益心舒中藥製劑中人參的質量控制方法
2023-12-04 08:25:56
專利名稱：：益心舒中藥製劑中人參的質量控制方法
技術領域：
：本發明涉及益心舒中藥製劑中人參的質量控制方法，屬於藥品的
技術領域：
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背景技術：
：中藥製劑作為最具發展潛力的藥物資源已經被全世界所認知的情況下，我國政府已經建立了一系列廣泛的政策來應對傳統中藥製劑標準化，現代化的要求。其中最重要的就是如何控制中藥製劑的質量。目前我們最常用的方法就是選擇中藥材的主要活性成分或其指標性成份，對這些成分的鑑別和含量測定以達到控制這些中藥製劑質量的目的。但是，這種只針對中藥及中藥製劑指標性成分進行控制的方法並不能科學而全面的確保中藥的藥效。人參為滋補強壯藥，幾乎世人皆知。我國使用人參預防和治療疾病，有著悠久的歷史。其效果不僅早為古今中外無數醫學家所肯定，而且為近代科學研究所證明。最早對人參藥理功用給予高度評價的，首推《神農本草經》。這是我國第一部藥物學經典。書中明確指出，人參"主補五臟，安精神，止驚悸，除邪氣，明目，開心益智"。寥寥數語，充分說明人參的補益作用是多方面的。祖國醫學認為，人參的主要作用是大補元氣。宋朝蘇頌《嘉佑圖經本草*論人參》中就記載有這麼一段話，相傳"欲試二人同走,一含人參一空口，各走三五裡許，其不含人參者必大喘，含者氣息自如"以此鑑別人參的真偽優劣。由此不難看出，人參具有多方面的藥理功效。益心舒中藥製劑是以人參、麥冬、五味子等七味藥經加工製成的製劑，臨床上廣泛用於治療心絞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心絞痛患等。所以在益心舒製劑中五味子的質量直接關係到該製劑的療效，所以對於人參的藥材品質控制方法的提高從而確保益心舒中藥製劑的療效顯得十分必要。
發明內容本發明的目的在於提供一種益心舒中藥製劑中人參的質量控制方法，這種方法向相關的生產、檢測機構提供了檢測的指標、檢測的手段、技術方法等等；以便更好的控制益心舒中藥製劑的質量，為臨床提供一種療效確切的益心舒中藥製劑，保證用藥的安全和療效，同時能夠更好的指導生產，使消費者能全面認識益心舒中藥製劑的品質。本發明涉及益心舒中藥製劑中人參的質量控制方法，它包括人參的產地、採集、鑑別、含測項目作為該製劑中人參質量控制的指標。本發明所述的益心舒中藥製劑中人參的質量控制方法，它是將人參的產地、採集、加工、鑑別、含測項目作為該製劑中人參質量控制的指標。上述的益心舒中藥製劑中人參的質量控制方法，是採用以下方法的部分或全部(1)人參的產地為遼寧、吉林、黑龍江、河北等地。(2)人參的採集時間為每年的3-IO月份。(3)人參的加工方法為方法l:挖取的鮮參鬆土，洗刷乾淨，適當日曬，再用硫磺燻蒸過曬乾。方法2:挖取的鮮參鬆土，洗刷乾淨，蒸l-4小時，取出烘乾或曬乾。(4)人參的鑑別為方法h採用薄層色譜法，一般使用矽膠G或矽膠GF254或矽膠H為薄層板，點樣量為0.530W之間任一體積，以人參對照藥材、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rd、人參皂苷Rbl、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rgl、人參皂苷Rb3、人參皂苷Re中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取後精製再濃縮的方法，展開劑可以為三氯甲烷、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一種或一種以上按照一定比例熙制而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣燻後再置紫外光燈下檢視、或噴以2—30%硫酸乙醇、或噴以1一10°/。印三酮乙醇等溶液顯色的方法；方法2:採用高效液相色譜法或蒸發光散射檢測器與高效液相色譜聯用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取後再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規的合適比例條件下為流動相，以人參對照藥材、人參皂苷Rgi、人參皂苷Re、人參皂苷Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rbl、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rd、人參皂苷Ral、人參皂苷Rhl、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在200600nm範圍內；(6)含量測定方法為方法l:採用高效液相色譜法測定本品中的人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Re，樣品前處理以氯仿、乙醚按一定的比例混合溶劑提取雜質，然後用氫氧化鉀、乙醇或甲醇、水提取，正丁醇、甲醇精製的方法，使用C18類型填料的色譜柱，以乙睛、磷酸、水在常規的合適比例條件下為流動相，檢測波長為203nm;方法