治療病毒性疾病的脂質體組合物的製作方法

2023-12-09 01:29:46

專利名稱：治療病毒性疾病的脂質體組合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及用於治療病毒性疾病、尤其是治療由病毒(例如人免疫缺損病毒和細胞肥大病毒)引起的感染的脂質體組合物及其方法。
背景技術：
目前已經開發出了多種用於對人免疫缺損病毒(HIV)感染的患者進行治療的抗病毒藥物。然而，在使用任何抗逆轉錄病毒藥物或其聯合形式治療的HIV感染的患者中，僅能觀察到短暫並且有限的治療效果。由於這些藥物減少病毒負荷的能力有限、耐藥性的迅速產生以及大多數藥物的毒副作用限制了它們的長期效果。對患者進行抗病毒藥物給藥的一個主要問題是這些藥物對感染細胞的穿透及定向能力很差。藥物的迅速清除以及母體化合物或其代謝產物的毒性也構成了一些主要的缺點，從而延緩了許多抗病毒藥物的開發和使用。針對目前使用的治療AIDS及其它病毒性疾病的抗病毒藥物的嚴重毒性以及它們對感染細胞的有限的定向能力，應當研究旨在在感染細胞內達到藥物的治療濃度並降低毒性的策略。將藥物包裹於脂質體中構成了一條改善活性藥物向感染細胞的轉運並減少與給藥有關的毒副作用的引人注目的途徑。脂質體是一種可以將多種藥物摻入其中的微囊。由於脂質體的主要成分與天然的膜相似，所以脂質體一般無毒並可以被生物降解。我們相信，通過更好地理解脂質體作為抗病毒藥物載體的角色，將導致改善治療AIDS及其它病毒性疾病所用藥物的效力和安全性的新策略。
目前，有許多證據表明巨噬細胞在HIV的發病機理中起重要作用，它可起到病毒在免疫系統中播散的病毒貯主的作用(Gendelman等，1989，AIDS 3475-495；Meltzer等，1990，免疫學年評，8169-194)。最近報導，在感染早期以及整個臨床潛伏期，儘管HIV在外周血中的活性很弱，但其在淋巴器官內的聚集和複製卻很活躍(Pantaleo等，1993，自然，362355-358；Embretson等，1993，自然，362359-362；Fox等，1994，自然，370256)。據報導，淋巴組織中觀察到的高病毒負荷與生發中心的濾泡樹狀細胞捕集的HIV顆粒有關。在HIV感染過程中，濾泡樹狀細胞網逐漸紊亂並最終被破壞。由於淋巴組織的微環境對有效的免疫應答非常重要，從而必需減少或終止HIV在淋巴組織中的聚集以保持該微環境網的完整性。使用脂質體作為藥物傳送系統特別適用於控制HIV疾病的進展。由於脂質體必然被單核吞噬細胞系統(MPS)的細胞攝取，基於脂質體的治療可以在易被HIV感染的細胞內富集抗病毒藥物，並同時減少可能會產生藥物潛在毒性的區域內的藥物量。因此，脂質體包封的藥物可以代表一種方便地策略，該策略可減少HIV向淋巴組織的播散並保持濾泡樹狀細胞微環境，從而有可能防止感染的宿主出現特徵性的免疫缺損狀態。
與母體藥物相比，使用脂質體作為釋藥系統具有很多益處。例如，脂質體可以防止藥物被酶降解、改善它們的藥代動力學和組織分布並控制治療藥物向適當的細胞中釋放。另外，脂質體的分布及其治療利用度可以通過其體積、層數、類脂組成、電荷以及表面性質的改變進行調節。因此必需使脂質體的理化性質與所需的治療目的相適應。本發明的一個目的是生產一種用於治療AIDS及其它病毒性疾病的藥物脂質體組合物。這種靶向釋藥系統有望在患有AIDS或其它病毒性疾病的患者中增強抗病毒藥物的效果並減弱其毒性。另外，將藥物包封於脂質體中所產生的改善的藥物生物利用度可以縮短服藥間隔，從而改善HIV及其它病毒感染的患者的生活質量。
