苯並[d]異噁唑-3-醇DAAO抑制劑的製作方法

2023-05-10 18:45:01 2

專利名稱：：苯並[d]異噁唑-3-醇DAAO抑制劑的製作方法苯並[d]異噁唑-3-醇DAA0抑制劑本申請是2004年12月28日提交的，發明名稱為「苯並[d]異噁唑_3_醇DAA0抑制劑」的中國專利申請200480042205.0的分案申請。相關申請的交叉引用本申請為非臨時申請並要求2003年12月29日遞交的美國臨時申請60/532，978的優先權。美國臨時申請60/532，978的全部公開內容引入本文作為參考。
背景技術：
：酶D胺基酸氧化酶(DAA0)代謝D胺基酸，特別是，在生理pH下在體外代謝D_絲氨酸。DAA0在哺乳動物腦和外周中表達。D-絲氨酸作為神經遞質在穀氨酸受體的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)選擇性亞型的激活中起重要的作用，穀氨酸受體的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)選擇性亞型是在神經元中表達的離子通道，本文稱之為NMDA受體。抑制DAA0酶周期的有機小分子可能控制D-絲氨酸的水平，並因此影響腦中NMDA受體的活性。NMDA受體的活性在多種疾病狀態，例如精神分裂症、精神病、共濟失調、缺血、包括神經性疼痛在內的幾種形式的疼痛以及記憶和認知缺陷中是重要的。抑制DAA0酶周期的有機小分子還可能控制D-絲氨酸氧化的毒代謝物，例如過氧化氫和氨的產生。因此，這些分子可能影響神經變性病症中細胞丟失的進程。神經變性疾病是其中CNS神經元和/或外周神經元發生進行性功能喪失的疾病，通常伴隨神經元本身或神經元與其它神經元之間的接觸面的結構的物理退化。這些病症包括帕金森氏病、阿爾茨海默氏病、亨廷頓氏病和神經性疼痛。N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)-穀氨酸受體在整個中樞神經系統(CNS)中的興奮性突觸部位表達。這些受體介導與某些類型的記憶形成和學習有關的多種腦過程，包括突觸可塑性。NMDA穀氨酸受體需要與兩個激動劑結合以實現神經傳遞。這些激動劑之一是興奮性胺基酸L-穀氨酸，而在所謂的「馬錢子鹼不敏感的甘氨酸位點」的第二種激動劑現在認為是D-絲氨酸。在動物中，D-絲氨酸通過絲氨酸消旋酶從L絲氨酸合成，並被DAA0降解為其相應的酮酸。絲氨酸消旋酶與DAA0—起被認為通過調節CNS中D-絲氨酸的濃度而在調節NMDA神經傳遞中發揮關鍵的作用。阿爾茨海默氏病表現為一種形式的痴呆，其通常涉及心智退化，反映在記憶喪失、精神錯亂和定向障礙。在本發明的上下文中，痴呆定義為在認知功能的多方面發生進行性衰退的症候群，最終導致不能維持正常的社會和/或職業表現。早期症狀包括記憶減退和特定的認知功能的輕度但進行性退化，所述特定的認知功能例如語言(失語症)、運動技能(失用症)和知覺(失認症)。阿爾茨海默氏病最早表現通常為記憶障礙，其是特定針對阿爾茨海默氏病的theNationalInstituteofNeurologicalandCommunicativeDisordersandStroke-Alzheimer'sDisease—andtheAlzheimer'sDiseaseandRelatedDisordersAssociation(NINCDS-ADRDA)豐示}f(McKhann^,1984,Neurology34939-944)和適用於所有形式的痴呆的美國精神病學協會的DiagnosticandStatisticalManualofMentalDisorders，第四版(DSM-IV)標準中對痴呆診斷的要求。還可以根據theAlzheimer'sdiseaseAssessmentScale-cognitivesubscale(ADAS-cog；Rosen等，1984，Am.J.Psychiatryl41:1356_1364)對患者的認知功能進行評價。阿爾茨海默氏病通常用乙醯膽鹼酯酶抑制劑如鹽酸他克林或多奈哌齊進行治療。遺憾的是，認為現有的幾種形式的記憶喪失和學習障礙的治療還不足以對患者產生顯著的效果，目前仍缺乏用於這種治療的標準益智藥。神經精神病症包括精神分裂症、孤獨症和注意力缺陷病症。臨床醫師識別這些病症之間的區別，並有多種方案對它們進行分類。美國精神病學協會出版的DiagnosticandStatisticalManualofMentalDisorders，修訂版，第四版(DSM-IV-R)為本領域技術人員提供了參考的標準診斷系統，該文獻引入本文作為參考。根據DSM-IV的框架，軸I的精神病症包括兒童中診斷的病症(如注意力缺陷病症(ADD)和注意力缺陷過動症(ADHD))和成人中診斷的病症。成人中診斷的病症包括(1)精神分裂症和精神病症；(2)認知障礙；(3)心境障礙；⑷焦慮相關病症；(5)進食障礙；(6)物質相關病症；(7)人格障礙；以及⑶該方案中「尚未包括在內的病症」。ADD和ADHD是兒童中最普遍的病症，與運動活性增加和注意力時長下降有關。這些病症通常通過給予精神興奮藥如哌醋甲酯和硫酸右旋苯異丙胺來治療。精神分裂症代表一組神經精神病症，其特徵為思考過程的功能障礙，如妄想、幻覺和患者對其它人的興趣大幅減退。世界人口中約有百分之一的人罹患精神分裂症，這一病症伴有高發病率和高死亡率。所謂的精神分裂症的陰性症狀包括情感遲鈍、無力、失語和社會退縮，可以使用SANS(Andreasen，l983，ScalesfortheAssessmentofNegativeSymptoms(SANS),IowaCity,Iowa)對其進行評價。精神分裂症的陽性症狀包括妄想和幻覺，可以使用PANSS(PositiveandNegativeSyndromeScale)(Kay等，1987，SchizophreniaBulletin13:261_276)對其進行評價。精神分裂症的認知症狀包括獲取、組織和使用知識的能力障礙，可以使用thePositiveandNegativeSyndromeScale-cognitivesubscale(PANSS-cognitivesubscale)(Lindenmayer等，1994,J.Nerv.Ment.Dis.182:631_638)對其進行評價或者利用認知任務如theWisconsinCardSortingTest對其進行評價。