由雷帕黴素42-酯硼酸酯製備雷帕黴素42-酯的可放大方法

2023-05-19 07:22:31

專利名稱：：由雷帕黴素42-酯硼酸酯製備雷帕黴素42-酯的可放大方法由雷帕黴素42-酯硼酸酯製備雷帕黴素42-酯的可放大方法本發明的背景雷帕黴素42-酯是雷帕黴素的衍生物，其是通過吸水鏈黴菌(streptomyceshygroscopicus)自然產生的大環三烯抗生素。基於雷帕黴素的抗腫瘤和免疫抑制效果，已經發現了雷帕黴素的一系列應用。這種用途包括預防、抑制或治療移植物排斥、移植物抗宿主疾病、自身免疫疾病包括系統紅斑狼皰、炎性疾病包括肺部和眼睛炎症、成人T細胞血癌/淋巴瘤、實質固態瘤、黴菌感染和高增殖的血管病症，包括血管手術之後的平滑肌細胞增殖和內膜變厚。為了治療這些及其它病症，繼續研究雷帕黴素和雷帕黴素衍生物，包括雷帕黴素42-酯例如與3-羥基-2-(羥甲基)-2-曱基丙酸的雷帕黴素42-酯(CCI-779)。包括CCI-779的雷帕黴素的42-酯製備和用途，描述在US專利No.5,362,718中。CCI-779的區域選擇性合成描迷在US專利No.6,277,983中。在US專利出版物No.US2005-0033046Al(還有US專利申請No.10/903,062)中，基於硼酸酯化學，描述了CCI-779的區域選擇性合成。需要製備雷帕黴素42-酯的其它經濟而有效的方法，包括純化雷帕黴素42-酯的可放大(scalable)方法。本發明概述本發明提供了由雷帕黴素42-酯硼酸酯來製備和純化雷帕黴素42-酯，包括與3-羥基-2-(羥甲基)-2-甲基丙酸的雷帕黴素42-酯(CCI-779)，的可方文大方法。通過雷帕黴素42-酯硼酸酯與二醇的轉硼化作用(transboronation)來製備粗品雷帕黴素42-酯，是在可以獲得晶體產物的溶劑系統中進行的。在一個實施方案中，通過進一步用二醇處理來純化粗品雷帕黴素42-酯，以減少不希望有的副產物，而後重結晶。在另一個實施方案中，將通過轉硼化作用(transboronation)製備的粗品雷帕黴素42-酯首先進行重結晶，而後用二醇處理雷帕黴素42-酯的漿料，提供純化的雷帕黴素42-酯。有利的是，本發明方法避免了使用四氫呋喃(THF)作為溶劑，該四氫呋喃在製備期間不能完全除去，產生油性、粘稠的固體，使得雷帕黴素42-酯的分離很困難。本發明還克服了在雷帕黴素42-酯的純化期間與使用二醇的丙酮溶液相關的分離問題，其中殘餘溶劑阻止以所需要的方式結晶、並導致尤其在規模擴大期間的穩定性和工藝問題。由下列的本發明詳細說明，可以發現，與現有技術相比，本發明的其它方面和優點非常明顯。本發明的詳細說明本發明提供了製備雷帕黴素42-酯的可放大方法，該方法通過雷帕黴素42-酯硼酸酯與二醇反應，通過將得到的粗品雷帕黴素42-酯用二醇重結晶和成漿加以純化，得到最後的雷帕黴素42-酯。在一個實施方案中，首先在溶劑中用二醇處理粗品雷帕黴素42-酯，形成固體雷帕黴素42-酯，而後重結晶，形成純化的雷帕黴素42-酯。在另一個實施方案中，首先將粗品雷帕黴素42-酯重結晶，形成雷帕黴素42-酯的漿料，而後用二醇處理，形成純化的雷帕黴素42-酯。術語"雷帕黴素42-酯"包括雷帕黴素的42-位鞋基的酯，和這些雷帕黴素42-酯的醚、醯胺、碳酸酯、氨基曱酸酯、磺酸酯、肟、腙和羥基胺，其中核上官能團例如通過還原或氧化加以修飾，雷帕黴素的代謝物例如各種去曱雷帕黴素或開環雷帕黴素(例如secorapamycin,描述在US專利No.5,252,579中)。術語雷帕黴素42-酯還包括雷帕黴素42-酯的藥學可接受的鹽，藉助於包含酸或鹼性的部分，其能夠形成這種鹽。本文使用的藥學可接受的鹽包括但不局限於鹽酸，氬溴酸，氫碘酸，氪氟酸，硫酸，檸檬酸，馬來酸，乙酸，乳酸，菸鹼酸，琥珀酸，草酸，磷酸，丙二酸，水楊酸，苯乙酸，硬脂酸，吡啶，銨，哌。秦，二乙胺，煙醯胺，曱酸，脲，鈉，鉀，釣，鎂，鋅，鋰，肉桂酸，曱基氨基，甲磺酸，苦味酸，酒石酸，三乙基氨基，二曱基氨基，和三(羥基甲基)氨基甲烷。其它藥學可接受的鹽對於本領域技術人員是已知的。在下面專利中描述了許多雷帕黴素42-酯烷基酯(US專利No.4,316,885);氨基烷基酉旨(US專利No.4,650,803);氟化酯(US專利No.5,100,883);醯胺酯(US專利No.5,118,677);氨基曱酸酯(US專利No.5,118,678);甲矽烷基醚(US專利No.5,120,842);氨基酯(US專利No.5,130,307);縮醛(US專利No.5,51,413);氨基二酯(US專利No.5,162,333);磺酸酯和硫酸酯(US專利No.5,177,203);酉旨(US專利No.5,221,670);烷氧基酯(US專利No.5,233,036);O-芳基、-烷基、-烯基和-炔基醚(US專利No.5,258,389);碳酸酯(US專利No.5,260,300);芳基羰基和烷氧羰基氨基曱酸酯(US專利No.5,262,423);氨基曱酸酯(US專利No.5,302,584);羥基酯(US專利No.5,362,718);位阻酯(US專利No.5,385,908);雜環酯(US專利No.5,385,909);偕-二取代的酯(US專利No.5,385,910);氨基烷酸酯(US專利No.5,389,639);磷醯基氨基甲酸酯(US專利No.5,391,730);氨基甲酸酯(US專利No.5,411,967);氨基甲酸酯(US專利No.5,434,260);脒基氨基曱酸酯(US專利No.5,463,048);氨基甲酸酯(US專利No.5,480,988);氨基曱酸酯(US專利No,5,480,989);氨基甲酸酯(US專利No.5,489,680);位阻N-氧化物酯(US專利No.5,491,231);生物素酯(US專利No.5,504,091);O-烷基醚(US專利No.5,665,772);和雷帕黴素的PEG酯(US專利No.5,780，462)。在一個實施方案中，選擇與二羧酸的雷帕黴素42-酯，例如42-半琥珀酸酯、42-半戊二酸酯和42-半己二酸酯。在一個實施方案中，雷帕黴素42-酯具有下面的核結構在一個實施方案中，！^是-CK).CR7117，117其中R7、R'和lT獨立地選自氫，l-6個碳原子的烷基，2-7個碳原子的烯基，2-7個碳原子的炔基，-(CR12R13)fOR1,-CF3,-F,或^02111;R"是氫，l-6個碳原子的烷基，2-7個碳原子的烯基，2-7個碳原子的炔基，三苯基甲基，節基，2-7個碳原子的烷氧基甲基，氯乙基，或四氬p比喃基；1112和1113各自獨立地是氫，l-6個碳原子的烷基，2-7個碳原子的烯基，2-7個碳原子的炔基，三氟甲基，或-F;、=0-6。