固相多分析物測試的製作方法

2023-05-16 09:28:01 1

專利名稱：固相多分析物測試的製作方法
技術領域：
本申請涉及測定樣品(如身體樣品或非身體樣品)中一種或多種分析物(例如濫 用藥物、有毒化學品、處方藥等)的存在和/或量的方法和組合物，並且更特定地為採用競 爭性免疫測試來實現這一目標的方法和組合物。在一些實施方式中，方法和組合物可用於 同時、並行或連續測定樣品中兩種或多種分析物的存在或量。本申請描述了包含結合在一 個固相上的兩種或多種不同分析物的固相分析物組合物，以及在競爭性免疫測試中使用來 測定一種或多種目標分析物的存在和量的方法。
背景技術：
例如放射免疫測試(RIA)和酶免疫測試(EIA)等免疫測試是用於測定樣品中一種 或多種目標分析物的存在、特性和量的有效方法。許多免疫測試將特異於目標分析物的抗 體固定化在固相上，例如微孔板或珠子；檢測所結合的抗體與樣品中存在的分析物之間的 結合，例如通過使用三明治測試。其他免疫測試將分析物固定化；這些免疫測試稱為固相抗 原或固相分析物免疫測試。在固相分析物免疫測試中，固相分析物與樣品中存在的分析物 競爭結合於特異於分析物的抗體。通常，在這樣的固相分析物測試中，抗體是可以用一些方 式檢測的，例如它是被標記的，例如放射性、螢光、發光或酶(例如可以在存在合適底物時 發生酶反應，產生顏色變化)標記的，或是它的存在可以通過本身被標記的第二抗體來檢 測。為了測定特定的樣品是否包含一種以上的目標分析物，以前的方法通常採用單獨 的固相組分(例如單獨的微孔板或是幾套微珠)，每種固相組分包含特異於一種特定分析 物的結合抗體，或是每種固相組分包含單一類型的結合分析物。這樣針對每種分析物需要 單獨的固相組分，使得多分析物測試昂貴、技術複雜並且花時間。需要能有一種有效且相對 便宜的分析物檢測方法，能夠快速測定樣品中一種或多種分析物的存在和/或量，包括例 如濫用藥物等分析物。發明簡述免疫測試是檢測樣品中分析物的存在和/或量的有力工具。然而，能夠檢測樣品 中的多種分析物，通常需要使用多個單獨的測試，例如每種目標分析物一個測試，這就提高 了成本、時間和過程的技術複雜性，並且導致操作者可能在多個步驟中的一個步驟產生誤 差。發明者驚奇地發現使用包含結合在一個固相上的至少兩種分析物的固相分析物組合 物，能夠提高多分析物測試的性能，表現出高靈敏度和高效率。本發明所述的多分析物測試 很靈活，可以同時、連續或並行進行，從而降低成本、時間和過程的複雜性。因此，本發明提供了一種測定樣品中目標分析物的存在的方法，包括(a)使固相分析物組合物接觸i)抗體，其中所述抗體特異於所述目標分析物；和ii)樣品；其中所述固相分析物組合物包含結合在固相支持物上的至少兩種不同的分析 物，其中所述至少兩種不同的分析物中的一種為目標分析物，以及(b)測定樣品中是否存在目標分析物。在一些實施方式中，固相分析物組合物首先與樣品相接觸，然後與抗體相接觸。在 一些實施方式中，抗體可檢測標記，例如，標有螢光、發光(包括化學發光或生物發光)、放 射性或酶標記物等可檢測標記物。在一些實施方式中，抗體沒有被標記。在一些實施方式中，方法包括去除沒有結合於固相分析物組合物的抗體。在一些實施方式中，方法包括如果存在分析物，測定分析物存在的量。在一些實施方式中，通過比較樣品中結合於固相分析物組合物的抗體產生的信號 和不包含目標分析物的對照樣品中結合於固相分析物組合物的抗體產生的信號來測定樣 品中存在分析物。在一些實施方式中，結合於固相分析物組合物的抗體產生的信號是由抗體上的可 檢測標記物產生的。在一些實施方式中，結合於固相分析物組合物的抗體產生的信號是由第二抗體與 所述抗體結合產生的，其中所述第二抗體被可檢測標記。在一些實施方式中，可檢測的標記物為螢光、發光(包括化學發光或生物發光)、 放射性或酶標記物。在一些實施方式中，方法還包括將固相分析物組合物與一個第二抗體相接觸，其 中第二抗體特異於結合於固相的至少第二個不同分析物，並且測定樣品中是否存在第二分 析物。在方法的一些實施方式中，至少兩種不同的分析物直接地或間接地非共價結合於 固相。在一些實施方式中，至少兩種不同的分析物直接地或間接地共價結合於固相。在一些實施方式中，至少兩種不同的分析物通過吸附直接地或間接地結合於固 相。在一些實施方式中，至少兩種不同的分析物是共價結合於結合劑，所述結合劑非 共價地或通過吸附結合於固相。在一些實施方式中，結合劑選自HSA和BSA。在一些實施方式中，至少兩種不同的分析物為濫用藥物或其代謝物。濫用 藥物或其代謝物可選自古柯鹼、苯醯牙子鹼、古柯乙烯(cocaethylene)、去甲古柯鹼 (norcocaine)、PCP、苯丙胺、甲基苯丙胺、大麻素、THC、羧基-THC、海洛因、可待因、嗎啡， 6-單乙醯嗎啡(MAM)、羥考酮、3，4-亞甲基二氧苯丙胺(MDA)或3，4-亞甲基二氧甲基苯丙 胺(MDMA)。樣品可為身體樣品或來源於身體樣品的樣品。身體樣品可來源於人，並且為選自腦、心、肺、腎、肝、肌肉、骨、胃、腸和皮膚等的組 織樣品；選自尿、血液、血漿、血清、唾液、精液、痰、腦脊液、粘液、汗、玻璃液和乳汁等的生物 液；和角質化結構。固相支持物可為微孔板的微孔。還提供了一種測定樣品中多種(用數字「N」表示)不同的目標分析物的存在的方法，該方法包括(a)使固相分析物組合物接觸i)多種抗體，其中所述多種抗體包含特異於每種不 同目標分析物的抗體；和ii)樣品；其中所述固相分析物組合物包含結合於固相支持物的 至少「N」種不同的分析物，其中所述結合的至少「N」種不同的分析物包括多種目標分析物， 以及(b)測定多種目標分析物中每種不同的分析物是否存在於樣品中。在一些實施方式中，特異於各種不同目標分析物的抗體是可以分別檢測的。在一 些實施方式中，抗體用可檢測的螢光、發光(包括化學發光或生物發光)、放射性或酶標記 物標記。