含有非活的雙歧桿菌和非消化性寡糖的營養物的製作方法

2023-12-10 10:12:07

專利名稱：：含有非活的雙歧桿菌和非消化性寡糖的營養物的製作方法
技術領域：
：本發明涉及嬰兒和/或幼童營養物的領域。特別地，本發明涉及包含非消化性寡糖和非活的(non-viable)雙歧桿菌的嬰兒和/或幼童營養物。這樣的營養組合物有利地用於治療或預防過敏(優選食物過敏)和/或特應性疾病(包括特應性皮炎和/或哮喘)。
背景技術：
：人乳餵養的人類嬰兒在出生後會形成富含產乳酸細菌的腸道微生物群。這是因為在人乳中存在非消化性糖類，而這些糖類可被產乳酸細菌(尤其是雙歧桿菌)特異性發酵。富含雙歧桿菌的微生物群是有益的，這是因為它具有預防以下病症的作用感染、腹瀉、便秘、胃腸炎症、腸道成熟(intestinalmaturation)、過敏特別是食物過敏、特應性疾病包括特應性皮炎以及哮喘，並且它對免疫系統具有有益作用。可使針對幼兒的配方模擬人乳的促雙歧桿菌生長效應(bifidogeniceffect)。W2005039319公開了使用活的短雙歧桿菌(Bifidobacteriumbreve)和兩種不同的非消化性糖類的混合物以改善用配方餵養之嬰兒的微生物群。該文獻公開了雙歧桿菌在屬的水平和在種的水平上的相關性。W020070046698公開了使用包含非消化性寡糖的組合物來製備向剖腹產嬰兒腸道施用的組合物。共施用活的乳酸細菌以增加剖腹產嬰兒腸道中微生物的多樣性和/或數量。JP01242532公開了使用活的或非活的短雙歧桿菌作為刺激集合淋巴小結(Peyer’spatch)的免疫強化劑，從而預防腸道內感染和過敏。該文獻未涉及用於嬰兒和/或幼童的營養配方。
發明內容已知活的短雙歧桿菌細胞可改善微生物群並從而改善過敏。然而，優選使用非活的短雙歧桿菌。這具有如下優點1)包含非活的短雙歧桿菌的產品儲存更容易並且成本降低，這是因為不需要做特殊的事先準備來維持短雙歧桿菌細胞可接受水平的生存力。這在水活度高於0.3的產品中尤為需要。2)沒有後酸化(post-acidification)發生，這是因為具有高水活度之儲存產品中的短雙歧桿菌不存在發酵能力，和/或在用水重溶之後、食用之前期間的嬰兒配方中的短雙歧桿菌不存在發酵能力。3)生產後，包含非活的短雙歧桿菌的最終營養組合物可進行巴氏消毒和/或滅菌，從而減少汙染有害微生物(例如坂崎腸桿菌(E.sakazakii))的機會。所以，本發明使得能夠製備並在室溫儲存包含非活的短雙歧桿菌的液體、即用型配方。4)需要時，可使用溫度高於37°C的水來重溶包含非活的短雙歧桿菌的粉末產品。5)每個嬰兒和/或幼童所接受的短雙歧桿菌細胞劑量可更容易控制，這是因為液體產品中不再發生任何生長，嬰兒腸道中也不再發生生長。後者是取決於個體腸道環境的可變因子，並從而導致各嬰兒中有益作用程度的不同。本發明人出人意料地發現，可以在包含非消化性寡糖的嬰兒和/或幼童營養物中有利地添加非活的短雙歧桿菌細胞以對食物過敏和/或其它特應性疾病具有預防和/或治療作用。組合物中非活的短雙歧桿菌的作用與活的短雙歧桿菌細胞的作用相當。所觀察到的失活短雙歧桿菌的抗過敏作用不能用直接的益生菌作用(例如通過改善菌群的作用)來解釋，這是因為這些細胞不再是活的並因此不會增加微生物群中短雙歧桿菌細胞的數目。迄今，短雙歧桿菌的有益作用被認為依賴於存在活細胞。非活的短雙歧桿菌細胞的作用與活的短雙歧桿菌相當但是略低。本發明人出人意料地發現，非活的短雙歧桿菌的作用還可通過非消化性寡糖的存在而進一步改進。這些是預料不到的，因為通常在共生製備物(synbioticpr印aration)中存在的非消化性寡糖刺激存在的益生細菌並從而顯示改善的作用。本發明人出乎意料地發現，在包含失活短雙歧桿菌的製備物(其不能使用和得益於存在的非消化性寡糖)中，也發現所述組合相比於單一化合物具有改進作用。非消化性寡糖刺激嬰兒和/或幼童的腸內微生物群，尤其是雙歧桿菌和/或乳酸桿菌的數量。施用非活的短雙歧桿菌的同時通過非消化性寡糖改善用配方餵養的嬰兒和/或幼童的微生物群，導致對預防和/或治療以下病症的作用增強，例如對感染、腹瀉、便秘、胃腸炎症、腸道成熟、過敏特別是食物過敏、特應性皮炎和/或哮喘的預防作用。具體實施例方式本發明涉及包含非消化性寡糖A和/或B以及一定量非活的短雙歧桿菌(相當於每克嬰兒和/或幼童營養物乾重至少103cfu)並包含一定量的活的短雙歧桿菌(每克嬰兒和/或幼童營養物乾重小於103cfu)的嬰兒和/或幼童營養物。本發明的一方面涉及餵食嬰兒和/或幼童的方法。本發明的另一方面涉及治療和/或預防過敏(優選食物過敏)和/或特應性疾病(包括特應性溼疹和/或哮喘)的方法，所述方法包括向對象施用本發明的嬰兒和/或幼童營養物。本發明的又一方面涉及治療和/或預防感染的方法，所述方法包括向對象施用本發明的嬰兒和/或幼童營養物。本發明的另一方面涉及治療和/或預防尿布皮炎(diaperdermatitis)的方法，所述方法包括向對象施用本發明的嬰兒和/或幼童營養物。換句話說，本發明涉及嬰兒和/或幼童營養物製備用於治療和/或預防過敏(優選食物過敏)、特應性疾病(包括特應性溼疹和/或哮喘)的組合物或營養物的用途，或者也就是說，本發明涉及用於治療和/或預防過敏(優選食物過敏)、特應性溼疹和/或哮喘的本發明嬰兒和/或幼童營養物。