通過照護點藥物動力學曲線分析進行治療藥物監測和投配的方法與組合物的製作方法

2023-07-10 09:29:41 2

通過照護點藥物動力學曲線分析進行治療藥物監測和投配的方法與組合物的製作方法
【專利摘要】本發明公開了用於採用照護點或服務點自採樣進行藥物動力學曲線分析並且允許基於所述藥物動力學曲線進行劑量調整的方法和試劑盒。
【專利說明】通過照護點藥物動力學曲線分析進行治療藥物監測和投配 的方法與組合物
[0001] 相關申請的交叉引用
[0002] 本PCT申請要求以下美國臨時申請的優先權：2011年5月30日提交的第61 / 491，268號、2011年8月3日提交的第61 / 514, 488號、2011年8月24日提交的第61 / 526, 950號、2011年9月11日提交的第61 / 533, 250號、2012年1月3日提交的第61 / 577, 008號、2012年3月3日提交的第61 / 606, 371號、2012年3月25日提交的第61 / 615, 312號以及2012年4月19日提交的第61 / 635, 730號，各美國臨時申請是以全文引 用的方式併入本文中。
[0003] 發明背景
[0004] 個性化醫療在其用於利用治療劑對個別患者進行定製治療時具有以下分量：優化 投與所述患者的藥物劑量的藥物動力學（PK)分量和使治療模式與所述患者相匹配的藥效 學（PD)分量。治療模式需要了解作用機制和抗性機制。預後性、預測性和/或診斷性生物 標記物的驚人增長證明，ro生物標記物的鑑別已成為大量研究工作的焦點。然而，經常忽 視PK分量。現在，對PK的不完全了解正阻礙著ro生物標記物測試發揮它的全部潛力。
[0005] 治療藥物監測（TDM)具有通過改善藥物遞送以及允許正確應用生物標記物測試 來改革治療劑的潛力。廣泛地相信可預測反應的生物標記物的鑑別將允許僅對會有回應的 那些人進行靶向治療並且分出不會回應治療的那些人。然而，不管疾病對藥物如何敏感，如 果患有疾病的個體沒有接收足夠的藥物，那麼所述個體就不會回應。這就是將會期待TDM 能補充並且推進當前關於生物標記物發現的努力的原因所在。
[0006] 然而，典型地，個性化投配已經成為了一種不顧成敗的方法。僅向醫師提供關於對 患者進行投配的總體指導，而大部分劑量調整留待對患者進行主觀觀測。醫師的案頭參考 書總結了在研究文獻中發現的通過實驗確定的合理藥物劑量範圍。這些範圍比較寬，並且 對所有患者都指定相同的劑量。探究劑量調整的科學研究和出版物並不適合於使劑量與個 別患者匹配。相反，它們基於在最壞情況下整個群體的特徵，或者在最好情況下僅患者的子 集的特徵的平均情況提供較寬劑量範圍。
[0007] 多次研究認識到，考慮到藥物反應的個體間差異，需要發現新的方法。過去幾十年 的研究已鑑別了影響藥療的臨床效果的許多因素。已經發現年齡、性別、種族、體重、肥胖、 伴隨發病率、飲食以及藥物-藥物相互作用都會影響藥物的藥物動力學和藥效學。兒科群 體、婦女、少數民族以及年長者與他們的男性白種人同伴相比往往需要不同的投配日程。
[0008] 因為大量可能互相作用的變量會影響個體對治療的反應，所以面臨著最小化副作 用並且最佳化藥物性能這一任務的醫師當前必須依靠試錯法來改善指定個體的處方劑量。 使用主觀和客觀方法來識別不利症狀並且實施治療過程中所必需的改變。普通的監測方法 是臨床觀察，它包括由觀察疾病的生理學體徵和症狀的醫師進行個別諮詢和密切的個人監 督。這種方法易於出錯、耗費時間、昂貴、非常主觀而且會過度增加醫生-患者接觸時間。此 夕卜，患者因暴露於高藥物濃度而承擔著不必要的毒性風險，或因藥物濃度不足而接收次最 佳或無效的治療濃度。
[0009] 因此，需要利用治療藥物監測對個體進行投配的經過改善的方法。
[0010] 發明概述