在一些實施方式中，方法包括測定如果存在的每種不同目標分析物的量。在一些實施方式中，通過比較樣品中結合於固相分析物組合物的特異於一種特定 目標分析物的抗體產生的信號和不包含特定目標分析物的對照樣品中結合於固相分析物 組合物的相同抗體產生的信號來測定樣品中存在各種不同的目標分析物。在一些實施方式中，多種抗體同時接觸固相分析物組合物。在一些實施方式中，多種抗體中的至少一種是在與多種抗體中的至少另一種抗體 不同的時間接觸固相分析物組合物。還提供了一種包含至少兩種不同的結合於固相的分析物的組合物。至少兩種不同 的分析物直接地或間接地共價結合於固相。至少兩種不同的分析物直接地或間接地非共價 結合於固相。在一些實施方式中，組合物包含2-10種不同的結合於固相的分析物。在一些實施 方式中，至少兩種不同的分析物為濫用藥物分析物或其代謝物。在一些實施方式中，至少 兩種不同的分析物選自古柯鹼、苯醯牙子鹼、古柯乙烯、去甲古柯鹼、PCP、苯丙胺、甲基苯丙 胺、大麻素、THC、羧基-THC、海洛因、可待因、嗎啡，6-單乙醯嗎啡(MAM)、羥考酮、3，4_亞甲 基二氧苯丙胺(MDA)或3，4_亞甲基二氧甲基苯丙胺(MDMA)。還提供了一種試劑盒，其包含如本發明所述的組合物，以及至少一種特異於結合 在固相上的兩種不同分析物中至少一種的抗體。在一些實施方式中，試劑盒可包含至少一 種特異於選自下組的分析物的抗體古柯鹼、苯醯牙子鹼、古柯乙烯、去甲古柯鹼、PCP、苯丙 胺、甲基苯丙胺、大麻素、THC、羧基-THC、海洛因、可待因、嗎啡，6-單乙醯嗎啡(MAM)、羥考 酮、3，4-亞甲基二氧苯丙胺(MDA)和3，4-亞甲基二氧甲基苯丙胺(MDMA)。還提供了一種測定樣品中存在目標分析物或其一種或多種代謝物的方法，包括(a)使固相分析物組合物接觸i)抗體，其中所述抗體特異於目標分析物，並且還 能結合目標分析物的一種或多種代謝物；和ii)樣品；其中所述固相分析物組合物包含結 合在固相支持物上的至少兩種不同的分析物，其中所述至少兩種不同分析物中的一種為目 標分析物，以及(b)測定樣品中是否存在目標分析物或其一種或多種代謝物。還提供了一種測定樣品中存在一種目標藥物類型的至少一個成員的方法，包括(a)使固相分析物組合物接觸i)抗體，其中所述抗體特異於目標藥物類型的成 員，並且還能結合目標藥物類型的一個或多個其他成員、或是目標藥物類型的一個成員的 一種或多種代謝物；和ii)樣品；其中所述固相分析物組合物包含結合在固相支持物上的至少兩種不同的分析物，其中所述至少兩種不同分析物中的一種為目標藥物類型的一個成 員，以及(b)測定樣品中是否存在目標藥物類型的至少一個成員。在任一種方法中，至少兩種不同分析物可選自濫用藥物、有毒化學品、環境化學 品、石油產品、天然產物、有機化合物、營養物、處方藥和非處方藥，或是前述任一物質的代 謝物、衍生物或分解產物。在方法的一些實施方法中，至少兩種不同分析物可選自鴉片樣物質、苯丙胺、 NSAIDS、類固醇、大麻素、苯並二氮革、巴比妥鹽、三環類和麻黃素，或是前述任一物質的代 謝物、衍生物或分解產物。在組合物的一些實施方式中，至少兩種不同的分析物可選自濫用藥物、有毒化學 品、環境化學品、石油產品、天然產物、有機化合物、營養物、處方藥和非處方藥，或是前述任 一物質的代謝物、衍生物或分解產物。在組合物的一些實施方式中，至少兩種不同分析物可選自鴉片樣物質、苯丙胺、 NSAIDS、類固醇、大麻素、苯並二氮革、巴比妥鹽、三環類和麻黃素，或是前述任一物質的代 謝物、衍生物或分解產物。在試劑盒的一些實施方式中，組合物包含至少兩種選自下組的不同分析物濫用 藥物、有毒化學品、環境化學品、石油產品、天然產物、有機化合物、營養物、處方藥和非處方 藥，或是前述任一物質的代謝物、衍生物或分解產物。在試劑盒的一些實施方式中，組合物包含至少兩種選自下組的不同分析物鴉片 樣物質、苯丙胺、NSAIDS、類固醇、大麻素、苯並二氮革、巴比妥鹽、三環類和麻黃素，或是前 述任一物質的代謝物、衍生物或分解產物。除非另外說明，本發明所用的所有技術和科學術語具有本發明涉及的領域普通技 術人員所通常了解的相同含義。儘管與本發明所述相似或等同的方法和材料也可用於這裡 所述方法的實踐或測試，下面描述了合適的方法和材料。本發明提到的所有的出版物、專利 申請、專利和其他參考文獻在此整體引用作為參考。萬一衝突，以本說明書為準，包括定義。 此外，材料、方法和實施例只用於說明，而不用於限制本發明。其他特性和優點將通過下列詳細說明和權利要求而顯現出來。


圖1為本發明提供的一種固相組合物(例如微孔板的微孔)的示意圖，該固相組 合物上結合有至少兩種不同的分析物，在圖中用三角形、正方形、圓形、菱形表示。示意圖顯 示了本固相組合物和方法同時測定兩種或多種分析物的存在和/或量的的能力。例如，樣 品中存在的菱形和三角形分析物與結合在固相上的菱形和三角形分析物分別競爭性結合 特異於菱形和三角形分析物的標記的抗體，導致信號丟失，例如在洗滌步驟後。特異於菱形 和三角形分析物的抗體可以進行差異標記(即這裡分別用A和B標記物)，可以分開檢測菱 形和三角形分析物。圖2為顯示採用本發明提供的固相組合物進行並行測試的示意圖。在一個並行測 試中，檢測(或測試)樣品中至少一種分析物的存在和/或量，採用本發明提供的固相組合 物(例如一個結合有至少兩種不同分析物的微孔，結合的分析物中至少一種為所測試的分析物)，至少一種不同分析物可用單獨的固相組合物(例如，相鄰的微孔同樣帶有至少兩種 不同的結合分析物，結合分析物中至少一種為所測試的至少一種不同分析物)來檢測(或 測試)。在圖中，孔1和孔2都結合了相同的4種分析物。在孔1中，顯示了檢測樣品中圓 形分析物的競爭性測試，而在孔2 (如相鄰的孔)中，顯示了檢測樣品中三角形分析物的競 爭性測試。圖3為顯示採用本發明提供的固相組合物進行連續測試的示意圖。