一種多硫酸寡糖及其製備方法
2023-11-02 02:25:57 1
專利名稱：一種多硫酸寡糖及其製備方法
技術領域：
本發明屬於生物醫藥領域，特別是涉及一種治療哮喘病的多硫酸寡糖及其製備方法。
背景技術：
通過對哮喘病發病機理的研究，世界上已確立了抗炎治療是支氣管哮喘的首要治療原則。目前應用的抗哮喘藥物有支氣管擴張劑和激素類抗炎藥物，前者只能起到緩解症狀的作用，而激素類抗炎藥物由於具有較大的副作用只能在應急時使用。近年已有關於肝素等糖胺聚糖具有抗炎和免疫調節作用的報導，並有小劑量肝素的吸入療法用於抗哮喘病的研究。Ahmed等人在美國專利「哮喘病的治療方法」(專利號US 5690910)曾報導了用低分子肝素治療哮喘病。儘管肝素具有潛在的治療哮喘病的作用，但將肝素用於常規治療卻很困難，因為其有效劑量範圍狹窄、成分不均一、具有較強的抗凝活性而導致出血等缺點，從而限制了它在這方面的應用。
發明內容
本發明的目的在於克服以上現有的抗哮喘藥物的不足，採用化學法對肝素進行結構修飾，提供一種具有抗哮喘活性強但同時又無出血副作用的多硫酸寡糖及其製備方法。
本發明是通過以下途徑實現的一種多硫酸寡糖，分子中含有艾杜糖醛酸衍生物、葡萄糖醛酸衍生物和氨基葡萄糖衍生物，其特徵是分子結構由2-O-硫酸基-α-L-艾杜糖醛酸-(1→4)-2-N-硫酸基-2-去氧-6-O-硫酸基-α-D-葡萄糖組成，糖鏈中還含有2-O-硫酸基-β-D-葡糖醛酸-(1→4)-2-N-硫酸基-2-去氧-6-O-硫酸基-α-D-葡萄糖組成的雙糖單位，化學結構如下 X＝SO3-或H，n＝1～8上述多硫酸寡糖，其特徵是平均分子量為3000道爾頓，分子量分布範圍1000～5500道爾頓之間，抗凝效價＜30IU/mg，硫酸根與羧酸根的比值為3～5。
製備多硫酸寡糖的方法，其特徵是包括以下步驟(1)肝素脫乙醯化將肝素配成濃度為1％～10％的溶液，所用的脫乙醯化試劑有無水肼、對肼基苯甲酸、二鹽酸肼、水合肼、硫酸肼及其混合物等，肼解溫度90～110℃，時間為3～6小時。凍幹後再溶於水，乙醇沉澱；(2)降解將步驟(1)的沉澱物按1％～10％濃度配成水溶液，加入0.1％～0.5％的亞硝酸鈉在pH1.5～4反應1～3小時，用80％的乙醇沉澱，真空乾燥；(3)降解產物還原將步驟(2)的產物按10％濃度配成水溶液，用0.1％～1％的硼氫化鈉還原降解產物，反應時間10～20小時。用80％的乙醇沉澱，真空乾燥；(4)多硫酸化將步驟(3)的產物溶於6倍量的甲醯胺或二甲基甲醯胺中，加入寡糖量的1～2倍量的氯磺酸(內含5％～10％的濃硫酸)，50℃以下反應2～8小時，用2～6倍量的乙醇終止反應；(5)磺化產物純化磺化產物經還原後，凝膠過濾層析分離所需片段，所用凝膠為Sephadex G 50～100，Superdex 30～200，收集所需要的組份，凍幹得產品。
本發明製得的多硫酸寡糖具有較強的抗炎、抗哮喘作用，並具有抗凝效價低，無出血副作用等優點。
具體實施例方式
下面給出本發明的一個最佳實施例。
多硫酸寡糖是將肝素脫乙醯化後降解，然後進行多硫酸化所得的產物。具體實施步驟如下(1)肝素脫乙醯化取肝素10g，溶於100ml無水肼-硫酸肼(99∶1)的混合物中，升溫至95～100℃，反應5～6小時，冷卻後，凍幹，再按10％濃度溶於水，70％乙醇沉澱；(2)降解將步驟(1)的乙醇沉澱物按10％濃度溶於水，調pH2～3.5，加入0.3％的亞硝酸鈉在室溫反應2小時，調pH至7.0，用80％的乙醇沉澱；(3)降解產物還原將步驟(2)的乙醇沉澱物配成10％水溶液，加入0.1％的硼氫化鈉還原反應15小時。調pH至7.0，用80％的乙醇沉澱，真空乾燥，得產物6.3g；(4)多硫酸化取步驟(3)的產物6g溶於36ml甲醯胺中，加入6ml氯磺酸(內含5％的濃硫酸)，50℃反應8小時，用4倍量的乙醇沉澱，真空乾燥，得產物7.3g；(5)磺化產物純化取步驟(4)的產物4g溶於10ml水中，上Sephadex G75柱(120×3.5cm)，用0.2mol/L的氯化鈉洗脫，收集所需要的組份，凍幹得產品2.3g。
