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一種感冒靈顆粒的指紋圖譜檢測方法

2023-12-02 20:10:21 4

一種感冒靈顆粒的指紋圖譜檢測方法
【專利摘要】本發明屬於中藥製劑檢測領域,具體涉及一種感冒靈顆粒的指紋圖譜檢測方法。本發明所述方法利用高效液相色譜法通過對感冒靈顆粒中包含蒙花苷在內的中藥成分的檢測,能夠全面反映感冒靈顆粒的質量信息,有效控制感冒靈顆粒的內在質量;並且所建立的方法穩定性、精密度、重現性較好;採用國家藥典委員會規定的中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統軟體操作快捷、結果客觀準確。
【專利說明】一種感冒靈顆粒的指紋圖譜檢測方法

【技術領域】
[0001]本發明屬於中藥製劑檢測領域,具體涉及一種感冒靈顆粒的指紋圖譜檢測方法。

【背景技術】
[0002]中藥成分複雜,藥效部位常常不是單一成分,以某種單一成分作為質量控制指標已越來越不適應中藥質量控制的要求,因此,中藥指紋圖譜技術應運而生。
[0003]中藥指紋圖譜技術源於指紋鑑定學,利用現代信息技術和質量分析手段較全面的反映了中藥所含化學成分的種類和數量。對於中藥材,指紋圖譜可以用來鑑別真偽、評判優劣;對於中成藥,指紋圖譜可以鑑別產品真偽,評判製備工藝的合理性,有效地控制產品質量。現階段中藥的有效成分大多數尚不明確,中藥指紋圖譜的整體性和模糊性正好適應這一特點,較單一成分的質量控制方法更具有科學性和全面性。目前國際上已認可將中藥指紋圖譜作為中藥質量的控制模式。高效液相色譜法具有分離效能高、分析速度快等優點,已成為當今指紋圖譜的主要分析手段。
[0004]感冒靈顆粒收載於中華人民共和國藥品標準中藥成方製劑第八冊,由三叉苦、金盞銀盤、野菊花、崗梅、咖啡因、對乙醯氨基酚、馬來酸氯苯那敏、薄荷素油共八味原料藥組成,具有解熱鎮痛功效,用於感冒引起的頭痛、發熱、鼻塞流涕、咽痛等。
[0005]感冒靈顆粒在中藥成方製劑第八冊標準中公開了用薄層色譜法鑑別馬來酸氯苯那敏、對乙醯氨基酚,用永停法測定對乙醯氨基酚的含量的方案。但是存在含量測定方法的終點不易觀察、操作繁瑣複雜、準確性欠佳的問題。
[0006]吳廣等人在《中國藥品標準》(2005,6(3):32_35)報導了感冒靈顆粒薄層鑑別和含量測定的方法,即在原標準的基礎上增訂了咖啡因、野菊花的薄層鑑別,修訂了對乙醯氨基酚的含量測定;在後續的研究中,莊幼齡在《海峽藥學》(2009,21(12):90-91)中公開了用HPLC法同時測定感冒靈顆粒中對乙醯氨基酚和咖啡因含量的方法;韓正洲等在《中國藥學雜誌》(2010,45(3) =228-230)中報導了用HPLC測定對乙醯氨基酚、咖啡因、馬來酸氯苯那敏的含量的方法;陳在敏在《中國研究與信息》(2005,17(4):50-51)公開了 HPLC法測定蒙花苷的含量的方法;陳懷冰在《海峽藥學》(2009,21 (I):53-54)報導了 HPLC法測定綠原酸的含量。
[0007]上述對感冒靈顆粒的質量控制方法中,往往是選取感冒靈顆粒中三個化學成分或一兩個中藥材中的已知成分進行含量測定,用其含量的多少判定質量好壞。但由於中藥材質量受產地、氣候、季節等多方面影響,導致所含成分的種類及含量往往不穩定,中藥部分只檢測其中單一成分的含量具有一定片面性。因此,以上方法均不能系統、全面的反映感冒靈顆粒的內在質量。
[0008]為保障患者用藥安全有效,發明一種控制感冒靈顆粒整體質量的檢測方法迫在眉睫。


