複方丹參滴丸1h-nmr指紋圖譜的製作方法

2023-05-21 18:48:06 1

複方丹參滴丸1h-nmr指紋圖譜的製作方法
【專利摘要】本申請公開了一種複方丹參滴丸1H-NMR指紋圖譜的測定方法，具體包括如下步驟：1)樣品預處理：複方丹參滴丸溶解於純水後加二氯甲烷混合離心，取上層水溶液凍幹後溶解，備用；2)測定條件：在實驗室條件下，調整核磁共振波譜儀的激發頻率、掃描次數和接受增益等；3)圖譜的測定：使用預飽和脈衝序列壓制水峰，在上述測定條件下，得到複方丹參滴丸的1H-NMR指紋圖譜。
【專利說明】複方丹參滴丸1H-NMR指紋圖譜

【技術領域】：
[0001]本發:明涉及一種藥物製劑的檢測，特別是一種複方丹參滴丸的核磁共振氫譜的檢 測方法。

【背景技術】：
[0002]複方丹參滴丸為天士力公司開發的活血化瘀、理氣止痛中藥，用於胸中憋悶、心絞 痛，其主要成分為丹參、三七、冰片，其藥理作用包括增加冠脈血流量，2增加心肌耐缺氧 保護缺血心肌，3抗血小板聚集防止血栓形成，4改善微循環。現有複方丹參滴丸的製備方 法主要包括：將丹參、三七水煮提取得到提取液，將提取液濃縮得到浸膏，將浸膏和滴丸基 質混合，放入滴丸機中，投料比為：提取物浸膏：基質=1 :5. 5,加入另一成分冰片9(TC混勻， 化料時間L 5小時，以液體石蠟為冷凝劑，冷凝液溫度，滴距7cm，滴速每分鐘35滴製成 複方丹參滴丸。
[0003] 複方丹參滴丸生產過程中的質量控制和檢測是一項複雜的工作，由於中藥化學成 分複雜，作用機制不明確，致使現有中藥製藥技術難以確保中藥產品質量穩定性，中藥指紋 圖譜建立的可以全面反映中藥內在化學成分的種類與數量，進而反映中藥的質量。現階段 中藥的有效成分絕大多數沒有明確，採用中藥指紋圖譜的方式，將有效地表徵中藥質量。指 紋圖譜已為國際社會所認可，有利於中藥及產品進入國際市場。
[0004] 核磁共振是一種基於具有自旋性質的原子核在核外磁場作用下，吸收射頻輻射而 產生能躍遷的譜學技術。在核磁共振技術中，核磁共振氫譜（1H-NMR)目前研究得最為充 分，且靈敏度和測試效率較高，應用範圍廣，積累的數據也最為豐富。W-NMR指紋圖譜測試 具有以下優點：不因為色譜分離而損失樣品中的組分；不破壞樣品的結構和性質；對所有 組分的靈敏度一致，無偏向性。同時， 1H-NMR指紋圖譜還可以提供化學位移、偶合常數、峰裂 分情況以及峰面積等大量重要的結構信息。因此，1H-NMR作為一種波譜型指紋圖譜與傳統 色譜型指紋圖譜相比，在表徵複方中藥體系方面更具全面性和整體性。目前， 1H-NMR指紋圖 譜與模式識別方法相結合已廣泛應用於生物體液樣品的代謝組學分析，以及中草藥和食品 質量監控與安全性等相關研究中。
[0005] 但1H-NMR指紋圖譜能否應用於複方丹參滴丸，在應用過程中會遇到哪些問題，應 用條件是什麼等問題是擺在研究者面前的重大課題，本發明人經過研究，有效的將核磁共 振技術應用於複方丹參滴丸，有效的提高了產品的質量控制水平，同時找到了適合的測定 方法和條件。


【發明內容】
：
[0006] 本發明將將核磁共振技術應用於複方丹參滴丸研究出了一種複方丹參滴丸的測 定方法，所述方法採用1H-NMR技術在一定條件下測定複方丹參滴丸，以獲得其1H-NMR圖 譜，通過獲得的圖譜和標準指紋圖譜的比較，確定複方丹參滴丸的質量是否符合標準，本發 明的測定方法，步驟如下：