2:採用薄層色譜掃描法，一般使用矽膠G或矽膠GF254或矽膠H為薄層板，點樣量為0.530W之間任一體積，以人參對照藥材、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rd、人參皂苷Rbl、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rgl、人參皂苷Rb3、人參皂苷Re中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取後精製再濃縮的方法，展開劑可以為三氯甲烷、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一種或一種以上按照一定比例配製而成，顯色方法包括噴以2—30%硫酸乙醇或噴以1一10%印三酮乙醇溶液，斑點在薄層掃描儀上採用單波長或雙波長進行掃描，掃描波長為500750nm;方法3:以高效液相色譜法或蒸發光散射檢測器與高效液相色譜聯用法測定本品中的人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rbl、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rd、人參皂苷Ral、人參皂苷Rhl、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酷或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取後再濃縮的方法，使用8或C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200600nm範圍內；上述的益心舒中藥製劑中人參的質量控制方法，採用以下方法-(1)人參的產地為遼寧、吉林、黑龍江。(2)人參的採集時間為每年的5-9月份。(3)人參的加工方法為挖取的鮮參鬆土，洗刷乾淨，適當日曬，再用硫磺燻蒸過曬乾。(4)人參的鑑別為採用薄層色譜法，使用矽膠G薄層板，點樣量為0.520W,以人參皂苷Rbl、Re、Rgl中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理是以三氯甲烷-乙醚按一定的比例混合溶劑提取雜質，然後用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一種或者是它們任意混合溶劑提取後再濃縮方法，再用正丁醇、水提取精製的方法，展開劑為三氯甲烷、甲醇、水按照常規比例配製而成，檢視條件為噴以230%硫酸乙醇顯色後紫外下檢視的方法；(5)人參的含量測定方法為採用高效液相色譜法測定本品中的人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Re，樣品前處理以氯仿、乙醚按一定的比例混合溶劑提取雜質，然後用氫氧化鉀、乙醇或甲醇、水提取，正丁醇、甲醇精製的方法，使用C18類型填料的色譜柱，以乙睛、磷酸、水在常規的合適比例條件下為流動相，檢測波長為203nm;，上述的益心舒中藥製劑中人參的質量控制方法，採用以下方法作為質量控制方法-(1)人參的產地為遼寧、吉林、黑龍江的長白山。((2)人參的採集時間為每年的5-9月份且生長期在6年以上。(3)人參的加工方法為挖取的鮮參鬆土，洗刷乾淨，日曬1天，再用硫磺燻蒸過曬乾。(4)人參的鑑別方法為採用薄層色譜法，取本品5g，加氯仿-乙醚(l:l)20ml，超聲30分鐘，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮幹溶劑，加甲醇20ml，加熱回硫30分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水30ml使溶解，轉移到分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇振搖提取兩次，每次20ml，合併正丁醇液，用氨試液洗兩次，每次25ml，再用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次25ml，棄去水液，正丁醇液蒸乾，殘渣加0.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Rbl、Re、Rgl中全部或部分品種作為對照品，對照品加甲醇製成每lml含2mg的溶液作為對照品溶液。吸取上述對照品溶液各10ul，供試品溶液15ul，分別點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(3:7:2)，l(TC以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105。C加熱至斑點清晰。分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，分別在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點或螢光斑點。