血腦屏障穿梭體的製作方法

2023-04-27 11:43:21 1

血腦屏障穿梭體的製作方法
【專利摘要】本發明涉及結合血腦屏障上的受體(R/BBB)的血腦屏障穿梭體及其使用方法。
【專利說明】血腦屏障穿梭體

【技術領域】
[0001] 本發明涉及結合血腦屏障上的受體（R/BBB)的血腦屏障穿梭體及其使用方法。

【背景技術】
[0002] 神經疾病藥物（例如具有低腦穿透的大生物治療藥物或小分子藥物）的腦穿透， 受廣泛的且不可滲透的血腦屏障（BBB)以及神經血管單元（NVU)中的其它細胞組分嚴格限 制。已經試驗了許多克服該阻礙的策略，並且一種策略是利用在腦毛細血管內皮上表達的 內源性受體所介導的胞吞轉運途徑。已經針對這些受體設計了重組蛋白諸如單克隆抗體或 肽，以實現受體介導的生物治療劑向腦的遞送。但是，使腦攝取最大化、同時使腦內皮細胞 (BEC)內的錯誤分選（miss-sorting)以及在BEC中的某些細胞器（特別是導致生物治療劑 的降解的細胞器）內的積累程度最小化的策略仍未得到探究。
[0003] 單克隆抗體和其它生物治療劑在治療中樞神經系統（CNS)的病理學中具有巨大 治療潛力。但是，它們進入腦中的途徑被BBB阻止。以前的研究已經闡明，非常小百分比（大 約0? 1% )的在血流中注射的IgG能夠穿透進CNS隔室中（Felgenhauer，Klin. Wschr. 52 : 1158-1164(1974))。由於抗體在CNS內的低濃度，這必然會限制任何藥理學作用。
[0004] 因此，需要使神經疾病藥物穿過BBB的遞送系統，以將藥物有效地穿梭進腦中。


【發明內容】

[0005] 在第一方面，本發明提供了一種血腦屏障穿梭體，其包含腦效應物實體、接頭和一 個結合血腦屏障受體的單價結合實體，其中所述接頭將所述效應物實體與所述結合血腦屏 障受體的單價結合實體偶聯。
[0006] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述結合血腦屏障受體的單價結 合實體選自蛋白、多肽和肽。
[0007] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述結合血腦屏障受體的單價結 合實體包含選自以下的分子：血腦屏障受體配體、scFv、Fv、sFab、VHH，優選sFab。
[0008] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述血腦受體選自轉鐵蛋白受 體、胰島素受體、胰島素樣生長因子受體、低密度脂蛋白受體相關的蛋白8、低密度脂蛋白受 體相關的蛋白1和結合肝素的表皮生長因子樣生長因子，優選轉鐵蛋白受體。
[0009] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述結合血腦屏障受體的單價結 合實體包含一個針對轉鐵蛋白受體的scFab，更具體地是識別被包含在Seq. Id. No. 14、15 或16的胺基酸序列中的轉鐵蛋白受體內的表位的scFab。
[0010] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述腦效應物實體選自神經疾病 藥物、神經營養因子、生長因子、酶、細胞毒性劑、針對腦靶標的抗體、針對腦靶標的單克隆 抗體、針對腦祀標的肽。
[0011] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述腦靶標選自0 -分泌酶1、 A3、表皮生長因子、表皮生長因子受體2、Tau、磷酸化的Tau、載脂蛋白E4、a突觸核蛋白、 a突觸核蛋白的寡聚片段、CD20、亨廷頓蛋白、朊病毒蛋白、富含亮氨酸的重複序列激酶2、 帕金蛋白、早老蛋白2、Y分泌酶、死亡受體6、澱粉樣蛋白前體蛋白、p75神經營養因子受體 和胱天蛋白酶6。
[0012] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述腦效應物實體選自蛋白、多 肽和肽。
[0013] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述結合血腦受體的單價結合 實體選自蛋白、多肽和肽，且所述單價結合實體通過所述接頭偶聯至所述腦效應物實體的 c-末端。
[0014] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述腦效應物實體包含針對腦靶 標的全長抗體，優選全長IgG。
[0015] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述血腦屏障穿梭體包含作為腦 效應物實體的全長IgG抗體、接頭和一個作為結合血腦受體的單價結合實體的scFab，其中 所述scFab通過所述接頭偶聯至所述IgG抗體的重鏈之一的Fc部分的C-末端。
[0016] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述效應物實體是針對AP的全 長抗體。
[0017] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述針對A0的抗體包含：(a) H-CDR1，其包含Seq. Id. No. 5的胺基酸序列，（b)H_CDR2,其包含Seq. Id. No. 6的胺基酸序 列，（c)H_CDR3,其包含 Seq.Id.No.7 的胺基酸序列，（d)L-CDRl，其包含 Seq.Id.No.8 的 胺基酸序列，（6)1^-〇?2，其包含5叫.1(0〇.9的胺基酸序列，和江)1-〇)1?3，其包含5叫. Id. No. 10的胺基酸序列。
[0018] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述針對AP的抗體包含：包含 Seq. Id. No. 11的胺基酸序列的VH結構域和包含Seq. Id. No. 12的胺基酸序列的結構域。 [0019] 在血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述效應物實體是針對AP的全長 抗體，且所述單價結合實體是針對轉鐵蛋白受體的scFab，更具體地是識別被包含在Seq. Id. No. 14、15或16的胺基酸序列中的轉鐵蛋白受體內的表位的scFab。
[0020] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述針對腦靶標的血腦屏障穿梭 體的抗體的第一重鏈包含第一二聚化模塊，且所述針對腦靶標的血腦屏障穿梭體的抗體的 第二重鏈包含第二二聚化模塊，從而允許所述兩個重鏈的異源二聚化。
[0021] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，根據突出物進入孔洞（knobs into holes)策略，所述針對腦祀標的血腦屏障穿梭體的抗體的第一重鏈的第一二聚化模 塊包含突出物，且所述針對腦靶標的血腦屏障穿梭體的抗體的第二重鏈的二聚化模塊包含 孔洞。
[0022] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述效應物實體是針對磷酸化的 Tau的全長抗體，且所述單價結合實體是一個針對轉鐵蛋白受體的scFab。
[0023] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述效應物實體是針對a突觸 核蛋白的全長抗體，且所述單價結合實體是一個針對轉鐵蛋白受體的scFab。
[0024] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述接頭是肽接頭，優選地是具 有至少25個胺基酸長度的胺基酸序列的肽，更優選地具有30-50個胺基酸的長度，特別地 所述接頭是（G 4S)6G2或（G4S)4。
[0025] 本發明的下述3個實施方案涉及血腦屏障穿梭體，其中所述腦效應物實體是蛋 白、多肽或肽，前提條件是，所述腦效應物實體不是全長抗體，尤其全長IgG。
[0026] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述結合血腦屏障受體的單價結 合實體包含CH2-CH3 Ig實體和一個結合血腦屏障受體的sFab，其中所述sFab通過第二接 頭偶聯至CH2-CH3 Ig實體的C-末端。
[0027] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述血腦屏障穿梭體包含腦效應 物實體、接頭、CH2-CH3 Ig結構域、第二接頭和一個結合血腦屏障受體的sFab,其中所述腦 效應物實體通過第一接頭偶聯至CH2-CH3Ig結構域的N-末端，且所述sFab通過第二接頭 偶聯至CH2-CH3 Ig結構域的C-末端。
[0028] 在所述血腦屏障穿梭體的一個特定實施方案中，所述CH2-CH3 Ig實體是CH2-CH3 IgG實體。
[0029] 此外，本發明涉及編碼本發明的血腦屏障穿梭體的分離的核酸、包含編碼所述血 腦屏障穿梭體的分離的核酸的宿主細胞、和包含所述血腦屏障穿梭體的藥物製劑。
[0030] 本發明的血腦屏障穿梭體可以用作藥物，特別地，它可以用於治療神經疾病例如 阿爾茨海默病。
[0031] 本發明的血腦屏障穿梭體可以用於運輸所述腦效應物實體穿過血腦屏障。
[0032] 在一個特定實施方案中，本發明的血腦屏障穿梭體的IgG抗體的重鏈（其在Fc部 分的C-末端處偶聯至scFab，所述scFab作為結合血腦屏障受體的單價結合實體）具有下 述結構：
[0033] ? IgG 重鏈，
[0034] ?接頭，其將IgG重鏈的Fc部分的C-末端偶聯至scFab的VL結構域的N-末端，
[0035] ? scFab的可變輕鏈結構域（VL)和C-k輕鏈結構域，
[0036] ?接頭，其將scFab的C-k輕鏈結構域的C-末端偶聯至scFab的VH結構域的 N-末端，
[0037] ? scFab抗體的可變重鏈結構域（VH)和IgG CH3重鏈結構域。
[0038] 在第二方面，本發明提供了一種運輸腦效應物實體穿過血腦屏障的融合蛋白，所 述融合蛋白包含CH2-CH3 Ig實體、接頭和一個針對血腦屏障受體的sFab，其中所述sFab通 過所述接頭偶聯至CH2-CH3 Ig實體的C-末端。
[0039] 在本發明的融合蛋白的一個特定實施方案中，本發明的融合蛋白進一步包含在 CH2-CH3 Ig實體的N-末端處的接頭，以將所述腦效應物實體偶聯至CH2-CH3 Ig實體的 N-末端。
[0040] 在本發明的融合蛋白的一個特定實施方案中，所述腦效應物實體選自神經疾病藥 物、神經營養因子、生長因子、酶、細胞毒性劑、選自scFv、Fv、scFab、Fab、VHH、F(ab'） 2的針 對腦靶標的抗體片段或肽。