發明概述本發明涉及治療病毒性疾病的方法，包括給予包封於脂質體內的抗病毒藥物。本發明還涉及用於治療病毒性疾病、尤其是治療由病毒(例如HIV和CMV)引起的感染的脂質體組合物。該脂質體組合物由特定種類的類脂成分組成並含有包封的可有效抵抗病毒性疾病的藥物。本發明的創造性是該藥物脂質體組合物可以在不同的細胞系中具有高的細胞穿透能力，在體外對HIV和CMV具有良好的抗病毒活性，在體內對HIV貯主具有有效的靶向能力，並且對藥物的藥代動力學具有顯著的改善(參見實施例)。
在優選的實施方案中，脂質體組合物由摩爾比為10∶3的二硬脂醯基磷脂醯膽鹼(DSPC)∶二硬脂醯基磷脂醯甘油(DSPG)組成，平均顆粒直徑在大約0.05到0.5μm之間，含有2』，3』-二脫氧肌苷(ddI)作為抗病毒藥物。在另一個優選實施方案中，脂質體組合物由摩爾比為10∶3∶1.45的DSPC∶DSPG∶二硬脂醯基磷脂醯乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)組成，平均顆粒直徑在大約0.05到0.5μm之間，含有2』，3』-二脫氧肌苷(ddI)作為抗病毒藥物。在上述優選實施方案中，聚乙二醇的分子量在大約500至5000道爾頓之間。在另一個優選實施方案中，脂質體組合物由摩爾比為4∶1∶5的二棕櫚醯基磷脂醯膽鹼(DPPC)∶磷酸三十二烷酯(DP)∶膽甾醇(CHOL)組成，平均顆粒直徑在大約0.05到0.5μm之間，含有2』，3』-二脫氧胞苷(ddC)作為抗病毒藥物。在又一個優選實施方案中，脂質體組合物由摩爾比為10∶3的DPPC∶二棕櫚醯基磷脂醯甘油(DPPG)組成，平均顆粒直徑在大約0.05到0.5μm之間，含有膦甲酸作為抗病毒藥物。
附圖概述

圖1a和1b表明游離ddI和脂質體ddI(20μM ddI)在U937細胞(圖1a)和RAW264.7細胞(圖1b)中的聚集量關於時間的函數。圖1c和1d表明游離ddC和脂質體ddC(25μM ddC)在U937細胞(圖1c)和RAW264.7細胞(圖1d)中的聚集量關於時間的函數。圖1e和1f分別表明游離的和脂質體包裹的ddC和膦甲酸在RAW264.7細胞中的藥物濃度的函數。
圖2a、2b和2d分別表示游離的和脂質體ddI(40μM ddI)、ddC(0.01μM ddC)和膦甲酸(1μM膦甲酸)在HIV-1IIIB感染的U937細胞中的抗病毒活性。圖2c和2e分別表示游離的和脂質體ddC(0.01μM ddC)和膦甲酸(1μM膦甲酸)在HIV-1IIIB感染的Molt-4克隆8細胞中的抗病毒活性。圖2f表示游離的和脂質體膦甲酸(1μM)在HIV-IIIIB感染的Supt-1細胞中的抗病毒活性。圖2g表示游離的和脂質體膦甲酸(分別為PFA和L-PFA)對人肺纖維細胞(MRC-5細胞系)中CMV p72蛋白表達的抑制作用。
圖3a、3b和3c表示將游離ddI或包裹於由摩爾比為10∶3的DSPC∶DSPG組成、平均顆粒直徑為0.175μm的脂質體中的ddI對大鼠給藥後，游離ddI(圖3a)、脂質體ddI(圖3b)和脂質體類脂(圖3c)在血漿和組織中的分布。圖3d和3e表示將包裹於由摩爾比為10∶3∶1.45的DSPC∶DSPG∶DSPE-PEG組成、平均顆粒直徑為0.150μm的脂質體中的ddI對大鼠給藥後，脂質體ddI(圖3d)和脂質體類脂(圖3e)在血漿和組織中的分布。