所描述的化合物可以包含一個或多個不對稱中心，並因此可以得到旋光異構體和非對映體。化合物可以包括旋光異構體和非對映體；消旋和拆分的對映體純R和S立體異構體；R和S立體異構體的其它混合物；和其藥學可接受的鹽。本文使用的術語"烷基"指的是直鏈和支鏈飽和脂肪烴基團。在一個實施方案中，烷基具有1至大約8個碳原子(即d、C2、C3、C4、C5、C6、C7或Cg)。在另一個實施方案中，烷基具有1至大約6個碳原子(即d、C2、C3、C4、Cs或C6)。在進一步實施方案中，烷基具有1至大約4個碳原子(即d、C2、C3或Q)。本文使用的術語"烯基"指的是含有一個或多個碳-碳雙鍵的直鏈和支鏈烷基。在一個實施方案中，烯基包含3至大約8個碳原子(即C3、C4、C5、C6、C7或Cs)。在另一個實施方案中，烯基具有l或2個碳-碳雙鍵和3至大約6個碳原子(即C3、C4、Cs或C6)。本文使用的術語"炔基，，指的是含有一個或多個碳-碳三鍵的直鏈和支鏈烷基。在一個實施方案中，炔基具有3至大約8個碳原子(即C3、C4、C5、C6、C7或Cs)。在另一個實施方案中，炔基包含l或2個碳-碳三鍵和3至大約6個碳原子(即C3、C4、C5或C。。本文使用的術語"烷氧基"是指O(烷基)基團，其中連結點是通過氧原子，烷基可以如上所述被取代。在一個實施方案中，雷帕黴素42-酯是與3-羥基-2-(羥甲基)-2-甲基丙酸的雷帕黴素42-酯(CCI-779)[US專利No.5,362,718],和42-0-(2-羥基)乙基雷帕黴素[US專利No.5,665,772]。當根據其立體化學進行圖示時，CCI-779的特點在於下列結構在一個實施方案中，由雷帕黴素42-酯硼酸酯製備雷帕黴素42-酯的本發明方法，提供了至少82%、至少85%或至少89M(針對強度(strength)校正)的收率，具有至少95%或至少98°/。的強度，總雜質小於4%、小於2%或優選總雜質小於1%。如本文所使用的，如下針對強度校正這些收率收率(％)=[實際重量x強度(％)]/[理論重量x100%]。在另一個實施方案中，雷帕黴素42-酯是與3-羥基-2-(羥甲基)-2-甲基丙酸的雷帕黴素42-酯(CCI-779)。在一個實施方案中，總雜質包括小於0.1%的苯基硼酸，優選小於0.05%的苯基硼酸。因為本發明方法是可放大方法，其可以提供超過20kg數量的純化的雷帕黴素42-酯(即，如上所定義的不含總雜質)。然而，沒有因此限制本發明。該方法還用於獲得少達20kg、lkg、200g、8g、5g的數量，或更少的數量。按照本發明，粗品雷帕黴素42-酯是由雷帕黴素42-酯硼酸酯製備的。在一個實施方案中，所使用的雷帕黴素42-酯硼酸酯具有下式其中R是-0-OO.CR7r8r9,其中R獨立地選自氫，l-6個碳原子的烷基，2-7個碳原子的烯基，2-7個碳原子的炔基，-(CR12R13)fOR10,-CF3,-F,或-C02R。；RW是氫，l-6個碳原子的烷基，2-7個碳原子的烯基，2-7個碳原子的炔基，三苯基甲基，卡基，2-7個碳原子的烷氧基甲基，氯乙基，或四氫吡喃基；R8和R9結合在一起形成X;X是2-苯基-二氧雜硼雜環己烷(dioxoborinane);1112和1113各自獨立地是氫，1-6個碳原子的烷基，2-7個碳原子的烯基，2-7個碳原子的炔基，三氟曱基，或-F;f=0-6。本文使用的2-苯基-二氧雜硼雜環己烷(dioxoborinane)可以Y壬選被1、2或3個基團取代，該基團獨立地選自氫，l-6個碳原子的烷基，2-7個碳原子的烯基，2-7個碳原子的炔基，-(CR12R13)fOR1,-CF3,-F，或-C02R1(}。在一個實施方案中，取代基是一、兩個或三個甲基。2-苯基-二氧雜硼雜環己烷(dioxoborinane)的苯基也可以是任選取代的。術語"取代的芳基"是指被一個或多個獨立選自下列的取代基取代的芳基(例如苯基)滷素，CN,OH,N02,氨基，烷基，環烷基，烯基，炔基，烷氧基，d至C3全氟烷基，C!至C3全氟烷氧基，芳氧基，烷基羰基，芳基，雜芳基。優選，取代的芳基(例如苯基)被1至大約4個取代基取代。在一個實施方案中，取代基是囟素。在另一個實施方案中，取代基是低級烷基。在一個實施方案中，2-苯基-二氧雜硼雜環己烷選自2-苯基-4,6,6-三甲基-l,3,2-二氧雜硼雜環己烷，2-苯基-l,3,2-二氧雜硼雜環己烷-5-基，2-苯基-l,3，2-二氧雜硼雜環己烷-4-基，其中苯基是如上所定義任選取代的。在進一步實施方案中，雷帕黴素42-酯硼酸酯是與3-羥基-2-(羥曱基)-2-曱基丙酸的雷帕黴素42-酯(CCI-779)的硼酸酯。可以使用先前描述的方法製備雷帕黴素42-酯硼酸酯，用於本發明方法。例如，製備CCI-779硼酸酯的一種合適方法描述在US專利出版物No.US2005-0033046Al(還有US專利申請No.10/903,062)中,並在反應路線I中舉例說明。反應路線1formulaseeoriginaldocumentpage14使用類似的技術，本領域技術人員可以容易地使用其它31-三曱基甲矽烷醚、42-酯硼酸酯來製備所需要的42-酯硼酸酯。典型地，除去31-三曱基曱矽烷醚基團。而後，可以利用丙酮漿料將得到的42-酯硼酸酯純化，如下針對CCI-779硼酸酯的舉例說明。反應路線2formulaseeoriginaldocumentpage14根據這種信息，本領域技術人員可以容易地製備其它雷帕黴素42-酯硼酸酯。通過雷帕黴素42-酯硼酸酯中間體來製備雷帕黴素42-酯的方法，是可以從製備過程中完全不用色譜分離的路線。雷帕黴素42-酯硼酸酯是由雷帕黴素製備的，具有大約80-85%轉化率；然而，通過丙酮漿料純化之後，分離的收率顯著地降低。在初步試驗中，典型地分離大約1/2的轉化物質。在一個實施方案中，本發明提供了用於製備雷帕黴素42-酯的分離粗品雷帕黴素42-酯硼酸酯的改進方法、和純化雷帕黴素42-酯硼酸酯的改進方法。儘管從母液中分離粗品雷帕黴素42-酯硼酸酯的這種方法特別適用於結合描述在US2005/0033046(2005年2月IO日公開)中的製備方法。簡要地說，這種可放大方法描述了在獲得雷帕黴素42-酯硼酸酯的反應中使用有機溶劑的方法。可以選擇的這種溶劑可以包括乙醚、乙腈、乙酸乙酯、THF、叔丁基甲基醚和二氯曱烷。然而，丙酮常常用於形成濃縮液。然而，在某些實施方案中，可以使用單相含水酸/有機溶劑系統進行水解。因此，將所選擇的有機溶劑(例如丙酮)與稀無機酸例如硫酸、鹽酸或磷酸混合。