一種白花前胡總香豆素提取物中藥片及其製備方法及應用的製作方法
2023-05-19 01:17:56
專利名稱：一種白花前胡總香豆素提取物中藥片及其製備方法及應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥提取物片、其製備方法及其應用，具體為一種白花前胡總香豆素提取物中藥片及其製備方法、以及其在製備治療高血壓藥物中的應用。
背景技術：
高血壓病是當今世界發病率最高的慢性病，也是死亡率和致殘率最高的疾病之一。在中國，每一小時就有120人死於高血壓引起的各種心腦血管疾病，每一小時就有600人因高血壓而致殘。它嚴重危害人體健康，影響生活質量，臨床表現為頭痛，頭暈，頭脹，頸部扳住感，耳鳴、眼花、健忘、失眠，煩悶，乏力，四肢麻木，心悸等。它也是造成肢體偏癱、心力衰竭、腦梗塞、腦出血、腎衰竭的重要原因，臨床上因高血壓病發生致殘致死的病例屢見不鮮，故學者稱之謂「隱形殺手」，是全世界醫學界一重大難題。各國都在參與高血壓的研究與探索，也研製了不少治療高血壓的藥品，它們都有較好的近期療效，但治療上有針對性、局限性、片面性、有時需要同時使用幾種藥品、也只能起到控制血壓的作用，容易發生停藥反彈，更為嚴重的是毒副作用大。目前臨床上經常使用的西藥長期服用毒副作用較大，療效較差，且價格比較昂貴。例如利血平、降壓靈可引起鼻塞、四肢無力、精神疲倦、嗤睡、陽痿、腹瀉、大量長期服用會出現精神憂鬱症、震顫麻痺，還可誘發胃及十二指腸潰瘍出血；受體阻斷劑，如心得安，可誘發和患支氣管痙攣、降低肌肉收縮力和病人的運動耐力，同時增加血中的甘油三脂，加速動脈硬化；腎上腺受體阻滯劑如派唑嗪可使患者出現疲乏心悸和噁心等。而中藥治療高血壓病，療效鞏固，長期服用毒副作用小，已為臨床所重視。但目前存在的主要問題在於其發揮作用較慢，質量較難控制等，因此藥物的使用也受到一定的局限。與西藥相比，中醫藥治療高血壓療效確切，副作用小，這是西藥所不能比擬的優勢。因此隨著高血壓患者的增多，尋找療效確切，使用方便的治療高血壓中藥新製劑是一項非常有意義的工作。
白花前胡(Peucedanum praeruptorum Dunn)，又名姨媽菜、羅鬼菜、水前胡、野芹菜等，為多年生草本植物，作為藥用始於宋代，其味苦、辛，性涼。前胡在民間有較多的應用。我國古代醫藥學家對白花前胡的功用有詳細的闡述。《別錄》記載前胡「味苦，微寒，無毒，主療痰滿胸肋中痞，心腹結氣，風頭痛」。《本草綱目》「清肺熱，化痰熱，散風邪」。我們經過對前胡提取分離工藝的深入研究，提取得到有效部位，經在臨床上應用，取得較好效果。臨床證明，本發明的中藥製劑使用劑量小，療效好，毒性低，質量可控，是一種比較理想的中藥治療高血壓及左心室肥大的藥物。
發明內容
本發明的目的在於提供一種白花前胡總香豆素提取物片劑，其藥效作用強，毒副作用小，安全範圍大，產品純度高，服用劑量較小，使用攜帶方便，質量可控，而且並對輔料的加入量，成型工藝進行了優選，提高了產品的崩解性能，增強了溶出度。
本發明另一個目的是提供該白花前胡總香豆素提取物片劑的製備方法。
本發明還有一個目的是提供該白花前胡總香豆素提取物片劑在製備治療高血壓藥物中的應用。
為解決上述技術問題，本發明提出如下技術方案。
1、本發明的白花前胡總香豆素提取物中藥製劑一種白花前胡總香豆素提取物片劑，按重量份計，含有白花前胡總香豆素提取物40-70份和藥用輔料250-350份；其中藥用輔料選自甘露醇、蔗糖、羧甲基澱粉鈉、微晶纖維素、十二烷基硫酸鈉和5％的澱粉漿；優選白花前胡總香豆素提取物40-60份，甘露醇120-150份、蔗糖10-20份、羧甲基澱粉鈉20-40份、微晶纖維素80-120份、十二烷基硫酸鈉3-10份和5％的澱粉漿適量；更優選白花前胡總香豆素提取物55份，甘露醇150份、蔗糖15份、羧甲基澱粉鈉30份、微晶纖維素100份、十二烷基硫酸鈉6份和5％的澱粉漿適量；本發明的白花前胡總香豆素提取物中含有白花前胡丙素50-95％；優選含白花前胡丙素65-90％；更優選白花前胡丙素70-85％；本發明中所使用的5％的澱粉漿只是作為一般的粘合劑使用，因此其用量只是本領域常規的選擇。
