一種化學與生物聯合催化合成磷酸吡哆醛的方法與流程

2023-04-23 00:20:26 2

本發明涉及化學-生物聯合催化領域，尤其涉及一種化學與生物聯合催化合成磷酸吡哆醛的方法。

背景技術：

磷酸吡哆醛是維生素b6的一種衍生物，是維生素b6參與蛋白質、脂肪和碳水化合物的多種代謝反應的一種活化形式。磷酸吡哆醛是胺基酸代謝中的轉氨酶及脫羧酶的輔酶。通過轉氨作用，將胺基酸、碳水化合物和脂肪代謝聯繫起來；通過脫羧作用，可生成多種生物活性物質，如組胺、血清素、γ-醯基丁酸、硫黃素。磷酸吡哆醛還參與造血，它是δ-氨基γ-酮戊酸（ala）合成酶的輔酶。而δ-氨基γ-酮戊酸合成酶是血紅素合成的限速酶。磷酸吡哆醛還作為糖原磷酸化酶的重要組成部分，參與糖原分解為1-磷酸葡萄糖的過程。此外，磷酸吡哆醛還參與脂肪代謝，促進白細胞生長。

磷酸吡哆醛作為維生素b6的衍生物在醫藥上有多種用途，治療原因不明的白細胞減少症，治療破傷風抗血栓作用，治療口腔潰瘍，治療貧血，治療動脈粥樣硬化，治療痤瘡等。研究還表明，磷酸吡哆醛不但可以用於預防治療高血壓、心血管疾病及糖尿病等，還可用於治療遲發性運動障礙、難治性兒童期癲癇及帕金森症候群。

磷酸吡哆醛還是合成β-羥基烷酸酯的輔酶，聚β-羥基烷酸酯具有良好的柔韌性和抗張性，並具有良好的可塑性，其優點是可被微生物降解掉，被稱為「生物可降解塑料」，其發展潛力大，在工業用途多，需求量大。同時聚羥基烷酸酯類材料以及不同聚合物的不同組合-聚羥基丁酸酯與聚羥基己酸酯共聚物得到廣泛應用，因其材料生物相容性好、無排斥性及可控降解性等特點，再生和應用軟骨組織為基礎目標的軟骨組織工程技術成為軟骨損傷治療帶來新的思路，作為新型的生物材料負載軟骨細胞在耳鼻喉科得到應用。此外，β-羥基烷酸酯在醫藥領域如藥物釋放和組織工程等中應用潛力巨大。β-羥基烷酸酯與通用塑料相比，pha具有良好的生物降解性及相容性，另外它還表現出具有實用價值的光學活性、壓電性、氣密性等。因此在生物醫用、食品包裝、感光材料等領域具有廣闊的應用前景。β-羥基烷酸酯是目前研究最多、產量最大、商業化最為成功的可生物降解聚合物之一。

磷酸吡哆醛還是合成β-羰基醯胺類化合物的輔酶，β-羰基醯胺類化合物在藥物生物活性研究、液晶材料及塗料等領域有廣泛應用，市場量大。

目前，鹽酸吡哆醛磷酸化生成磷酸吡哆醛是以化學合成法進行的，但此種方法存在步驟複雜、資源消耗多、不易製備等問題，導致了鹽酸吡哆醛與磷酸吡哆醛之間巨大的價格差．需要開發一種新工藝來降低生產成本。

技術實現要素：

為克服現有技術鹽酸吡哆醇由化學工藝合成磷酸吡哆醛步驟複雜產量低等缺點，本發明的目的是通過化學與生物聯合催化鹽酸吡哆醇轉化為磷酸吡哆醛，提供一種環保高效，選擇性好，反應條件溫和，操作方便，成本低廉，具有良好的工業化應用價值的化學-生物聯合催化合成吡哆醛的技術。

