用於肝病合併營養不良的藥食組合物及其製劑和製備應用的製作方法

2023-05-21 17:10:12

本發明屬於藥物組合物領域，具體涉及中藥藥物組合物領域，尤其涉及一種治療肝病合併營養不良的藥食組合物及其製劑和製備應用。

背景技術：

肝病患者普遍存在營養不良，特別是肝硬化和肝癌等重症患者營養不良發生率極高。肝病患者存在的營養不良問題，近年來受到業內高度重視，對營養不良的危害性和營養幹預的重要性高度重視。肝臟具有極其複雜的功能,是糖、脂肪、蛋白質代謝的中心器官。以肝硬化為例，由於肝臟結構發生異常，功能發生改變，與之相關的各條代謝途徑存在不同程度代謝障礙，肝硬化患者幾乎都存在不同程度的營養不良。即使Child-Pugh分級為A級的患者，營養不良率也高達25％。並且隨著Child-Pugh分級的增加，營養不良的發生率亦隨之增加。肝硬化進展與營養不良的嚴重程度密切相關，對肝硬化患者的治療和預後也有著非常嚴重的影響。(註：Child-Pugh分級是目前國際上對肝病患者肝功能狀態優劣的一種最通用的分級方法，分為A、B、C三級，A級肝功能狀態最好，C級則最差)

蛋白質-能量營養不良在肝硬化患者中最常見。肝臟受損時，主要影響白蛋白的合成、胺基酸代謝異常和尿素的合成變化。其中胺基酸的代謝異常表現尤為突出。胺基酸代謝異常是引起肝硬化併發症的重要發病機制，如肝性腦病、低蛋白血症、胰島素抵抗等。首先，胺基酸是構成蛋白質的基本單位,其中血漿(清)胺基酸尤其是支鏈胺基酸濃度與白蛋白濃度密切相關，而白蛋白濃度與肝硬化腹水等併發症的出現有很大關係。其次，胺基酸失衡(支鏈胺基酸和芳香族胺基酸比值的下降)是肝性腦病的重要發病機制之一。支鏈胺基酸主要包括亮氨酸、異亮氨酸及纈氨酸,是維持人體大腦正常功能的必需物質。芳香族胺基酸主要包括苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸,能促進假性神經遞質的合成而競爭內源性的多巴胺和去甲腎上腺素。因此,如何改善胺基酸代謝異常是減少肝硬化併發症的關鍵。有研究表明：補充支鏈胺基酸可明顯促進肝性腦病的恢復，並且可以對抗分解代謝，促進血漿白蛋白合成，加速肝臟再生。如何通過適當營養素進行營養幹預改善肝硬化患者胺基酸失衡狀態從而治療肝硬化及其合併症是臨床醫師及研究者關注的熱點問題。

肝病患者最常出現的症狀有食欲不振、腹脹等，這些症狀會導致病人攝食減少，營養攝入不足，是導致患者營養不良的常見病因。另外，患者口服多種藥物，往往會進一步影響食慾和胃的攝入量。而住院病人還會由於大量輸液而增加腹脹感，頻繁抽血、放腹水等導致的營養物質丟失，以及為配合檢查和治療而頻繁的限制飲食，因為很多檢查需要空腹進行。肝硬化的病人還會經常被限制鈉鹽、葡萄糖、蛋白質的攝入，以上多種因素都會導致肝病患者的營養不良進入惡性循環，即營養不良造成肝病進行性加重，反過來肝病又進一步限制了飲食營養的攝入和消化吸收。如何打破這一惡性循環是醫學上的難題。

目前臨床最常用的解決方案是腸內營養方案和腸外營養方案。腸內營養也就是經口補充營養素，目前臨床常用的口服營養素有多種，但存在的問題主要是：①缺少針對肝病患者專用的口服營養補充劑，目前市售的僅有美國生產的「紐娃(Noveliver)」是專門針對肝病的營養素，是目前全球唯一針對肝病患者的新型複合營養及免疫調節素，含有豐富的胺基酸等營養物質，廣泛應用於營養不良的肝硬化患者。其他非針對性營養素則需要專業人員的調配才能服用。②目前所有的營養補充劑均為單純補充營養素，而沒有考慮患者的基礎肝病是導致患者營養攝入及吸收障礙的根本因素。單純補充營養素往往由於患者肝功能不全，消化吸收功能差等原因而導致攝入或吸收障礙而作用不佳，達不到預期的目的。