[OOf] 1)關預處理：取生產過程巾賴酸方丹麵A，龍於純水後加二氯甲院混 合咼心，取上層水溶液，加入d2o溶解混勻，備用；
[0008] 2)測定條件：在實驗室條件下，調整核磁共振波譜儀的掃描次數和接受增益；
[0009] 3)圖譜的測定：使用預飽和脈衝序列壓制水峰，在上述測定條件下，得到複方丹 參滴丸的1H-NMR指紋圖譜。
[0010] 4)相似度計算：用軟體計算樣品圖譜與標準圖譜的相似度，用於評價待測樣品復 方丹參滴丸的質量。
[0011]優選的，本發明的測定方法，步驟如下：
[00^1 1)樣品預處理丄複方丹參滴丸加入純水中，超聲溶解，0 03?0. lg/mL，再加 入一氯甲烷，渦旋混合，罔心取上層水溶液，凍幹，加入0· 2-1倍所取上層溶液體積的含 0. 05%TMSP的D20混勻，備用；
[0013] 2)測定條件：在實驗室條件下，調整核磁共振波譜儀的掃描次數和接受增益；
[0014] 3)圖譜的測定：使用預飽和脈衝序列zgpr在s 4_ 65?4· 75處壓制水峰，在上述 測定條件下，得到複方丹參滴丸的1H-NMR指紋圖譜。
[0015] 4)相似度計算：用軟體計算樣品圖譜與標準圖譜的相似度，用於評價待測樣品復 方丹參滴丸的質量。
[0016] 更優選的，本發明的測定方法，步驟如下：
[0017] D ^品預處理：複方丹參滴丸加入純水中，超聲10?3〇min溶解0. 03?0. lg/mL， 再加入1-3倍樣品體積二氯甲烷，渦旋混合2?1〇min，於3〇〇〇? 6〇〇〇轉/min離心5? 30min,取上層水溶液，凍幹，加入〇· 2-1倍所取上層溶液體積的含〇. 〇5%TMSp的d2〇混勻， 備用；
[0018] 2)測定條件：在實驗室條件下，調整核磁共振波譜儀的掃描次數和接受增益；
[0019] 3)圖譜的測定：使用預飽和脈衝序列zgpr在δ 4_ 65?4_ ?5處壓制水峰，在上述 測定條件下，得到複方丹參滴丸的1H-NMR指紋圖譜。
[0020] 4)相似度計算：用軟體計算樣品圖譜與標準圖譜的相似度，用於評價待測樣品復 方丹參滴丸的質量。
[0021]特別優選的，本發明的測定方法，步驟如下：
[0022] 1)樣品預處理：複方丹參滴丸加入純水中，超聲10?3〇min溶解，〇· 03?〇. lg/ mL，再加入卜3倍樣品體積二氯甲焼，渦旋混合2?1〇min，於 3〇〇〇?6〇〇〇轉/min離心5? 30min，取上層水溶液，凍幹，加入〇. 3-〇. 8倍所取上層溶液體積的含〇· 〇5%TMSp的D混勻， 備用；
[0023] 2)測定條件1在實驗室條件下，調整核磁共振波譜儀的掃描次數和接受增益；
[0024] 3)圖譜的測定：使用預飽和脈衝序列zgpr在δ 4_ 65?4· 75處壓制水峰,在上述 測定條件下，得到複方丹參滴丸的1H-NMR指紋圖譜。
[0025] 4)相似度計算：用軟體計算樣品圖譜與標準圖譜的相似度，用於評價待測樣品復 方丹參滴丸的質量。
[0026]進一步特別優選的，本發明的測定方法，步驟如下：
[0027^、1)樣品預處理：複方丹參滴丸加入純水中，超聲20min溶解，0 0625g/mL，再加入 1_3倍樣品體積二氯甲烷，渦旋混合2?10min，於3000? 6000轉/min離心5?30min，取 上層水溶液，凍幹加入0· 3-0. 6倍所取上層溶液體積的含0· 05%TMSP的D20混勻，備用； [0028] 2)測定條件：在實驗室條件下，調整核磁共振波譜儀的掃描次數和接受增益；