本發明的目的通過以下技術方案實現：

一種化學與生物聯合催化合成磷酸吡哆醛的方法，包括以下步驟：

（1）化學合成鹽酸吡哆醛取鹽酸吡哆醇1g溶於10ml5%鹽酸溶液中，加入適量（摩爾比1:1）或過量（摩爾比1:1~8）選擇性氧化劑，在磁力攪拌20~40℃水浴加熱反應，反應3h直到氧化劑完全溶解，並進行2~3抽濾除去機械雜質；將所得清亮濾液在旋轉蒸發儀上減壓濃縮蒸乾，溫度應低於其分解溫度；向蒸乾後的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中於0℃下冷卻，直至析出白色晶體；抽濾，醇洗，風乾，得白色晶體；將粗產品在稀鹽酸溶液中重結晶2次，得到鹽酸吡哆醛白色晶體；

（2）高效酶法轉化鹽酸吡哆醛為磷酸吡哆醛

取上一步反應所獲得的產物鹽酸吡哆醛0.1g於離心管中，添加磷酸鹽：氫二鉀或磷酸二氫鉀0.05g，用tris緩衝液（ph=6.0）溶解磷酸吡哆醛轉移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為20~30℃恆溫水浴搖床中反應3h，將反應後的溶液進行離心處理8000r/min，10min，收集上清液，即為磷酸吡哆醛；

步驟（1）的操作需在黑暗條件下進行。

進一步地，步驟（1）所述氧化劑是雙氧水、二氧化錳、硝酸銅、二乙胺中的一種或幾種的混合物。

進一步地，步驟（1）所述氧源為空氣時，空氣壓力為1-5個大氣壓，優選為1-2個大氣壓。

進一步地，步驟（1）所述氧化劑是雙氧水，其用量以鹽酸吡哆醇摩爾數計的0.5-8倍，優選1-2倍。進一步地，步驟（1）所述氧化劑是二氧化錳，其用量以摩爾數計為鹽酸吡哆醇的摩爾數的0.01-5倍，優選0.01-1倍。

進一步地，步驟（1）所述氧化劑是雙氧水、硝酸銅、二乙胺（按照物質的量之比約為1:1:1進行配比），其用量以摩爾數計為鹽酸吡哆醇的摩爾數的0.1-5倍，優選0.8-2倍。本發明的有益效果：本發明相較於純化學方法製備磷酸吡哆醛，條件更為溫和，所消耗的時間較短；且環保高效，選擇性好、操作方便，成本低廉，具有良好的工業化應用價值。

具體實施方式

通過以下詳細說明可以進一步理解本發明的特點和優點。所提供的實施例僅是對本發明方法的說明，而不以任何方式限制本發明揭示的其餘內容。

本發明中，選用的酶為abnova公司的pdxk（human）recombinantprotein（p01）。

【實驗例1】：

稱取1g鹽酸吡哆醇溶於10ml5%鹽酸溶液中，加入0.25g二氧化錳粉末，在磁力攪拌27℃水浴加熱處理3h，直到二氧化錳粉末完全溶解，並進行多次抽濾，得一淺棕黃色溶液。抽濾，除去機械雜質。將所得清亮濾液在旋轉蒸發儀上減壓濃縮蒸乾，溫度應低於其分解溫度。向蒸乾後的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中於0℃下冷卻，直至析出白色晶體。抽濾，醇洗，風乾，得白色晶體。將粗產品在稀鹽酸溶液中重結晶2次，得到鹽酸吡哆醛白色晶體，經高效色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈50ml，戊烷磺酸鈉2.0g，三乙胺2.5ml定容1000ml，取500ml；ph:3(用冰醋酸調節ph至3.0)；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：293nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測鹽酸吡哆醇轉化率為30%-50%。取上一步反應所獲得的產物鹽酸吡哆醛0.1g於離心管中，添加磷酸鹽0.05g，用tris緩衝液溶解磷酸哆醛轉移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為27℃恆溫水浴搖床中反應3h，將反應後的溶液進行離心處理（8000r/min，10min），取20.0μl上清液用高效液相色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈：水=3：7；ph=6；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：388nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測為產物其轉化效率為40%-50%。【實驗例2】：