技術實現要素：

本發明主要解決的技術問題是如何將補充營養素與改善肝功能和消化吸收功能同步進行的問題。

針對肝病患者及其同時存在的營養不良問題，現有技術存在很多不足：

西醫對肝病營養不良的幹預可以分為腸外營養補充和腸內營養補充兩大方法。腸外營養即指經靜脈營養補充，常用的為白蛋白、葡萄糖、脂肪乳、胺基酸等，該方案的優點是起效快，但缺點較多：①價格高昂，人血白蛋白在肝病患者最常用，但除了價格高昂之外，還常出現貨源緊張，另外因為人血白蛋白是血液製品，存在一定程度的用藥風險。②效果不持久，經靜脈補充營養素常在短時間內被代謝掉，而作用不持久。③靜脈輸注脂肪乳可增加感染風險，並有很強的血管刺激，因而臨床應用受到很大的限制。

腸內營養是指經口補充營養素，目前臨床有很多配方營養素，較多用於外科術後患者。對於肝功能失代償的患者，常因噁心、腹脹等因素導致患者不能很好接受腸內營養治療方案。腸內營養素不能解決食慾和腹脹的問題，是其明顯不足。

本發明的目的是克服現有技術的不足之處，解決以上現有技術所帶來的問題，為合併營養不良的肝病患者，特別是重症肝病患者提供一種由藥食兩用中藥配方而成的，既能補充營養素又能保肝且促進營養吸收的製劑，以克服既往營養方案不能同時解決補充營養素和促進吸收同時進行的缺陷。

本發明的發明人在長期從事肝病臨床診療過程中，認識到營養不良是導致肝病患者預後不良的重要因素。結合臨床經驗，開發了一種養肝運脾方，兼顧了營養素補充、保肝、增進食慾、減輕腹脹等多個環節，臨床具有明顯的優勢。

具體而言，本發明提供了一種治療肝病合併營養不良的藥食組合物及其製劑和製備應用。

具體而言，本發明提供了一種用於肝病合併營養不良的藥食組合物，其含有下述幾種組分：枸杞、山藥、山楂、麥芽和萊菔子。

優選的，上述藥食組合物，按重量份計，包含枸杞6-12份，山藥15-30份，山楂9-15份，麥芽9-15份，和萊菔子1-10份。

優選的，上述藥食組合物，按重量份計，包含枸杞10-12份，山藥20-28份，山楂12-15份，麥芽12-15份，和萊菔子5-10份。

優選的，上述藥食組合物，按重量份計，包括枸杞15份、山藥15份、山楂15份、麥芽15份和萊菔子9份。

第二方面，本發明提供了一種用於肝病合併營養不良的中藥製劑，所述中藥製劑包括以上任一項所述的藥食組合物作為活性成分和輔料。

優選的，所述輔料包括乳清蛋白、維生素、蜂蜜、糊精、澱粉和/或蛋白粉中的至少一種。

優選的，所述製劑的劑型包括湯劑、衝劑、片劑、口服液、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、散劑或注射劑。

第三方面，本發明提供了一種用於肝病合併營養不良的試劑盒，所述中藥製劑試劑盒含有中藥製劑試劑單元，每個試劑單元含有以上任一項所述的藥食組合物的有效用量為0.1g-3g。

優選的，所述中藥製劑試劑盒含有1-5個試劑單元。

第四方面，本發明提供了一種用於肝病合併營養不良的湯劑的製備方法，包括如下步驟：將以上任一項所述的藥物組合物中的各原料浸泡煎煮，分出水煎劑；向剩餘藥材中加水煎煮過篩，分出水煎劑；合併水煎劑。