[0041] 在本發明的融合蛋白的一個特定實施方案中，所述針對血腦屏障受體的sFab是 針對轉鐵蛋白受體的sFab，優選地是識別被包含在Seq. Id. No. 14、15或16的胺基酸序列中 的轉鐵蛋白受體內的表位的scFab。
[0042] 在本發明的融合蛋白的一個特定實施方案中，所述接頭是肽接頭，尤其是具有至 少15個胺基酸長度的胺基酸序列的肽，更優選地具有20-50個胺基酸的長度，最特別地所 述接頭具有胺基酸序列（G4S)6G2(Seq. Id. No. 13)或（G4S)4(Seq. Id. No. 17)。
[0043] 在本發明的融合蛋白的一個特定實施方案中，所述CH2-CH3Ig實體是CH2-CH3 IgG實體。
[0044] 此外，本發明提供了一種編碼本發明的融合蛋白的分離的核酸和包含編碼本發明 的融合蛋白的核酸的宿主細胞。
[0045] 在第三方面，本發明提供了一種綴合物，其包含本發明的融合蛋白和腦效應物實 體，所述腦效應物實體通過接頭偶聯至本發明的融合蛋白的CH2-CH3Ig實體的N-末端。
[0046] 在本發明的綴合物的一個特定實施方案中，所述腦效應物實體是神經營養因子， 且其中將所述神經營養因子偶聯至CH2-CH3Ig實體的N-末端的接頭是肽接頭。
[0047] 此外，本發明提供了包含本發明的綴合物和藥用載體的藥物製劑，所述綴合物作 為藥物的用途，尤其是所述綴合物用於治療神經變性疾病、尤其是阿爾茨海默病的用途。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0048] 圖1:在實施例中使用的不同形式的血腦屏障穿梭體（融合蛋白）。1A:針對A3 的IgG(mAb31)。1B:針對TfR的單Fab(sFab)，其偶聯至針對AP的IgG(mAb31)的Fc部分。 1C :針對TfR的雙Fab (dFab)，其偶聯至針對A 0的IgG (mAb31)的Fc部分。所述scFab結 構與IgG抗體的重鏈的C-末端融合。
[0049] 圖2:融合蛋白對AP結構的結合性能。使用ELISA方案測量結合親和力，所述 ELISA方案表明，所述Fab構建體已經保留A 0結合性能。mAb31-8D3構建體與A 0纖絲的 結合。儘管8D3(空心正方形）不會結合固定化的AP纖絲，但是mAb31-8D3-dFab(實心正 方形）、mAb31-8D3-sFab (空心三角形）和mAb31(實心三角形）以可比較的親和力結合。
[0050] 圖3:所述構建體對轉鐵蛋白受體（TfR)的結合性能。使用ELISA方案測量結合 親和力，所述ELISA方案表明，僅Fab構建體結合轉鐵蛋白受體（TfR)，且雙Fab構建體由 於二價結合模式而具有稍微更高的表觀親和力。mAb31-8D3構建體與mTfR的結合。儘管 mAb31(實心三角形）不會結合固定化的mTfR，但是mAb31-8D3-dFab (實心正方形）的結合 親和力與8D3親本抗體（空心正方形）的結合親和力相當。單價構建體mAb31-8D3-sFab (空 心三角形）顯示出中間結合親和力。
[0051] 圖4 :抗-A P單克隆抗體mAb31 (圖4A)、單Fab mAb31 (與mAb31的C-末端融合 的單Fab)(圖4B)和雙Fab mAb31 (與mAb31的C-末端融合的雙Fab)(圖4C)的斑塊染 色。將構建體注射進PS2APP小鼠（n = 3/構建體），單次靜脈內給藥10mg/kg，然後在給藥 後8小時進行腦灌注。分析包括斑塊結合的免疫組織化學和共焦顯微術。數據表明，僅單 Fab-mAb31構建體能夠穿過BBB並結合斑塊。該圖顯示了得自所有動物的腦的一個代表性 區域。
[0052] 圖5:顯示了雙Fab_mAb31構建體的定量。在所有3隻治療的動物的3個不同區域 (每種構建體共計9個區域）定量斑塊和毛細血管染色。數據表明，僅雙Fab-mAb31構建體 與mAb31相比存在毛細血管的增加。沒有檢測到在斑塊處（在腦內）增加的雙Fab-mAb31 水平。以l〇mg/kg給藥後8h，mab31 (HEK對照）相對於雙Fab_mab3的定量。
[0053] 圖6:顯示了單Fab_mAb31構建體的定量。在所有3隻治療的動物的3個不同區 域（每種構建體共計9個區域）定量斑塊和毛細血管染色。數據表明，單Fab-mAb31構建 體與mAb31相比存在斑塊的大量增加。螢光信號的定量指示，單Fab-mAb31與mAb31構建 體相比超過50倍的增加。單Fab-mAb31構建體與mAb31相比也存在毛細血管中的短暫染 色，從而指示穿過BBB。以10mg/kg給藥後8h和以25mg/kg給藥後24h，mab31 (HEK對照） 相對於單Fab_mab31的定量。
[0054] 圖7 :2種不同劑量的抗-AP單克隆抗體mAb31和非常低劑量的單FabmAb31(與 mAb31的C-末端融合的單Fab)的斑塊染色。將構建體注射進PS2APP小鼠（n = 3/構建體） 中，單次靜脈內給藥，然後在給藥後的不同時間點進行腦灌注。分析包括斑塊結合的免疫組 織化學和共焦顯微術。數據表明，僅單Fab-mAb31構建體能夠穿過BBB並結合斑塊。對於 單Fab-mAb31構建體而言，腦暴露是非常快速的，並且斑塊染色從單次施用持續超過至少1 周。
[0055] 圖8 :用單Fab-mab31或雙Fab-mAb31處理的TfR的細胞表面表達的定量。雙 Fab-mAb31構建體對轉鐵蛋白受體（TfR)的細胞表面減量調節。將表達TfR的腦內皮細胞 與單Fab-mAb31構建體（圖8A)或雙Fab-mAb31構建體（圖8B) -起溫育24小時。僅雙 Fab-mAb31構建體降低了細胞表面表達的TfR的水平。
[0056] 圖9:用單Fab_mab31或雙Fab_mAb31處理的TfR的體內細胞運輸。在體內研究 毛細血管和斑塊染色的早期時間點。sFab-MAb31 (圖9A)和dFab-MAb31 (圖9B)在注射後 15分鐘將腦脈管系統染色，它們的分布沒有差異。注射後8小時，sFab-MAb31達到實質並 將澱粉樣蛋白斑塊染色（箭頭，圖9C)，而dFab-MAb31停留在腦脈管系統內，類似於15分鐘 時間點（圖9D)。對於dFab-MAb31而言，在實質中沒有檢測到澱粉樣蛋白斑塊。
[0057] 圖10:用單Fab_mab31或雙Fab_mAb31處理的TfR的體內細胞運輸。為了控 制在研究中使用的所有構建體的完整性，使用MAb31(圖10A)、sFab-MAb31(圖10B)或 dFab-MAB31(圖10C)，進行18個月小鼠APP轉基因腦冷凍切片的染色。圖10D顯示了對照 的結果。結果表明，所有3種構建體檢測到轉基因小鼠的腦中的澱粉樣蛋白斑塊。
[0058] 圖11:用單Fab_mab31處理的TfR的體內細胞運輸。對體內處理過的樣品的高分 辨率共焦顯微術表明，sFab-MAb31沒有將腦毛細血管的腔側染色，但是被包含在囊泡樣結 構（其穿過內皮細胞的腔膜）內和內皮細胞胞質溶膠內。在圖11中的箭頭指示在內皮細 胞細胞核的近腔側上含有sFab-MAb31構建體的囊泡。這些數據提示，sFab-MAb31可以進 入腦內皮細胞並穿過脈管系統和到達腦的實質空間內的澱粉樣蛋白斑塊（與圖9A和C對 比）。
[0059] 圖12:用雙Fab_mab31處理的TfR的體內細胞運輸。對體內處理過的樣品的高分 辨率共焦顯微術表明，dFab-MAb31沒有將腦毛細血管的腔側染色，但是被包含在囊泡樣結 構（其穿過內皮細胞的腔膜）內和內皮細胞胞質溶膠內。在圖12中的箭頭指示在內皮細 胞細胞核的近腔側上含有dFab-MAb31構建體的囊泡。這些數據提示，dFab-MAb31可以進 入腦內皮細胞，但是被捕集，不能穿過脈管系統，且因此不能到達腦的實質空間內的澱粉樣 蛋白斑塊（與圖圖9B和D對比）。
[0060] 圖13:靜脈內施用以後的腦暴露和斑塊染色。圖13A:將mAb31、dFab和sFab構 建體以10mg/kg靜脈內地注射進PS2APP轉基因動物，在注射後8小時將動物灌注和處死。 dFab與mAb31相比，沒有檢測到斑塊染色的顯著增加。對於sFab構建體，基於來自檢測抗體 的在555nm的螢光強度，檢測到比親本mAb31高55倍的斑塊染色。注射後8小時，mAb31 (圖 13B)、dFab (圖13C)和sFab (圖13D)在皮質中的代表性免疫組織化學染色。dFab僅顯示 微血管染色，而sFab廣泛地將澱粉樣蛋白斑塊染色。圖13E :證實了與2mg/kg和10mg/ kg mAb31相比，低劑量的sFab構建體（2. 66mg/kg)會快速地且顯著地到達腦中的斑塊。 sFab構建體的靶標嚙合在注射後持續超過至少1周。免疫組織化學染色顯示了 2mg/kg的 mAb31 (圖13F)和2. 66mg/kg的sFab (圖13G)在注射後7天的斑塊染色。
[0061] 圖14 :在通過14次每周靜脈內注射治療的、帶有斑塊的PS2APP小鼠中的慢性 研究的體內效力。分別對於低劑量mAb31、中劑量mAb31、低劑量sFab和中劑量sFab (圖 14A-D)，顯示了在研究結束時，與殘餘斑塊結合的施用構建體的靶斑塊結合。在斑塊的免疫 組織化學染色以後，顯示了皮質和海馬的定量形態測定分析（圖14E)。在4. 5個月齡時處 死的未治療的動物的斑塊負載被顯示為在研究開始時的澱粉樣變性的基線水平。與在媒介 物治療的動物中觀察到的進行性斑塊形成相比，在用中劑量sFab治療以後，斑塊數目的顯 著減少是顯而易見的；減少的斑塊形成的趨勢甚至出現在低劑量sFab。因而，sFab構建體 顯著減少了皮質和海馬中的斑塊數目。斑塊尺寸的分析揭示了斑塊數目的減少，對於小斑 塊尺寸而言是最顯著的。*P < 〇? 05, < 0? 01，< 0? 001。
[0062] 圖15:具有與Fc C-端融合的TfR scFab片段的抗體多聚體沒有誘導ADCC。通過 定量LDH釋放，測量NK92介導的BA/F3小鼠紅白血病細胞的殺死。僅多聚體構建體（其具 有結合TfR的Fab部分，呈"常規" "N-端至Fc"取向）誘導顯著的ADCC，而呈相反取向的 腦穿梭構建體是沉默的。
[0063] 圖16:針對轉鐵蛋白受體的scFab 8D3結合小鼠轉鐵蛋白受體的細胞外結構域中 的3個不同肽。通過抗體的化學發光檢測，揭示了有3個胺基酸重疊的抗體8D3-15聚體肽 的結合，所述抗體在攜帶固定化的mTfR肽的CelluSpot載玻片上溫育。框：被8D3結合的 肽 #373、374 和 376 (Seq. Id. No. 15、16 和 17)。

【具體實施方式】
[0064] 定義
