用於光動力學治療的水溶性卟啉鹽的製備方法

2023-04-26 02:32:11 4

專利名稱：：用於光動力學治療的水溶性卟啉鹽的製備方法
技術領域：
：本發明涉及生物活性化合物化學，即涉及一種新的製備水溶性卟啉衍生物，特別是類型1和2的二氫卟酚、菌綠素、脫鎂葉綠酸和細菌脫鎂葉綠酸的衍生物的製備方法。本發明的化合物可以在癌症、感染及其它疾病的光動力學治療中，以及在其它情況下的光輻射療法中用作光敏劑。(1)(2)4其中B是具有下面結構的環:R^陽CI^CH2、-CH(OAlk)CH3、-CHO、-C(0)CH3、-CH2CH3、-CH(Alk)CH(COAlk)2、-CH2CH(COAlk)2、-CH(Alk)CH2COAlk、-CH(Alk)CH2CH(OH)CH3和-CH2CH2CH(OH)CH3;R2=-CH3、誦CHO、-CH(OH)Alk、-CH=CHAlk、CH2OH和CH2OAlk;R3=-OH、-OAlk、-NH-Alk、NH-X-COCT(HG)+、-NH-Y-NR8R9和-NH-Y-OH;R4=-0-(HG)+、-OAlk、國NH-Alk和NH-X-COO國(HG)+;R5=-CT(HG)+、-OAlk、-NH-All^-NH-X-COO-(HG)+;R6=H和-COOAlk;R7=-CT(HG)+、-OAlk、-NH-Alk和隱NH-X-COCT(HG)+;R8=H和AlkR9=H和Alk其中-NH-X-COO—=有機胺基酸的殘基；X二亞烷基、肽、寡肽和-(CH2CH20)nCH2CH2-，其中n-l-30;Y二亞垸基和-(CH2CH20)nCH2CH2-，其中n=l-30;G二親水性有機胺(例如，N-甲基-D-葡糖胺以及其它含氨基的碳水化合物衍生物、TRIS、胺基酸、寡肽)；和All^烷基取代基。
背景技術：
：在各種醫學應用中，光動力學治療(PDT)是一種最有前途的新技術(Photodynamictherapy,basicprinciplesandclinicalapplications,編輯B.W.Henderson,Th.J.Dougherty,MarcelDekker，1992，NewYork),並且光動力學治療特別是公認的治療腫瘤的方法(Photodynamictumortherapy.2ndand3rdgenerationphotosensitizers，J.G.Moser編輯,HarwoodAcademicPublishers,1998,Amsterdam)。在PDT中，B卜啉是廣泛使用的化合物。但是在卟啉的藥物應用中，一個主要的問題是它們在生理溶液中的溶解度很低。這使得它幾乎不可能製備用於PDT及其它應用的有效的藥物級的可注射溶液。製備用於PDT的水溶性卟啉衍生物的方法是本領域已知的。Smith等的USP5，330，741公開了一種製備賴氨醯-二氫葉酚P6三鈉的方法，該方法包括在吡啶存在下，由脫鎂葉綠酸甲酯a轉變得到的紅紫素18甲酯和含水賴氨酸在二氯甲烷中反應。混合物在室溫下攪拌反應12小時，接著高真空下除去溶劑。這樣製得的粗產物用反相高壓液相色譜法進行提純，隨後冷凍乾燥。為了製備用於癌症PDT的可注射溶液，首先將其溶於磷酸鹽緩衝液中，然後加入0.1N的氫氧化鈉，用0.1N的HC1將溶液的pH值調節到7.35，接著通過微孔過濾器進行滅菌過濾。上述方法的缺點包括缺少重現性、後處理困難以及使用有毒試劑，這使得其幾乎不適合於製備藥物。另外，在4。C下並且在黑暗中，製得的水溶性目標產物在水溶液中僅穩定存在24小時；在4。C以及在黑暗中，固態形式的水溶性目標產物僅穩定存在4個月[M.W.Leach，R.J.Higgins,J.E.Boggan，S.-J.Lee，S.Autry,K.M.Smith,EffectivenessofaLysylchlorinP6/ChlorinP6mixtureinPhotodynamicTherapyoftheSubcutaneous9LGliomaintheRat，CancerRes.，1992，52,1235-1239;USP5,330,741}。Nakazato在USP5,378，835中描述了水溶性脫鎂葉酸a(3)鈉鹽的製備方法。根據該發明，將脫鎂葉綠酸a(4)溶於乙醚中，然後向其中非常緩慢地滴加鹼在正丙醇、異丙醇或者它們的混合物中的非常稀的溶液。保持反應，直至完全析出脫鎂葉綠酸a鹽沉澱，離心分離並在真空中乾燥。然後將產物溶於水中，得到濃度為0.5%、pH為9.2-9.5的溶液，然後用pH為7.4-7.8的磷酸鹽緩衝劑稀釋該溶液。Nakazato描述的方法的缺點是通過該技術不能得到濃的(>1%)可注射的脫鎂葉綠酸a的水溶液。另外，該發明的作者證明了這樣的鹽在乾燥儲存時的化學不穩定性，並且它們在乾燥狀態下儲存後，不能在水中完全溶解。(7)與本發明方法最相似的方法公開在G.V.Ponomarev等的俄羅斯專利RU2144538中，通過多級簡單序列化學反應，用空間大的有機胺包括N-甲基-D-葡糖胺製備二氫卟酚e6(7)的水溶性絡合物，該方法包括從盤狀螺旋藍細菌(SpirulinaPlatensis)的藍細菌(cyanobacteria)葉綠素A，然後按照標準方法將其進一步轉化為二氫卟酚e6[S.L6tj6nen，P.H.Hynninen，Animprovedmethodforthepreparationof(lOR)-and(lOS)-pheophytinsaandb，Synthesis,1983,705-708;P.H.Hyiminen,S.L3tj6nen,Preparationofphorbinderivativesfromchlorophyllmixtureutilizingtheprincipleofselectivehydrolysis,Synthesis,1980，539-541;S.L的6nen,P.H.Hynninen,A_convenientmethodforthepreparationofwetchlorine6andrhoding7trimethylesters，Synthesis,1980，541-543]，通過逐步加入水至它的丙酮溶液中，析出二氫卟酚e^沉澱，接著離心分離沉澱，用3倍的水洗滌沉澱，然後用2g-eq.空間大的有機胺水溶液處理溼的二氫卟酚e6，得到總收率超過50%的產物。該方法的主要缺點使得很難合成水溶性二氫卟酚、特別很難在工業上合成水溶性二氫卟酚以及難以進行藥物製備，該方法的主要缺點如下1.作為中間產物的二氫卟酚e6是溼塊，未知其確定的含量，所得到的二氫卟酚e6含量上的不穩定性造成了下一步所得溶液的標準化能力的不確定性。2.在合成工序中的關鍵中間體是脫鎂葉綠酸a(4)，由於它的酸性，其很難提純並且難以標準化，通過重複沉澱方法(如用Ponomarev的方法)分離得到的脫鎂葉綠酸a(4)是不定量的，因此不利於大規模製備。3.通過指出的方法得到的脫鎂葉綠酸a(4)包含難以分離的雜質。該缺點引起脫鎂葉綠酸a(4)定量上的不確定，並且在脫鎂葉綠酸a(4)轉變為二氫卟酚的過程中擾亂了環戊酮環的化學開環。4.應該注意到，按照Ponomarev製得的二氫卟酚e6水溶性鹽的樣品包含各種非卟啉型和卟啉型雜質，用其中描述的方法並不能將這些雜質與目標產物二氫卟酚e6分離。具體地說，通過TLC和HPLC方法，人們應該注意到卟啉的雜質是脫鎂葉綠酸a(4)、紅紫素18(8)、二氫卟酚p6(9)以及其它一些附隨物。formulaseeoriginaldocumentpage8人們認為，與它們各自的二氫卟酚e6鹽相比，上述發明的類型(4)、(8)和(9)的化合物與親水性胺形成的鹽的特徵是水溶性顯著降低。然而類型(4)、(8)和(9)的化合物與上述發明的親水性胺形成的鹽卻大大提高了水溶性，這可能是因為與二氫卟酚e6鹽形成了絡合物，這種現象使得不可能通過利用它們的不同的水溶性從雜質，例如類型(4)、(8)和(9)的化合物中分離二氫卟酚ee產物。5.被Ponomarev用於製備水溶性二氫卟酚的有機胺在實際應用中不是最佳的，特別是D-葡糖胺，其與具有較高溶解度的二氫卟酚形成絡合物，由於其醛基可能氧化，因此是不夠穩定的。同時，D-葡糖胺在溶液中可以以各種異構體形式存在，這引起結構上的不確定性，很難進行各自詳細的結構表徵，不能滿足藥物製備上質量控制的需要。另一個Ponomarev使用的空間大的胺，即N-甲基-D-葡糖胺，其與上述的D-葡糖胺具有相同的缺點，而且由於它很難製備，因此不容易得到。6.Ponomarev認為二氫卟酚e6衍生物與空間大的有機胺形成的水溶性鹽是很不確定的，因為通常的空間大的有機胺，例如包含叔丁基、新戊基、金剛烷基、環己基基團的那些胺，由於空間大的有機部分的高疏水性，不能用於製備水溶性二氫卟酚e6鹽。由於上述提及的這方面以及其它方面的缺點，使得Ponomarev要求保護的方法不可能用於製備GMP標準的有效藥物級組合物。用於合成本發明化合物的初始卟啉衍生物通常從純的和標準的粗葉啉材料脫鎂葉綠酸a甲酯(5)或脫鎂葉綠酸a乙酯(6)中獲得。