作為替代地，本發明涉及嬰兒和/或幼童營養物製備用於治療和/或預防感染的組合物或營養物的用途，或者也就是說，本發明涉及用於治療和/或預防感染的本發明嬰兒和/或幼童營養物。作為替代地，本發明涉及嬰兒和/或幼童營養物製備用於治療和/或預防尿布皮炎的組合物或營養物的用途，或者也就是說，本發明涉及用於治療和/或預防尿布皮炎的本發明嬰兒和/或幼童營養物。短雙歧桿菌短雙歧桿菌是革蘭氏陽性、厭氧的、分枝杆狀細菌。與短雙歧桿菌的模式菌株ATCC15700相比，本發明短雙歧桿菌的16SrRNA序列優選地具有至少95%的一致性，更優選至少97%的一致性(Stackebrandt&Goebel,1994，Int.J.Syst.Bacteriol.44846-849)。本發明的組合物、方法和用途中涉及的雙歧桿菌優選地與短雙歧桿菌探針雜交並在5』核酸酶測定法中產生信號，如WO2005039319所述。優選的短雙歧桿菌菌株是從用健康人乳餵養的嬰兒的糞便中分離的菌株。通常，這些可以從乳酸細菌生產者處購得，但是也可以直接從糞便中分離，鑑定，表徵和製備。根據一個優選的實施方案，本發明的組合物包含至少一種選自以下的短雙歧桿菌短雙歧桿菌Bb-03(Rhodia/Danisco)、短雙歧桿菌M-16V(Morinaga)、短雙歧桿菌R0070(InstituteRosell,Lallemand)、短雙歧桿菌BR03(Probiotical)、短雙歧桿菌BR92(CellBiotech)、DSM20091和LMG11613。最優選地，所述非活的短雙歧桿菌是非活的短雙歧桿菌M-16V(Morinaga)。最優選地，所述非活的短雙歧桿菌來自保藏於法國巴黎CNCM的短雙歧桿菌菌株1-2219。本發明的組合物包含一定量非活的短雙歧桿菌(相當於每克組合物乾重至少IO3Cfu)。本發明的組合物優選包含相當於每克本發明組合物乾重IO3IO13集落形成單位(cfu)短雙歧桿菌的非活的短雙歧桿菌，優選IO41012、更優選IO51011、最優選相當於每克本發明組合物乾重IO5IOltlCfu短雙歧桿菌。優選地，本發明的組合物包含相當於每克總的非消化性寡糖IO41013、優選IO51012、最優選相當於IO65XIO11集落形成單位(cfu)短雙歧桿菌。本發明非活的短雙歧桿菌的劑量優選地以相當於IO41014、更優選IO51013、更優選IO61012、最優選IO85XIO11集落形成單位(Cfu)的日劑量來施用。當組合物為液體時，該組合物優選地包含相當於每IOOml本發明組合物IO4IO14集落形成單位(cfu)的非活的短雙歧桿菌，優選IO51013、更優選IO61012、最優選相當於每IOOml本發明組合物IO6IO11Cfu的短雙歧桿菌。一定量的相當於每克乾重至少IO3Cfu的非活的短雙歧桿菌是指相當於每克乾重至少IO3Cfu短雙歧桿菌之量的非活的短雙歧桿菌。可通過用短雙歧桿菌探針和引物對包含非活的短雙歧桿菌的產品(即嬰兒配方)進行5』核酸酶測定並將其與校準曲線進行比較來測定cfu的相當量(如WO2005039319中所公開地)，所述校準曲線從已添加已知量幹的、活的短雙歧桿菌cfu的可比產品(例如標準嬰兒配方)獲得。所述幹的、活的雙歧桿菌可如上所述購得。認為校準曲線中由活的短雙歧桿菌(其與包含失活短雙歧桿菌的產品具有同樣的5』核酸酶測定應答)得到的cfu值是非活的短雙歧桿菌的相當量。或者，每克乾重的cfu量可以在失活步驟之前在組合物中測定。存在大量活的雙歧桿菌仍會導致液體嬰兒配方中發生後酸化作用。因此，本發明的組合物包含每克組合物乾重小於IO3Cfu活的雙歧桿菌，優選地小於102，更優選地小於lOcfu。當採用液體形式時，本發明的組合物包含每IOOml優選地小於IO4Cfu活的雙歧桿菌，優選地小於103cfu，更優選地小於102cfu。活的雙歧桿菌的cfu可以如Ingham，S.C.，1999，J.FoodProt.62(1)77-80頁所述進行適當測定。優選地，所述組合物根本不包含可測量的活的短雙歧桿菌cfu。然而，完全不存在活的短雙歧桿菌是難於測定的或者是不可能測定的。適當地，可通過平板培養法測定的低於檢測限來表示不存在活的短雙歧桿菌。該檢測限為每克乾重組合物103cfu。本申請中非活的短雙歧桿菌涉及死的短雙歧桿菌、非可培養(non-culturable)的短雙歧桿菌、不生長的短雙歧桿菌和/或(代謝)失活的短雙歧桿菌。可通過本領域已知的方法使短雙歧桿菌細胞成為非活的細胞，包括熱處理步驟(包括滅菌、巴氏消毒、UHT處理)、輻射(UV)、用氧處理、用殺菌劑(例如乙醇)處理、超聲處理、超高壓應用、高壓勻漿以及使用細胞破碎儀。優選地，短雙歧桿菌被熱殺死。非活的短雙歧桿菌的存在有利地預防和/或治療至少一種選自以下的疾病感染、腹瀉、便秘、胃腸炎症、由腸道成熟受損引起的疾病、(食物)過敏、特應性皮炎、溼疹和哮喘，同時提供許多產品技術益處，包括延長貨架期、降低細菌汙染發生率、減少產品的後酸化作用、改善劑量控制以及改善重溶的方便性。非消化件寡糖本發明的組合物包含非消化性寡糖A和/或B。所述非消化性寡糖A和/或B優選地刺激腸內產乳酸細菌(特別是雙歧桿菌和/或乳桿菌)的生長，並因此刺激健康腸內微生物群的形成，並優選發酵成有機酸。