斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統的製作方法
2023-12-09 06:40:21
專利名稱：：斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統的製作方法
技術領域：
：本實用新型涉及抗體檢測系統
技術領域：
，特別涉及血吸蟲病抗體檢測系統
技術領域：
，具體是指一種斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統。
背景技術：
：血吸蟲病免疫學診斷方法是十分可靠的輔助診斷依據，也是流行病學調查最常用的工具。在目前常用的有酶聯免疫法、間接血凝法、膠體染料試紙條法、膠體金斑點免疫滲濾法。雖然這些方法各有利弊，但在血吸蟲病檢測的敏感性和特異性方面沒有明顯區別，都納入了中華人民共和國衛生行業標準——血吸蟲病診斷標準(WS261-2006)。膠體金斑點免疫滲濾法是上世紀90年代以來我國血吸蟲病免疫診斷市場上新出現的方法，其優勢在於操作簡便、反應快速，不需任何專門設備，不需工作人員特殊培訓，可作快速診斷工具。但是，滲濾法也有一些缺點，如，滲濾法對血清的要求比較高，一般要求新鮮血清，如果陳舊血清則需離心分離，否則將使滲透速率下降造成反應膜堵塞，影響反應結果，而且滲濾法需要的血清量較大，通常50ul100ul，這些因素都限制其現場大規模應用。因此，需要提供一種斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統，其使用簡便，成本降低，檢測快速靈敏，檢測效果準確可靠，適於現場大規模應用。
實用新型內容本實用新型的目的是克服了上述現有技術中的缺點，提供一種斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統，該檢測系統設計巧妙，使用簡便，成本降低，檢測快速靈敏，檢測效果準確可靠，適於現場大規模應用。為了實現上述目的，本實用新型的斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統有如下構成該斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統，其特點是，包括反應裝置，所述反應裝置包括盒體、盒蓋、吸水材料和反應膜，所述吸水材料位於所述盒體中，所述反應膜置於所述吸水材料上，所述盒蓋蓋在所述盒體上壓住所述反應膜，所述盒蓋上開有反應孔，裸露部分所述反應膜，所述反應孔為橢圓形反應孔。較佳地，所述橢圓形反應孔的容積是50ii1，底面積為0.5cm2。較佳地，所述橢圓形反應孔設置在所述盒蓋的中央。較佳地，所述反應膜是微孔膜。更佳地，所述微孔膜是硝酸纖維膜，所述硝酸纖維膜的孔徑是0.45i！m。較佳地，所述吸水材料的厚度為3mm5mm。較佳地，所述吸水材料是吸水紙墊。更佳地，所述吸水紙墊為32層餐巾紙。較佳地，所述反應孔中的所述反應膜上包被可溶性蟲卵抗原膜層、人IgG膜層和封閉劑層，所述可溶性蟲卵抗原膜層和所述人IgG膜層位於所述封閉劑層中由所述封閉劑層隔開。較佳地，所述斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統還包括盛放洗滌液的第一試劑瓶和盛放顯色液的第二試劑瓶。本實用新型的有益效果具體如下1.本實用新型將反應孔設計成橢圓形反應孔，設計巧妙，擴大了血清滲透面積，便於洗滌液對反應膜的充分洗滌，保持濾孔通暢，使得陳舊血清也能夠滲透，省卻了使用離心機進行離心分離的步驟，使用簡便；2.本實用新型的抗原包被於反應孔的正中央，檢測時血清從中央加入，直接加在抗原上面與之充分接觸，血清用量成倍減少(容積均為50iU時，採用橢圓形反應孔可以減少血清用量25i！1)，成本大大降低；3.本實用新型的吸水材料採用吸水紙墊，最適厚度為32層餐巾紙，提高了滲透速率；通過調整金標二抗及包被抗原的濃度，最適金標二抗濃度為A520nm1.O，抗原濃度為0.2mg/ml，增強了反應靈敏度；通過調整金標洗滌液配方，吐溫-20的最適濃度為2%，背景更加清晰，檢測快速靈敏，檢測效果準確可靠；4.