合適的稀無機酸濃度範圍的實例是從大約0.1N至大約3N、大約0.2N至大約2N或大約0.5N。優選，該步驟在5至6的pH值下進行。任選地，合適緩衝液例如乙酸鈉，或在石灰酸氬鈉和/或醋酸的存在下，加入到混合物中以調節或保持pH值在所需要的範圍。然而，可以使用製備雷帕黴素42-酯的其它方法。分離雷帕黴素42-酯硼酸酯的方法可以從製備其的母液中有效分離粗品雷帕黴素42-酯硼酸酯。這種母液典型地包括雷帕黴素42-酯硼酸酯和汙染物，例如一種或多種溶劑和雷帕黴素，最大的單一汙染物典型地是雷帕黴素。如上所指出，本發明方法特別適合在如上所述丙酮漿料之後使用。然而，在一方面，將反應物用合適溶劑洗滌並與母液混合。任選地，母液可以從第一丙酮漿料處獲得，或從第一和第二丙酮漿料的混合物中獲得，或從第一、笫二和第三丙酮漿料的混合物中獲得。可以進一步任選將母液與洗滌步驟產生的液體混合。典型地，可以用醚進行反應洗滌，例如可以選擇乙醚、三甲醚(例如三丁基甲醚)等等。通過濃縮母液並過濾，可以從母液中分離粗品雷帕黴素42-酯硼酸酯。在一個實施方案中，在過濾之前，將母液濃縮至漿料。典型地，這可以導致更高的收率，但降低了產物質量(例如大約70至80%w/w雷帕黴素42-酯硼酸酯，具有小於或大約15至20。/。w/w汙染雷帕黴素)。與反應路線II的方法的母液相比較，這種漿料可以具有大約15至30%範圍內的乾燥損失。在另一個實施方案中，在過濾之前，將母液濃縮至濃漿料，並用醚(例如乙醚)稀釋。典型地，與使用反應路線II的方法的第一或第二丙酮漿料的母液相比較，得到的濃漿料具有大約30至大約40y。範圍內的乾燥損失(LOD)。與使用不那麼濃縮的漿料相比較，這種方法產生更高質量的產物(例如小於或大約12至15%w/w雷帕黴素)。在又一個實施方案中，將母液濃縮為泡沫(即，水分含量低於由濃縮到濃槳液產生的溼物質)，而後用醚處理。該實施方案提供了高質量產物(例如，小於大約12。/。w/w,優選小於ll。/。w/w,最優選小於10。/。w/雷帕黴素)。在另一個方面，本發明提供了由分離的粗品雷帕黴素42-酯硼酸酯來純化雷帕黴素42-酯硼酸酯的方法。優選，純化降低了分離的粗品雷帕黴素42-酯硼酸酯中的汙染物至少大約10倍。在一個實施方案中，將雷帕黴素42-酯硼酸酯純化，以使其含有小於lwt%雷帕黴素，優選大約0.8wt。/。雷帕黴素或更少。在另一個實施方案中，純化的雷帕黴素42-酯含有大約0.7wt。/。雷帕黴素或更少。在一個實施方案中，純化包含雷帕黴素42-酯硼酸酯、雷帕黴素和其它可能汙染物(例如至少一種溶劑)粗品雷帕黴素42-酯硼酸酯的方法，包括將包含粗品雷帕黴素42-酯硼酸酯和合適溶劑的混合物加熱。典型地以超過雷帕黴素42-酯硼酸酯的數量加入溶劑(按重量計算)。例如，可以以大約二、三或四倍雷帕黴素42-酯硼酸酯重量的數量加入溶劑。典型地，將混合物加熱至回流，並保持至少大約一個(l)小時。溫度和保持時間的長度可以根據許多因素變化，包括例如所選擇的溶劑和所需要的保持時間的長度。在一個實施方案中，所選擇的溶劑是丙酮，加熱溫度大約是55至大約62°C。然而，可以選擇其它的酮作為溶劑，例如甲基乙基酮。其它溶劑還可以包括醚(例如，醚，乙醚，三丁基曱醚(TBME)，三乙基醚，等等)、乙腈或其混合物(例如，1:1至1:2比例的丙酮/醚)。在混合和加熱之後，將混合物冷卻並攪拌至少大約6小時。典型地，將混合物隨著時間的推移而冷卻至室溫。然而，通過合適方法可以更快速地冷卻將混合物濃縮，形成漿料。除去至少大約三分之一至至少大約一半溶劑(例如丙酮)之後，將醚加入到混合物中，典型地以大約所除去溶劑的數量(例如大約1倍至大約1.5至大約2倍雷帕黴素42-酯硼酸酯的重量)。然而，可以加入更大或更少數量的溶劑。可使用常規方法除去溶劑，例如在用或不用加熱的條件下進行真空蒸餾。在一個合乎需要的實施方案中，醚是乙醚。然而，可以容易地從本文所描述和本領域技術人員熟知的那些醚中選擇出其它合適的醚。而後，將得到的漿料過濾，回收純化的雷帕黴素42-酯硼酸酯。第一系列濃縮/漿料，結晶，過濾步驟產生提高純度的雷帕黴素42-酯硼酸酯。然而，重複一兩次分離過程(例如，蒸餾/漿料，結晶和過濾)和/或純化過程(例如回流，濃縮，結晶和過濾)可能是需要的，以便獲得具有所需要純度的產物，例如含有小於大約1%雷帕黴素的產物。在一個實施方案中，將產物過濾至小於大約5%的乾燥損失，優選，小於大約3%,或小於或大約1%，而後重複進行與溶劑混合。任選地，可以用乙酸乙酯洗滌進行第一次純化操作的容器，並對得到的液體進行本文描述的分離和/或純化方法。可以在本文所描述的雷帕黴素42-酯的製備中使用得到的純化的雷帕黴素42-酯硼酸酯。雷帕黴素42-酯的製備在合適溶劑中，使用二醇，將雷帕黴素42-酯硼酸酯轉變為粗品雷帕黴素42-酯，即轉硼化作用。可以對於上文雷帕黴素42-酯硼酸酯式中所包括的所有雷帕黴素42-酯硼酸酯化合物實行本文所描述的轉硼化作用。根據所使用的雷帕黴素42-酯硼酸酯，本領域技術人員可以容易地修飾溶劑混合物中的雷帕黴素42-酯硼酸酯的濃度、二醇與雷帕黴素42-酯硼酸酯的比例、溶劑組成、反應溫度和所需要的反應時間、或本文所描述的其它可變量。在一個實施方案中，在溶劑混合物中，可以以從大約10%至大約30%、大約15%至大約30%、大約20%至大約30%或大約25%至大約30%重量提供雷帕黴素42-酯硼酸酯。在進一步實施方案中，以大約30%重量提供雷帕黴素42-酯硼酸酯。不優選更高濃度的雷帕黴素42-酯硼酸酯，例如40%,這是因為它們可以產生可與反應器壁粘附的粘稠固體的沉澱，從而降低收率。根據溶劑組成、反應溫度和所需要的反應時間，本領域技術人員能夠選擇優選的比例。在反應混合物中，以從大約2:1至大約10:1的二醇與雷帕黴素42-酯硼酸酯的摩爾比提供二醇。在一個實施方案中，二醇與雷帕黴素42-酯硼酸酯的摩爾比至少為5:1。在進一步實施方案中，二醇與雷帕黴素42-酯硼酸酯的摩爾比大約5:1。在其它實施方案中，二醇與雷帕黴素42-酯硼酸酯的摩爾比大約為6:1、大約7:1、大約8:1、大約9:1、大約10:1或其中的任何增量，例如5.1:1或8.5:1。通常，增加二醇數量可以促進反應完成。根據雷帕黴素42-酯硼酸酯在溶劑混合物中的濃度、溶劑組成、反應溫度和所需要的反應時間，本領域技術人員能夠選擇優選的比例。可使用許多1,2-、1,3-、1,4-和1,5-二醇來進行該轉硼化作用。優選烷基取代的二醇，例如2-甲基-2,4-戊二醇。在另一個實施方案中，可以使用二乙醇胺或固體-力口載的聚苯乙烯二乙醇胺(PS-DEAM)。