在連續測試 中，採用本發明提供的固相組合物檢測(或測試)樣品中的至少一種分析物，接著用同一固 相組合物檢測(或測試)至少一種不同的分析物。例如，在圖中，孔1首先用於在t = 1時 檢測圓形分析物，接著在t = 2時檢測正方形分析物。在t = 2進行第二測試前，可以先去 除特異於圓形分析物的抗體；在一些實施方式中，可以在第二測試中保留特異於圓形分析 物的抗體，例如，如果它們與特異於正方形分析物的抗體是差異標記的，或是不會干擾正方 形分析物的檢測。發明詳述本發明提供了採用帶有結合於固相的至少兩種不同分析物的固相分析物組合物， 快速、靈敏且低成本檢測樣品中一種或多種不同分析物的材料和方法。材料和方法利用了 兩種或多種不同分析物結合於單個固相組分產生的驚人的效率和靈敏度。例如，每個微孔 結合有相同的兩種或多種不同分析物的微孔板，可用於在單個微孔中測定樣品中兩種或多 種不同分析物的存在和/或量，通過在競爭性免疫測試中差異標記針對兩種或多種目標分 析物中每一種的抗體；通過探測每個特異性抗體的差異信號，確定其特異於的分析物的存 在和/或量。在其他實施方式中，固相分析物組合物可用於測定兩種或多種不同分析物的存在 和/或量，通過使用分開的(但是結合了同一套兩種或多種分析物)固相分析物組合物和 特異於目標分析物的合適的標記抗體分開檢測(例如並行或平行測試)。在又一些其他實 施方式中，相同的固相組合物可用於測定兩種或多種不同分析物的存在和/或量，通過首 先用固相分析物組合物採用特異於至少第一分析物的抗體來測定至少第一分析物的存在 和/或量，然後用同一的固相分析物組合物採用特異於至少第二分析物的抗體來測定至少 第二分析物的存在和/或量，例如可為立即檢測或是在從第一測試中去除任何幹擾性物質 後檢測。這樣的測試形式可以稱為連續測試。組合物本發明提供了用於檢測樣品中一種或多種不同目標分析物(例如確定其存在和/ 或量)的組合物。組合物包含一個結合了至少兩種分析物的固相支持物，例如2，3，4，5，6， 7,8,9,10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，或20種分析物或更多。在一些實施方式中，2-5 種分析物結合於固相支持物。在其他實施方式中，5-10種分析物結合於固相支持物。這樣 的組合物在本發明中稱為固相分析物組合物。對於本領域普通技術人員而言顯而易見，儘管組合物使得測定結合於固相支持物 的總數為「N」的不同分析物的存在和/或量成為可能，一個人不需要測定(或評估)用給 定固相分析物組合物能夠測定的所有分析物的存在和/或量。例如，在一些實施方式中，它 可用於測定僅一種目標分析物的存在和/或量。在其他實施方式中，它可用於首先測定一 種或多種目標分析物是否存在，接著在測定第二或多種分析物是否存在。本發明所屬的固相組合物可用於同時、並行或連續檢測多達「N」種結合於固相的分析物。如本發明所用，短語「測定存在」表示測定分析物是否存在。因此，如果測定一種 分析物不存在，這樣的行為也還包括在本短語中。分析物可為任何化學品，包括濫用藥物、有毒化學品、環境化學品(例如農藥、除 草劑和殺蟲劑)、石油產品、天然產物、有機化合物、營養物、處方藥和非處方藥(例如鎮痛 劑、類固醇、麻醉劑、NSAIDQ，或是前述任一物質的代謝物、衍生物或分解產物。在一些實施方式中，用於結合於固相支持物的分析物為藥物，例如濫用藥物，處方 藥或鎮痛藥。特定的目標藥物類型包括鴉片樣物質、類固醇、苯丙胺、大麻素、苯並二氮革、 NSAIDS、巴比妥鹽、三環類和麻黃素。在一些實施方式中，目標分析物可選自古柯鹼(以及代謝物苯醯牙子鹼、古柯乙 烯、去甲古柯鹼)，鴉片樣物質及其代謝物(嗎啡、海洛因、6-單乙醯嗎啡、二乙醯嗎啡、可待 因、羥考酮、氫可待因酮、氫嗎啡酮、羥嗎啡酮和美沙酮)，苯環利定(PCP)，苯丙胺，甲基苯 丙胺，MDMA (迷幻劑，亞甲基二氧甲基苯丙胺)，MDA (亞甲基二氧苯丙胺)，大麻素(及THC 和羧基-THC代謝物)，丙氧芬，哌替啶，苯並二氮革(阿普唑侖，氯氮卓，地西泮，蘿拉西泮， 氟硝西泮，三唑侖和舒樂安定)，巴比妥鹽(甲基苯巴比妥，戊巴比妥)，卡立普多，曲馬多， 芬太尼，丁丙諾啡，納曲酮，三環類，尼古丁(及其代謝產物可替寧)，eve(亞甲基二氧乙基 苯丙胺)，麥角酸(LSD)，地高辛，哌醋甲酯，對乙醯氨基酚，水楊酸，氟西汀，舍曲林，右美沙 芬，麻黃素，苯乙胺，偽麻黃鹼和脫氧腎上腺素。在一些實施方式中，結合於固相支持物的分析物可為濫用藥物或其代謝物，並且 可選自下列物質古柯鹼、苯醯牙子鹼、古柯乙烯、去甲古柯鹼、PCP、苯丙胺、甲基苯丙胺、大 麻素、THC、羧基-THC、海洛因、可待因、嗎啡，6-單乙醯嗎啡(MAM)、羥考酮、3，4_亞甲基二氧 苯丙胺(MDA)和3，4-亞甲基二氧甲基苯丙胺(MDMA)。在具體實施方式
中，組合物可包含下列物質中的至少兩種古柯鹼、一種或多種鴉 片樣物質、PCP、苯丙胺和大麻素，結合於固相支持物。在具體實施方式
中，兩種或多種鎮痛 藥物選自嗎啡、可待因、羥考酮、羥嗎啡酮、氫可待因酮、氫嗎啡酮，可以結合於固相支持物。 在一些實施方式中，兩種或多種古柯鹼和一種鴉片樣物質可以結合於固相支持物。任何形式的樣品都可用於測試一種或多種目標分析物的存在和/或量。在某些情 況下，樣品包含或可能包含一種或多種目標分析物，例如一種或多種濫用藥物或有毒化學 品。樣品可為身體樣品或非身體樣品。身體樣品可以為來自個體(例如人、小鼠、大鼠、豬、 馬、猴、兔、牛、綿羊或山羊)的樣本。身體樣品可為組織樣品，例如腦、心、肺、腎、肝、肌肉、 骨、胃、腸或皮膚的組織樣品。身體樣品可以從活檢或從組織培養獲得。身體樣品可以包括 生物液，例如尿、血液、血漿、血清、唾液、精液、痰、腦脊液、粘液、汗、乳汁、玻璃液等等。身體 樣品可為角質化結構，例如毛髮、手指甲或腳趾甲。非身體樣品可為例如土壤或水樣品、植 物樣品、或無機材料樣品，或是在研究或製造過程中得到的樣品。