一種新生牛血清的生產工藝的製作方法
2023-11-01 04:14:32
一種新生牛血清的生產工藝的製作方法
【專利摘要】本發明提供了一種新生牛血清的生產工藝，包括以下步驟：選取原料血清，入庫保存；將原料血清移入融化間進行融化，然後保存；採用純化水對原料血清包裝袋進行清洗後，再採用注射用水清洗，最後在酒精中浸泡消毒；將消毒後的原料血清包裝袋進行無菌剪口，粗濾；將粗濾後的血清進行澄清過濾，速凍，保存；將速凍後的血清注入滅菌後的混合罐中，在混合罐中進行攪拌；將攪拌後的血清注入筒式過濾器中進行除菌過濾，除菌過濾後的血清通過過渡罐進入自動灌裝線進行分裝；將分裝後的血清進行抽樣檢驗，對檢查合格後的產品進行包裝。該工藝能夠徹底實現杜絕支原體及病菌的汙染，完全滿足對牛血清的使用要求。
【專利說明】一種新生牛血清的生產工藝
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種新生牛血清的生產工藝，尤其涉及一種無菌生產工藝。
【背景技術】
[0002] 牛血清是細胞培養中用量最大的天然培養基，含有豐富的細胞生長必須的營養成 份，常用於動物細胞的體外培養，具有極為重要的功能。它提供對維持細胞指數生長的激 素，基礎培養基中沒有或量很少的營養物，以及主要的低分子營養物。它還能夠提供結合蛋 白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結合或調變它們所結合的物質活力；有些情 況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合，起到解毒作用。牛血清還是細胞貼壁、鋪展在 塑料培養基質上所需因子來源。另外牛血清還起酸鹼度緩衝液作用以及提供蛋白酶抑制 齊IJ，使在細胞傳代時使剩餘胰蛋白酶失活，保護細胞不受傷害。
[0003] 胎牛血清應取自剖腹產的胎牛；新牛血清取自出生24小時之內的新生牛；小牛血 清取自出生10 - 30天的小牛。顯然，胎牛血清是品質最高的，因為胎牛還未接觸外界，血 清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分最少。
[0004] 根據2005版《中華人民共和國藥典》第三部附錄的要求，胎牛血清的各項質量 指標符合以下要求：1、性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。2、蛋白質含量 3. 5%?5.0% (w/v)3、血紅蛋白含量<0. 02% (w/v)4、無菌檢驗--陰性5、支原體檢 驗--陰性；6、細菌內毒素彡5(EU/ml) ;7、牛腹瀉病毒--陰性8、大腸桿菌噬菌體--陰 性9、支持細胞增殖--（Sp2/0-Agl4);生長曲線（接種濃度）最大增殖濃度彡2. 5X106 個/ml ;細胞倍增時間彡15h ;克隆率彡85%。
[0005] 在實際生產新生牛血清的過程中，一般工藝很難做到無病菌支原體汙染，因為牛 血清產品在生產過程中環節眾多、繁雜，存在有多個汙染漏洞，比如：為了保障產品血清的 均一性，以保障細胞培養過程的穩定性和疫苗病毒的產量，必須將多批次的牛血清進行混 合。目前的血清混合工藝多是在潔淨環境開放條件下完成的，皮膚、唾液氣溶膠、呼吸氣溶 膠、汗漬等人體脫落物以及原料血清外包裝攜帶的包括支原體在內的微生物都有可能在混 合過程中進入牛血清。為了保障血清無菌狀態，可以採取多級過濾程序，移除掉混合過程中 汙染的細菌。但是支原體具有形態學可變特性，高壓條件下支原體可以通過變形而通過微 孔濾膜，因此多級過濾程序並不能防止支原體的汙染。
【發明內容】
[0006] 本發明解決了【背景技術】中的不足，提供了一種新生牛血清的生產工藝，該工藝能 夠徹底實現杜絕支原體及病菌的汙染，完全滿足對牛血清的使用要求。
[0007] 實現本發明上述目的所採用的技術方案為：
[0008] -種新生牛血清的生產工藝，包括以下步驟：（1)、選取淺黃色、澄清且粘稠的原料 血清，其pH值為6. 8?8. 0,蛋白質含量為3. 5%?5. 0%，細菌內毒素低於10EU/mL，將原 料血清在低於-15°C的條件下進行入庫保存；
[0009] (2)、將原料血清移入融化間進行融化，融化間溫度為18?26°C，待原料血清融化 後，採用純淨水對原料血清包裝袋進行清洗，然後在_5°C?_2°C的條件下保存；
[0010] (3)、採用純化水對原料血清包裝袋進行清洗後，再採用注射用水清洗，最後在酒 精中浸泡消毒；
[0011] (4)、將消毒後的原料血清包裝袋進行無菌剪口，用100目不鏽鋼網進行粗濾，粗 濾後的血清在-5 °C?-2 °C的條件下保存；
[0012] (5)、將粗濾後的血清用0.45 μ m的濾膜進行澄清過濾，澄清後的血清在低 於-15°C的條件下速凍，速凍後的血清在-2°C?2°C的條件下保存；