作用於多巴胺D2受體的常規抗精神病藥物可用於治療精神分裂症的陽性症狀，例如妄想和幻覺。一般而言，作用於多巴胺D2受體和5HT25-羥色胺受體的常規抗精神病藥物和非典型抗精神病藥物對治療認知缺陷和陰性症狀例如情感遲鈍(即缺乏面部表情)、無力和社會退縮效果有限。表現為記憶和學習缺陷的其它病症包括良性遺忘症和閉合性頭部損傷。良性遺忘症指不能找回或回憶起曾經記錄、學習或儲存於記憶中的信息(例如不能記起鑰匙放在哪裡或車停在哪裡)的輕微傾向。良性遺忘症通常影響40歲以上的個體，並且可以通過標準評價工具如theffechslerMemoryScale進行識別。閉合性頭部損傷是指頭部損傷或創傷後的臨床病症。根據DSM-IV，這種以認知和記憶障礙為特徵的病症可以被診斷為「由一般醫學病症引起的遺忘性病症」。如Frisell等，J.Biol.Chem.，223:75_83(1956)禾口Parikh等，JACS，80:953(1958)所述，已知的DAA0抑制劑包括苯甲酸、吡咯_2_羧酸和吲哚_2_羧酸。吲哚衍生物，特別是某些吲哚-2-羧酸酯在治療神經變性疾病和神經毒性損傷的文獻中已有描述。EP396124公開了吲哚-2-羧酸酯及其衍生物用於由CNS病症或創傷事件導致的神經毒性損傷的治療或控制或用於神經變性疾病的治療或控制。給出了可能導致神經毒性損傷的創傷事件的幾個實例，包括與圍產期窒息、心臟停搏或中風相關的低氧、缺氧和缺血。神經變性與CNS病症，例如驚厥和癲癇有關。Cugola的美國專利5，373，018,5,374，649、5，686，461、5，962，496和6，100，289公開了使用吲哚衍生物治療神經毒性損傷和神經變性疾病。上述參考文獻中沒有一篇提及學習、記憶或認知的改善或提高。W003/039540公開了使用DAA0抑制劑，包括吲哚_2_羧酸增強學習、記憶和認知和治療神經變性病症。但是，仍然需要臨床上有效治療記憶缺陷、學習障礙和認知喪失以及與NMDA受體活性或其缺乏有關的其它症狀的新藥。意想不到地發現某些苯並[d]異噁唑-3-醇衍生物表現比已知抑制劑具有更強的DAA0抑制活性。已觀察到，特別是相對於已知的DAA0抑制劑，例如苯甲酸、吡咯_2_羧酸和吲哚-2-羧酸而言，這些化合物在體外抑制DAA0的濃度要低的多。由於具有這種抑制DAA0活性的能力，所述某些苯並[d]異噁唑衍生物可用於治療其中通過調節D-絲氨酸水平和/或其氧化產物以有效緩解症狀的各種疾病和/或病症，同時減輕不期望的副作用。具體而言，這些化合物可用於增加D-絲氨酸水平並降低D-絲氨酸氧化產生的毒性產物的水平；因此，這些化合物用於增強學習、記憶和/或認知，或用於治療精神分裂症，用於治療或預防與阿爾茨海默氏病有關的記憶和/或認知喪失，用於治療共濟失調，或者用於預防神經變性疾病特徵性的神經元功能喪失。因此，一方面，本發明涉及用於增加D-絲氨酸並降低D-絲氨酸氧化產生的毒性產物，用於增強學習、記憶和/或認知，或用於治療精神分裂症，用於治療或預防與阿爾茨海默氏病有關的記憶和/或認知喪失，用於治療共濟失調，或者用於預防神經變性疾病特徵性的神經元功能喪失的方法。所述方法包括給予個體治療量的式I的化合物或其藥學可接受的鹽或溶劑合物formulaseeoriginaldocumentpage5其中Z1是N或CR3;Z2是N或CR4;Z3是0或S；A是氫、烷基或M+;M是鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉、鋅或它們的混合物；R1、R2、R3和R4獨立地選自氫、烷基、羥基、烷氧基、芳基、醯基、滷素、氰基、滷代烷基、NHC00R5和S02NH2；R5是芳基、芳基烷基、雜芳基或雜芳基烷基；且
發明內容t和Z2中至少一個不是N。第二個方面，本發明涉及用於治療孤獨症、精神分裂症、阿爾茨海默氏病、共濟失調或神經變性疾病的方法，所述方法包括向需要對這些病症中的一種或多種進行治療的個體給予治療有效量的上述式I的D胺基酸氧化酶(DAA0)抑制劑。在優選的實施方案中，式I的化合物是取代的苯並[d]異噁唑-3-醇，即Ri、R2、R3和R4中至少一個不是氫。示例性化合物為formulaseeoriginaldocumentpage6具體實施例方式本發明涉及用於增加D-絲氨酸並降低D-絲氨酸氧化產生的毒性產物，用於增強學習、記憶和/或認知，或用於治療精神分裂症，用於治療或預防與阿爾茨海默氏病有關的記憶和/或認知喪失，用於治療共濟失調，或者用於預防神經變性疾病特徵性的神經元功能喪失的方法。所述方法包括給予個體治療量的式I的化合物或其藥學可接受的鹽或溶劑合物其中Z1是N或CR3；Z2是N或CR4；Z3是0或S；A是氫、烷基或M+;M是鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉、鋅或它們的混合物；R1、R2、R3和R4獨立地選自氫、烷基、羥基、烷氧基、芳基、醯基、滷素、氰基、滷代烷基、NHC00R5和S02NH2；R5是芳基、芳基烷基、雜芳基或雜芳基烷基；且Z1和Z2中至少一個不是N。用式I的化合物進行治療改善和/或增強記憶、學習和認知，特別是在患神經變性疾病如阿爾茨海默氏病、亨廷頓氏病或帕金森氏病的個體中。這些化合物還緩解與衰老有關的認知功能障礙並改善緊張型精神分裂症。式I的化合物在DAA0抑制方面具有獨特的藥理學特徵，特別是通過控制D-絲氨酸水平影響腦中NMDA受體的活性。因此，這些化合物有效地治療由DAA0、D-絲氨酸和/或NMDA受體活性調節的疾病和病症，特別是CNS相關病症，同時與給予目前的標準治療相比副作用減輕。這些疾病或病症包括但不限於神經精神病症，例如精神分裂症、孤獨症、注意力缺陷病症(ADD和ADHD)和兒童期學習障礙，以及神經變性疾病和病症，例如MLS(小腦共濟失調)、阿爾茨海默氏病、帕金森氏病、亨廷頓氏病、肌萎縮性側索硬化、唐氏症候群、神經性疼痛、多發性硬化性痴呆、癲癇持續狀態、挫傷(如脊髓損傷和頭部損傷)、病毒感染引起的神經變性(如AIDS、腦病)、癲癇、良性遺忘症和閉合性頭部損傷。式I的化合物還可用於治療腦中風、血栓栓塞性中風、出血性中風、腦缺血、腦血管痙攣、低血糖、遺忘症、低氧、缺氧、圍產期窒息和心臟停搏後的神經毒性損傷。式I的化合物一般比包括吲哚-2-羧酸酯在內的已知DAA0抑制劑具有更高的選擇性，而且相對於在NMDA受體的D-絲氨酸結合位點的結合而言，表現對DAA0抑制的更高選擇性。