(5)人參的含量測定方法為是利用HPLC法測定人參中人參皂苷Rgi和人參皂苷Re的總量色譜條件系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；0.1%磷酸-乙腈(80:20)為流動相；流速lml/min;檢測波長203nm。理論板數以人參皂苷Re峰計算應不低於2500。對照品溶液的製備精密稱取人參皂苷Rg,對照品12.5mg、人參皂苷fRelOmg，加甲醇分別製成每lml含人參皂苷Rgi0.5mg、人參皂苷ReO.4mg的溶液，即得。供試品溶液的製備取本品30粒的內容物，精密稱定，混勻，取4g，精密稱定，置索氏提取器中，加氯仿-乙醚(1:1)適量，加熱回流3小時，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮幹溶劑，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中，加入2%氫氧化鉀醇液50ml，加熱回流l小時，取下，放冷，濾過，用少量甲醇洗滌殘渣3次，合併洗液和濾液，置蒸發皿中蒸乾，殘渣加水50ml溶解瓶移至分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取4次(20ml，20ml，10ml，10ml)，合併正丁醇液，正丁醇液置蒸發皿中蒸乾，殘渣加甲醇溶解並移至5ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45Pm)濾過，即得。乂測定法分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10W，注入液相色譜儀，測定，即得。與現有技術相比，本發明提供的質量控制方法能更好的、更進一步的控制一種益心舒中藥製劑的產品質量，保證用藥的安全性，使用本發明後，使生產該產品的單位或檢測機構從源頭原料人參來控制，確保該益心舒的療效，能夠保證藥物製成品的質量；我們在進行試驗時發現為了達到益心舒中藥製劑的確切療效，就必須從源頭開始控制，包括人參的產地、採集、鑑別、含測項目。這樣更有利於指導生產，讓消費者全面認識產品品質、放心使用這類藥n口o為證明利用本發明提供的人參質量控制方法能更好的控制益心舒中藥製劑的產品質量，得到的藥物具有有效的效果，申請人進行了一系列實驗；試驗例1益心舒中藥製劑中人參產地的考察本實驗通過對相同採集時期的河北人參和東北人參中人參(長白山)總皂苷的含量測定來考察不同產地的人參的品質。1.1儀器與藥材Waters高效液相色譜儀，2693輸液泵柱溫箱自動進樣裝置；2487紫外檢測器；Millennium32色譜工作站。HP1100色譜儀，ChemStation色譜工作站，二級管陳列檢測器；恆溫柱箱；TCQ-250超聲波清洗器(北京醫療設備二廠)。藥材河北人參、東北人參(長白山)。1.2試驗方法1.2.1色譜條件色譜條件系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；0.1%磷酸-乙腈(80:20)為流動相；流速lml/min;檢測波長203nm。理論板數以人參皂苷Re峰計算應不低於2500。1.2.2對照品溶液製備精密稱取人參皂苷Rg,對照品12.5mg、人參皂苷RelOmg，加甲醇分別製成每lml含人參皂苷Rgl0.5mg、人參皂苷ReO.4mg的溶液，即得。1.2.3供試品溶液製備取本品30粒的內容物，精密稱定，混勻，取4g，精密稱定，置索氏提取器中，加氯仿-乙醚(1:1)適量，加熱回流3小時，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮幹溶劑，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中，加入2y。氫氧化鉀醇液50ml，加熱回流l小時，取下，放冷，濾過，用少量甲醇洗滌殘渣3次，合併洗液和濾液，置蒸發皿中蒸乾，殘渣加水50ml溶解瓶移至分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取4次(20ml,20ml,10ml，10ml)，合併正丁醇液，正丁醇液置蒸發皿中蒸乾，殘渣加甲醇溶解並移至5ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45to)濾過，即得。1.2.4測定法分別吸取對照品及各供試品溶液10pl注入液相色譜儀，將峰面積及濃度均取常用對數後用外標法計算。1.3結果和討論1.3.l樣品測定結果長白山、河北人參藥材樣品，單位(mg/g),結果見表l一l樣品人參皂苷Rgi人參皂苷Re人參總皂苷河北人參0.200.220.49長白山人參0.280.310.591.3.2討論研究結果表明，長白山、河北人參中的人參皂苷成分含量差異較大，說明不同產地藥材的種內變異造成藥材品質的差異。其中以東北地區的長白山人參為佳，其總皂苷含量最高，故認為綜合評價其品質優良。試驗例2益心舒中藥製劑中人參採集時期的考察本實驗通過對不同採集期長白山人參中人參總皂苷的含量測定來考察的人參的品質。2.1儀器與藥材Waters高效液相色譜儀，2693輸液泵柱溫箱自動進樣裝置；2487紫外檢測器；Millennium32色譜工作站。HP1100色譜儀，ChemStation色譜工作站，二級管陳列檢測器；恆溫柱箱；TCQ-250超聲波清洗器(北京醫療設備二廠)。