低咖啡鹼茶葉提取物的製備方法
2023-12-05 20:49:46 2
專利名稱：低咖啡鹼茶葉提取物的製備方法
低咖啡鹼茶葉提取物的製備方法
技術領域：
本發明涉及一種山茶科植物提取物的製備方法。背景技術：
茶屬於山茶科，為常綠灌木或小喬木植物。現代科學研究證實，茶葉含有許多與人體健康密切相關的活性成份如茶多酚、咖啡鹼、脂多糖、茶氨酸等。具有抗衰老、抑制心血管疾病、抗癌、防輻射、抵抗病毒菌、美容護膚、醒腦提神、利尿解乏、降脂助消化、護齒明目等作用。咖啡鹼是一種中樞神經的興奮劑，在綠茶葉含量一般為幹茶重的4%左右，並且咖啡鹼能使胃酸增多，引起胃腸紊亂，導致消化道不適。目前對茶葉的提取主要是使用有機溶劑萃取，但是這樣容易造成有機溶劑殘留， 降低提取物的純度，影響提取物中活性成分的功效，並對人體安全造成隱患。
發明內容本發明旨在提供一種製備茶葉提取物的方法，該方法獲得的茶葉提取物能清除體內自由基，預防細胞癌變，並且其中所含的咖啡鹼的量能明顯降低。本發明所述的一種低咖啡鹼茶葉提取物的製備方法，由以下步驟組成將茶葉粉碎為茶粉並對其進行加溼預處理；將處理過的茶粉進行C02超臨界萃取；將經過超臨界萃取的茶粉進行水浴提取；將提取液抽濾後濃縮冷凍乾燥。其中，優選地步驟(1)所述的粉碎是使用本領域普通技術人員熟悉的方法和要求進行的，如可以粉碎至20目。而所述的加溼預處理是使其含水量為20% -80% (% w/w)。步驟O)中所述的萃取條件為溫度25°C -70°C;處理時間3-10小時；夾帶劑為水， 其含量為 15% -65% (% w/w)。步驟(3)中所述的水浴提取的提取溫度為40°C -100°C;料液比為1 5至1 30 ； 提取1-4次；每次30-60分鐘。本發明有效地提取了茶葉中的活性物質，降低活性物質中的咖啡鹼含量，將活性物質中的咖啡鹼含量控制在5% (質量百分含量)以內，並使其具有較高的抑制腫瘤細胞生長功效。通過實驗驗證發現此活性物質的副作用低，對腫瘤細胞生長具有良好的抑制效果， 且無耐藥性的產生。下面通過相關實驗來驗證本發明從茶葉中提取獲得的活性物質(下面簡稱為本發明)的功效。咖啡因及茶多酚得率檢測實驗使用本發明進行咖啡因含量及茶多酚得率檢測實驗。實驗結果顯示使用本發明中的條件對茶粉進行處理和提取比普通提取方法的咖
3啡因含量降低約80 %，茶多酚含量提高到大約40 %。
實驗條件咖啡因含量(％ w/w)茶多酚得率(％ w/w)普通條件1230本發明< 542二、抑制腫瘤細胞生長實驗使用本發明進行抑制腫瘤細胞生長實驗。實驗步驟1.稱取一定量的本發明，用DMEM培養基稀釋成10mg/ml後，用0. 22um的無菌濾器除去細菌等汙染物。然後用DMEM培養基稀釋終濃度為lmg/ml。2.細胞計數用含青黴素、鏈黴素和10%胎牛血清(FBQ的DMEM培養液進行細胞培養。將含有 10% FBS的DMEM細胞懸液接種於96孔組織培養板上，細胞密度為1 X 105cells/孔。培養物置於37°C、5% C02的組織培養箱中培養2天，收集細胞，用細胞計數器測定細胞數。3. MTT法檢測抑制效果(1)收集對數期細胞，調整細胞懸液濃度，每孔加入lOOul，鋪板使待測細胞調密度至1 X 105cells/孔(邊緣孔用無菌PBS填充)。(2)5% C02，37°C孵育，至細胞單層鋪滿孔底(96孔平底板)，加入濃度梯度的藥物，孵育4個小時後加藥.每孔lOOul，設5個復孔。(3)5% C02，37°C孵育48小時，倒置顯微鏡下觀察。(4)每孔加入 20ul MTT 溶液(5mg/ml，即 0. 5% MTT)，繼續培養 4h。(5)終止培養，小心吸去孔內培養液，每孔加入150ul 二甲基亞碸，置脫色搖床上低速振蕩lOmin，使結晶物充分溶解。在酶聯免疫檢測儀0D490nm處測量各孔的吸光值。(6)同時設置調零孔(培養基、MTT、二甲基亞碸)，對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質、培養液、MTT、二甲基亞碸)。4.計算抑制率相對抑制率=1-(給藥孔平均OD值/對照孔平均OD值)X 100 %5.實驗結果實驗結果如圖1顯示，隨著樣品濃度的增加，樣品抑制腫瘤細胞生長的效果也增加，即抑制效果呈濃度依賴性。