[0011] 在某些實施方案中，本發明提供了一種對經過藥物治療的個體進行治療藥物監測 的方法。所述方法包括使用在適於構建藥物動力學曲線的時間點獲自所述個體的至少兩份 樣品中的藥物濃度來構建所述藥物在所述個體中的藥物動力學曲線。所述樣品是在照護點 或使用點通過採樣或自採樣而收集在照護點裝置或使用點裝置上，各裝置能夠定量所述藥 物；或收集在適合於在由實驗室定量所述藥物之前存儲所述至少兩份樣品的基質上。所述 藥物動力學曲線包括適合於指導對所述個體投配所述藥物的藥物動力學參數。
[0012] 所述樣品是在照護點或服務點通過例如自採樣加以收集。可以將樣品應用到側 流裝置上以便定量所述藥物，並且將結果傳送到醫師或醫師代理人以供藥物動力學分析。 在其他實施方案中，所述樣品是在照護點或服務點通過例如自採樣收集在合適的存儲基質 上，例如濾紙，隨後將所述樣品遞送到實驗室以便定量和分析。
[0013] 在某些實施方案中，由照護點或使用點在不同的時間通過自採樣從個體收集的樣 品是由實驗室獲得。所述實驗室隨後測試所述樣品以定量所關注的藥物，並且基於結果構 建藥物動力學曲線。藥物動力學曲線的結果可以任選地隨增加所述個體的藥物劑量以便提 高效力或減少劑量以便降低毒性風險的建議一起提供。
[0014] 在另一個方面，它提供一種試劑盒，所述試劑盒用於使用藥物動力學曲線對經過 藥物治療的個體進行治療藥物監測。有利的是，所述試劑盒可以用來執行根據權利要求1 所述的方法。所述試劑盒包含多個能夠對所述至少兩份樣品中的藥物進行定量的照護點裝 置或使用點裝置，或適合於在由實驗室定量之前存儲所述樣品的基質。
[0015] 附圖簡述
[0016] 圖1是展示丸式靜脈內施用的PK曲線和經口施用藥物的PK曲線的圖。
[0017] 圖2是展示AUC隨3小時或24小時內施用的紫杉酚劑量變化的圖。
[0018] 圖3是展示AUC隨兩種不同的紫杉醇製劑的劑量變化的圖。
[0019] 圖4是展示AUC隨兩種不同的紫杉醇製劑的劑量變化的圖。
[0020] 圖5是展示AUC隨兩種不同的紫杉醇製劑的劑量變化的圖。
[0021] 圖6是展示在開始輸注兩種不同的紫杉醇製劑之後0到72小時平均紫杉醇濃度 隨時間變化的圖。
[0022] 圖7是呈現研究結果的一系列圖，這些圖展示Abraxane藥物動力學參數Vz (圖 7A)、AUCinf (圖 7B)、Cmax (圖 7C)、CL (圖 7D)以及 ?\ / 2 (圖 7E)在接收 Abraxane 的群體內 的變化性。
[0023] 圖8是呈現研究結果的一系列圖，這些圖展示FSH藥物動力學參數Cmax(圖8A)、 AUC (圖8B)、CL (圖8C)以及?\ / 2 (圖8D)在接收150IU FSH的群體內的變化性。
[0024] 圖9是呈現研究結果的一系列圖，這些圖展示FSH藥物動力學參數Cmax(圖9Α)、 AUC (圖9B)、CL (圖9C)以及?\ / 2 (圖9D)在接收300IU FSH的群體內的變化性。
[0025] 圖10展示假定丸式施用時單指數ΡΚ曲線的曲線圖。
[0026] 圖11展示以兩個指數為特徵的ΡΚ曲線。
[0027] 圖12展示原型紫杉醇側流測定。
[0028] 圖13展示使用共焦光度掃描儀得到的hCG定量側流的結果。
[0029] 圖14使用耦接照相機的圖像分析程序得到的FSH定量側流。
[0030] 圖15納米金定量FSH側流信號的穩定性。
[0031] 圖16LH(黃體化激素）的定量照護點側流測定。尿液LH測定（範圍=5-1，700IU / L);血清/血漿LH測定（範圍=1-1，700IU / L);血液LH測定（範圍=5-1，700IU / L)。
[0032] 圖17FSH(卵泡刺激激素）的定量照護點測定。尿液FSH測定（範圍=6-1，500IU / L);血清/血漿FSH測定（範圍=5-10, 000IU / L);血液FSH測定（範圍=5-10, 000IU / L)。
[0033] 圖18hCG(人絨毛膜促性腺激素）的定量照護點測定。尿液hCG測定（範 圍=5-10, 000IU / L);血清hCG測定（範圍=1-10, 000IU / L);血液hCG測定（範圍 =20-10, 000IU / L)。