藥材東北人參(長白山)。2.2試驗方法2.2.1色譜條件色譜條件系統適用性試驗用十八垸基矽垸鍵合矽膠為填充劑；0.1%磷酸-乙腈(80:20)為流動相；流速lml/min;檢測波長203nm。理論板數以人參皂苷Re峰計算應不低於2500。2.2.2對照品溶液製備精密稱取人參皂苷R^對照品12.5mg、人參皂苷RelOmg，加甲醇分別製成每lml含人參皂苷Rgl0.5mg、人參皂苷ReO.4mg的溶液，即得。2.2.3供試品溶液製備取本品30粒的內容物，精密稱定，混勻，取4g，精密稱定，置索氏提取器中，加氯仿-乙醚(1:1)適量，加熱回流3小時，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮幹溶劑，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中，加入2y。氫氧化鉀醇液50ml，加熱回流l小時，取下，放冷，濾過，用少量甲醇洗滌殘渣3次，合併洗液和濾液，置蒸發皿中蒸乾，殘渣加水50ml溶解瓶移至分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取4次(20ml，20ml，10ml，10ml)，合併正丁醇液，正丁醇液置蒸發皿中蒸乾，殘渣加甲醇溶解並移至5ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45Mffl)濾過，即得。2.2.4測定法分別吸取對照品及各供試品溶液10pl注入液相色譜儀，將峰面積及濃度均取常用對數後用外標法計算。2.3結果和討論2.3.1結果不同採集期人參藥材樣品，單位(mg/g)，結果見表2—1樣品人參皂苷Rgi人參皂苷Re人參總皂苷.—五年生0.16000.16260.3226^—六年生0.26710.28690.5540七年生0.27020.30100.5712八年生0.27260.30660.57922.3.2討論研究結果表明，不同採集期人參中的皂普類成分含量差異較大，說明不同採集期採集的藥材的種內變異造成藥材品質的差異。其中以六年以後產的人參為佳，七年以後產的人參雖然總皂苷的含量比六年期的高，但是考慮到增加的總皂苷並不明顯，所以以六年期後採集的人參為佳。試驗例3益心舒中藥製劑中人參的加工方法考察本實驗通過對長白山人參不同的加工方法，依其總皂苷的含量為指標來評價人參加工方法的考察。3.1儀器與材料Waters高效液相色譜儀，2693輸液泵柱溫箱自動進樣裝置；2487紫外檢測器；Millennium32色譜工作站。HP1100色譜儀，ChemStation色譜工作站，二級管陳列檢測器；恆溫柱箱；TCQ-250超聲波清洗器(北京醫療設備二廠)。樣品A:挖取的新人參洗乾淨，剪下塊根，洗淨泥土，除淨鬚根、雜質，暴曬1天，再用硫磺燻蒸過曬乾而成。樣品B:挖取的人參洗乾淨，剪下塊根，除淨鬚根、雜質即可。3.2試驗方法3.2.1色譜條件色譜條件系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；0.1%磷酸-乙腈(80:20)為流動相；流速lml/min;檢測波長203nm。理論板數以人參皂苷Re峰計算應不低於2500。3.2.2對照品溶液製備精密稱取人參皂苷R^對照品12.5mg、人參皂苷RelOmg，加甲醇分別製成每lml含人參皂苷Rgl0.5mg、人參皂苷ReO.4mg的溶液，即得。3.2.3供試品溶液製備取本品30粒的內容物，精密稱定，混勻，取4g,精密稱定，置索氏提取器中，加氯仿-乙醚(1:1)適量，加熱回流3小時，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮幹溶劑，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中，加入2y。氫氧化鉀醇液50ml，加熱回流l小時，取下，放冷，濾過，用少量甲醇洗滌殘渣3次，合併洗液和濾液，置蒸發皿中蒸乾，殘渣加水50ml溶解瓶移至分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取4次(20ml，20ml,10ml，10ml),合併正丁醇液，正丁醇液置蒸發皿中蒸乾，殘渣加甲醇溶解並移至5ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45Wn)濾過，即得。3.2.4測定法'分別吸取對照品及各供試品溶液10pl注入液相色譜儀，將峰面積及濃度均取常用對數後用外標法計算。3.3結果和討論3.3.1結果不同加工方法人參藥材樣品，單位(mg/g),結果見表3—1tableseeoriginaldocumentpage183.3.2討論研究結果表明，依照樣品A採集加工的人參以及依照樣品B採集加工的人參中的皂普類成分含量差異較大，說明不同的樣品加工方法對麥冬中的總皂苷成分影響較大，其中樣品A的加工方法為佳。可以保證人參中總皂苷的含量，所以以樣品A加工方法的人參為佳。試驗例4益心舒中藥製劑中人參鑑別的穩定性考察本實驗通過對5批人參進行鑑別方法學考察，以確定該方法的穩定性。