目前已知的用於從生物原料中分離卟啉的一般方法為用有機溶劑繁重的洗滌和/或冷凍步驟以破壞生物材料的細胞壁，以及重複萃取並且化學處理生物質，首先轉化為葉綠素，然後其變為脫鎂葉綠素以及隨後水解得到脫鎂葉綠酸(K.M.Smith,D.A.Goff和D.J.Simpson,J.Amer.Chem.Soc.,1985,107,4946-4954;R.K.Pandey,D.A.Bellnier，K.MSmith禾口T.J.Dougherty,Photochem.Photobiol"1991,53，65-72}。9因此，需要提供一種容易的並且有效的方法，用於製備純的和在化學上穩定的水溶性藥物級卟啉衍生物，該水溶性藥物級卟啉衍生物具有標準含量的所需物質並且適用於醫學應用，特別是光動力學治療應用。本發明實現了這種需要並進一步提供了其它相關的優點。發明目的和概述本發明的一個目的是提供化學上穩定的並具有標準含量的所要物質的水溶性卟啉衍生物，其適用於各種醫學應用，特別是PDT應用。本發明另一個目的是提供藥物級高純度的水溶性卟啉衍生物，其在藥物組合物中是有效的。本發明另一個目的是提供一種製備化學上穩定的水溶性卟啉衍生物的方法。本發明還有一個目的是提供一種容易的並且節省時間的從生物原料製備化學上穩定的水溶性卟啉衍生物的方法，該方法其避免了現有技術中存在的缺點。本發明還有一個目的是提供在藥學上可接受的製劑中化學穩定的水溶性卟啉衍生物，其用於醫學應用，例如用於治療癌症及其它過度增生性疾病、感染等等。本發明的一個實施方案是一種製備水溶性卟啉衍生物的方法，其包括一步或兩步的生物原料的直接酸性醇解，製備脫鎂葉綠酸垸基酯的晶體，然後將得到的脫鎂葉綠酸烷基酯轉變為酸性卟啉，接著酸性口卜啉在水中或在一種含水有機溶液中與親水性有機胺反應。本發明的另一實施方案是一種製備水溶性卟啉衍生物的方法，其包括酸性卟啉在水中或在含水有機溶液中與親水性有機胺反應。本發明的另一實施方案是製備水溶性卟啉衍生物的方法，該方法包括下述多個步驟一步或兩步的生物原料的直接酸性醇解，製備脫鎂葉綠酸垸基酯的晶體，將得到的脫鎂葉綠酸烷基酯轉變為酸性P卜啉，然後使所述酸性卟啉在水中或在含水有機溶液中與親水性有機胺反應，並通過反相色譜法使用揮發性溶劑提純所得的水溶性卟啉衍生物。在另一實施方案中，本發明提供一種製備水溶性卟啉衍生物的方法，該方法包括使酸性卟啉在水中或在含水有機溶液中與親水性有機胺反應，並通過反相色譜法使用揮發性溶劑提純水溶性卟啉衍生物。此外，本發明還提供通過本發明方法得到的式(1)和(2)的水溶性卟啉衍生物，其用於光動力學治療和其它醫學應用中的藥物組合物。附圖的簡要說明圖1:測定用二氫卟酚e"7)與N-甲基一D-葡糖胺(10)製得的本發明(實施例9)水溶性鹽(A)和根據Ponomarev(RU2144538)製得的水溶性鹽(B)的暗毒性(darktoxicity)(細胞毒性,實施例14);測試在OV2774細胞中進行，加入不同濃度的如下指出的光敏劑。圖2:測定用二氫卟酚e6(7)與N-甲基一D-葡糖胺(10)製得的本發明(實施例9)水溶性鹽(A)和根據Ponomarev(RU2144538)製得的水溶性鹽(B)的光毒性(phototoxicity)(實施例15)的測定；測試在OV2774細胞中進行，加入不同濃度的如下指出的光敏劑並且在670nm處輻射。優選實施方案的詳細說明在描述本發明之前，規定用於本發明公開中使用的某些術語的定義是有幫助的。卟啉是大環化合物，分別具有一個碳原子或一個氮原子的橋，連接多個吡咯以形成特徵性的四吡咯環狀結構。有許多不同類型的卟啉衍生物，包括那些含二氫吡咯單元的卟啉衍生物。在此使用的術語卟啉是指適用於PDT和藥物製劑的卟啉、酞菁、二氫卟酚、脫鎂葉綠酸、其金屬衍生物以及其它擬卟啉化合物。在此使用的生物原料是用於製備本發明化合物的原料，例如包括植物、藻類、血液組分和昆蟲分泌物。本發明的目的通過下面描述的方法得以實現，該方法包括酸性口卜啉在水中或在含水有機溶液中與親水性有機胺反應，親水性有機胺優選為N-甲基-D-葡糖胺(lO)，其是一種多羥基化的穩定並且是無毒的用於製備藥物的化合物，或者與氨基垸基和氨基芳基苷，例如麥芽糖衍生物(11)和(12)，或者與碳水化合物衍生物相連的其它氨基基團反應。其它可行的試劑包括但不限於，三(羥甲基)氨基甲烷(亦稱為TRIS)(13)，它也是一種穩定的和無毒的用於製備藥物的化合物，或者是TRIS衍生物例如化合物(14)和(15)，以及其它類型的親水性胺例如雙(2-羥乙基)胺(16)。根據本發明，胺基酸或寡肽例如賴氨酸低聚物，優選是五和六賴氨酸，也可以用作製備水溶性卟啉衍生物的親水性有機胺。(10)(11)12formulaseeoriginaldocumentpage13(14)(15)(16)根據本發明的一個優選實施方案，如實施例9中所述，在室溫下以及惰性氣氛下，在黑暗中進行化學純的卟啉(如游離酸)和合適的親水性有機胺的定量化學計量反應。所用的溶劑或者是用惰性氣體(例如氬氣、氦氣、或其它氣體)脫氣的化學純的水，或者如有必要，可以是水與合適的化學純的並脫氣的有機溶劑的混合物。有機溶劑隨後在不加熱的情況下在真空中蒸發(以避免初始卟啉的可能破壞)，並將產物冷凍乾燥。在某些情況下，有必要加入有機溶劑以溶解初始卟啉，以便於卟啉(如游離酸)和合適的親水性有機胺發生反應。可能的有機溶劑的例子是丙酮或二氯甲垸和甲醇的混合物。所得的冷凍乾燥的水溶性卟啉是化學純的，無需更進一步的提純，滅菌後即可以用於醫學或生物應用。根據本發明的另一優選實施方案，可以使用的不純成分包括初始口卜啉的溼糊。除了用過量親水性有機胺與所有卟啉組分反應外，反應類似於如上所述的方法進行。反應混合物在真空中濃縮後，所得水溶性葉啉用具有合適的反相吸附劑的柱子，優選是RPC-8或C-18型柱，進行色譜提純。收集含目標產物的餾分，不加熱下在真空中蒸發以除去有機溶劑，然後冷凍乾燥，得到所要的水溶性卟啉衍生物。通過反相色譜法使用揮發性溶劑提純水溶性卟啉衍生物，得到標準的高質量產物，這對於製備醫用製劑是重要的。本發明又一個實施方案是一種容易的並且有效的從生物原料中得到卟啉化合物的方法。該方法包括對生物原料進行一步或兩步的直接酸性醇解，優選甲醇醇解或乙醇醇解，得到關鍵中間體脫鎂葉綠酸烷基酯(優選甲基酯和乙基酯)的晶體，然後將該關鍵中間體進一步進行多種化學轉化以得到目標卟啉衍生物。這種方法可以從生物原料中簡單並且相對快速的製備卟啉衍生物，而無需通過用有機溶劑對初始生物材料進行繁重的洗滌或冷凍(以破壞細胞壁)以及前述已知方法中需要的重複萃取。使用脫鎂葉綠酸垸基酯的晶體(優選甲基酯和乙基酯)作為合成的中間產物，使得簡單的提純和標準化成為可能，這對製備醫療方法如PDT中使用的藥物製劑中是關鍵的。醇解的性能取決於初始生物原料的質量，特別是它的乾燥程度，在醇解期間，保持必要的酸濃度是很重要的。因此，在充分乾燥的材料中，例如乾燥的螺旋蘭細菌屬(Spirulina)或小球藻屬(Chlorella)生物質或粉末狀乾燥蕁麻葉(參見實施例l-5)有可能迸行直接的一步醇解以製備脫鎂葉綠酸烷基酯。在不充分乾燥的原料中，通過兩步醇解以製備脫鎂葉綠酸烷基酯，例如從菠菜(參見實施例6)中製備脫鎂葉綠酸a(5)和b(17)甲基酯。在該情況中，在初始原料中存在的大量水阻止了形成適合於裂解植醇酯的合適的酸濃度。然而，在第一步醇解之後得到的脫鎂葉綠素是足夠乾燥的，可以在第二步醇解中用於製備脫鎂葉綠酸垸基酯的晶體。根據本發明描述的方法，通過卟啉原料的化學轉化，例如由生物原料得到的脫鎂葉綠酸垸基酯晶體製備酸性卟啉，該酸性卟啉適用於進一步轉變為水溶性的形式。具體地，2-脫乙烯基-2-(l-垸氧基乙基)-二氫卟酚e6例如乙氧基衍生物(19)可以通過脫鎂葉綠酸a的甲酯或乙酯用HBr在乙酸中的飽和溶液進行溴氫化作用得到，各自生成2-脫乙烯基-2-(l-溴甲基)-脫鎂葉綠酸a，進一步醇解得到2-脫乙烯基-2-(l-烷氧基乙基)-脫鎂葉綠酸a(例如化合物18)(C.Rimington,A.Roennestad,A.Western,禾卩J.Moan,Int.J.Biochem.,1988,20,1139-1149;K.R.Adams,C.R.Berembaum,R.Bonnett,A.N.Nizhnik,A.Salgado，禾卩M.A.Valles,J.Chem.Soc.PerkinTrans.1,1992，1465-1470)，並且隨後進行皂化反應，分別形成三酸化合物2-脫乙烯基-2-(l-垸氧基乙基)-二氫卟酚&(19)或者例如與N-甲基-D-葡糖胺(IO)形成水溶性鹽(實施例10)。根據本發明，其它類型的親核試劑與2-脫乙烯基-2-(l-溴甲基)-脫鎂葉綠酸可以按類似方式進行反應，而不是它們的醇解，形成各種可能的卟啉衍生物，用於製備它們的水溶性形式。此外，本發明用於製備不同的二氫卟酚和脫鎂葉綠酸衍生物的水溶性形式的方法可以通過實施例15-30(下面提供)進行說明，以製備酸(4)和(20)-(33)與胺(10)的水溶性鹽。