第五方面，本發明提供了以上任一項所述的藥食組合物或任一項所述的中藥製劑或者所述的試劑盒在製備治療肝病合併營養不良的藥物領域或者在製備保肝護肝的保健品或食品領域中的應用。本發明所取得的有益效果為：(1)價格低廉。紐娃含有極為豐富與平衡的胺基酸、維生素、微量元素，以及特殊的生物鹼、黃酮、腺苷，是肝細胞白蛋白原料提供劑和蛋白合成激活劑，有益於促進肝臟白蛋白自發合成，緩解肝硬化時的低蛋白狀態。紐娃(Noveliver)是目前全球唯一針對肝病患者的新型複合營養及免疫調節素，含有豐富的胺基酸等營養物質，廣泛應用於營養不良的肝硬化患者。但是紐娃的價格為每月1920元，價格高，使肝硬化患者在治療疾病的同時還需大量費用花在改善營養方面。養肝運脾方五味中藥，價格低廉，每月的價格為幾十元。

(2)口感良好。紐娃服用時配合酸奶或水，成糊狀，無味。肝硬化患者食慾下降，這種口感必然會影響進食。養肝運脾方口味酸甜，水煎劑質稀便於服用。

(3)本方面提供的藥物組合物具有補充營養素和改善肝功能，改善食慾和減輕腹脹的多種作用，同時安全性好，口感良好，價格低廉，在肝病患者的營養補充方面，具有明顯的優勢。