這些化合物還表現出包括良好的生物利用度在內的有利的活性特徵(profile)。因此，與本領域已知的用於治療由DAA0、D-絲氨酸或NMDA受體活性調節的病症的許多方法相比，它們提供了優勢。例如，與許多常規的抗精神病治療方法不同，DAA0抑制劑能使精神分裂症的認知症狀如所期望地降低。常規的抗精神病藥常常產生不期望的副作用，包括遲發性運動障礙(不可逆性不隨意性運動障礙)、錐體外系症狀和靜坐不能，而給予式I的化合物可以減輕或消除這些症狀。另一方面，本發明還涉及式la的化合物或其藥學可接受的鹽或溶劑合物以及含有它們的藥物組合物formulaseeoriginaldocumentpage7其中A是氫、烷基或M+;M是鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉、鋅或它們的混合物；Z是0或S；R1和R2獨立地選自氫、烷基、羥基、烷氧基、芳基、醯基、滷素、氰基、滷代烷基、NHC00R5和S02NH2；R5是芳基、芳基烷基、雜芳基或雜芳基烷基；且R3a和R4a獨立地選自烷基、羥基、烷氧基、芳基、醯基、滷素、氰基、滷代烷基、NC00R5和so2nh2。式la的化合物形成式I的化合物的子集，因此可以用於本發明的方法中。本文中提及式I的化合物時意在包括式la的化合物。在優選的實施方案中，式I和la的化合物是在5位和/或6位被取代的苯並[d]異噁唑-3-醇。對於式I和Ia化合物和5-、6_和5，6-取代的苯並[d]異噁唑-3-醇而言，優選的取代基為滷素(特別是氯)、羥基、烷基(特別是高級烷基(C6C2tl))和烷氧基。特別優選的苯並[d]異噁唑-3-醇D-胺基酸氧化酶抑制劑包括formulaseeoriginaldocumentpage8formulaseeoriginaldocumentpage9本發明包括式I和Ia的化合物以及這些化合物的藥學可接受的鹽和溶劑合物。術語「化合物或化合物的藥學可接受的鹽或溶劑合物」意指「或」的包括意義，即鹽和溶劑合物的物質均包括。藥學可接受的鹽包括但不限於鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉和鋅的無機鹽以及賴氨酸、N，N'-二苄基乙二胺、氯普魯卡因、膽鹼、二乙醇胺、乙二胺、甲葡胺(N-甲基葡糖胺)、普魯卡因和氨丁三醇的有機鹽。本發明的治療個體包括需要對所述病症進行治療的人(患者)和其它哺乳動物。需要對改善或增強學習和記憶進行治療的患者是那些表現出痴呆或學習和記憶喪失症狀的患者。具有遺忘病症的個體他們的學習新信息的能力受到損傷或者不能回憶起以前學習過的信息或過去的事件。記憶缺陷在要求自發回憶的任務時最為明顯，以及當檢查者晚些時候向個體提供刺激以回憶時也可能明顯。記憶障礙必須是嚴重到足以引起明顯的社會或職業功能障礙，且必須比以前的功能水平有顯著下降。記憶缺陷可以是年齡相關的，也可以是疾病或其它原因的結果。痴呆的特徵是與以前功能水平相比具有顯著變化的臨床上顯著的多重認知缺陷，包括涉及不能學習新信息或忘記以前學過的信息的記憶障礙。可以通過測試記錄、保持、回憶和識別信息的能力在形式上測試記憶。對痴呆的診斷還要求至少具有以下認知障礙之一失語、運動不能、認識不能或執行功能障礙。這些分別在語言、運動功能、客觀識別和抽象思考方面的缺陷必須嚴重到與記憶缺陷結合起來足以導致職業或社會功能障礙，且與以前較高的功能水平相比降低。式I和Ia的化合物還可以與涉及給予D-絲氨酸或其類似物如D-絲氨酸鹽、D-絲氨酸酯、烷基化D-絲氨酸或D-絲氨酸前體的治療聯合使用，或者可以與涉及給予抗精神病藥、抗抑鬱藥、精神興奮藥和/或阿爾茨海默氏病治療劑的治療聯合使用。在動物中，已有幾種學習和記憶模型可用於檢測治療對認知增強的有益效果和潛在的相關副作用。Sarter，Martin，Intern.J.Neuroscience,32765-774(1987)中給出了關於可用於評價非人物種認知改變的測試描述。該測試包括Morris水迷宮法(Stewart和Morris,BehavioralNeuroscience，R.Saghal，Ed.,p.107(1993))、非配對延遲作業法和社交分辨模型(socialdiscriminationmodel)。Morris水迷宮是被確認為最有效的學習記憶模型，它對多種藥理學活性劑增強認知的作用敏感。在該迷宮中進行的任務對腦中海馬區的操作特別敏感，海馬區是腦中對動物的空間學習和人的記憶鞏固重要的區域。此外，在Morris水迷宮中行為表現的改善預測化合物作為認知增強劑的臨床效能。例如，用膽鹼酯酶抑制劑或選擇性毒蕈鹼膽鹼能激動劑治療，在Morris迷宮動物學習記憶模型中逆轉學習缺陷，而在臨床痴呆人群中也有同樣效果。此外，這一動物模型準確地模擬了障礙隨年齡增長而程度加劇，以及記憶痕跡對測試前延遲或幹擾的脆弱性的增加，而這種脆弱性的增加是遺忘症患者的特徵。該測試是簡單的空間學習任務，其中將動物置於微溫的水槽中，由於加入奶粉其為不透明的。動物學習平臺相對於迷宮中和測試房間內視覺線索的位置；這一學習被稱為位置學習。各組動物在訓練前或訓練後以期望的時間間隔接受對照溶液或一定劑量的治療活性劑(therapeuticagent)0訓練3天後對照動物通常在5_10秒內到達平臺。治療活性劑的記憶調節的度量是這一時間段的變化。在測試的第二階段或探查階段，將先前學習過平臺位置的動物置於平臺已被移走的水槽中。記住平臺位置的動物將在本來具有平臺的象限停留較長時間並將穿過先前被平臺佔據的位置較多次。記憶或認知能力的增強表現為與對照動物相比，動物在正確的象限花更多的時間或在先前被平臺佔據的位置穿梭更多次。記憶或認知能力的下降表現為與對照動物相比，動物在正確的象限花較短的時間或在先前被平臺佔據的位置穿梭次數減少。在非配對延遲測試中提供給動物一個刺激(例如槓桿A)。一段時間後，提供給動物兩個選擇(例如槓桿A和槓桿B)。挑選與原刺激不配對的選擇(槓桿B)則得到獎勵。若挑選正確選擇的次數大於隨機機率則表明記住了原始刺激。隨著刺激與選擇反應之間的時間間隔的增加，行為表現下降並接近純粹的隨機機率。在給定時間所作出的正確選擇的次數與認知能力有關。認知或記憶缺陷可能由生理、生化原因誘發或通過使用老齡動物實現。在社交相互作用測試中，將外來動物(動物B)引入測試動物(動物A)的家籠中。動物A將識別出弓丨入的動物是外來動物並對其進行調查。若移走動物B，遲後一段時間再將其引入，則測試動物(動物A)因為其記得以前的引入所以花在研究籠中新成員上的時間將減少。