還可以使用歡酸試劑例如草酸、丙二酸、酒石酸、鄰苯二甲酸和水楊酸來實現轉硼化作用。在一個實施方案中，溶劑混合物由醚和庚烷類的混合物組成。在進一步實施方案中，醚是乙醚。然而，沒有因此限制本發明。在一個實施方案中，溶劑混合物包括醚和單獨的庚烷。在其它實施方案中，溶劑混合物包括庚烷類的混合物和醚。在其它實施方案中，可以使用溶劑例如曱苯、叔丁基曱醚(TBME)、乙醚、^20、己烷類、環己烷類、二嘈、烷或包含這些溶劑的混合物來代替庚烷類。當本文指使用庚烷類時，還涵蓋了使用這些溶劑或其混合物。本文使用的術語"庚烷類"包括庚烷和其異構體。該術語還包括庚烷製品，其主要由C7異構體組成，其餘組分主要是Cs異構體，例如EXXSOLH印taneFluid(ExxonMobilChemical)。然而，沒有因此限制本發明。用於本發明的其它庚烷製品(包括可商業購買的製品)對於本領域技術人員是已知的，並且包括在本發明中。本領域技術人員可以根據反應條件選擇庚烷類。進一步的，還可以調節醚與庚烷類的比例。醚與庚烷類的比例可以在大約1:1至大約3:1的範圍，或大約1:1至大約2:1(按重量計算)。儘管醚與庚烷類的增加的比例可以促進反應完成，但增加的比例例如4:1產生粘稠固體的沉澱，並因此不是優選的。在一個實施方案中，醚與庚烷類的比例大約是2:1(按重量計算)。然而，本領域技術人員能夠根據二醇與雷帕黴素42-酯硼酸酯的比例、溶劑混合物中的雷帕黴素42-酯硼酸酯的濃度、溶劑組成、反應溫度和所需要的反應時間來選擇優選的比例。反應可以在從大約2CTC至大約40°C、大約25。C至大約40°C、大約3(TC至大約4(TC或大約35。C至大約40。C下進行，其中升高溫度通常可以促進反應完成。在一個實施方案中，溫度大約為30。C至大約40°C。在進一步實施方案中，溫度大約為34。C至大約35°C。然而，本領域技術人員能夠根據二醇與雷帕黴素42-酯硼酸酯的比例、溶劑混合物中的雷帕黴素42-酯硼酸酯的濃度、溶劑組成和所需要的反應時間來選擇優選溫度。可以利用本領域技術人員已知的常規方法來檢測反應是否完成。在優選的條件下，反應可以在三至四小時內高效地完成。在反應完成之後，將產生的粗品雷帕黴素42-酯冷卻至大約20至25。C,並攪拌，以免形成粘稠的或膠狀的固體。在一個實施方案中，將反應混合物攪拌大約18小時。在另一個實施方案中，將反應混合物攪拌大約38小時。在降低的溫度下攪拌反應混合物之後，通過加入非極性的碳基溶劑或其混合物來沉澱粗品雷帕黴素42-酯。在一個實施方案中，非極性的碳基溶劑可以是己烷、戊烷和庚烷和其混合物。在進一步實施方案中，非極性的碳基溶劑是庚烷。在一個實施方案中，非極性的碳基溶劑與醚的比例大約是3:1(按重量計算)。在一個實施方案中，將得到的沉澱粗品雷帕黴素42-酯過濾並用庚烷類洗滌。雷帕黴素42-酯的純化沉澱之後，利用多步方法，包括重結晶和雜質例如苯基硼酸與二醇的反應，將粗品雷帕黴素42-酯純化。這些步驟的順序不是對於本發明的限制。換句話說，在一個實施方案中，首先用二醇處理粗品雷帕黴素42-酯，並將固體雷帕黴素42-酯重結晶。在另一個實施方案中，首先將粗品雷帕黴素42-酯重結晶，而後用二醇處理雷帕黴素42-酯的漿料。可以對於上文雷帕黴素42-酯式中所包括的所有雷帕黴素42-酯化合物實行本文所描述的提純方法。根據所使用的雷帕黴素42-酯硼酸酉旨，本領域技術人員可以容易地修飾溶劑中的雷帕黴素42-酯的濃度、二醇與粗品雷帕黴素42-酯的比例、溶劑組成、反應溫度和所需要的反應時間、或本文所描述的其它可變量。在由雷帕黴素42-酯硼酸酯進行大規模製備的粗品雷帕黴素42-酯中，例如，超過2kg，殘餘苯基硼酸的量在大約1.8至2.9%之間。先前所描述的重結晶純化方法僅僅降低了大約一半的這個數量。優選，本發明的純化方法可以將苯基硼酸的總量降低至小於0.1%，在一些實施方案中，小於0.05%。利用二醇/重結晶純化粗品雷帕黴素42-酯在這個實施方案中，如果利用二醇處理的純化在重結晶之前進行，首先乾燥轉硼化作用產生的粗品雷帕黴素42-酯漿料的剩餘溶劑。在溶劑中用二醇處理粗品雷帕黴素42-酯。在一個實施方案中，溶劑是醚。在進一步實施方案中，溶劑是乙醚。在一個實施方案中，二醇是2-甲基-2,4-戊二醇。二醇與雷帕黴素42-酯的摩爾比可以在大約2:1至大約10:1的範圍。在一個實施方案中，雷帕黴素42-酯與二醇的摩爾比大約為5:1。在大約20至25。C下進行反應。更高的溫度，例如，34°C，不是優選的，因為它們可以引起粘稠固體的形成。可以利用本領域技術人員已知的常規方法來檢測反應完成，例如苯基硼酸的消失。在優選的條件下，反應可以在大約五小時內高效地完成。在進一步實施方案中，可以重複反應，以便進一步降低苯基硼酸含量。反應完成之後，將部分純化的雷帕黴素42-酯乾燥，以得到固體雷帕黴素42-酯。將部分純化的固體雷帕黴素42-酯溶於極性溶劑中。在一個實施方案中，溶劑是丙酮。在另一個實施方案中，溶劑是乙酸乙酯。然而，本領域技術人員可以選擇其它極性溶劑，以及溶劑與粗品雷帕黴素42-酯的合適比例。在一個實施方案中，溶劑與粗品雷帕黴素42-酯的比例是從大約5:1至大約8:1(按重量計算)。在一個實施方案中，溶劑是丙酮，丙酮與粗品雷帕黴素42-酯的比例大約為5:1(按重量計算)。溶解雷帕黴素42-酯之後，將不溶性雜質濾出，並將濾液濃縮，形成泡沫。然後將泡沫溶於醚中，經過一段時間以後，純化的雷帕黴素42-酯結晶出來。在一個實施方案中，該醚是乙醚。然而，可以使用其它醚，以便沉澱雷帕黴素42-酯。在一個實施方案中，雷帕黴素42-酯與醚的比例是從大約1:4至大約1:3。在進一步實施方案中，醚中的雷帕黴素42-酯是大約29%至大約37%,或大約29%至大約30%,按重量計算。在醚重結晶之後，可以用庚烷類進一步處理得到的雷帕黴素42-酯的醚漿料。在一個實施方案中，庚烷類與醚的比例大約是3:1,按重量計算。在另一個實施方案中，庚烷處理和通過過濾分離純化的雷帕黴素42-酯之後，用醚和庚烷類的溶液洗滌雷帕黴素42-酯，而後乾燥。在進一步實施方案中，在洗液中的醚與庚烷類的比例是1:2(按體積)。在洗滌之後，將得到的產物乾燥，得到純化的雷帕黴素42-酯。利用重結晶/二醇反應純化粗品雷帕黴素42-酯在另一個實施方案中，首先將由轉硼化作用產生的粗品雷帕黴素42-酯進行重結晶。典型地，將粗品雷帕黴素42-酯過濾並抽濾乾燥。然後將粗品雷帕黴素42-酯溶於極性溶劑中，例如丙酮或乙酸乙酯，過濾出任何不溶性雜質，將濾液乾燥成泡沫，並將得到的泡沫溶於極性溶劑例如醚中。