15formulaseeoriginaldocumentpage16(22)R=COOMe(24)1^=012012(0012012)20(:恥0011，R、COOMe(23)R=H(25)R^CH2CH2(OCH2CH2)20CH2COOH,R2=H(26)R^CH2CH2(OCH2CH2)50CH2COOH,R2=H(27)R^CKbCOOH,R2=H(28)R'KCH2)sCOOH，R2=Hformulaseeoriginaldocumentpage17根據本發明，酸性卟啉衍生物與親水性胺的反應形成水溶性鹽。具體地，在脫鎂葉綠酸衍生物的情況中生成的是單鹽，而二鹽則是由三酸二氫卟酚(34)形成[通過形成一種可能的單鹽中間體，例如中間體(35)，如反應流程1中所示]，因為6位的羧基(原子編號如化合物4-6所示)沒有顯現出足夠的用於形成鹽的酸性。反應流程1.(34)(35)(1)G-親水性胺因為本發明的水溶性卟啉鹽在溶於水的同時可以進行水解(例如反應流程2中的二氫卟酚)，所以需要在過量親水性胺存在下製備本發明的水溶鹽並將它們在溶解狀態下儲存。本發明的水溶性二氫卟酚二鹽可以通過如實施例9B中描述的柱色譜法提純而以單個狀態得到。將提純過的二鹽溶於水中進行可逆水解，得到單鹽(例如，類型35，參見反應流程2)，該單鹽與其二鹽相比，甚至與在水中溶解度差的母體二氫卟酚(l)相比，水溶性可能降低。這種方法可導致在溶液儲存期間形式少量的沉澱。反應流程2.formulaseeoriginaldocumentpage18G-親水性胺為了避免這種不理想的方法並使溶液保持澄清和均相，在醫學應用中例如PDT中使用這些溶液時是有嚴格要求的，優選在少量和已知量的親水性胺(例如小於2摩爾當量，更優選在0.05-0.5當量之間)存在下將二鹽溶於水中，以使所要的卟啉衍生物保持二鹽的形式，從而避免了由於二鹽的水解而形成單鹽和母體二氫卟酚。本文公開的二氫卟酚和脫鎂葉綠酸衍生物與親水性胺形成的鹽具有0.1mg/L數量級的水溶性，這使得它們能夠在各種應用中使用。本發明的另一個目的是製備帶有通過肽鍵連接的胺基酸單元的脫鎂葉綠酸衍生物，以便與親水性胺形成鹽，所述鹽的特徵在於與沒有胺基酸片段的母體脫鎂葉綠酸化合物相比，其水溶性高出100以上。具體地，脫鎂葉綠酸衍生物(36)與N-甲基-D-葡糖胺(10)形成的鹽的溶解度為40mg/L，而帶有連接胺基酸殘基的肽鍵的衍生物(7,20-33)的溶解度大於5g/L。(36)本發明的另一個目的是將化學穩定的並且是水溶性的式(1)和(2)的口卜啉衍生物用於各種醫學應用。所述化合物特別優選用於PDT以治療癌症和其它過度增生性疾病、感染、牛皮癬、動脈粥樣硬化、AMD以及其它適於用光動力治療的疾病和感染。由於其水溶性，所述化合物可以製成各種藥學上可接受的並且是活性的製劑，以用於不同的給藥方法，例如注射。本發明還提供了根據本發明製得的高純度水溶性卟啉衍生物在癌症和其它過度增生性疾病以及感染的光動力學治療中的應用。PDT通過如下方法實現首先將所述的衍生物與藥學上可接受的應用賦形劑混合，然後將衍生物輸送到特定的治療部位。在一個實施方案中，對於疾病例如皮膚癌或其它皮膚病，應用的賦形劑通常是皮膚用的乳膏、凝膠或者有時是氣霧劑的液體分散劑。將賦形劑中的衍生物給予治療區域之後，使藥物在治療區域停留足夠的時間，優選在患病組織中積累卟啉衍生物。最後，將治療區域在合適波長和足夠能量的光下進行輻射，以激活卟啉衍生物，從而使其殺死所述患病組織的細胞。本發明的卟啉衍生物之一，即由二氫卟酚e6(7)與N-甲基-D-葡糖胺(10)根據實施例9B中的方法製得的水溶性鹽在細胞培養實驗中測定的暗毒性(實施例31，圖l)和光毒性(實施例32，圖2)的結果表明，本19發明化合物用於PDT時表現出極好的性能。而用根據Ponomarev技術(RU2144538)製得的相同化合物進行同樣的實驗，該化合物卻表現出差的特性(高的暗毒性和低的光毒性)。然而，在特定情況下，如果不同卟啉衍生物的親水性胺鹽的特定混合物對患病組織表現出較高的光毒性時，給予這些混合物可能是有利的。這種提高的光毒性可能是由於在二氫卟酚e6的相同鹽存在下，化合物(4)、(7)和(8)與親水性胺形成的鹽的混合物的水溶性提高，這種現象是可以觀察到的。本發明其它實施例的水溶性形式的良好光毒性提供在表1和2中，酸(4)、(7)、(22)和(25)與N-甲基-D-葡糖胺(10)形成的水溶鹽在HeLa細胞中的暗毒性和光毒性實驗結果總結在表1和2中。本發明的另一個目的是公開的二氫卟酚和脫鎂葉綠酸衍生物的水溶性形式在抗微生物光動力療法中的應用。這通過表3中的數據說明，表3總結了使用酸(4)、(7)、(22)和(25)與N-甲基-D-葡糖胺(10)形成的水溶性鹽對一些微生物進行光動力療法處理的結果。實施例下面的實施例為本領域普通技術人員提供全面和說明性的公開和描述，描述了如何製備本發明的水溶性卟啉衍生物，該水溶性卟啉衍生物用於製備藥物組合物，這些實施例並不是用來限制本發明的範圍。雖然在實驗中儘量保證使用的數據(例如數量、溫度等等)的準確性，但是也應該考慮到某些實驗誤差和偏差。實施例1從盤狀螺旋藍細菌(Spirulinaplatesis)中獲得脫鎂葉綠酸甲酯(5)(A)將20g盤狀螺旋藍細菌、60mL甲醇和10mL濃硫酸的混合物在室溫下攪拌3小時，接著用30mL甲醇稀釋，然後用硅藻土(Cdite)墊過濾。用甲醇(70mL)洗滌過濾漏鬥中的物質，用己垸(2x30mL)萃取上述溶液，用氯仿(100mL)稀釋，然後將其倒入飽和氯化鉀水溶液(300mL)中。所得混合物用硅藻土墊過濾，水相用氯仿(2x50mL)萃取。用水洗滌合併的萃取液，用棉花過濾後濃縮。將殘餘物溶解在氯仿-己烷(l:l，30mL)的混合物中，用氧化鋁墊過濾，首先用己烷(以除去非極性非-二氫卟酚組分)洗滌，接著用二氯甲垸(以得到脫鎂葉綠酸甲酯)洗滌。將二氯甲垸溶液濃縮，殘餘物首先用二氯甲垸-甲醇(3mL+7mL)進行重結晶，然後用二氯甲烷-甲醇(lmL+10mL)進行重結晶，最後用甲醇(10mL)洗滌，得到113mg純的脫鎂葉綠酸甲酯a(5)。^-NMR光譜9.41，9.23，8.56(3H，全部s，meso-H);7.88(1H，q，-CIi=CH2)，6.25-6.10(2H，CH=QJb)，6.28(1H，s，環戊酮-H)，4,50，4'25(2H，m，7-H,8-H);3.55(2H，q，4-Cii2CH3);3.93，3.70，3.63，3.39，3.15(15H，全部s，5x-CH3);2.75-2.20(4H,m，-COOCH3);L85(3H,d，8-Cli3);1.71(3H，m，4-CH2Cii3);0.55和-1.68ppm(2H，2brs，2x-NH-)。經鑑定該產物與從PorphyiinProductsInc.,USA得到的化合物相同。(B)將lOg盤狀螺旋藍細菌、30mL甲醇和5mL濃硫酸的混合物在室溫(r.t.)下攪拌3小時，然後用冷水(70mL)稀釋，用硅藻土墊過濾。用水將過濾漏鬥中的物質洗至pH為7，乙醇(50mL)，己烷(4x30mL)，用丙酮(120mL)將所需的脫鎂葉綠酸甲酯從過濾漏鬥中的物質中移出。將上述溶液濃縮，並溶於氯仿中，用無水硫酸鈉墊(無水)過濾，濃縮，殘餘物首先用二氯甲烷-甲醇(1.5mL+5mL)進行重結晶，然後用二氯甲垸-甲醇(1.5mL+10mL)進行第二次重結晶，最後用甲醇(15mL)洗滌，得到60mg純的脫鎂葉綠酸甲酯a(5)。(C)在室溫以及攪拌下將濃硫酸(250mL)加入到500g盤狀螺旋藍細菌在甲醇(1500mL)中的懸浮液中。形成的混合物在室溫下保持3小時，然後倒入水(6L)中，用硅藻土墊(直徑12cm，高度2cm;在過濾器SchottN3上)過濾。過濾器上的糊狀物質用水(3x800mL)洗滌，直至pH為6，然後用乙醇(3x300mL)和石油醚(40-6(TC，3x250mL)洗滌。接著用丙酮21(總共1.2L)從墊上移出目標產物，濃縮，並將殘餘物溶於氯仿(200mL)中，用棉絮過濾，然後在真空中濃縮，殘餘物用二氯甲烷(40mL)和甲醇(200mL)的混合物結晶，得到2.45g脫鎂葉綠酸甲酯a，約卯％的純度(TLC，95:5的氯仿/丙酮)。將後者溶於氯仿(20mL)中，並將其通過氧化鋁墊(中性，GradeII;直徑8cm，高度5cm)，用氯仿進行洗脫；濃縮並用二氯甲烷(50mL)和甲醇(250mL)的混合物進行重結晶，得到2.38g純的(TLC對照)脫鎂葉綠酸甲酯a(5)。其它數量的脫鎂葉綠酸甲酯a(約10-15%)可以通過對兩次結晶的母液進行常規後處理(色譜法和重結晶)得到。實施例2從盤狀螺旋藍細菌中得到脫鎂葉綠酸乙酯a(6)將20g盤狀螺旋藍細菌在60mL96。/。的含水乙醇和10mL濃硫酸中進行乙醇解，隨後按照實施例1A中描述的製備脫鎂葉綠酸a甲酯(5)的方法進行後處理，只是在所有步驟中用乙醇代替甲醇，得到110mg脫鎂葉綠酸乙酯a(6)的晶體。iH-NMR光譜:9.57，9.42，8.61(3H，全部s，meso-H);7.99(1H，q，-CH=CH2)，6.32,6.26(2H，dd，-CH=CE2)，6.27(1H，s,環戊酮國H)，4.51，4.28(2H，m，7-H，8-H);4.07(2H，q，-COOCS2CH3);3.71(2H，q，4-CE2CH3);3.89，3.72，3.41，3.27(12H，全部s，4x-CH3);2.69，2.47，2.37，2.22(4H，m，-CE2Qi2COOCH2CH3);1.83(3H，d，8-CH3);1.73(3H，t，4-CH2Cg3);1.12(3H，t，-COOCH2Qi3);0.57，-1.46ppm(2H,2brs,2x-NH-)。