合成tlr7激動劑的磷脂綴合物的用途的製作方法

2023-12-08 08:10:46 2

專利名稱：合成tlr7激動劑的磷脂綴合物的用途的製作方法
合成TLR7激動劑的磷脂綴合物的用途相關申請的相互參引本申請要求2010年4月30日提交的第61/343，573號美國臨時申請的優先權，該臨時申請的公開內容以引用的方式納入本說明書。政府權利聲明本文所描述的發明是在美國國立衛生研究院(National Institutes of Health)授予的批准號為A1056453和Al 1077989的政府基金資助下完成。美國政府對於本發明享有某些權利。
背景技術：
最近十年來對於微生物病原體的先天識別(innate recognition)的分子機理已經了解很多。普遍接受的是，許多體細胞表達一系列能檢測潛在病原體的模式識別受體(pattern recognition receptors),而與適應性免疫系統(adaptive immune system)無關(參見 Janeway et al., Annu.Rev.1mmunol., 20:197 (2002))。據認為，這些受體與被稱為病原體相關分子模式(pathogen associated molecular pattern, PAMP)的微生物組分相互作用。PAMP的實例包括肽聚糖(peptidoglycan)、革蘭氏陽性細胞壁中的脂磷壁酸(lipotechoic acid)、甘露糖(其通常存在於微生物碳水化合物中,但是在人體中罕有)、細菌的DNA、病毒的雙鏈RNA以及真菌細胞壁中的葡聚糖(glucan)。PAMP通常滿足某些標準，所述標準包括:(a)它們由微生物而不是其哺乳動物宿主表達，(b)在多種病原體中的結構保守性，和(c)能夠刺激先天免疫(innate immunity)的能力。已經發現Toll樣受體(Toll-like Receptor, TLR)在PAMP檢測中和對微生物感染的早期應答中起核心作用(參見Underhill et al., Curr.0pin.Jmmunο1..14:103(2002))。已經識別了十種哺乳動物TLR和許多這些TLR的激動劑。例如，已經識別了富含鳥嘌呤和尿苷的單鏈RNA作為TLR7的天然配體(Diebold etal., Science.303:1529 (2004))。此外，還識別了若干個低分子量的TLR7激活劑，包括咪唑並喹啉(imidazoquinoline)和類嘌呤(purine-like)分子(Hemmiet al., Nat.Tmmunol..3:191 (2002);Lee et al., Proc.Natl.Acad.Sc1.USA, 180:6646(2003);Lee etal.，Nat.Cell Biol..8:1327 (2006))。在類嘌呤分子中，9-苄基-8-羥基-2(2-甲氧基乙氧基)腺嘌呤(「SM」)已被識別作為有效的並且特異性的TLR7激動劑。合成的免疫調節劑R-848 (雷西莫特(resiquimod))活化TLR7和TLR8。儘管TLR刺激引發共有的信號傳導級聯(包括銜接蛋白MyD88、轉錄因子NF-kB以及促炎性細胞因子和效應細胞因子)，但某些細胞類型仍傾向於產生特定的TLR。例如，TLR7和TLR9主要存在於樹突狀細胞(DC)和B淋巴細胞中的內體的內面上(在人體中；小鼠巨噬細胞表達TLR7和TLR9)。另一方面，TLR8存在於人血單核細胞中(參見 Hornung et al., T.1mmunol., 168:4531 (2002))。

發明內容