附圖說明

圖1為實施例二建立大鼠肝硬化模型時正常組大鼠腎組織電鏡圖。

圖2為實施例二建立大鼠肝硬化模型時低劑量組大鼠腎組織電鏡組。

圖3為實施例二建立大鼠肝硬化模型時高劑量組大鼠腎組織電鏡組。

圖4為實施例三動物實驗部分，給藥期大鼠體重變化圖。

圖5為實施例三動物實驗部分，正常組與模型組大鼠胺基酸變化圖。

圖6為實施例三動物實驗部分，模型組、紐娃治療組和中藥治療組大鼠酪氨酸水平變化圖。

圖7為實施例三動物實驗部分，模型組、紐娃治療組和中藥治療組大鼠色氨酸水平變化圖。

圖8為實施例三動物實驗部分，模型組、紐娃治療組和中藥治療組大鼠苯丙氨酸水平變化圖。

圖9為實施例三動物實驗部分，模型組、紐娃治療組和中藥治療組大鼠異亮氨酸水平變化圖。

圖10為實施例三動物實驗部分，模型組、紐娃治療組和中藥治療組大鼠纈氨酸水平變化圖。

圖11為實施例三動物實驗部分，模型組、紐娃治療組和中藥治療組大鼠亮氨酸水平變化圖。

圖12為實施例三動物實驗部分，模型組、紐娃治療組和中藥治療組大鼠支鏈胺基酸水平變化圖。

圖13為實施例三動物實驗部分，模型組、紐娃治療組和中藥治療組大鼠芳香族胺基酸水平變化圖。

圖14為實施例三動物實驗部分，模型組、紐娃治療組和中藥治療組大鼠支芳比水平變化圖。

具體實施方式

如上所述，針對現有技術的不足，本發明的目的在於提供了一種治療肝病合併營養不良的藥食組合物，在保證藥效的基礎上，增加患者的耐受性。

本發明所述的藥食組合物，是指可以作為藥物，用於肝病合併營養不良的患者；同時，也可以用來作為食品或者保健品，用於健康人群的保健和食用。

中醫學一般根據患者的症狀體徵及臨床特點，把肝硬化分屬於：脅痛，黃疸，癥積，痞塊，臌脹，水臌，蜘蛛蠱等。中醫證型大致分為肝氣鬱結證、脾虛溼盛證、溼熱內蘊證、肝腎陰虛證、脾腎陽虛、肝血瘀阻證等，養肝運脾方包括枸杞、山藥、山楂、麥芽、萊菔子等5味，枸杞滋補肝腎且能補血；山藥大補肺脾腎三髒之氣；枸杞配合山藥，氣血雙補，補益肝脾肺腎四髒；山楂善消肉積且能活血柔肝；麥芽善消面積且能理氣。四藥合用，具有養血柔肝、健脾消導之功效。既能補充肝臟所需的營養物質，又能調整臟器代謝功能，促進營養素的吸收，優於單純的營養素補充方案，而且以上藥物具有安全、廉價的優勢。現代研究表明：五藥含有豐富胺基酸、微量元素等，在改善肝硬化營養不良、胺基酸代謝失常中，具有一定的意義。

養肝運脾方是首都醫科大學附屬北京佑安醫院中西醫結合肝病重點學科開發的中藥經驗秘方，學科在長期從事肝病臨床診療過程中，認識到營養不良是導致肝病患者預後不良的重要因素。我們基於肝硬化合併營養不良的病因病機，採用養血柔肝、健脾消導法組方，選用山藥、山楂、麥芽、枸杞、萊菔子等5味藥食同源的中藥組成，用於治療肝硬化患者的營養不良。前期臨床研究表明，本方具有安全、無副作用、口感良好、服用方便、成本低廉等優勢，通過改善肝硬化患者的消化吸收功能以及補充微量元素和抗氧化作用機制，對肝硬化合併營養不良具有一定的治療作用，較目前西醫的營養素補充具有明顯優勢。

而且，本發明提供的主要活性成分配方，其包含枸杞、山藥、山楂、麥芽、萊菔子等5味中藥組成，一方面可以用於治療肝病營養不良，另一方面可以作為保肝護肝的產品，用於正常人群的食用和保健。本發明提到的五味中藥可以經過處理，例如包括各味中藥的各種炮製方法，如麥芽，包括生麥芽、炒麥芽、焦麥芽等。也可以不經過特殊處理，將中藥藥材調配進行常規的浸泡煎煮等。

具體的，在本發明的一種優選實施方式中，所述藥食組合物按重量份計，包含以下物質作為活性成分：枸杞6-12份、山藥15-30份、山楂9-15份、麥芽9-15份和萊菔子1-10份；在此基礎上還可以添加黃精5-40份、和/或雞內金3-30份。黃精以根莖入藥，味甘，性平，具有補氣養陰，健脾，潤肺，益腎功能，可以作為滋補之品；雞內金味甘，性平，可以健胃消食。

本發明的養肝健脾方包含枸杞、山藥、山楂、麥芽和萊菔子等5味藥食同源的中藥作為活性成分，在此基礎上可在主方的基礎上隨證加減。同時可以添加其他輔料製備成不同的中藥劑型。所述輔料包括賦形劑以及其他營養性的原料，例如乳清蛋白、蛋白粉和/或維生素等等。所述輔料例如可以佔到所述製劑的20％到90％，優選佔到30％-90％，優選佔到40％-90％，優選佔到50％-90％，優選佔到60％-90％，優選佔到70％-90％。例如可以加入蜂蜜等輔料，按照本領域常用的比例，作成蜜丸食用。

其中在一種優選實施方式中，本發明提供了一種用於肝病合併營養不良的中藥製劑試劑盒，所述中藥製劑試劑盒含有試劑單元，每個試劑單元含有枸杞、山藥、山楂、麥芽和萊菔子作為活性組分，所述的藥食組合物的有效用量為每個試劑單元每kg體重人群對應0.1g/天-3g/天。患者或者是健康人群在藥用或者食用時，可以根據個人需要每天攝取一個或者三個試劑單元。作為藥物使用時，其臨床用量可以參照上述值，即為0.1g/kg/天-3g/kg/天。

另外，所述試劑單元可以根據實際製成的劑型的不同，在0.1g/kg/天-3g/kg/天變化。例如，如果是製成丸劑、散劑、片劑等劑型時給藥量要小，而製成湯劑或者口服液時給藥量要大。