隨著引入之間的時間間隔加長，測試動物因為記憶越來越不清晰所以調查第二次引入新動物所花的時間也隨之加長。調查第二次引入的籠中新動物所花的時間與認知能力成反比。認知或記憶缺陷可能由生理、生化原因誘發或通過使用老齡動物實現。在人中，用於改善學習記憶的方法可以由諸如WechslerMemoryScale和Minimental測試的測試度量。測定患者是否患有學習記憶障礙的標準臨床測試是MinimentalTestforLearningandMemory(Folstein等，J.PsychiatricRes.12185,1975)，特別是對於患頭部創傷、Korsakoff病或中風的患者更為適用。測試結果作為在痴呆或遺忘症的早期階段發生迅速退化的短期工作記憶的指數。向受試者宣讀10對不相關的詞(如軍隊-表格)。然後當給出每對中的第一個詞時請受試者回憶第二個詞。記憶障礙的度量是，與匹配的對照組相比，回憶起的配對相關詞數量的減少。學習記憶的改善包括(a)與安慰劑組的成員相比，接受治療的患者的行為表現具有統計學上顯著性差異；或(b)對與疾病模型有關的測量行為表現具有向正常方向的統計學顯著性變化。動物模型或臨床疾病實例表現出與正常對照在定義上不同的症狀。因此有效的藥理學治療的度量將是顯著的、但不一定是完全的症狀逆轉。使用臨床上有效的用於改善記憶任務行為表現的「認知增強」藥物可以在動物和人記憶病理模型中有助於改善。例如在患痴呆和阿爾茨海默氏病型記憶喪失的患者中作為擬膽鹼替代治療的認知增強劑在諸如配對相關詞任務這樣的模型中顯著地改善短期工作記憶。年齡相關的行為表現缺陷提示對針對記憶障礙的治療性幹預的另一潛在的應用，而在衰老小鼠中進行的近期記憶縱向研究有效地模擬了年齡相關的行為表現缺陷。WechslerMemoryScale是被廣泛使用的認知功能和記憶能力的筆-紙(pencil-and-paper)測試。在正常群體中，標準化測試的結果是平均值為100，標準差為15，這樣分數下降10-15點則可以檢測到輕度的遺忘症，下降20-30點則為較重度的遺忘症，依此類推。在臨床採訪期間，應用一組測試包括但不限於Minimental測試、WechslerMemoryScale或配對相關詞學習來診斷記憶喪失的症狀。這些測試對一般認知障礙和特殊學習/記憶能力喪失的靈敏度一般(Squire，1987)。除了對痴呆或遺忘症的特定診斷之外，這些臨床工具還鑑別年齡相關的認知下降，其反映由給定的個體年齡正常範圍內的衰老過程引起的心智功能的客觀衰退(DSMIV，1994)。如上所述，當在配對相關詞測試中，例如，在治療活性劑治療的患者與安慰劑組的成員之間或者在對同一患者進行的連續測試之間行為表現具有向正常方向的統計學上顯著性差異時，則發生本發明中的學習記憶的「改善」。前脈衝抑制測試可用於鑑別有效治療精神分裂症的化合物。該測試基於動物或人接觸強聲響會表現驚跳反射，而動物或人在接觸較高強度聲響之前聽到一系列較低強度的聲響則驚跳反射的強度會減弱的觀察。這被稱為前脈衝抑制。被診斷為精神分裂症的患者表現前脈衝抑制缺陷，即較低強度的前脈衝不再抑制對強測試聲響的驚跳反射。經過藥物治療(東莨菪鹼、氯胺酮、PCP或MK801)或通過隔離飼養幼崽可以在動物中誘發類似的前脈衝抑制缺陷。已知對精神分裂症患者有效的藥物能夠部分地逆轉這些前脈衝抑制缺陷。認為動物前脈衝抑制模型在預測化合物治療精神分裂症患者的效能上具有價值。脊神經結紮(SpinalNerveLigation，SNL)模型(KimSH禾口ChungJM(1992),Anexperimentalmodelforperipheralneuropathyproducedbysegmentalspinalnerveligationintherat,Pain50:355_63)可用於測定治療活性劑對慢性神經性疼痛的作用。用異氟烷麻醉動物，移去L5左橫突，並將L5和L6脊神經用6-0絲線緊緊結紮。然後用內部縫線和外部肘針(externalstaple)閉合傷口。手術後10-11天移去傷口夾(woundclip)。根據上下方法(ChaplanSR,BachFff,PogrelJff,ChungJM和YakashTL(1994),Quantitativeassessmentoftactileallodyniaintheratpaw.JNeurosciMethods53:55_63.)，使用8種不同硬度(0·4、0·7、1·2、2·0、3·6、5·5、8·5和15g)的Semmes-Weinstein絲(Stoelting，WoodDale,IL,USA)對基線、損傷後以及治療後的無害機械敏感性進行評價。將動物置於有孔的金屬平臺上，並在測試開始前給它們至少30分鐘的時間熟悉環境。對每個治療組中的每隻動物都測定平均值和平均值的標準誤差(SEM)。由於通常認為該刺激不引起疼痛，因此在該測試中將損傷誘發的顯著反應增強解釋為機械異常性疼痛的量度。損傷足的機械超敏性透過比較賦形劑組內對側足值與同側足值來確定。用Marm-Whitney檢驗分析數據。賦形劑組損傷足值隨時間的穩定性用Friedman雙向方差分析進行秩檢驗。通過進行Kruskal-Wallis單向方差分析進行秩檢驗，然後進行Dunn'sposthoc檢驗或Marm-Whitney符號秩檢驗而在每個時間點分析藥物作用。如果期望，式I和Ia的化合物還可以與涉及給予D-絲氨酸或其類似物如D-絲氨酸鹽、D-絲氨酸酯、烷基化D-絲氨酸或D-絲氨酸前體的治療聯合使用。這些化合物還可以與涉及給予(用於治療精神分裂症及其它精神病症的)抗精神病藥、(用於治療注意力缺陷病症、抑鬱症或學習障礙的)精神興奮藥、抗抑鬱藥、益智藥(例如吡拉西坦、奧拉西坦或阿尼西坦)、乙醯膽鹼酯酶抑制劑(例如毒扁豆鹼相關的化合物、他克林或多奈哌齊)和/或(用於治療阿爾茨海默氏病的)阿爾茨海默氏病治療劑的治療聯合使用。這些用於聯合治療的方法也包括在本發明中。本文使用的術語「治療有效量「是指化合物、物質或包含本發明的化合物的組合物的量，所述量為通過抑制動物中至少一種細胞亞群中的DAAO並從而阻斷在所處理的細胞中的該路徑的生物結果而以適用於任何醫學治療的合理的效益/風險比有效地產生一些期望的治療效果的量。術語「藥學可接受的鹽」是指從藥學可接受的無毒鹼，包括無機鹼和有機鹼製備的鹽。