一種治療魚鱗病的中藥組合物的質量控制方法

2023-11-01 23:49:37 1

專利名稱：一種治療魚鱗病的中藥組合物的質量控制方法
技術領域：
本發明屬於中藥技術領域，尤其是指中藥製劑中成份含量測定和鑑 別方法。
背景技術：
魚鱗病(ichthyosis)是一組遺傳性皮膚病，主要表現為肌膚甲錯， 從細磷屑至鱷魚皮樣改變不等，這種病目前在國內外尚無較好的治療方 法。西醫主要根據魚鱗病的不同臨床類型採取相應的治療措施，治療目 的是緩解症狀，增加角質層含水量和促進正常角化。用於全身治療的藥 物主要為維生素A及13-順維甲酸等；局部治療常用0.1%維甲酸霜、 10%尿素軟膏或尿素霜等藥物，但療效均不能令人滿意。中醫稱魚鱗病 為"蛇皮病""魚鱗風"等，認為系先天不足、後天失養、血虛風燥、 營衛失和等所致，治療以養血潤燥、活血和營為主，常內服、外用結合 治療，多用湯劑和酊劑，服用不方便，並且療效不確切。
在公開號為CN1762452A的中國專利申請文件中公開了一種治療 魚鱗病的藥物及其製備方法，該藥物由中藥材白鮮皮、威靈仙、生地黃、 蒼朮、防風、蟬蛻、紅花、火麻仁、桂枝、當歸、川芎、甘草、苦參、 麻黃、地膚子十五味藥組成。該專利沒有公開其質量控制方法，本發明 是在該發明藥物製劑的基礎上，提供了上述發明藥物的質量控制方法, 通過此方法可以控制該發明藥物及含相同組分藥物的質量。

發明內容
本發明提供一種治療魚鱗病的中藥組合物的質量控制方法，其所 述藥物是由白鮮皮、威靈仙、生地黃、蒼朮、防風、蟬蛻、紅花、火 麻仁、桂枝、當歸、川芎、甘草、苦參、麻黃、地膚子十五味藥組成，
特徵在於用高效液相色譜法測定所述藥物的一種或幾種成分的含量； 用薄層色譜法鑑別其中的一種或幾種成分； 含量測定
a)用高效液相色譜法測定該中藥組合物中苦參的含量，操作步 驟如下
色譜條件以氨基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以體積比為 60-90:20-5:20-5的乙腈_無水乙醇-3%磷酸溶液為流動相，檢測波長為
220 nm，理論板數按苦參鹼峰計算應不低於4000;
對照品溶液的製備精密稱取苦參鹼對照品適量，加體積比為 60-90:40-10的乙腈-無水乙醇溶解，製成每1 ml含50 u g苦參鹼的 溶液，即得；
供試品溶液的製備取本品粉末0.5-1.5 g，精密稱定，加濃氨 試液1-2 ml，精密加入三氯甲烷20-30 ml密塞，稱定重量，超聲處 理20-40分鐘，放冷，再稱定重量，用三氯甲垸補足減失的重量，搖 勻，濾過。精密量取濾液10 ml，回收溶劑至幹，殘渣加無水乙醇使 溶解，並轉移至5ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液 相色譜儀，測定，即得。
本品每lg含苦參以苦參鹼計，不得少於0. 8 mg;
b)用高效液相色譜法測定該中藥組合物中當歸和川芎的含量， 操作步驟如下
色譜條件以十八垸基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以體積比為
20-40:80-60的甲醇-O. 1%磷酸溶液為流動相，檢測波長為320 nm。理
論板數按阿魏酸峰計算應不低於8000;
對照品溶液的製備取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置棕色量 瓶中，加甲醇製成每l ml含5"g的溶液，即得；
供試品溶液的製備取本品粉末1-3 g,精密稱定，置具塞錐形 瓶中，精密加入甲醇15-25 ml，密塞，稱定重量，超聲處理20-40分 鍾，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續 濾液，即得；
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液 相色譜儀，測定，即得；
本品每lg含當歸、川芎以阿魏酸計，不得少於30"g。 鑑別方法
其中對甘草的鑑別是採用甘草次酸對照品作為陽性對照 和對苦參的鑑別是採用槐定鹼對照品作為陽性對照； 和對麻黃的鑑別是採用鹽酸麻黃鹼對照品作為陽性對照； 和對川芎的鑑別是採用川芎對照藥材作為陽性對照； a)用薄層色譜法鑑別其中的甘草成分
取本品4-10 g，研細，加乙醇40 ml與鹽酸2 ml，置水浴上加 熱回流20-50分鐘，放冷，濾過，取濾液濃縮至約10ml，加水10ml， 攪勻，轉移到分液漏鬥中，用沸程為60 9(TC的石油醚提取兩次，每 次20ml，合併石油醚提取液置水浴上蒸乾，殘渣加無水乙醇0.5ml 使溶解，作為供試品溶液。另取甘草次酸對照品，加無水乙醇製成每 lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述 供試品溶液5-10 ul，對照品溶液5 tU，分別點於同一矽膠GF254 薄層板上，以體積比為10: 20: 7: 0. 5的60 9(TC石油醚-苯-乙酸 乙酯-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾乾，置254 nm紫外光燈下檢 視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑 點。
b) 用薄層色譜法鑑別其中的苦參成分