樣品可以用作或者可以處理成為用於檢測一種或多種分析物的最終樣品。例如， 樣品可以被液化、濃縮、乾燥、稀釋、凍幹、萃取、分餾、上層析柱、純化、酸化、還原、降解、進 行酶處理、或是用本領域普通技術人員已知的方式進行處理，從而釋放出目標分析物。如果 需要，樣品可以為樣品的組合(集合)，如從一個個體或是從一個製造過程中獲得的。樣品可為各種物理狀態，例如液體、固體、乳劑或凝膠。可小心處理樣品以保持分析物的完整性。處理可以包括使用合適的緩衝液和/或抑制劑，例如某些生物酶的抑制劑。 獲知目標分析物和樣品的性質，本領域的普通技術人員能夠確定合適的條件。如本發明所用，術語「固相」和「固相支持物」可以互換使用，並且指可以結合一種 或多種分析物的任何固體或半固體材料，例如一種它們可以共價或非共價結合的材料，可 為直接或間接結合；或是一種它們能夠合為一體(例如物理包埋、吸附等)的材料；或是一 種能夠功能化以包含(例如結合)兩種或多種分析物的材料。除了分析物，固相支持物還 可包含各種材料，包括例如天然或合成的聚合物、樹脂、金屬或矽酸鹽。合適的固相支持物是本領域已知的，並且示例包括瓊脂糖(商品名為 Sepharose)；纖維素(例如羧甲基纖維素)；右旋糖酐(例如kphadex)；聚丙烯醯胺；聚苯 乙烯；聚乙二醇；樹脂；矽酸鹽；二乙烯基苯；甲基丙烯酸酯；聚甲基丙烯酸酯；玻璃；陶瓷； 紙；金屬；非金屬；聚丙烯醯嗎啉；聚醯胺 』聚(四氟乙烯)；聚乙烯；聚丙烯 』聚甲基丁 烯)；聚(乙烯對苯二酸酯)；人造絲，尼龍，聚(乙烯丁酸酯)；聚偏二氟乙烯(PVDF)；矽樹 脂；聚甲醛；醋酸纖維素，硝基纖維素，或兩種或多種上述任意物質的組合。所需要的只是 固相支持物中的材料或材料組合基本不會影響兩種或多種分析物與特異於每個分析物的 抗體之間的結合，例如在某些情況下只是最低限度的影響。固相支持物可為各種物理形式，其包括例如膜；晶片；玻片(例如玻璃載玻片或蓋 玻片)；柱；空心、固體、半固體、帶有孔或空腔的顆粒，例如珠子；凝膠；纖維包括光纖材料； 基質；和樣品容器。樣品容器的非限制性例子包括樣品孔、管子、毛細管、小瓶以及能夠存放 樣品的任何其他容器、凹槽或紋齒。樣品容器可以包含在一個多樣品平臺上，例如微孔板、 玻片、微流體裝置、多孔或微孔板等等。用於結合分析物的顆粒可為各種尺寸的，包括能在 所需粘度的溶液中保持懸浮的顆粒，以及在所需粘度的溶液中容易沉澱的顆粒。可以選擇 顆粒，以使得容易從樣品組成中分離顆粒，例如通過引入純化標籤用合適的標籤結合材料 來分離，利用順磁性來進行磁性分離，等等。通常，本發明描述的顆粒為球狀。然而，顆粒可為如長方形或管狀。在一些實施方 式中，例如晶形顆粒，顆粒可為(規則的或不規則的)多面體形，例如立方形。在一些實施 方式中，顆粒可為無定形的。在一些實施方式中，顆粒混合物可基本為球形，基本為長方形，基本為管狀，基本 為多面體或基本為無定形。「基本為」表示顆粒混合物中超過30% (例如35^^40^^45%, 50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、96%、97%、98% 或 99% 或更 多)為給定形狀。在一些實施方式中，顆粒的直徑(或最長直線度)可在約1納米到約1000納米之 間或更大。例如顆粒可為至少約1納米到1000納米(例如至少約2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、 20、25、30、35、40、45、50、75、100、150、200、250、300、325、350、375、400、425、450、475、500、 525、550、575、600、625、650、675、700、725、750、775、800、825、850、875、900、925、950、975 或 1000納米)。在一些實施方式中，顆粒的直徑(或其最長直線度)可為不超過1000納米 (例如，不超過 975、950、925、900、875、850、825、800、775、750、725、700、675、650、625、600、 575、550、525、500、475、450、425、400、375、350、325、300、275、250、225、200、175、150、125、 100、75、50、45、40、35、30、25、20、15、10 或 5 納米)。生產固相支持物的合適方法，以及用於本發明所述的組合物和方法的固相支持物
11(例如顆粒)的其他例子，可在如PCT公報WO 01/84157、W099/30160、WO 99/42838和WO 06/078618中找到，這些公報都在此整體引用作為參考。分析物可以用本領域普通技術人員已知的多種方式結合於固相支持物。例如，分 析物可以共價或非共價地結合於固相支持物，可為直接的或間接的，例如通過接頭、結合劑 或結合對的成員。例如，分析物可以直接共價結合於固相支持物，例如通過分析物上的官能 團和固相支持物上的官能團之間的化學鍵。任選地，分析物可為間接共價結合於固相支持 物，例如分析物可以共價結合於接頭或結合劑，接頭或結合劑本身共價結合於固相支持物。 在一些實施方式中，分析物直接非共價結合於固相支持物，例如分析物非共價結合於或吸 附於固相支持物。在其他實施方式中，分析物間接非共價結合於固相支持物，例如共價結合 於接頭、結合劑和結合對，接頭、結合劑和結合對非共價的結合於固相支持物。在所有情況 下，與抗體對沒有結合於固相的分析物的特異性相比，目標分析物和固相的結合應該基本 不影響抗體對所結合的分析物的特異性，例如應該只是最低限度影響。可用於將分析物共價結合於支持物的各種化學反應是本領域技術人員所熟知的 (參見例如Hartmann等· (2002) J. Mater. Res. 17(2) :473-478)。