圖3f、3g、3h和3i表示將游離ddC或包裹於由摩爾比為4∶1∶5的DPPC∶DS∶CHOL組成、平均顆粒直徑為0.300μm的脂質體中的ddC對大鼠靜脈內(圖3f和3g)或腹膜內(圖3h和3i)給藥後1小時(圖3f和3h)和3小時(圖3g和3i)，游離的和脂質體ddC(ddC和L-ddC)在血漿和組織中的分布。圖3i、3k和3l表示將游離膦甲酸或包裹於由摩爾比為10∶3的DPPC∶DPPG組成、平均顆粒直徑為0.165μm的脂質體中的膦甲酸對大鼠給藥後，脂質體膦甲酸(圖3j)、游離膦甲酸(圖3k)和脂質體類脂(3l)在血漿和組織中的分布。在圖3a至3l中，數值表示從每個時間點每組4至6隻動物得到的平均值(±SEM)。
發明詳述類脂成分在以脂質體為主的產品中，有必要利用脂質體雙層特性，其可使藥物包囊高效性以及包埋藥物降低的滲漏利用脂質體將高量抗病毒藥物釋放到感染細胞中。在本發明範圍藥物中，通過使用以下組成的脂質體即可達到這些要求i)二醯基磷脂醯膽鹼和二醯基磷脂醯甘油混合物(摩爾比在10∶1和1∶1之間)，其中醯基鏈為飽和或不飽和的14至18碳鏈，或者ii)摩爾比為4∶1∶5的二醯基磷脂醯膽鹼∶磷酸三十二烷酯∶膽固醇，其中二醯基磷脂醯膽鹼的醯基鏈為飽和或不飽和的14至18碳鏈。
本發明的脂質體包括立體穩定的脂質體，本文所定義的為由上述類脂組分組成的脂質體，其可通過混合聚合物(例如poloxamers和poloxamines)或混合由聚合物(如DSPE-PEG或二油醯磷脂醯乙醇胺(DOPE-PEG))衍生出的兩親類脂而改良。DSPE-PEG的合成細節如實施例1所示。本發明的脂質體包括免疫脂質體，本文所定義的為由上述類脂組成的脂質體或立體穩定的脂質體，其可通過偶聯可增強定位特定細胞的抗體分子而改良。
並不是所有測試的脂質體組合物都顯示出有效的藥物包囊和藥物瀦留。例如，ddI在由摩爾比為55∶45的蛋磷脂醯膽鹼∶膽固醇組成的脂質體中的包埋表現出有效的藥物包囊，其比觀察到的由摩爾比為10∶3的DSPC∶DSPG組成的脂質體低約30倍。另外，在人血清中僅培養1小時後，從由摩爾比35∶45∶10的蛋PC∶膽固醇∶心脂質組成的多層囊中即釋放出多於90％的ddI。相反，在類似條件下於人血清中培養5小時後，從由摩爾比10∶3的DSPC∶DSPG組成的多層囊中僅釋放出10％的ddI。
儘管以下實施例描述了特定的脂質體組合物，但是顯然易於從其得到許多脂質體組合物而不影響其有用的特性。因此，這些化合物包括已在實踐中檢測的磷脂組合物的其它醯基鏈。脂質體的製備在過去的幾年中已發展了大量的脂質體製備技術以適應不斷增長的用作藥物轉運體系的脂質體特殊應用。本發明脂質體的製備可通過許多技術完成，例如參考文獻中描述的(Szoka and Papahadjopoulos，1980，Ann.Rev.Biophys.Bioeng.9467-508；Nasssander等，1990，liposomes inBiodegradable polymers as drug delivery systems.p.261-338)。其中，薄類脂薄膜水合技術可迅速並簡單地製備脂質體。由這種技術製備的脂質體多為多層囊，通常為0.2至10微米。薄類脂薄膜水合技術詳細描述在實施例2中。製備脂質體的另外一種常用技術是由Szoka等在美國專利4235871中描述的反相蒸發技術。由這種技術製備的脂質體是單層或復層的，通常為0.2至5微米。反相蒸發技術詳細描述在實施例3中。抗病毒藥物本發明包括任何病毒DNA和/或RNA合成抑制劑和/或HIV蛋白酶抑制劑。這類物質包括抗病毒藥物，例如3』-疊氮-3』-脫氧胸苷(AZT)、ddI、ddC、膦甲酸、三氮唑核苷、更昔洛韋和saqiunavir。通過文獻中描述的一種或多種主動和/或被動裝填方法(Mayer等，1986，Chem.Phys.Lipids 40333-345)可將這些藥物摻入脂質體。