【發明內容】

[0009]為此,本發明所要解決的技術問題在於提供一種可全面反映感冒靈顆粒的內在質量及用藥安全的指紋圖譜檢測方法。
[0010]本發明提供了一種感冒靈顆粒的指紋圖譜檢測方法,包括如下步驟:
[0011]精密稱定蒙花苷,加甲醇溶解稀釋,製成每I體積份含0.00001重量份的蒙花苷對照品溶液;
[0012]取感冒靈顆粒粉末2.0-6.0重量份,加甲醇20-30體積份,進行超聲處理,放冷後稱定並以甲醇補足重量,濾過後取濾液5-15體積份,蒸乾,殘渣用50%甲醇溶解,並定容至5體積份,微孔濾膜過濾製成供試品溶液;
[0013]照高效液相色譜法,以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填料,以乙腈為流動相A、以0.1%甲酸溶液為流動相B,控制流速為0.8-1.2ml/min,柱溫30°C,檢測波長為310nm ;按照如下程序進行梯度洗脫:從0-15min,流動相A:流動相B的體積比由8%:92% — 10%:90% ;從 15-30min,流動相 A:流動相 B 體積比由 10%:90%^ 15%:85% ;從 30_70min,流動相A:流動相B體積比由15%:85%- 30%:70% ;從70_71min,流動相A:流動相B體積比由30%:70% — 8%:92% ;從71-75min,流動相A:流動相B體積比8%:92% ;理論板數按蒙花苷峰計算,應不低於3000 ;
[0014]吸取供試品溶液與對照品溶液10 μ 1-20 μ 1,注入液相色譜儀,測定;
[0015]所述重量份與所述體積份的關係為g/mL的關係。
[0016]優選的,所述供試品溶液製備的步驟具體為:取感冒靈顆粒粉末4.0重量份,加甲醇25體積份,進行超聲處理,放冷後稱定並以甲醇補足重量,濾過後取濾液10體積份,蒸乾,殘渣用50%甲醇溶解,並定容至5體積份,微孔濾膜過濾製成供試品溶液。
[0017]優選的,所述供試品溶液製備的步驟具體為:取感冒靈顆粒粉末3.0重量份,加甲醇28體積份,進行超聲處理,放冷後稱定並以甲醇補足重量,濾過後取濾液8體積份,蒸乾,殘渣用50%甲醇溶解,並定容至5體積份,微孔濾膜過濾製成供試品溶液。
[0018]優選的,所述供試品溶液製備的步驟具體為:取感冒靈顆粒粉末5.0重量份,加甲醇22體積份,進行超聲處理,放冷後稱定並以甲醇補足重量,濾過後取濾液12體積份,蒸乾,殘渣用50%甲醇溶解,並定容至5體積份,微孔濾膜過濾製成供試品溶液。
[0019]優選的,所述供試品溶液製備的步驟中,所述超聲處理步驟的功率200W,頻率為59KHz,超聲處理 20-40min。
[0020]優選的,所述高效液相色譜法檢測步驟中,所述色譜柱為Kromasil C18柱。
[0021]本發明所述感冒靈顆粒的相關信息記載於中華人民共和國藥品標準中藥成方製劑第八冊,原料藥組成為:三叉苦442-540重量份、金盞銀盤295-349重量份、野菊花221-270重量份、崗梅720-750重量份、咖啡因0.36-0.44重量份、對乙醯氨基酚18-22重量份、馬來酸氯苯那敏0.36-0.44重量份、薄荷素油0.18-0.22體積份。
[0022]相關方案可詳見中國專利CN102147360A。
[0023]本發明還公開了由上述方法構建得到的感冒靈顆粒的指紋圖譜,得到的感冒靈顆粒的標準指紋圖譜詳見圖4所示,所得的感冒靈顆粒的標準指紋圖譜包括14個共有峰,各峰號的相對保留時間(以14號峰蒙花苷為基準)分別為:1號峰0.070、2號峰0.085、3號峰0.114,4 號峰 0.131,5 號峰 0.150,6 號峰 0.257,7 號峰 0.302,8 號峰 0.455,9 號峰 0.674、
10號峰 0.731、11 號峰 0.754、12 號峰 0.813、13 號峰 0.990、14 號峰 1.000。
[0024]本發明還公開了上述方法用於感冒靈顆粒檢測中的用途。
[0025]本發明所述的感冒靈顆粒的指紋圖譜檢測方法,通過對包含蒙花苷在內的中藥成分的檢測分析,能夠全面反映感冒靈顆粒的質量信息,有效控制感冒靈顆粒的內在質量;並且所建立的方法穩定性、精密度、重現性較好;採用國家藥典委員會規定的中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統軟體操作快捷、結果客觀準確。