本發明白花前胡總香豆素提取物片劑的製備方法1)白花前胡提取工藝將白花前胡根，粉碎成粗粉，乙醇加熱回流提取，過濾，濾液濃縮回收乙醇至無醇味，得到的膏狀物加入蒸餾水拌散，用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，濃縮成稠膏狀，加入石油醚，超聲20分鐘後靜置，析出沉澱，過濾，沉澱用石油醚洗滌至淺黃色，即得白花前胡總香豆素提取物；其中提取所用的乙醇的濃度優選60-95％，優選85％-95％，更優選乙醇的濃度為95％；乙醇的用量優選8-10倍量；更優選乙醇加熱回流提取3次，每次0.5-2小時，第一次加10倍量的乙醇，第二、三次各加8倍量的乙醇；乙酸乙酯的用量優選為1-3倍量；乙酸乙酯萃取次數優選為3-5次；更優選使用1倍量的乙酸乙酯萃取3次。
2)製劑工藝將白花前胡總香豆素提取物粉碎過160目篩，甘露醇、糖粉、羧甲基澱粉鈉、微晶纖維素、十二烷基硫酸鈉過100目篩，備用，稱取白花前胡總香豆素提取物、甘露醇、糖粉、微晶纖維素、2/3量的羧甲基澱粉鈉、1/2量的十二烷基硫酸鈉，混勻，加入5％澱粉漿制軟材，過20目篩制溼顆粒，50～60℃乾燥2小時，過16目篩整粒，加入剩餘的1/3量的羧甲基澱粉鈉和1/2量的十二烷基硫酸鈉，混勻，壓片即得。
3、本發明的白花前胡總香豆素提取物中藥製劑的質量控制方法1.總香豆素的含量測定對照品溶液的配製取減壓乾燥至恆重的白花前胡丙素標準品10.0mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。
供試品溶液的配製取本發明的提取物約10mg，置10ml量瓶中，加入甲醇約8ml，超聲處理30分鐘，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密吸取續濾液1ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
標準曲線的製備精密吸取對照品溶液0.25、0.5、1.0、2.0、4.0ml至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。取處方量的空白輔料，按上述方法製備空白對照溶液。照分光光度法(附錄VB)，在323nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪製標準曲線。
測定法取供試品溶液在323nm處測定吸收度，按標準曲線計算樣品中總香豆素含量，即得。
2.白花前胡丙素的含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統適應性試驗 用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-乙腈-水(25∶60∶15)為流動相；檢測波長323nm；流速1.0ml/min，柱溫35℃；理論塔板數按白花前胡丙素峰計算應不低於3000。
對照品溶液的製備 取減壓乾燥至恆重的白花前胡丙素對照品10mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加入甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1ml置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻作為對照品溶液。
供試品溶液的製備 取本發明的提取物細粉10mg，精密稱定，置10ml量瓶中，加入甲醇適量，超聲處理30分鐘，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續濾液1.0ml，置100ml量瓶中加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法 精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，按外標法以峰面積計算，即得。