[0029] 3)圖譜的測定：使用預飽和脈衝序列zgpr在δ 4. 65?4. 75處壓制水峰，在上述 測定條件下，得到複方丹參滴丸的1H-NMR指紋圖譜。
[0030] 4)相似度計算：用軟體計算樣品圖譜與標準圖譜的相似度，用於評價待測樣品復 方丹參滴丸的質量。
[0031]最優選的，本發明的測定方法，步驟如下：
[0032] 1)樣品預處理：5粒25mg/粒複方丹參滴丸加入2mL純水中，超聲20min溶解，再 加入3mL 一蝨甲焼，潤旋混合5mj_n，4500轉/min離心15min,取上層水溶液〇· 8mL凍幹，加 入0· 45mL含0· 〇5%TMSP的D20溶解混勻，備用；
[0033] 2)測定條件：實驗溫度為298K ;譜寬（SWH)6410. 256Hz ;採樣數據點（TD)32768 ; 掃描次數（NS) 16次；延遲時間（Dl) 2s ;接受增益（RG) 128 ;
[0034] 3)圖譜的測定：以10_2〇鎖場，使用預飽和脈衝序列 2聊在s 4. 7處壓制水峰， 在上述測定條件下，得到複方丹參滴丸的m-NMR指紋圖譜；
[0035] 4)相似度計算：所得的1H-NMR圖譜在S0. 〇?1〇.〇範圍進行分段積分，以 0· 04ppm為最小間隔積分，得到249個數據點，即每段化學位移下的相對峰面積積分值，並 建立資料庫，根據雙定性相似度計算原理進行相似度分析。
[0036]本發明的另外一種測定方法，步驟如下：
[0037] 1)樣品預處理：複方丹參滴丸加入純水中，超聲溶解，得〇· 25-1. 25g/mL待測樣 品，再加入I-3倍樣品體積二氯甲焼，渦旋混合2?lOmin,於3000?6000轉/min離心5? 30min，取上層水溶液，加入丨/了-丨/川倍所取上層溶液體積的含〇· 05%TMSP的〇2〇混勻，備 用；
[0038] 2)測定條件：在實驗室條件下，調整核磁共振波譜儀的掃描次數和接受增益；
[0039] 3)圖譜的測定：使用預飽和脈衝序列zgpr、zgcpgppr、wet、noesygpprld在 δ 4. 65?4. 75處壓制水峰，在上述測定條件下，得到複方丹參滴丸的1H-nmR指紋圖譜。
[0040] 4)相似度計算：用軟體計算樣品圖譜與標準圖譜的相似度，用於評價待測樣品復 方丹參滴丸的質量。
[0041]優選的，本發明的另外一種測定方法，步驟如下：
[0042] 1)樣品預處理：複方丹參滴丸加入純水中，超聲溶解，得0.5-lg/mL待測樣品， 再加入1_3彳首樣品體積二氯甲焼，禍旋混合2?lOmin,於3000?6000轉/min離心5? 30min，取上層水溶液，加入1/7-1/10倍所取上層溶液體積的含〇· 〇5%TMSP的D20混勻，備 用；
[0043] 2)測定條件：實驗溫度為298K ;譜寬（SWH) 6410. 256Hz ;採樣數據點（TD) 32768 ; 掃描次數（NS) 32-64次；延遲時間（D1) 2s ;接受增益（RG) 128 ;
[0044] 3)圖譜的測定：以90%純水-1〇%D20溶液鎖場，使用預飽和脈衝序列zgpr、 zgcpgppr、wet、noesygpprld在δ 4. 7處壓制水峰，在上述測定條件下，得到複方丹參滴丸 的1H-NMR指紋圖譜；