用於共價結合於支持物 的官能團的示例包括烷基、矽羥基、羧基、羰基、羥基、醯胺、胺、氨基、醚、酯、環氧化物、氰酸 酯，異氰酸酯，硫氰酸酯，巰基，二硫化物，氧化物，重氮化物，碘，磺酸基或具有化學或潛在 化學反應能力的類似基團。分析物可為非共價的結合於固相支持物，例如通過吸附或包被到固相支持物上， 或是通過共價或非共價的結合於接頭、結合劑或結合對成員，接頭、結合劑和結合對成員本 身非共價結合或結合於固相支持物。可用於將分析物結合於支持物的接頭、結合劑或結合 對成員的示例包括蛋白、有機聚合物(PEG及其衍生物)、以及小分子。特別優選的例子包括 HSA、BSA、鏈黴親和素、抗生物素蛋白、生物素、PEG、以及抗體或抗體片段。例如，在一個優選實施方式中，分析物可以共價偶聯到例如HSA或BSA等結合劑 上，然後可將所得的共價偶聯物用於非共價包被固相支持物。在另一個實施方式中，分析物 可以共價偶聯到生物素和抗生物素蛋白結合對的一個成員上；然後共價偶聯物可非共價結 合於結合對的另一個成員，所述另一個成員可以非共價的結合(例如包被)到固相支持物 上。在其他實施方式中，分析物和結合對的一個成員的共價偶聯物可以非共價的結合於結 合對的另一個成員，所述另一個成員已經共價結合於固相支持物。接頭或結合劑也可用於將分析物共價結合於固態支持物。例如，分析物與如HSA 或BSA等結合劑的共價偶聯物可共價結合於固相支持物。在一些實施方式中，固相支持物的表面可被修飾，以促進接頭或結合劑的穩定連 接。一般而言，熟練的技術人員可根據所需的應用，採取常規的方法來修飾固相支持物。下 面為固相支持物修飾的非限制性例子。例如，固相支持物的表面可以帶有促進與分析物結合的塗層。一般而言，塗層是 與分析物上的接頭部分互補的。固相支持物的表面可以是醯胺化的，例如通過表面甲矽烷 化，如採用三烷氧基氨基矽烷。矽烷處理的支持物也可用同雙功能接頭和異雙功能接頭衍 生化。支持物可以是衍生化的，例如它帶有羥基、氨基(如烷基胺)、羧基、N-羥基-琥珀醯 亞胺酯、光激活基團、巰基、酮、或可用於反應的其他官能團。支持物可以結合覆膜進行衍生 化，使得只有有限的區域(例如多孔測試板的某些孔)衍生化，或是化學蝕刻或紫外燈可用於從所選的區域去除衍生化。官能團可以在第一固相支持物的製備過程中或之後整合到第一固相支持物上，而 不是包被到表面上。通常選擇將官能團溶解在第一固相支持物的一種或多種組分中，但可 共價結合於第一固相支持物。用於將分析物結合於固相支持物的其他方法，在如PCT公報WOO1 /84157、WO 99/30160和WO 06/078618中有描述，每個公報的內容都在此整體引用作為參考。如本發明所述，兩種或多種分析物是結合在固相支持物上的。兩種或多種分析物 中的每一種與固相支持物的結合類型可為相同的，或相對於其他分析物的結合不同的。例 如，一種分析物可以直接共價結合，而另一個可為通過接頭部分間接共價結合。在另一個實 施方式中，一種分析物可以共價結合於如BSA等結合劑，結合劑非共價結合於固相支持物， 而另一種分析物是直接共價結合於固相支持物。所需要的只是分開結合不會影響(例如基 本不會影響)分析物與特異於分析物的抗體之間的結合。包含結合於固相的兩種或多種不同分析物的固相組合物可以驚人的牢固，例如可 以在室溫下長期穩定。在一些實施方式中，本發明所述的固相組合物可以是冷凍的、凍幹 的、或是固定化且存儲在合適的條件下。條件應該使得分析物可以保持活力。示例性的固相組合物在圖1-3中闡明，並且在下文中描述。應用本發明所述的技術涉及測定一種或多種目標分析物的存在和/或量。一般而言， 方法涉及競爭性免疫測試，這是本領域普通技術人員所熟知的方法。在本發明所用的競爭 性免疫測試中，結合於固相的分析物與樣品溶液(如測試樣品)中存在的分析物競爭結合 於抗體，例如標記的抗體。在將樣品施用到固相組合物上之後抗體產生的信號可以與在將 其施用到對照樣品上後產生的信號、或施用測試樣品前產生的信號相比，從而確定分析物 的存在。重要地是，如果需要，本組合物和方法允許同時或連續檢測兩種或多種分析物，靈 敏度高且來自其他分析物的幹擾最小。在方法中，固相分析物支持物是通過至少兩種分析物結合於一個固相上製備的， 所述固相例如顆粒或多孔板的多孔。然後，固相分析物支持物可與一種或多種抗體相接觸， 其中至少一種抗體是特異於結合於固相組合物的兩種分析物中的一種，並且也與樣品(如 測試樣品)相接觸，樣品可包含或疑似包含一種或多種目標分析物。通常，抗體被可檢測標 記(例如放射性的、螢光的、發光的或酶標記)，或是可以通過本領域普通技術人員已知的 方法(例如酶擴增方法)使用與第一抗體結合的第二抗體來檢測。在這些方法中，抗體與 其特異於的分析物之間的相互作用產生可檢測的信號，例如通過抗體上的可檢測標記物或 通過第二抗體上的標記物。信號可以用讀數來測量分析物的存在或量。方法中使用的抗體可為特異於目標分析物的任何抗體。該術語包括抗體或其分析 物結合片段。術語也可包括人源化抗體，完全人源抗體，單鏈抗體，嵌合抗體，Fab片段、F(ab，)2 片段、Fab，片段、Fv片段和scFv片段。針對目標分析物的抗體可以從多種商業來源獲得，或 者可以用本領域普通技術人員已知的方法來製備和分離，例如從產生抗體的宿主動物(例 如，如大鼠、兔、小鼠、山羊、牛、馬、狗、貓、綿羊、驢、雞或人等哺乳動物)或細胞(例如雜交 瘤)分離抗體。在一些實施方式中，抗體是特異於目標分析物的，並且還能結合目標分析物的一種或多種代謝物。例如抗體可以特異性的針對古柯鹼，也能表現出與一種或多種古柯鹼代 謝物的交叉反應結合。在這樣的情況下，交叉反應結合應該足以用本發明所述的方法來檢 測一種或多種代謝物。同樣地，抗體可以特異於一種目標藥物類型的一個成員，且也能與目標藥物類型 的一個或多個成員和/或其代謝物結合。例如，抗體可以特異於一種特定的鴉片樣物質，也 能表現出與其他鴉片樣物質的交叉反應結合。