基於有關白花前胡的古代醫家記述及現代藥理和臨床研究取得的試驗結果，本發明經過長期摸索研究，確證白花前胡治療高血壓病的有效部位，並提取分離得到本發明的白花前胡總香豆素提取物，用以治療高血壓。本發明解決了長期以來存在的發揮作用較慢，質量較難控制等中藥使用局限，本發明藥物的藥效學和藥理學深入系統研究表明，本發明藥物具有藥效作用強，毒副作用小，安全範圍大，以及產品純度高，服用劑量較小，質量可控等優點。以下就通過幾個方面的研究來說明本發明技術方案的有益效果。
一、藥效學實驗本發明藥物試驗用其原料；性狀淡黃色粉末。山東大學藥學院提供。使用時，根據大鼠劑量要求用0.5％羧甲基纖維素鈉製成混懸液。根據犬劑量要求用3ml 0.5％羧甲基纖維素鈉和生理鹽水配製成所需濃度的混懸液。
硝苯地平規格10mg/片。批號020411。山東省德州製藥廠。
馬來酸依那普利片10mg×16片。批號04092203。由揚子江藥業集團江蘇製藥股份有限公司提供。
氯化鈉注射液250ml/瓶，批號04092203。山東臨淄製藥廠提供。
3.動物雄性Wistar大鼠120隻，180±10g，購自山東大學實驗動物中心。合格證號魯動質字20001003。自發性高血壓大鼠50隻，雌雄各半，200±10g，購自中國醫學科學院實驗動物研究所繁育場，許可證編號SOXK京2000-0006。適應性飼養1周後，測量各鼠血壓。雜種犬20隻，體重11.58±1.23kg，雌雄兼用，購自濟南郊區。實驗前馴養1周，擇其正常、健康、雌性無孕者供試驗用。
4.儀器大鼠尾套法血壓計，型號GB4727-44。湖南醫科大學心血管生理研究室提供。
BioPAC多導生理信號採集分析系統，美國BioPAC公司。
CBI雷射都卜勒血流計，美國CBI公司。
DGD-300C-2醫用電腦高頻電刀，北京貝林電子有限公司5.動物實驗室條件溼度40-70％，溫度20-24℃，合格證號魯動環字H2002120672。籠具蘇州新區楓橋淨化設備廠，許可證號SCXK(蘇)2002-0034。塊狀鼠飼料山東省實驗動物中心提供。魯動飼字200001001。
6.方法6.1本發明藥物對自發性高血壓大鼠血壓的影響將自發性高血壓大鼠按血壓、體重均衡的原則分為五組，即本發明藥物大劑量組50.0mg/kg、中劑量組25.0mg/kg、小劑量組12.5mg/kg、陽性藥硝苯地平組20mg/kg、模型對照組。每組10隻。灌胃給藥。給藥體積為1ml/200g。模型對照組給予等體積的0.5％羧甲基纖維素鈉。動物在清醒非麻醉及保溫狀態下，用大鼠尾套法血壓計測量血壓，連續測量3～4次取平均值。每天灌胃一次，分別於給藥第5、10、15、20、30天同法測量血壓。
6.2本發明藥物對腎型高血壓大鼠血壓的影響雄性Wistar大鼠，在1％戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉下，右側臥位，在肋緣下1cm處逐層打開腹壁，游離左腎動脈，將直徑0.20mm的銀夾夾住腎動脈，使其產生部分狹窄，右腎不作處理。假手術組的大鼠，除不鉗夾左腎動脈外，手術步驟同上。術後大鼠均給予抗生素4天預防感染。術後4周血壓趨於穩定，測定血壓3～4次，取其平均值，選收縮壓在150mmHg以上者進行實驗。動物分組和給藥劑量、方法及測量方法同6.1。
6.3本發明藥物逆轉腎型高血壓大鼠左心室肥厚試驗腎型高血壓動物模型的建立同6.2。參照文獻，腎型高血壓大鼠術後8周可形成明顯的左室肥厚，據此，我們擬定術後9周開始給藥觀察供試品的逆轉左室肥厚作用。將已造模動物按血壓、體重均衡的原則分為六組，本發明藥物大劑量組50.0mg/kg、中劑量組25.0mg/kg、小劑量組12.5.0mg/kg、陽性藥依那普利片組10mg/kg、模型對照組、假手術組。灌胃給藥。給藥體積為1ml/200g。假手術組、模型對照組均給予等體積的0.5％羧甲基纖維素鈉。連續給藥9周，分別測量給藥前和給藥9周後血壓。實驗結束後，立即處死動物，開胸，迅速取出心臟，用4℃生理鹽水衝洗，去掉心房、右心室及其他組織，稱左心室重量，計算左室指數，同時進行心肌組織病理學檢查。