所形成的有機酸刺激粘液產生並因此進一步改善嬰兒中的腸屏障功能和/或成熟。因此，非消化性寡糖A和/或B的存在對感染、過敏和/或特應性疾病具有有利的作用。有利地，所述非消化性寡糖A和/或B是水溶性的(根據L.Prosky等，J.Assoc.Anal.Chem71:1017_1023，1988中公開的方法)並且是聚合度(degreeofpolymerisation,DP)為2200的寡糖。所述非消化性寡糖A和/或B的(平均)DP優選低於200，更優選低於100，更優選低於60，最優選低於40。所述非消化性寡糖A和/或B不在腸中被人類上消化道(小腸和胃)中存在的消化酶所消化。所述非消化性寡糖A和/或B優選被人類腸內微生物群所發酵。例如，認為葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖和麥芽糊精是可消化的。寡糖原材料可包含單糖例如葡萄糖、果糖、巖藻糖、半乳糖、鼠李糖、木糖、葡糖醛酸、乙醯氨基半乳糖(GalNac)等，但這些不是本發明中所述寡糖的一部分。本發明的組合物、方法和用途中涉及的非消化性寡糖A和/或B包括非消化性寡糖的混合物。這是常用的實踐，因為使用例如一種鏈長的非消化性寡糖是非常昂貴的。優選地，所述非消化性寡糖選自低聚果糖(包括菊粉)、非消化性糊精、低聚半乳糖(包括反式低聚半乳糖)、低聚木糖、低聚阿拉伯糖、低聚阿拉伯半乳聚糖、低聚葡萄糖(包括低聚龍膽糖和環糊精)、低聚葡甘露聚糖、低聚半乳甘露聚糖、低聚甘露聚糖、低聚殼糖、糖醛酸低聚糖、唾液酸低聚糖(包括3-SL、6-SL、LSTa,b，c、DSLNT、S-LNH、DS-LNH)和低聚巖藻糖(包括(未經)硫酸化的巖藻多糖0S、2-FL、3-FL、LNFPI，II，III，V、LNnFPI、LNDH)及其混合物，更優選低聚果糖(包括菊粉)、低聚半乳糖(包括反式低聚半乳糖，α以及優選地β連接的)、糖醛酸低聚糖和低聚巖藻糖及其混合物，更優選反式低聚半乳糖和/或菊粉，最優選反式低聚半乳糖。當非消化性寡糖A和/或B是混合物時，使用各參數的平均數來限定本發明。本發明優選地提供包含兩種不同的非消化性寡糖(即非消化性寡糖A和非消化性寡糖B)的組合物。所述非消化性寡糖A和非消化性寡糖B優選地具有不同類型的糖苷鍵、不同的聚合度和/或不同的單糖組成。根據本發明的一個優選實施方案，特定單糖在非消化性寡糖A中的百分比比同種單糖在非消化性寡糖B中的百分比至少高出40%(數目)，優選地至少50%，更優選地至少75%，更優選地至少90%。增加單糖的多樣性刺激更廣泛的有益腸細菌群。單糖在非消化性寡糖中的百分比可簡單地如下計算將非消化性寡糖中的各單糖單元(例如葡萄糖)數除以該非消化性寡糖中的單糖單元總數，再乘以100。當非消化性寡糖是非消化性寡糖混合物時，須將非消化性寡糖混合物中每個單獨單糖單元的貢獻考慮在內。非消化性寡糖混合物中的單糖百分比可簡單地如下測定將該混合物完全水解並測定每種單糖數目的百分比。優選地，非消化性寡糖A包含至少40%(數目)半乳糖，更優選地至少67%半乳糖，更優選地至少75%半乳糖。優選地，非消化性寡糖B包含至少30%(數目)果糖，更優選地至少67%果糖，更優選地至少80%果糖。根據本發明的一個優選實施方案，非消化性寡糖A的平均DP比非消化性寡糖B的平均DP至少低5個單糖單元，優選地至少10個，更優選地至少15個。優選地，非消化性寡糖A的平均DP為210，更優選為3-5。優選地，非消化性寡糖B的平均DP低於200，更優選1160，更優選2030。包含聚合度增加的非消化性寡糖降低了滲透負荷，這對嬰兒營養物有利和/或增強腸內微生物群在結腸更遠處的益生元刺激。具有不同DP的非消化性寡糖A和B可具有相同或不同的單糖組成。優選地，非消化性寡糖A和B具有不同的單糖組成和不同的DP。優選地，非消化性寡糖A和B的累積重量的至少80wt.%、更優選至少95wt.%、最優選至少98wt.%具有低於60、更優選地低於40、最優選地低於20的DP。較低的DP有利地降低粘度以及提高非消化性寡糖的發酵性能。優選地，非消化性寡糖A和B的累積重量的至少50wt.%、優選至少75wt.%是DP為28的非消化性寡糖。通過使用包含高重量百分比的小的非消化性寡糖的混合物，提高了發酵性能以及對乳酸細菌和雙歧桿菌的生長的刺激作用。在本發明的另一優選實施方案中，非消化性寡糖A的至少一種糖苷連接相對於非消化性寡糖A總糖苷連接的百分比與寡糖B中同種糖苷連接的百分比相比至少高出40%或低出40%，優選地至少50%，更優選地至少75%。本發明中使用的術語「糖苷連接」是指通過脫水在兩個環狀單糖的環之間形成的C-O-C連接。糖苷連接的多樣性增加刺激了更廣泛的有益細菌。糖苷連接的不同在於它們與單糖單元中不同編號位置的碳原子共價結合，和/或它們形成α或β鍵。非消化性糖類中存在的不同糖苷連接的實例有β(1,3),α(1，4)、β(2，1)、α(1,2)和β(1,4)連接。優選地，在非消化性寡糖A中的糖苷連接包含至少40%(更優選至少75%)的β(1,4)和/或β(1,6)糖苷連接。在非消化性寡糖B中的糖苷連接優選地包含至少40%(更優選至少75%)的β(2,1)糖苷連接。優選地，非消化性寡糖A和B在單糖單元組成和糖苷連接類型上不同。優選地，非消化性寡糖A和B在糖苷連接類型和DP上不同。