4.1標準溶液的製備4.1.1供試品溶液的製備取人參藥材5g，加氯仿-乙醚(1:1)20ml,超聲30分鐘，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮幹溶劑，加甲醇20ml,加熱回硫30分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水30ml使溶解，轉移到分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇振搖提取兩次，每次20ml，合併正丁醇液，用氨試液洗兩次，每次25ml，再用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次25ml，棄去水液，正丁醇液蒸乾，殘渣加0.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。4.1.2對照品溶液的製備另取人參皂苷Rbl、Re、Rgl中全部或部分品種作為對照品，對照品加甲醇製成每lml含2mg的溶液作為對照品溶液。4.2鑑別吸取上述對照品溶液各10ul，供試品溶液15ul，分別點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(3:7:2)，l(TC以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105。C加熱至斑點清'晰。分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，分別在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點或螢光斑點。4.3結果供試品和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點；同時5批樣品均比較穩定，說明此方法可以作為人參藥材的鑑別方法來進行麥冬藥材的鑑別。試驗例5益心舒中藥製劑中人參含測的方法學考察益心舒膠囊由人參、麥冬、五味子等七味藥材組成，人參是方中君藥，據報導，人參中主要含皂苷類化合物，已鑑定了29種皂苷成分人參皂苷(Ginsenoside);丙二醯基人參皂苷；三七皂苷(Notogindenoside);西洋參皂苷(Quinqueoside)。全部皂苷成分分成3種類型，g卩A型，包括人參皂苷Rb^Rb2、Rc、Rd，水解後生成人參萜二醇(Panaxadiol);B型，包括人參皂苷Re、Rf、Rgl、Rg2，水解後生成人參萜三醇(Panaxtriol);C型，人參皂苷Ro，是齊墩果酸(Oleanolicacid)的衍生物。人參中化學成分的含量測定，文獻報導較多的是人參皂苷Rg,、Rh、Re等皂苷類的含量測定，測定的方法多為高效液相色譜法，薄層掃描法等。本申請人對益心舒中藥制齊:i中的人參皂苷Rgh人參皂苷Re含量進行了測定，並對測定的方法學進行了研究。1.1儀器Waters高效液相色譜儀，2693輸液泵柱溫箱自動進樣裝置；2487紫外檢測器；Millennium32色譜工作站。HP1100色譜儀，ChemStation色譜工作站，二級管陳列檢測器；恆溫柱箱；TCQ-250超聲波清洗器。.1.2試藥甲醇(色譜純、分析純)、磷酸(分析純)、氫氧化鉀(分析純)、乙醚(分析純)、氯仿(分析純)、正丁醇(分析純)、氨水(分析純)、磷酸二氫鉀(分析純)、水為純淨水；人參皂苷Rg^人參皂苷Re對照品(中國藥品生物製品檢定所提供，供含量測定用，人參皂苷Rgi的批號0703-200221，人參皂苷Re的批號0754-200217)。樣品益心舒膠囊及陰性空白樣品(貴州信邦製藥有限公司)。1.3色譜條件色譜柱迪瑪，C18(4.6X200mm);流動相0.1%磷酸溶液-乙腈(80:20);檢測波長203nm;流速lml/min;進樣量1(￥1。1.4系統適用性試驗分別取人參皂苷Rgi、人參皂苷Re對照品溶液、供試品溶液和缺人參藥材的陰性空白溶液注入液相色譜儀，記錄色譜(見圖53)。從圖中可見，人參皂苷R&、人參皂苷Re的保留時間分別為44分鐘和47分鐘，陰性空白色譜圖在人參皂苷Rg,、人參皂苷Re位置處均無峰，人參皂苷Rgh人參皂苷Re和其相近的其它峰分離完全(分離度>1.5)，即本試驗條件下人參皂苷Rgl、人參皂苷Re與其他組分分離完全。理論板數對照品中人參皂苷Rg,、Re分別為7952和7836;理論板數樣品中人參皂苷Rgl、人參皂苷Re分別為7889和7451。人參皂苷Rgi、人參皂苷Re與其他組分峰的分離度大於1.5。(見圖55)故定理論板數以人參皂苷Re峰計算，應不低於2500。1.5線性關係考察1.5.1標準溶液的製備精密稱取人參皂苷Rgl、人參皂苷Re對照品適量，加甲醇溶解，製成每lml含人參皂苷Rg".5188mg人參皂苷Re0.4268nu:;'的混合對照品溶液。1.5.2標準曲線的繪製精密吸取上述混合對照品溶液4W、8W、12W、16^1、分別注入液相色譜儀，記錄色譜(見表5-l)，以峰面積A對質量數(Pg)進行線性回歸計算，得線性回歸方程為人參皂苷Rg"A=325872X-14655，r=0.9999(人參皂苷Rgi在2.075210.376Pg範圍內線性關係良好。)人參皂苷Re:A=292726X-111543，r=0.9999(人參皂苷Re在1.70728.5360)Ltg範圍內線性關係良好。)