本發明的脂質體組合物包括任何粒度的普通顆粒，優選直徑在約0.05和0.5微米之間。本發明的脂質體組合物也包括用任何藥物/類脂摩爾比製備的脂質體。如前所述，被MPS細胞攝取的脂質體應使包埋的抗病毒藥物集中在易受HIV或其它病毒感染的細胞中，從而提高其抗病毒效果並降低其毒性。因此，下述實施例意欲說明抗病毒藥物(其可非常有效地治療HIV和CMV感染)的特定脂質體組合物的製備而不是以任何方式限定本發明範圍。此外，儘管脂質體組合物的效果特定在兩種病毒種類(HIV和CMV)上，但是本發明包括任何對病毒DNA和/或RNA合成抑制劑和/或HIV蛋白酶抑制劑效果敏感的病毒。
實施例1DSPE-PEG的合成如前所述製備二硬脂醯磷脂醯乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)(Gabizon and Papahadjopoulos，1989，Proc.Natl.Acad.Sci.USA856949-6953；Klibanov等，1990，FEBS Letters 268235-237)。簡而言之，將含有0.01uCi[14C]-二油醯磷脂醯乙醇胺DOPE([14C]-DOPE)/μmol類脂的摩爾比為3∶1；3.5的甲氧基聚乙二醇琥珀醯琥珀酸琥珀醯酯(PEG-OSu；MW5000)、DSPE和三乙胺在氯仿中於室溫培養過夜。然後在氮氣流下蒸發溶劑，所得幹混合物用二次蒸餾水水合。用含有Bio-Gel A-1.5M(50-100目)的柱(32×2cm)過濾膠束溶液以除去未結合的PEG-OSu。通過液閃計數(計數[14C]-DOPE-PEG)和225nm的吸收(游離PEG-OSu)測定含有DSPE-PEG的峰級分。合併含有DSPE-PEG的級分並用滲析膜(截至分子量(MWCO)為300,000(Spectra-Por，SpectrumMedical，Los Angeles，CA))在水中滲析24小時，然後凍幹。市場上也可買到各種分子量的DSPE-PEG。
實施例2用薄類脂薄膜水合將2』-3』-雙去氧肌苷(ddI)包囊到由摩爾比10∶3的DSPC∶DSPG和摩爾比為10∶3∶1.45的DSPC∶DSPG∶DSPG-PEG組成的脂質體中。按照實施例1可合成DSPE-PEG，或者市售得到。簡而言之，在少量[14C]-DPPC(＜0.002％mol/mol)存在下將類脂混合物溶於氯仿∶甲醇(2∶1v/v)，然後在圓底燒瓶中蒸發溶劑，於燒瓶壁上形成薄類脂薄膜。然後用加入少量放射性標記的[3H]ddI且藥物/類脂的摩爾比為2的ddI磷酸鹽緩衝液(PBS，145mM，pH7.4)水合類脂薄膜。室溫放置約30分鐘後，在高於類脂混合物的凝膠至液相轉移的溫度機械攪拌脂質體組合物而形成多層囊(MLVs)。用不鏽鋼擠壓裝置(Lipex Biomembrane，Vancouver，BC)從0.2微米的聚碳酸酯膜(Nuclepore，Cambridge，MA)擠出MLV。通過準彈性光散射(QELS)用亞微粒分析儀(Model N2SDCoulter Electronics，Hialeah，FL)評價囊的粒度分布和均勻度。擠出的DSPC∶DSPG和DSPC∶DSPG∶DSPE-PEG製劑的脂質體平均直徑分別為0.175±0.035微米和0.15±0.01微米。將脂質體組合物(1毫升)通過10毫升粗Sephadex G-50柱(Pharmacia LKB，Montreal，QC)離心(4℃，於300克離心15分鐘)、超離心(4℃，於160000g離心90分鐘)或通過在預定PBS中滲析而除去未包囊的藥物。藥物包埋的效率用液閃計數儀(model LS 6000TA，Beckman Instruments Canada Inc.m Mississauga，ON)測定。