[0065] "血腦屏障"或"BBB"是指外周循環與腦和脊髓之間的生理屏障，其由腦毛細血 管內皮質膜內的緊密連接部形成，從而建立限制分子（甚至非常小的分子如尿素（60道爾 頓））運輸進腦中的緊密屏障。腦內的BBB、脊髓內的血液-脊髓屏障和視網膜內的血液-視 網膜屏障，是CNS內的相連毛細血管屏障，並且在本文中被統稱為血腦屏障或BBB。BBB還 包括血液-CSF屏障（脈絡叢），其中屏障由室管膜細胞而不是毛細血管內皮細胞構成。
[0066] 突出物進入孔洞二聚化模塊和它們在抗體工程中的應用描述在：Carter P.; Ridgway J. B. B. ；Presta L. G. ：Immunotechnology, Volume 2, Numberl, 1996 年 2 月，第 73-73 頁（1))。
[0067] "中樞神經系統"或"CNS"是指控制身體功能的神經組織的複合體，並且包括腦和 脊髓。
[0068] "血腦屏障受體"（本文中簡寫為"R/BBB"）是在腦內皮細胞上表達的細胞外膜連 接的受體蛋白，其能夠將分子運輸穿過BBB或者用於運輸外源施用的分子。本文中R/BBB 的例子包括：轉鐵蛋白受體（TfR)、胰島素受體、胰島素樣生長因子受體（IGF-R)、低密度脂 蛋白受體（包括但不限於低密度脂蛋白受體相關的蛋白1(LRP1)和低密度脂蛋白受體相關 的蛋白8(LRP8))、和結合肝素的表皮生長因子樣生長因子（HB-EGF)。本文中的一種示例性 的R/BBB是轉鐵蛋白受體（TfR)。
[0069] "腦效應物實體"是指要穿過BBB運輸至腦的分子。效應物實體通常具有希望遞送 至腦的特徵性治療活性。效應物實體包括神經疾病藥物和細胞毒性劑例如肽、蛋白和抗體， 尤其是針對腦靶標的單克隆抗體或其片段。
[0070] "單價結合實體"是指能夠特異性地且以單價結合模式與R/BBB結合的分子。本發 明的血腦穿梭和/或綴合物的特徵在於存在單價結合實體的單個單元，即本發明的血腦穿 梭和/或綴合物包含單價結合實體的一個單元。所述單價結合實體包括但不限於蛋白、多 肽、肽和抗體片段，包括Fab、Fab'、Fv片段、單鏈抗體分子例如單鏈Fab、scFv。所述單價 結合實體可以是例如使用現有技術（如噬菌體展示或免疫接種）工程改造的支架蛋白。所 述單價結合實體還可以是肽。在某些實施方案中，所述單價結合實體包含CH2-CH3Ig結構 域和針對血腦屏障受體的單Fab (sFab)。所述sFab通過接頭偶聯至CH2-CH3 Ig結構域的 C-末端。在某些實施方案中，所述sFab是指轉鐵蛋白受體。
[0071] "單價結合模式"是指與R/BBB的特異性結合，其中單價結合實體和R/BBB之間的 相互作用通過一個單獨表位而發生。由於單個表位相互作用點，單價結合模式會阻止R/BBB 的任何二聚化/多聚化。單價結合模式會阻止R/BBB的細胞內分選發生變化。
[0072] 術語"表位"包括能夠特異性結合抗體的任何多肽決定簇。在某些實施方案中，表 位決定簇包括分子的化學活性表面分組（groupings)，諸如胺基酸、糖側鏈、磷醯基或磺醯 基，且在某些實施方案中，可以具有特定的三維結構特徵，和或特定的帶電特性。表位是被 抗體結合的抗原區域。
[0073] "轉鐵蛋白受體"（"TfR"）是一種跨膜糖蛋白（具有約180, 000的分子量），其由 參與脊椎動物中的鐵攝取的兩個二硫鍵鍵合的亞基（各自的表觀分子量為約90, 000)組 成。在一個實施方案中，本文中的TfR是人TfR,其包含例如在Schneider等.Nature 311: 675-678(1984)中的胺基酸序列。
[0074] 本文中使用的"神經疾病"是指影響CNS和/或具有在CNS中的病因的疾病或病 症。示例性的CNS疾病或病症包括、但不限於：神經病、澱粉樣變性、癌症、眼的疾病或病症、 病毒或微生物感染、炎症、缺血、神經變性疾病、癲癇發作、行為疾病和溶酶體貯積病。為了 本申請的目的，將理解CNS包括眼，其通常通過血液-視網膜屏障與身體的其它部分隔離。 神經疾病的具體例子包括、但不限於：神經變性疾病（包括、但不限於，雷維小體病（Lewy body disease),脊髓灰質炎後症候群（postpoliomyelitis syndrome),夏伊-德雷格綜合 徵（Shy-Draeger syndrome)，撤攬體腦橋小腦萎縮（olivopontocerebellar atrophy)，帕 金森病（帕金蛋白son' s disease),多系統萎縮（multiple system atrophy),紋狀體 黑質變性（striatonigral degeneration), Tau 病變（tauopathy)(包括、但不限於，阿爾 茨海默病（Alzheimer disease)和核上性麻搏（supranuclear palsy))，|元病毒病（prion disease)(包括、但不限於，牛海綿狀腦病（bovine spongiform encephalopathy)，癢病 (scrapie)，克-雅症候群（Creutzfeldt-Jakob syndrome)，庫魯病（kuru)，格-施-沙 病（Gerstmann-Straussler-Scheinker disease),慢性消耗性疾病（chronic wasting disease),和致命性家族性失眠症（fatal familial insomnia)),延髓性麻搏（bulbar palsy),運動神經兀病（motor neuron disease),和 heterodegenerative 疾病（包括、 但不限於卡納範病（Canavan disease)，亨廷頓病（Huntington' s disease)，神經兀 錯樣脂褐素沉積症（neuronal ceroid-lipofuscinosis)，亞歷山大病（Alexander' s disease),圖雷特症候群（Tourette' s syndrome),門克斯扭結髮症候群（Menkes kinky hair syndrome),科凱恩症候群（Cockayne syndrome),哈勒沃登-施帕茨綜合 徵（Halervorden-Spatz syndrome),拉福拉病（lafora disease),雷特症候群（Rett syndrome),肝豆狀核變性（hepatolenticular degeneration),萊施-奈恩症候群 (Lesch-Nyhan syndrome),和翁-隆症候群（Unverricht-Lundborg syndrome))，痴呆（包 括、但不限於，皮克病（Pick' s disease),和脊髓小腦性共濟失調（spinocerebellar ataxia))，癌症（例如CNS和/或腦的癌症，包括源自身體其它位置的癌症的腦轉移灶）。
[0075] "神經疾病藥物"是治療一種或多種神經疾病的藥物或治療劑。本發明的神經疾病 藥物包括，但不限於，小分子化合物，抗體，肽，蛋白質，一種或多種CNS靶標的天然配體，一 種或多種CNS靶標的天然配體的修飾形式，適體，抑制性核酸（即，小的抑制性RNA(siRNA) 和短髮夾RNA (shRNA))，核酶，和小分子，或上述中任何一種的活性片段。本發明的示例性神 經疾病藥物描述於此並且包括、但不限於：抗體，適體，蛋白質，肽，抑制性核酸和小分子和 上述中任何一種的活性片段，它們是它們本身或特異性識別和/或作用於（即，抑制，活化， 或檢測）CNS抗原或靶標分子如，但不限於，澱粉樣蛋白前體蛋白或其部分，澱粉樣蛋白3， 3 -分泌酶，Y -分泌酶，tau，a -突觸核蛋白，帕金蛋白，亨廷頓蛋白，DR6,早老蛋白，ApoE, 神經膠質瘤或其它CNS癌症標誌物，和神經營養因子。神經疾病藥物的非限制性例子以及 可以使用它們治療的對應疾病：腦衍生的神經營養因子（BDNF)，慢性腦損傷（神經發生）， 成纖維細胞生長因子2 (FGF-2)，抗-表皮生長因子受體腦癌，（EGFR)-抗體，神經膠質細胞 系衍生的神經因子，帕金森病（⑶NF)，腦衍生的神經營養因子（BDNF)，肌萎縮性側索硬化， 抑鬱症，溶酶體酶，腦的溶酶體貯積疾病，睫狀神經營養因子（CNTF)，肌萎縮性側索硬化，神 經調節蛋白-1，精神分裂症，抗-HER2抗體（例如曲妥珠單抗），來自HER2-陽性癌症的腦 轉移。
[0076] "成像劑"是這樣的化合物：其具有允許它的存在和/或位置被直接或間接檢測到 的一種或多種性質。這樣的成像劑的例子包括蛋白和小分子化合物，其摻入使檢測成為可 能的標記實體。
[0077] "CNS抗原"或"腦靶標"是在CNS (包括腦）中表達的抗原和/或分子，其可以被抗 體或小分子所靶向。這樣的抗原和/或分子的例子包括、但不限於4 -分泌酶1 (BACE1)、 澱粉樣蛋白0 (AP )、表皮生長因子受體（EGFR)、人表皮生長因子受體2(HER2)、Tau、載脂 蛋白E4(ApoE4)、a-突觸核蛋白、⑶20、亨廷頓蛋白、朊病毒蛋白（PrP)、富含亮氨酸的重複 序列激酶2(LRRK2)、帕金蛋白、早老蛋白1、早老蛋白2、Y分泌酶、死亡受體6(DR6)、澱粉 樣蛋白前體蛋白（APP)、p75神經營養因子受體（p75NTR)和胱天蛋白酶6。在一個實施方 案中，所述抗原是BACE1。
[0078] 本文中的"天然序列"蛋白質是指包含在自然中發現的蛋白質的胺基酸序列的蛋 白質，包括所述蛋白質的天然存在的變體。本文中使用的該術語包括從其天然來源分離的 蛋白質或重組製備的蛋白質。
[0079] 術語"抗體"在本文中以最寬的含義使用，並且具體地涵蓋單克隆抗體、多克隆抗 體、由至少兩個完整抗體形成的多特異性抗體（例如、雙特異性抗體）和抗體片段，只要它 們表現出期望的生物活性即可。
[0080] "抗體片段"在本文中包括保持結合抗原的能力的完整抗體的一部分。抗體片段的 例子包括Fab、Fab '、F (ab') 2和Fv片段；雙體；線性抗體；單鏈抗體分子例如單鏈Fab、 scFv和由多個抗體片段形成的多特異性抗體。"單鏈Fab"形式例如描述在Hust M.等.BMC Biotechnol. 2007 年 3 月 8 日；7 :14 中。