本實用新型對血清純度不作要求，陳舊血清無需離心即可使用；反應體系血清用量少，僅需25iU;反應速率快，全過程用時1分半鐘；檢測效果準確可靠，適於現場大規模應用。圖1是本實用新型的一具體實施例的結構示意圖。圖2是圖1所示的具體實施例的反應裝置的分解示意圖。圖3a-c是採用本實用新型進行檢測的檢測結果示意圖。具體實施方式為了能夠更清楚地理解本實用新型的技術內容，特舉以下實施例詳細說明。請參閱圖1-2所示，本實用新型的斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統包括反應裝置l，所述反應裝置1包括盒體11、盒蓋12、吸水材料13和反應膜14，所述吸水材料13位於所述盒體11中，所述反應膜14置於所述吸水材料13上，所述盒蓋12蓋在所述盒體11上壓住所述反應膜14，所述盒蓋12上開有反應孔15，裸露部分所述反應膜14，所述反應孔15為橢圓形反應孔。因此，體積不變，反應孔15設計成橢圓形，擴大了血清滲透面積，便於洗滌液對反應膜14的充分洗滌，保持濾孔通暢，使得陳舊血清也能夠滲透，省卻了使用離心機進行離心分離的步驟。在本實用新型的具體實施例中，所述橢圓形反應孔的容積是50iU，底面積為0.5cm2。在本實用新型的具體實施例中，所述橢圓形反應孔設置在所述盒蓋12的中央。較佳地，所述反應膜14是微孔膜。在本實用新型的具體實施例中，所述微孔膜是硝酸纖維膜，所述硝酸纖維膜的孔徑是0.45iim。較佳地，所述吸水材料13的厚度為3mm5mm。較佳地，所述吸水材料13是吸水紙墊。通過調整反應膜14下面吸水紙墊的厚度，提高滲透速率。將不同層數的市售餐巾紙(吸水紙墊)襯於反應膜14下，根據檢測效果確定最適層數。在本實用新型的具體實施例中，所述吸水紙墊為32層餐巾紙。較佳地，所述反應孔15中的所述反應膜14上包被可溶性蟲卵抗原膜層、人IgG膜層和封閉劑層，所述可溶性蟲卵抗原膜層和所述人IgG膜層位於所述封閉劑層中由所述封閉劑層隔開。在本實用新型的具體實施例中，可溶性蟲卵抗原膜層位於反應孔15的正中央，抗原旁點滴人IgG作為質控點。檢測時血清從中央加入，直接加在抗原上面與之充分接觸，血清用量可成倍減少(25iU)。較佳地，所述斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統還包括盛放洗滌液的第一試劑瓶2和盛放顯色液的第二試劑瓶3。顯色液即為金標二抗，調整金標二抗及包被抗原的濃度，可增強反應靈敏度。在本實用新型的具體實施例中，包被抗原採用自製的血吸蟲可溶性蟲卵抗原，濃度為0.2mg/ml;採用中國藥品生物製品檢定所提供的"血吸蟲病抗體診斷試劑國家參考品"(批號20041108)作為最適抗原濃度和金標二抗驗證血清；洗滌劑基本配製為0.02mol/LpH8.0TBS，然後加入不同濃度(0.5%5%)的吐溫-20，根據背景清晰度選擇最適濃度，吐溫-20的最適濃度為2%，背景更加清晰。本實用新型的製造過程為在4.0cmX2.2cm的塑料盒體11內填滿吸水墊料13，盒蓋12中央開一面積0.5cm2的橢圓形的反應孔15，孔下緊貼吸水墊料放置一小片硝酸纖維膜(孔徑0.45iim)，膜中央點滴liil可溶性蟲卵抗原(用0.02mol/LPBS稀釋)，抗原旁點滴O.5iU人IgG作為質控點，室溫自然乾燥2h，滴加封閉劑，乾燥後密閉fC保存備用。[0034]檢測時在反應裝置1的中央的橢圓形的反應孔15內滴加2滴洗滌液，滲入後於反應孔15中央加25iU受檢血清，待液體充分吸入，加2滴洗滌液，滲入後加4滴金標二抗，最後加2滴洗滌液，滲入後即可判斷結果。如圖3a-c所示，反應孔15中出現兩個紅色斑點為陽性，出現一個紅色斑點為陰性，無斑點表示結果無效。採用本實用新型對血吸蟲病抗體診斷試劑國家參考品的測試結果，顯示出陰陽性參考品的檢測符合率均為100%，靈敏度為1:4，精密度測試10次均為陽性，顯色均勻一致，均符合國家參考品的檢測質量要求(見下表l)。參加由衛生部血吸蟲病專家諮詢委員會於2008年組織的中國血吸蟲病免疫診斷試劑實驗室測評工作，歷經初篩和正式測評2個階段。試劑盒的敏感性92%，特異性95.08%，Youden指數0.87，ka卯a值0.87，具有較好的重複性。