實施例3從最大螺旋藍細菌(Spirulinamaxima)中得到脫鎂葉綠酸甲酯a(5)用30mL甲醇和5mL濃硫酸處理10g最大螺旋藍細菌，隨後按照實施例lB所述製備脫鎂葉綠酸甲酯a(5)的方法進行後處理，得到64mg脫鎂葉綠酸a甲酯(5)。實施例422從小球藻中得到脫鎂葉綠酸a甲酯(5)和b甲酯(17)將10g乾燥的小球藻生物質進行甲醇解，隨後按照實施例3中描述的方法進行後處理，得到20:7的脫鎂葉綠酸a甲酯和脫鎂葉綠酸b甲酯的混合物(140mg)，由'HNMR光譜測得。用矽膠60(Fluka，70-230目)柱色譜進行分離，用15:30:1.5的氯仿-甲苯-丙酮作為洗脫液進行洗脫，得到單一的脫鎂葉綠酸a甲酯(5)和脫鎂葉綠酸b甲酯(17)。脫鎂葉綠酸a甲酯(5)與上述描述的產物相同。脫鎂葉綠酸b甲酯(17)的^-NMR光譜數據11.0(1H，s，CHO)，10.22,9.50，8.55(3H，全部s，meso國H);7.98(1H，q，-CH=CH2)，6.40-6.15(2H，-CH=CH2)，6.25(1H，s，環戊酮-H)，4.48，4.20(2H，m，7-H，8-H);3.60(2H，q，4-CH2CH3);3.93，3.78，3.75，3.40(12H，全部s，4x-CH3);2.75-2.20(4H，m，-<:00(:113);1.85(3H，d，8-Qi3);L71(3H，m，4-CH2CH3);0.48和-1.60ppm(2H，2brs，2x-NH-)。實施例5從粉末狀幹蕁麻葉中得到脫鎂葉綠酸a甲酯(5)和脫鎂葉綠酸b甲酯(17)將500g粉末狀幹蕁麻葉進行甲醇解，隨後按照實施例1C中描述的方法進行後處理，由1!^111光譜測定得知，得到6.5:1的脫鎂葉綠酸a甲酯(5)和脫鎂葉綠酸b甲酯(17)的混合物(1.74g)。實施例6從冷凍菠菜葉中得到脫鎂葉綠酸a甲酯(5)和脫鎂葉綠酸b甲酯(17)在室溫和攪拌下，將濃硫酸(5mL)加入到100g冷凍菠菜葉和甲醇(100mL)的混合物中。形成的混合物在室溫下保持16小時，用水(100mL)稀釋，用硅藻土過濾。殘餘物用丙酮(3x50mL)洗滌，丙酮萃取物用二氯甲垸-水(l:l，lOOmL)稀釋，分離有機相併濃縮，殘餘物在100mL含5%濃硫酸的甲醇中進行甲醇解，隨後按照實施例1C中描述的方法進行後處理，由NMR光譜測定得知，得到2:1脫鎂葉綠酸a甲酯(5)和脫鎂葉綠酸b甲酯(17)的混合物(40mg)。實施例72-脫乙烯基-2-(l-乙氧基乙基)-脫鎂葉綠酸a甲酯(18)的製備將脫鎂葉綠酸a甲酯(5)(3.5g，5.8mmol)溶於溴化氫和乙酸(密度1.44，50mL)的混合物中，並放置18小時。然後在真空中將混合物在5(TC蒸發至幹，攪拌下加入無水乙醇(100mL)。18小時後，攪拌下將反應混合物倒入碎冰中並用二氯甲垸(3x40mL)萃取。合併的萃取物用水(4x70mL)洗滌，並在真空中蒸發至幹。殘餘物用矽膠(40-63nm，Merck)柱色譜進行分離，用二氯甲垸作為洗脫液進行洗脫，得到2.95g產物(18)，收率77%。iH-NMR光譜9.82，9.58,8.55(3H，全部s,meso-H);6.31(1H，s，IO-H)，5.96(1H，q，2-CgCH3);4.53，4.25(2H，m，7-H，8-H);3.71(4H，dq，4-CM2CH3，-OCiLCHs);3.93，3.87，3.63，3.41，3.28(15H，全部s，5x-CH3);2.67，2.51，2.37，2.23(4H，m，-Qi2Cli2COOCH3);2.11(3H，d，2-CHQi3);L80(3H，d，8-Cg3);1.75(3H，t，4-CH2CH3);L36(3H，t，-OCH2Cg3);0.55，-1.41(2H，2brs，2x-NH)。實施例8二氫臥酚e6(7)的製備在氬氣氛中，攪拌下將氫氧化鉀水溶液(脫氣，10%的溶液，10mL)加入到140mg(231nmol)脫鎂葉綠酸a甲酯(35)在脫氣(用氦氣)丙酮(12mL)中的溶液。混合物在4(TC下攪拌40分鐘，加熱至65。C，然後加入3%的氫氧化鉀水溶液(由5mL脫氣的10%的氫氧化鉀水溶液和llmL脫氣的水製備)。在氬氣氛下以及65'C下，將所得混合物加熱攪拌2.5小時，然後冷卻至室溫，用100mL水稀釋，用2NHCl(12mL)酸化。離心分離沉澱物(3分鐘，5000rpm)，然後用水(3x30mL)洗滌，再次離心分離，再次懸浮在10mL水中，冷凍乾燥得到游離酸形式的粗二氫口卜酚e6(120mg，87%,約卯％的純度，用TLC對照)。TLC:RP-18TLC板(Merck)，甲醇-二氯甲烷(3:1),Rf為0.6;汙染物Rf<0.3的極性更大的雜質。最後純化將20mg粗二氫卟酚e6溶於甲醇-二氯甲垸-水24(3:1:1，4mL)中，然後在RP-8柱(Merck，#11447，240x10，40-63,)上進行MPLC分離，用甲醇-二氯甲烷-水(4:3:l，2mL/min)進行洗脫，得到純的二氫卟酚e6(7)(15mg，75%)。雜質用甲醇-二氯甲垸(3:l)洗出。1H-NMR光譜(DMSO-d6):9.88，9.78,9.18(3H，全部s，meso-H);8.33(1H，dd，-CH=CH2);6.47(1H，d，cis-CH=CM2);6.22(1H，d,trans-CH=CH2);5.38(2H，m，-QLCOOH);4.62(1H，m，-CJiCH3);4.48(1H，m，-CgCH2);3.83(2H,m，-CHzCHs);3.59，3.53，3.33(9H，全部s，-Cg3);2.62，2.27，2.14，(4H，m，-CH2CM2COOH);1.70，1.66(6H，m,-CHQi3+-CH2C|i3);1.64，-1.90(2H，2brs具有不同的強度，2x-NH-)。13C-NMR光譜(DMSO-d6)特徵信號僅為174.15，173.46，172.34(COOH);129.21(-￡H=CH2);122.25(-CH=￡H2);103.74(力；101.12(卩)；98.09(a);94.67(S);52.66(^HCH2);48.19(￡HCH3);37.80(-￡H2COOH);30.82，29.50(-CHCH2QH2COOH);22.92(QHCH3);18.91H3);17.583);11.00,10,98(ArMe)。實施例9二氫卟酚e^7)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的製備(A)將N-甲基-D-葡糖胺(10)(4mg，21pmol)在水(4mL)中的溶液加入到5mg(8.4iimol)二氫卟酚e6(7)在甲醇-二氯甲烷(3:l，20mL)(或在丙酮中)中的溶液中。在真空中蒸發除去有機溶劑。所得水溶液用膜(20imi)過濾，冷凍千燥，定量得到水溶性鹽(9mg，包括過量的N-甲基-D-葡糖胺)。(B)將10。/。脫氣的氫氧化鉀水溶液(10mL)加入到50mg脫鎂葉綠酸a甲酯(5)在脫氣丙酮(12mL)中的溶液。在惰性氣體(氬氣)氣氛中，將混合物在4(TC攪拌30分鐘，接著加入15mL3M的脫氣的氫氧化鉀水溶液。所得混合物在惰性氣體(氬氣)氣氛下於65'C攪拌2小時，然後用水(lOOmL)稀釋，加入2NHCl水溶液(直至pH為6)，析出二氫卟酚e6(7)。離心分離沉澱物(3000rpm，5分鐘)，然後沉澱物用水(3xl0mL)進行洗滌。得到二氫卟酚e6的溼餅，可直接用於下一步反應，無需進一步純化。在氬氣氛下，將得到的全部二氫卟酚e6(7)樣品與N-甲基-D-葡糖胺(10)(30mg，2eq.)和水(10mL)混合，得到約5%的水溶性鹽的溶液。將所得混合物進行攪拌直至其完全溶解，蒸發至幹，然後使用RPC-8柱進行HPLC分離，用水-甲醇進行梯度洗脫(從40%至80%)。收集含目標產物的混合物樣品，將其冷凍乾燥，得到約75-80%收率的水溶性二鹽。它的結構通過iHNMR光譜確認。具體地，二氫卟酚e6(7)與N-甲基-D-葡糖胺(10)部分的比例為1:2的水溶性二鹽通過葡糖胺組分中N-Me基團的信號(在2.70ppm)和二氫卟酚單元的8-Me基團(在1.75卯m)信號的結合確認。(C)在氬氣氛及黑暗中，將50mg(84nmol)粉末狀二氫卟酚e6(7)、40mg(0.21mmol)N-甲基-D-葡糖胺(10)和水(50mL，預先用惰性氣體脫氣)的混合物進行攪拌，直至完全溶解。用膜(2(Him)將所得溶液過濾，冷凍乾燥得到定量的水溶性鹽(90mg，包括過量的N-甲基-D-葡糖胺)。實施例102-脫乙烯基-2-(l-乙氧基乙基)-二氫卟酚e6(19)的製備按照製備二氫卟酚&(實施例8)的方法，將2-脫乙烯基-2-(l-乙氧基乙基)-脫鎂葉綠酸a甲酯(18)(2.8g，4.1mmol)進行皂化，柱色譜分離後，得到2.1g產物(19)，收率79%。