取本品4-10 g，研細，加三氯甲烷25 ml與濃氨試液1 ml，超聲 處理15-30分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加三氯甲烷lml使溶解，作 為供試品溶液。另取槐定鹼對照品，加乙醇製成每l ml含0.2 mg的 溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各4-8 u 1分別點於同一矽膠G薄層版上，以體積比為5: 0. 6: 0. 3的三氯 甲垸-甲醇-濃氨試液l(TC以下放置後的下層溶液為展開劑，展開，取 出，晾乾，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相 應的位置上，顯相同顏色的斑點。
c) 用薄層色譜法鑑別其中的麻黃成分
取本品4-8 g，研細，置50 ml錐形瓶中，加濃氨試液l ml、乙 醚30ml，密塞，放置兩個小時，時時振搖，濾過，加酸性乙醇(取乙 醇20 ml，加鹽酸l ml，混勻)1 ml，蒸乾，殘渣加甲醇l ml使溶解， 作為供試品溶液。另取鹽酸麻黃鹼對照品，加甲醇製成每lml含lmg
的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各
4-8 yl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以體積比為40: 7: 1的三
氯甲垸-甲醇-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以茚三酮試
液，在105'C加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相 應的位置上，顯相同顏色的斑點。
d)用薄層色譜法鑑別其中的川芎成分
取本品2-5g，研細，加lX碳酸氫鈉溶液50ml，超聲處理10-20 分鐘，離心，取上清液用稀鹽酸調節pH值至2 3，用乙醚振搖提取2 次，每次20 ml，合併乙醚液，揮幹，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為 供試品溶液。另取川芎對照藥材0.5g，同法製成對照藥材溶液。照薄 層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5-10 W,分別點於同一矽膠G薄 層板上，以體積比為4: 1: 0. 1的苯-乙酸乙酯-甲酸為展開劑，展開， 取出，晾乾，置365 mn紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥 材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
藥品應具有安全性、有效性、穩定性及可控性，完善的質量控制 標準能夠保證藥品質量的可靠性和均一性。在公開號為CN1762452A 的中國專利申請文件中公開的藥物對魚鱗病的治療效果已經得到臨床 的驗證，但是否能夠保證該發明藥物的質量以及藥物中有效成分的含 量，是決定該發明藥物療效的基礎。
在國家衛生部頒發的藥品標準中，與該發明含相同藥味組方的質量 控制方法中，除有一項顯微鑑別及兩個薄層鑑別項外，沒有其它含量測 定方法，難以很好地從多方面控制該發明藥物的質量。本發明內容彌補
了現有技術的不足，提高了該發明藥物的質量控制標準，具體內容如下 ①增加組方中麻黃的薄層色譜定性鑑別方法，並經方法學試驗確認方法 專屬、可行、陰性無幹擾；②增加組方中川芎的薄層色譜定性鑑別方法， 並經方法學試驗確認方法專屬、可行、陰性無幹擾；③增加組方中苦參 的定量測別方法，苦參鹼是苦參中的一種生物鹼成分，也是苦參的主要 活性成分之一，本發明利用高效液相色譜法測定該藥物中苦參鹼的含 量，結果準確，重現性好，具有專屬性；④增加當歸、川芎兩味藥材的 定量測定方法，阿魏酸在當歸中含量豐富，是當歸的主要活性成分，同 時也是川芎的主要功效成分之一，本發明利用高效液相色譜法測定該藥 物中當歸和川芎的共有成分阿魏酸的總含量，方法簡便，結果準確，重 現性好。
具體實施例方式
對於本領域技術人員而言，根據本發明所公開的技術內容，本領域 技術人員將很清楚本發明的其它實施方案，本發明實施例僅作為示例。 在不違反本發明主旨及範圍的情況下，可對本發明進行各種改變和改 進，但只要使用本發明所述的質量控制方法，均在本發明保護範圍之內。
實施例1
處方苦參44 g，甘草44 g，地黃88 g，防風44 g，蒼朮66 g， 威靈仙66 g，地膚子66 g，火麻仁44 g，麻黃44 g，紅花44 g，白 鮮皮66 g，蟬蛻44 g，當歸66 g，川芎44 g，桂枝44 g。
製法以上十五味，取桂枝、當歸、川芎全量及白鮮皮半量、共粉
成細粉；除紅花外，餘之半量的白鮮皮及地黃等十一味，加水煎煮2
次，第二次煎煮時下紅花，每次3小時，合併煎液過濾，濾液濃縮成相 對密度為1. 00 1. 30的清膏、檢測溫度為50 80。C;將上述細粉與清 膏混合均勻，乾燥後粉碎成細粉即得待檢藥物。
鑑別和含量測定方法如下
鑑別方法包括下列步驟