圖1所示的是樣品抑制腫瘤細胞生長效果圖。
具體實施方式實施例一1.將茶葉進行加溼預處理，使其含水量達到25% (% w/w)。
2.將處理過的茶葉進行C02超臨界萃取脫除咖啡鹼。萃取條件溫度30°C ；處理時間10小時；夾帶劑為水，其含量為25% (% w/w)。3.將經過超臨界萃取的茶葉進行水浴提取。提取溫度為60°C ；料液比為1 8; 提取2次；每次40分鐘。4.將提取液抽濾後濃縮冷凍乾燥。5.提取物咖啡因含量為2. 7% w/w，茶多酚得率為38% w/w。實施例二1.將茶葉進行加溼預處理，使其含水量達到30% (% w/w)。2.將處理過的茶葉進行C02超臨界萃取脫除咖啡鹼。萃取條件溫度45°C ；處理時間8小時；夾帶劑為水，其含量為35% (% w/w)。3.將經過超臨界萃取的茶葉進行水浴提取。提取溫度為55°C ；料液比為1:9; 提取2次；每次50分鐘。4.將提取液抽濾後濃縮冷凍乾燥。5.提取物咖啡因含量為2. 5% w/w，茶多酚得率為40% w/w。實施例三1.將茶葉進行加溼預處理，使其含水量達到60% (% w/w)。2.將處理過的茶葉進行C02超臨界萃取脫除咖啡鹼。萃取條件溫度70°C ；處理時間5小時；夾帶劑為水，其含量為55% (% w/w)。3.將經過超臨界萃取的茶葉進行水浴提取。提取溫度為90°C;料液比為1 27; 提取4次；每次50分鐘。4.將提取液抽濾後濃縮冷凍乾燥。5.提取物咖啡因含量為2. 9% w/w，茶多酚得率為36% w/w。
權利要求
1.低咖啡鹼茶葉提取物的製備方法，其特徵在於由以下步驟組成(1)將茶葉粉碎為茶粉並對其進行加溼預處理；(2)將處理過的茶粉進行C02超臨界萃取；(3)將經過超臨界萃取的茶粉進行水浴提取；(4)將提取液抽濾後濃縮冷凍乾燥。
2.如權利要求1所述的低咖啡鹼茶葉提取物的製備方法，其特徵在於步驟⑴所述的加溼預處理是使其含水量為20% -80%。
3.如權利要求1所述的低咖啡鹼茶葉提取物的製備方法，其特徵在於步驟(2)中所述的萃取的條件為溫度25°C -70°C ；處理時間3-10小時；夾帶劑為水，其含量為15% -65%。
4.如權利要求1所述的低咖啡鹼茶葉提取物的製備方法，其特徵在於步驟(3)中所述的水浴提取的提取溫度為40°C -90°C ；料液比為1 5至1 30 ；提取1_4次；每次30-60 分鐘。
全文摘要
本發明所述的一種低咖啡鹼茶葉提取物的製備方法涉及一種山茶科植物提取物的製備方法。該方法由以下步驟組成(1)將茶葉粉碎為茶粉並對其進行加溼預處理；(2)將處理過的茶粉進行CO2超臨界萃取；(3)將經過超臨界萃取的茶粉進行水浴提取；(4)將提取液抽濾後濃縮冷凍乾燥。本發明有效地提取了茶葉中的活性物質，降低活性物質中的咖啡鹼含量，將活性物質中的咖啡鹼含量控制在3％(質量百分含量)以內，並使其具有較高的抑制腫瘤細胞生長功效。通過實驗驗證發現此活性物質的副作用低，對腫瘤細胞生長具有良好的抑制效果，且無耐藥性的產生。
文檔編號A61P39/06GK102198189SQ20111008306
公開日2011年9月28日 申請日期2011年4月2日 優先權日2011年4月2日
發明者餘雄濤, 張智, 李向敏, 李崇, 李森柱, 潘鴻輝, 焦春偉, 蔡勉華, 謝意珍, 陳冠州 申請人:廣東粵微食用菌技術有限公司