表5-1人參皂苷Rg^Re線性關係考察人參皂苷Rg,人參皂苷Re實驗次數進樣量(Pg)峰面積進樣量(Pg)峰面積-12.07526537971.707239513424.150413294823.414486850636.225620357115.1216139692948.300827033706.82881899491510.37633480978.536023783491.6供試品溶液提取時間的選擇提取方法回流提取，測定結果見表5-2。_表5-2不同提取時間的考察_提取時間(min)_^_^___100Rgi含量(mg/g)0.59050.74301.07181.01701.0578Re含量(mg/g)0,51460.64710.74280.7479_0.7393從表5-2中可見，提取時間60分鐘即可將製劑中的人參皂苷Rgl、Re提取完全，故選擇加熱回流l小時。1.7精密度試驗取人參皂苷Rg"Re對照品溶液，重複進樣5次，測定峰面積，結果見表5-3，人參皂苷Rgi、Re的平均峰面積分別為1632643、1142200;RSD分別為O.98%、2.2%。表5-3人參皂苷測定的精密度試驗進樣次數12345平均值RSD(%)Rgi峰面積Re峰面積16283491118262162384711613101612807117436016486731119948164953916326430.98113712011422002.191.8重複性試驗取本品(批號20020509)內容物，按質量標準(修訂)正文中含量測定項下供試液的製備方法，平行製備5份供試溶液測定，計算結果列入表5-4，RSD分別為2.41%、1.91%。表5-4益心舒膠囊中人參皂苷的重現性試驗進樣次數12345平均值RSD00Rgi含量(％)Re含量(％)0.10610.10380.07060.07010.10560.06770.10240.06880.09990.07080.10360.06962.431.891.9穩定性試驗取本品(批號20020509)內容物，按質量標準(修訂)正文中含量測定項下供試液的製備方法製備供試液，分別於0、1、2、4、8、12小時進樣測定人參皂苷峰面積，結果列入表5-5，人參皂苷RgbRe平均峰面積分別為1643149、1091529，RSD分別為0.78%和0.73%,說明供試液在12小時內穩定性良好。表5-5益心舒膠囊中人參皂苷的穩定性試驗測定時間(h)0124812平均值RSD(90Rg,峰面積Re峰面積164163910918861648022109254216274851081204166539511056561636028164032716431490.781088358108952510915280.-731.10回收率試驗採用加樣回收法，分別精密稱取5份已測定含量的樣品(人參皂苷Rg"Re的含量分別為0.1036%和0.0696%)約2g，精密加入人參皂苷Rg!(0.5064mg/ml)、Re(0.4084mg/ml)的對照品混合溶液4.Oml，置索氏提取器中，加氯仿-乙醚(1:1)適量，加熱回流3小時，棄去氯仿液，藥渣揮幹溶劑，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中，加入2。/。氫氧化鉀甲醇溶液50ml，加熱回流1小時，取下，放冷，濾過，用少量甲醇洗滌殘渣3次，合併洗液和濾液，置蒸發皿中蒸乾，殘渣加水50ml溶解瓶轉移至分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取4次(20ml，20ml，10ml，10ml)，合併正丁醇液，正丁醇液分別用氨試液、水、1%磷酸二氫鉀溶液各洗滌1次，每次40ml，棄去洗滌液，正丁醇液置蒸發皿中蒸乾，殘渣加甲醇溶解，並移至5ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45Wn)濾過，測定，結果見表5-6、7。表5-6益心舒膠囊中人參皂苷Rgl的回收率試驗試驗樣品量含人參皂苷加入人參皂苷測得量回收率平均回收率RSD次數(g)(mg)(mg)(mg)(%)(%)(%)12.61732.71152.02564.722999.3022.03812.11152.02564.134399.8632.30172.38462.02564.361597.6098.770.9042.00712.07942.02564.068998.2252.31242.39562.02564.398098.85表5-7益心舒膠囊中人參皂苷Re的回收率試驗試驗樣品量含人參皂苷加入人參皂苷測得量回收率平均回收率RSD次數(g)(mg)(mg)(mg)(%)(%)(%)12.61731.82161.63363.445099.3822.03811.41851.63363.026298.4132.30171.60201.63363.219999.0498.630.7242.00711.39691.63362.990497.5452.31241.60941.63363.223098.781.11樣品測定按質量標準(修訂)製備供試品和對照品溶液，分別進樣IOW，記錄色譜，測定峰面積，按下式計算含量W:供試品稱樣量(g)W1:平均粒重(g)a旦，,*丄、AxCsx)^含量(wg/權)=-^^sx—式中Ai:供試品溶液峰面積As:對照品溶液峰面積Cs:對照品溶液濃度(mg/ml)10批樣品中人參皂苷總量測定結果見表5-8,_表5-810批樣品中人參皂苷總量測定結果_人參皂苷Rg!