[0045] 4)相似度計算：用軟體計算樣品圖譜與標準圖譜的相似度，用於評價待測樣品復 方丹參滴丸的質量。
[0046]更優選的，本發明的另外一種測定方法，步驟如下：
[0047] 1)樣品預處理：複方丹參滴丸加入純水中，超聲15min溶解，得0· 75g/mL待測樣 品，再加入1. 5倍樣品體積二氯甲烷，渦旋混合5min,於4500轉/min離心15min，取上層水 溶液，加入1/9所取上層溶液體積的含0. 〇5%TMSP的D20混勻，備用；
[0048] 2)測定條件：實驗溫度為298K ;譜寬（SWH)6410. 256Hz ;採樣數據點（TD)32768 ; 掃描次數（NS) 32-64次；延遲時間（Dl) 2s ;接受增益（RG) 128 ;
[0049] 3)圖譜的測定：以90%純水-10%D20溶液鎖場，使用預飽和脈衝序列zgpr、 zgcpgppr、wet、noesygpprld在δ 4. 7處壓制水峰，在上述測定條件下，得到複方丹參滴丸 的1Η-NMR指紋圖譜；
[0050] 4)相似度計算：所得的1H-NMR圖譜在δ 〇.〇?10.0範圍進行分段積分，以 0. 04ppra為最小間隔積分，得到249個數據點，即每段化學位移下的相對峰面積積分值，並 建立資料庫，根據雙定性相似度計算原理進行相似度分析。
[0051] 本發明應用1η-NMR技術建立複方丹參滴丸的指紋圖譜，以相似度為指標，判別不 同批次產品質量的一致性和穩定性，為其質量評價和控制提供一種新方法。本發明選取 2008?2011年生產的不同批次複方丹參滴丸50份作為研究對象，樣品經CH 2C12處理後， 以D20為溶劑，在298K下採用預飽和水峰壓制脈衝序列zgpr測定其W-NMR指紋圖譜。用 MetresNova軟體在δ 〇· 〇?10. 〇範圍進行分段積分，以〇· 〇4ppm為最小間隔積分，得到 249個數據點，即每段化學位移下的相對峰面積積分值，並建立資料庫，根據雙定性相似度 計算原理，利用Excel軟體進行相似度分析。結果發現，4-麗1?指紋圖譜中芳香區和飽和脂 肪區範圍的質子信號表徵了複方丹參滴丸中主要化學成分，50批覆方丹參滴丸的相似度在 0· 9732?0· 9%6之間。因此，本發明所建立的複方丹參滴丸1Η-NMR指紋圖譜專屬性強，準 確可行，能全面、客觀地反映其質量特徵，可用於複方丹參類中藥複方製劑的質量評價和控 制。
[0052] 本發明的複方丹參滴丸測定方法，尤其是測定條件等關鍵技術是經過篩選獲得 的，篩選過程如下：
[0053] 1儀器與試藥
[0054] AVANCE III400超導核磁共振波譜儀（質子激發頻率：400MHz)，配置ΒΒ0正向 (Plus)觀察寬帶探頭和VTU控溫系統（德國Bruker公司），LGJ_10D壓蓋型冷凍乾燥機（北 京四環科學儀器廠有限公司）。美國\^1"^(1￥6-5000核磁管（5111111)。0 20(氘代度>99.8%， 含0· 〇5%TMSP)購自青島騰龍微波科技有限公司，娃哈哈純淨水購自杭州娃哈哈集團有限 公司，二氯甲烷（分析純）購自天津市福晨化學試劑廠。50批覆方丹參滴丸由天士力製藥 集團股份有限公司提供（生產批號見表1)。2方法與結果
[0055] 2. 1供試樣品處理
[0056] 取5粒複方丹參滴丸置於10mL玻璃試管中，加入2mL純水，超聲15min溶解，再 加入3mL二氯甲燒，渦旋5min，於45〇Orpm下離心Ιδη?η，取上層水溶液〇· 8mL，凍幹後用含 0. 05%TMSP的D20溶解混勻，並轉移至5mm核磁管中，加封后用於NMR檢測。