最優選地，非消化性寡糖A和B在糖苷連接類型、單糖組成和DP上不同，從而最佳地改善生物多樣性以及刺激多種腸內生物(尤其是雙歧桿菌屬的不同菌種)的生長。優選地，非消化性寡糖A和B總單糖單元的至少60%、更優選至少75%、更優選90%、最優選98%是選自半乳糖(gal)、果糖(fru)和葡萄糖(glu)單糖的單糖。非消化性寡糖A優選為選自β_低聚半乳糖、α-低聚半乳糖和半乳聚糖的寡糖。根據一個更優選的實施方案，非消化性寡糖A是低聚半乳糖或反式低聚半乳糖。優選地，非消化性寡糖A包含帶有β(1,4)和/或β(1,6)糖苷鍵的低聚半乳糖以及末端葡萄糖。反式低聚半乳糖例如可以商品名VivinalGOS(BorculoDomoIngredients,Zwolle,Netherlands)、Bi2muno(Clasado)、Cup_oligo(NissinSugar)禾口01igomate55(Yakult)購得。非消化性寡糖B優選為低聚果糖。低聚果糖在其它語境中可以有如下名稱fructopolysaccharide>oligofructose、polyfructose>polyfructan>菊粉、果聚||(levan)和果聚糖(fructan)，並且可以指包含0-連接果糖單元(優選地通過0(2,1)和/或0(2,6)糖苷連接進行連接，並且優選DP為2200)的寡糖。優選地，所述低聚果糖包含3(2,1)糖苷連接的末端葡萄糖。優選地，所述低聚果糖包含至少7個連接的果糖單元。在另一優選實施方案中，使用菊粉作為非消化性寡糖B。菊粉是一類低聚果糖，其中至少75%的糖苷連接是0(2,1)連接。通常，菊粉的平均鏈長為860個單糖單元。用於本發明組合物中的合適的低聚果糖可以商品名Raftiline:HP(orafti)購得。其它合適的來源有raftilose(Orafti)、fibrulose和fibruline(Cosucra)以及Frutafit和frutalose(Sensus)。最優選的是平均DP低於10、優選低於6的反式低聚半乳糖作為非消化性寡糖A以及平均DP高於7、優選高於11、更優選高於20的低聚果糖作為非消化性寡糖B，因為發現這樣的組合有利於改善腸內微生物群。如果組合物包含非消化性寡糖A和B，則非消化性寡糖A與非消化性寡糖B的重量比優選地從1/99到99/1，更優選地從1/19到19/1，更優選地從1到19/1。當非消化性寡糖A具有低的DP並且非消化性寡糖B具有相對高的DP時，該重量比特別有利。它確保了滲透壓和發酵性能之間的最佳平衡。它還確保了單糖組成多樣性、糖苷連接和/或聚合度的最佳作用。優選地，寡糖A是反式低聚半乳糖，寡糖B是低聚果糖。因此，根據一個實施方案，本發明的嬰兒營養物包含非消化性寡糖A和B，其中所述非消化性寡糖A和B的不同在於i)寡糖A的至少一種單糖相對於寡糖A總單糖單元的百分比，所述單糖比寡糖B中同種單糖的百分比高出至少40%(數目)；和/或ii)寡糖A的至少一種糖苷連接相對於寡糖A總糖苷連接的百分比，所述糖苷連接比寡糖B中同種糖苷連接的百分比高出至少40%；和/或iii)寡糖A的聚合度，所述寡糖A的聚合度比寡糖B的聚合度低至少5個單糖單兀。在一個優選的實施方案中，本發明的組合物還包含非消化性寡糖C。該非消化性寡糖C包括糖醛酸低聚糖。本發明中使用的術語「糖醛酸低聚糖」是指寡糖中存在的單糖單元中至少50%(數目)為選自以下之單糖單元的寡糖古洛糖醛酸、甘露糖醛酸、半乳糖醛酸、艾杜糖醛酸、核糖醛酸(riburonicacid)和葡萄糖醛酸。在一個優選的實施方案中，糖醛酸低聚糖包含相對於糖醛酸低聚糖中總糖醛酸單元來說至少50%(數目)的半乳糖醛酸。本發明中使用的糖醛酸低聚糖優選地從果膠、果膠酸類、褐藻酸類、軟骨素、透明質酸、肝素(h印arine)、類肝素(h印arane)、細菌碳水化合物和/或唾液酸聚糖的降解而製備，更優選地從果膠和/或褐藻酸類的降解而製備，更優選地從果膠的降解而製備，最優選為多聚半乳糖醛酸。優選地，降解果膠通過對果實和/或蔬菜的果膠進行水解和/或3_消除來製備，更優選地使用蘋果、柑桔和/或糖用甜菜的果膠，更優選地使用經至少一種裂解酶降解的蘋果、柑桔和/或糖用甜菜的果膠。優選地，本發明的組合物包含25IOOwt.%、更優選地50IOOwt.%的糖醛酸低聚糖，其DP相對於組合物中糖醛酸低聚糖總重量來說為2250，更優選地DP為2100，更優選地DP為250，最優選地DP相對於組合物中糖醛酸低聚糖總重量來說為220。在一個優選的實施方案中，糖醛酸低聚糖的至少一個末端己糖醛酸單元具有雙鍵。該雙鍵有效地保護免受病原細菌附著於腸上皮細胞。這對於嬰兒來說是有利的。優選地，末端己糖醛酸單元之一包含C4C5雙鍵。位於末端己糖醛酸單元的雙鍵可例如通過用裂解酶對果膠進行酶促水解來獲得。可將糖醛酸低聚糖衍生化。可將糖醛酸低聚糖甲氧基化和/或醯胺化。在一個實施方案中，糖醛酸低聚糖的特徵在於甲氧基化程度高於20%，優選地高於50%，更優選地高於70%。本文使用的「甲氧基化程度」(也稱為「酯化程度(degreeofesterification,DE)")意指糖醛酸低聚糖中所含的自由羧酸基團被酯化(例如被甲基化)的程度。優選地，所述組合物包含非消化性寡糖反式低聚半乳糖、低聚果糖和果膠降解產物。