實施例3用反相蒸發法(Szoka and Papahadjopoulos，1978，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 754194-4198)將2』-3』-雙去氧胞苷(ddC)包囊到由摩爾比為4∶1∶5的DPPC∶DP∶CHOL組成的脂質體中。簡而言之，在少量[1-14C]油酸膽甾醇酯存在下將類脂混合物溶於氯仿∶甲醇(2∶1v/v)，然後在圓底燒瓶中蒸發溶劑，於燒瓶壁上形成薄類脂薄膜。然後將類脂包埋再溶於異丙醚∶甲醇(3∶0.8v/v)。在該有機相中加入含有少量放射性標記的[3H]-ddC且藥物/類脂的摩爾比為3.6的ddC磷酸鹽緩衝液(PBS，145mM，pH7.4)。然後將兩相混合物於室溫的超聲浴中超聲5分鐘而得均勻溶液。50℃通過反相蒸發在控制條件於真空下除去有機溶劑。然後將脂質體懸浮液通過0.4微米的聚碳酸酯膜擠出。通過QELS評價囊粒度分別和均勻度。擠出的脂質體平均直徑為0.300±0.08微米。如上除去未包囊藥物，ddC包囊效率通過放射性計數測定。
實施例4
用如上所述的ddC脂質體組合物反相蒸發技術(實施例3)將膦甲酸包囊到脂質體中，只是類脂組分是摩爾比為10∶3的DPPC∶DPPG。本實施例中，藥物/類脂的摩爾比是5，[3H]-DPPC和[14C]-膦甲酸分別用作類脂和藥物標記物。通過0.2微米的聚碳酸酯膜擠出脂質體懸浮液而得平均直徑為0.165±0.030微米的脂質體。如上除去未包囊藥物，膦甲酸包囊效率通過放射性計數測定。
脂質體藥物和游離藥物的比較實施例細胞攝取發明人在體外實驗中評價了游離及脂質體包囊的抗HIV藥物在鼠單核細胞-巨噬細胞RAW264.7中及人幼單核細胞U937中的累積。簡而言之，通過將融合細胞在含有不同濃度的游離和脂質體包囊抗HIV藥物的培養基(其中加有少量放射性標記的藥物和類脂)中培養。在不同培養時間移去培養基，洗滌細胞並用Triton X-100溶液處理。用液閃計數儀通過測量放射性水平計算藥物和類脂的攝取。用Pierce二辛可寧酸蛋白分析(Rockford，IL)在微滴定板中測定每個樣品的蛋白質濃度。結果表明結合有ddC的脂質體可在RAW264.7和U937細胞中大大增加藥物的攝取(圖1c、1d和1e)。類似地，脂質體膦甲酸在RAW264.7細胞中的累積大大高於游離藥物(圖1f)。相反，儘管脂質體ddI在這些細胞中的攝取水平與ddC或膦甲酸脂質體組合物類似，但是，在兩種細胞系中觀察到游離ddI更多的累積(圖1a和1b)，這表明與其它抗HIV藥物相比，這些細胞系對ddI具有更大的膜滲透性。
體外抗病毒效應抗病毒藥物的脂質體組合物的抗病毒效應也已在不同細胞系中評價。簡而言之，用不同株的HIV經1(病毒/靶細胞)的重複感染感染細胞並用不同濃度的游離及脂質體包囊藥物處理。在不同時間間隔通過測定不含細胞的上清液中逆轉錄酶的活性或者通過用酶分析測量病毒p24蛋白來監測病毒的複製。通過聚合物酶鏈反應(PCR)分析用HIV引物對(M661/M667)處理後24小時監測病毒轉錄。PCR評價與人細胞β-珠蛋白基因的含量相適應。用四唑比色(MTT)分析法評價細胞活性。