[0057] 2. 2屯-麗1?測試條件
[0058] 實驗溫度為298K ;譜寬（SWH) 6410. 256Hz ;採樣數據點（td) 32768 ;掃描次數 (NS) 16次；延遲時間（Dl)2s ;接受增益（RG) 128。
[0059] 2. 3屯-圈1?指紋圖譜的測定
[0060] 供試品在400MHz NMR上採用德國Bruker公司的Topspin3. 0軟體系統進行操控 測試，以1〇〇%D20鎖場，使用預飽和脈衝序列zgpr在S 4. 7處壓制水峰，在2. 2項的測試條 件下測定1H-NMR圖譜，得到一組FID信號。經過傅立葉變換、窗函數擬合、相位與基線校正 後，得到複方丹參滴丸的 1Η-NMR指紋圖譜。
[0061] 2. 4圖譜與分析數據的處理
[0062]用MetresNova軟體在δ 〇. 〇?1〇_ 〇範圍進行分段積分，以〇. 〇4ppm為最小間隔 積分，得到249個數據點，即每段化學位移下的相對峰面積積分值，並建立資料庫，根據雙 定性相似度計算原理，利用Excel軟體進行相似度分析。
[0063] 2. 5雙定性相似度計算方法[9'
[0064] N個數值組成的行（Χι,χ2，···，χη)稱為N維向量，簡記為大寫字母X。如果存在兩 個向量X及Υ則Χ，Υ之間的向量夾角按照（1)式計算。如果 cos Θ越接近丨則說明兩個向 量越相似。因此，將供試品的各指紋峰峰面積構成樣品指紋向量XzUp χ2，…,χη)，對照指紋 圖譜的各指紋峰峰面積構成對照指紋向量Y=(yi，y 2，…，yn)，其中Xi與yi為各指紋峰面積， 計算X與Y的夾角餘弦（公式1)，稱為定性相似度S，該指標能清晰地反映樣品化學成分與 對照指紋圖譜化學成分在分布比例上的相似程度，其特點是受大峰影響嚴重，很難反映小 峰丟失。
[0065]

【權利要求】
1. 一種複方丹參滴丸的質量測定方法，其特徵在於用1H-NMR技術測定複方丹參滴丸 的指紋圖譜，具體步驟如下： 1) 樣品預處理：複方丹參滴丸溶解於純水後加二氯甲烷混合離心，取上層水溶液，力口 入D20溶解混勻，備用； 2) 測定條件：在實驗室條件下，調整核磁共振波譜儀的掃描次數和接受增益； 3) 圖譜的測定：使用預飽和脈衝序列壓制水峰，在上述測定條件下，得到複方丹參滴 丸的1H-NMR指紋圖譜。 4) 相似度計算：用軟體計算樣品圖譜與標準圖譜的相似度，用於評價待測樣品複方丹 參滴丸的質量。
2. 如權利要求1所述的測定方法，其特徵在於步驟如下： 1) 樣品預處理：複方丹參滴丸加入純水中，超聲溶解，〇. 03?0. lg/mL，再加入二氯甲 烷，渦旋混合，離心取上層水溶液，凍幹，加入〇. 2-1倍所取上層溶液體積的含0. 05%TMSP的 D2〇混勾，備用； 2) 測定條件：在實驗室條件下，調整核磁共振波譜儀的掃描次數和接受增益； 3) 圖譜的測定：使用預飽和脈衝序列zgpr在δ 4. 65?4. 75處壓制水峰，在上述測定 條件下，得到複方丹參滴丸的1H-NMR指紋圖譜。 4) 相似度計算：用軟體計算樣品圖譜與標準圖譜的相似度，用於評價待測樣品複方丹 參滴丸的質量。