反式低聚半乳糖低聚果糖果膠降解產物的重量比優選為(202)1(13)，更優選地為(127)1(12)。本發明的組合物優選地包含相對於本發明組合物的乾重來說0.0520wt.%的非消化性寡糖(A+B+C)，更優選為0.515wt.%，更優選為1IOwt.%，最優選為2.0IOwt.%。IS^;本發明的嬰兒和/或幼童營養物優選地經腸施用，更優選地經口施用。本發明的嬰兒和/或幼童營養物優選地用作嬰兒配方。本發明的嬰兒和/或幼童營養物可有利地用作針對嬰兒的完全營養物。這樣的食物優選地包含脂質、蛋白質和碳水化合物，並優選以液體形式施用。優選地，所述組合物為即用的流質食品，例如以即食的液體形式。與需要重溶的粉末相比，經包裝的即食流質食品有利地包括較少的製備步驟，因此降低了汙染有害微生物的機會。因此，本發明還涉及嬰兒和/或幼童營養物，其優選地包含550en%脂質、550en%蛋白質、1590en%碳水化合物和非活的短雙歧桿菌以及非消化性寡糖A和/或B和任選地C。優選地，本發明的嬰兒和/或幼童營養物包含3550en%脂質、7.512.5en%蛋白質和3580en%碳水化合物(「en%」是能量百分比的簡寫，其代表每種組分佔製備物總熱量值的相對量)。優選地，所述嬰兒和/或幼童營養物包含脂質。優選地，所述嬰兒和/或幼童營養物包含植物脂質。優選地，所述脂質組分是植物脂質和至少一種選自以下的油的組合魚油、動物油、海藻油和細菌油。優選地，所述脂質包含超過50mg/100kCal(優選地相對於總脂肪酸來說超過Iwt.%)α-亞麻酸(ALA)。優選地，所述脂質組合物的亞油酸(LA)和ALA重量比為415，更優選地為58。優選地，本發明的嬰兒和/或幼童營養物包含長鏈多不飽和脂肪酸(longchainpolyunsaturatedfattyacid，LC-PUFA)，更優選二十碳五烯酸(EPA)和/或二十二碳六烯酸(DHA)，和/或花生四烯酸(ARA)。優選地，相對於總脂肪酸來說，所述嬰兒和/或幼童營養物包含0.030.8wt.%、更優選地0.120.4wt.%DHA。優選地，相對於總脂肪酸來說，所述組合物包含0.010.2wt.%、更優選地0.030.lwt.%EPA。優選地，相對於總脂肪酸來說，所述組合物包含0.031.6wt.%、更優選地0.120.8wt.%ARA.LC-PUFA的存在有利地降低腸通透性或改善免疫系統或者兩者兼而有之，從而與本發明中有關抵抗過敏、特應性皮炎、感染等作用的其它組分一起發揮協同作用。優選地，所述嬰兒和/或幼童營養物包含蛋白質。所述營養製備物中的蛋白質優選地選自非人動物蛋白質(例如乳蛋白質(包括酪蛋白和乳清蛋白)、肉蛋白質和卵蛋白質)、植物蛋白質(例如大豆蛋白質、小麥蛋白質、水稻蛋白質、馬鈴薯蛋白質和豌豆蛋白質)、水解產物(部分水解地和/或廣泛水解地)、游離胺基酸及其混合物。特別優選的是牛乳衍生氮源，特別是牛乳蛋白質例如酪蛋白和乳清蛋白，因為這些蛋白質的胺基酸組成很均衡。由於本發明的組合物適當地用於降低嬰兒和/或幼童中的過敏反應，因此該嬰兒營養物的蛋白質優選地選自經水解的乳蛋白質(例如水解酪蛋白和/或水解乳清蛋白)、經水解的植物蛋白質和/或胺基酸。使用這些蛋白質還降低嬰兒和/或幼童的過敏反應和/或提高蛋白質吸收。優選地，所述蛋白質來源被廣泛地和/或部分地水解。更優選地，所述蛋白質來源為經廣泛水解的源自牛乳的乳清蛋白。優選地，所述嬰兒和/或幼童營養物包含可消化的碳水化合物。營養製備物中使用的可消化的碳水化合物優選地選自蔗糖、乳糖、麥芽糖、半乳糖、葡萄糖、果糖，玉米糖漿固形物、澱粉和麥芽糖糊精及其混合物，更優選乳糖。本發明的嬰兒和/或幼童營養物優選地包含礦物質、微量元素和維生素、膽鹼、牛磺酸、肉鹼、肌醇和/或其混合物。優選地，本發明的組合物包含牛磺酸，其減輕哮喘症狀(Adv.Exp.Med.Biol.2003526403-10)。牛磺酸與本發明的嬰兒和/或幼童營養物中的組分協同作用。優選地，本發明的嬰兒和/或幼童營養物包含核苷酸。優選地，所述組合物包含胞苷5』-單磷酸、尿苷5』-單磷酸、腺苷5』-單磷酸、鳥苷5』-單磷酸和肌苷5』-單磷酸。優選地，本發明的嬰兒和/或幼童營養物包含0.0050.07、更優選地0.010.035wt.%的核苷酸(基於乾重來說)。核苷酸的存在有利地影響免疫系統、腸屏障和/或腸內微生物群。因而，預計核苷酸與本發明中有關抵抗過敏、特應性皮炎、感染等作用的其它組分一起發揮協同作用。優選地，本發明的嬰兒和/或幼童營養物包含LC-PUFA和核苷酸。優選地，本發明的嬰兒和/或幼童營養物是未經發酵的組合物。被微生物發酵導致PH降低，這對新形成的牙齒可有不利影響。優選地，所述組合物的pH高於5.5，更優選地高於6.0，更優選地高於6.5，從而減少對牙齒的損傷。優選地，所述嬰兒和/或幼童營養物的pH為68。優選地，本發明的嬰兒和/或幼童營養物是經發酵的組合物。優選地，本發明的營養物包含經短雙歧桿菌發酵的乳衍生產品，該短雙歧桿菌的細胞在發酵後失活。所述經短雙歧桿菌發酵的乳衍生產品包含短雙歧桿菌外泌的片段或/和產物，例如糖蛋白、糖脂、肽聚糖、脂磷壁酸(LTA)、脂蛋白、莢膜多糖和/或DNA。這些免疫原性分子誘導腸道針對產乳酸細菌定殖的耐受性。