在這樣的情況下，交叉反應結合應該足以用 本發明所述的方法來檢測藥物類型中的一種或多種藥物或藥物代謝物。用於測定一種或多種分析物的存在和/或量的方法是如下進行的。如上所述，固 相分析物組合物，例如包含每個微孔結合有至少兩種不同分析物的微孔板，可以接觸i) 至少一種抗體，其中至少一種抗體特異於一種目標分析物；以及ii)樣品，如前所述。接觸 可以包括任何接觸方法，例如手動移液、洗滌、機器人或自動分液裝置，或是本領域普通技 術人員已知的其他方式。接觸方法中的常規注意事項，例如無菌技術或保持樣品完整性的 其他方法是本領域普通技術人員已知的。固相分析物組合物可以首先與抗體相接觸，然後與樣品接觸，或者反之亦然。已知 量的抗體可以與固相組合物相接觸，例如在定量方法中。通常，抗體被可檢測標記，並且標記物能夠測定分析物的存在。例如，抗體被可檢 測地標記上了螢光、發光(包括化學發光或生物發光)、放射性或酶標記物。在其他情況下， 抗體沒有被標記，但可以通過使用第二抗體來檢測，第二抗體本身被標記(例如酶標記)並 且特異於第一抗體。在同時檢測多種分析物的情況下，針對每個目標分析物的獨立抗體優 選是差異標記的，使得每樣品可以與其他樣品分開被檢測，例如通過使用吸收/發射光譜 不重疊的螢光標記物。用於檢測的方法，包括自動化方法，是本領域普通技術人員所熟知 的。任一方法可以採用洗滌步驟，例如來去除沒有結合於固相分析物組合物的抗體和 分析物。合適的洗滌條件可由本領域普通技術人員來確定，並且應該基本不幹擾抗體結合 於固相的結合分析物，或僅是最低限度幹擾。通過利用測試的競爭性特性，可以確定樣品中存在分析物。例如，通過比較由接觸 樣品(如測試樣品)後結合於固相分析物組合物的抗體產生的信號、和接觸不包含目標分 析物的對照樣品後結合於固相分析物組合物的抗體產生的信號，可以確定分析物的存在。在任何方法中，固相分析物組合物可以與第二抗體相接觸，其中第二抗體是特異 於結合在固相上的第二種不同的分析物。可以在與第一抗體相同的時間(例如在兩個分析 物的同時測試中)、或連續的(例如需要在測定第二分析物前確定第一分析物存在的測試 中)接觸第二抗體。本領域的普通技術人員會意識到，在方法中可以採用多達N種抗體，對 應於與固相結合的分析物的數量，其中抗體群包括至少一種特異於每種結合的分析物的抗 體。此外，當在同時測試中可以檢測多達N種分析物時，在任何測試中可以檢測任何較少 數量的分析物，或者可以在一個同時或連續測試中檢測任意的組合。另外，在某些實施方式 中，例如採用微孔板的實施方式中，一個微孔可用於測試一種或多種目標分析物，而另一個 微孔可用於測試相同的目標分析物組，、不同的目標分析物組、或是有交叉但不完全相同的 目標分析物組。試劑盒
本發明也提供了試劑盒，例如包括一種或多種本發明所述的固相分析物組合物的 試劑盒。試劑盒可包含其他組分，包括緩衝液、試劑、使用說明、以及方法中使用的一種或多 種抗體。在一些實施方式中，試劑盒中包含至少一種特異於選自下組的分析物的抗體可卡 因、苯醯牙子鹼、古柯乙烯、去甲古柯鹼、PCP、苯丙胺、甲基苯丙胺、大麻素、THC、羧基-THC、 海洛因、可待因、嗎啡，6-單乙醯嗎啡(MAM)、羥考酮、3，4-亞甲基二氧苯丙胺(MDA)和3， 4-亞甲基二氧甲基苯丙胺(MDMA)。在一些實施方式中，試劑盒可包含用於樣品製備的其他 試劑，包括提取或處理用於這些方法的樣品的試劑。
實施例實施例1從頭髮中還原性提取分析物，並且用結合有多種分析物的固相組合物來 檢測多種分析物採用2008年4月四日與本發明同時提交的美國專利申請序列號《用於測定角 質化結構中分析物的非蛋白水解法》(Non-Proteolytic Method ForThe Determination Of Analytes In Keratinized Mructures)(公開了用於從頭髮中提取分析物的非蛋白水 解還原性方法)中公開的萃取方法分析頭髮樣品中是否存在多種分析物(如濫用藥物)。 採用這樣的非蛋白水解還原性方法獲得的結果也與採用如美國專利第6，022，693號、第 6，350，582號和第6，949，344號中公開的方法(公開了用於從頭髮中提取分析物的蛋白水 解和還原聯合法)獲得的結果進行比較。一旦提取，採用本發明公開的方法和組合物評估 測試樣品中是否存在多種濫用藥物分析物，例如與結合有兩種或多種分析物的固相、以及 一種或多種第一抗體相接觸，其中所述每種第一抗體特異於一種特定的分析物；然後檢測 每種第一抗體，例如通過第一抗體上的標記物或通過被標記的第二抗體來檢測第一抗體。I.溶液用於消化頭髮樣品的溶液1. 5%的二硫蘇糖醇的水溶液，pH 9. 45-9. 55用於中 和消化的頭髮樣品的溶液1.5%的氯化鋅水溶液2. 1. OM Bis Tris pH 73.臨用前，將氯化鋅1 10稀釋在Bis-Tris中II.酶免疫測試(EIA)的分析物提取的處理過程Smg頭髮樣品放入裝有0. SmL 1. 5%二硫蘇糖醇溶液(pH 9. 5)的試管中，並且樣 品在37°C孵育2小時。樣品用70 μ L氯化鋅的Bis-Tris溶液中和，混合均勻並且離心。III.採用多分析物包被的微孔板並且使用頭髮的二硫蘇糖醇提取物的酶免疫測 試(EIA)古柯鹼、鴉片樣物質、苯丙胺、PCPΑ.微孔板的製備用BSA-分析物偶聯物包被購自東海岸生物公司(East Coast Biologicals)的目標藥物的BSA (牛血清白蛋 白)偶聯物是配製在水中的。BSA偶聯物(BSA-苯醯牙子鹼、BSA-嗎啡、BSA-PCP, BSA-甲 基苯丙胺)是溶解在水中的，使得在50微升的藥物偶聯物溶液中每種分析物為1-10納克。為了包被各孔，向96孔微孔板(康寧科技公司(Corning Scientific)的高結合 力微孔板)的孔中加入50微升/孔藥物偶聯物溶液，該溶液含有苯醯牙子鹼、嗎啡、CPC和 甲基苯丙胺的BSA-偶聯物。板子加蓋並且在搖床上室溫下100轉/分鐘搖過夜。