(1) 甘草的鑑別取本品4g，研細，加乙醇40ml與鹽酸2ml， 置水浴上加熱回流20分鐘，放冷，濾過，取濾液濃縮至約10ml，加 水10 ml，攪勻，轉移到分液漏鬥中，用石油醚(60 90°C)提取兩 次，每次20 ml，合併石油醚提取液置水浴上蒸乾，殘渣加無水乙醇 0.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取甘草次酸對照品，加無水乙醇 製成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥 典2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述供試品溶液10 u 1，對 照品溶液5ul，分別點於同一矽膠GF^薄層板上，以體積比為10-20: 7: 0.5的石油醚(60 90°C)-苯-乙酸乙酯-冰醋酸為展開劑， 展開，取出，晾乾，置紫外光燈(254mn)下檢視。供試品色譜中， 在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(2) 苦參的鑑別取本品4 g，研細，加三氯甲烷25ml與濃氨 試液lml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加三氯甲垸lml 使溶解，作為供試品溶液。另取槐定鹼對照品，加乙醇製成每lml含 0.2 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年 版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各8u 1分別點於同一矽膠 G薄層版上，以體積比為5: 0.6: 0.3的三氯甲烷-甲醇-濃氨試液10
x:以下放置後的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以稀碘化鉍 鉀試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色 的斑點。
(3) 麻黃的鑑別取本品4 g，研細，置50 ml錐形瓶中，加濃 氨試液l ml、乙醚30 ml，密塞，放置兩個小時，時時振搖，濾過， 加酸性乙醇(取乙醇20 ml，加鹽酸l ml，混勻)1 ml，蒸乾，殘渣加 甲醇lml使溶解，作為供試品溶液。另取鹽酸麻黃鹼對照品，加甲醇 製成每1 ml含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥 典2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各8ixl，分別點 於同一矽膠G薄層板上，以體積比為40: 7: l的三氯甲垸-甲醇-濃氨 試液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以茚三酮試液，在105-C加熱 至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯 相同顏色的斑點。
(4) 川芎的鑑別取本品2g，研細，加1X碳酸氫鈉溶液50ml， 超聲處理20分鐘，離心，取上清液用稀鹽酸調節pH值至2 3，用乙 醚振搖提取2次，每次20ml，合併乙醚液，揮幹，殘渣加甲醇lml使 溶解，作為供試品溶液。另取川芎對照藥材0.5g，同法製成對照藥材 溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取上 述兩種溶液各10W，分別點於同一矽膠G薄層板上，以體積比為4: 1: 0.1的苯-乙酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈 (365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯 相同顏色的螢光斑點。含量測定方法包括下列步驟
(1) 苦參的含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部
附錄VI D)測定。
色譜條件與系統適用性試驗以氨基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以體 積比為60:20:20的乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液為流動相，檢測波長為 220 nm。理論板數按苦參鹼峰計算應不低於4000。
對照品溶液的製備精密稱取苦參鹼對照品適量，加體積比為 60:40的乙腈-無水乙醇溶解，製成每1 ml含50p g苦參鹼的溶液， 即得。
供試品溶液的製備:取本品粉末0. 5g，精密稱定，加濃氨試液lml， 精密加入三氯甲垸20ml密塞，稱定重量，超聲處理20分鐘，放冷， 再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取濾 液10ml，回收溶劑至幹，殘渣加無水乙醇使溶解，並轉移至5ml量 瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液 相色譜儀，測定，即得。
本品每lg含苦參以苦參鹼(C15H24N20)計為1.0 mg。
(2) 當歸、川芎的含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年