此外，在發酵和/或短雙歧桿菌與乳衍生產物發生其它相互作用之後，還可形成另外的生物活性化合物，例如生物活性肽和/或寡糖，其也刺激免疫系統和/或刺激腸內微生物群的定殖。所述乳衍生產物優選地選自乳、酪蛋白、酪蛋白蛋白質、酪蛋白蛋白質水解產物、酪蛋白肽、乳清、乳清蛋白、乳清蛋白水解產物、乳清肽和乳糖或其混合物。乳可以是全脂乳、半脫脂乳和/或脫脂乳。乳清可以是甜乳清(sweetwhey)和/或酸11乳清(acidwhey)0優選地，待發酵的水性基質為脫脂乳。大便異常(例如，大便堅硬、大便體積不足(insufficientstoolvolume)、腹瀉)是許多嬰幼兒的主要問題。已發現可通過在流質食品中施用本發明的非活的短雙歧桿菌和非消化性寡糖的組合來解決大便問題，所述流質食物具有50500m0sm/kg的滲透壓，更優選地為100400m0sm/kg。鑑於以上所述，同樣重要的是所述流質食物組合物不具有過度的熱量密度而仍然提供足夠的熱量來餵食對象。因此，所述流質食物優選地具有0.12.5kcal/ml的熱量密度，更優選地為0.41.2kcal/ml的熱量密度，最優選地為0.550.75kcal/ml。本發明的嬰兒和/或幼童營養物優選地具有160mPa.s的粘度，優選地為120mPa.s，更優選地為1lOmPa.s，最優選地為16mPa.s。低粘度確保液體的適當施用，例如通過奶嘴的孔適當遞送。同時，該粘度與人乳的粘度極其近似。此外，低粘度導致正常的胃排空和更好的能量攝取，這對需要能量用於良好生長和發育的嬰兒和/或幼童是必要的。本發明的組合物優選地通過將粉末組合物與水混合來製備。通常嬰兒配方即以這種方式製備。因此，本發明還涉及經包裝的粉末組合物，其中所述包裝中提供了將所述粉末與適當量的液體進行混合、從而得到粘度為160mPa.s的液體組合物的說明書。所述液體的粘度通過使用PhysicaRheometerMCR300(PhysicaMesstechnikGmbH,Ostfilden,Germany)於20°C以95s-1的剪切速率來測定。包含非活的短雙歧桿菌能延長嬰兒和/或幼童營養物的貨架期，特別是與包含活的短雙歧桿菌的嬰兒和/或幼童營養物進行比較時。這對於液體的嬰兒和/或幼童營養物特別有利。因此，本發明的嬰兒和/或幼童營養物優選地在室溫下在至少6個月內、優選地至少12個月內、優選地當所述嬰兒和/或幼童營養物為液體、即食形式時是貨架穩定的。^M已發現，本發明的嬰兒和/或幼童營養物特別地可用作以下嬰幼兒的營養物早產嬰兒、足月出生的嬰兒(陰道分娩嬰兒以及剖腹產分娩嬰兒)、處於向固體食物過渡時期的嬰兒、過敏風險增加或患有過敏的嬰兒和/或幼童、和/或感染風險增加的嬰兒和/或幼童(例如加入日間託兒中心或患有感染的嬰兒和/或幼童)。本發明特別地有利於陰道出生的嬰兒。本發明特別地有利於剖腹產分娩的嬰兒，因為這些嬰兒的大腸中微生物定殖受損。因此，本發明提供了向人類嬰兒和/或幼童提供營養物的方法，該方法包括向嬰兒和/或幼童施用本發明的組合物。優選地，所述嬰兒和/或幼童的年齡為036個月，更優選地為018個月，最優選地為012個月。在一個優選的實施方案中，本發明提供了向年齡為012個月的人類嬰兒提供營養物的方法。在一個優選的實施方案中，本發明提供了向年齡為1236個月的人類幼童提供營養物的方法。本發明還提供了用於促進嬰兒和/或幼童健康的方法，包括向嬰兒和/或幼童施用包含非活的短雙歧桿菌和非消化性寡糖A和/或B以及任選地C的組合物。因此，本發明還提供了用於促進嬰兒和/或幼童健康的方法，包括步驟a)將i)特別是營養可接受的液體或可藥用液體與ii)幹的組合物(其中該幹的組合物(ii)包含短雙歧桿菌和非消化性寡糖A和/或B以及任選地C)混合，以及步驟b)向嬰兒和/或幼童施用步驟a)中得到的組合物。施用包含非活的短雙歧桿菌和非消化性寡糖的嬰兒營養物有利地導致腸內微生物群的改善，其通過增加產乳酸細菌的數目和/或通過減少病原細菌的數目和/或通過激活免疫系統來實現。優選地，將包含非活的短雙歧桿菌和非消化性寡糖A和/或B以及任選地C的嬰兒和/或幼童營養物用於治療和/或預防嬰兒和/或幼童中的胃腸疾病和/或免疫疾病的方法，該方法包括向嬰兒和/或幼童施用所述組合物。本發明的營養物可適當地治療特別是過敏(更特別是食物過敏)、過敏性鼻炎、食物超敏反應、特應性皮炎(即過敏性或特應性溼疹，特別是由皮炎引起的瘙癢皮膚)、過敏性結膜炎、哮喘(特別是由哮喘引起的氣喘)、腹瀉、腸道炎症、感染、便秘、腸痙攣和/或絞痛。在一個優選的實施方案中，本發明提供了治療和/或預防(食物)過敏、過敏性鼻炎、食物超敏反應、溼疹(即特應性皮炎)、哮喘、腹瀉、腸炎和/或感染的方法。優選地，本發明提供了治療和/或預防感染和/或腹瀉的方法。在一個優選的實施方案中，本發明提供了治療和/或預防(食物)過敏、哮喘和/或特應性皮炎的方法。這些疾病發病率的降低是由於改善了微生物群、改善了免疫系統和/或降低了變應原穿過腸道屏障的易位所致。在一個實施方案中，所述組合物用於改善嬰兒和/或幼童的皮膚以及減輕嬰兒和/或幼童的皮膚瘙癢。在一個實施方案中，所述組合物用於減輕嬰兒和/或幼童的氣喘。另外，向嬰兒和/或幼童施用包含非活的短雙歧桿菌和非消化性寡糖的營養物強化了免疫系統。在一個實施方案中，將包含非活的短雙歧桿菌和非消化性寡糖A和/或B以及任選地C的嬰兒和/或幼童營養物用於治療或預防嬰兒和/或幼童中全身性和/或呼吸道感染和/或炎症的方法，所述方法包括向嬰兒和/或幼童施用所述嬰兒營養物。