在搖過夜後，去除分析物混合物，並且用PBS (磷酸緩衝鹽水)洗滌各孔一次。為了 封閉各孔，向所有孔中加入300微升含有BSA的PBS，微孔板在室溫下搖4_6小時(旋 轉速度約100轉/分鐘)。在封閉後，各孔用含有0. 01% Tween-20的PBS洗滌6次。在洗滌後，將板子翻轉 並且在檯面上輕拍，以去除液體。然後將板子保持翻轉在實驗臺上乾燥幾個小時或過夜。幹 燥後，把它們放入乾燥密封真空包裝袋中；用真空泵從袋中抽走空氣並且封住袋子進行儲 存。B.分析消化並且中和後的頭髮樣品的等分試樣在微孔板的孔中與針對目標分析物的合 適第一抗體混合。在室溫下孵育1小時後，在自動化洗板機上用PBS洗板。洗滌後，向孔中 加入連有HRP (辣根過氧化物酶)的第二抗體(針對第一抗體的類型)，板子在室溫下孵育 1小時。再次洗板，並且底物(TMB、3，3』，5，5』-四甲基聯苯氨)在孔中孵育30分鐘。最後 加入50微升4N的鹽酸，並且讀取620納米的吸光度。1.頭髮中的古柯鹼固相分析物酶免疫測試(EIA)固相抗原EIA得到的古柯鹼結果的例子
權利要求
1.一種測定樣品中目標分析物的存在的方法，包括(a)使固相分析物組合物接觸i)抗體，其中所述抗體特異於所述目標分析物；和ii) 樣品；其中所述固相分析物組合物包含結合在固相支持物上的至少兩種不同的分析物，其 中所述至少兩種不同的分析物中的一種為目標分析物，以及(b)測定樣品中是否存在所述目標分析物。
2.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述固相分析物組合物首先接觸樣品，然後 接觸抗體。
3.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述抗體被可檢測標記。
4.如權利要求3所述的方法，其特徵在於，所述抗體用可檢測的螢光、發光(包括化學 發光或生物發光)、放射性或酶標記物標記。
5.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述抗體沒有被標記。
6.如權利要求1所述的方法，還包括去除沒有結合於固相分析物組合物的抗體。
7.如權利要求1所述的方法，還包括如果存在分析物，測定分析物存在的量。
8.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，通過比較樣品中結合於固相分析物組合物 的抗體產生的信號與不包含目標分析物的對照樣品中結合於固相分析物組合物的抗體產 生的信號來測定樣品中存在分析物。
9.如權利要求8所述的方法，其特徵在於，結合於固相分析物組合物的抗體產生的信 號是由抗體上的可檢測標記物產生的。
10.如權利要求8所述的方法，其特徵在於，結合於固相分析物組合物的抗體產生的信 號是由第二抗體與所述抗體結合產生的，其中所述第二抗體被可檢測標記。
11.如權利要求9或10所述的方法，其特徵在於，所述可檢測的標記物為螢光、發光 (包括化學發光或生物發光)、放射性或酶標記物。
12.如權利要求1所述的方法，還包括使固相分析物組合物接觸第二抗體，其中所述第 二抗體特異於結合於固相的至少第二種不同的分析物，並且測定樣品中是否存在第二分析 物。
13.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述至少兩種不同的分析物直接地或間接 地非共價結合於固相。
14.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述至少兩種不同的分析物直接地或間接 地共價結合於固相。
15.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述至少兩種不同的分析物通過吸附直接 地或間接地結合於固相。
16.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述至少兩種不同的分析物共價結合於結 合劑，所述結合劑非共價地或通過吸附結合於固相。
17.如權利要求16所述的方法，其特徵在於，所述結合劑選自HSA或BSA。
18.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述至少兩種不同的分析物為濫用藥物或 其代謝物。
19.如權利要求18所述的方法，其特徵在於，所述濫用藥物或其代謝物選自古柯鹼、苯 醯牙子鹼、古柯乙烯、去甲古柯鹼、PCP、苯丙胺、甲基苯丙胺、大麻素、THC、羧基-THC、海洛 因、可待因、嗎啡、6-單乙醯嗎啡(MAM)、羥考酮、3，4-亞甲基二氧苯丙胺(MDA)或3，4_亞甲基二氧甲基苯丙胺(MDMA)。
20.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述樣品為身體樣品或來源於身體樣品的樣品。
21.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述身體樣品來自人，並且為選自腦、心、 肺、腎、肝、肌肉、骨、胃、腸和皮膚的組織樣品；選自尿、血液、血漿、血清、唾液、精液、痰、腦 脊液、粘液、汗、玻璃液和乳汁的生物液；和角質化結構。
22.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述身體樣品為角質化結構。
23.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述固相支持物為微孔板的微孔。