版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽垸鍵合矽膠為填充劑； 以體積比為20:80的甲醇-0. 1%磷酸溶液為流動相，檢測波長為320 nm。 理論板數按阿魏酸峰計算應不低於8000。
對照品溶液的製備取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置棕色量 瓶中，加甲醇製成每l ml含5ug的溶液，即得。供試品溶液的製備取本品粉末1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶
中，精密加入甲醇15ml，密塞，稱定重量，超聲處理20分鐘，放冷， 再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10"1，注入液
相色譜儀，測定，即得。
本品每lg含當歸、川芎以阿魏酸(C10H1004)計，為45ug。 實施例2取實施例1中的藥物組合物
鑑別方法包括下列步驟
(1) 甘草的鑑別取本品6g，研細，加乙醇40ml與鹽酸2ml， 置水浴上加熱回流40分鐘，放冷，濾過，取濾液濃縮至10ml，加水 10 ml，攪勻，轉移到分液漏鬥中，用石油醚(60 90°C)提取兩次， 每次20 ml，合併石油醚提取液置水浴上蒸乾，殘渣加無水乙醇0. 5 ml 使溶解，作為供試品溶液。另取甘草次酸對照品，加無水乙醇製成每 1 ml含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005 年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述供試品溶液8ul，對照品溶液5 ta，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以體積比為10: 20: 7: 0.5 的石油醚(60 90°C)-苯-乙酸乙酯-冰醋酸為展開劑，展開，取出， 晾乾，置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色 譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(2) 苦參的鑑別取本品6 g，研細，加三氯甲烷25 ml與濃氨 試液lml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加三氯甲烷lml 使溶解，作為供試品溶液。另取槐定鹼對照品，加乙醇製成每lml含
0.2 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年 版一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各8ul分別點於同一矽膠 G薄層版上，以體積比為5: 0.6: 0.3的三氯甲烷-甲醇-濃氨試液10 'C以下放置後的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以稀碘化鉍 鉀試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色 的斑點。
(3) 麻黃的鑑別取本品6 g，研細，置50 ml錐形瓶中，加濃 氨試液l ml、乙醚30 ml，密塞，放置兩個小時，時時振搖，濾過， 加酸性乙醇(取乙醇20 ml，加鹽酸l ml，混勻)1 ml，蒸乾，殘渣加 甲醇lml使溶解，作為供試品溶液。另取鹽酸麻黃鹼對照品，加甲醇 製成每1 ml含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥 典2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5ul，分別點 於同一矽膠G薄層板上，以體積比為40: 7: l的三氯甲垸-甲醇-濃氨 試液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以茚三酮試液，在105。C加熱 至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯 相同顏色的斑點。
(4) 川芎的鑑別取本品3g，研細，加1X碳酸氫鈉溶液50ml， 超聲處理10分鐘，離心，取上清液用稀鹽酸調節pH值至2 3，用乙醚 振搖提取2次，每次20ml，合併乙醚液，揮幹，殘渣加甲醇lml使溶 解，作為供試品溶液。另取川芎對照藥材0.5g，同法製成對照藥材溶 液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述 兩種溶液各10ri，分別點於同一矽膠G薄層板上，以體積比為4: 1:
0.1的苯-乙酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈 (365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯 相同顏色的螢光斑點。
含量測定方法包括下列步驟
(l)苦參的含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部
附錄VI D)測定。