[0034] 圖19是Abraxane和Taxol (藥物動力學群體）的估計紫杉醇血液藥物動力學變 量的總結。
[0035] 發明詳述
[0036] 本發明涉及多種方法，通過這些方法可以使用在投配後的不同時間點獲得的樣品 構建藥物在接收藥物的個體中的藥物動力學曲線。用於構建所述藥物動力學曲線的數據是 從在照護點或使用點收集的樣品獲得。有利的是，所述樣品可以通過自採樣來獲得。在某 些實施方案中，所述樣品可以遞送到照護點裝置以定量所述藥物，並且將如此獲得的結果 報告給醫師或他的代理人。可選地，使用適合於收集和存儲所述樣品直到被實驗室接收並 分析的基質或容器來收集所述樣品。適合於收集和存儲所述樣品的基質的實例包括但不限 於市售生物採樣濾紙系統，如 Whatman3MM、GF / CM30、GF / QA30、S&S903、GB002、GB003 * GB004。可利用若干種類用於血液樣本收集的揩吸材料，例如S&S903纖維素（得自於木材 或棉花）濾紙和Whatman玻璃纖維濾紙。將血斑放在所述濾紙的一個或多個指定區域中， 使其乾燥，並且然後隨測試申請表一起郵寄給實驗室。這種收集方法具有避免需要在醫生 辦公室或診所收集樣品的優勢。因而，患者可以在0到72小時期間便利地收集多份樣品， 從而相當節約成本和時間。這種方式的優勢在於提高效率和減少將分析結果傳輸到治療醫 師的延遲，醫師可以使用所述信息根據需要來調整治療，並且聯絡所述患者以傳達新的治 療方案。
[0037] 在本發明之前，藥物動力學指導性投配的潛在價值尚未得以利用，部分是因方收 集個別藥物動力學曲線所需的樣品不夠便利並且過於昂貴，因為樣品收集典型地需要多達 72小時的較長醫院停留時間。對於典型藥物PK研究而言，藥物動力學研究局限於第I階段 研究，其中關於幾個患者的PK / ro形成了在整個群體中使用藥物的基礎。為了補償，通常 在藥物開發的第III階段期間進行群體PK研究；然而，由於相同的限制，這些研究是根據稀 疏採樣程序進行。由於與稀疏採樣相關的不精確性，僅能獲得群體PK的近似值。在完整的 藥物動力學測試中，需要在48到72小時的時期內收集至少12個數據點以充分表徵每一個 特定患者的PK參數。此舉不可能對加入第III階段的每個患者進行（或甚至對第II階段 試驗也那樣）。針對C max，在施用藥物之後立即獲得用來評價藥物水平的血液樣品典型地不 成問題。然而，在隨後的時間點獲得血液樣品用來定義"清除率"和"穩態濃度"非常困難， 因為拐點是治療之後4到24小時。患者返回醫院進行更多血液操作往往是比較麻煩或繁 重的，並且就成本和服務而言，整夜護理患者將會是比較昂貴的。
[0038] 通過LC / MS將5-FU投配在穩態水平優化的第3階段多中心隨機化研究 (N=208)證明了藥物動力學指導的投配對於效力和毒性二者的益處（Gamelin，E，Delva，R， Jacob, J.等，''Individual fluorouracil dose adjustment based on pharmacokinetic follow-up compared with conventional dosage ：Results of a multicenter randomized trial of patients with metastatic colorectal cancer，'，J Clin Oncol. 13 ： 2099-2105,2008.)。一半患者是基於體表面積（BSA)來投配5-FU。另一半最初是基於BSA 進行投配，隨後基於測量患者血漿中的化學療法的實際濃度的血液測試來調整循環劑量。 主要終點是腫瘤反應；次要終點是治療耐受性。所述研究的結論為：1)劑量調整組的反應 速率相對於BSA組幾乎加倍（33. 6%相對於18. 3% )，具有統計顯著性；2)具有個性化5-FU 劑量管理的患者的兩年總體存活率提高了 48%，其中BSA分組中22個月相對於16個月的 中位數存活率有所提高。殘存率數據傾向於顯著性；3)發現具有個性化劑量調整的患者中 的III / IV級5-FU相關毒性顯著較低；4)發現58%的患者劑量不足（亞治療且較低的有 效藥物濃度）並且上調他們的劑量；以及5)發現17%劑量過高（增加了嚴重副作用的風 險）並且下調他們的劑量。然而，大部分靜脈內施用的藥物並非為了以24小時的長期輸注 來實現穩態。可選地，他們以單次短期輸注（30分鐘到3小時）的形式投配，從而不能維持 長期持續穩態血液藥物濃度。