本發明提供通過穩定的共價鍵與磷脂大分子相連的合成TLR7激動劑(綴合物)的用途，即，所述綴合物不作為前藥發揮作用。所述綴合物可包括與合成TLR7激動劑直接相連的磷脂大分子、或經由接頭(例如氨基、羧基或丁二醯胺基團)與TLR7激動劑相連的磷脂大分子。本發明的綴合物為廣譜、長效和無毒的合成免疫刺激劑，其可用於激活哺乳動物(例如，人類)的免疫系統，例如在體內通過刺激TLR7活性而激活。具體而言，本發明的綴合物可優化免疫應答，同時限制了與非綴合TLR7激動劑相關的不合需要的全身副作用。因此，本發明提供了增強免疫應答(例如對特異性抗原的免疫應答)的方法，或誘導全身性免疫應答(general immune response)(不存在特異性抗原的情況下)的方法。在一個實施方案中，所述綴合物作為佐劑起作用，並因此與特異性的免疫應答而非與全身性免疫應答相關。在一個實施方案中，所述綴合物作為全身性免疫刺激劑起作用。在一個實施方案中，所述方法包括對需要其的哺乳動物給予可有效預防、抑制或治療疾病(包括但不限於，微生物感染、膀胱病症或皮膚病症)的量的抗原和本發明綴合物。可用於本發明中的抗原的非限制性實例包括，但不限於，分離的蛋白質或肽(例如二肽或三肽等)、碳水化合物(多糖)、核苷酸(例如PNA、RNA和DNA等)、細胞、脂質、微生物(例如病毒、細菌、真菌等)。所述抗原可包括滅活的完整的生物體或微生物，或其亞成分等。在一個實施方案中，對所述抗原和綴合物給藥的免疫應答與對所述抗原給藥(不存在所述綴合物的情況)或者對相應的未綴合TLR7激動劑給藥或對其組合給藥的免疫應答得到增強。在一個實施方案中，對哺乳動物給予包括所述抗原和所述綴合物的組合物。在一個實施方案中，所述組合物為局部給予，例如皮膚給藥(dermal administration)或鼻內給藥。在另一個實施方案中,所述組合物為全身給予。在另一個實施方案中，所述抗原和所述綴合物分別配製並且同時給予或慣序給予。因此，本發明提供了包括一定量本發明綴合物的免疫原性組合物，例如，可單獨誘導炎症應答而且還可有效增強對抗原的免疫應答的組合物。在一個實施方案中，所述組合物不包括溶劑或防腐劑(如DMSO或乙醇)，其可在例如人體中具有毒性效應，。本發明的綴合物具有式(I)，或其互變異構體，或其可藥用的鹽或溶劑合物:
權利要求
1.一種增強哺乳動物中免疫應答的方法，包括對所述哺乳動物給予有效量的組合物，所述組合物包括式(I)的化合物，或其互變異構體，或其可藥用的鹽或溶劑合物:
2.權利要求1的方法，其中R3包括下式的基團:
3.權利要求2的方法，其中m為I。
4.權利要求2的方法，其中R11和R12各自為油醯基。
5.權利要求1的方法，其中所述R3的磷脂包括兩個羧酸酯並且每個羧酸酯包括一個、兩個、三個或四個不飽和位點、環氧化位點、羥基化位點或其結合。
6.權利要求1的方法，其中所述R3的磷脂包括兩個羧酸酯並且所述羧酸酯為相同或不同。
7.權利要求6的方法，其中所述磷脂的每個羧酸酯為在C8-C9處具有不飽和位點的C17羧酸酯。
8.權利要求6的方法，其中所述磷脂的每個羧酸酯為在C9-C10處具有不飽和位點的C18羧酸酯。
9.權利要求1-8任一項的方法，其中X2為鍵或在鏈中具有I至約10個原子的鏈，其中所述鏈的所述原子選自碳、氮、硫和氧，其中任意碳原子可用氧代基團取代，並且其中任意硫原子可用一個或兩個氧代基團取代。
10.權利要求1-6任一項的方法，其中X2為C(O)、
11.權利要求1-10任一項的方法，其中R3包括二油醯基磷脂醯乙醇胺。
12.權利要求1-11任一項的方法，其中R3為1，2-二油醯基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺並且X2為C (O)。
13.權利要求1-12任一項的方法，其中X1為氧。
14.權利要求1-13任一項的方法，其中X1為硫或-NIT-，其中Re為氫、C1^6烷基或取代的Cu燒基，其中所述燒基取代基為輕基、C3_6環燒基、C^6燒氧基、氣基、氛基或芳基。