色譜條件與系統適用性試驗以氨基矽垸鍵合矽膠為填充劑；以體 積比為80:10:10的乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液為流動相，檢測波長為 220 nm。理論板數按苦參鹼峰計算應不低於4000。
對照品溶液的製備精密稱取苦參鹼對照品適量，加體積比為 80:20的乙腈-無水乙醇溶解，製成每l ml含50ug苦參鹼的溶液， 即得。
供試品溶液的製備取本品粉末1.0 g，精密稱定，加濃氨試液 1.5 ml，精密加入三氯甲垸25 ml密塞，稱定重量，超聲處理30分 鍾，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過。 精密量取濾液10 ml，回收溶劑至幹，殘渣加無水乙醇使溶解，並轉 移至5ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液 相色譜儀，測定，即得。
本品每lg含苦參以苦參鹼(C15H24N20)計為0.9 mg。 (2)當歸、川芎的含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005
年版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；
以體積比為30:70的甲醇-O. 1%磷酸溶液為流動相，檢測波長為320 nm。 理論板數按阿魏酸峰計算應不低於8000。
對照品溶液的製備取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置棕色量 瓶中，加甲醇製成每l ml含5ug的溶液，即得。
供試品溶液的製備取本品粉末2 g，精密稱定，置具塞錐形瓶 中，精密加入甲醇20ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷， 再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10yl，注入液 相色譜儀，測定，即得。
本品每lg含當歸、川芎以阿魏酸(d晶A)計為43ug。
實施例3取實施例1中的藥物組合物
鑑別方法包括下列步驟 (l)甘草的鑑別取本品10g，研細，加乙醇40ml與鹽酸2ml， 置水浴上加熱回流50分鐘，放冷，濾過，取濾液濃縮至10ml，加水 10ml，攪勻，轉移到分液漏鬥中，用石油醚(60 90°C)提取兩次， 每次20ml，合併石油醚提取液置水浴上蒸乾，殘渣加無水乙醇0.5ml 使溶解，作為供試品溶液。另取甘草次酸對照品，加無水乙醇製成每 lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005 年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述供試品溶液5ul，對照品溶液5ul， 分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以體積比為10: 20: 7: 0.5的石 油醚(60 90°C)-苯-乙酸乙酯-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾 幹，置紫外光燈(254nrn)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜 相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
(2) 苦參的鑑別取本品10g，研細，加三氯甲垸25ml與濃氨 試液lml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加三氯甲烷lml 使溶解，作為供試品溶液。另取槐定鹼對照品，加乙醇製成每lml含 0.2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版 一部附錄VIB)試驗，吸取上述兩種溶液各4ix 1分別點於同一矽膠G 薄層版上，以體積比為5: 0.6: 0.3的三氯甲烷-甲醇-濃氨試液l(TC 以下放置後的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以稀碘化鉍鉀 試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的 斑點。
(3) 麻黃的鑑別取本品8 g，研細，置50 ml錐形瓶中，加濃 氨試液l ml、乙醚30 ml，密塞，放置兩個小時，時時振搖，濾過， 加酸性乙醇(取乙醇20 ml，加鹽酸l ml，混勻)1 ml，蒸乾，殘渣加 甲醇lml使溶解，作為供試品溶液。另取鹽酸麻黃鹼對照品，加甲醇 製成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典 2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各，分別點於同一 矽膠G薄層板上，以體積比為40: 7: 1的三氯甲烷-甲醇-濃氨試液為 展開劑，展開，取出，晾乾，噴以茚三酮試液，在105。C加熱至斑點 顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏 色的斑點。