[0081] 本文中使用的術語"單克隆抗體"是指從一群基本上同質的抗體中獲得的抗體， 即除了可能的變體（該變體可以在產生單克隆抗體的過程中出現，此類變體通常少量存 在）外，構成群體的個體抗體是相同的和/或結合相同的表位。相比於通常包括針對不同 決定簇（表位）的不同抗體的多克隆抗體製備物，每個單克隆抗體針對抗原上的單一決定 簇。除它們的特異性外，單克隆抗體的優勢在於它們不受其它免疫球蛋白的汙染。修飾 語"單克隆"表明抗體從基本上同質的抗體群獲得的特徵，不應解釋為要求通過任何特定 方法來生產抗體。例如，根據本發明使用的單克隆抗體可通過最先由Kohler等，Nature, 256 :495(1975)描述的雜交瘤方法製備，或可以通過重組DNA方法（參見，例如，美國 專利號4, 816, 567)製備。"單克隆抗體"也可以使用例如在Clackson等，Nature, 352 : 624-628(1991)和 Marks 等，J. Mol. Biol.，222 :581-597 (1991)中所述的技術從噬菌體抗 體文庫分離。本文中的單克隆抗體的具體實例包括嵌合抗體、人源化抗體和人抗體，包括 它們的抗原結合片段。單克隆抗體在本文中具體地包括："嵌合"抗體（免疫球蛋白），其 中重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種或屬於特定抗體類別或亞類的抗體中的相 應序列相同或同源，而所述鏈的剩餘部分與衍生自另一物種或屬於另一抗體類別或亞類 的抗體中的相應序列相同或同源；以及此類抗體的片段，只要它們展現出期望的生物學活 性（美國專利號4,816,567以〇1'1^8〇11等，？1'〇(3.似七4〇3(1.5(^^54(美國國家科學院學 報）81:6851-6855 (1984))。本文感興趣的嵌合抗體包括"靈長類源化（primatized)"抗 體，該抗體包含來源於非人靈長類動物（例如舊大陸猴（Old World Monkey),如狒狒、恆河 猴（rhesus)或食蟹猴（cynomolgus monkey))的可變結構域抗原-結合序列以及人恆定區 序列（美國專利號5, 693, 780)。
[0082] 非人（例如鼠）抗體的"人源化"形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的 序列的嵌合抗體。在大部分情況中，人源化抗體是人免疫球蛋白（受體抗體），其中受體高 變區的殘基被具有所需特異性、親和力和能力的非人物種（供體抗體）（諸如小鼠、大鼠、 兔或非人靈長類動物）的高變區殘基替換。在有些情況中，將人免疫球蛋白的框架區（FR) 殘基用相應的非人殘基替換。此外，人源化抗體可包含在受體抗體中或在供體抗體中沒有 發現的殘基。進行這些修飾以進一步改進抗體的性能。一般而言，人源化抗體將包含基本 上全部的至少一個、典型地兩個可變結構域，其中所有或基本上所有高變區對應於非人免 疫球蛋白的高變區，且所有或基本上所有FR是人免疫球蛋白序列的那些，不同之處在於如 上所述的FR置換。人源化抗體任選還將包含至少部分免疫球蛋白恆定區，所述免疫球蛋 白恆定區典型地是人免疫球蛋白的恆定區。更多細節見例如Jones等，自然（Nature)321 : 522-525(1986) ;Riechmann 等，自然（Nature)332:323-329(1988) ; &Presta，Curr. Op.Struct. Biol. 2 :593_596(1992)。
[0083] "人抗體"在本文中是包含這樣的胺基酸序列結構的抗體，所述胺基酸序列結構與 可獲得自人B細胞的抗體的胺基酸序列結構對應，並且包括人抗體的抗原結合片段。可以 通過多種技術鑑定或製備這樣的抗體，所述技術包括、但不限於：通過在免疫後能夠在不存 在內源免疫球蛋白生產的情況下生產人抗體的轉基因動物（例如，小鼠）生產（參見，例 如，Jakobovits 等，Proc. Natl. Acad. Sci.USA，90 :2551 (1993) ;Jakobovits 等，Nature, 362 :255_258 (1993) ;Bruggermann 等，Year in Tmmuno. , 7 :33 (1993);和美國專利號 5, 591，669, 5, 589, 369和5, 545, 807));從表達人抗體或人抗體片段的噬菌體展示文庫選 擇（參見，例如，McCafferty等，Nature 348:552-553(1990) ;Johnson等，Current Opinion in Structural Biology 3:564-571(1993) ;Clackson 等，Nature, 352:624-628 (1991); Marks等，J.Mol.Biol. 222 :581-597(1991) ;Griffith等，EMBO J. 12:725-734(1993);美國 專利號5, 565, 332和5, 573, 905);通過體外活化的B細胞生成（參見美國專利5, 567, 610 和5, 229, 275);和分離自生產人抗體的雜交瘤。
[0084] "多特異性抗體"在本文中是對至少兩個不同的表位具有結合特異性的抗體。示例 性多特異性抗體可以結合R/BBB和腦抗原兩者。多特異性抗體可以被製備成全長抗體或抗 體片段（例如F(ab' )2雙特異性抗體）。也預期有改造的具有兩個、三個或更多個（例如 四個）功能性抗原結合位點的抗體（參見，例如，美國申請號US 2002/0004587 Al，Miller 等）。多特異性抗體可以被製備成全長抗體或抗體片段。
[0085] 本文中的抗體包括具有改變的抗原結合或生物學活性的"胺基酸序列變體"。這樣 的胺基酸變化的例子包括具有增強的對抗原的親和力的抗體（例如"親和力成熟"抗體）， 和具有改變的Fc區（如果存在的話）的抗體，例如具有改變的（增加或減小的）依賴抗體 的細胞介導的細胞毒性（ADCC)和/或依賴補體的細胞毒性（CDC)的抗體（參見，例如，W0 00/42072, Presta，L.和W0 99/51642, Iduosogie等）；和/或具有增加的或減小的血清半 衰期的抗體（參見，例如，W000/42072, Presta，L.)。
[0086] "親和力修飾的變體"具有一個或多個被置換的親本抗體的高變區或框架殘基（例 如親本嵌合、人源化或人抗體的），其改變（增加或減小）親和力。在一個實施方案中，根據 本發明，所得的被選用於進一步開發的變體將具有減小的對R/BBB的親和力。產生這種置 換變體的簡便方式是使用噬菌體展示。簡言之，將若干個高變區位點（例如6-7個位點） 突變以在每個位點產生所有可能的氨基置換。因此產生的抗體變體以單價形式從絲狀噬菌 體顆粒展示為與包裝在每個顆粒內的M13的基因III產物的融合體（fusion)。然後對噬菌 體展示的變體的生物學活性（例如結合親和力）進行篩選。為了鑑定用於修飾的候選高變 區位點，可以進行丙氨酸掃描誘變以鑑別顯著有助於抗原結合的高變區殘基。可替換地，或 另外地，可能有利的是分析抗原-抗體複合物的晶體結構從而鑑別抗體及其靶標間的接觸 點。根據本文所述的技術，這樣的接觸殘基和鄰近殘基是置換的候選物。在這樣的變體產 生後，對一組變體進行篩選，並且可以選擇具有改變的親和力的抗體用於進一步的開發。 [0087] 本文中的抗體可以是"糖基化變體"以使與Fc區相連的任何糖（如果存在的 話）被改變。例如，具有缺乏與抗體的Fc區偶聯的巖藻糖的成熟糖結構的抗體描述於美 國專利申請號 US 2003/0157108 (Presta，L.)中。也參見 US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co. , Ltd)。在與抗體的Fc區連接的糖中具有平分型N-乙醯葡糖胺（GlcNAc)的 抗體引用在 W0 2003/011878(Jean-Mairet 等）和美國專利號 6,602,684(Umana 等）中。 在與抗體的Fc區連接的寡糖中具有至少一個半乳糖殘基的抗體在W0 1997/30087, Patel 等中被報導。也參見 W0 1998/58964(Raju，S.)和 W0 1999/22764(Raju，S.)，其涉及具 有改變的與其Fc區連接的糖的抗體。也參見US 2005/0123546 (Umana等），其描述了具 有修飾的糖基化的抗體。術語"高變區"當在本文中使用時是指抗體的負責抗原結合的 胺基酸殘基。高變區包含來自"互補決定區"或"CDR"的胺基酸殘基（例如輕鏈可變結 構域中的殘基24-34 (L1)、50-56(L2)和89-97 (L3)和重鏈可變結構域中的31-35 (H1)、 50_65(H2)和95-102 (H3) ;Kabat 等，免疫學感興趣的蛋白的序列（Sequences of Proteins of Immunological Interest)，第 5 版?公眾健康服務（Public Health Service)，國立衛 生研究所（National Institutes of Health)，Bethesda，MD. (1991))和/或來自"高變環" 的那些殘基（例如輕鏈可變結構域中的殘基26-32(Ll)、50-52(L2)和91-96(L3)以及重鏈 可變結構域中的26-32(Hl)、53-55(H2)和96-101(H3) ;Chothia和Lesk，分子生物學雜誌 (J. Mol. Biol.) 196 :901-917 (1987))。"框架"或"FR"殘基是不同於本文所定義的高變區殘 基的那些可變結構域殘基。
[0088]"全長抗體"是這樣的抗體，其包含抗原-結合可變區以及輕鏈恆定結構域（CL)和 重鏈恆定結構域，CH1，CH2和CH3。恆定結構域可以是天然序列恆定結構域（例如人天然序 列恆定結構域）或其胺基酸序列變體。
[0089]"裸抗體"是沒有綴合異源分子（如細胞毒性實體、聚合物或放射性標記）的抗體 (如本文所定義的）。
[0090] 抗體"效應子功能"指那些可歸因於抗體的Fc區（天然序列Fc區或胺基酸序列 變體Fc區）的生物學活性。抗體效應子功能的例子包括：Clq結合，補體依賴性細胞毒性 (CDC)，Fc受體結合，抗體依賴性細胞介導的細胞毒性（ADCC)等。在一個實施方案中，本文 中的抗體基本上缺少效應子功能。
[0091] 術語"抗體依賴性的細胞的細胞毒性（ADCC) "是指在有效應細胞存在下抗體對人 靶細胞的裂解。術語"補體依賴性的細胞毒性（CDC)"指由補體因子Clq與大多數IgG抗 體亞類的Fc部分結合而起始的過程。Clq與抗體的結合由在所謂的結合位點的定義的蛋 白-蛋白相互作用所導致。這樣的Fc部分結合位點是現有技術中已知的。這些Fc部分結 合位點例如特徵在於胺基酸L234、L235、D270、N297、E318、K320、K322、P331和P329 (根據 Kabat的EU索引編號）。亞類IgGl、IgG2和IgG3的抗體通常顯示包括Clq和C3結合的補 體激活，而IgG4不激活補體系統並且不結合Clq和/或C3。