經過一段時間以後出現的沉澱包括重結晶的部分純化的雷帕黴素42-酯。將溶劑中的二醇溶液與部分純化的雷帕黴素42-酯混合，形成漿料。在一個實施方案中，溶劑是醚。在進一步實施方案中，溶劑是乙醚。在一個實施方案中，溶劑中部分純化的雷帕黴素42-酯大約為10%至大約30%(按重量計算)，或在溶劑中大約20%至大約30%重量。在進一步實施方案中，溶劑中部分純化的雷帕黴素42-酯大約為30%重量。在一個實施方案中，二醇是2-曱基-2,4-戊二醇。二醇與雷帕黴素42-酯的摩爾比可以在大約2:1至大約10:1的範圍。在一個實施方案中，雷帕黴素42-酯與二醇的摩爾比大約為5:1。在大約20至大約25。C下進行反應。更高的溫度，例如，34°C,不是優選的，因為它們可以引起粘稠固體的形成。可以利用本領域技術人員已知的常規方法來檢測反應完成，例如苯基硼酸的消失。在優選的條件下，反應可以在大約五小時內高效地完成。在進一步實施方案中，可以重複反應，以便進一步降低苯基硼酸含量。在反應完成之後，將庚烷類加入到混合物中，並利用過濾來分離得到的懸浮液，千燥，得到結晶純化的雷帕黴素42-酯。在一個實施方案中，可以按照ProcessforthePreparationofPurifiedCrystallineCCI-779(Deshmukh,等人，US專利申請No.60/748,006,2005年12月7日提交，與美國專利商標局的優先權申請和其相應的US和國際申請的日期相同)進一步純化按照本發明製備的CCI-779,將其說明書和權利要求引入本文中作為參考。可以按照MethodfortheMeasurementofCrystallinityofCCI-779UsingDifferentialScanningCalorimetry(Deshmukh,等人，US專利申請No.60/748,005，2005年12月7日提交，與優先權申請和其相應的US和國際申請的日期相同)來測定按照本發明製備的CCI-779的結晶度，將其說明書和權利要求引入本文中作為參考。下列實施例僅僅是說明性的，不是用來限制實施例1-6舉例說明了由可放大方法的母液中分離粗品CCI-779硼酸酯的方法，例如在下面反應路線中所舉例i兌明的方法。實施例1:/人母液中回收粗品CCI-779硼酸酯首先使用首批部分回收物質(源於不同工藝的反應路線1和2所舉例說明的製備方法)，評價從母液中分離粗品CCI-779硼酸酯，如表1所概括的。表1tableseeoriginaldocumentpage23*回收率=[(回收的CCI-779硼酸酯/回收的CCI-779硼酸酯+餘量物質>100%]士5%如項目I所示，可以過濾漿料(從源於第二和第三丙酮漿料的母液混合物處獲得)來分離粗品CCI-779硼酸酯，而後過濾。這些母液主要由溶劑、CCI-779硼酸酯和雷帕黴素組成。回收率在95±5%範圍之內。分離的CCI-779硼酸酯包括大約8%雷帕黴素。由於得自於第一丙酮漿料的母液含有多得多的雜質，所以試驗三種不同的方法。項目II表示濃縮母液至濃漿料、而後過濾的結果。回收率在75±5%範圍之內，但過濾非常緩慢。獲得含有大約18%雷帕黴素的粗品CCI-779硼酸酯。第二方法(項目III)包括首先將母液濃縮為泡沫，用乙醚處理，得到漿料，而後過濾。過濾分離粗品CCI-779硼酸酯，55±5%收率，雷帕黴素含量13%。在項目IV中，代之以將母液濃縮為濃漿料。用乙醚稀釋之後，將粗品CCI-779硼酸酯過濾。回收率在35±5%範圍之內，雷帕黴素含量11%。實施例2:乂人母液中回收的粗品CCI-硼酸酯的純化表2概括了對於從母液中回收的粗品CCI-779硼酸酯的純化研究結果。在按照反應路線1的製備方法的2次丙酮漿料之後，雷帕黴素含量從8.0降至0.93%。對於試驗方法l,將母液在指定溫度下加熱1小時，在室溫下攪拌至少6小時，然後過濾。對於試驗方法2A,將母液在指定溫度下加熱1小時，用1小時冷卻至室溫，然後在室溫下攪拌至少6小時。將這種過程重複2次以上，然後將得到的漿料過濾。對於試驗方法2B,將用指定溶劑處理的母液在指定溫度下加熱1小時，用1小時冷卻至室溫，然後在室溫下攪拌30分鐘。將這種過程重複2次以上，並將得到的漿料過濾。對於試驗方法3，將含有指定溶劑的母液在指定溫度下加熱6小時，在室溫下攪拌至少6小時，然後過濾。對於試驗方法4，將含有指定溶劑的母液在室溫下攪拌24小時，過濾。表2tableseeoriginaldocumentpage24tableseeoriginaldocumentpage25通過增加回流和/或混合時間，雷帕黴素含量沒有顯著地降低。其它溶劑還可以用於純化粗品CCI-779硼酸酯，但沒有丙酮有效。醚可以幫助從粗品CCI-779硼酸酯中除去一些其它雜質，但不是除去雷帕黴素的有效溶劑。丙酮/醚的混合物可以降低雷帕黴素含量及其它雜質，具有合理的回收率。利用2或3個漿料，可以將在粗品CCI-779硼酸酯中的接近於8%的雷帕黴素含量減少到0.80/o或更少(規格(spedfication)-0.80/0)。實施例3:從母液中分離粗品CCI-779硼酸酯濃縮並收集母液。然後用乙酸乙酯洗滌反應器。除去溶劑之後，將從乙酸乙酯衝洗液獲得的物質與濃縮母液混合。將合併的混合物進一步濃縮至濃漿料(對於分別得自於第一、第二丙酮漿一+母液的物質，LOD=32%,48%),而後用醚處理。然後過濾分離粗品CCI-779硼酸酯。表3tableseeoriginaldocumentpage25實施例4:將得自於母液中的粗品CCI-779硼酸酯進行純化在批料生產純化期間，使用由第一和第二丙酮漿料產生的全部母液量設計和檢^r回收CCI-779硼酸酯的方法。通過將母液濃縮至濃漿料、而後用乙醚處理來進行粗品CCI779的分離，如表4所概括。將超過2Kg的粗品CCI-779硼酸酯(雷帕黴素含量8.6%)從第一丙酮漿料(項目I)期間生成的母液中分離。從第二丙酮漿料的母液中獲得大約900克粗品CCI-779硼酸酯，雷帕黴素含量低得多(3.5%,項目11)。使用改進的製備方法來純化粗品CCI-779硼酸酯，在該方法中，首先將粗品CCI-779硼酸酯的丙酮漿料按照與製備方法相似的方法進行回流加熱。冷卻至室溫後，將一半數量的用於漿料中的丙酮替換為乙醚。在室溫下攪拌得到的漿料一段時間，過濾。如下列表所示，在兩個這種漿料(項目I)之後，由第一漿料的母液得到的粗品CCI779硼酸酯，得到純化的CCI-779硼酸酯，收率59%,雷帕黴素含量0.8%(在規格之內)。得自於第二漿料的母液的粗品CCI-779硼酸酯的回收率更高(70%,雷帕黴素％=0.7,項目II)。