其中，枸杞、山藥、山楂、麥芽、萊菔子等均為本領域常用的中藥原料，同時收錄在《中國藥典》中。

枸杞：漿果紅色，卵狀，栽培者可成長矩圓狀或長橢圓狀，頂端尖或鈍，長7-15毫米，栽培者長可達2.2釐米，直徑5-8毫米。種子扁腎臟形，長2.5-3毫米，黃色。花果期6-11月。《神農本草經》中稱枸杞「味苦寒，主五內邪氣，熱中，消渴，周痺。久服能堅筋骨，輕身不老」。現代藥理研究表明，枸杞含蛋白質、脂肪、糖、微量元素、胡蘿蔔素、核黃素以及鈣、磷、鐵等多種礦物質和18種胺基酸。

山藥：本品略呈圓柱形，彎曲而稍扁，長15～30cm，直徑1.5～6cm。表面黃白色或淡黃色，有縱溝、縱皺紋及鬚根痕，偶有淺棕色外皮殘留。體重，質堅實，不易折斷，斷面白色，粉性。無臭，味淡、微酸，嚼之發黏。光山藥呈圓柱形，兩端平齊，長9～18cm，直徑1.5～3cm。表面光滑，白色或黃白色。又稱薯蕷，《神農本草經》中記載：薯蕷，味甘，溫。主傷中，補虛羸，除寒熱邪氣。補中，益氣力，長肌肉。久服耳目聰明，輕身，不飢，延年。現代學分析，山藥含皂苷、粘液質、蛋白質、膽鹼、澱粉、多糖、胺基酸、多酚氧化酶、維生素及微量元素等成分。

山楂：果實近球形或梨形，直徑1-1.5釐米，深紅色，有淺色斑點；小核3-5，外面稍具稜，內面兩側平滑；萼片脫落很遲，先端留一圓形深窪。花期5-6月，果期9-10月，幹制後可入藥。《日用本草》：化食積，行結氣，健胃寬膈，消血痞氣塊。《本草綱目》：化飲食，消肉積，癥瘕，痰飲痞滿吞酸，滯血痛脹。現代學研究表明，山楂含有山楂的主要成分為黃酮類及有機酸類化合物(兒茶精、槲皮素、金絲桃甙、綠原酸、山楂酸、檸檬酸、苦杏仁甙等)，另外尚含有磷脂、維生素等。

麥芽：本品呈梭形，長8～12mm，直徑3～4mm。表面淡黃色，背面為外稃包圍，具5脈；腹面為內稃包圍。除去內外稃後，腹面有1條縱溝；基部胚根處生出幼芽和鬚根，幼芽長披針狀條形，長約5mm。鬚根數條，纖細而彎曲。質硬，斷面白色，粉性。氣微，味微甘。《本草綱目》：麥糵、谷芽、粟糵，能消導米麵諸果食積。現代學研究表明，麥芽含有澱粉、微量元素、胺基酸等成分。

萊菔子：為十字花科植物蘿蔔Raphanus sativus L.的乾燥成熟種子。夏季果實成熟時採割植株，曬乾，搓出種子，除去雜質，再曬乾。本品呈類卵圓形或橢圓形，稍扁，長2.5～4mm，寬2～3mm。表面黃棕色、紅棕色或灰棕色。一端有深棕色圓形種臍，一側有數條縱溝。種皮薄而脆，子葉2，黃白色，有油性。氣微，味淡、微苦辛。辛、甘，平。歸肺、脾、胃經。消食除脹，降氣化痰。用於飲食停滯，脘腹脹痛，大便秘結，積滯瀉痢，痰壅喘咳。

下面結合具體實施方式對本發明作進一步詳細的說明。但是這些實施例僅為本發明的代表舉例而已，不應理解為本發明實施的限定範圍。此外，凡是對本發明配方、生產工藝步驟的簡單替換或變化，均屬於本發明的保護範圍。本發明組合物中所用的原料均為本領域技術人員常用的原料。