iH-NMR光譜(DMS0-d6):9.88，9.78，9.18(3H，全部s，meso-H);6.47(1H，d，cis-CH-CHa);6.22(1H，d，trans-CH=Cli2);5.5.1(2H，m，-OCg2CH3);5.38(2H，m，-Q^COOH);4.62(1H，m，-CgCH3);4.48(1H，m，-QiCH2);4.29(1H，q，-QiCH3);3.83(2H，m，-CH2CH3);3.59，3.53，3.33(9H，全部s，-CHa);2.62，2.27，2.14(4H，m，-QizQiaCOOH);1.83(1H，d，-CH(0-)Qi3);1.70，1.66(6H，m，-CHCii3+-CH2CH3);1.54(3H，t，-OCH2CH3);-1.90(2H，2brs具有不同的強度，2x-NH-)。13C-NMR光譜(DMSO-d6)特徵峰僅為174.15，173.46，172.34(COOH);129.21(-￡H=CH2);103.74(力；101.12(p);98.09(a);94.67(5);67.97(《H(0-)CH3);63.49(-0￡H2CH3);52.66(￡HCH2);48.19(￡HCH3);37.80,2COOH);30.82，22.92(CH￡H3);20.20(-CH(O-)GH3);18.91(￡H2CH3);17.58,15.23(CH￡H3+-OCH￡H3);11.00,10.98(ArMe).實施例11二氫卟酚ee衍生物(19)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的製備按照實施例9C中描述的方法，將30mg2-脫乙烯基-2-(l-乙氧基乙基)-二氫卟酚ee(19)與20mgN-甲基-D-葡糖胺(10)反應，冷凍乾燥，定量得到50mg水溶性鹽。實施例12雙[2-(p-麥芽糖氧基)乙基]胺(ll)的製備在-2(TC下，攪拌下，將過-O-乙醯基-麥芽糖基溴化物(500mg，0.7mmo1)、N-節氧基羰基-N，N-雙(2-羥乙基)胺(56mg，0.233mmol)和2,4,6-三甲基吡啶(80^1，0.605mmo1)的溶液滴加到三氟甲磺酸銀(208mg，0.805mmol)和1,5mL無水二氯甲垸的混合物中。將混合物溫熱至室溫，然後用0.5mL三乙胺處理，用200mL二氯甲垸稀釋，用飽和Na2S2O3水溶液(50mL)和水(50mL)洗滌，濃縮，使用乙酸乙酯-石油醚(l:l)進行快速色譜純化，得到粗的N-苄氧基羰基-N，N-雙[2-(七-0-乙醯基-p-麥芽糖氧基)乙基]胺(57mg)。選擇結構的特定"CNMR數據(500MHz，CDC13):20.41(￡H3CO);46.92，47.24，48.00和48.02(OQH2CH2N和OCH￡H2N);61.30，61.50，61.98，禾卩62.52(葡萄糖部分的C-6);67.18(NCOO￡H2C6H5);67.81，68.33，69.14，69.84，72.02，72.55，75.10(C-2-C-5，葡萄糖部分)；95.38(C-l，a-葡萄糖部分)；100.18禾QIOI.IO(C-I，p-葡萄糖部分)；127.73，128.01和128.40(OCH￡6H5);164.00(N￡OO);169.24，169.42，169.76，169.98，170.35(CH3GO)。[a]D38.9°(cl，乙酸乙酯)。將得到的產物溶解在0.1M甲醇鈉的無水甲醇溶液中，並放置2小時，然後用離子交換樹脂KU-2(H+)中和並過濾。濾液在Pd/C催化劑下氫化反應過夜，過濾，冷凍乾燥得到23mg化合物(ll)，[a]D7r(cl，水)。選擇結構的特定13CNMR數據(500MHz，D20):48.74(OCH￡H2N)，50.85(O￡H2CH2N);61.72(C-6，27a-葡萄糖部分)，61.92(C-6，卩-葡萄糖部分)，77.28(C-4，(3-葡萄糖部分)；100.83(C-1，a-葡萄糖部分)；103.40(C-1，p-葡萄糖部分)。實施例13二氫卟酚e6(7)與雙[2-((3-麥芽糖氧基)乙基]胺(ll)的水溶性鹽的製備按照實施例9C描述的方法，使5mg二氫卟酚e6(7)與18.6mg胺(11)反應，幾乎定量地得到23mg冷凍乾燥的水溶性鹽。實施例14製備中脫鎂葉綠酸-a甲酯(37)將脫鎂葉綠酸-a甲酯(5)(130mg，0.2mmol)溶於5mL四氫呋喃，在室溫和約1大氣壓的H2以及在30mg碳載的10n/。Pd(OH)2上氫化反應1小時。過濾除去催化劑，將溶液進行濃縮，得到純的中(meso)脫鎂葉綠酸-a甲酯(37)(125mg，定量)。實施例15製備中二氫卟酚《6(20)按照實施例9B中的方法將中脫鎂葉綠酸-a甲酯(37)(20mg，0.033mmol)進行鹼性水解，得到中二氫卟酚-e6(17mg，86%)。MS(-)(電霧化)597.3(M-H)。實施例16中二氫卟酚&(20)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的製備按照實施例9C中描述的方法，15mg中二氫卟酚ee(20)與12mgN-甲基-D-葡糖胺(10)反應，定量得到27mg冷凍乾燥的水溶性鹽。formulaseeoriginaldocumentpage29實施例17脫鎂葉綠酸a(4)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的製備將脫鎂葉綠酸a甲酯(5)(30mg，0.049mmol)溶於2mL5(P/o的硫酸，混合物在室溫下攪拌2小時，用冰水稀釋，然後用氯仿萃取。萃取物用水洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，濃縮後得到粗脫鎂葉綠酸-a(4)。然後將後者溶於3mLN-甲基-D-葡糖胺(10)(11.6mg，1.2eq.)的水溶液中。用45nm過濾器過濾所得溶液，冷凍乾燥後得到29mg冷凍乾燥的水溶性鹽。MS(-)(電霧化)(酸4組分):591単-H)。實施例18二氫卟酚e6二甲酯(21)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的製備二氫卟酚-e6三甲酯(38)[根據L6tj加enS.，HynninenP.H.,Synthesis,1980，541-543製備](25mg，0.039mmol)用50%硫酸進行酸性水解，然後按照實施例17中描述的方法與9mgN-甲基-D-葡糖胺(10)進行反應，冷凍乾燥後得到32mg的水溶性鹽。MS(-)(電霧化)(酸21組分)623.5(M-H)。實施例19中(meso)焦(pyro)脫鎂葉綠酸a衍生物(25)與N-甲基-D-葡糖胺(lO)的水溶性鹽的製備將脫鎂葉綠酸-a甲酯(5)(1.3g，2.09mmol)溶於100mL吡啶，在氮氣氛及黑暗中，攪拌回流反應8小時。蒸發除去吡啶，殘餘物用二氯甲垸/甲醇進行重結晶，得到1.08g(92。/。)的焦(pyro)脫鎂葉綠酸-a甲酯(39)。UV/visonax(￡)(CH2Cl2):410(112500)，509(11400)，537(9800)，611(8500)，669(47000)nm。焦脫鎂葉綠酸a甲酯(39)(1.0g，1.78mmol)溶於100mL丙酮，在室溫和約8-10大氣壓的H2中，在300mglOy。的碳載Pd催化劑中進行氫化反應2小時。過濾除去催化劑，濃縮溶液得到純的中焦脫鎂葉綠酸-a甲酯(40)(1.0g，定量的)。UV/vis、max(s)(CH2Cl2):408(136000)，501(12400)，534(11800)，603(10500)，656(54600)nm;丄H-雨R(200MHz，CDC13):9.40(s，1H，(p-mesoH)，9.16(s，1H，隨esoH)，8.46(s，1H，5-mesoH)，5.26禾口5.08(AB，J=19.7Hz，10-CH2)，4.46(dq，1H，J7,8=2.0Hz，8-H)，4.27(dt，1H，7-H)，3.80和3.64(每個q，4H，J=7.5Hz，2a陽和4a-CH2)，3.63，3.52，3.28禾Q3.21(每個s，12H，l-、3-、5-Me和COOMe)，2.80-2.20(m，4H，7a,b-CH2CH2)，1.80(d，3H，J=7.3Hz,8-Me)，1.71禾卩L63(每個t，6H，J=7.5Hz，2b陽和4b-Me)，0.60和-1.60(每個brs，2H，NH)。將中焦脫鎂葉綠酸a甲酯(40)(250mg，0.443mmol)溶於5mL50。/o的硫酸，混合物在室溫下攪拌反應2小時，用冰水稀釋，並用氯仿萃取。萃取物用水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，濃縮得到粗中焦脫鎂葉綠酸a(36)。然後將後者溶於20mL二氯甲垸中，然後向其中加入0.3mL(2.22mmol，約5叫.)