可以回收總共接近2千克純化的CCI-779硼酸酯[2243/1239x722克(得自於第一漿料的ML)+622克(得自於第二漿料的ML)=1929克]。表4tableseeoriginaldocumentpage261.純化方法I.將粗品CCI-779硼酸酯的丙酮漿料回流攪拌1小時，然後冷卻至室溫。真空除去大約一半數量的丙酮。將相同數量的乙醚加入到稀漿料中。進一步攪拌至少6小時之後，過濾收集純化的CCI-779硼酸酯。II.重複I。2.HPLC面積％。3.兩次純化的總收率。實施例5:回收的CCI-779硼酸酯轉化為CCI-779使用本文所描述的方法，將回收的CCI-779硼酸酯(得自於笫一漿料的母液)進一步轉變為CCI-779。如表5所示，分離的CCI-779的收率和質量可與使用其它渠道的CCI-779硼酸酯時的收率和質量相當。"總Im."是指總雜質。"LSI"是指最大量的單一雜質。表5tableseeoriginaldocumentpage27實施例6:將得自於母液的CCI-779硼酸酯進行分離和純化使用得自於CCI-779硼酸酯製備方法的第一丙酮漿料的濃縮母液(8.0千克)和乙酸乙酯衝洗液(5.5千克)。從乙酸乙酯衝洗液中真空除去溶劑，得到537克濃縮液。使用750毫升丙酮，將濃縮液轉入12-L多頸圓底燒瓶中，圓底燒瓶配備有機械攪拌器、溫度計和蒸餾器。然後將大約一半濃縮母液加入到燒瓶中。在20-25。C的溫度下將其真空蒸餾(28"Hg),直到獲得濃漿料為止。加入餘下的濃縮母液，然後再次蒸餾至濃漿料(大約5L)。向由此獲得的混合物中加入4.0千克乙醚。將得到的黃色漿料在20-25。C攪拌4小時，而後過濾，得到2243克粗品CCI-779硼酸酯，具有3.84%的LOD(75。C/30"Hg，2小時)和8.6%的雷帕黴素含量(HPLC面積％)。在配備有機械攪拌器、溫度計和蒸餾裝置的12L多頸圓底燒瓶中，裝入1239克粗品CCI-779硼酸酯和1859克丙酮。將體積做出標記，然後加入另外的1859克丙酮。將混合物回流加熱(56-59。C),並保持1小時。用2-3小時將漿料冷卻至20-25°C，然後在20-25。C的釜溫度下、真空(27"Hg)蒸鎦至標記的體積處。加入1872克乙醚，在20-25。C攪拌至少6小時，然後過濾，得到865克粗品CCI-779硼酸酯，具有2.1%的雷帕黴素含量。在配備有機械攪拌器、溫度計和蒸餾裝置的另一個12L多頸圓底燒並瓦中，裝入全部數量的粗品CCI-779硼酸酯和1275克丙酮。標記體積之後，加入另外的1275克丙酮。在56-59。C攪拌加熱混合物1小時，用2-3小時冷卻至20-25。C，然後在20-25。C的釜溫度下真空(27"Hg)蒸餾至標記體積處。加入1275克乙醚，攪拌至少6小時，然後過濾。在40。C真空028"Hg)乾燥5小時之後，獲得727克純化的CCI-779硼酸酯(LOD^.86),具有0.8%(HPLC面積％)的雷帕黴素含量。凡-驗5將得自於製備批料的第一丙酮漿料的母液(221.3千克)在-5至25°C的釜溫度下真空蒸餾(42-46torr),直到獲得濃漿料為止(大約25L)。向由此獲得的混合物中加入22.1千克乙醚。將得到的黃色漿料在19-25°C攪拌4小時，而後過濾，得到10.1千克粗品CCI-779硼酸酯。將溼濾餅與母液(107.4千克)(得自於製備批料的第二丙酮漿料)混合，並在-1至-9。C的釜溫度下真空蒸餾(22-45torr)，直到獲得濃漿料為止。向由此獲得的混合物中加入32.9千克乙醚。將得到的黃色漿料在19-25。C攪拌4小時，而後過濾。使用醚(每次洗液20千克)洗滌兩次之後，得到10.0千克CCI-779硼酸酯，具有0.82%的LOD(40。C/30，，Hg,2小時)。將粗品CCI-779硼酸酯(300克)和丙酮(900克)加入到燒瓶中。將混合物回流加熱(55至61°C),並保持1小時。用2-3小時將混合物冷卻至20-25°C,然後在不超過10-18。C的釜溫度下、真空(23-26"Hg)蒸餾除去丙酮(最終體積940-960毫升)。加入乙醚(450克)，在18-25。C攪拌18小時，而後過濾，得到粗品CCI-779硼酸酯(225克，LOD=0.95%)。將過濾的粗品CCI-779硼酸酯(224克)和丙酮(676克)加入到燒瓶中。將混合物回流加熱(55至61°C),並保持1小時。用2-3小時將混合物冷卻至19-25°C,然後在18-20。C的釜溫度下、真空(18-20"Hg)蒸餾除去丙酮(最終體積620毫升)。加入乙醚(338克)，在18-25。C攪拌18小時，而後過濾。使用醚(每次250毫升)洗滌3次之後，得到CCI-779硼酸酯，63%收率(LOD-0.57。/。，強度=85.9%,總雜質=1.8%,LSI=0.50,雷帕黴素=0.95%)。實施例7-9舉例說明了由CCI-779硼酸酯製備純化的CCI-779的本發明方法的一個實施方案，例如反應路線III所舉例說明的方法。反應路線in過濾丙酮/醚重結晶2-甲基-2，4-戊二醇庚烷類CCI-779CseH87NOwMW1030.31^^^7-^^CC/-779的賴務A^2^CC/-779W斜務在配備有機械攪拌器、溫度計、500毫升壓力平衡加料漏鬥和回流冷凝器(帶有氮氣頭)的3L多口圓底燒瓶中，加入199克(0.178摩爾)CCI-779硼酸酯、105克2-曱基-2,4-戊二醇(0.891摩爾)的371克乙醚和185克庚烷類溶液。在氮氣氛圍中，伴隨著攪拌，將混合物加熱至33-37°C,保持12小時。HPLC顯示消耗的起始CCI-779硼酸酯(<3%)和苯基硼酸(在反應混合物中)低於小於3.0%或小於1.5%的規格。用20分鐘將反應混合物冷卻至20-25°C,用1小時通過加料漏鬥加入928克庚烷類，然後在20-25。C攪拌1小時。將得到的混合物在布氏漏鬥上過濾。將過濾的固體用兩份500毫升庚烷類洗滌。再次抽濾乾燥，直到基本上收集不到濾液為止，分離出174克粗品0:1-779[強度=93.8%,總雜質=1.36%,雷帕黴素-0.40。/。(HPLC);醚=0.15%，庚烷類=0.26%(GC)]。B.粗品CCI-779的純化將獲得的粗品CCI-779轉入2L燒瓶中，然後加入1L丙酮，獲得渾濁溶液。將溶液通過帶有細玻璃粉(4-5.5微米)的玻璃布氏漏鬥進行澄清。然後將清濾液加入到配備有機械攪拌器、溫度計和真空蒸餾裝置的5L多頸燒瓶中。用400毫升丙酮洗滌2L燒瓶和布氏漏鬥。將丙酮洗滌液加入到5L燒瓶中。在20-30。C減壓除去丙酮之後，在20-25。C將獲得的泡沫溶於420克乙醚中，形成澄清溶液。