結果表明，在脂質體中混合ddC得到與游離藥物對抗HIV-1IIIB在U937和Molt-4clone-8細胞中複製相比較的甚或更好的抗HIV效應(圖2b和2c)。類似地，脂質體膦甲酸表明了與未包囊藥物對抗HIV-1IIIB在U937、Molt-4clone-8和Supt-1細胞中複製相比較的甚或更好的抗病毒效應(圖2d、2e和2f)。儘管ddI脂質體組合物的抗病毒效應比游離藥物對抗HIV-1IIIB在U937細胞中複製低(圖2a)，但是觀察到脂質體ddI對HIV-1Ada-M在單核細胞衍生的巨噬細胞中的更大抗-HIV效應(表1)。應理解，由於脂質體優先被MPS細胞攝取，在體內環境下更容易觀察到脂質體藥物比游離藥物更高的抗-HIV效應。
表1游離和脂質體ddI在被HIV-1Ada-Ma感染的初期單核細胞衍生的巨噬細胞中的抗病毒效應處理 濃度 p24(ng/ml) 感染後天數(μM) 713 17未處理 0 161 1,263 7,700脂質體ddI0.1 00 01 00 01000 0游離ddI 0.1 00 2801 00 01000 0a將外周血液單核細胞懸浮在48孔板的接種培養基中，濃度為3×106細胞/毫升。開始培養5天後，用PBS漂洗培養基四次以除去未附著細胞。將附著細胞在用10,000cpm/孔的HIV-1Ada-M單核細胞株接種前，首先在有含有藥物的培養基或沒有含有藥物的培養基存在下預培養2小時。然後，每4至5天更換培養基，並用補充有或沒有ddI的培養基代替。通過用酶分析測定p24的水平了監測病毒複製。
游離和脂質體包囊的膦甲酸的抗-CMV活性也在胚胎肺成纖維細胞(MRC-5細胞系)中評價。簡而言之，用人CMV AD169株感染細胞，用系列稀釋的游離和脂質體膦甲酸處理。培養96小時後，將細胞固定，用單克隆抗體(抗72-kDa早期CMV蛋白)進行免疫過氧化酶染色。計數標記的血小板，結果用未處理的感染對照細胞與膦甲酸濃度的百分比表示。結果表明，游離和脂質體膦甲酸具有可比的對CMV p72在MRC-5細胞系中表達的抑制活性(圖2g)。
體內研究在大鼠中研究了游離和脂質體包囊的抗-HIV藥物的藥代動力學特性和組織分布。簡而言之，通過插入動物頸靜脈的插管將游離和脂質體包囊的藥物以單一靜脈內藥團劑量注射給雌性Sprague-Dawley大鼠。在特定的時間點處死動物，將血樣收集到肝素化試管中，離心分離。在相同的時間，除去選擇後的組織，洗滌，稱重並勻化。然後根據商用組織增溶方法處理組織和血漿。用放射性示蹤劑監測所有樣品中的藥物和類脂水平。
結果清楚地表明，將抗病毒藥物包囊到脂質體中與未包囊藥物相比，可在富含巨噬細胞組織中得到更高的藥物累積(圖3a至3l)。在這些易受HIV感染的組織中較大量抗病毒藥物的釋放以及藥物在潛在毒性位點的降低的釋放可得到具有增加效應且降低毒性的抗-HIV藥物。特別地，發明人表明，脂質體膦甲酸在淋巴結中的累積比游離藥物高8倍(表2；圖3j、3k和3l為相同製劑10mg膦甲酸/kg)。
表2對大鼠進行單一靜脈內劑量(10mg膦甲酸/kg)給藥後，在不同組織中游離的和脂質體包裹的膦甲酸的曲線下面積。a組織 脂質體包裹的膦游離膦甲酸L-膦甲酸/甲酸膦甲酸的比例淋巴結163.5 20.3 8.1大腦 40.8 3.1 13.2眼睛 86.9 22.9 3.8脾1151.40.8 1495.3肝62.5 1.2 52.1肺59.7 1.5 39.8a數值用梯形(trapezoidal)規則從組織分布曲線的平均值計算得到，以nmol膦甲酸/g組織/h表示。