6.4本發明藥物對麻醉犬血流動力學的影響將正常健康犬20隻隨機分為4組，即本發明藥物大劑量組10.0mg/kg(1、2、4、5、7號犬)，本發明藥物小劑量組5.0mg/kg(8、10、13、15、16號犬)，陽性對照藥依那普利片組2.5mg/kg(11、12、18、19、20號犬)及空白對照組(3、6、9、14、17號犬)。動物用2.5％戊巴比妥鈉(25mg/kg)靜脈麻醉，分離頸總動脈和氣管，頸總動脈插管經壓力換能器與BioPAC多導生理信號採集分析系統相連記錄血壓；氣管插管備接電動呼吸器行人工呼吸。分離十二指腸並插管供給藥用。犬右側臥位，於左側第四肋間隙開胸，做心包床，暴露心臟。左心室尖部插管連接Biopac通用放大器記錄左心室內壓(LVP)和左室內壓最大變化速率(±dp/dtmax)。分離冠狀動脈左旋支及主動脈根部，分別放置合適的血流計卡式探頭與都卜勒血流計相連，分別測量冠脈血流量(CBF)及心輸出量(CO)。同時計算總外周阻力、冠脈阻力、每搏心排出量和左室作功。所有上述指標均同步記錄於BioPAC多導生理信號採集分析系統。術後緩慢恆速靜脈滴注生理鹽水，以補充體液。
術後穩定30min，待觀察指標穩定後，記錄上述各指標作為藥前值。然後經十二指腸插管給藥。給藥體積為2.0ml/kg。空白對照組給予等體積的0.5％羧甲基纖維素鈉和生理鹽水。分別於給藥後30、60、90、120、180和240min記錄各項指標。實驗結果分別與空白對照組比較，進行統計學分析處理。
7.結果7.1本發明藥物對自發性高血壓大鼠血壓的影響結果表明，本發明藥物大劑量組灌胃給藥10天開始明顯降低血壓，與藥前相比差異顯著(P＜0.05)，15天差異更顯著(P＜0.01)，20、30天時差異最明顯(p＜0.001)。本發明藥物中劑量組灌胃給藥15天開始降低血壓(P＜0.05)，20、30天時差異最明顯(p＜0.001)。小劑量組與藥前比較雖無顯著性差異(P＞0.05)，但有降低趨勢。結果詳見表1。
表1本發明藥物對自發性高血壓大鼠收縮期血壓(mmHg)的影響(n＝10，X±s)
注與藥前相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與模型組相比，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.0017.2本發明藥物對自發性高血壓大鼠血壓的影響結果表明，本發明藥物大劑量組灌胃給藥5天起開始有效，降壓作用顯著(P＜0.05)，10天起差異更顯著(P＜0.01)，20天時差異最明顯(p＜0.001)。中劑量組灌胃給藥10天起有差異(P＜0.05)，30天時差異最明顯(p＜0.001)。小劑量組灌胃給藥與藥前比有降低趨勢，但無顯著性差異。結果詳見表2。
7.3本發明藥物對腎型高血壓大鼠左心室肥厚的影響從表3中可以看出，大鼠腎動脈狹窄術後第9周，高血壓形成已經恆定，此時左心室肥厚已經形成。連續給藥9周後，本發明藥物大、中劑量組和依那普利片組能顯著降低腎型高血壓大鼠的血壓，與模型組相比有顯著差異(P＜0.001)，表2本發明藥物對腎型高血壓大鼠收縮期血壓mmHg影響(n＝10，X±s)
注藥前相比，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001；與模型組相比，#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001表3本發明藥物逆轉腎型高血壓左心室肥厚的作用(X±s)
注與模型對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001小劑量組無顯著性差異(P＞0.05)。本發明藥物大、中劑量組能夠明顯降低腎型高血壓大鼠的左室係數(P＜0.05)。說明本發明藥物能夠逆轉腎型高血壓大鼠的左心室肥厚。結果詳見表3。