20分鐘之後，固體開始沉澱。將已經通過0.45微米針筒式濾器過濾的105.3克2-甲基-2，4-戊二醇的52克乙醚溶液加入到5L燒瓶中。將混合物在20-25。C攪拌1小時。HPLC分析表明，苯基硼酸的量小於0.05%。然後通過加料漏鬥、用2小時向反應混合物中加入1,272克庚烷類。在20-25。C攪拌1小時之後，將混合物在布氏漏鬥上過濾。將收集的固體用3份500毫升醚/庚烷類(1/2,v/v)洗滌，保持抽濾，直到液滴停止為止。將溼濾餅在50。C、在真空烘箱中真空乾燥21小時，得到156克(89%,強度校正)純化的CCI-7"(CZ-7781-24-2)白色晶體[強度=98.4%,總雜質=0.98%,雷帕黴素=0.36%,PhB(OH)2<0.05%(HPLC);醚=0.21%,庚烷類=0.037%,2畫甲基-2,4-戊二醇=0.096%,2-曱基-2,4-戊二醇硼酸酯=沒有檢測到(GC)]。方法編號tableseeoriginaldocumentpage30tableseeoriginaldocumentpage31實施例8-純化CCI-779的製備進行了一些早期的中試(pilot)研究，基本上使用實施例1所描述的方法，但改變了CCI-779硼酸酯的濃度、利用不同路線製備的CCI-779和不同的反應時間。在前述的表中，方法編號1是指27%(wt%)CCI-779硼酸酯在2/1(wt/wt)醚/庚烷類中，在34-5。C，6-12小時，然後加入庚烷類，過濾。利用丙酮/醚結晶進行純化，而後用2-曱基-2,4-戊二醇處理。方法編號2是指17Q/。(wtQ/。)CCI-779硼酸酯，在2/1(wt/wt)醚/庚烷類中，在34-5",15-24小時，然後加入庚烷類，過濾。利用丙酮/醚結晶進行純化，而後用2-曱基-2，4-戊二醇處理。基本上如上所述，在醚和庚烷類(2:1，Wt/Wt)的混合物中，在34°C,使用5叫.的2-曱基-2,4-戊二醇，經過6小時，由CCI-779硼酸酯製備粗品CCI-779。過濾分離粗品CCI-779。將粗品CCI-779懸浮在醚中，然後用5eq.的2-曱基-2,4-戊二醇處理，而後加入庚烷類，過濾，千燥。然後將乾燥的、部分純化的CCI-779溶於丙酮中，澄清，除去丙酮。在這之後，加入醚，使產物結晶，將庚烷類加入到醚漿料中，過濾漿料，乾燥。得到的收率是73%的CCI-779,具有93.5%的強度,小於4%(即3.59%)的總雜質，和顯著的0.007的PhB(OH)2。引入本文確定的所有文獻作為參考。本領域技術人員將會認識到，在不背離本發明的條件下，可以對於本文所描述具體實施方案中的條件和技術進行較小改進。這種較小的改進和變化在本文所描述的本發明範圍之內，正如下列權利要求所定義的那樣。權利要求1.製備雷帕黴素42-酯的方法，包括下列步驟(a)將雷帕黴素42-酯硼酸酯在溶劑混合物中與二醇反應，提供粗品雷帕黴素42-酯；和(b)通過重結晶並用二醇處理來純化粗品雷帕黴素42-酯。2.按照權利要求1的方法，其中步驟(b)包括在溶劑中用二醇處理粗品雷帕黴素42-酯，形成固體雷帕黴素42-酯，而後將固體重結晶，形成純化的雷帕黴素42-酯。3.按照權利要求l的方法，其中步驟(b)包括將粗品雷帕黴素42-酯重結晶，形成漿料，而後用二醇處理，形成純化的雷帕黴素42-酯。4.按照權利要求1至3的任一項的方法，其中步驟(a)中的雷帕黴素42-酯硼酸酯在所述溶劑混合物中是從大約10%至大約30%重量。5.按照權利要求4的方法，其中步驟(a)中的雷帕黴素42-酯硼酸酯在所述溶劑混合物中是大約30%重量。6.按照權利要求1至5的任一項的方法，其中在步驟(a)中的二醇與雷帕黴素42-酯硼酸酯的摩爾比是從大約5:1至大約10:1。7.按照權利要求6的方法，其中步驟(a)中的二醇與雷帕黴素42-酯硼酸酯的摩爾比是大約5:1。8.按照權利要求1至7的任一項的方法，其中步驟(a)中的二醇是2-曱基-2,4-戊二醇。9.按照權利要求1至8的任一項的方法，其中步驟(a)中的溶劑混合物包括乙醚和庚烷。10.按照權利要求1至8的任一項的方法，其中步驟(a)中的溶劑混合物包括庚烷類的混合物和乙醚。11.按照權利要求10的方法，其中乙醚與庚烷類的比例是從大約1:1至大約2:1重量。12.按照權利要求1至11的任一項的方法，其中步驟(a)中的反應是在大約30至4(TC下進行的。13.按照權利要求12的方法，其中將(a)的粗品雷帕黴素42-酯冷卻至大約20至25。C。14.按照權利要求1至13的任一項的方法，其中通過加入一種或多種非極性的碳基溶劑，將(a)的粗品雷帕黴素42-酯沉澱。15.按照權利要求14的方法，其中一種或多種非極性的碳基溶劑選自己烷、戊烷和庚烷。16.按照權利要求14或15的方法，其中溶劑是庚烷類的混合物。17.按照權利要求16的方法，其中步驟(a)的庚烷(類)與溶劑混合物的比例是大約3:1重量。18.按照權利要求1至17的任一項的方法，其中步驟(b)中的重結晶包括下列步驟(I)將粗品雷帕黴素42-酯在極性溶劑中溶解；和(II)將得到的懸浮液過濾，並濃縮粗品雷帕黴素42-酯濾液，得到泡沫。19.按照權利要求18的方法，其中極性溶劑是丙酮。20.按照權利要求18的方法，其中極性溶劑是乙酸乙酯。21.按照權利要求19的方法，其中丙酮與粗品雷帕黴素42-酯的比例是大約5:1。22.按照權利要求18至21的任一項的方法，進一步包括將步驟(II)的泡沫在醚中溶解。23.按照權利要求22的方法，其中醚是乙醚。24.按照權利要求22或23的方法，其中雷帕黴素42-酯與醚的比例是從大約1:4至大約1:3。25.按照權利要求22至24的任一項的方法，進一步包括加入庚烷類。26.按照權利要求25的方法，其中庚烷類與醚的比例是3:1重量。27.按照權利要求25或26的方法，進一步包括將形成的懸浮液過濾，用醚和一種或多種庚烷類洗滌沉澱的粗品雷帕黴素42-酯。28.按照權利要求27的方法，其中醚與庚烷類的比例是l:2體積。29.按照權利要求27或28的方法，進一步包括將分離的雷帕黴素42-酯乾燥。30.按照權利要求1至29的任一項的方法，其中步驟(b)中的用二醇處理包括下列步驟(I)將粗品雷帕黴素42-酯在溶劑中混合；和(n)將粗品雷帕黴素42-酯與二醇反應。31.按照權利要求30的方法，其中步驟(I)中的溶劑是乙醚。32.按照權利要求30或31的方法，其中步驟(I)中的雷帕黴素42-酯在溶劑中是大約30%重量。33.按照權利要求30至32的任一項的方法，其中步驟(II)中的二醇是2-曱基-2，4-戊二醇。34.