[0039] 藥物PK的特徵在於藥物被吸收到身體的不同代謝區中--一般通過血液、組織， 然後是目標器官。它的特徵還在於藥物通過藥物的主動新陳代謝從身體中清除，或被肝 和/或腎清除。血藥濃度相對於時間的曲線描述了個體如何處理藥物。通常被接受的描 述藥物暴露的參數為曲線下面積（AUC)或有效藥物濃度的時間或毒性藥物濃度的時間。一 般接受各藥物存在單一通用PK曲線。然而，這是不正確的，因為調查PK文獻將顯示任何 特定藥物的PK曲線都存在較寬範圍的變化。這大概是由於個體在吸收和清除方面的變化 性。事實上，兩條完全不同的曲線可以具有相似的AUC值。因此，為了完全開發TDM指導 的投配，將針對各患者產生完全個性化的PK曲線以便可進行劑量優化，並且可以使用如 Phoenix(WinNonlin)等常規PK程序估計通過改變投配頻率或持續時間所實現的劑量調 整。使用任一個單一 PK參數進行劑量調整都將忽視可獲得的PK數據的價值並且不會同樣 有效。所以，充分個性化的PK曲線將用於指導劑量調整，並且與如AUC等單一 PK參數相比， 將允許進行更精確的劑量調整。
[0040] 在某些實施方案中，這個問題的解決方案是開發一種可以使用由單次手指刺破得 到的血液來進行的側流測試。理想地，所述測試包括將單次刺破血液應用到側流裝置，該裝 置隨後給出讀數，該讀數經由Wifi /網際網路發送給主治醫師。在某些實施方案中，可以通過 患者跨越0到24小時、0到36小時、0到48小時或0到72小時的時期在至少2、3、4、5、6、 7、8、9、10、11或12個指定時間點親自進行測試來獲得有意思的PK數據。
[0041] 需要可用於更容易檢測小分子分析物並且檢測低濃度分析物的改進型測定。另 夕卜，需要改進對分析物（包括小分子分析物）的測量，以便定製藥物方案以維持藥物效力， 同時減少個別患者中不希望有的副作用。此外，需要可用於照護點以測量生物學和/或臨 床相關分析物以便減少獲得樣品與獲得測定結果之間的延遲的方法和設備。
[0042] 通過本文所描述的本發明監測的藥物可以是希望在化學、物理、酶學或光學分析 中加以檢測和/或測量的任何特定物質或組分。所述分析物包括但不限於治療劑和/或藥 理學藥劑（例如茶鹼、抗HIV藥物、鋰、抗癲癇藥、環孢菌素、化學治療劑）。在優選實施方案 中，所述分析物是所關注的生理學分析物或具有生理作用的化學物質，例如藥物或藥理學 藥劑。術語藥物和藥理學藥劑可互換使用並且可包括具有治療效果的任何分子，包括小分 子和生物學物質。
[0043] 在某些實施方案中，欲監測的藥物可以包括但不限於化學療法、生育能力治療劑、 抗病毒劑以及抗微生物劑。
[0044] 在某些優選實施方案中，本發明的方法是用於監測由於所接收的特定療法的PK 變化性而將會受益於劑量調整的患者。
[0045] 可以使用本發明的方法來監測的化學治療劑包括但不限於紫杉醇、多烯紫杉 醇、吉西他濱以及5-氟尿嘧啶。所述方法可以用來監測不同的紫杉醇製劑，包括例如 Abraxane、Taxol 或 Genexol，或 Nanoxel，或 Zyotag，或 Tocosol，或其他製劑。這些製劑包 括但不限於白蛋白綴合紫杉醇、聚合物膠束紫杉醇、紫杉醇的聚合納米粒子製劑、基於維生 素 E的紫杉醇乳劑、聚穀氨酸紫杉醇，以及當前在開發中或尚有待開發的製劑，如脂質分散 紫杉醇、靶向紫杉醇納米粒子（基於白蛋白以及基於PEG)以及多孔紫杉醇納米粒子。
[0046] 可以監測的生育能力治療劑包括例如FSH、LH、hCG、GnRH激動劑/拮抗劑、雌二醇 等。