24.一種測定樣品中多種(用數字「N」表示)不同的目標分析物的存在的方法，該方法 包括(a)使固相分析物組合物接觸i)多種抗體，其中所述多種抗體包含特異於各種不同目 標分析物的抗體；和ii)樣品；其中所述固相分析物組合物包含結合於固相支持物的至少 「N」種不同的分析物，其中所述結合的至少「N」種不同的分析物包括多種目標分析物，以及(b)測定多種目標分析物中各種不同目標分析物是否存在於樣品中。
25.如權利要求M所述的方法，其特徵在於，所述特異於各種不同目標分析物的抗體 是可分別檢測的。
26.如權利要求25所述的方法，其特徵在於，所述抗體用可檢測的螢光、發光(包括化 學發光或生物發光)、放射性或酶標記物標記。
27.如權利要求M所述的方法，還包括測定如果存在的各種不同目標分析物的量。
28.如權利要求M所述的方法，其特徵在於，通過比較樣品中結合於固相分析物組合 物的特異於特定目標分析物的抗體產生的信號和不包含特定目標分析物的對照樣品中結 合於固相分析物組合物的相同抗體產生的信號來測定樣品中存在各種不同的目標分析物。
29.如權利要求M所述的方法，其特徵在於，所述多種抗體同時接觸固相分析物組合物。
30.如權利要求M所述的方法，其特徵在於，所述多種抗體中的至少一種在與多種抗 體中的至少另一種抗體不同的時間接觸固相分析物組合物。
31.一種包含至少兩種不同的結合於固相的分析物的組合物。
32.如權利要求31所述的組合物，其特徵在於，所述至少兩種不同的分析物直接地或 間接地共價結合於固相。
33.如權利要求31所述的組合物，其特徵在於，所述至少兩種不同的分析物直接地或 間接地非共價結合於固相。
34.如權利要求31所述的組合物，包含2-10種不同的結合於固相的分析物。
35.如權利要求31所述的組合物，其特徵在於，所述至少兩種不同的分析物為濫用藥 物分析物或其代謝物。
36.如權利要求31所述的組合物，其特徵在於，所述至少兩種不同的分析物選自可卡 因、苯醯牙子鹼、古柯乙烯、去甲古柯鹼、PCP、苯丙胺、甲基苯丙胺、大麻素、THC、羧基-THC、 海洛因、可待因、嗎啡，6-單乙醯嗎啡(MAM)、羥考酮、3，4_亞甲基二氧苯丙胺(MDA)或3， 4-亞甲基二氧甲基苯丙胺(MDMA)。
37.一種試劑盒，其包含如權利要求31所述的組合物以及至少一種特異於結合在固相上的兩種不同分析物中至少一種的抗體。
38.一種試劑盒，其包含如權利要求36所述的組合物以及至少一種特異於選自下組的 分析物的抗體古柯鹼、苯醯牙子鹼、古柯乙烯、去甲古柯鹼、PCP、苯丙胺、甲基苯丙胺、大麻 素、THC、羧基-THC、海洛因、可待因、嗎啡，6-單乙醯嗎啡(MAM)、羥考酮、3，4-亞甲基二氧苯 丙胺(MDA)和3，4-亞甲基二氧甲基苯丙胺(MDMA)。
39.一種測定樣品中存在目標分析物或其一種或多種代謝物的方法，包括(a)使固相分析物組合物接觸i)抗體，其中所述抗體特異於目標分析物，並且還能結 合目標分析物的一種或多種代謝物；和ii)樣品；其中所述固相分析物組合物包含結合在 固相支持物上的至少兩種不同的分析物，其中所述至少兩種不同分析物中的一種為目標分 析物，以及(b)測定樣品中是否存在目標分析物或其一種或多種代謝物。
40.一種測定樣品中存在一種目標藥物類型的至少一個成員的方法，包括(a)使固相分析物組合物接觸i)抗體，其中所述抗體特異於目標藥物類型的成員，並 且還能結合目標藥物類型的一個或多個其他成員或結合目標藥物類型的一個成員的一種 或多種代謝物；和ii)樣品；其中所述固相分析物組合物包含結合在固相支持物上的至少 兩種不同的分析物，其中所述至少兩種不同分析物中的一種為目標藥物類型的一個成員， 以及(b)測定樣品中是否存在目標藥物類型的至少一個成員。
41.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述至少兩種不同的分析物選自濫用藥 物、有毒化學品、環境化學品、石油產品、天然產物、有機化合物、營養物、處方藥和非處方 藥，或是前述任一物質的代謝物、衍生物或分解產物。
42.如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述至少兩種不同的分析物選自鴉片樣 物質、苯丙胺、NSAIDS、類固醇、大麻素、苯並二氮革、巴比妥鹽、三環類和麻黃素，或是前述 任一物質的代謝物、衍生物或分解產物。
43.如權利要求31所述的組合物，其特徵在於，所述至少兩種不同的分析物選自濫用 藥物、有毒化學品、環境化學品、石油產品、天然產物、有機化合物、營養物、處方藥和非處方 藥，或是前述任一物質的代謝物、衍生物或分解產物。
44.如權利要求31所述的組合物，其特徵在於，所述至少兩種不同的分析物選自鴉片 樣物質、苯丙胺、NSAIDS、類固醇、大麻素、苯並二氮革、巴比妥鹽、三環類和麻黃素，或是前 述任一物質的代謝物、衍生物或分解產物。
45.如權利要求37所述的試劑盒，其特徵在於，如權利要求31所述的組合物包含至少 兩種選自下組的不同分析物濫用藥物、有毒化學品、環境化學品、石油產品、天然產物、有 機化合物、營養物、處方藥和非處方藥，或是前述任一物質的代謝物、衍生物或分解產物。
46.如權利要求37所述的試劑盒，其特徵在於，如權利要求31所述的組合物包含至少 兩種選自下組的不同分析物鴉片樣物質、苯丙胺、NSAIDS、類固醇、大麻素、苯並二氮革、巴 比妥鹽、三環類和麻黃素，或是前述任一物質的代謝物、衍生物或分解產物。
全文摘要
本發明提供了用於檢測一種或多種分析物的存在和/或其量的組合物和方法，所述分析物包括例如濫用藥物。組合物包含結合在一個例如顆粒或多孔板等固相上的兩種或多種分析物。組合物和方法也可以同時、並行或連續測定樣品中的兩種或多種目標分析物的存在和/或量。
文檔編號G01N33/94GK102077094SQ200980126100
公開日2011年5月25日 申請日期2009年4月29日 優先權日2008年4月29日
發明者M·I·謝弗, M·阿特菲, V·希爾 申請人:賽凱米迪克斯股份有限公司