含量(mg/粒)人參皂苷Re含量(mg/粒)^~12平均值12平均值人參皂苷總量tableseeoriginaldocumentpage25根據10批樣品測定結果，人參皂苷Rgi與人參皂苷Re總量在0.2430.954mg/粒範圍內，故暫定本品每粒含人參以人參皂苷Rgl(C42H72014)和人參皂苷(C48HS2018)的總量計算，不得少於0.20mg。權利要求1、益心舒中藥製劑中人參的質量控制方法，特徵是它將人參的產地、採集、加工、鑑別、含測項目作為該製劑中人參質量控制的指標。2、根據權利要求1所述的益心舒中藥製劑中人參的質量控制方法，其特徵是採用以下方法的部分或全部-(1)人參的產地為遼寧、吉林、黑龍江、河北等地。(2)人參的採集時間為每年的3-IO月份。(3)人參的加工方法為方法l:挖取的鮮參鬆土，洗刷乾淨，適當日曬，再用硫磺燻蒸過曬乾。方法2:挖取的鮮參鬆土，洗刷乾淨，蒸1-4小時，取出烘乾或曬乾。(4)人參的鑑別為方法1:採用薄層色譜法，一般使用矽膠G或矽膠6&54或矽膠H為薄層板，點樣量為0.530W之間任一體積，以人參對照藥材、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rd、人參皂苷Rbl、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rgl、人參皂苷Rb3、人參皂苷Re中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲烷或正丁醇提取後精製再濃縮的方法，展開劑可以為三氯甲烷、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一種或一種以上按照一定比例配製而成，檢視條件包括紫外光燈下檢視、氨氣燻後再置紫外光燈下檢視、或噴以2—30%硫酸乙醇、或噴以1一10%印三酮乙醇等溶液顯色的方法；方法2:採用高效液相色譜法或蒸發光散射檢測器與高效液相色譜聯用法，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酯或三氯甲垸或二氯甲垸或正丁醇提取後再濃縮的方法，使用C8或C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規的合適比例條件下為流動相，以人參對照藥材、人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rbl、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rd、人參皂苷Ral、人參皂苷Rhl、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種作為對照品，檢測波長在200600nm範圍內；(6)含量測定方法為方法h採用高效液相色譜法測定本品中的人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Re，樣品前處理以氯仿、乙醚按一定的比例混合溶劑提取雜質,然後用氫氧化鉀、乙醇或甲醇、水提取，正丁醇、甲醇精製的方法，使用C18類型填料的色譜柱，以乙睛、磷酸、水在常規的合適比例條件下為流動相，檢測波長為203nm;方法2:採用薄層色譜掃描法，一般使用矽膠G或矽膠G&54或矽膠H為薄層板，點樣量為0.530W之間任一體積，以人參對照藥材、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rd、人參皂苷Rbl、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg3、人參皂苷Rgl、人參皂苷Rb3、人參皂苷Re中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理包括直接取樣或者是以乙醇或甲醇或醋酸乙酯或三氯甲烷或二氯甲垸或正丁醇提取後精製再濃縮的方法，展開劑可以為三氯甲垸、丙酮、甲酸、水、甲醇、二氯甲烷、醋酸乙酯、冰醋酸、正丁醇中的一種或一種以上按照一定比例配製而成，顯色方法包括噴以2—30%硫酸乙醇或噴以1—10%印三酮乙醇溶液，斑點在薄層掃描儀上採用單波長或雙波長進行掃描，掃描波長為500750nm;方法3:以高效液相色譜法或蒸發光散射檢測器與高效液相色譜聯用法測定本品中的人參皂苷Rgl、人參皂苷Re、人參皂苷Rh2、人參二醇、人參三醇、人參皂苷Rbl、人參皂苷Rc、人參皂苷Rb2、人參皂苷Rd、人參皂苷Ral、人參皂苷Rhl、人參皂苷Rf、人參皂苷Rg2、人參皂苷Rg3中全部或部分品種，樣品前處理包括直接取樣或者是以醋酸乙酷或三氯甲烷或二氯甲烷或正丁醇提取後再濃縮的方法，使用8或C18類型填料的色譜柱，以乙睛、水、甲醇、磷酸中的一種或一種以上品種溶劑在常規的合適比例條件下為流動相，檢測波長在200600nm範圍內。