優選地，將包含非活的短雙歧桿菌和非消化性寡糖A和/或B以及任選地C的嬰兒和/或幼童營養物用於治療或預防嬰兒和/或幼童中尿布皮炎(或尿布疹、尿溼疹等)的方法，所述方法包括向嬰兒和/或幼童施用所述嬰兒營養物。優選地，將包含非活的短雙歧桿菌和非消化性寡糖A和/或B以及任選地C的嬰兒和/或幼童營養物用於治療或預防嬰兒和/或幼童中絞痛和/或腹部痙攣、腹脹、腸胃氣脹、腹痛、便秘、炎性腸病、腸易激症候群的方法，和/或用於改善骨礦化的方法，和/或預防晚年肥胖(特別是向心型肥胖(centralobesity))的方法，所述方法包括向嬰兒和/或幼童施用所述嬰兒營養物。在本文件中以及在權利要求中，動詞「包含(包括)，，及其變化形式使用其非限制性含義，意指包括緊跟其後的項目，但是不排除未具體指出的項目。另外，無數量限定的要素不排除存在多於一個要素的可能性，除非上下文中明確要求存在一個或僅存在一個要素。因此，無數量限定通常是指「至少一個(種)」。實施例^MM1非活的短雙歧杆Ifjl有抗過乍用雄性BALB/c小鼠(6_8周齡)從CharlesRiver(Someren,TheNetherlands)獲得。使用隨意提供的半合成食物(AING93)(基於AmericanlnstituteofNutrition(1993)的生長配方)和水，將小鼠單獨飼養在II型籠中。將小鼠分成不同的處理組A-D(N=6)，再將每一組分為兩群，每群3隻動物。第二群的開始時間滯後一周。在第0天和第7天通過兩次腹膜內注射進行主動致敏。用含有2.25mg氫氧化鋁和2.25氫氧化鎂作為佐劑(Aluminject,Pierce)、體積為100u1的磷酸鹽緩衝液(PBS)通過腹膜內注射對陰性對照組(A組)的小鼠進行致敏。用含有2.25mg氫氧化鋁和2.25mg氫氧化鎂(Aluminject,Pierce)、體積為100μ1的PBS(0.2μm過濾)中的10μg卵清蛋白(OVA)通過腹膜內注射對其它組的小鼠進行致敏。最後一次注射(在第35、38和41天)的4周後，將B、C和D組的小鼠暴露於霧化卵清蛋白(10mg/ml)20分鐘(總共3次，每次使用20分鐘氣霧)。將A組小鼠暴露於霧化鹽水。氣霧由與小鼠所在的macrolon籠相連的Jet噴霧器(PariIS_2，Pari-WerkGmbH,Starnberg,Germany，粒徑23微米)產生。從第28天開始至第42天結束，每天如下經口處理小鼠A組和B組的小鼠接受200μ1NaCl/天。C組的小鼠接受200μ1鹽水中IO9CFU短雙歧桿菌M16-V；D組的小鼠接受與C組同樣量的細菌，不同在於D組所接受的細菌在90°C熱滅活10分鐘。組合物C包含低於每克乾重IO3Cfu的活的短雙歧桿菌(即低於檢測限)。組合物C包含其量相當於IO9Cfu短雙歧桿菌的失活短雙歧桿菌。在第41天，使用彈簧式卡尺(Mitutoyo，Veenendaal,TheNetherlands)測定基礎耳厚度。隨後，在利用異氟烷、O2和N2O麻醉動物後，通過向雙耳的耳廓皮內注射20μ10VA(40yg/ml，在PBS中)來激發小鼠。在動物麻醉狀態下，在OVA激發前以及激發後1、6和24小時對雙耳進行Duplo測量。結果顯示於表1中。與陽性對照(設定其為100%)相比，陰性對照顯示耳厚度增加約20%。用活的短雙歧桿菌處理顯示耳厚度僅增加45%。這表明，與陽性和陰性對照相比，過敏反應減少約70%。非活的短雙歧桿菌導致耳厚度增加60%。這表明，與陽性和陰性對照相比，過敏反應減少約52%。這些結果表明，非活的短雙歧桿菌具有與活的短雙歧桿菌細胞相當程度(約75%)的抗過敏和/或免疫改善作用。這是出人意料的，因為由於非活的短雙歧桿菌不能通過改善菌群來起作用因而未預計到它具有這些作用。表1:balb/c小鼠中由針對卵清蛋白之過敏反應所致的耳厚度增加百分比。tableseeoriginaldocumentpage14*與陽性對照相比，ρ<0.05。實施例2與單一組分相比，非活的短雙歧桿菌和非消化性寡糖的組合具有增強的抗過敏作用。CH3/He0uJ小鼠(3_5周齡)從CharlesRiver獲得。使用隨意提供的半合成、不含牛乳蛋白質的食物和水，將小鼠單獨飼養在II型籠中。將小鼠分成不同的處理組A-E(N=6)2周。所述不同的處理組A-E(N=6)包括陰性對照組(A組)、陽性對照組(B組)、接受每克飲食2X109CFU短雙歧桿菌M16-V(在90°C熱滅活10分鐘)的組(C組)、接受每克飲食20mg非消化性寡糖(T0S(來自VivinalG0S,BorculoDomo)和lcFOS(RaftilinHP,Orafti)，重量比為9/1)的組(D組)以及接受熱滅活短雙端菌和非消化性寡糖的組(E組)。因此，C組和D組的飲食包含其量相當於每克飲食2X109CFU的失活短雙歧桿菌。所述組合物包含每克飲食低於1X103cfu活的短雙歧桿菌(其低於檢測限)。在第14、21、28、35、42和49天用0.5ml乳清蛋白(DMVInternational,Veghel,每毫升PBS中含40mg乳清蛋白，每毫升PBS中含20ug/ml霍亂毒素作為佐劑)通過胃內強飼進行主動致敏。