本發明藥物逆轉腎型高血壓大鼠左心室肥厚病理學檢查結果假手術組心內膜、外膜、心肌及心肌間質組織結構正常，心肌纖維未見變性、壞死等形態學改變。
模型組心肌纖維束明顯腫脹增大，心肌纖維明顯濁腫、顆粒變性及水樣變性，部分心肌纖維可見少數灶狀壞死，心肌間質中可見炎細胞浸潤。在部分區域心肌組織中可見心肌纖維中斷現象。部分小血管壁明顯增厚，管腔明顯變小，管周纖維結締組織增多。
大劑量組多數動物心肌纖維束未見明顯改變，僅個別動物心肌纖維束輕度腫脹增大。個別部位少數心肌纖維輕度濁腫、變性，小血管壁未見增厚，管周纖維結締組織未見增多。
中劑量組心肌纖維束腫脹增大，心肌纖維明顯濁腫、顆粒變性，部分心肌纖維可見少數灶狀壞死，心肌間質中可見炎細胞浸潤。在部分區域心肌組織中偶見心肌纖維中斷現象。部分小血管壁增厚，管腔未見明顯變小，管周纖維結締組織也未見增多。
小劑量組心肌纖維束腫脹增大，心肌纖維明顯濁腫、顆粒變性，部分心肌纖維可見少數灶狀壞死，心肌間質中可見炎細胞浸潤。在部分區域心肌組織中偶見心肌纖維中斷現象。部分小血管壁增厚，管腔變小，管周纖維結締組織輕度增多。
陽性對照組多數動物心肌纖維束未見明顯改變，僅個別動物心肌纖維束輕度腫脹增大。個別部位少數心肌纖維輕度濁腫、變性，小血管壁未見增厚，管周纖維結締組織未見增多。
7.4本發明藥物對麻醉犬血流動力學的影響7.4.1本發明藥物對心輸出量及冠脈血流量的影響本發明藥物大、小劑量組均對心輸出量無明顯影響。依那普利片組給藥後60min使心輸出量降低。
本發明藥物大劑量組於給藥後180min使冠脈流量明顯增加(P＜0.01)，小劑量組有增加趨勢。依那普利片組給藥後60min使冠脈流量明顯增加(P＜0.05)。
7.4.2本發明藥物對左室內壓、+dp/dtmax和-dp/dtmax的影響本發明藥物大、小劑量組和依那普利片均對左室內壓無明顯影響。
本發明藥物大、小劑量組皆於給藥後120min使+dp/dtmax明顯降低。依那普利片於給藥後30～120min使+dp/dtmax明顯降低。
本發明藥物大、小劑量組和依那普利片均對-dp/dtmax無明顯影響7.4.3本發明藥物對總外周阻力和冠脈阻力的影響本發明藥物大、小劑量組和依那普利片對總外周阻力均無明顯影響。
本發明藥物大劑量組別於給藥180min明顯降低冠脈阻力，小劑量組和依那普利片有降低趨勢。
7.4.4本發明藥物對血壓和心率的影響與空白對照組比較，本發明藥物大、小劑量組和依那普利片組均對平均血壓和心率無明顯影響。與給藥前比較，本發明藥物大劑量組於給藥後180～240mi明顯降低平均血壓，小劑量組無明顯影響，依那普利片240min有降低趨勢。
7.4.5本發明藥物對每搏心排出量和左室作功的影響本發明藥物大、小劑量組和依那普利片組均對每搏心排出量無明顯影響。
本發明藥物大、小劑量組對左室作功無明顯影響。依那普利片組於給藥後60min明顯降低左室作功。
8.小結8.1本發明藥物50.0mg/kg、25.0mg/kg分別從灌胃給藥10天、15天開始明顯降低自發性高血壓大鼠收縮壓，小劑量組12.5mg/kg雖無顯著性差異，但有降低趨勢。
8.2本發明藥物50.0mg/kg、25.0mg/kg分別從灌胃給藥5天、10天開始明顯降低腎型高血壓大鼠收縮壓，12.5mg/kg雖無顯著性差異，但有降低趨勢。
8.3本發明藥物50.0mg/kg、25.0mg/kg能逆轉腎型高血壓大鼠的左心室肥厚，小劑量組12.5mg/kg雖無顯著性差異，但有逆轉趨勢。
8.4本發明藥物10.0mg/kg給藥後180～240min能明顯降低麻醉犬平均血壓。
8.5本發明藥物10.0mg/kg、5.0mg/kg均於給藥後120min使麻醉犬+dp/dtmax明顯降低。
8.6本發明藥物10.0mg/kg於給藥180min明顯降低麻醉犬冠脈阻力，並顯著增加冠脈流量；5.0mg/kg有增加趨勢。
8.7本發明藥物10.0mg/kg、5.0mg/kg均對麻醉犬左室內壓、-dp/dtmax、心輸出量無明顯影響。