[0092] 取決於其重鏈恆定結構域的胺基酸序列，可以將全長抗體分配到不同的"類別"。 有五個主要類別的全長抗體：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，並且這些中的數個可以進一步被 劃分為"亞類"（同種型），例如，IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgA和IgA2。對應於不同類別的 抗體的重鏈恆定結構域分別被稱為a、S、 e、Y和y。不同類別的免疫球蛋白的亞基結 構和三維構型是已知的。術語"重組抗體"，當在本文中使用時，是指這樣的抗體（例如嵌 合、人源化或人抗體或其抗原結合片段），該抗體由包含編碼所述抗體的核酸的重組宿主細 胞表達。用於生產重組抗體的"宿主細胞"的例子包括：（1)哺乳動物細胞，例如，中國倉 鼠卵巢（CH0)、C0S、骨髓瘤細胞（包括Y0和NS0細胞），幼倉鼠腎細胞（BHK)，Hela細胞和 Vero細胞；（2)昆蟲細胞，例如，sf9, sf21和Tn5 ; (3)植物細胞，例如屬於菸草屬（genus Nicotiana)的植物（例如菸草（Nicotiana tabacum)) ;(4)酵母細胞，例如，屬於酵母屬 (genus Saccharomyces)的那些（例如釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae))或屬於曲 黴屬（genus Aspergillus)的那些（例如黑麴黴（Aspergillus niger)) ; (5)細菌細胞，例 如大腸桿菌（Escherichia, coli)細胞或枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis)細胞等。
[0093] 本文中使用的"特異性結合"或"特異地結合"是指抗體選擇性地或優先地結合抗 原。通常使用標準測定，如斯卡查德分析或表面等離子共振技術（例如使用B1ACORE? )確定結合親和力。
[0094] 與參照抗體"結合相同表位的抗體"是指這樣的抗體，其在競爭測定中阻斷50%以 上的所述參照抗體與其抗原的結合，反之，參照抗體在競爭測定中阻斷50%以上的該抗體 與其抗原的結合。
[0095] 術語"細胞毒性劑"用在本發明中指抑制或防止細胞功能和/或引起細胞 死亡或破壞的物質。細胞毒性劑包括、但不限於：放射性同位素（例如，At211，1131， 1125, Y90, Rel86, Rel88, Sml53, Bi212, P32, Pb212 和 Lu 的放射性同位素）；化療劑或 藥物（例如，甲氨蝶呤（methotrexate),阿黴素（adriamicin)，長春花生物鹼（vinca alkaloids)(長春新喊（vincristine)，長春喊（vinblastine)，依託泊苷（etoposide)), 多柔比星（doxorubicin),美法侖（melphalan)，絲裂黴素（mitomycin) C，苯丁酸氮芥 (chlorambucil),柔紅黴素（daunorubicin)或其它嵌入劑）；生長抑制劑；酶及其片段如核 酸水解酶；抗生素；毒素如小分子毒素或細菌、真菌、植物或動物起源的酶促活性毒素，包 括其片段和/或變體。
[0096] 試劑例如藥物製劑的"有效量"是指在需要的劑量和時間階段有效獲得所需的治 療或預防結果的量。
[0097] 術語"Fc區"在本文中用於定義免疫球蛋白重鏈的C端區域，所述區域包含恆定 區的至少一部分。Fc區包含免疫球蛋白的CH2和CH3結構域。該術語包括天然序列Fc區 和變體Fc區。在一個實施方案中，人IgG重鏈Fc區從Cys226或Pr 〇230延伸至重鏈的羧 基端。但是，Fc區的C端賴氨酸（Lys447)可以存在或可以不存在。除非另外說明，Fc區 或恆定區中的胺基酸殘基的編號是根據EU編號系統，其也被稱為EU索引，如在Kabat等， Sequences of Proteins of Immunological Interest (免疫學感興趣的蛋白質的序列）， 第5版.Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda，MD，1991 中 所述。"框架"或"FR"是指除高變區（HVR)殘基之外的可變結構域殘基。可變結構域的FR 通常由以下四個FR結構域組成：FR1，FR2, FR3和FR4。因此，HVR和FR序列通常以下列順 序出現在 VH(或 VL)中：FR1-H1 (LI) -FR2-H2 (L2) -FR3-H3 (L3) -FR4。
[0098] 本文中使用的術語"CH2-CH3 Ig實體"是指從免疫球蛋白CH2或CH3結構域衍生 出的蛋白實體。"CH2-CH3 Ig實體"包含2個形成二聚體的"CH2-CH3"多肽。所述免疫球 蛋白可以是186、1§4、1 §0、1§￡或1§11。在一個實施方案中，所述〇12-〇13以實體衍生自 IgG免疫球蛋白，且在本文中被稱作"CH2-CH3 IgG實體"。該術語包括CH2-CH3結構域的 天然序列和變體CH2-CH3結構域。在一個實施方案中，所述"CH2-CH3 Ig實體"衍生自人 重鏈CH2-CH3 IgG結構域，所述結構域從Cys226或從Pr〇230延伸至重鏈的羧基端。但是， Fc區的C-端賴氨酸（Lys447)可以存在或可以不存在。除非在本文中另外說明，CH2-CH3 結構域區域或恆定區中的胺基酸殘基的編號是根據EU編號系統，其也被稱為EU索引，如在 Kabat 等，Sequences of Proteins of Immunological Interest (免疫學感興趣的蛋白質 的序列），第 5版.Public Health Service，National Institutes of Health，Bethesda， MD，1991中所述。
[0099] "綴合物"是與一個或多個異源分子綴合的本發明的融合蛋白，所述異源分子包 括、但不限於標記、神經疾病藥物或細胞毒性劑。
[0100] 本文中使用的"接頭"是指化學接頭或單鏈肽接頭，其將血腦屏障穿梭體和/或融 合蛋白和/或本發明的綴合物的不同實體共價地連接。例如，所述接頭將腦效應物實體與 單價結合實體連接。例如，如果單價結合實體包含CH2-CH3 Ig實體和針對血腦屏障受體的 sFab，那麼所述接頭將sFab與CH3-CH2 Ig實體的C-末端連接。將腦效應物實體與單價結 合實體連接的接頭（第一接頭）和將sFab與CH2-CH3 Ig結構域的C-末端連接的接頭（第 二接頭）可以相同或不同。
[0101] 可以使用單鏈肽接頭，其包含1-20個通過肽鍵連接的胺基酸。在某些實施方案 中，所述胺基酸選自2種天然存在的胺基酸。在某些其它實施方案中，所述胺基酸中的一個 或多個選自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬醯胺、穀氨醯胺和賴氨酸。在其它實施方案中，所 述接頭是化學接頭。在某些實施方案中，所述接頭是具有至少25個胺基酸長度的胺基酸序 列的單鏈肽，優選地具有32-50個胺基酸的長度。在一個實施方案中，所述接頭是（GxS)n， 其中G =甘氨酸，S =絲氨酸（x = 3、n = 8、9或10且m = 0、l、2或3)或（x = 4和n = 6、7或8且m = 0、1、2或3),優選地，其中x = 4，n = 6或7且m = 0、1、2或3,更優選地， 其中x = 4，n = 7且m=2。在一個實施方案中，所述接頭是（G4S)4(Seq. Id. No. 17)。在一 個實施方案中，所述接頭是（G4S)6G2(Seq. Id.No. 13)。
[0102] 可以使用多種化學接頭進行綴合。例如，使用多種雙功能的蛋白偶聯劑諸如N-琥 珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基二硫）丙酸酯（STOP)、琥珀醯亞胺基-4-(N-馬來醯亞胺基甲基） 環己烷-1-甲酸酯（SMCC)、亞氨基硫雜環戊烷（IT)、亞胺酯的雙功能衍生物（諸如己二亞 氨酸二甲酯HC1)、活性酯（諸如辛二酸二琥珀醯亞胺酯）、醛（諸如戊二醛）、二-疊氮基化 合物（諸如雙（對疊氮基苯甲醯基）己烷二胺）、二-重氮鎗衍生物（諸如二_(對重氮鎗 苯甲醯基）_乙二胺）、二異氰酸酯（諸如甲苯2,6_二異氰酸酯）和雙活性的氟化合物（諸 如1，5-二氟-2,4-二硝基苯），可以綴合單價結合實體或融合蛋白和腦效應物實體。所述接 頭可以是"可切割的接頭"，從而促進效應物實體在遞送至腦以後的釋放。例如，可以使用酸 不穩定的接頭、肽酶敏感的接頭、光不穩定的接頭、二甲基接頭或含有二硫鍵的接頭（Chari 等，Cancer Res. 52 :127-131 (1992);美國專利號 5, 208, 020)。
[0103] 共價綴合可以直接進行或通過接頭進行。在某些實施方案中，直接綴合通過構建 蛋白融合體進行（即，通過編碼針對R/BBB的單價結合實體和效應物實體的兩種基因的基 因融合併且表達為單一蛋白）。在某些實施方案中，直接綴合通過在針對R/BBB的單價結 合實體的兩部分之一上的反應基團與腦效應物實體上的對應基團或接受體之間形成共價 鍵進行。在某些實施方案中，直接綴合通過將要綴合的兩種分子中的一種進行修飾（即基 因修飾）而進行，從而包括在適當條件下形成與要綴合的其它分子的共價連接的反應基團 (作為非限制性例子，巰基或羧基）。作為一個非限制性例子，可以引入具有期望的反應基 團（即，半胱氨酸殘基）的分子（即，胺基酸），例如，引入到針對R/BBB抗體的單價結合實 體中，並且與神經藥物形成二硫鍵。使核酸與蛋白共價綴合的方法也是本領域已知的（即， 光交聯，參見，例如，Zats印in等? Russ. Chem. Rev?(俄羅斯化學綜述）74 :77-95 (2005))。 還可以使用多種接頭進行綴合。例如，使用多種雙功能的蛋白偶聯劑諸如N-琥珀醯亞胺 基-3_(2-吡啶基二硫）丙酸酯（STOP)、琥珀醯亞胺基-4-(N-馬來醯亞胺基甲基）環己 烷-1-甲酸酯（SMCC)、亞氨基硫雜環戊烷（IT)、亞胺酯的雙功能衍生物（諸如己二亞氨酸 二甲酯HC1)、活性酯（諸如辛二酸二琥珀醯亞胺酯）、醛（諸如戊二醛）、二-疊氮基化合 物（諸如雙（對疊氮基苯甲醯基）己烷二胺）、二-重氮鎗衍生物（諸如二_(對重氮鎗苯 甲醯基）_乙二胺）、二異氰酸酯（諸如甲苯2,6_二異氰酸酯）和雙活性的氟化合物（諸 如1，5-二氟-2,4-二硝基苯），可以綴合單價結合實體和效應物實體。也可以使用包含通 過肽鍵連接的1-20個胺基酸的肽接頭。在某些這樣的實施方案中，胺基酸選自20種天然 存在的胺基酸。在某些其它這樣的實施方案中，一個或多個胺基酸選自甘氨酸、丙氨酸、脯 氨酸、天冬醯胺、穀氨醯胺和賴氨酸。接頭可以是"可切割的接頭"，從而促進效應物實體在 遞送至腦後的釋放。例如，可以使用酸不穩定的接頭、肽酶敏感的接頭、光不穩定的接頭、 二甲基接頭或含有二硫鍵的接頭（Chari等，Cancer Res. 52 :127-131 (1992);美國專利號 5, 208, 020)。
[0104] "標記"是與本文中的融合蛋白偶聯並被用於檢測或成像的標誌物。這樣的標記的 例子包括：放射性標記、螢光團、生色團或親和標籤。在一個實施方案中，標記是用於醫療成 像的放射性標記，例如tc99m或1123,或用於核磁共振（NMR)成像（也被稱為磁共振成像， mri)的自旋標記，如又有碘-123,碘-131，銦-111，氟-19,碳-13,氮-15,氧-17,釓，錳，鐵 等。"個體"或"受試者"是哺乳動物。哺乳動物包括、但不限於，家養動物（例如，牛，羊，貓， 狗和馬），靈長類動物（例如，人和非人靈長類動物如猴），兔，以及嚙齒類動物（例如，小鼠 和大鼠）。在某些實施方案中，個體或受試者是人。