3. 如權利要求1所述的測定方法，其特徵在於步驟如下： 1) 樣品預處理：複方丹參滴丸加入純水中，超聲10?30min溶解0. 03?0. lg/mL，再加 入1-3倍樣品體積二氯甲燒，潤旋混合2?lOmin，於3000?6000轉/min離心5?30min， 取上層水溶液，凍幹，加入0. 2-1倍所取上層溶液體積的含0. 05%TMSP的D20混勻，備用； 2) 測定條件：在實驗室條件下，調整核磁共振波譜儀的掃描次數和接受增益； 3) 圖譜的測定：使用預飽和脈衝序列zgpr在δ 4. 65?4. 75處壓制水峰，在上述測定 條件下，得到複方丹參滴丸的1H-NMR指紋圖譜。 4) 相似度計算：用軟體計算樣品圖譜與標準圖譜的相似度，用於評價待測樣品複方丹 參滴丸的質量。
4. 如權利要求1所述的測定方法，其特徵在於步驟如下： 1) 樣品預處理：複方丹參滴丸加入純水中，超聲10?30min溶解，0. 03?0. lg/mL， 再加入1-3倍樣品體積二氯甲烷，渦旋混合2?lOmin，於3000?6000轉/min離心5? 30min，取上層水溶液，凍幹，加入0. 3-0. 8倍所取上層溶液體積的含0. 05%TMSP的D20混勻， 備用； 2) 測定條件：在實驗室條件下，調整核磁共振波譜儀的掃描次數和接受增益； 3) 圖譜的測定：使用預飽和脈衝序列zgpr在δ 4. 65?4. 75處壓制水峰，在上述測定 條件下，得到複方丹參滴丸的1H-NMR指紋圖譜。 4) 相似度計算：用軟體計算樣品圖譜與標準圖譜的相似度，用於評價待測樣品複方丹 參滴丸的質量。
5. 如權利要求1所述的測定方法，其特徵在於步驟如下： 1)樣品預處理：複方丹參滴丸加入純水中，超聲20min溶解，0. 0625g/mL，再加入1-3 倍樣品體積二氯甲燒，潤旋混合2?lOmin，於3000?6000轉/min離心5?30min，取上 層水溶液，凍幹加入〇. 3-0. 6倍所取上層溶液體積的含0. 05%TMSP的D20混勻，備用； 2) 測定條件：在實驗室條件下，調整核磁共振波譜儀的掃描次數和接受增益； 3) 圖譜的測定：使用預飽和脈衝序列zgpr在δ 4. 65?4. 75處壓制水峰，在上述測定 條件下，得到複方丹參滴丸的1H-NMR指紋圖譜。 4) 相似度計算：用軟體計算樣品圖譜與標準圖譜的相似度，用於評價待測樣品複方丹 參滴丸的質量。
6. 如權利要求1所述的測定方法，其特徵在於步驟如下： 1) 樣品預處理：5粒25mg/粒複方丹參滴丸加入2mL純水中，超聲20min溶解，再加 入3mL二氯甲燒，潤旋混合5min，4500轉/min離心15min，取上層水溶液0. 8mL凍幹，加入 0. 45mL含0. 05%TMSP的D20溶解混勻，備用； 2) 測定條件：實驗溫度為298K ;譜寬（SWH)6410. 256Hz ;採樣數據點（TD)32768 ;掃描 次數（NS) 16次；延遲時間（Dl) 2s ;接受增益（RG) 128 ; 3) 圖譜的測定：以100%D20鎖場，使用預飽和脈衝序列zgpr在δ 4. 7處壓制水峰，在上 述測定條件下，得到複方丹參滴丸的1H-NMR指紋圖譜； 4) 相似度計算：所得的1H-NMR圖譜在δ 〇. 〇?10. 〇範圍進行分段積分，以〇. 〇4ppm 為最小間隔積分，得到249個數據點，即每段化學位移下的相對峰面積積分值，並建立數據 庫，根據雙定性相似度計算原理進行相似度分析。