按照權利要求30至33的任一項的方法，其中在步驟(II)中的二醇與雷帕黴素42-酯的摩爾比是大約5:1。35.按照權利要求30至34的任一項的方法，其中步驟(II)中的反應是在20至25。C下進行的。36.按照權利要求30至35的任一項的方法，其中首先將步驟(a)的粗品雷帕黴素42-酯進行殘餘溶劑的乾燥。37.按照權利要求1至36的任一項的方法，其中雷帕黴素42-酯硼酸酯具有下式其中R是-0-OO.CR7r8r9,其中W是氫，l-6個碳原子的烷基，2-7個碳原子的烯基，2-7個碳原子的炔基，-(CR^R^fOR^-CF^-F,或-(2021110;R"是氫，l-6個碳原子的烷基，2-7個碳原子的烯基，2-7個碳原子的炔基，三苯基甲基，千基，2-7個碳原子的烷氧基曱基，氯乙基，或四氬p比喃基；R8和R9結合在一起形成X;X是2-苯基-二氧雜硼雜環己烷或2-(取代的)苯基-(取代的)二氧雜硼雜環己烷；R"和R"各自獨立地是氫，1-6個碳原子的烷基，2-7個碳原子的烯基，2-7個碳原子的炔基，三氟曱基，或-F;f=0-6。38.按照權利要求37的方法，其中2-苯基-二氧雜硼雜環己烷選自2-苯基-4,6,6-三甲基-l,3,2-二氧雜硼雜環己烷，2-苯基-l,3,2-二氧雜硼雜環己烷-5-基，2-苯基-l,3,2-二氧雜硼雜環己烷-4-基，其中苯基可以是任選^皮取代的。39.按照權利要求37的方法，其中雷帕黴素42-酯硼酸酯是CCI-779硼酸酯。40.按照權利要求1至39的任一項的方法製備的純化雷帕黴素42-酯。41.按照權利要求39的方法製備的、純化的與3-羥基-2-(羥甲基)-2-甲基丙酸的雷帕黴素42-酯(CCI-779)。42.具有至少96%純度的純化的與3-羥基-2-(羥曱基)-2-甲基丙酸的雷帕黴素42-酯(CCI-779)。43.按照權利要求42的純化的化合物，其中所述化合物含有小於1%的任何單一雜質。44.按照權利要求42或43的純化的化合物，其中所述化合物含有小於0.05%的苯基硼酸。45.從包含雷帕黴素42-酯硼酸酯、雷帕黴素和一種或多種溶劑的母液中分離粗品雷帕黴素42-酯硼酸酯的方法，包括將母液濃縮為漿料；將得到的濃縮母液過濾，分離粗品雷帕黴素42-酯硼酸酯。46.按照權利要求45的方法，其中一種或多種溶劑選自丙酮、乙酸乙酯和水的一種或多種。47.按照權利要求45的方法，進一步包括下列步驟將包含丙酮的母液濃縮為泡沫，並用乙醚處理泡沫，而後過濾。48.按照權利要求45的方法，進一步包括下列步驟將第二漿料用包括丙酮的溶劑處理，濃縮混合物，形成第三漿料，而後過濾。49.按照權利要求45的方法，其中將母液濃縮為漿料，並且進一步包括將漿料用乙醚稀釋的步驟，而後過濾。50.純化粗品雷帕黴素42-酯硼酸酯的方法，該粗品雷帕黴素42-酯硼酸酯包含雷帕黴素42-酯硼酸酯、雷帕黴素和至少一種溶劑，所述方法包括(a)將包含粗品雷帕黴素42-酯硼酸酯和溶劑的混合物加熱至少大約1小時；(b)在冷卻之後，將(a)的混合物攪拌至少大約6小時；(c)將雷帕黴素42-酯硼酸酯混合物濃縮，形成濃縮漿料；(d)用合適醚處理濃縮的漿料；(e)將雷帕黴素42-酯硼酸酯純化；(f)任選重複步驟(a)-(e)。51.按照權利要求50的方法，其中將(a)的混合物冷卻至室溫。52.按照權利要求50的方法，其中將步驟(a)-(e)至少重複一次。53.按照權利要求50的方法，其中將步驟(a)-(e)總共進行三次。54.按照權利要求53的方法，其中重複步驟(a)-(e)之後，回收的雷帕黴素42-酯硼酸酯含有小於1%重量的雷帕黴素。55.按照權利要求50的方法，其中濃縮的漿料(c)通過除去至少大約一半溶劑而形成。56.按照權利要求50的方法，進一步包括通過用合適醚洗滌來純化步驟(e)中所分離的雷帕黴素42-酯硼酸酯的步驟。57.按照權利要求50的方法，其中步驟(a)中的溶劑選自丙酮、甲醇、乙腈、甲基乙基酮、TBME和醚和其混合物。58.按照權利要求50的方法，其中步驟(a)中的溶劑是丙酮。59.按照權利要求50的方法，其中加熱步驟是在大約55至大約6(TC的溫度範圍進行的。60.按照權利要求50的方法，其中合適的醚是乙醚。61.按照權利要求50的方法，其中通過將合適醚處理之後所形成的結晶產物過濾來回收雷帕黴素42-酯硼酸酯。62.按照權利要求50的方法，其中雷帕黴素42-酯硼酸酯具有下式formulaseeoriginaldocumentpage6其中R是-0-CK).CR7r8r9,其中R、蟲立地選自氫，l-6個碳原子的烷基，2-7個碳原子的烯基，2-7個碳原子的炔基，-(CR12R13)fOR10,-CF3,-F,或C02R";R"是氫，l-6個碳原子的烷基，2-7個碳原子的烯基，2-7個碳原子的炔基，三苯基曱基，苄基，2-7個碳原子的烷氧基曱基，氯乙基，或四氫p比喃基；R8和R9結合在一起形成X;X是2-苯基-二氧雜硼雜環己烷；1112和R"各自獨立地是氫，l-6個碳原子的烷基，2-7個碳原子的烯基，2-7個碳原子的炔基，三氟曱基，或-F;和f=0-6。63.從包含CCI-779和至少一種溶劑的母液中純化與3-羥基-2-(羥甲基)-2-曱基丙酸的雷帕黴素42-酯(CCI-779)硼酸酯的方法，所述方法包括(a)加熱回流包括從母液獲得的粗品CCI-779和包括丙酮的溶劑的混合物；(b)將(a)的混合物冷卻至室溫；(c)將冷卻的混合物攪拌至少大約6小時；(d)除去至少大約一半溶劑，形成濃縮的CCI-779硼酸酯漿料；(e)用乙醚處理濃縮的漿料；(f)回收CCI-779硼酸酯；(g)重複步驟(a)-(f)至少一次。64.按照權利要求63的方法，其中真空除去溶劑。65.按照權利要求63的方法，其中通過過濾收集分離的CCI-779硼酸酯。66.按照權利要求63的方法製備的CCI-779硼酸酯，具有小於1%w/w的雷帕黴素含量。67.按照權利要求66的CCI-779硼酸酯，其中雷帕黴素含量是0.8%w/w。68.按照權利要求66的CCI-779硼酸酯，其中雷帕黴素含量是0.7%w/w。全文摘要本文提供了製備雷帕黴素42-酯的可放大方法，該方法通過雷帕黴素42-酯硼酸酯與二醇反應，利用重結晶來純化粗品雷帕黴素42-酯，並用二醇處理。也提供了從包含丙酮和雷帕黴素汙染物的母液中分離和純化雷帕黴素42-酯硼酸酯的方法。文檔編號C07D498/18GK101321770SQ200680045719公開日2008年12月10日申請日期2006年12月6日優先權日2005年12月7日發明者A·P·米紹,A·皮爾歇爾,A·薩利,C·W·庫格林,C·張,J·S·法裡納申請人:惠氏公司