用含有作為佐劑之霍亂毒素的PBS(磷酸鹽緩衝液)對陰性對照組(A組)的小鼠進行致敏。在第54天，用20iU乳清蛋白(每毫升PBS中含有0.5mg蛋白質)經真皮內注射入左耳廓來激發A、B、C、D和E組的小鼠。在作為對照的右耳中注射PBS。在t=0和t=1時，使用數字測微器(Mitutuyo，Veenendaal)測量耳厚度兩次。從t=1時左耳測量的厚度中減去t=0時和對照右耳的腫脹。結果顯示於表2中。與陽性對照的159.9iim(其被設為100%)相比，陰性對照顯示耳厚度增加36.0i!m(設為0%)。用非活的短雙歧桿菌處理顯示，耳厚度僅增加116.0umo這表明與陽性和陰性對照相比，過敏反應減少約35%。使用非消化性寡糖導致耳厚度增加103.8i!m。這表明與陽性和陰性對照相比，過敏反應減少約45%。非活的短雙歧桿菌和非消化性寡糖的組合導致耳厚度僅增加80.4。這表明與陽性和陰性對照相比，過敏反應出人意料地減少64%。表2小鼠中由針對乳清蛋白之過敏反應所致的平均耳厚度增加。tableseeoriginaldocumentpage15*與陽性對照相比，p<0.05。這些結果表明，與單一組分相比，非消化性寡糖和非活的短雙歧桿菌的組合具有出人意料的增強作用。這是出人意料的，因為失活短雙歧桿菌不能代謝非消化性寡糖。實施例3含有短雙歧桿菌的液體兒童乳液體的即食成長乳，其每100ml包含-67千卡_1.9g蛋白質(牛乳蛋白質)-8.lg可消化的碳水化合物(其中有7.8g乳糖)-3.0g脂肪_0.8g非消化性寡糖0.72來自VivivalG0S的低聚半乳糖0.08g來自RaftilinHP的果聚糖-相當於5.109cfu的熱滅活短雙歧桿菌pH約為6.7。1權利要求嬰兒和/或幼童營養物，其包含非消化性寡糖A和/或B和非活的短雙歧桿菌，並包含低於每克所述嬰兒和/或幼童營養物乾重103cfu的一定量活的短雙歧桿菌，所述非消化性寡糖的聚合度為2～200，所述非活的短雙歧桿菌的量相當於每克所述嬰兒和/或幼童營養物乾重103～1013cfu短雙歧桿菌。2.根據權利要求1的營養物，其採用即食液體形式。3.根據權利要求1或2的營養物，其還包含經廣泛水解和/或部分水解的蛋白質來源。4.根據前述權利要求中任一項的營養物，其在室溫下至少6個月內為貨架穩定的。5.根據前述權利要求中任一項的營養物，其為未經發酵的嬰兒和/或幼童營養物。6.根據前述權利要求中任一項的營養物，其中所述營養物的pH為68。7.根據前述權利要求中任一項的營養物，其包含非消化性寡糖A和B，其中所述非消化性寡糖A和B的不同在於i)寡糖A的至少一種單糖相對於寡糖A總單糖單元的百分比，所述單糖比寡糖B中同種單糖的百分比高出至少40%(數目)；和/或ii)寡糖A的至少一種糖苷連接相對於寡糖A總糖苷連接的百分比，所述糖苷連接比寡糖B中同種糖苷連接的百分比高出至少40%；和/或iii)寡糖A的聚合度，所述寡糖A的聚合度比寡糖B的聚合度低至少5個單糖單元。8.根據前述權利要求中任一項的營養物，其中所述非消化性寡糖選自低聚果糖、非消化性糊精、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚阿拉伯糖、低聚阿拉伯半乳聚糖、低聚葡萄糖、低聚葡甘露聚糖、低聚半乳甘露聚糖、低聚甘露聚糖、低聚殼糖、糖醛酸低聚糖、唾液酸低聚糖和低聚巖藻糖。9.根據前述權利要求中任一項的營養物，其中寡糖A和/或B的總單糖單元中至少60%(數目)是選自半乳糖、果糖和葡萄糖的單糖。10.根據前述權利要求中任一項的營養物，其包含寡糖A和B，其中寡糖A和B的重量比為19/11/19。11.根據前述權利要求中任一項的營養物，其中寡糖A是反式低聚半乳糖，寡糖B是低聚果糖。12.根據前述權利要求中任一項的營養物，其包含相對於所述嬰兒和/或幼童營養物乾重來說0.510wt.%的非消化性寡糖。13.根據前述權利要求中任一項的營養物，其還包含二十碳五烯酸(EPA)和/或二十二碳六烯酸(DHA)和/或花生四烯酸(ARA)。14.根據前述權利要求中任一項的營養物，其還包含550en%脂質、550en%蛋白質、1590en%碳水化合物。15.根據前述權利要求中任一項的營養物，其中所述非活的短雙歧桿菌選自非活的短雙歧桿菌菌株M-16V和短雙歧桿菌菌株1-2219。16.根據前述權利要求中任一項的嬰兒和/或幼童營養物用於製備向嬰兒和/或幼童提供營養之組合物的用途。17.根據權利要求1-15中任一項的嬰兒和/或幼童營養物用於製備治療和/或預防過敏優選食物過敏和/或特應性疾病包括溼疹和/或哮喘之組合物的用途。18.根據權利要求1-15中任一項的嬰兒和/或幼童營養物用於製備治療和/或預防感染之組合物的用途。19.根據權利要求1-15中任一項的嬰兒和/或幼童營養物用於製備治療和/或預防尿布皮炎之組合物的用途。全文摘要公開了包含非活的短雙歧桿菌(non-viableBifidobacteriumbreve)和非消化性寡糖的嬰兒和/或幼童營養物及其用途。文檔編號A23L1/308GK101801220SQ200880025644公開日2010年8月11日申請日期2008年6月13日優先權日2007年6月15日發明者揚·克諾爾,桑德·胡吉,約翰·加爾森,阿德裡亞努斯·約翰尼斯·瑪麗亞·夫裡瑟馬申請人:努特裡希亞公司