本發明的化合物的合適的藥學可接受的鹼加成鹽包括從鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉和鋅製備的金屬鹽或從賴氨酸、N，N'-二苄基乙二胺、氯普魯卡因、膽鹼、二乙醇胺、乙二胺、甲葡胺(N-甲基葡糖胺)、普魯卡因和氨三丁醇製備的有機鹽。一般而言，本發明的化合物可商購獲得或者可通過本領域技術人員已知的方法製備。此外，還可以使用可容易地獲得的原料、試劑以及常規合成方法根據以下所述的方法或其修改製備。在這些反應中，還可以使用本身是已知的但本文未提及的變體。在本發明中，烷基意在包括直鏈、支鏈或環狀烴結構及它們的組合，包括低級烷基和高級烷基。優選的烷基是C2tl或小於C2tl的烷基。低級烷基是指1-6個碳原子，優選1-4個碳原子的烷基，包括甲基、乙基、正丙基、異丙基以及正丁基、仲丁基和叔丁基。高級烷基是指具有7個或更多碳原子，優選7-20個碳原子的烷基，包括例如正庚基、仲庚基和叔庚基、辛基和十二烷基。環烷基是烷基的子集，包括3-8個碳原子的環狀烴基。環烷基的實例包括環丙基、環丁基、環戊基和降冰片基。芳基和雜芳基是指含有0-3個選自氮、氧或硫的雜原子的5或6元芳環或雜芳環，含有0-3個選自氮、氧或硫的雜原子的9或10元二環芳環或雜芳環系統，或含有0-3個選自氮、氧或硫的雜原子的13或14元三環芳環或雜芳環系統。6元至14元芳族碳環包括例如苯、萘、茚滿、1，2，3，4-四氫化萘和芴，而5元至10元芳族雜環包括例如咪唑、吡啶、吲哚、噻吩、苯並吡喃酮、噻唑、呋喃、苯並咪唑、喹啉、異喹啉、喹喔啉、嘧啶、吡嗪、四唑和吡唑。芳基烷基是指與芳環連接的烷基。實例為苄基和苯乙基。雜芳基烷基是指與雜芳環連接的烷基。實例包括吡啶基甲基和嘧啶基乙基。烷基芳基是指具有一個或多個烷基與其相連的芳基。實例為甲苯基和2，4，6_三甲苯基。烷氧基或烴氧基是指1-8個碳原子的通過氧與母體結構相連的直鏈、支鏈、環狀結構的基團及其組合。實例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、環丙氧基和環己氧基。低級烷氧基是指含有1-4個碳原子的基團。醯基是指1-8個碳原子的通過羰基官能團與母體結構相連的飽和、不飽和和芳香性的直鏈、支鏈、環狀結構基團及其組合。只要與母體結構的連接點在羰基處，醯基中一個或多個碳原子可以被氮、氧或硫替代。實例包括乙醯基、苯甲醯基、丙醯基、異丁醯基、叔丁氧羰基和苄氧羰基。低級醯基是指含有1-4個碳原子的基團。雜環是指其中一個或兩個碳原子被諸如氧、氮、硫的雜原子替代的環烷基或芳基。本發明範圍內的雜環的實例包括吡咯烷、吡唑、吡咯、吲哚、喹啉、異喹啉、四氫異喹啉、苯並呋喃、苯並二噁烷、苯並間二氧雜環二戊烯(當作為取代基出現時通常稱為亞甲二氧基苯基)、四唑、嗎啉、噻唑、吡啶、噠嗪、嘧啶、噻吩、呋喃、噁唑、噁唑啉、異噁唑、二噁烷和四氫呋喃。取代的是指殘基中最多三個H原子被低級烷基、取代的烷基、取代的炔基、滷代烷基、烷氧基、羰基、羧基、羧烷氧基、醯氨基(carboxamido)、醯氧基、脒基、硝基、滷素、羥基、OCH(COOH)2、氰基、伯氨基、仲氨基、醯氨基(acylamino)、烷硫基、亞碸、碸、苯基、苄基、苯氧基、苄氧基、雜芳基或雜芳氧基替代的殘基，包括但不限於烷基、烷基芳基、芳基、芳基烷基和雜芳基。滷代烷基是指其中一個或多個H原子被滷素原子替代的烷基，術語滷代烷基包括全滷代烷基。本發明範圍內的滷代烷基的實例包括CH2F、CHF2和CF3。在本發明中，被認為具有DAAO抑制劑活性的化合物是在濃度為約40%梯度)純化，得至Ij167mg(56%)，為白色固體。(1HDMS0-d6,400MHz)δ12.19(s，1Η)，7·59(d,J=8.OHz,1Η)，7.34(s,1Η)，7.12(d,J=8.OHz,1Η)，2.07(s，3H)；(13CDMS0-d6,100MHz)δ165.09，163.59，141.18，124.588，120.76，112.08，109.80,21.33。5-甲基-苯並「dl異噁嗶-3-醇如上所述，從可商購獲得的2-N-二羥基_5_甲基-苯甲醯胺製備標題化合物。(1HDMS0-d6,400MHz)δ12.19(s，1H)，7.48(s，1H)，7.42-7.40(m，2H)，2·38(s，3H)；(13CDMS0_d6，100MHz)δ165.01，161.61，132.22，131.92，120.38，114.47，109.64，20.45。5-氯-苯並「dl異噁嗶-3-醇如上所述，從可商購獲得的2-N-二羥基_5_氯-苯甲醯胺製備標題化合物。(1HDMS0-d6，400MHz)δ12.55(s，1H)，7.78，(s，1H)，7.60(m，2H)；(13CDMS0-d6,100MHz)δ164.67，161.65，130.66，127.17，120.63，115.90，111.88。5-甲氧基-苯並「dl異噁嗶-3-醇如上所述，從可商購獲得的2-羥基-5-甲氧基-苯甲酸甲酯製備標題化合物。(1HDMS0-d6,400MHz)δ12.21(s，1Η)，7.45(d，J=9.0Hz，1Η)，7·18(dd,J=9.5Hz，J，=11.5Hz，1Η)，7.14(d，J，=11.5Hz)，3.80(d，J，=11.5Hz，3H)；(13CDMS0-d6,10OMHz)δ165.23，158.26，155.44，120.50,114.51,110.90，101.60，55.67。5-羥基-苯並「dl異噁嗶-3-醇如上所述，從可商購獲得的2，5-二羥基-苯甲酸甲酯製備標題化合物。(1HDMS0-d6，400MHz)δ12.03(s，1H)，9.55(s，1H)，7.34(d，J=9.OHz,1H),7.02(dd,J=9.4Hz,J，=2.4Hz，1H)，6.94(d，J=2.4Hz，lH)；(13CDMS0_d6，100MHz)δ164.97，157.41，153.22，120.14，114.74，110.52，103.89。6-羥基-苯並「dl異噁唑-3-醇如上所沭,從可商購獲得的2，4-二羥基-苯甲酸甲酯製備標題化合物。(1HDMS0-d6，400MHz)δ12.00(s，1H)，10.29(s，1H)，7.49(d，J=9.IHz,1H),6.75-6.73(m,2H)；(13CDMS0_d6，100MHz)δ165.17,164.91,160.57,121.90,113.13，106.52,95.10。