[0105] "分離的"抗體是這樣的抗體，其已經與其天然環境的組分分離。在某些實施方 案中，將抗體純化至超過95%或99%純度，如通過例如電泳（例如，SDS-PAGE，等電聚焦 (IEF)，毛細管電泳）或層析（例如，離子交換或反相HPLC)確定的。對於用於評估抗體純 度的方法的綜述，參見，例如，Flatman 等，J. Chromatogr. B 848 :79_87 (2007)。
[0106] 術語"包裝說明書"用於指常規地包含在治療性產品的商業包裝中的說明書，其含 有關於適應症、用法、劑量、施用、組合療法、禁忌症和/或關於使用此類治療性產品的警告 的信息。
[0107] 術語"藥物製劑"指這樣的製劑，其以允許包含在其中的活性成分的生物學活性 有效的形式存在，並且不包含對被施用所述製劑的受試者具有不可接受的毒性的另外的成 分。
[0108] "藥用載體"是指藥物製劑中不同於活性成分的成分，其對受試者是無毒的。藥用 載體包括、但不限於緩衝劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
[0109] 本文中使用的"治療（treatment)"（及其語法變化如"治療（treat)"或"治療 (treating) "）指在嘗試改變待治療的個體的天然進程中的臨床幹預，並且可以為了預防或 在臨床病理學的進程中進行。治療的理想效果包括、但不限於防止疾病發生或復發，緩和徵 狀，消除疾病的任何直接或間接病理學後果，預防轉移，降低疾病進展速率，改善或減輕疾 病狀態，和徵狀緩解或改善的預後。在某些實施方案中，將本發明的抗體用於延緩疾病的發 生或減緩疾病的進展。
[0110] 組合物和方法
[0111] 本發明的方法和製品使用，或包括，結合R/BBB的血腦屏障穿梭體和/或融合蛋 白。要用於生產或篩選單價結合實體的R/BBB抗原可以是，例如，包含所需表位的可溶形式 的或其部分（例如胞外結構域）。可替換地，或另外地，在其細胞表面表達BBB-R的細胞可 以用於產生或篩選單價結合實體。可用於生產單價結合實體的R/BBB的其它形式對於本領 域技術人員將是明顯的。本文中的R/BBB的例子包括轉鐵蛋白受體（TfR)、胰島素受體、胰 島素樣生長因子受體（IGF-R)、低密度脂蛋白受體相關的蛋白1(LRP1)和LRP8和結合肝素 的表皮生長因子樣生長因子（HB-EGF)。
[0112] 根據本發明，選擇針對R/BBB的"單價結合"實體（例如針對TfR的單價結合實 體），這基於本文中證實此種單價結合實體顯示提高的CNS(例如，腦）攝取的數據。為 了鑑別此種結合實體，用於測量單價結合模式的多種測定是可用的，其包括、但不限於： Scatchard測定和表面等離子體共振技術（例如使用B1ACORE? )和本文描述的體內研 究。
[0113] 因而，本發明提供了製備可用於將腦效應物實體（例如神經疾病藥物）運輸穿過 血腦屏障的單價結合實體的方法，所述方法包括：從針對R/BBB的單價結合部分集合中選 擇單價結合實體，因為它具有對R/BBB的單價結合模式。所述單價結合模式確保某些R/BBB 的有效BBB穿過，但是不會干擾受體正常細胞內篩選。
[0114]對於神經病疾病，可以選擇作為鎮痛藥的神經藥物，包括、但不限於，麻 醉藥/阿片類鎮痛藥（即，嗎啡，芬太尼（fentanyl)，丙碘酮（hydrocodone)，哌 替陡（meperidine)，美沙酮（methadone)，輕嗎啡酮（oxymorphone)，噴他佐辛 (pentazocine)，丙氧芬（propoxyphene)，曲馬朵（tramadol)，可待因（codeine)和 輕可酮（oxycodone))，非留類抗炎藥（NSAID)(即，布洛芬（ibuprofen)，萘普生 (naproxen)，雙氯芬酸（diclofenac)，二氟尼柳（diflunisal)，依託度酸（etodolac)， 非諾洛芬（fenoprofen)，氟比洛芬（flurbiprofen)，卩引哚美辛（indomethacin)，酮 咯酸（ketorolac)，甲芬那酸（mefenamic acid)，美洛昔康（meloxicam)，萘 丁美酮 (nabumetone)，奧沙普秦（oxaprozin)，卩比羅昔康（piroxicam)，舒林酸（sulindac)和託 美丁（tolmetin))，皮質類甾醇（即，可的松（cortisone)，潑尼松（prednisone)，潑尼松 龍（prednisolone)，地塞米松（dexamethasone)，甲潑尼龍（methylprednisolone)和去 炎松（triamcinolone))，抗偏頭痛劑（即，sumatriptin，阿莫曲普坦（almotriptan)，夫 羅曲普坦（frovatriptan)，舒馬普坦（sumatriptan)，利扎曲普坦（rizatriptan)，依來 曲普坦（eletriptan)，佐米曲普坦（zolmitriptan)，雙氫麥角胺（dihydroergotamine)， 依來曲普坦（eletriptan)和麥角胺（ergotamine))，醋氨酚（acetaminophen)，水楊酸 鹽（即，阿司匹林（aspirin)，水楊酸膽鹼（choline salicylate)，水楊酸鎂（magnesium salicylate)，二氟尼柳（diflunisal)和雙水楊酯（salsalate))，抗驚厥藥（S卩，卡 馬西平（carbamazepine)，氯硝西泮（clonazepam)，加巴噴丁（gabapentin)，拉莫三嗪 (lamotrigine)，普瑞巴林（pregabalin)，噻加賓（tiagabine)和託卩比酯（topiramate))， 麻醉藥（g 卩，異氟醚（isoflurane)，三氯乙烯（trichloroethylene)，氟焼（halothane)， 七氣焼（sevof lurane)，苯佐卡因（benzocaine)，氣普魯卡因（chloroprocaine)， 古柯鹼（cocaine)，環美卡因（cyclomethycaine)，二甲卡因（dimethocaine)，丙 氧卡因（propoxycaine)，普魯卡因（procaine)，奴佛卡因（novocaine)，丙美卡因 (proparacaine)，丁卡因（tetracaine)，|5可替卡因（articaine)，布 t匕卡因（bupivacaine)， 卡替卡因（carticaine)，辛古柯鹼（cinchocaine)，依替卡因（etidocaine)，左布比 卡因（levobupivacaine)，利多卡因（lidocaine)，甲脈卡因（mepivacaine)，脈羅 卡因（piperocaine)，丙胺卡因（prilocaine)，羅脈卡因（ropivacaine)，三甲卡因 (trimecaine)，始鮮毒素（saxitoxin)和河膝毒素（tetrodotoxin))，和 cox-2-抑制 劑（即，塞來昔布（celecoxib)，羅非昔布（rofecoxib)和伐地考昔（valdecoxib))。對 於伴有眩暈的神經疾病，可以選擇作為抗眩暈劑的神經藥物，其包括、但不限於，美克 洛嗪（meclizine)，苯海拉明（diphenhydramine)，異丙嗪（promethazine)和地西泮 (diazepam)。對於伴有噁心的神經疾病，可以選擇作為抗噁心劑的神經藥物，其包括、但不 限於，異丙嗪（promethazine)，氯丙嗪（chlorpromazine)，丙氯拉嗪（prochlorperazine)， 曲美節胺（trimethobenzamide)和甲氧氯普胺（metoclopramide)。對於神經變性疾病， 可以選擇是生長激素或神經營養因子的神經藥物；實例包括、但不限於腦源性神經營養 因子（BDNF)，神經生長因子（NGF)，神經營養因子-4/5,成纖維細胞生長因子（FGF)-2和 其它FGF，神經營養因子（NT)-3,促紅細胞生成素（EP0)，肝細胞生長因子（HGF)，表皮生 長因子（EGF)，轉化生長因子（TGF)-a，TGF-為，血管內皮生長因子（VEGF)，白介素-1 受體拮抗劑（IL-lra)，睫狀神經營養因子（CNTF)，神經膠質源性神經營養因子（GDNF)， neurturin，血小板源性生長因子（PDGF)，調蛋白（heregulin)，神經調節蛋白，artemin， persephin，白介素，膠質細胞源性神經營養因子（GFR)，粒細胞集落刺激因子（CSF)，粒細 胞-巨嗤細胞-CSF，導蛋白（netrin)，心肌營養蛋白-1，刺蝟分子（hedgehogs)，白血病 抑制因子（LIF)，中期因子，多效營養因子，骨形成蛋白（BMP)，導蛋白，皂化蛋白，腦信號 蛋白和幹細胞因子（SCF)。對於癌症，可以選擇是化療劑的神經藥物。化療劑的例子包括 焼基化試劑，如塞替哌（thiotepa)和環磷醯胺（cyclosphosphamide) (CYTOXAN?); 焼基磺酸酯（alkyl sulfonates)如白消安（busulfan)，英丙舒凡（improsulfan) 和哌泊舒凡（piposulfan) ; B丫丙陡類（aziridines)如苯佐替派（benzodopa)、卡 波醌（carboquone)、美妥替哌（meturedopa)和烏瑞替哌（uredopa);乙撐亞胺類 (ethylenimines)和甲基蜜胺類（methylamelamines)，包括六甲蜜胺（altretamine)、曲 他胺（triethylenemelamine)、三亞乙基憐酉先胺（triethylenephosphoramide)、三乙烯 硫代憐酸胺（triethylenethiophosphoramide)和三輕甲蜜胺（trimethylomelamine); 聚乙酸類（acetogenins)(特別是布拉他辛（bullatacin)和布拉他辛酮 (bullatacinone)) ; A-9-四氫大麻酌?