(4) 川芎的鑑別取本品5g，研細，加1X碳酸氫鈉溶液50ml， 超聲處理20分鐘，離心，取上清液用稀鹽酸調節pH值至2 3，用乙 醚振搖提取2次，每次20ml，合併乙醚液，揮幹，殘渣加甲醇lml使
溶解，作為供試品溶液。另取川芎對照藥材0.5g，同法製成對照藥材 溶液。照薄層色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VI B)試驗，吸取上 述兩種溶液各5W，分別點於同一矽膠G薄層板上，以體積比為4: 1: 0.1的苯-乙酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈
(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯 相同顏色的螢光斑點。
含量測定方法包括下列步驟
(l)苦參的含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部
附錄VI D)測定。
色譜條件與系統適用性試驗以氨基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以體 積比為90:5: 5的乙腈-無水乙醇-3%磷酸溶液為流動相，檢測波長為 220 nm。理論板數按苦參鹼峰計算應不低於4000。
對照品溶液的製備精密稱取苦參鹼對照品適量，加體積比為 90:10的乙腈-無水乙醇溶解，製成每1 ml含50u g苦參鹼的溶液， 即得。
供試品溶液的製備取本品粉末1.5 g，精密稱定，加濃氨試液 2ml，精密加入三氯甲烷30 ml密塞，稱定重量，超聲處理40分鐘， 放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過。精密 量取濾液10ml，回收溶劑至幹，殘渣加無水乙醇使溶解，並轉移至5 ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10iU，注入液 相色譜儀，測定，即得。
本品每lg含苦參以苦參鹼(C15H24N20)計為1. 1 mg。
(2)當歸、川芎的含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2005
年版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽垸鍵合矽膠為填充劑； 以體積比為40: 60的甲醇-O. 1%磷酸溶液為流動相，檢測波長為320 nm。 理論板數按阿魏酸峰計算應不低於8000。
對照品溶液的製備取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置棕色量 瓶中，加甲醇製成每l ml含5ng的溶液，即得。
供試品溶液的製備取本品粉末3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶 中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理40分鐘，放冷， 再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液
相色譜儀，測定，即得。
本品每lg含當歸、川芎以阿魏酸(C10H1004)計，為42ug。
權利要求
1.一種治療魚鱗病的中藥組合物的質量控制方法，其所述藥物是由白鮮皮、威靈仙、生地黃、蒼朮、防風、蟬蛻、紅花、火麻仁、桂枝、當歸、川芎、甘草、苦參、麻黃、地膚子十五味藥組成，特徵在於用高效液相色譜法測定所述藥物的一種或幾種成分的含量；用薄層色譜法鑑別其中的一種或幾種成分；含量測定a)用高效液相色譜法測定該中藥組合物中苦參的含量，操作步驟如下色譜條件以氨基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以體積比為60-90:20-5:20-5的乙腈-無水乙醇-3％磷酸溶液為流動相，檢測波長為220nm，理論板數按苦參鹼峰計算應不低於4000；對照品溶液的製備精密稱取苦參鹼對照品適量，加體積比為60-90:40-10的乙腈-無水乙醇溶解，製成每1ml含50μg苦參鹼的溶液，即得；供試品溶液的製備取該中藥組合物粉末0.5-1.5g，精密稱定，加濃氨試液1-2ml，精密加入三氯甲烷20-30ml密塞，稱定重量，超聲處理20-40分鐘，放冷，再稱定重量，用三氯甲烷補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取濾液10ml，回收溶劑至幹，殘渣加無水乙醇使溶解，並轉移至5ml量瓶中，加無水乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；該中藥組合物每1g含苦參以苦參鹼計，不得少於0.8mg；b)用高效液相色譜法測定該中藥組合物中當歸和川芎的含量，操作步驟如下色譜條件以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以體積比為20-40:80-60的甲醇-0.1％磷酸溶液為流動相，檢測波長為320nm。