稱取1g鹽酸吡哆醇溶於10ml，5%鹽酸溶液中，加入0.5g二氧化錳粉末，在磁力攪拌27℃水浴加熱處理3h，直到二氧化錳粉末完全溶解，並進行多次抽濾，得一淺棕黃色溶液。抽濾，除去機械雜質。將所得清亮濾液在旋轉蒸發儀上減壓濃縮蒸乾，溫度應低於其分解溫度。向蒸乾後的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中於0℃下冷卻，直至析出白色晶體。抽濾，醇洗，風乾，得白色晶體。將粗產品在稀鹽酸溶液中重結晶2次，得到鹽酸吡哆醛白色晶體，經高效色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈50ml，戊烷磺酸鈉2.0g，三乙胺2.5ml定容1000ml，取500ml；ph:3(用冰醋酸調節ph至3.0)；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：293nm；進樣濃度：1ug/ml）檢測鹽酸吡哆醇轉化率為40%-50%。取上一步反應所獲得的產物鹽酸吡哆醛0.1g於離心管中，添加磷酸鹽0.05g，用tris緩衝液溶解磷酸哆醛轉移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為27℃恆溫水浴搖床中反應3h，將反應後的溶液進行離心處理（8000r/min，10min），取20.0μl上清液用高效液相色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈：水=3：7；ph=6；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：388nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測為產物其轉化效率為40%-50%。

【實驗例3】：

稱取1g鹽酸吡哆醇溶於10ml，5%鹽酸溶液中，加入質量分數5ml，5%的雙氧水，在磁力攪拌27℃水浴加熱處理3h，得無色溶液，在旋轉蒸發儀上減壓濃縮蒸乾，溫度應低於其分解溫度。向蒸乾後的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中於0℃下冷卻，直至析出白色晶體。抽濾，醇洗，風乾，得白色晶體。將粗產品在稀鹽酸溶液中重結晶2次，得到鹽酸吡哆醛白色晶體，經高效色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈50ml，戊烷磺酸鈉2.0g，三乙胺2.5ml定容1000ml，取500ml；ph:3(用冰醋酸調節ph至3.0)；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：293nm；進樣濃度：1ug/ml）檢測鹽酸吡哆醇轉化率為40%-50%。取上一步反應所獲得的產物鹽酸吡哆醛0.1g於離心管中，添加磷酸鹽0.05g，用tris緩衝液溶解磷酸哆醛轉移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為27℃恆溫水浴搖床中反應3h，將反應後的溶液進行離心處理（8000r/min，10min），取20.0μl上清液用高效液相色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈：水=3：7；ph=6；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：388nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測為產物其轉化效率為40%-50%。

【實驗例4】：

稱取1g鹽酸吡哆醇溶於10ml，5%鹽酸溶液中，加入質量分數5ml，10%的雙氧水，在磁力攪拌27℃水浴加熱處理3h，得無色溶液，在旋轉蒸發儀上減壓濃縮蒸乾，溫度應低於其分解溫度。向蒸乾後的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中於0℃下冷卻，直至析出白色晶體。抽濾，醇洗，風乾，得到鹽酸吡哆醛白色晶體，經高效色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈50ml，戊烷磺酸鈉2.0g，三乙胺2.5ml定容1000ml，取500ml；ph:3(用冰醋酸調節ph至3.0)；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：293nm；進樣濃度：1ug/ml）檢測鹽酸吡哆醇轉化率為30%-40%。取上一步反應所獲得的產物鹽酸吡哆醛0.1g於離心管中，添加磷酸鹽0.05g，用tris緩衝液溶解磷酸哆醛轉移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為27℃恆溫水浴搖床中反應3h，將反應後的溶液進行離心處理（8000r/min，10min），取20.0μl上清液用高效液相色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈:水=3:7；ph=6；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：388nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測為產物其轉化效率為40%-50%。