5-溴-苯並「dl異噁唑-3-醇如上所沭,從可商購獲得的5-溴-2-羥基-苯甲酸製備標題化合物。(1HDMS0-d6，400MHz)δ12.55(s,1H)，7.93(d,J=1.8Hz,1H)，7·73(dd,J=L8Hz,J，=8.9Ηζ)，7.56(d,J，=8.8Ηζ)；(13CDMS0_d6，100MHz)δ164.48，161.98，133.26，123.70，116.52，114.76，112.29。7-甲氧基-苯並「dl異噁唑-3-醇如上所沭，從可商購獲得的2-羥基-3-甲氧基-苯甲酸甲酯製備標題化合物。(1HDMS0-d6，400MHz)δ12.29(s，1H)，7.26-7.13(m，3H)，3.92(s，3H)；(13CDMS0-d6,100MHz)δ165.48，153.07，143.98，124.17,115.95,112.41，111.57,55.97。4-羥基-苯並「dl異噁唑-3-醇如上所沭,從可商購獲得的2，6-二羥基-苯甲酸甲酯製備標題化合物。(1HDMS0-d6，400MHz)δ11.90(s，1H)，10.49(s，1H)，7.30(t，J=8.0Hz，J，=8.2Hz,1H),6.85(d,J，=8.3Hz，1H)，6.55(d，J=7.9Hz，lH)；(13CDMS0_d6，100MHz)δ165.24，164.89，153.41，132.00，107.55，103.44，100.24。6-氟-苯並「dl異噁唑-3-醇如上所沭,從可商購獲得的4-氟-2-羥基-苯甲酸甲酯製備標題化合物。(1HDMS0-d6,400MHz)δ12.47(s，1H)，7.77(dd，4J(H，F)=5.4Hz，J=8.7Hz，lH)，7.53(dd，J，=1.7Hz，3J(H，F)=10.OHz,1H),7.19(dt，J，=1.4Hz，3J(H，F)=9.5Hz,J=9.0Hz,1H)；(13CDMS0_d6，100MHz)δ165.02,163.65(d,3J(C,F)=14Hz)，163.33(d,1J(C,F)=247Hz)，122.90(d，3J(C，F)=11Hz),111.97(d,2J(C,F)=26Hz)，111.27,97.70(d,2J(C,F)=27Hz)。4-氟-苯並「dl異噁嗶-3-醇如上所述，從可商購獲得的6-氟-2-羥基-苯甲酸甲酯製備標題化合物。(1HDMS0-d6，400MHz)δ12.69(s，1Η)，7.60(dt，4J(H，F)=5.4Hz，J=8.2Hz，J，=8.2Hz,1H),7.40(d,J=8.5Hz，lH)，7.19(t，3J(H，F)=9.7Hz,J=8.IHz,1H)；(13CDMS0-d6,100MHz)δ165.15，163.45，155.13(d，1J(C，F)=254Hz)，132.50(d，3J(C，F)=18Hz),108.55(d,2J(C,F)=18Hz)，106.74，106.78。6-甲氧基-苯並「dl異噁嗶-3-醇如上所述，從可商購獲得的2-羥基-4-甲氧基-苯甲酸甲酯製備標題化合物。(1HDMS0-d6,400ΜΗζ)δ12.14(s,1H),7.56(d,J=8.6Hz,1H)，7·09(d,J，=1.9Hz,1H)，6·87(dd,J=8.7Hz,J，=1.9Hz,1H)，3.82(s，3H)；(13CDMS0-d6,100MHz)δ165.08，164.99，162.23，121.68，113.21，107.43,93.34,55.79。4-甲氧基-苯並「dl異噁嗶-3-醇如上所述，從可商購獲得的2-羥基-6-甲氧基-苯甲酸製備標題化合物。(1HCD3OD,400MHz)δ7.52(t，J=J，=8.2Hz，1H)，7.01(d，J=8.4Hz，1H)，6.74(d，J，=8.0Hz，1H)，3.95(s，3H)；(13CCD3OD,100MHz)δ165.83，165.37，155.89，132.83，104.28，103.26，102.25，55.12。5-氟-苯並「dl異噁嗶-3-醇如上所述，從可商購獲得的5-氟-2-羥基-苯甲酸製備標題化合物。(1HDMS0-d6，400MHz)δ12.48(s，1Η)，7.61(dd，4J(H，F)=5.3Hz，J=9.OHz,1H)，7·53(dd,J，=2.2Hz，3J(H，F)=7.7Hz,1H)，7.49(dt,J，=2.2Hz，3J(H，F)=9.0Hz,J=9.0Hz,1H)；(13CDMS0-d6,100MHz)δ165.31,159.62,158.02(d,1J(C,F)=238Hz),119.OO(d,2J(C,F)=27Hz)，111.61(d，3J(C，F)=9Hz)，106.47，106.22。6-溴-苯並「dl異噁唑-3-醇如上所沭,從6-溴-2-羥基-苯甲酸(J.Med.Chem.(1992)，35，739)製備標題化合物。(1HCD3OD,400ΜΗζ)δ7.71(s，1H)，7.61(d，J=8.3Hz,1H),7.45(d,J=8.3Hz,1Η)；(13CCD3OD,100MHz)δ166.77,165.43,127.79,126.08,123.62，115.27，114.56。7-氟-苯並「dl異噁唑-3-醇如上所沭,從可商購獲得的3-氟-2-羥基-苯甲酸製備標題化合物。(1HDMS0-d6,400MHz)δ12.73(s,1H)，7.57(d,J=7.9Hz,1H)，7.53(dd,3J(H,F)=11.3Hz,J=8.0Hz,1H),7.31(dt,4J(H,F)=4.0Hz，J=7.9Hz，J，=7.9Hz，1H)；(13CCD3OD,100MHz)δ167.05(d,4J(C,F)=3Hz)，152.49(d，2J(C，F)=14Hz)，147.88(d，1J(C,F)=249Hz)，125.22(d,3J(C,F)=5Hz)，119.92(d,4J(C,F)=3Hz)，118.13(d,3J(C,F)=5Hz)，117.11(d，2J(C,F)=14Hz)。7-氨-苯並「dl異噁唑-3-醇如上所沭,從可商購獲得的3-氯-2-羥基-苯甲酸製備標題化合物。(1HDMS0-d6，400MHz)δ12.74(s,1H),7.74(s,1H),7.72(s,1Η),7.33(t，J=J'=7.8Hz,1Η)；(13CCD3OD,100MHz)δ167.18，160.58，131.51，125.37，121.18，117.87，116.71。