[0026]實驗例
[0027]實驗例一條件優化
[0028]I儀器與試藥:
[0029]儀器:Waters e 2695高效液相色譜儀,DAD檢測器,Empower色譜工作站,AG245型電子天平(Mettler Toledo),SK5200H超聲波清洗機。
[0030]試藥:乙腈為色譜純,水為超純水,甲醇和甲酸為分析純,蒙花苷對照品(由中國藥品生物製品檢定所提供),感冒靈顆粒(由華潤三九醫藥股份有限公司提供)。
[0031]2色譜條件優化
[0032]2.1色譜柱的選擇
[0033]在同一色譜條件下,選擇Kromasil C18 (250mmX 4.6mm, 5um)、Hypersil BDSC18 (250mmX4.6mm, 5um) >Sapphire C18 (250mmX4.6mm, 5um)三種色譜柱進行比較,獲得的色譜圖結果見圖1所示。
[0034]Hypersil柱峰之間未達到基線分離,Sapphire柱各峰對稱性較差,而Kromasil分離效果較好、檢出峰多、保留時間適宜,故選擇Kromasil C18 (250mmX4.6mm, 5um)為感冒靈顆粒指紋圖譜分析用色譜柱。
[0035]2.2檢測波長的選擇
[0036]對不同波長條件下感冒靈顆粒指紋圖譜進行了比較,選擇了 254nm、280nm、300nm、310nm、320nm五個波長進行比較,獲得的色譜圖結果見圖2所示。
[0037]結果顯示,選擇310nm時吸收峰較多,峰形較好,各峰分離度好,基線平穩,且在此波長下對乙醯氨基酚、咖啡因、馬來酸氯苯那敏均無吸收峰,充分顯示感冒靈顆粒中藥部分的指紋特徵,故選擇310nm作為檢測波長。
[0038]2.3流速的選擇
[0039]考察了流速0.8、1.0、1.2ml/min對分離度的影響,結果表明三種流速均可行。
[0040]2.4流動性梯度選擇
[0041]米用Kromasil C18 (250mmX 4.6mm, 5um)色譜柱;流速1.0ml/min ;檢測波長310nm ;柱溫:30°C ;進樣量20 μ I ;以乙腈為A相、0.1 %甲酸溶液為B相,採用以下三種梯度洗脫:
[0042]a)、從 0_15min,A:Β(ν/ν)由 8%:92%—10%:90% ;從 15_30min, A:Β(ν/ν)由10%:90%— 15%:85% ;從 30-70min,A:B(v/v)由 15%:85%— 30%:70% ;從 70_71min,A:B(v/v)由 30%:70% — 8%:92% ;從 71_75min,A:B(v/v)為 8%:92% ;
[0043]b)、從 0-15min,A:B(v/v)由 5%:95%^ 10%:90% ;從 15_30min,A:B(v/v)由10%:90%^ 20%:80% ;從 30-70min,A:B(v/v)由 20%:80% — 30%:70% ;從 70_71min,A:B(v/v)由 30%:70%— 5%:95% ;從 71_75min,A:B(v/v)為 5%:95% ;
[0044]c)、從 0-20min,A:B(v/v)由 8%:92%^ 10%:90% ;從 20_35min,A:B(v/v)由10%:90%^ 20%:80% ;從 35-65min,A:B(v/v)由 20%:80% — 30%:70% ;W65_66min,A:B (v/v)由 30%:70%^ 8%:92% ;從 66_70min,A:B (v/v)為 8%:92%。
[0045]各梯度洗脫程序下得到的對應的色譜圖結果見圖3所示。
[0046]從圖中可見,採用梯度方式a)得到的色譜圖分離度較好,基線平穩,保留時間適宜,故選擇梯度a)作為感冒靈顆粒指紋圖譜分析的色譜條件。
[0047]3感冒靈顆粒樣品製備的優化
[0048]3.1供試品溶液製備方法的選擇
[0049]採用現有技術中的四種製備方法獲得供試品溶液,具體如下:
[0050]a、取感冒靈顆粒粉末2.0g,精密稱定,置25ml量瓶中,加50 %甲醇20ml,超聲處理30min,取出,放冷,加50%甲醇至刻度,搖勻,濾過,濾液過0.45 μ m微孔濾膜,即得;
[0051]b、取感冒靈顆粒粉末4.0g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加甲醇25ml,稱重,超聲處理30min,取出,放冷,用甲醇補重,濾過,精密移取上清液5ml置1ml量瓶中,加水定容,搖勻,過0.45 μ m微孔濾膜,即得;