8.8本發明藥物10.0mg/kg、5.0mg/kg均對麻醉犬總外周阻力、每搏心排出量和左室作功無明顯影響。
8.9本發明藥物在降低平均血壓和改善冠脈流量等方面顯示了一定的藥效作用。
二、本發明藥物的工藝研究1、白花前胡提取工藝研究根據白花前胡活性成分的化學性質及藥理學研究，我們對本發明藥物中的提取物的提取工藝、分離純化工藝進行了系統的研究。
1)白花前胡醇提工藝研究考察了不同醇提工藝對白花前胡丙素含量的影響，採用正交試驗，篩選最佳醇提工藝條件。
2)白花前胡分離純化工藝研究(1)比較了不同乙酸乙酯用量對總香豆素得率及含量得影響，確定採用乙酸乙酯萃取，優選採取等量的乙酸乙酯。
(2)比較了不同乙酸乙酯萃取次數對總香豆素得率及含量的影響，確定根據所用萃取溶劑的量，優選採用3次萃取。
(3)提取物內控質量標準的制定通過以上工藝研究，制定了本品的製備工藝，並經中試放大，成品各項指標均符合規定要求，進一步確證了本工藝合理、科學並適應規模生產的需要，保證了製劑質量。
1.1)儀器與試藥Agilent 1100高效液相色譜儀所用試劑均為色譜純所用藥材由山東大學藥學院溫學森教授鑑定對照品白花前胡丙素對照品由實驗室製備1.2)試驗方法採用正交表L9(34)篩選了乙醇回流提取的最佳工藝條件1.2.1)製備工藝取白花前胡100g，共稱取9份，分別按不同的提取工藝提取，回收乙醇，並濃縮至每g相當於1.5g原藥材的清膏。
1.2.2)白花前胡丙素含量測定色譜條件流動相甲醇-水-乙腈＝25∶15∶60，流速1.0ml/min，柱溫25℃，檢測波長323nm，進樣量20μl。
對照品溶液的配製精取乾燥至恆重的白花前胡丙素標準品約10.0mg，精密稱重，置10ml量瓶中，用甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置100ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(含白花前胡丙素10ug/ml)。
供試品溶液的配製取相當於1.0g原藥材的清膏，置10ml量瓶中，加入甲醇約8ml，超聲處理30分鐘，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，從中精密量取1ml，置100ml量瓶中加甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。
精密量取對照品溶液與供試品溶液20μl，在上述色譜條件下進樣，測定峰面積，計算不同工藝白花前胡丙素含量，試驗方案和結果見表2，方差分析見表3。
1.2.3)方差分析正交試驗結果分析，A因素即醇濃度對白花前胡丙素含量有顯著差異，選擇乙醇的濃度在60％-95％，但95％醇提清膏中白花前胡丙素含量明顯高於75％醇提工藝及85％醇提工藝，故優選85-95％醇提工藝，更優選95％的乙醇；B因素即加醇量對白花前胡丙素含量的影響較大，故優選加醇量為8-10倍量，更優選10倍量；C因素即提取時間對白花前胡丙素含量無顯著影響，故選擇提取時間為60-120分鐘。
2.1)不同萃取次數的考察萃取一步是該生產工藝中的關鍵步驟，它直接影響到白花前胡香豆素的產率，乙酸乙酯的用量和生產能耗等。考察萃取次數與得率，得到最佳萃取次數。
2.1.1)供試品的製備取白花前胡藥材5kg，按選定的提取工藝提取，回收乙醇至無醇味，至相對密度為1.20(60℃)稠膏，平均分成3份，加水適量，分散，加1倍量乙酸乙酯分別萃取2、3、5次，回收溶劑，加入適量的石油醚，結晶析出淡黃色固體，得到白花前胡總香豆素提取物。
2.1.2)白花前胡丙素的含量測定色譜條件流動相甲醇-水-乙腈＝25∶15∶60，流速1.0ml/min，柱溫25℃，檢測波長323nm，進樣量20μl。
對照品溶液的配製精取乾燥至恆重的白花前胡丙素標準品約10.0mg，精密稱重，置10ml量瓶中，用甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml置100ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(含白花前胡丙素10ug/ml)。