7-羥基-苯並「dl異噁唑-3-醇如上所沭，從可商購獲得的2,3-二羥基-苯甲酸製備標題化合物。(1HDMS0-d6，400MHz)δ12.17(s，1H)，10.37(s，1H)，7.11(dd，J=8.0Hz，J，=1.7Hz,1H)，7.07(t,J=J，=7.7Hz,1H)，6.93(dd,J=8.0Hz，J，=1.7Hz,1H)；(13CCD3OD,100MHz)δ167.29，154.69，143.12，125.26，117.58，116.69，112.51。5-碘-苯並「dl異噁嗶-3-醇如上所述，從可商購獲得的5-碘-2-羥基-苯甲酸製備標題化合物。(1HDMS0-d6，400MHz)δ12.48(s,1H),8.08(s,1H),7.85(d,J=8.8Hz,1H),7.42(d,J=8·7Ηζ，1Η)；(13CDMS0_d6，100MHz)δ164.11，162.43，138.62，129.68，117.15，112.49,86.28。實施例2苯並[d]異噁唑-3-醇溴化的一般方法formulaseeoriginaldocumentpage175-溴-6-甲基-苯並「dl異噁唑-3-醇向裝有攪拌棒和特氟降螺旋蓋的25ml高壓管中加入6-甲基-苯並[d]異噁唑-3-醇(745mg，5.Ommol，1.Oeq)和冰醋酸(5.Oml)。滴加純Br2(774μL,15.Ommo1,3.Ocq)。在80°C下攪拌20小時後，將反應物緩緩冷卻至室溫。過濾收集所得沉澱，並迅速用3x1.Oml冰醋酸洗滌。將該粗產物(624mg)從50mlMeCN中結晶，得到567mg標題化合物(RP-HPLC測定純度96%)。從70ml甲苯中再次結晶，得到519mg(46%)，為白色固體。(HPLC測定純度98.1%)。(1HDMS0-d6,400ΜΗζ)δ12.45(s,1H)，7.94(s，1H)，7.61(s，1H)，2.45(s，3H)；(13CCD3OD,100MHz)δ165.96,164.50,142.34,125.39，119.73，115.78，112.67,24.10。5,6-二溴-苯並「dl異噁唑-3-醇如上所沭,經溴化製備標題化合物。(1Hdmso-CI6^oomHz)δ12.72(s，ih),8.15(s,ih),8.12(s,1η)；(13ccd3od,100mhz)δ165.90，164.04，117.33，116.46，128.08，126.48，119.30。5-溴-6-氯-苯並「dl異噁唑-3-醇如上所沭，經溴化製備標題化合物。(1Hdmso-CI6^oomHz)δ12.71(s,IH),8.13(s,IH),8.03(s,IH)；(13CCD3OD,ΙΟΟΜΗζ)δ165.83，164.03，137.92，126.71，117.19，116.71，113.14。實施例3苯並[d]異噁唑-3-醇氯化的一般方法formulaseeoriginaldocumentpage185-氯-6-甲基-苯並「dl異噁唑-3-醇向裝有攪拌棒的25ml圓底燒瓶中加入6-甲基-苯並[d]異噁唑-3-醇(298mg，2.Ommo1,1.Oeq)和TFA(2.Oml)，並在冰浴上冷卻至0°C。滴加純N-氯嗎啉(242μL，2.Ommol，1.Oeq，OrganicSyntheses,CV8，167)，並在30分鐘內將反應混合物溫至室溫。加入EtOAc，將粗產物在分液漏鬥(EtOAc/l.OMHCl水溶液)中分配，用硫酸鎂乾燥有機層，並從濾液中真空除去過量的溶劑。粗產物(383mg)從20ml甲苯和6mlEt0Ac的混合物中結晶，得到206mg(HPLC測定純度94%)，為白色固體。(1HDMS0-d6,400MHz)δ12.41(s,1H)，7.77(s,1H)，7.59(s,1H)，2.43(s,3H)；(13CDMS0_d6，ΙΟΟΜΗζ)δ164.46，161.87，138.53，128.08，120.59，113.78，111.83,20.49。5,6-二氯-苯並「dl異噁唑-3-醇如上所沭,經氯化製備標題化合物。(1HDMSO-Cl6,400ΜΗζ)δ12.73(s,1H)，8.03(s,1H),8.01(s,1H)；(13CDMS0_d6，ΙΟΟΜΗζ)δ164.46，161.39，133.60，125.82，122.27，114.85，112.40。5-氯-6-溴-苯並「dl異噁唑-3-醇如上所沭，經氯化製備標題化合物。(1Hdmso-CI6^oomHz)δ12.74(s，IH),8.16(s,IH),7.99(s,1Η)；(13CCD3OD,ΙΟΟΜΗζ)δ166.11，163.47，130.04，126.00，122.95，116.87，116.53。實施例4苯並[d]異噁唑-3-醇碘化的一般方法formulaseeoriginaldocumentpage185-碘-6-甲基-苯並「dl異噁唑-3-醇向裝有攪拌棒和特氟降螺旋蓋的25ml高壓管中加入固體ICl(648mg，4.Ommol,2.Oeq)和AcOH(6.0ml)。一次性加入固體6-甲基-苯並[d]異噁唑-3-醇(298mg，2.0mmOl，1.0eq)，然後加入水(15ml)。將非勻質反應混合物在80°C下攪拌64小時。過濾除去固體沉澱，向濾液中加入乙酸乙酯，將粗產物在分液漏鬥(Et0Ac/l.OMHCl水溶液)中分配，用硫酸鎂乾燥有機層，並從濾液中真空除去過量的溶齊U。將水處理(workup)後合併的沉澱和粗產物(471mg)分別從15ml和IOml甲苯兩次重結晶，得到106mg(19%)(HPLC測定純度92%)，為白色固體。(1HDMS0-d6,400MHz)12.35(s,1H)，8.16(s，1H)，7.60(s,1H)，2.48(s，與DMS0_d6重疊)；(13CDMS0_d6，ΙΟΟΜΗζ)δ163.76，163.37，142.88，130.47，114.87，110.72,93.42,28.204。實施例4=daao活性的體外測量將純化的豬DAAO加入緩衝的50mMD-絲氨酸混合物中，對於每個氧化的D-絲氨酸分子都產生化學計量量的過氧化氫。過氧化氫的生成可以用可商購獲得的染料AmplexRed進行監測，AmplexRed在過氧化氫存在下被轉化為螢光產物9-羥基-3-異吩噁唑酮。