的三乙胺，接著加入0.1mL(0.576mmo1，1.3eq.)的三氟乙酸五氟苯基酯。混合物在室溫下攪拌反應20分鐘(以製備化合物41)，向其中加入0.5mL水，然後向其中加入化合物42(200mg，GlycoSenseAG的產品，Jena，Germany)的5mL二氯甲垸溶液。混合物在室溫下攪拌30分鐘，用二氯甲垸稀釋，然後用水和5%的硫酸洗滌，乾燥，濃縮。殘餘物用矽膠快速色譜法進行純化，使用丙酮-二氯甲垸(20:80)作為洗脫液進行洗脫，得至U2卯mg(88o/o)胺43。UV/visXmax(e)(CH2Cl2):408(136500)，501(12300)，534(11800)，603(10000)，656(54500)nm;iH-畫R(300應z，CDC13):9.41(s，1H，p-mesoH)，9.20(s，1H，a-mesoH)，8.47(s，1H，S-mesoH)，6.08(brs，1H，CONH)，5.26和5.08(AB，J=19.7Hz，10-CH2)，4.51(brq，1H，8-H)，4.32(brd，1H，7-H)，3.82和3.66(每個q，4H，J=7.5Hz，2a-禾口4a-CH2)，3.78(s，2H，OC^COOMe),3.63，3.32和3.21(每個s，9H，l-、3-和5-Me)，3.52(s，3H，COOMe)，3.28(brs，12H,NHQijCCj^CMzOC)，2.80-1.90(m，4H，7a，b-CH2CH2)，1.80(d，3H，J=7.3Hz，8-Me)，1.72和1.68(每個t，6H，J=7.5Hz，2b-和4b-Me)，0.70和-1.60(每個brs，2H，NH)。13C-NMR(75MHz，CDC13):196.3，172.4，172.3，160.2，155.2，150.3，149.0，145.0，142.3，141.6，137.3，136.9，135.6,131.3,130.1，127.8，105.9，104.1，95.8，92.5，70.5，70.2，69.9，69.6，68.2，51.6，50.1，48.0，39.1，39.0，32.6，30.2，23.1，19.5，19.4，17.5，17.0，12.0，11.3，11.0。將胺43(195mg，0.263mmol)溶於4mL50。/。的硫酸，混合物在室溫下攪拌2小時，用冰冷的水稀釋，離心分離所得沉澱物(5000rpm，3分鐘)，然後沉澱物用水(2x50mL)洗至pH為7(形成25)，然後將其溶於丙酮(50mL)、甲醇(15mL)和水(6mL)的混合物中。然後向上述溶液中加入N-甲基-D-葡糖胺(10)(56mg，0.29mmol，l.l叫)。在4(TC下將所得溶液在真空(約20mmHg)中濃縮，除去有機溶劑。將濃縮後的殘餘物溶於40mL水中，用45pm過濾器過濾，冷凍乾燥後得到239mg水溶性鹽。UV/visXmax(s)(H20):375(46550)，514(5750)，548(5750)，608(6320)，660(21260)。MS(-)(電霧化)(酸25組分)724.7(M-H)。(44)(45)R=Me(46)R=H(47)R=CeF5(48)(49)實施例20細菌脫鎂葉綠酸衍生物(29)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的製備32攪拌下，將0.5mL吡啶加入到中焦脫鎂葉綠酸-a甲酯(40)(650mg，1.152mmo1)的130mL二氯甲烷溶液中，接著向其中加入600mg(2.361mmo1，2.05叫.)的四氧化鋨。反應混合物在室溫下攪拌48小時，然後向溶液中鼓入H2S氣體5分鐘以將鋨酸鹽轉化為游離二醇(44)，混合物用矽膠柱進行分離，使用丙酮-氯仿(5:95)作為洗脫液進行洗脫，得到初始化合物40(l卯mg，29%)。用丙酮-氯仿(15:85)進行洗脫得到二醇(44)(350mg，51%)。後者在室溫下用20mL濃硫酸處理30分鐘。反應混合物用冰水稀釋，接著用氯仿萃取。萃取物分別用碳酸氫鈉水溶液和水洗滌，在無水硫酸鈉中乾燥，濃縮。殘餘物用矽膠柱色譜進行純化，使用丙酮-氯仿(l:99)作為洗脫液進行洗脫，得到酮(45)(180mg，從化合物(40)開始計算的收率為27%)[參見R.K.Pandey等人，JOrg.Chem.，1997，62，1463-1472]。將後者溶於5mL50。/o的硫酸中，然後將混合物在室溫下攪拌2小時，用冰冷卻的水稀釋，用氯仿萃取。萃取物用水洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，濃縮後得到粗化合物46。將後者溶於20mL二氯甲垸中，接著加入0.2mL(1.58mmo1，約5eq.)的三乙胺，然後加入70nL(0.411mmo1，1.3叫.)的三氟乙酸五氟苯基酯。混合物在室溫下攪拌20分鐘(以得到47)，然後向其中加入0.5mL的水，接著加入化合物42(150mg，GlycoSenseAG的產品，Jena，Germany)在5mL二氯甲院中的溶液。混合物在室溫下攪拌30分鐘，用二氯甲垸稀釋，用水和5%硫酸洗滌，乾燥，濃縮。殘餘物用矽膠進行快速色譜純化，使用丙酮-二氯甲垸(20:80)洗脫，得到205mg(85Q/。)的醯胺(48)。UV/visXmax(s)(CH2Cl2):394(42300)，412(44100)，506(7650)，539(9100)，597(4500)，652(15750)，712(30600)nm;^-麗R(250MHz，CDC13):9.18，8.72，8'50(每個s，3H，mesoH)，6.10(brs，1H，CONH)，5.20(m，2H，10-CH2)，4.50和4.30(兩個都是m，2H，8-H和7-H)，3.88(s，2H，OCg2COOMe)，3.58，3.41和3.21(每個s，9H，l-、3-和5隱Me)，3.5l(s，3H，COOMe)，3.30(brs，12H，NHCl^CEaOCEaClLOCl^CiisO),2.80-1.90(m，4H,7a，b-CH2CH2)，1.90-1.65(m，6H，2xCH2Qi3)，0.5(m，3H，CH2Cli3)，-0.10和-1.70(每個brs，2H，NH)。13C-NMR(75MHz，CDC13):201.4，199.2，172.3，33171.7，153.3，141.0，137/2，98.2，95.0，91.3，89.7，87.1，79.4，70.7，70.4，70.1，69.8，68.4，53.4,51.8，49.9，48.0，39.3，36.2，32.9，32.1，30.5，28.5，25.9，23.2，19.3，16.9，11.9，11.0，9.0，8.1。將所述醯胺衍生物(48)(205mg，0.270mmol)溶於4mL50。/o的硫酸中，混合物在室溫下攪拌2小時，用冰冷卻的水稀釋。離心分離所得沉澱物(5000rpm，3分鐘)，用水(2x50mL)洗滌至pH為7(以得到29)，並將其溶於丙酮(50mL)、甲醇(15mL)和水(6mL)的混合物中。將N-甲基-D-葡糖胺(10)(56mg，0.29mmo1，l.l叫.)加入到該溶液中。所得溶液在40'C下真空(約20mmHg)濃縮以除去有機溶劑。將殘餘物溶於40mL水中，用45(im過濾器過濾，溶液在40'C下真空(約20mmHg)濃縮，並在4(TC下真空(約lmmHg)乾燥，得至U240mg水溶性鹽。UV/visonax(s)(H20):420(40400)，515(5380)，561(6150)，668(9610)，776(51200)。MS(-)(電霧化)(酸29組分)740.7(M-H)。實施例21脫鎂葉綠酸a衍生物(22)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的製備用三氟乙酸五氟苯基酯(15nL)活化脫鎂葉綠酸a(4)(17mg，0.028mmo1)，接著在過量三乙胺存在下與化合物42(25mg，GlycoSenseAG的產品，Jena，Germany)反應，然後用50%的硫酸進行酸性水解，並按照實施例19中描述的方法與6.5mgN-甲基-D-葡糖胺(10)反應，冷凍乾燥後得到23mg水溶性鹽。MS(-)(電霧化)(酸22組分)780.1(M-H)。實施例22焦脫鎂葉綠酸a衍生物(23)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的製備用50%的硫酸對焦脫鎂葉綠酸a甲酯(39)(15mg)進行酸性水解，接著用三氟乙酸五氟苯基酯(15pL)活化，然後在過量三乙胺存在下與化合物42(25mg，GlycoSenseAG的產品，Jena，Germany)反應，然後用50%的硫酸進行酸性水解，按照實施例19中描述的方法與6mgN-甲基-D-葡糖胺(10)反應，得到19mg冷凍乾燥的水溶性鹽。MS(-)(電霧化)(酸23組分)722.1(M-H)。