[0052]C、取感冒靈顆粒粉末4.0g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加甲醇25ml,稱重,超聲處理30min,取出,放冷,用甲醇補重,濾過,精密移取濾液1ml至蒸發皿中,水浴揮幹,殘渣用50%甲醇溶解置5ml量瓶中並定溶至刻度,搖勻,過0.45 μ m微孔濾膜,即得;
[0053]d、取感冒靈顆粒粉末4.0g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加甲醇25ml,稱重,超聲處理30min,取出,放冷,用甲醇補重,濾過,濾液過0.45 μ m微孔濾膜,即得。
[0054]分別對上述a_d四種製備方法所得的感冒靈顆粒色圖譜按照上述優化後的條件進行檢測。結果顯示,其指紋圖譜的整體相同。但採用方法a時,供試品溶液較難過濾;採用方法b、d時,供試品峰面積較小,需要較大的進樣量才能達到預期的峰面積;另外方法d中,甲醇作為供試品溶劑,各色譜峰峰形較差。綜合考慮,最終選擇方法c作為感冒靈顆粒供試品溶液的製備方法。
[0055]3.2超聲處理時間的選擇
[0056]試驗比較了在供試品溶液製備中,超聲處理的時間分別為10min、20min、30min和40min的感冒靈顆粒指紋圖譜。結果發現,隨著超聲時間的延長,各色譜峰峰面積有所增加,但超聲30min與40min的無差異,較佳的超聲處理時間為30min。
[0057]實驗例二:感冒靈指紋圖譜方法驗證
[0058]I指紋圖譜檢測
[0059]按照上述實驗中優化後的檢測條件進行感冒靈顆粒的指紋圖譜檢測,具體包括:
[0060]精密稱定蒙花苷,加甲醇溶解稀釋,製成每I體積份含0.00001重量份的蒙花苷對照品溶液;
[0061]取感冒靈顆粒粉末4.0g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加甲醇25ml,稱重,超聲處理(200W、59KHz)30min,取出,放冷,用甲醇補重,濾過,精密移取濾液1ml至蒸發皿中,水浴揮幹,殘渣用50%甲醇溶解置5ml量瓶中並定溶至刻度,搖勻,過0.45 μ m微孔濾膜,即得供試品溶液;
[0062]照高效液相色譜法,以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填料,以乙腈為流動相A、以0.1%甲酸溶液為流動相B,控制流速為0.8-1.2ml/min,柱溫30°C,檢測波長為310nm ;按照如下程序進行梯度洗脫:從0-15min,流動相A:流動相B的體積比由8%:92% — 10%:90% ;從 15-30min,流動相 A:流動相 B 體積比由 10%:90%^ 15%:85% ;從 30_70min,流動相A:流動相B體積比由15%:85% — 30%:70% ;從70-7Imin,流動相A:流動相B體積比由30%:70% — 8%:92% ;從71-75min,流動相A:流動相B體積比8%:92% ;理論板數按蒙花苷峰計算,應不低於3000 ;
[0063]吸取供試品溶液與對照品溶液10 μ 1-20 μ 1,注入液相色譜儀,測定。
[0064]檢測得到的感冒靈顆粒的標準指紋圖譜詳見圖4所示,所得的感冒靈顆粒的標準指紋圖譜包括14個共有峰,各峰號的相對保留時間分別為:(1)0.070、(2)0.085、
(3)0.114、(4)0.131、(5)0.150、(6)0.257、(7)0.302、(8)0.455、(9)0.674、(10)0.731、
(11)0.754、(12)0.813、(13)0.990、(14) 1.000。
[0065]2精密度試驗
[0066]取同一份感冒靈顆粒供試品,按照上述實驗中優化後的檢測條件進行指紋圖譜檢測,並連續進樣6次。取同一份感冒靈顆粒供試品溶液,連續進樣6次,以蒙花苷為參照峰,結果各主要色譜峰的相對保留時間RSD均小於0.5%,檢測結果見表1所示。
[0067]以第一次分析所得指紋圖譜為對照圖譜,其他5次分析所得指紋圖譜與對照圖譜相比,相似度計算結果為:1.000、1.000、1.000、1.000、1.000,說明儀器精密度良好。
[0068]表1感冒靈顆粒精密度試驗相對保留時間