其中，本發明所提到的胺基酸，參照本領域通用的胺基酸的表述方式，即用三個字母表示胺基酸，分別如下：

絲氨酸(Ser)；甘氨酸(Gly)；組氨酸(His)；蘇氨酸(Thr)；穀氨酸(Glu)；穀氨醯胺(Gln)；天門冬氨酸(Asp)；天門冬醯胺(Asn)；丙氨酸(Ala)；精氨酸(Arg)；脯氨酸(Pro)；半胱氨酸(Cys)；賴氨酸(Lys)；甲硫氨酸(Met)；纈氨酸(Val)；酪氨酸(Tyr)；異亮氨酸(Ile)；亮氨酸(Leu)；苯丙氨酸(Phe)；色氨酸(Trp)；支鏈胺基酸(BCAA)；芳香族胺基酸(AAA)。

實施例一

配製方法：以重量份計算，稱取枸杞15g、山藥15g、山楂15g、麥芽15g和萊菔子9g等五味中藥，煎藥前首先將藥物加涼水浸泡20分鐘左右，有利於藥物有效成分的析出。加水後使中藥完全浸泡於水中，水面要高出中藥2-3cm，煎藥先用大火煮沸後，再用文火煮，每劑應煎兩次，第一次煎制時間為開鍋後30分鐘，第二次用開水量較第一次應少，煎制的時間為開鍋後40分鐘，兩次各取藥汁200毫升，共計400毫升，混合均勻後，備用。最終製得的藥液為69g中藥組合物對應於400mL藥液。

實施例二大鼠肝硬化模型的建立

1.材料

1.1實驗動物

SPF級健康SD大鼠，雄性，4-6周齡，體重為180±20g/只，共30隻。由北京軍事研究所提供，在北京市肝病研究所動物房飼養。所有動物在實驗前均予普通飼料適應性餵養一周。所有飼料、飲水及墊料達到清潔標準，環境清潔安靜，溫度控制在26±2℃，溼度控制在60±10％。

1.2主要試劑

四氯化碳國藥集團化學試劑有限公司

橄欖油北京華源生命科貿發展有限公司

1.3儀器設備

2.方法

2.1四氯化碳油溶液的製備

四氯化碳(CCl4)與橄欖油按體積比配置40％及50％濃度的四氯化碳油溶液，充分攪拌溶解，室溫保存，備用。

2.2動物造模

選取30隻SPF級SD大鼠，體重200±20g，隨機分為三組，每組10隻。其中低劑量組給予腹腔注射40％CCl4橄欖油溶液,每周2次，持續8周，2.0mL/100g；高劑量組給腹腔注射50％CCl4橄欖油溶液，每周2次,持續8周2.0mL/100g；正常組注射生理鹽水，每周2次，持續8周2.0mL/100g。

8周後觀察大鼠生長狀態及存活率，留取大鼠肝臟組織病理以選取最佳的造模注射劑量。

2.3.大鼠一般狀況及相關測定

2.3.1大鼠的一般情況

觀察大鼠精神狀態、皮毛光澤、活動攝食及死亡情況。

2.3.2大鼠肝臟病理觀察

處死大鼠留取新鮮肝臟組織用HE染色，電鏡下觀察肝臟病理切片超微結構並拍照記錄。

2.4統計學分析

所有數據處理均採用SPSS17.0統計軟體對數據進行統計學分析，採用x2檢驗或Fisher精確檢驗對定性資料進行組間比較；採用t-test或ANOVA檢驗對定量資料進行組間比較。P<0.05為差異有統計學意義。

3.實驗結果

3.1大鼠的一般狀況

造模過程中，正常組大鼠表現機警，皮毛整齊有光澤，進食及活動情況均無明顯異常，無死亡。

造模組大鼠精神萎靡，皮毛欠光澤，食欲不振，活動遲緩，體形消瘦。

3.2死亡率

造模過程中，高劑量組大鼠死亡7隻，死亡率70％，低劑量組死亡2隻，死亡率20％。

3.3大鼠肝臟組織電鏡觀察

對各組肝臟組織進行電鏡觀察，在電鏡放大倍數為12000倍時，如附圖1-3所示。其中圖1為正常組大鼠電鏡圖片，圖2為低劑量組大鼠電鏡圖片，圖3為高劑量組大鼠電鏡圖片。如圖所示，正常組肝臟組織細胞結構清楚，未見明顯異常；低劑量組和高劑量組均可見肝臟纖維增生明顯，肝小葉結構紊亂，並形成不典型假小葉。