當用脂質體膦甲酸代替游離藥物對動物注射時，在動物大腦中也觀察到了藥物聚集量的增加。由於HIV病理學涉及嚴重的中央神經系統疾病，所以該特徵非常重要。另外，由於我們的數據表明在用脂質體膦甲酸代替游離藥物進行注射後，眼內的藥物聚集增加，所以給予脂質體膦甲酸可以在HIV感染的患者中改善藥物對CMV的效力並可用於治療CMV視網膜炎。將抗病毒藥物包裹於脂質體中時，還觀察到了藥代動力學的改善(表3和4；與圖3a至3e和3j至3l中的製劑相同)。發現包裹藥物的系統清除率比游離藥物低得多，導致脂質體藥物的清除半衰期大大增加。將抗病毒藥物包裹於脂質體中所引起的藥理學的改善有望降低常規治療中所用的抗病毒藥物的劑量以及抗HIV藥物的給藥頻率，從而改善AIDS或其它病毒性疾病患者的生活質量。表3對大鼠進行單一靜脈內劑量(3mg ddI/kg)給藥後，游離的和脂質體ddI的藥代動力學參數。a參數t空間穩定的脂質體常規脂質體游離ddIDSPC∶DSPG∶PEG DSPC∶DSPG
(10∶3∶1.45) (10∶3) [3H]ddI[3H]ddI[3H]ddI[14C]DPPC [14C]DPPCt1/2(h) 3.53 14.50 2.64 3.92 0.14AUC0-∞950.3 17420649.9 4971 5.31(nmol/ml/h)Kel(h-1) 0.20 0.048 0.26 0.18 4.97Vdss(1/kg) 0.071 0.077 0.0740.0700.48Cl(1/h/kg) 0.013 0.004 0.0200.0132.39MRT(h) 5.31 21.04 3.79 5.51 0.20a參數用零室模型從血漿濃度-時間曲線計算得到。t縮寫t1/2，清除半衰期；AUC0-∞，血漿濃度-時間曲線下從零到無窮的曲線下面積；Kel，清除速率常數；Vdss，穩態分布體積；Cl，系統清除率；MRT，平均保留時間。表4對大鼠進行單一靜脈內劑量(10mg/kg)給藥後，游離的和脂質體PFA的藥代動力學參數。a藥代動力學參數t游離膦甲酸 脂質體包裹的膦甲酸 脂質體類脂[14C]-PFA [14C]-PFA [3H]-DPPCt1/2(h) 0.71±0.04 3.06±0.34 5.44±0.79AUC0-＞∞48.0±9.6 3687.5±374.2 24277.8±2962.8(nmol/ml/h)Kel(h-1)0.96±0.06 0.24±0.03 0.12±0.02Vdss(1/kg) 0.80±0.14 0.040±0.0040.050±0.003Cl(1/h/kg) 0.77±0.15 0.010±0.0010.006±0.001MRT(h) 1.04±0.07 4.52±0.42 7.93±1.12a數值表示每個時間點從每組6隻動物得到的平均值±SD。t縮寫t1/2，清除半衰期；AUC0-∞，血漿濃度-時間曲線下從零到無窮的曲線下面積；Kel，清除速率常數；Vdss，穩態分布體積；Cl，系統清除率；MRT，平均保留時間。
權利要求
1.一種用於治療病毒性疾病的脂質體組合物，含有i)含有摩爾比在10∶1和1∶1之間的二醯基磷脂醯膽鹼和二醯基磷脂醯甘油的混合物的類脂成分，其中的醯基鏈可以是飽和或不飽和的，並且鏈長在14和18個碳原子之間，和ii)治療量的對所述病毒性疾病有效的包封藥物。
2.根據權利要求1的脂質體組合物，其中所述類脂成分另外含有二醯基磷脂醯乙醇胺的聚乙二醇衍生物。
3.一種用於治療病毒性疾病的脂質體組合物，所述製劑含有i)含有摩爾比為4∶1∶5的二醯基磷脂醯膽鹼∶磷酸三十二烷酯∶膽甾醇的混合物的類脂成分，其中的醯基鏈可以是飽和或不飽和的，並且鏈長在14和18個碳原子之間，和ii)治療量的對所述病毒性疾病有效的包封藥物。