【權利要求】
1.一種感冒靈顆粒的指紋圖譜檢測方法,其特徵在於,包括如下步驟: 精密稱定蒙花苷,加甲醇溶解稀釋,製成每I體積份含0.0OOOl重量份的蒙花苷對照品溶液; 取感冒靈顆粒粉末2.0-6.0重量份,加甲醇20-30體積份,進行超聲處理,放冷後稱定並以甲醇補足重量,濾過後取濾液5-15體積份,蒸乾,殘渣用50%甲醇溶解,並定容至5體積份,微孔濾膜過濾製成供試品溶液; 照高效液相色譜法,以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填料,以乙腈為流動相A、以0.1%甲酸溶液為流動相B,控制流速為0.8-1.2ml/min,柱溫30°C,檢測波長為310nm ;按照如下程序進行梯度洗脫:從0-15min,流動相A:流動相B的體積比由8%:92% — 10%:90% ;從15_30min,流動相A:流動相B體積比由10%:90%^ 15%:85% ;從30_70min,流動相A:流動相B體積比由15%:85% — 30%:70% ;從70_7Imin,流動相A:流動相B體積比由30%:70%- 8%:92% ;從71-75min,流動相A:流動相B體積比8%:92% ;理論板數按蒙花苷峰計算,應不低於3000 ; 吸取供試品溶液與對照品溶液10 μ 1-20 μ 1,注入液相色譜儀,測定; 所述重量份與所述體積份的關係為g/mL的關係。
2.根據權利要求1所述的感冒靈顆粒的指紋圖譜檢測方法,其特徵在於,所述供試品溶液製備的步驟具體為: 取感冒靈顆粒粉末4.0重量份,加甲醇25體積份,進行超聲處理,放冷後稱定並以甲醇補足重量,濾過後取濾液10體積份,蒸乾,殘渣用50%甲醇溶解,並定容至5體積份,微孔濾膜過濾製成供試品溶液。
3.根據權利要求1所述的感冒靈顆粒的指紋圖譜檢測方法,其特徵在於,所述供試品溶液製備的步驟具體為: 取感冒靈顆粒粉末3.0重量份,加甲醇28體積份,進行超聲處理,放冷後稱定並以甲醇補足重量,濾過後取濾液8體積份,蒸乾,殘渣用50%甲醇溶解,並定容至5體積份,微孔濾膜過濾製成供試品溶液。
4.根據權利要求1所述的感冒靈顆粒的指紋圖譜檢測方法,其特徵在於,所述供試品溶液製備的步驟具體為: 取感冒靈顆粒粉末5.0重量份,加甲醇22體積份,進行超聲處理,放冷後稱定並以甲醇補足重量,濾過後取濾液12體積份,蒸乾,殘渣用50%甲醇溶解,並定容至5體積份,微孔濾膜過濾製成供試品溶液。
5.根據權利要求1-4任一所述的感冒靈顆粒的指紋圖譜檢測方法,其特徵在於,所述供試品溶液製備的步驟中,所述超聲處理步驟的功率2 O OW,頻率為5 9KHz,超聲處理20_40mino
6.根據權利要求1-5任一所述的感冒靈顆粒的指紋圖譜檢測方法,其特徵在於,所述高效液相色譜法檢測步驟中,所述色譜柱為Kromasil C18柱。
7.根據權利要求1-6任一所述的感冒靈顆粒的指紋圖譜檢測方法,其特徵在於,所述感冒靈顆粒的原料藥組成為: 三叉苦442-540重量份、金盞銀盤295-349重量份、野菊花221-270重量份、崗梅720-750重量份、咖啡因0.36-0.44重量份、對乙醯氨基酚18-22重量份、馬來酸氯苯那敏0.36-0.44重量份、薄荷素油0.18-0.22體積份。
8.由權利要求1-7任一所述方法構建得到的感冒靈顆粒的指紋圖譜,其特徵在於,所述感冒靈顆粒的標準指紋圖譜包括14個共有峰,各峰號的相對保留時間分別為:1號峰0.070,2 號峰 0.085,3 號峰 0.114、4 號峰 0.131,5 號峰 0.150,6 號峰 0.257,7 號峰 0.302、8號峰 0.455,9 號峰 0.674、10 號峰 0.731、11 號峰 0.754、12 號峰 0.813、13 號峰 0.990、14號峰1.000。
9.權利要求1-7任一所述方法用於感冒靈顆粒檢測領域中的用途。
【文檔編號】G01N30/02GK104181248SQ201410431650
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年8月28日 優先權日:2014年8月28日
【發明者】李瓊婭, 林麗娜, 張躍飛, 馬鵬崗 申請人:華潤三九醫藥股份有限公司