[0047] 可以監測的抗病毒/微生物劑包括而不限於蛋白酶抑制劑；反轉錄酶抑制劑，諸 如2'，3'-雙脫氧肌苷（ddl)、2'，3'-雙脫氧胞苷（ddC)或3'-疊氮基_2,3'-雙 脫氧胸苷（AZT);抗真菌藥物，例如還可以用於抗利什曼原蟲化學療法的伊曲康唑，或最常 用的抗利什曼原蟲藥，即含銻劑。
[0048] 另外，接收某些類別治療劑的患者將受益於由於PK變化性而進行的劑量調整。這 些治療劑類別的實例包括口服藥劑、靜脈內藥劑以及肌肉內/陰道內/眼眶內藥劑。
[0049] 口服藥劑的PK曲線一般以緩慢吸收後血液濃度穩定下降為特徵。Tmax和c max是描 述PK曲線以及生物利用率和穩態水平的重要參數。這些包括經常經口施用的抗病毒劑，以 及用於癌症的靶向療法、抗高膽固醇血症劑、抗高血壓劑等。
[0050] 對於靜脈內藥劑，包括小分子和生物學物質，Cmax作為毒性以及AUC的界定是非常 重要的。這些包括癌症療法中所使用的大部分化學治療劑和抗體藥物綴合物（ADC)。這一 類別的PK曲線的特徵在於Cmax在輸注過程中快速增加達到穩態，並且然後在輸注停止後快 速下降，並且此後緩慢衰減。
[0051] 對於經肌肉內/陰道內/眼眶內途徑施用的藥劑，包括生物學物質和小分子，穩 態濃度、吸收、終末?\ / 2是重要的參數。這類藥物包括生育能力治療時所使用的激素及其 他生物製劑，如依那西普、利妥昔單抗、瑞舒伐他汀、曲妥珠單抗、胰島素、因子VIII、tPA、 up、抗體-藥物綴合物等。這些藥劑所展現的PK曲線為介於口服藥劑與靜脈內藥劑之間的 中間值。治療藥物包括例如免疫抑制劑藥療，如環孢菌素、他克莫司（FK-506)、雷帕黴素以 及麥考酚酸酯。免疫抑制劑具有狹窄治療指數以及高度患者間和患者內生物利用率變化 性。免疫抑制劑需要對患者的樣品進行小心頻繁的監測以便平衡防止移植排斥所需的免疫 抑制水平，同時避免過度免疫抑制的副作用，如毒性、感染以及罹患癌症的風險增加。這些 包括抗病毒劑，如抗HIV劑。實例為抗逆轉錄病毒藥物，如蛋白酶或反轉錄酶抑制劑，例如 2'，3'-雙脫氧肌苷（ddl)、2'，3'-雙脫氧胞苷（ddC)或3'-疊氮基_2,3'-雙脫 氧胸苷（AZT)。
[0052] 預計治療藥物監測對具有高度可變性PK的藥物最有效。紫杉醇在患者暴露 方面的變化性超過十倍（Evans，W. Ε ' &Relling，Μ· V. Clinical pharmacokinetics-pharmacodynamics of anticancer drugs. Clin. Pharmacokinet. 16,327-336 (1989)； Freyer，G 等.Pharmacokinetic studies in cancer chemotherapy usefulness in clinical practice.Cancer Treat.Rev.23,153-169 (1997) ;Masson，E.&Zamboni， W.C. Pharmacokinetic optimisation of cancer chemotherapy ：effect on outcomes. Cl in. Pharmacokinet. 32, 324-343 (1997)。不同的患者相關因素可以影響藥物的藥物 動力學（PK)，例如器官功能、代謝酶的表達和活性、抗藥性、體格大小、性別、年齡、伴發 病以及共同施用的其他藥物。這些因素在化學療法劑量確定中可能具有臨床意義。