【實驗例5】：

稱取1g鹽酸吡哆醇溶於10ml5%鹽酸溶液中，加入質量分數5ml，15%的雙氧水，在磁力攪拌27℃水浴加熱處理3h，得無色溶液，在旋轉蒸發儀上減壓濃縮蒸乾，溫度應低於其分解溫度。向蒸乾後的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中於0℃下冷卻，直至析出白色晶體。抽濾，醇洗，風乾，得白色晶體。將粗產品在稀鹽酸溶液中重結晶2次，得到鹽酸吡哆醛白色晶體，經高效色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈50ml，戊烷磺酸鈉2.0g，三乙胺2.5ml定容1000ml，取500ml；ph:3(用冰醋酸調節ph至3.0)；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：293nm；進樣濃度：1ug/ml）檢測鹽酸吡哆醇轉化率為40%-50%。取上一步反應所獲得的產物鹽酸吡哆醛0.1g於離心管中，添加磷酸鹽0.05g，用tris緩衝液溶解磷酸哆醛轉移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為27℃恆溫水浴搖床中反應3h，將反應後的溶液進行離心處理（8000r/min，10min），取20.0μl上清液用高效液相色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈：水=3：7；ph=6；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：388nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測為產物其轉化效率為40%-50%。

【實驗例6】：

稱取1g鹽酸吡哆醇溶於10ml，5%鹽酸溶液中，加入催化體系雙氧水、硝酸銅（按照物質的量之比約為1:1進行配比），在磁力攪拌27℃水浴加熱處理3h，再進行多次抽濾，得一淺棕黃色溶液。抽濾，除去機械雜質。將所得清亮濾液在旋轉蒸發儀上減壓濃縮蒸乾，溫度應低於其分解溫度。向蒸乾後的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中於0℃下冷卻，直至析出白色晶體。抽濾，醇洗，風乾，得白色晶體。將粗產品在稀鹽酸溶液中重結晶2次，得到鹽酸吡哆醛白色晶體，經高效色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈50ml，戊烷磺酸鈉2.0g，三乙胺2.5ml定容1000ml，取500ml；ph:3(用冰醋酸調節ph至3.0)；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：293nm；進樣濃度：1ug/ml）檢測鹽酸吡哆醇轉化率為50%-60%。取上一步反應所獲得的產物鹽酸吡哆醛0.1g於離心管中，添加磷酸鹽0.05g，用tris緩衝液溶解磷酸哆醛轉移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為27℃恆溫水浴搖床中反應3h，將反應後的溶液進行離心處理（8000r/min，10min），取20.0μl上清液用高效液相色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈：水=3：7；ph=6；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：388nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測為產物其轉化效率為40%-50%。

【實驗例7】：

稱取1g鹽酸吡哆醇溶於10ml5%鹽酸溶液中，加入催化體系雙氧水、二乙胺（按照物質的量之比約為1:1進行配比），在磁力攪拌27℃水浴加熱處理3h，再進行多次抽濾，得一淺棕黃色溶液。抽濾，除去機械雜質。將所得清亮濾液在旋轉蒸發儀上減壓濃縮蒸乾，溫度應低於其分解溫度。向蒸乾後的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中於0℃下冷卻，直至析出白色晶體。抽濾，醇洗，風乾，得白色晶體。將粗產品在稀鹽酸溶液中重結晶2次，得到鹽酸吡哆醛白色晶體，經高效色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈50ml，戊烷磺酸鈉2.0g，三乙胺2.5ml定容1000ml，取500ml；ph:3(用冰醋酸調節ph至3.0)；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：293nm；進樣濃度：1ug/ml）檢測鹽酸吡哆醇轉化率為50%-60%。取上一步反應所獲得的產物鹽酸吡哆醛0.1g於離心管中，添加磷酸鹽0.05g，用tris緩衝液溶解磷酸哆醛轉移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為27℃恆溫水浴搖床中反應3h，將反應後的溶液進行離心處理（8000r/min，10min），取20.0μl上清液用高效液相色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈：水=3：7；ph=6；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：388nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測為產物其轉化效率為40%-50%。