4.根據權利要求3的脂質體組合物，其中所述類脂成分另外含有二醯基磷脂醯乙醇胺的聚乙二醇衍生物。
5.根據權利要求1的脂質體組合物，其中的包封藥物選自3』-疊氮基-3』-脫氧胸苷(AZT)、ddI、ddC、膦甲酸、三氮唑核苷、更昔洛韋和saquinavir。
6.根據權利要求5的脂質體組合物，其中的類脂成分是摩爾比為10∶3的二醯基磷脂醯膽鹼∶二醯基磷脂醯甘油。
7.根據權利要求2的脂質體組合物，其中的包封藥物選自3』-疊氮基-3』-脫氧胸苷(AZT)、ddI、ddC、膦甲酸、三氮唑核苷、更昔洛韋和saquinavir。
8.根據權利要求7的脂質體組合物，其中的類脂成分是摩爾比為10∶3∶1.45的二醯基磷脂醯膽鹼∶二醯基磷脂醯甘油∶二醯基磷脂醯乙醇胺-聚乙二醇。
9.根據權利要求3的脂質體組合物，其中的包封藥物選自3』-疊氮基-3』-脫氧胸苷(AZT)、ddI、ddC、膦甲酸、三氮唑核苷、更昔洛韋和saquinavir。
10.根據權利要求4的脂質體組合物，其中的包封藥物選自3』-疊氮基-3』-脫氧胸苷(AZT)、ddI、ddC、膦甲酸、三氮唑核苷、更昔洛韋和saquinavir。
11.根據權利要求2、4、8和10中的任意一項的脂質體組合物，其中聚乙二醇的分子量為大約500和大約5000道爾頓之間。
12.根據權利要求6的脂質體組合物，其中的類脂成分是摩爾比為10∶3的二醯基磷脂醯膽鹼∶二醯基磷脂醯甘油，而包封藥物是2』，3』-二脫氧肌苷。
13.根據權利要求8的脂質體組合物，其中的類脂成分是摩爾比為10∶3∶1.45的二醯基磷脂醯膽鹼∶二醯基磷脂醯甘油∶二醯基磷脂醯乙醇胺-聚乙二醇，而包封藥物是2』，3』-二脫氧肌苷。
14.根據權利要求6的脂質體組合物，其中的類脂成分是摩爾比為10∶3的二醯基磷脂醯膽鹼∶二醯基磷脂醯甘油，而包封藥物是膦甲酸。
15.根據權利要求9的脂質體組合物，其中的類脂成分是摩爾比為4∶1∶5的二棕櫚醯基磷脂醯膽鹼∶磷酸三十二烷酯∶膽甾醇，而包封藥物是2』，3』-二脫氧胞苷。
16.根據權利要求1至10和12至15中的任意一項的脂質體組合物，其平均顆粒直徑在大約0.05和0.5μm之間。
17.根據權利要求11的脂質體組合物，其平均顆粒直徑在大約0.05和0.5μm之間。
18.對病毒性疾病患者進行治療的方法，包括向所述患者給予權利要求1至10、12至15、和17中任意一項的脂質體組合物。
19.對病毒性疾病患者進行治療的方法，包括向所述患者給予權利要求11的脂質體組合物。
20.對病毒性疾病患者進行治療的方法，包括向所述患者給予權利要求16的脂質體組合物。
全文摘要
公開了一種治療病毒性疾病的方法，包括給予脂質體包裹的抗病毒藥物。還提供了由於治療病毒性疾病、尤其是治療由病毒如人免疫缺損病毒(HIV)和細胞肥大病毒(CMV)引起的感染的脂質體組合物。該脂質體組合物由特定種類的類脂成分組成，並含有包封的、可有效抵抗病毒性疾病的藥物。該抗病毒藥物脂質體組合物可以在不同的細胞系中具有高的細胞穿透能力，在體外對HIV和CMV複製具有良好的抗病毒活性，在體內對HIV貯主具有有效的靶向能力，並且對藥物的藥代動力學具有顯著的改善。
文檔編號A61K31/70GK1165480SQ95196052
公開日1997年11月19日 申請日期1995年10月3日 優先權日1994年10月3日
發明者M·G·伯傑龍, A·德索梅奧克斯 申請人:M·G·伯傑龍, A·德索梅奧克斯