[0013] ￠)、將速凍後的血清注入滅菌後的混合罐中，在混合罐中進行攪拌，攪拌速度為 15?20轉/min，攬祥時間為60?70min ;
[0014] (7)、將攪拌後的血清注入筒式過濾器中進行除菌過濾，濾芯孔徑為0. 1 μ m，在筒 式過濾器中並聯裝載有3?7根濾芯，除菌過濾後的血清通過過渡罐進入自動灌裝線進行 分裝；
[0015] (8)、將分裝後的血清進行抽樣檢驗，檢驗項目包括蛋白質含量測定、血紅蛋白含 量測定、大腸桿菌噬菌體測定、滲透壓摩爾濃度測定、無菌檢查、支原體檢查、細菌內毒素測 定、病毒檢查以及支持細胞增殖檢查，所述的病毒檢查方法包括細胞培養法和免疫螢光抗 體檢查法；
[0016] (9)、對檢查合格後的產品進行包裝。
[0017] 步驟（3)中將原料血清包裝袋在質量濃度為75%的酒精中浸泡30分鐘。
[0018] 步驟（5)中在澄清過濾前，採用生理鹽水進行系統平衡，平衡後的流出物取樣進 行pH值和細菌內毒素檢測，pH值為6. 8?8. 0,細菌內毒素低於10EU/mL。
[0019] 本發明提供的新生牛血清的生產工藝與現有技術相比有以下優點：本發明在步驟 (3)中，採用75%濃度的酒精對原料血清包裝袋進行浸泡消毒，能夠有效地殺死包裝袋錶 面的細菌。本發明在步驟￠)中採用大罐混勻，能夠增大血清生產率。現有技術採用單根 濾芯過濾，本發明在步驟（7)中採用3-7根濾芯並聯過濾，使生產率增大，同時減少濾芯更 換頻率，從而降低了汙染風險。
【具體實施方式】
[0020] 下面結合具體實施例對本發明做詳細具體的說明，但是本發明的保護範圍並不局 限於以下實施例。
[0021] 本發明提供的新生牛血清的生產工藝，包括以下步驟：（1)、選取淺黃色、澄清且 粘稠的原料血清，原料血清採集自出生14小時內未進食的新生牛中，上述原料血清pH值 為6. 8?8. 0,蛋白質含量為3. 5%?5. 0%，細菌內毒素低於10EU/mL，將原料血清在低 於-15°C的條件下進行入庫保存。
[0022] (2)、將原料血清移入融化間進行融化，融化間的不鏽鋼多層架先擦洗乾淨，再用 75%酒精清潔消毒，融化間溫度為18?26°C，待融化狀態為98%左右，實時巡查剔除破漏 血袋。採用純淨水對原料血清包裝袋進行清洗，然後在_5°C?_2°C的條件下保存。
[0023] (3)、採用純化水對原料血清包裝袋進行清洗後，再採用注射用水清洗，最後在質 量濃度為75%的酒精中浸泡30分鐘消毒。
【權利要求】
1. 一種新生牛血清的生產工藝，其特徵在於包括以下步驟：（1)、選取淺黃色、澄清且 粘稠的原料血清，其pH值為6.8?8.0,蛋白質含量為3. 5%?5.0%，細菌內毒素低於 10EU/mL，將原料血清在低於-15°C的條件下進行入庫保存； (2) 、將原料血清移入融化間進行融化，融化間溫度為18?26°C，待原料血清融化後， 採用純淨水對原料血清包裝袋進行清洗，然後在_5°C?_2°C的條件下保存； (3) 、採用純化水對原料血清包裝袋進行清洗後，再採用注射用水清洗，最後在酒精中 浸泡消毒； (4) 、將消毒後的原料血清包裝袋進行無菌剪口，用100目不鏽鋼網進行粗濾，粗濾後 的血清在-5 °C?-2 °C的條件下保存； (5) 、將粗濾後的血清用0. 45 μ m的濾膜進行澄清過濾，澄清後的血清在低於-15°C的 條件下速凍，速凍後的血清在_2°C?2°C的條件下保存； (6) 、將速凍後的血清注入滅菌後的混合罐中，在混合罐中進行攪拌，攪拌速度為15? 20轉/min，攪拌時間為60?70min ; (7) 、將攪拌後的血清注入筒式過濾器中進行除菌過濾，濾芯孔徑為0. 1 μ m，在筒式過 濾器中並聯裝載有3?7根濾芯，除菌過濾後的血清通過過渡罐進入自動灌裝線進行分 裝； (8) 、將分裝後的血清進行抽樣檢驗，檢驗項目包括蛋白質含量測定、血紅蛋白含量測 定、大腸桿菌噬菌體測定、滲透壓摩爾濃度測定、無菌檢查、支原體檢查、細菌內毒素測定、 病毒檢查以及支持細胞增殖檢查，所述的病毒檢查方法包括細胞培養法和免疫螢光抗體檢 查法； (9) 、對檢查合格後的產品進行包裝。
2. 根據權利要求1所述的新生牛血清的生產工藝，其特徵在於：步驟（3)中將原料血 清包裝袋在質量濃度為75%的酒精中浸泡30分鐘。
3. 根據權利要求1所述的新生牛血清的生產工藝，其特徵在於：步驟（5)中在澄清過 濾前，採用生理鹽水進行系統平衡，平衡後的流出物取樣進行pH值和細菌內毒素檢測，pH 值為6. 8?8. 0,細菌內毒素低於10EU/mL。
【文檔編號】C12N5/07GK104099288SQ201410341070
【公開日】2014年10月15日 申請日期:2014年7月17日 優先權日:2014年7月17日
【發明者】張國榮 申請人:武漢三利生物技術有限公司