表1血吸蟲病抗體診斷試劑國家參考品的測試結果[0037]tableseeoriginaldocumentpage5tableseeoriginaldocumentpage6綜上，本實用新型的斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統設計巧妙，使用簡便，成本降低，檢測快速靈敏，檢測效果準確可靠，適於現場大規模應用。在此說明書中，本實用新型已參照其特定的實施例作了描述。但是，很顯然仍可以作出各種修改和變換而不背離本實用新型的精神和範圍。因此，說明書和附圖應被認為是說明性的而非限制性的。權利要求一種斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統，其特徵在於，包括反應裝置，所述反應裝置包括盒體、盒蓋、吸水材料和反應膜，所述吸水材料位於所述盒體中，所述反應膜置於所述吸水材料上，所述盒蓋蓋在所述盒體上壓住所述反應膜，所述盒蓋上開有反應孔，裸露部分所述反應膜，所述反應孔為橢圓形反應孔。2.根據權利要求1所述的斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統，其特徵在於，所述橢圓形反應孔的容積是50iil，底面積為0.5cm2。3.根據權利要求1所述的斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統，其特徵在於，所述橢圓形反應孔設置在所述盒蓋的中央。4.根據權利要求1所述的斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統，其特徵在於，所述反應膜是微孔膜。5.根據權利要求4所述的斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統，其特徵在於，所述微孔膜是硝酸纖維膜，所述硝酸纖維膜的孔徑是0.45i！m。6.根據權利要求1所述的斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統，其特徵在於，所述吸水材料的厚度為3mm5mm。7.根據權利要求1所述的斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統，其特徵在於，所述吸水材料是吸水紙墊。8.根據權利要求7所述的斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統，其特徵在於，所述吸水紙墊為32層餐巾紙。9.根據權利要求1所述的斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統，其特徵在於，所述反應孔中的所述反應膜上包被可溶性蟲卵抗原膜層、人IgG膜層和封閉劑層，所述可溶性蟲卵抗原膜層和所述人IgG膜層位於所述封閉劑層中由所述封閉劑層隔開。10.根據權利要求1所述的斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統，其特徵在於，所述斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統還包括盛放洗滌液的第一試劑瓶和盛放顯色液的第二試劑瓶。專利摘要本實用新型涉及一種斑點免疫金滲濾法血吸蟲病抗體檢測系統，包括反應裝置，反應裝置包括盒體、盒蓋、吸水材料和反應膜，吸水材料位於所述盒體中，反應膜置於吸水材料上，盒蓋蓋在所述盒體上壓住反應膜，盒蓋上開有反應孔，裸露部分反應膜，反應孔為橢圓形反應孔，較佳地，橢圓形反應孔的容積是50μl，底面積為0.5cm2，設置在盒蓋的中央，反應膜是微孔膜，吸水材料的厚度為3mm～5mm，是吸水紙墊，反應孔中的反應膜上包被可溶性蟲卵抗原膜層、人IgG膜層和封閉劑層，還包括盛放洗滌液的第一試劑瓶和盛放顯色液的第二試劑瓶，本實用新型設計巧妙，使用簡便，成本降低，檢測快速靈敏，檢測效果準確可靠，適於現場大規模應用。文檔編號G01N33/52GK201464476SQ20092007587公開日2010年5月12日申請日期2009年8月5日優先權日2009年8月5日發明者何豔燕,劉靜,張麗,張小萍,張明敏,蔣守富,蔡黎,邱倩雯,馬曉疆申請人:上海市疾病預防控制中心;上海疾控生物科技有限公司