（delta-9-tetrahydrocannabinol)(屈大麻酷 (dronabinol)、MAR1NOL? ); 6 -拉帕醌（beta-lapachone);拉帕醇（lapachol); 秋水仙喊（colchicines);禪木酸（betulinic acid);喜樹喊（camptothecin) (包括合成的類似物託泊替康（topotecan) (HYCAMTIN⑧)、CPT-11 (伊立替康 (irinotecan) CAMP10SAR? )、乙酉先喜樹喊（acetylcamptothecin)、東莫菪亭 (scopolectin)和 9_ 氨基喜樹喊（9-aminocamptothecin));苔蘚抑素（bryostatin);海 綿多烯酮類化合物（callystatin) ;CC-1065(包括其阿多來新（adozelesin)、卡折來新 (carzelesin)和比折來新（bizelesin)合成類似物）；鬼臼毒素（podophyllotoxin);鬼 臼酸（podophyllinic acid);替尼泊苷（teniposide);隱藻素類（cryptophycins)(特別 是隱藻素1和隱藻素8);多拉司他汀（dolastatin);倍癌黴素（duocarmycin)(包括合成 的類似物、KW-2189 和 CB1-TM1);艾植素（eleutherobin);水鬼蕉鹼（pancratistatin); 匍枝珊瑚醇（sarcodictyin);海綿素（spongistatin);氮芥（nitrogen mustards)如苯 丁酸氮芥（chlorambucil)、萘氮芥（chlornaphazine)、膽憐酸胺（chlorophosphamide)、 雌莫司汀（estramustine)、異環憐酸胺（ifosfamide)、氮芥（mechlorethamine)、鹽 酸氧氮芥（mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法侖（melphalan)、新氮芥 (novembichin)、苯芥膽留醇（phenesterine)、潑尼莫司汀（prednimustine)、曲憐胺 (trofosfamide)、尿啼陡氮芥（uracil mustard);亞硝基脈類（nitrosoureas)如卡莫 司汀（carmustine)、氯脲菌素（chlorozotocin)、福莫司汀（fotemustine)、洛莫司汀 (lomustine)、尼莫司汀（nimustine)和雷莫司汀（ranimnustine);抗生素如烯二炔類 (enediyne)抗生素（例如加利車黴素（calicheamicin)，尤其是加利車黴素Y II和加 利車黴素 coil (參見例如 Agnew，Chem. Intl.Ed.Engl.，33 :183-186(1994));烯二炔蒽 環類抗生素（dynemicin)，包括烯二炔蒽環類抗生素A;埃斯波黴素（esperamicin);以 及新制癌菌素（neocarzinostatin)生色團和相關色素蛋白烯二炔類抗生素生色團）、 阿克拉黴素（aclacinomysins)、放線菌素（actinomycin)、蒽黴素（authramycin)、偶氮 絲氨酸（azaserine)、博來黴素（bleomycins)、放線菌素 C(cactinomycin)、carabicin、 洋紅黴素（carminomycin)、嗜癌黴素（carzinophilin)、色黴素（chromomycins)、 放線菌素 D(dactinomycin)、柔紅黴素（daunorubicin)、地託比星（detorubicin)、 6_ 重氮-5-氧代-L-正亮氨酸（6-diaz〇-5-〇x〇-L_norleucine)、ADR1AMYCIN? 多柔比星（doxorubicin)(包括嗎啉代-多柔比星（morpholino-doxorubicin)、 氰基嗎啉代-多柔比星（cyanomorpholino-doxorubicin)、2_卩比咯啉-多柔比 星（2-pyrrolino-doxorubicin)和脫氧多柔比星（deoxydoxorubicin))、表柔比 星（epirubicin)、依索比星（esorubicin)、伊達比星（idarubicin)、馬塞羅黴素 (marcellomycin)、絲裂黴素類（mitomycins)如絲裂黴素 C、麥考酌?酸（mycophenolic acid)、諾拉黴素（nogalamycin)、橄欖黴素（olivomycins)、培洛黴素（peplomycin)、 紫菜黴素（porfiromycin)、卩票呤黴素（puromycin)、三鐵阿黴素（quelamycin)、羅多比 星（rodorubicin)、鏈黑黴素（streptonigrin)、鏈佐星（streptozocin)、殺結核菌素 (tubercidin)、烏苯美司（ubenimex)、淨司他丁（zinostatin)、佐柔比星（zorubicin);抗 代謝物如甲氨碟呤（methotrexate)和5-氟尿啼陡（5-fluorouracil) (5-FU);葉酸類似物 如二甲葉酸（denopterin)、甲氨碟呤、碟羅呤（pteropterin)、三甲曲沙（trimetrexate); 口票呤類似物如氟達拉濱（fludarabine)、6_巰卩票呤（6-mercaptopurine)、硫咪卩票呤 (thiamiprine)、硫鳥卩票呤（thioguanine);啼陡類似物如安西他濱（ancitabine)、 阿扎胞苷（azacitidine)、6_氮尿苷（6-azauridine)、卡莫氟（carmofur)、阿糖胞苷 (cytarabine)、雙脫氧尿苷（dideoxyuridine)、去氧氟尿苷（doxif luridine)、依諾他 濱（enocitabine)、氟尿苷（floxuridine);雄激素類，諸如卡魯睪酮（calusterone)、 丙酸屈他雄酮（dromostanolone propionate)、環硫雄醇（epitiostanol)、美雄焼 (mepitiostane)、睪內酯（testolactone);抗腎上腺藥（anti-adrenals)如氨魯米特 (aminoglutethimide)、米託坦（mitotane)、曲洛司坦（trilostane);葉酸補償劑如亞 葉酸（frolinic acid);醋葡醒內酯（aceglatone);輕醒磷醯胺配糖（aldophosphamide glycoside) ;5_ 氨基酮戊酸（aminolevulinic acid);恩尿啼陡（eniluracil);安 R丫陡 (amsacrine) ;bestrabucil ; t匕生群（bisantrene);依達曲沙（edatraxate) ;defofamine ; 秋水仙胺（demecolcine);地卩丫醌（diaziquone) ;elfornithine ;依利醋銨（elliptinium acetate);埃坡黴素（epothilone);依託格魯（etoglucid);硝酸嫁（gallium nitrate); 輕基脲（hydroxyurea);香燕多糖（lentinan);氯尼達明（lonidainine);美登木素生 物喊類（maytansinoids)如美登素（maytansine)和安絲菌素（ansamitocins);米託 胍腙（mitoguazone);米託蒽醌（mitoxantrone);莫哌達醇（mopidanmol);尼曲卩丫陡 (nitraerine);噴司他丁（pentostatin);異丙嗪（phenamet);批柔比星（pirarubicin); 洛索蒽醌（losoxantrone) ;2_ 乙基酉先餅（2-ethylhydrazide);丙卡巴餅（procarbazine); PSK? 多糖複合物（JHS Natural Products (JHS 天然產品），Eugene，OR);雷佐生 (razoxane);利索新（rhizoxin);西佐喃（sizofiran);錯螺胺（spirogermanium);細 交鏈孢菌酮酸（tenuazonic acid);三亞胺醌（triaziquone) ;2, 2'，2' -三氯三乙胺 (2,2'，2"-trichlorotriethylamine);單端抱黴烯族化合物（trichothecenes)(特 別是T-2毒素、verracurin A、杆孢菌素A(roridin A)和蛇形菌素（anguidine));烏 拉坦（urethan);長春地辛（vindesine) (ELD1SINE?、F1LDES1N?):達卡巴嗪 (dacarbazine);甘露莫司汀(mannomustine);二溴甘露酉享（mitobronitol);二溴衛 矛醇（mitolactol);哌泊溴焼（pipobroman) ;gacytosine ;阿糖胞苷（arabinoside) ("Ara-C"）；塞替哌（thiotepa);紫杉焼類化合物（taxoid)，例如TAXOL?紫 杉醇（paclitaxel)(Bristol-Myers Squibb Oncology， Princeton， N.J.)、不含 Cremophor 的 ABRAXANETM(ABRAXANETM Cremophor-free)，紫杉醇的白蛋白改造的 納米顆粒製劑(American Pharmaceutical Partners， Schaumberg， Illinois)和 TAXOTERE? 多西他塞（docetaxel) ( Rlidne-Poillenc Rorer，Antony，法國））； 苯丁 酸氮芥（chloranbucil);吉西他濱（gemcitabine) (GEMZAR?); 6_ 硫鳥 P票呤（6-thioguanine);巰卩票呤（mercaptopurine);甲氨碟呤；鉬類似物如順鉬 (cisplatin)和卡鉬（carboplatin);長春喊（vinblastine) (VELBAN?);鉬；依託泊 苷（etoposide) (VP-16);異環磷醯胺（ifosfamide);米託蒽醌（mitoxantrone);長春新鹼 (vincristine) (ONCOVIN?);與沙利鉬（oxaliplatin);亞葉酸（leucovorin);長春 瑞濱（vinorelbino) (NAVELB丨NE?);諾安託（novantrone);依達曲沙（edatrexate); 道諾黴素（daunomycin);氨基碟呤（aminopterin);伊班膦酸鹽（ibandronate);拓撲異 構酶抑制劑RFS 2000;二氟甲基鳥氨酸（difluoromethylornithine)(DMFO);類視黃酸類 (retinoids)如視黃酸（retinoic acid);卡培他濱（capecitabine) (XELODA?);以上 任何一種的藥用鹽、酸或衍生物；以及以上各項中的兩個以上的組合，CHOP，即環磷醯胺、多 柔比星、長春新鹼、和潑尼松龍（prednisolone)的組合療法的縮寫；以及F0LF0X，即與5-FU 和亞葉酸（leucovorin)組合的奧沙利鉬（oxaliplatin) (ELOXATINTM)的治療方案的縮寫。