紫 杉醇被肝臟清除到排洩物中（Sparreboom A，Scripture CD，Trieu V，Williams PJ， De T，Yang A，Beals B，Figg WD, Hawkins M，Desai N. Comparative preclinical and clinical pharmacokinetics of a cremophor-free， nanoparticle albumin-bound paclitaxel(ABI-007)and paclitaxel formulated in Cremophor(Taxol). Clin Cancer Res.11,4136-43(2005) ；Sparreboom A,van Tellingen 0,Nooijen WJ,Beijnen JH. Tissue distribution， metabolism and excretion of paclitaxel in mice.Anticancer Drugs. 7,78-86(1996));因此，肝損傷影響藥物從循環中清除，而滲透性糖蛋白（Pgp)，也 稱為抗多藥物蛋白1 (MDR1)，它的狀態影響藥物在腸中清除和再吸收。肝清除另外受CYP因 素影響（Walle T. Assays of CYP2C8_and CYP3A4_mediated metabolism of taxolin vivo and in vitro. Methods Enzymol，272, 145-51(1996))。另外，存在其他因素，這些因素是使 用體表面積（BSA)作為劑量標準化因子所固有的（Baker，S.D.等.Role of body surface area in dosing of investigational anticancer agents in adults,1991-2001. J. Natl. Cancer Inst. 94,1883-1888(2002))。BSA自身受體重影響；紫杉醇AUC隨體重增加而增加 是由於較重患者的總劑量增加。因此，白種人傾向於具有比亞洲人高的AUC。年齡的作用因 大部分患者是老年人而未得到充分分析。
[0053] 對於紫杉醇，在藥物動力學方面存在較大個體間差異；對於AUCinf，平均CV 在 20 % 到 50 % 範圍內（Sparreboom A，Scripture CD，Trieu V，Williams PJ，De T， Yang A，Beals B，Figg WD, Hawkins M，Desai N. Comparative preclinical and clinical pharmacokinetics of a cremophor-free， nanoparticle albumin-bound paclitaxel(ABI-007)and paclitaxel formulated in Cremophor(TaXol). Clin Cancer Res. 11,4136-43(2005) ；Nyman DW, Campbell KJ, Hersh E, Long K, Richardson K, Trieu V，Desai N，Hawkins MJ，Von Hoff DD. Phase I and pharmacokinetics trial of ABI-007, a novel nanoparticleformulation of paclitaxel in patients with advanced nonhematologic malignancies. J Clin Oncol.23,7785-93(2005) ;Yamada K， Yamamoto N，Yamada Y，Mukohara T，Minami H, Tamura T.Phase I and pharmacokinetic study of ABI-007,albumin-bound paclitaxel,administered every3weeks in Japanese patients with solid tumors. Jpn J ClinOncol. 