對於每種所述的抑制劑，還測量在DAAO不存在下加入80μM過氧化氫時的螢光，以為染料轉化的人為抑制提供對照，並對產生的過氧化氫進行定量。在另外的DAAO活性測定法中，在化合物存在下將純化的豬DAAO加入緩衝的ImM苯基甘氨酸混合物中。通過苯基甘氨酸酶促轉化為在252nm處有光吸收的苯甲醯甲酸以分光光度法監測DAAO的活性。將DAAO酶周期抑制劑系列稀釋以降低抑制的水平。將非線性方程的參數進行調整以擬合所得的系列抑制水平，以外推獲得50%抑制的化合物濃度(IC5tl)。將這些數對抑制的獨立測量(在不同的日子)的次數(η)進行平均。tableseeoriginaldocumentpage20表1tableseeoriginaldocumentpage21formulaseeoriginaldocumentpage22從表1中可以看出，對於DAAO活性抑制大於50%的情況，以前報導的DAAO抑制劑的IC5tl值均大於1μM化合物。本發明的苯並異噁唑衍生物顯示至少是如此的抑制活性，而且幾個單個的實例具有5倍或更大的活性，僅需要小於200ηΜ的這些化合物就抑制DAAO活性的50%。實施例5=NMDA受體親和力的測量為測量本文報告的化合物對於NMDA受體上D-絲氨酸結合位點(也稱為「甘氨酸位點」或「馬錢子鹼不敏感的甘氨酸位點」)的親和力，用從大鼠大腦皮層製備的膜進行放射性配體結合測定。放射性配體是[3H]MDL105519。所述化合物顯示的放射性的量通過閃爍計數進行評價。非特異性結合在ImM甘氨酸存在下測定。從測試化合物抑制[3H]MDL105519特異性結合的％計算親和力。對於NMDA受體的D-絲氨酸結合位點，當在100μM下測試時，吲哚_2_羧酸將所述放射性標記化合物的特異性結合抑制77%，而下面的作為取代的苯並[d]異噁唑-3-醇的實例的化合物顯示沒有親和力(當在100μM下測試時對[3H]MDL-105519特異性結合的抑制小於10%):OHCl^實施例6大鼠腦攝取的測量評價測試化合物穿透大鼠腦的實驗使用灌流系統，其中對左頸動脈進行插管，並將分支動脈結紮。將在PH7.4的磷酸鹽緩衝鹽水中的測試化合物和內標對照一起於30秒內灌注於左半球內。內標對照是阿替洛爾(腦攝取低)和安替比林(腦攝取高)。用灌流液衝洗30秒後，手術將腦取出。將左半球勻漿，將測試化合物(和內標)從腦勻漿物中提取出來，用LC/MS/MS分析以測定腦中測試化合物和內標對照的濃度。所選的化合物的腦攝取率表示為N為4的大鼠的pmol/g腦/秒士SD，如表2所示。formulaseeoriginaldocumentpage23實施例7腦中D-絲氨酸水平的測量哺乳動物腦中D-絲氨酸的測量表明內源性產生的水平通過D-絲氨酸的降解來平衡。D-絲氨酸經絲氨酸外消旋酶的作用從L絲氨酸產生，而D-絲氨酸通過DAAO的作用而代謝。由於DAAO的作用，外源給予的D-絲氨酸在腦中產生D-絲氨酸水平的持續短時間的升高。同樣，在本發明中顯示的DAAO抑制劑使腦中D-絲氨酸水平增加7倍。已表明外源給予D-絲氨酸具有精神分裂症方面的臨床應用，參見Coyle，JosephJ.，Ann.N.YAcad.Sci.，1003318-327(2003)和美國專利6，227，875、6，420，351和6，667，297。因此，測量大鼠腦中D-絲氨酸水平可用於評價DAAO抑制劑在升高D-絲氨酸水平以治療精神分裂症方面的潛在治療作用。腦中D-絲氨酸的體內升高將化合物懸浮於磷酸鹽緩衝鹽水(pH7.4，含2%吐溫80)中，腹膜內給予成年雄性SpragueDaly大鼠(年齡40-60天，CharlesRiverLaboratories，Inc.)，實驗時體重為185_225g。幾小時後，經斷頭術處死大鼠，迅速取出小腦，在-80°C下冷凍以進一步分析。腦的其餘部分同樣取出並冷凍。分析當日，將腦組織在冰冷的5%三氯乙酸中以其5倍體積勻漿。將勻漿物在ISOOOxg下離心30min。棄去沉澱物。將上清液用水飽和的乙醚洗滌三次，棄去有機層。將水層濾過孔徑為0.45μM的濾膜後，樣品就可以根據Hashimoto及其同事的方法(HashimotoA等，JChromatogr.，582(1-2)41-8(1992))用鄰苯二甲醛(OPA)和BOCL-Cys-OH進行衍生化。簡言之，將50mg的每種衍生化試劑溶於5ml甲醇中。將其中的200μ1等分試樣加入溶於700μ1硼酸鹽緩衝液(0.4Μ，用氫氧化鈉將pH調至9.0)中的100μ1樣品中。通過將10μ1等分試樣注入高效液相色譜系統中經螢光法(激發波長344nm，發射波長443nm)測定D-絲氨酸水平。本專利中的化合物實例在大鼠腦中產生D-絲氨酸強烈且顯著的D-絲氨酸水平升高。特別是，以兩個單獨劑量(125mg/kg，3小時後75mg/kg)給予的苯並M異噁唑_3_醇衍生物在第一劑量給予後6小時使小腦中D-絲氨酸水平增加2倍。實施例8:劑型不含乳糖的片劑劑型表3提供式I和Ia的化合物的不含乳糖的片劑劑型的成分表3tableseeoriginaldocumentpage24*水在製備過程中蒸發。將活性成分與纖維素混合至形成均一混合物。將較少量玉米澱粉與適當量的水混合形成玉米澱粉糊。然後將其與所述均一混合物混合至形成均一溼料。將剩餘的玉米澱粉加入所得的溼料中，並混合至得到均一的顆粒。然後將顆粒篩過合適的碾磨機，使用1/4英寸的不鏽鋼篩。然後將碾磨的顆粒在合適的乾燥烘箱中乾燥直至獲得期望的水分含量。然後將乾燥的顆粒篩過合適的碾磨機，使用1/4目的不鏽鋼篩。然後摻入硬脂酸鎂，並將所得混合物壓製成為期望的形狀、厚度、硬度和崩解度的片劑。用標準的水成或非水成技術將片劑包衣。片劑劑型另一適用於本發明的活性成分的片劑製劑在表4中提供。tableseeoriginaldocumentpage24將活性成分過篩並與纖維素、澱粉和預膠化玉米澱粉混合。加入適當量的純水，將粉末制粒。乾燥後，將顆粒過篩並與硬脂酸鎂混合。然後用衝頭將顆粒壓制為片劑。通過改變活性成分與藥學可接受的載體的比例、壓制重量或通過使用不同的衝頭可以製備其它強度的片劑。權利要求化合物II或化合物IIIFSA00000074728700011.tif全文摘要本發明涉及化合物II或化合物III。文檔編號A61K31/42GK101798291SQ20101015042公開日2010年8月11日申請日期2004年12月28日優先權日2003年12月29日發明者塞思·霍普金斯,彼得·威普弗,方群,米蘭·希季爾,米歇爾·赫弗南申請人:塞普拉科公司