15.權利要求14的方法，其中X1為-NH-。
16.權利要求1-15任一項的方法，其中R1和Re—起形成雜環或取代的雜環。
17.權利要求16的方法，其中R1和Re—起形成取代的或未取代的嗎啉環、哌啶環、批咯燒環或哌嗪環。
18.權利要求1-15任一項的方法，其中R1為用C1-6烷氧基取代的Cl-ClO烷基。
19.權利要求1-15任一項的方法，其中R1為氫、CV4烷基或取代的CV4烷基。
20.權利要求19的方法，其中R1為氣、甲基、乙基、丙基、丁基、輕基Cu亞燒基、或Cp4燒氧基Cu亞燒基。
21.權利要求20的方法，其中R1為氣、甲基、乙基、甲氧基乙基或乙氧基乙基。
22.權利要求1-21任一項的方法，其中R2為滷素或Cy烷基，或R2不存在。
23.權利要求22的方法，其中R2為氯、溴、甲基或乙基、或R2不存在。
24.權利要1-23任一項的方法，其中X1為0，R1為CV4烷氧基乙基，η為0，X2為羰基，以及R3為二油醯基磷脂醯乙醇胺(DOPE)。
25.權利要求1-24任一項的方法，其中所述式(I)化合物為:
26.權利要求1-25任一項的方法，其中所述式(I)化合物為
27.權利要求1-26任一項的方法，其中所述組合物還包括一定量的抗原。
28.權利要求27的方法，其中所述抗原為微生物、蛋白質或芽孢。
29.權利要求1-26任一項的方法，還包括給予抗原。
30.權利要求29的方法，其中所述抗原與所述組合物同時給予。
31.權利要求29的方法，其中所述抗原在所述組合物之前或之後給予。
32.權利要求29的方法，其中所述抗原為微生物、蛋白質或芽孢。
33.權利要求28或29的方法，其中所述給藥可有效預防、抑制或治療微生物感染。
34.權利要求28、32或33的方法，其中所述微生物為細菌。
35.權利要求27或29的方法，其中所述抗原包括細菌芽孢。
36.權利要求1-35任一項的方法，其中所述哺乳動物為人。
37.權利要求1-36任一項的方法，其中所述組合物為鼻內給予。
38.權利要求1-36任一項的方法，其中所述組合物為皮膚給予。
39.權利要求1-38任一項的方法，其中所述給予的量可有效預防感染。
40.權利要求1-38任一項的方法，其中所述給予的量可有效預防、抑制或治療膀胱病症。
41.權利要求1-38任一項的方法，其中所述給予的量可有效預防、抑制或治療皮膚病症。
42.權利要求1-41任一項的方法，其中所述給予的量不會導致食慾缺乏或體溫過低。
43.權利要求1-42任一項的方法，其中所述給予的量誘導Th2免疫應答但沒有顯著的Thl免疫應答。
44.權利要求1-11任一項的方法，其中所述組合物包括形成脂質雙層的納米顆粒和所述化合物。
45.一種包括組合物的疫苗，所述組合物包括抗原或與腫瘤相關的抗原和一定量的權利要求I所示的式(I)化合物， 或其互變異構體； 或其可藥用的鹽或溶劑合物。
46.一種包括納米顆粒的製品，所述納米顆粒包括形成脂質雙層的納米顆粒和權利要求I所示的通式(I)的化合物。
47.一種納米顆粒分散劑，包括含權利要求1-26任一項中所述化合物的納米顆粒和分散於水性介質中的脂質，所述納米顆粒具有的平均粒徑為至少50nm至約300nm。
48.權利要求47的納米分散劑，其中所述脂質為磷脂。
全文摘要
本發明提供了TLR激動劑的磷脂綴合物的用途，例如，在疫苗中，預防、抑制或治療各種疾病，包括炎症、癌症和病原體例如微生物、感染。
文檔編號A61K31/66GK103118682SQ201180033022
公開日2013年5月22日 申請日期2011年4月29日 優先權日2010年4月30日
發明者D·A·卡森, H·B·科塔姆, 林公子, M·陳, C·C·N·吳 申請人:加利福尼亞大學校務委員會