實施例23中脫鎂葉綠酸a衍生物(24)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的製備用50%的硫酸對中脫鎂葉綠酸a甲酯(37)(16mg)進行酸性水解，接著用三氟乙酸五氟苯基酯(15nL)活化，然後在過量三乙胺存在下與化合物42(25mg，GlycoSenseAG的產品，Jena，Germany)反應，然後用50%的硫酸進行酸性水解，按照實施例19中描述的方法與6mgN-甲基-D-葡糖胺(10)反應，得到18mg冷凍乾燥的水溶性鹽。MS(-)(電霧化)(酸24組分)782.1(M-H)。實施例24中焦脫鎂葉綠酸a衍生物(26)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的製備用三氟乙酸五氟苯基酯(20iiL)活化中焦脫鎂葉綠酸a(36)(20mg，0.034mmo1)，接著在過量三乙胺存在下與化合物49(40mg，GlycoSenseAG的產品，Jena，Germany)反應，然後按照實施例19中描述的方法與7mg的N-甲基-D-葡糖胺(10)反應，得到32mg冷凍乾燥的水溶性鹽。MS(-)(電霧化)(酸26組分)856翠-H)。實施例25中焦脫鎂葉綠酸a衍生物(27)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的製備用三氟乙酸五氟苯基酯(15nL)活化中焦脫鎂葉綠酸a(36)(15mg，0.026mmo1)，接著在過量三乙胺存在下與20mg甘氨酸甲酯反應，接著用50%的硫酸進行酸性水解，然後按照實施例19中描述的方法與5mgN-甲基-D-葡糖胺(10)反應，得到19mg冷凍乾燥的水溶性鹽。MS(-)(電霧化)(酸27組分)592単國H)。實施例26中焦脫鎂葉綠酸a衍生物(28)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的製備用三氟乙酸五氟苯基酯(15pL)活化中焦脫鎂葉綠酸a(36)(14mg，0.024mmo1)，接著在過量三乙胺存在下與25mge-氨基己酸甲酯反應，接著用50%的硫酸進行酸性水解，然後按照實施例19中描述的方法與5mgN-甲基-D-葡糖胺(10)反應，得到20mg冷凍乾燥的水溶性鹽。MS(-)(電霧化)(酸28組分)648.5(M-H)。實施例27二氫卟酚《6衍生物(30)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的製備將脫鎂葉綠酸a甲酯(5)(38mg，0.063mmol)與N,N-二甲基-l,3-二氨基丙垸(10(HiL)在1,4-二噁烷(3mL)中的混合物在室溫下保持10小時(以製備化合物50)。向該溶液中加入6MNaOH水溶液(0.1mL)，將所得混合物回流10分鐘。然後加入5mL水，再回流10分鐘。將混合物冷卻，用30mL水稀釋，用乙酸酸化至pH為4.5。離心分離形成的沉澱物(5000rpm，3分鐘)，用水洗滌沉澱物，得到二酸衍生物(30)。將後者溶於7mLN-甲基-D-葡糖胺(10)(30mg，1.2叫.)水溶液中。用45iim過濾器過濾所得溶液，冷凍乾燥後得到62mg水溶性鹽。MS(+)(電霧化)(酸30組分)681.3(M+H)。實施例28二氫卟酚ee衍生物(31)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的製備將脫鎂葉綠酸a甲酯(5)(22mg，0.036mmol)與1,7-二氨基庚垸(100nL)反應，接著用NaOH水溶液進行鹼性水解，然後按照實施例27中描述的方法與18mgN-甲基-D-葡糖胺(10)反應，得到41mg冷凍乾燥的水溶性鹽。MS(-)(電霧化)(酸31組分)709.4(M+H)。實施例29二氫卟酚ee衍生物(32)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的製備將脫鎂葉綠酸a(4)(20mg，0.033mmol)和e-氨基己酸甲酯(50mg，約10eq.)在1，4-二隨烷(3mL)中的溶液在室溫下保持120小時。混合物用二氯甲烷稀釋，然後用0.5NHC1水溶液和水洗滌，乾燥，濃縮，用矽膠快速色譜法進行純化，使用3%的甲醇-二氯甲烷作為洗脫液進行洗脫，得到22mg(88。/。)的醯胺衍生物(51)。後者用50%硫酸進行酸性水解，然後按照實施例17中描述的方法與13.5mgN-甲基-D-葡糖胺(10)反應，得到33mg冷凍乾燥的水溶性鹽。MS(-)(電霧化)(酸32組分)722.3(M-H)。實施例30二氫卟酚e6衍生物(33)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的製備將脫鎂葉綠酸a(4)(20mg，0.034mmol)和2-氨基乙醇(50nL)在1，4-二聰烷(3mL)中的溶液在室溫下保持1小時。混合物用二氯甲垸稀釋，用0.5NHC1水溶液和水洗滌，乾燥，濃縮，用矽膠快速色譜法，使用3%的甲醇-二氯甲垸作為洗脫液進行純化，得到20mg(9in/。)的醯胺衍生物(33)。然後按照實施例17中描述的方法與8mgN-甲基-D-葡糖胺(10)反應，得到28mg冷凍乾燥的水溶性鹽。MS(-)(電霧化)(酸33組分)652.2(M-H)。實施例31在OV2774細胞中，測定根據本發明製得的二氫卟酚e6(7)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽與根據Ponomarev等(RU2144538)製得的二氫卟酚ee(7)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的暗毒性(細胞毒性)為了測定根據本發明實施例9B製得的二氫卟酚66(7)與^甲基-0-葡糖胺(10)的水溶性鹽(化合物A)和根據Ponomarev等人的RU2144538製得的二氫卟酚es(7)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽(化合物B)的細胞毒性(暗毒性)，將OV2774細胞(接種密度50-75細胞/mm2在RPMI-1640w.P.(用酚紅)中，5%胎牛血清，2mMGlutai恵I，100嗎/mL青黴素/鏈黴素)用逐漸增加至50pM的濃度培育24小時。在無敏化劑的介質中再經過24小時後，使用中性紅分析法測定細胞的存活率。細胞存活率的數值以未培育的對照樣品的百分比表示。對於每個培育濃度，三個獨立實驗都重複進行4次。實驗數據列於圖1中。化合物A與化合物B相比，其對OV2774細胞的毒性更低。培育濃度至25pM(化合物B:10pM)時，細胞存活率沒有明顯降低。在此範圍內不能測定IC50值(培育濃度，與對照組相比，細胞生長降低50%)。最高測試培育濃度的細胞存活率大於80%。實施例32在OV2774細胞中，測定根據本發明製得的二氫卟酚ee(7)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽與根據Ponomarev等(RU2144538)製得的二氫卟酚ee(7)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的光毒性(細胞毒性)為了測定根據本發明實施例9製得的二氫卟酚％(7)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽(化合物A)和根據Ponomarev等人的RU2144538製得的二氫卟酚ee(7)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽(化合物B)的光毒性，將OV2774細胞(接種密度50-75細胞/mm2在RPMI-1640w/oP.(用酚紅)，5%胎牛血清，2mMGlutamaxI，100ng/mL青黴素/鏈黴素)用前面實驗中使用的的相同濃度化合物B(l(HiM，24h)培育。在無光敏劑和無酚紅的介質中進行第二階段的培育，然後用670nm的光(10-25mW/cm2，0.1-2.5J/cm2)進行照射，使用中性紅分析法測定細胞的存活率。細胞存活率的數值以培育的、但未照射的對照組的百分比表示。五個獨立實驗都重複進行4次。樣品的IDs。值(能流(能量密度)，與對照組相比，細胞生長降低50%)用作光毒性的定量測定。實驗數據列於圖2中。實驗結果表明，化合物A與化合物B相比，其對OV2774細胞的光毒性更高一些。化合物A的ID5c值約為化合物B的IDso值的一半(0.1J/cm2對0.2J/cm2)。實施例33在HeLa細胞中，測定二氫卟酚(7)禾口脫鎂葉綠酸[(4)、(22)和(25)]38衍生物與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的暗毒性(細胞毒性)為了測定根據實施例9、17、19和21製得的二氫卟酚e6(7)和脫鎂葉綠酸a衍生物(4、22、25)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的暗毒性，在光敏劑濃度從2ng/mL增加至500叫/mL的同時，將HeLa(人類頸部癌細胞)細胞單層培養物在96孔板(接種密度7000細胞/L，具有10%胎牛血清的Dulbeco改性的必需培養基(Dulbeco-modifiedessentionalmedium)(DMEM))中培育48小時。