[0115] 同樣包括在對化療劑的該定義中的是抗激素劑，其作用為調節、降低、阻斷或抑制 可促進癌生長的激素效果，並且通常為系統或全身治療的形式。它們自身可以是激素。實例 包括抗雌激素類和選擇性雌激素受體調控物類（SERM)，包括，例如，他莫昔芬（tamoxifen) (包括NOLVADEX?他莫昔芬），EV1STA⑧雷洛昔芬（raloxifene)，屈洛昔芬 (droloxifene)，4_ 輕基他莫西芬，曲沃昔芬（trioxifene), keoxifene，LY117018,奧那司 酮（onapristone)，和FARESTON?託瑞米芬（toremifene));抗黃體酮；雌激素受體下 調劑（ERDs);起作用抑制或關閉卵巢的藥劑，例如，促黃體生成激素釋放素（leutinizing hormone-releasing hormone) (LHRH)激動劑如 LUPRON? 和 EL1G.ARD? 醋酸亮 丙立德（leuprolide acetate),醋酸戈舍瑞林（goserelin acetate)、醋酸布舍瑞林 (buserelin acetate)和tripterelin;其它抗雄激素類，如氟他胺（flutamide)、尼魯米 特（nilutamide)和比卡魯胺（bicalutamide);和抑制芳香酶的芳香酶抑制劑，其調節腎上 腺中的雌激素生產，諸如例如，4(5)-咪唑、氨魯米特（3111；[11(^11^61:11；[1111(16)、1\4￡0八8巳? 醋酸甲地孕酮（megestrol acetate)、AROMAS1N?依西美坦（exemestane)、福美坦 (formestanie)，法倔唑（fadrozole)、RIVISOR? 伏氯唑（vorozole)、FEMARA? 來曲唑（letrozole)和AR1M丨DEX?阿那曲唑（anastrozole)。此夕卜，對化療齊 的這種定義包括二膦酸鹽類（bisphosphonates)如氯膦酸鹽（clodronate)(例如， BONEFOS? 或 OSTAC? )、DIDROCAL? 依替膦酸鹽（etidronate)、NE-58095、 ZOMETA?唑來膦酸（zoledronic acid)/唑來膦酸鹽（zoledronate)、FOSAMAX? 阿侖膦酸鹽（alendronate)、AREDIA? 帕米膦酸鹽（pamidronate)、SKELID? 替 魯膦酸鹽（tiludronate)或ACTONEL?利塞膦酸鹽（risedronate);以及曲沙他濱 (troxacitabine) (1，3_二氧戊環核苷胞啼陡類似物）；反義寡核苷酸，特別是抑制在涉 及異常細胞增殖的信號傳導途徑中基因的表達的那些，諸如例如，PKC-a、Raf、H-Ras 和表皮生長因子受體（EGF-R);疫苗諸如THERATOPE?疫苗和基因治療疫苗、例如， ALLOVECT1N?疫 m、LEUVECT1N?疫 m和 VAX1D?疫苗；LURTOTECAN?拓 撲異構酶 1 抑制劑；ABARELIX?:rmRH;託西拉帕替尼（lapatinib ditosylate) (ErbB-2 和EGFR雙重酪氨酸激酶小分子抑制劑，也已知為GW572016);和以上任何一種的藥用鹽、酸 或衍生物。
[0116] 可以被選作用於癌症治療或預防的神經藥物的另一組化合物是抗癌症免疫球蛋 白（包括、但不限於，曲妥珠單抗（trastuzumab)，貝伐珠單抗（bevacizumab)，阿侖單抗 (alemtuxumab)，西妥昔單抗（cetuximab)，吉妥珠單抗（gemtuzumab ozogamicin)，替尼莫 單抗（ibritumomab tiuxetan)，帕尼單抗（panitumumab)和利妥昔單抗（rituximab))。在 一些情況中，與有毒的標記結合的抗體可以用於靶向並殺死目的細胞（即，癌症細胞），所 述抗體包括、但不限於，具有放射性標記的託西莫單抗（tositumomab)。
[0117] 對於眼疾病或病症，可以選擇是以下各項的神經藥物：抗新生血管眼科試劑 (即，貝伐珠單抗（bevacizumab)，蘭尼單抗（ranibizumab)和培加尼布（pegaptanib))， 眼科青光眼藥（即，卡巴膽鹼（carbachol)，腎上腺素（epinephrine)，地美溴銨 (demecarium bromide)，阿可樂定（apraclonidine)，溴莫尼定（brimonidine)，布林 唑胺（brinzolamide)，左布諾洛爾（levobunolol)，噻嗎洛爾（timolol)，倍他洛爾 (betaxolol)，多佐胺（dorzolamide)，比馬前列素（bimatoprost)，卡替洛爾（carteolol)， 美替洛爾（metipranolol)，地匹福林（dipivefrin)，曲伏前列素（travoprost)和拉 坦前列素（latanoprost))，碳酸酐酶抑制劑（即，醋甲唑胺（methazolamide)和乙醯 唑胺（acetazolamide))，眼科抗組胺劑（S卩，萘甲唑啉（naphazoline)，去氧腎上腺素 (phenylephrine)和四氫唑啉（tetrahydrozoline))，眼用潤滑劑，眼科甾類化合物（即， 氟米龍（fluorometholone)，潑尼松龍（prednisolone)，氯替潑諾（loteprednol)，地塞 米松（dexamethasone)，二氟潑尼酯（difluprednate)，利美索龍（rimexolone)，醋酸 氟輕鬆（fluocinolone)，甲輕鬆（medrysone)和去炎松（triamcinolone))，眼科麻醉 劑（即，利多卡因（lidocaine)，丙美卡因（proparacaine)和 丁卡因（tetracaine))， 眼科抗感染劑（即，左氧氟沙星（levofloxacin)，加替沙星（gatifloxacin)，環丙沙星 (ciprofloxacin)，莫西沙星（moxifloxacin)，氯黴素（chloramphenicol)，桿菌膚 / 多粘 菌素 b (bacitracin/polymyxin b)，橫胺醋酸（sulfacetamide)，妥布黴素（tobramycin)， 阿奇黴素（azithromycin)，貝西沙星（besifloxacin)，諾氟沙星（norfloxacin)，橫 胺異 惡唑（sulfisoxazole)，慶大黴素（gentamicin)，碘苷（idoxuridine)，紅黴素 (erythromycin)，那他黴素（natamycin)，短桿菌肽（gramicidin)，新黴素（neomycin)， 氧氟沙星（of loxacin)，曲氟尿苷（trifluridine)，更昔洛韋（ganciclovir)，阿糖腺 苷（vidarabine))，眼科抗炎劑（S卩，奈帕芬胺（nepafenac)，酮咯酸（ketorolac)， 氟比洛芬（flurbiprofen)，舒洛芬（suprofen)，環孢菌素（cyclosporine)，去炎松 (triamcinolone)，雙氯芬酸（diclofenac)和溴芬酸（bromfenac))，和眼科抗組胺劑或 解充血藥（即，酮替芬（ketotifen)，奧洛他定（olopatadine)，依匹斯汀（epinastine)， 萘甲唑啉（naphazoline)，色甘酸鈉（cromolyn)，四氫唑啉（tetrahydrozoline)，卩比啼 司特（pemirolast)，貝他斯汀（bepotastine)，萘甲唑啉（naphazoline)，去氧腎上腺 素（phenylephrine)，奈多羅米（nedocromil)，洛度沙胺（lodoxamide)，去氧腎上腺素 (phenylephrine)，依美斯汀（emedastine)和氮卓斯汀（azelastine))。對於發作疾病，可 以選擇是抗驚厥藥或抗癲癇藥的神經藥物，其包括、但不限於，巴比妥酸鹽（barbiturate) 抗驚厥藥（即，撲米酮（primidone)，美沙比妥（metharbital)，甲苯比妥（mephobarbital)， 阿洛巴比妥（allobarbital)，異戊巴比妥（amobarbital)，阿普比妥（aprobarbital)， 苯烯比妥（alphenal)，巴比妥（barbital)，溴烯比妥（brallobarbital)和苯巴比妥 (phenobarbital))，苯並二氮卓類（benzodiazepine)抗驚厥藥（即，地西泮（diazepam)， 氯硝西泮（clonazepam)和蘿拉西泮（lorazepam))，氨基甲酸酯（carbamate)抗驚厥藥 (即非爾氨酯（felbamate))，碳酸酐酶（carbonic anhydrase)抑制劑抗驚厥藥（即，乙 醯唑胺（acetazolamide)，託卩比酯（topiramate)和唑尼沙胺（zonisamide))，二苯並氮 卓（dibenzazepine)抗驚厥藥（即，盧非酸胺（rufinamide)，卡馬西平（carbamazepine) 和奧卡西平（oxcarbazepine))，脂肪酸衍生物抗驚厥藥（即，雙丙戊酸鈉（divalproex) 和丙戊酸（valproic acid))，y-氨基丁酸類似物（即，普瑞巴林（pregabalin)，加巴 噴丁（gabapentin)和氨己烯酸（vigabatrin))，Y-氨基丁酸再攝取抑制劑（即，噻加 賓（tiagabine))，Y-氨基丁酸轉氨酶抑制劑（即，氨己烯酸（vigabatrin)，乙內醯脲 抗驚厥藥（即苯妥英（phenytoin)，乙苯妥英（ethotoin)，磷苯妥英（fosphenytoin)和 美芬妥英（mephenytoin))，雜類抗驚厥藥（即，拉科醯胺（lacosamide)和硫酸鎂），孕 酮類（S卩，黃體酮（progesterone))，P惡唑焼二酮（oxazolidinedione)抗驚厥藥（即， 甲乙雙酮（paramethadione)和三甲雙酮（trimethadione))，卩比咯焼抗驚厥藥（SP，左乙 拉西坦（levetiracetam))，琥拍醯亞胺抗驚厥藥（即，乙琥胺（ethosuximide)和甲琥按 (methsuximide))，三嗪抗驚厥藥（即，拉莫三嗪（lamotrigine))，和尿素抗驚厥藥（即，苯 乙醯脲（phenacemide)和苯丁醯脲（pheneturide))。
[0118] 對於溶酶體貯積病，可以選擇這樣的神經藥物，其自身或以其它方式模擬在疾病 中受損的酶的活性。用於治療溶酶體貯積病的示例性重組酶包括、但不限於在例如美國專 利申請
【發明者】貝恩德·博爾曼, 佩爾-奧拉·弗雷斯克加德, 彼得·邁爾, 延斯·尼韋納, 阿蘭·蒂索-達蓋特, 愛德華·烏裡希 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司