3、根據權利要求1或2所述的益心舒中藥製劑中人參的質量控制方法，其特徵在於(1)人參的產地為遼寧、吉林、黑龍江。(2)人參的採集時間為每年的5-9月份。(3)人參的加工方法為挖取的鮮參鬆土，洗刷乾淨，適當日曬，再用硫磺燻蒸過曬乾。(4)人參的鑑別為採用薄層色譜法，使用矽膠G薄層板，點樣量為0.520W，以人參皂苷Rbl、Re、Rgl中全部或部分品種作為對照品，樣品前處理是以三氯甲垸-乙醚按一定的比例混合溶劑提取雜質，然後用乙醇、甲醇、醋酸乙酯、水中的一種或者是它們任意混合溶劑提取後再濃縮方法，再用正丁醇、水提取精製的方法，展開劑為三氯甲烷、甲醇、水按照常規比例配製而成，檢視條件為噴以230%硫酸乙醇顯色後紫外下檢視的方法；(5)人參的含量測定方法為:採用高效液相色譜法測定本品中的人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、人參皂苷Re，樣品前處理以氯仿、乙醚按一定的比例混合溶劑提取雜質,然後用氫氧化鉀、乙醇或甲醇、水提取，正丁醇、甲醇精製的方法，使用C18類型填料的色譜柱，以乙睛、磷酸、水在常規的合適比例條件下為流動相，檢測波長為203nm。4、根據權利要求13所述的益心舒中藥製劑中人參的質量控制方法，其特徵在於-(1)人參的產地為遼寧、吉林、黑龍江的長白山。(2)人參的採集時間為每年的5-9月份且生長期在6年以上。(3)人參的加工方法為挖取的鮮參鬆土，洗刷乾淨，日曬1天，再用硫磺燻蒸過曬乾。(4)人參的鑑別方法為採用薄層色譜法，取本品5g，加氯仿-乙醚(l:l)20ml，超聲30分鐘，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮幹溶劑，加甲醇20ml，加熱回硫30分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水30ml使溶解，轉移到分液,鬥中，用水飽和的正丁醇振搖提取兩次，每次20ml，合併正丁醇液，用氨試液洗兩次，每次25ml，再用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次25ml，棄去水液，正丁醇液蒸乾，殘渣加0.5ml甲醇溶解，作為供試品溶液。另取人參皂苷Rbl、Re、Rgl中全部或部分品種作為對照品，對照品加甲醇製成每lml含2mg的溶液作為對照品溶液。吸取上述對照品溶液各lOiil，供試品溶液15iU，分別點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(3:7:2),l(TC以下放置分層的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105匸加熱至斑點清晰。分別置日光及紫外光燈(365nm)下檢視，供試品色譜中，分別在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點或螢光斑點。(5)人參的含量測定方法為是利用HPLC法測定人參中人參皂苷R^和人參皂苷Re的總量fi譜條件系統話甲件試脇用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；0.1%磷酸-乙腈(80:20)為流動相；流速lml/min;檢測波長203nm。理論板數以人參皂苷Re峰計算應不低於2500。對照品溶液的製備精密稱取人參皂苷R^對照品12.5mg、人參皂苷RelOmg，加甲醇分別製成每lml含人參皂苷Rg力.5mg、人參皂苷ReO.4mg的溶液，即得。供試品溶液的製備取本品30粒的內容物，精密稱定，混勻，取4g，精密稱定，置索氏提取器中，加氯仿-乙醚(1:1)適量，加熱回流3小時，棄去氯仿-乙醚液，藥渣揮幹溶劑，連同濾紙筒移入具塞錐形瓶中，加入2%氫氧化鉀醇液50ml，加熱回流l小時，取下，放冷，濾過，用少量甲醇洗滌殘寧3次，合併洗液和濾液，置蒸發皿中蒸乾，殘渣加水50ml溶解瓶移至分液漏鬥中，用水飽和的正丁醇提取4次(20ml，20ml，10ml，10ml)，合併正丁醇液，正丁醇液置蒸發皿中蒸乾，殘渣加甲醇溶解並移至5ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45陶)濾過，即得。測定法分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各10W，注入液衝目色譜儀，測定，即得。全文摘要本發明是一種益心舒中藥製劑中人參的質量控制方法，屬於藥品的
技術領域：
。益心舒中藥製劑是以人參、黃芪、丹參、麥冬、五味子等七味藥組成，具有益氣復脈，活血化瘀，養陰生津的功效，目前臨床上廣泛用於治療心絞痛、心肌缺血、各型心率失常、房性早搏、胸痛及冠心病心絞痛患等。本發明提供了一種益心舒中藥製劑中人參的質量控制方法，該方法的提供直接向有關的生產益心舒製劑中人參的品質提供了檢測的指標、檢測的手段、技術方法等等；以便更好的控制該中藥製劑的質量，保證用藥的安全性和療效，能夠更好的指導生產，為消費者提供一種品質優良的產品。文檔編號A61K36/8968GK101596275SQ200910102649公開日2009年12月9日申請日期2009年6月30日優先權日2009年6月30日發明者張觀福申請人:貴州信邦製藥股份有限公司