供試品溶液的配製取白花前胡總香豆素提取物15mg，置10ml量瓶中，加入甲醇約8ml，超聲處理30分鐘，放冷，補足溶劑至刻度，搖勻，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
精密量取對照品溶液與供試品溶液20μl，在上述色譜條件下進樣，測定峰面積，計算不同工藝白花前胡丙素含量。
2.1.3)總香豆素的含量測定對照品溶液的配製精密稱取乾燥至恆重的白花前胡丙素標準品10.0mg，置10ml量瓶中，用甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密量取0.5、2.0ml分別置100ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，製備得對照液。
供試品溶液的配製取本發明的提取物15mg，置10ml量瓶中，加入甲醇約8ml，超聲處理30分鐘，放冷，加甲醇至刻度，搖勻，從中精密量取1ml，置100ml量瓶中加甲醇稀釋至刻度，作為供試品溶液。
照紫外分光光度法(中國藥典2005版一部附錄28頁VA)測定。分別取對照品溶液和供試品溶液在323nm處測定吸收度，計算總香豆素含量。
結果表明，萃取次數為3次和5次得到的提取物的得率及含量沒有明顯的差別，而萃取2次所得的的提取物的得率較低，因此確定萃取次數為3-5次，優選3次。
2.2)不同萃取劑用量得考察考察了不同乙酸乙酯用量對本發明提取物得率及含量的影響。
取白花前胡藥材5kg，按選定的提取工藝提取，回收乙醇至無醇味，至相對密度為1.20(60℃)稠膏，平均分成3份，加水適量，分散，每份200ml，分別加0.5倍、1倍量2倍量(V/V)乙酸乙酯，分別萃取3次，回收溶劑，加入適量的石油醚，結晶析出淡黃色固體，得到白花前胡總香豆素提取物。
以上不同提取工藝提取得到的供試品分別按2.1.2項下方法測定白花前胡丙素含量，按2.1.3項下方法測定總香豆素的含量。
結果表明，萃取劑用量為1倍量和2倍量(V/V)所得提取物的得率及含量無明顯差別，為0.5倍時，得率較低，因此確定優選的萃取劑用量為1-3倍量(V/V)，優選1倍量(V/V)。
在上述一系列工藝條件研究後，確定了從白花前胡藥材中提取、分離、純化有效部位白花前胡丙素的各步工藝的具體條件，將各部最佳的工藝條件組合在一起確定白花前胡總香豆素提取物的製備工藝，確定採用乙酸乙酯萃取後，回收溶劑，加入適量石油醚，重結晶，得到本發明提取物，並進一步制定了提取物的內控標準。
2、本發明藥物製劑工藝研究在確定白花前胡提取物的製備工藝之後，又放大中試多批，認為這些工藝條件基本可行，產品收率、含量、色澤都比較穩定，且各項指標均符合提取物質量標準要求。在此前提下，進行了製劑工藝研究，其中包括製劑處方設計、製劑成型工藝及中試等研究。
2.1)製劑處方的確定根據藥效學試驗結果，確定片劑藥物含量白花前胡總香豆素為50mg；用法為一日3次，每次1片。
2.2)處方的篩選與確定選擇不同的輔料及配比進行處方篩選試驗。由於前胡有效部位難溶於水，為促進其溶出，故以溶出度為指標對片劑的處方組成進行了篩選。
2.3)輔料的選擇與作用本品原料藥前胡有效部位性質穩定，難溶於水，故選擇能增進其溶解的輔料進行處方篩選。
(1)甘露醇作為稀釋劑，由於其易溶於水，分散於前胡提取物周圍可促進其溶出。
(2)微晶纖維素作為助崩解劑，有助於片劑的迅速崩解和溶出。
(3)十二烷基硫酸鈉作為表面活性劑助於水分滲入片心以達到迅速崩解，並改善難溶性藥物的溶出；另外作為潤滑劑使用，可起到助流作用可提高顆粒的流動性。
(4)蔗糖乾燥粘合劑。處方中加入蔗糖粉可增大顆粒的硬度。
(5)羧甲基澱粉鈉崩解劑。可促進片劑的崩解。
2.4)輔料的來源與質量標準(見表4)表4各輔料的來源及質量標準
具體實施方式