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專利名稱:釘的製作方法技術領域:本實用新型涉及一種釘,尤其涉及一種可提供方便拔除的鐵(鋼)釘。背景技術:考慮到廢木材回收後再加工利用作業的方便性與安全性,根據環保規定,廢木材的回收是必須將釘於廢木材上的鐵(鋼)釘拔除。如圖1、圖2所示,目前用以釘入木材的鐵(鋼)釘10主要是在一釘體11的一端形成一尖

直流氧噴裝置的製作方法

專利名稱:直流氧噴裝置的製作方法技術領域:本實用新型涉及ー種醫療器械,具體地說是ー種直流氧噴裝置。背景技術:臨床上的放療過程極易造成患者的局部皮膚損傷和炎症,被稱為「放射性皮炎」。目前對於放射性皮炎的主要治療措施是塗抹藥膏,而放射性皮炎患者多伴有局部疼痛,對於止痛,多是通過ロ服或靜脈注射進行止痛治療

新型熱網閥門操作手輪的製作方法

專利名稱:新型熱網閥門操作手輪的製作方法技術領域:新型熱網閥門操作手輪技術領域:本實用新型涉及一種新型熱網閥門操作手輪,屬於機械領域。背景技術::閥門作為流體控制裝置應用廣泛,手輪傳動的閥門使用比例佔90%以上。國家標準中提及手輪所起作用為傳動功能,不作為閥門的運輸、起吊裝置,不承受軸向力。現有閥門

用來自動讀取管狀容器所載識別碼的裝置的製作方法

專利名稱:用來自動讀取管狀容器所載識別碼的裝置的製作方法背景技術:1-本發明所屬領域本發明涉及一種用來自動讀取管狀容器所載識別碼的裝置,其中的管狀容器被放在循環於配送鏈上的文檔匣或託架裝置中。本發明特別適用於,然而並非僅僅專用於,對引入自動分析系統的血液樣本試管之類的自動識別。本發明還涉及專為實現讀