7. 如權利要求1所述的測定方法，其特徵在於步驟如下： 1) 樣品預處理：複方丹參滴丸加入純水中，超聲溶解，得〇. 25-1. 25g/mL待測樣品， 再加入1-3倍樣品體積二氯甲烷，渦旋混合2?lOmin，於3000?6000轉/min離心5? 30min，取上層水溶液，加入1/7-1/10倍所取上層溶液體積的含0. 05%TMSP的D20混勻，備 用； 2) 測定條件：在實驗室條件下，調整核磁共振波譜儀的掃描次數和接受增益； 3) 圖譜的測定：使用預飽和脈衝序列zgpr、zgcpgppr、wet、noesygpprld在δ 4. 65? 4. 75處壓制水峰，在上述測定條件下，得到複方丹參滴丸的1H-NMR指紋圖譜。 4) 相似度計算：用軟體計算樣品圖譜與標準圖譜的相似度，用於評價待測樣品複方丹 參滴丸的質量。
8. 如權利要求7所述的測定方法，其特徵在於步驟如下： 1) 樣品預處理：複方丹參滴丸加入純水中，超聲溶解，得〇. 5-lg/mL待測樣品，再加入 1-3倍樣品體積二氯甲燒，潤旋混合2?lOmin，於3000?6000轉/min離心5?30min，取 上層水溶液，加入1/7-1/10倍所取上層溶液體積的含0. 05%TMSP的D20混勻，備用； 2) 測定條件：實驗溫度為298K ;譜寬（SWH)6410. 256Hz ;採樣數據點（TD)32768 ;掃描 次數（NS) 32-64次；延遲時間（Dl) 2s ;接受增益（RG) 128 ; 3) 圖譜的測定：以90%純水-10%D20溶液鎖場，使用預飽和脈衝序列zgpr、zgcpgppr、 wet、noesygpprld在δ 4. 7處壓制水峰，在上述測定條件下，得到複方丹參滴丸的1H-NMR指 紋圖譜； 4) 相似度計算：用軟體計算樣品圖譜與標準圖譜的相似度，用於評價待測樣品複方丹 參滴丸的質量。
9.如權利要求7所述的測定方法，其特徵在於步驟如下： 1) 樣品預處理：複方丹參滴丸加入純水中，超聲15min溶解，得0. 75g/mL待測樣品，再 加入1. 5倍樣品體積二氯甲燒，潤旋混合5min，於4500轉/min離心15min，取上層水溶液， 加入1/9所取上層溶液體積的含0. 05%TMSP的D20混勻，備用； 2) 測定條件：實驗溫度為298K ;譜寬（SWH)6410. 256Hz ;採樣數據點（TD)32768 ;掃描 次數（NS) 32-64次；延遲時間（Dl) 2s ;接受增益（RG) 128 ; 3) 圖譜的測定：以90%純水-10%D20溶液鎖場，使用預飽和脈衝序列zgpr、zgcpgppr、 wet、noesygpprld在δ 4. 7處壓制水峰，在上述測定條件下，得到複方丹參滴丸的1H-NMR指 紋圖譜； 4) 相似度計算：所得的1H-NMR圖譜在δ 〇. 〇?10. 〇範圍進行分段積分，以〇. 〇4ppm 為最小間隔積分，得到249個數據點，即每段化學位移下的相對峰面積積分值，並建立數據 庫，根據雙定性相似度計算原理進行相似度分析。
【文檔編號】G01N24/08GK104297277SQ201310295543
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2013年7月15日 優先權日:2013年7月15日
【發明者】孫鶴, 褚揚, 李偉, 靳元鵬, 張宇, 馬曉慧, 李雲飛, 王國成, 周水平, 郭治昕, 朱永宏 申請人:天士力製藥集團股份有限公司