將上述所得的多硫酸寡糖分別進行分子量測定、結構測定和抗凝效價測定，得到一種多硫酸寡糖，分子中含有艾杜糖醛酸衍生物、葡萄糖醛酸衍生物和氨基葡萄糖衍生物，分子結構由2-O-硫酸基-α-L-艾杜糖醛酸-(1→4)-2-N-硫酸基-2-去氧-6-O-硫酸基-α-D-葡萄糖組成，糖鏈中還含有2-O-硫酸基-β-D-葡糖醛酸-(1→4)-2-N-硫酸基-2-去氧-6-O-硫酸基-α-D-葡萄糖組成的雙糖單位，化學結構如下 X＝SO3-或H，n＝1～8該多硫酸寡糖的平均分子量為3000道爾頓，分子量分布範圍1000～5500道爾頓之間，抗凝效價＜30IU/mg，硫酸根與羧酸根的比值為3～5。
權利要求
1.一種多硫酸寡糖，分子中含有艾杜糖醛酸衍生物、葡萄糖醛酸衍生物和氨基葡萄糖衍生物，其特徵是分子結構由2-O-硫酸基-α-L-艾杜糖醛酸-(1→4)-2-N-硫酸基-2-去氧-6-O-硫酸基-α-D-葡萄糖組成，糖鏈中還含有2-O-硫酸基-β-D-葡糖醛酸-(1→4)-2-N-硫酸基-2-去氧-6-O-硫酸基-α-D-葡萄糖組成的雙糖單位，化學結構如下 X＝SO3-或H，n＝1～8
2.根據權利要求1所述多硫酸寡糖，其特徵是平均分子量為3000道爾頓，分子量分布範圍1000～5500道爾頓之間，抗凝效價＜30IU/mg，硫酸根與羧酸根的比值為3～5。
3.一種製備權利要求1或2所述多硫酸寡糖的方法，其特徵是包括以下步驟(1)肝素脫乙醯化將肝素配成濃度為1％～10％的溶液，所用的脫乙醯化試劑有無水肼、對肼基苯甲酸、二鹽酸肼、水合肼、硫酸肼及其混合物等，肼解溫度90～110℃，時間為3～6小時。凍幹後再溶於水，乙醇沉澱。(2)降解將步驟(1)的沉澱物按1％～10％濃度配成水溶液，加入0.1％～0.5％的亞硝酸鈉在ph1.5～4反應1～3小時，用80％的乙醇沉澱，真空乾燥。(3)降解產物還原將步驟(2)的產物按10％濃度配成水溶液，用0.1％～1％的硼氫化鈉還原降解產物，反應時間10～20小時。用80％的乙醇沉澱，真空乾燥。(4)多硫酸化將步驟(3)的產物溶於6倍量的甲醯胺或二甲基甲醯胺中，加入寡糖量的1～2倍量的氯磺酸(內含5％～10％的濃硫酸)，50℃以下反應2～8小時，用2～6倍量的乙醇終止反應。(5)磺化產物純化磺化產物經還原後，凝膠過濾層析分離所需片段，凍幹得產品。
全文摘要
本發明屬於生物醫藥領域，特別是涉及一種多硫酸寡糖及其製備方法。該法製備的多硫酸寡糖的平均分子量為3000道爾頓左右，分子量分布範圍為1000～5500道爾頓之間，分子中硫酸化程度高，硫酸根與羧酸根的比值為3～5，抗凝效價＜30IU/mg。該多硫酸寡糖製備方法是採用肼解將肝素脫乙醯化，化學降解後再進行磺化得到，該化合物具有較強的抗炎、抗哮喘作用，並具有抗凝效價低，無出血副作用等優點。
文檔編號C07H11/00GK1450076SQ03112179
公開日2003年10月22日 申請日期2003年4月18日 優先權日2003年4月18日
發明者姬勝利, 崔慧斐, 遲延青, 石峰 申請人:山東大學