理論板數按阿魏酸峰計算應不低於8000；對照品溶液的製備取阿魏酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加甲醇製成每1ml含5μg的溶液，即得；供試品溶液的製備取本發明藥物粉末1-3g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇15-25ml，密塞，稱定重量，超聲處理20-40分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得；該中藥組合物每1g含當歸、川芎以阿魏酸計，不得少於30μg；鑑別方法其中對甘草的鑑別是採用甘草次酸對照品作為陽性對照和對苦參的鑑別是採用槐定鹼對照品作為陽性對照；和對麻黃的鑑別是採用鹽酸麻黃鹼對照品作為陽性對照；和對川芎的鑑別是採用川芎對照藥材作為陽性對照；a)用薄層色譜法鑑別其中的甘草成分取該中藥組合物4-10g，研細，加乙醇40ml與鹽酸2ml，置水浴上加熱回流20-50分鐘，放冷，濾過，取濾液濃縮至約10ml，加水10ml，攪勻，轉移到分液漏鬥中，用沸程為60～90℃的石油醚提取兩次，每次20ml，合併石油醚提取液置水浴上蒸乾，殘渣加無水乙醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取甘草次酸對照品，加無水乙醇製成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述供試品溶液5-10μl，對照品溶液5μl，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以體積比為102070.5的60～90℃石油醚-苯-乙酸乙酯-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾乾，置254nm紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；b)用薄層色譜法鑑別其中的苦參成分取該中藥組合物4-10g，研細，加三氯甲烷25ml與濃氨試液1ml，超聲處理15-30分鐘，濾過，濾液蒸乾，殘渣加三氯甲烷1ml使溶解，作為供試品溶液。另取槐定鹼對照品，加乙醇製成每1ml含0.2mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各4-8μl分別點於同一矽膠G薄層版上，以體積比為50.60.3的三氯甲烷-甲醇-濃氨試液10℃以下放置後的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以稀碘化鉍鉀試液。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；c)用薄層色譜法鑑別其中的麻黃成分取該中藥組合物4-8g，研細，置50ml錐形瓶中，加濃氨試液1ml、乙醚30ml，密塞，放置兩個小時，時時振搖，濾過，加酸性乙醇(取乙醇20ml，加鹽酸1ml，混勻)1ml，蒸乾，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸麻黃鹼對照品，加甲醇製成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各4-8μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以體積比為4071的三氯甲烷-甲醇-濃氨試液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以茚三酮試液，在105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；d)用薄層色譜法鑑別其中的川芎成分取該中藥組合物2-5g，研細，加1％碳酸氫鈉溶液50ml，超聲處理10-20分鐘，離心，取上清液用稀鹽酸調節pH值至2～3，用乙醚振搖提取2次，每次20ml，合併乙醚液，揮幹，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取川芎對照藥材0.5g，同法製成對照藥材溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5-10μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以體積比為410.1的苯-乙酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾乾，置365nm紫外光燈下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的螢光斑點。
全文摘要
本發明涉及一種治療魚鱗病的中藥組合物的質量控制方法，屬於中藥質量控制領域。其所述藥物是由白鮮皮、威靈仙、生地黃、蒼朮、防風、蟬蛻、紅花、火麻仁、桂枝、當歸、川芎、甘草、苦參、麻黃、地膚子十五味藥組成，特徵在於用高效液相色譜法測定所述藥物的一種或幾種成分的含量；用薄層色譜法鑑別其中的一種或幾種成分。本發明彌補了現有技術的不足，提高了本發明藥物的質量控制標準，且方法簡便，結果準確，重現性好。
文檔編號A61K36/804GK101366856SQ20081005128
公開日2009年2月18日 申請日期2008年10月17日 優先權日2008年10月17日
發明者劉志昆, 周文波, 偉 姜, 張成海, 石桂芳, 心 陳 申請人:大連美羅中藥廠有限公司