該細胞用純的DMEM進行洗漆，然後在室溫下用10%的福馬林處理15分鐘。用水洗滌細胞兩次，細胞用0.1%的結晶紫(50|111/孔)溶液培育15分鐘，然後用水洗滌，用乙醇(10(Hil/孔)處理。形成的乙醇溶液的光密度用SpecordlOO(AnalytikJenaAG，Germany)分光光度計在594nm處測定，以檢測細胞的存活率。細胞存活率的數值以未培育的對照組的百分比表示。對於每個培育濃度，進行八個實驗。實驗數據列於表1中，表1中列出ICso和IC8值(培育濃度，與對照組相比，細胞生長降低達到50%和20%)。表l.在HeLa細胞中，二氫卟酚(7)和脫鎂葉綠酸[(4)、(22)和(25)〗衍生物與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的暗毒性(細胞毒性)數據(實施例33)tableseeoriginaldocumentpage39承不能測定(〉1000嗎/mL)。實施例34在HeLa細胞中，測定在662nm的輻射下二氫卟酚(7)和脫鎂葉綠酸[(4)、(22)和(25)]衍生物與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的細胞毒性為了測定根據實施例9、17、19和21製得的二氫卟酚e6(7)和脫鎂葉綠酸a衍生物(4、22、25)與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的細胞毒性，在光敏劑濃度從0.01嗎/mL增加至40路/mL的同時，將HeLa(人類頸部癌細胞)細胞單層培養物在96孔板(接種密度30,000細胞/孔，在含10%胎牛血清的DMEM中)中培育。培育30分鐘後，用662mn的光[CeralasPDT雷射器，BioLitecAG，德國；150mW/cm2，5-20J/cm2]照射。用MTT分析法測定細胞存活率。細胞存活率的值以輻射的、但未培育的對照組的百分比表示。實驗重複進行8次。實驗數據列於表2中，表2中列出在進行10J/cn^輻射後的ICso和IC卯值。表2.在HeLa細胞中，二氫卟酚(7)和脫鎂葉綠酸[(4)、(22)和(25)]衍生物與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的細胞毒性數據(實施例34)tableseeoriginaldocumentpage40實施例35在抗菌光動力治療實驗中，測定二氫卟酚(7)和脫鎂葉綠酸[(4)、(22)和(25)]衍生物與N-甲基-D-葡糖胺(10)的水溶性鹽的細胞毒性使用的微生物是館藏的和臨床的菌株，金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)(ATCC25923)、糞腸球菌(Enterococcusfaecalis)(ATCC29212)和假絲酵母菌屬種(Candidaspp)(臨床的)。菌落在下面類型的固體介質上培養金黃色葡萄球菌在葡萄球菌瓊脂110上培養、糞腸球菌在帶5%馬血的Columbia瓊脂上培養、假絲酵母菌屬種在Saburo葡萄糖瓊脂上培養。根據McFarland標準製備等滲NaCl溶液中的最初細菌懸浮液(IBS),該懸浮液的數值為0.5-1.0(在lmL懸浮液中有1.5-5xlS個細菌細胞)，接著按1:100進行稀釋。為了正確控制細菌細胞數，IBS的一部分用等滲NaCl溶液稀釋1:1000(直到為最初濃度的10—3)，取出3等分的O.lmL，每個接種在單獨的含微生物合適的介質的培養皿中。菌落在37'C培育24小時(對於金黃色葡萄球菌，培育48小時)，然後對菌落進行計數，取3個培養皿的平均值用作對照值。A).控制溫度和雷射輻射行為將2.0mL最初細菌懸浮液(IBS)在37'C儲存30分鐘，然後用等滲NaCl溶液稀釋1:1000(直到為最初濃度的10'3)，取出3個等分試樣，每個O.lmL，將每個試樣接種在單獨的培養皿中，每個培養皿含有微生物合適的介質。將菌落在37'C培育24小時，然後對菌落進行計數，取3個培養皿的平均值用作對照值。將IBS(2.0mL)的另一個樣品在37X:儲存30分鐘，然後在40mm的培養皿(懸浮液層的厚度-2mm)中用輸出功率為3W的"CeraksPDT"雷射輻射210秒，以使輸出光能的劑量是50J/cm2。混合物用等滲NaCl溶液稀釋至1:1000(直到為最初濃度的10—3)，取3個等分試樣，每個O.lmL，並將它們在單獨的培養皿中培養，按上述方法計數。表3中的數據[處理體系B和C表示(7)]表明IBS在37'C下儲存30分鐘，在沒有光敏劑和在劑量為50J/cn^的雷射輻射下幾乎沒有影響細菌的成活力。B).暗毒性測定將0.5mL濃度為500pg/mL的光敏劑的儲備溶液加入到2.0mLIBS中，使所得光敏劑的濃度為10(Hig/mL。將形成的懸浮液在37'C下儲存30分鐘，然後用等滲NaCl溶液稀釋至1:1000(直到為最初濃度的10—3)，取3個等分試樣，每個O.lmL，並將它們在單獨的培養皿中培養，按上述方法計數。表3中的數據表明本發明的光敏劑在濃度為100嗎/mL的情況下培育30分鐘幾乎沒有暗毒性作用。C).光毒性測定將0.125或0.5mL濃度為500|ag/mL的光敏劑的儲備溶液加入到2.0mLIBS中，使所得光敏劑的濃度分別為25和100pg/mL。形成的懸浮液在37'C下儲存30分鐘，然後用強度為50J/cn^的雷射進行輻射。取3個等分試樣，每個O.lmL，並將它們在單獨的培養皿中培養，剩餘懸浮液部分用等滲NaCl溶液稀釋至1:100或1:1000(直到為最初濃度的10^或1(T3)，取3個等分試樣，每個O.lmL，並將它們在單獨的培養皿中培養，按上述方法計數。表3中的數據說明本發明的水溶性鹽可以作為抗菌光動力療法的光敏劑。42表3.二氫卟酚(7)和脫鎂葉綠酸[(4)、(22)和(25)]衍生物與N-甲基-D-葡糖胺(IO)的水溶性鹽在抗菌光動力治療實驗中的應用(實施例35)tableseeoriginaldocumentpage43*處理體系A,使用的最初細菌懸浮液(IBS)中對照組細菌數目；B,IBS在37"C恆溫儲存30分鐘後的細菌數目；C,用劑量為50J/cm2的雷射(CeralasPDT,3W，210秒)輻射後的細菌數目；D,用光敏劑(濃度100)ig/mL)培育30分鐘後的細菌數目；E,用濃度為25嗎/mL的光敏劑進行光動力學處理後的細菌數目；F,用濃度為100ng/mL的光敏劑進行光動力學處理後的細菌數目；上述實施例公開了本發明優選的實施方案，但是應該理解的是，本發明並不限於這些具體的實施方案，本領域熟練技術人員在不脫離後附的本發明權利要求書的範圍內和精神下，可以作出各種變化和改變。權利要求1.一種利用親水性胺製備藥物級水溶性卟啉鹽的方法，該方法包括以下步驟a)使生物原料一步或兩步直接酸性醇解，得到脫鎂葉綠酸烷基酯的晶體；b)將得到的脫鎂葉綠酸烷基酯轉化為酸性卟啉；以及c)使酸性卟啉與親水性有機胺在選自水和含水有機溶液的介質中反應。2.權利要求1的方法，其中所述生物原料選自天然存在的植物、藻類、血液組分、昆蟲分泌物、微生物。3.權利要求2的方法，其中天然存在的植物和藻類包括盤狀螺旋藍細菌、最大螺旋藍細菌、小球藻、蕁麻和菠菜。4.權利要求l的方法，其中一步或兩步直接酸性醇解選自甲醇醇解和乙醇醇解。5.權利要求1的方法，其中所述親水性有機胺選自N-甲基-D-葡糖胺、氨基烷基苷、三(羥甲基)氨基甲烷和其衍生物、胺基酸和寡肽。6.權利要求5的方法，其中所述有機胺是N-甲基-D-葡糖胺。7.—種利用親水性胺製備藥物級水溶性卟啉鹽的方法，該方法包括使酸性卟啉與親水性有機胺在選自水和含水有機溶液的介質中反應。8.權利要求7的方法，其中所述親水性有機胺選自N-甲基-D-葡糖胺、氨基垸基苷、三(羥甲基)氨基甲烷和其衍生物、胺基酸和寡肽。9.權利要求7的方法，其中所述有機胺是N-甲基-D-葡糖胺。全文摘要本發明涉及用於光動力學治療的水溶性卟啉鹽的製備方法，具體地，本發明涉及一種利用親水性胺製備藥物級水溶性卟啉鹽的方法，該方法包括以下步驟a)使生物原料一步或兩步直接酸性醇解，得到脫鎂葉綠酸烷基酯的晶體；b)將得到的脫鎂葉綠酸烷基酯轉化為酸性卟啉；以及c)使酸性卟啉與親水性有機胺在選自水和含水有機溶液的介質中反應。本發明還涉及一種利用親水性胺製備藥物級水溶性卟啉鹽的方法，該方法包括使酸性卟啉與親水性有機胺在選自水和含水有機溶液的介質中反應。本發明的化合物可以在癌症、感染和其它需要光輻射治療的疾病的光動力學治療中用作光敏劑。文檔編號A61P35/00GK101638411SQ200910130260公開日2010年2月3日申請日期2002年5月31日優先權日2001年6月1日發明者尼古拉·E·尼凡蒂耶夫,德米特裡·V·亞順斯基申請人:塞拉莫普泰克工業公司