【實驗例8】：

稱取1g鹽酸吡哆醇溶於10ml5%鹽酸溶液中，加入催化體系雙氧水、硝酸銅、二乙胺（按照物質的量之比約為1:1:1進行配比），在磁力攪拌27℃水浴加熱處理3h，再進行多次抽濾，得一淺棕黃色溶液。抽濾，除去機械雜質。將所得清亮濾液在旋轉蒸發儀上減壓濃縮蒸乾，溫度應低於其分解溫度。向蒸乾後的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中於0℃下冷卻，直至析出白色晶體。抽濾，醇洗，風乾，得白色晶體。將粗產品在稀鹽酸溶液中重結晶2次，得到鹽酸吡哆醛白色晶體，經高效色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈50ml，戊烷磺酸鈉2.0g，三乙胺2.5ml定容1000ml，取500ml；ph:3(用冰醋酸調節ph至3.0)；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：293nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測鹽酸吡哆醇轉化率為50%-60%。取上一步反應所獲得的產物鹽酸吡哆醛0.1g於離心管中，添加磷酸鹽0.05g，用tris緩衝液溶解磷酸哆醛轉移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為27℃恆溫水浴搖床中反應3h，將反應後的溶液進行離心處理（8000r/min，10min），取20.0μl上清液用高效液相色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈：水=3：7；ph=6；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：388nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測為產物其轉化效率為40%-50%。

【實驗例9】：

稱取1g鹽酸吡哆醇溶於10ml，5%鹽酸溶液中，加入0.5g二氧化錳粉末，在磁力攪拌35℃水浴加熱處理3h，直到二氧化錳粉末完全溶解，並進行多次抽濾，得一淺棕黃色溶液。抽濾，除去機械雜質。將所得清亮濾液在旋轉蒸發儀上減壓濃縮蒸乾，溫度應低於其分解溫度。向蒸乾後的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中於0℃下冷卻，直至析出白色晶體。抽濾，醇洗，風乾，得白色晶體。將粗產品在稀鹽酸溶液中重結晶2次，得到鹽酸吡哆醛白色晶體，經高效色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈50ml，戊烷磺酸鈉2.0g，三乙胺2.5ml定容1000ml，取500ml；ph:3(用冰醋酸調節ph至3.0)；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：293nm；進樣濃度：1ug/ml）檢測鹽酸吡哆醇轉化率為45%-50%。取上一步反應所獲得的產物鹽酸吡哆醛0.1g於離心管中，添加磷酸鹽0.05g，用tris緩衝液溶解磷酸哆醛轉移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為27℃恆溫水浴搖床中反應3h，將反應後的溶液進行離心處理（8000r/min，10min），取20.0μl上清液用高效液相色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈：水=3：7；ph=6；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：388nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測為產物其轉化效率為40%-50%。

【實驗例10】：

稱取1g鹽酸吡哆醇溶於10ml，5%鹽酸溶液中，加入質量分數5ml，10%的雙氧水，在磁力攪拌35℃水浴加熱處理3h，得無色溶液，在旋轉蒸發儀上減壓濃縮蒸乾，溫度應低於其分解溫度。向蒸乾後的固體加入5ml蒸餾水，加熱溶解，置冰箱中於0℃下冷卻，直至析出白色晶體。抽濾，醇洗，風乾，得到鹽酸吡哆醛白色晶體，經高效色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈50ml，戊烷磺酸鈉2.0g，三乙胺2.5ml定容1000ml，取500ml；ph:3(用冰醋酸調節ph至3.0)；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：293nm；進樣濃度：1ug/ml）檢測鹽酸吡哆醇轉化率為35%-40%。取上一步反應所獲得的產物鹽酸吡哆醛0.1g於離心管中，添加磷酸鹽0.05g，用tris緩衝液溶解磷酸哆醛轉移酶，配置成0.1mg/ml的酶反應液，取1ml加入離心管中，將離心管放入溫度為27℃恆溫水浴搖床中反應3h，將反應後的溶液進行離心處理（8000r/min，10min），取20.0μl上清液用高效液相色譜（液相條件：色譜柱：c18（5μm，250mm×4.6mm）；流動相：乙腈:水=3:7；ph=6；流速：1.0ml/min；柱溫：30°c；進樣量：20.0μl；檢測波長：388nm；進樣濃度：1μg/ml）檢測為產物其轉化效率為40%-50%。