實施例1白花前胡總香豆素提取物55份甘露醇150份蔗糖 15g份羧甲基澱粉鈉(先加)20份(後加)10份微晶纖維素100份十二烷基硫酸鈉(先加) 3份(後加) 3份5％澱粉漿 適量實施例2白花前胡總香豆素提取物40份甘露醇120份蔗糖 15g份羧甲基澱粉鈉(先加)20份(後加)10份微晶纖維素80份十二烷基硫酸鈉(先加) 1份(後加) 1份5％澱粉漿 適量實施例3白花前胡總香豆素提取物55份甘露醇130份蔗糖 15g份羧甲基澱粉鈉(先加)18份
(後加)9份微晶纖維素100份十二烷基硫酸鈉(先加) 3份(後加) 3份5％澱粉漿 適量實施例4白花前胡總香豆素提取物60份甘露醇150份蔗糖 20份羧甲基澱粉鈉(先加)22份(後加)11份微晶纖維素110份十二烷基硫酸鈉(先加) 4份(後加) 4份5％澱粉漿 適量實施例5白花前胡總香豆素提取物70份甘露醇150份蔗糖 20份羧甲基澱粉鈉(先加)24份(後加)12份微晶纖維素120份十二烷基硫酸鈉(先加) 5份(後加) 5份5％澱粉漿 適量
權利要求
1.一種中藥組合物，其特徵為其中含有白花前胡。
2.一種白花前胡總香豆素提取物片劑，按重量份計，含有白花前胡總香豆素提取物40-70份和藥用輔料250-350份，其中的藥用輔料選自甘露醇、蔗糖、羧甲基澱粉鈉、微晶纖維素、十二烷基硫酸鈉和5％的澱粉漿。
3.如權利要求2所述的片劑，其中所含的白花前胡總香豆素提取物40-60份，甘露醇120-150份、蔗糖10-20份、羧甲基澱粉鈉20-40份、微晶纖維素80-120份、十二烷基硫酸鈉3-10份和5％的澱粉漿適量。
4.如權利要求3所述的片劑，其中所含的白花前胡總香豆素提取物55份，甘露醇150份、蔗糖15份、羧甲基澱粉鈉30份、微晶纖維素100份、十二烷基硫酸鈉6份和5％的澱粉漿適量。
5.如權利要求2-4任意一項所述的片劑，其中白花前胡總香豆素提取物中含有白花前胡丙素為65-90％。
6.如權利要求2-5任意一項所述的片劑，其中的白花前胡總香豆素提取物的製備方法為，將白花前胡根，粉碎成粗粉，用60-95％乙醇加熱回流提取3次，每次0.5-2小時，第一次加8-10倍量的乙醇，第二、三次各加6-8倍量的乙醇，過濾，濾液濃縮回收乙醇至無醇味，得到的膏狀物加入蒸餾水拌散，用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，濃縮成稠膏狀，加入石油醚，超聲20分鐘後靜置，析出沉澱，過濾，沉澱用石油醚洗滌至淺黃色，即得到所述的提取物。
7.如權利要求6所述的片劑，其中提取白花前胡總香豆素所用的乙醇的濃度為95％。
8.如權利要求6或7所述的片劑，其中用1倍量的乙酸乙酯萃取三次。
9.如權利要求2-8任意一項所述的片劑的制各方法為，將白花前胡總香豆素提取物粉碎過160目篩，甘露醇、糖粉、羧甲基澱粉鈉、微晶纖維素、十二烷基硫酸鈉過100目篩，備用，稱取白花前胡總香豆素提取物、甘露醇、糖粉、微晶纖維素、2/3量的羧甲基澱粉鈉、1/2量的十二烷基硫酸鈉，混勻，加入5％澱粉漿制軟材，過20目篩制溼顆粒，50～60℃乾燥2小時，過16目篩整粒，加入剩餘的1/3量的羧甲基澱粉鈉和1/2量的十二烷基硫酸鈉，混勻，壓片即得。
10.如權利要求2-8任意一項所述的片劑在製備治療高血壓藥物中的應用。
全文摘要
本發明涉及一種白花前胡總香豆素提取物片劑及其製備方法、以及其在製備治療高血壓藥物中的應用。本發明經過長期摸索研究，確證白花前胡治療高血壓病的有效部位，並提取分離得到本發明的白花前胡總香豆素提取物，用以治療高血壓。本發明解決了長期以來存在的發揮作用較慢，質量較難控制等中藥使用局限，本發明藥物的藥效學和藥理學深入系統研究表明，本發明藥物具有藥效作用強，毒副作用小，安全範圍大，以及產品純度高，服用劑量較小，質量可控等優點，而且經過對藥物輔料的選擇，本發明藥物的活性成分溶出度好，崩解性好。
文檔編號A61K125/00GK1977874SQ200510127618
公開日2007年6月13日 申請日期2005年12月6日 優先權日2005年12月6日
發明者趙志全 申請人:魯南製藥集團股份有限公司