本發明通過40％、50％四氯化碳油溶液，幹預大鼠模型，觀察兩組大鼠生長變化及成模率，以尋找最佳造模濃度和劑量，儘量避免大鼠對四氯化碳反應的個體差異，以減少大鼠死亡概率，提高模型成功率。

本實驗腹腔注射四氯化碳油溶液建造大鼠肝硬化模型，所有模型組大鼠肝臟切片均可見肝臟纖維增生明顯，肝小葉結構紊亂，並形成不典型假小葉，造模成功。但在造模過程中，高劑量組死亡率為70％，考慮可能與高劑量四氯化碳肝毒作用迅速劇烈，導致大鼠急性肝衰竭而死亡，不適合進行下一步實驗研究。故本實驗確定予大鼠腹腔注射40％四氯化碳橄欖油溶液為製備肝硬化模型的適宜劑量。

實施例三動物實驗

在造模成功的基礎上，進一步研究本發明的中藥配方對於肝硬化大鼠模型胺基酸水平以及一般生長狀態的影響。其中，具體實驗過程和實驗結果如下：

1.材料

1.1實驗動物

SPF級健康SD大鼠，雄性，4-6周齡，體重為180±20g/只，共37隻。由北京軍事研究所提供，在北京市肝病研究所動物房飼養。所有動物在實驗前均予普通飼料適應性餵養一周。所有飼料、飲水及墊料達到清潔標準，環境清潔安靜，溫度控制在26±2℃，溼度控制在60±10％。

1.2藥物及試劑

四氯化碳(國藥集團化學試劑有限公司)；橄欖油(北京華源生命科貿發展有限公司)；養肝運脾方(山楂、山藥、枸杞、麥芽和萊菔子)由北京佑安醫院中藥房提供，均購自於北京杏林藥業責任有限公司，按照等效劑量係數折算法換算(參考徐叔雲教授主編的《藥理實驗方法學》)，水煎濃縮至所需濃度(即將實施例一製備的400mL的藥液濃縮至63.5mL)；紐娃(北京美澳嘉事生物技術有限公司，配製濃度為0.18g/mL)；胺基酸試劑盒：北京質譜醫學研究有限公司MSLAB-45+AA批號：MSLAB451561#；甲醇、已腈等均購自fisher。

1.3主要儀器

電子天平(德國Sartorius公司，BP1215)；低溫離心機(美國sigma公司，3-18k)；超速離心機(美國Thermo公司，WX100)；超低溫冰箱(美國Thermo公司)；全自動石蠟切片機(德國Leica公司，LEICA RM2235)；石蠟包埋機(德國Leica公司，LEICA 1150H)；光學顯微鏡(日本OLYMPUS公司，CH型)；展片機(德國Leica公司，HI1210)；照相系統(日本尼康公司，Eclipso 501型)；顯微圖像分析系統(日本尼康公司，Image-pro plus 6.0)；高效液相色譜串聯質譜聯用儀儀器型號：HPLC-MS/MS(Ultimate3000-API 3200 Q TRAP)。

2.實驗方法

37隻大鼠隨機分為正常組(7隻)、模型組(30隻)。所有模型組大鼠給予腹腔注射40％CCl4橄欖油溶液，每周2次，持續8周，2.0mL/100g。8周後模型組大鼠病理切片證實造模成功。

然後將模型組隨機等量分為3組，模型組、紐娃治療組、中藥治療組。紐娃治療組灌胃紐娃，2mL，每日一次；中藥治療組灌胃養肝運脾方，2mL，每日一次；正常組與模型組均灌胃生理鹽水，2mL，每日一次。各組均幹預治療6周。

治療期間，在0周、2周、4周、6周測量大鼠體重，尾靜脈取大鼠靜脈血0.5mL，進行血清胺基酸水平分析。治療結束後處死大鼠，留取肝臟組織行電鏡觀察病理變化。

3.統計學處理

所有數據處理均採用SPSS17.0統計軟體進行統計學分析，採用x2檢驗或Fisher精確檢驗對定性資料進行組間比較；採用t-test或ANOVA檢驗對定量資料進行組間比較。P<0.05為差異有統計學意義。

4.結果

4.1各組大鼠一般情況的比較

實驗過程中，正常組大鼠共計7隻，大鼠表現機警，皮毛整齊有光澤，進食及活動情況均無明顯異常，造模期無死亡，給藥期死亡2隻。造模組大鼠共計30隻，大鼠精神萎靡，皮毛欠光澤，食欲不振，活動遲緩，體形消瘦；其中大鼠在造模期死亡7隻，剩餘23隻模型組大鼠，隨機分為模型組(7隻)、紐娃治療組(8隻)和中藥治療組(8隻)，進行給藥處理。給藥期模型組死亡3隻，紐娃治療組死亡3隻，中藥治療組死亡2隻。給藥期三組肝硬化大鼠一般情況無明顯差異，中藥治療組大鼠體重增長比其他組有增多趨勢(P＞0.05)，如圖4所示。從圖4可以看出，治療期內給予中藥治療的大鼠，其體重增長的趨勢也比紐娃治療組更明顯。

4.2模型組大鼠與正常大鼠血清胺基酸水平比較

比較正常組大鼠和模型組(肝硬化大鼠)大鼠的血清胺基酸水平變化。與正常組比較，肝硬化大鼠血清胺基酸水平變化較大，胺基酸水平紊亂，水平升高及降低均可見，其中絲氨酸(Ser)、色氨酸(Trp)水平下降、芳香族胺基酸(AAA)水平升高、支鏈胺基酸(BCAA)與芳香族胺基酸(AAA)比值下降，差異均有統計學意義(P<0.05)。結果見圖5和表1所示。

表1 正常組與肝硬化大鼠胺基酸變化

註：與正常組比較，*P<0.05

4.3給藥期肝硬化大鼠胺基酸水平變化

在給藥期，分別於給藥後第0周，第2周，第4周，以及第6周，觀察不同組，包括模型組，中藥給藥組以及紐娃給藥組大鼠胺基酸水平變化。在觀察支芳比及相關胺基酸水平變化中發現，養肝運脾方在影響肝硬化大鼠胺基酸水平上作用與紐娃相似，組間比較基本無統計學差異；中藥治療組與模型組比較，胺基酸水平差變化異較大，其中以支芳比(BCAA/AAA)升高，芳香族胺基酸水平下降最為明顯，且差異均有統計學意義(P<0.05)。隨著肝硬化大鼠模型病程進展，大鼠體內支鏈胺基酸(包括亮氨酸、異亮氨酸及纈氨酸)、芳香族胺基酸(包括苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)及相關胺基酸水平均呈下降趨勢，其中模型組支鏈胺基酸水平下降明顯，其中異亮氨酸(Ile)、纈氨酸(Val)下降具有統計學差異(P<0.05)，中藥治療組芳香族胺基酸下降明顯，其中色氨酸(Try)下降具有統計學差異(P<0.05)。模型組支芳比值明顯下降(P<0.05)，中藥治療組及紐娃組支芳比值明顯升高(P<0.05)，且中藥治療組趨勢更加明顯。肝硬化進展中，大鼠支鏈胺基酸及芳香族胺基酸都成下降趨勢，支芳比也逐漸降低，中藥治療組在與模型組比較時，支芳比顯著提高，說明養肝運脾方有改善肝硬化大鼠支芳比的作用，且主要以減緩支鏈胺基酸的降低而改善支芳比。結果見表2-10以及圖6-圖14所示。

表2 酪氨酸水平變化