40 :404-11(2010) ；Gardner ER，Dahut WL, Scripture CD， Jones J， Aragon-Ching JB， Desai N， Hawkins MJ， Sparreboom A， Figg WD. Randomized crossover pharmacokinetic study of solvent-based paclitaxel and nab-paclitaxel. Clin Cancer Res. 14 :4200-5(2008) ；Stinchcombe TE, Socinski MA, Walko CM, 0' Neil BH, Collichio FA, Ivanova A, Mu H, Hawkins MJ, Goldberg RM, Lindley C, Claire Dees E.Phase I and pharmacokinetic trial of carboplatin and albumin-bound paclitaxel, ABI-007(Abraxane)on three treatment schedules in patients with solid tumors. Cancer ChemotherPharmacol. 60 :759-66 (2007)) 〇 不完全 了解這種較大差異的原因並且因此無法控制。肝損傷和肥胖已被鑑別為影響因素；然而， 其他未知的因素仍有待界定。觀看紫杉醇PK，顯而易見投配批准劑量的患者發生劑量不足 或劑量過度的機會較高（Mielke S. Individualized pharmacotherapy with paclitaxel. Curr Opin Oncol. 19,586-9(2007))。
[0054] 高度可變性紫杉醇PK對它的治療應用不具有顯著影響。在比較lOOmg / m2的紫 杉醇劑量與125mg / m2紫杉醇劑量的兩次研究中，劑量較高的群組比劑量較低的群組表 現更好（Blum 幾 ，Savin MA，Edelman G，Pippen JE，Robert NJ，Geister BV，Kirby RL， Clawson A,0/ Shaughnessy JA. Phase II study of weekly albumin-bound paclitaxel for patients with metastatic breast cancer heavily pretreated with taxanes. Clin Breast Cancer7 :850-6(2007) ；Von Hoff DD,Ramanathan RK,Borad MJ,Laheru DA, Smith LS, Wood TE, Kom RL, Desai N, Trieu V, Iglesias JL, Zhang H, Soon-Shiong P, Shi T, Rajeshkumar NV, Maitra A,Hidalgo M. Gemcitabine Plus nab-Paclitaxel Is an Active Regimen in Patients With Advanced Pancreatic Cancer ：A Phase I / IITrial. J ClinOncol. 29 :4548-54(2011))。考慮到紫杉醇PK的高變化性，鑑別劑量不足的患者並 且將他們移到較高劑量非常可能會導致藥物暴露增加超過25%。鑑於上文，紫杉醇的TDM 很可能是有益的。
[0055] 本發明的方法將適用於監測以相對較高頻率的治療抗性為特徵的疾病，如癌症和 HIV。這些病狀的治療將通過頻繁監測藥物濃度連同抗性測試來增強。所以，已開發出監測 在患者體內循環的HIV病毒體群體的表型變化的方法（例如W097 / 27480)。其他表型測 定包括 Witvrouw(W001 / 57245)、Virologic(W097 / 27319)以及 Bioalliance(W002 / 38792)所描述的那些。Antivirogram. RTM. (W097 / 27480)估計病毒群體與'野生型' 菌株相比的藥物敏感性。在這個測試服務中，在體外測定抑制50%病毒生長的藥物濃度 (IC50)。患者血液樣品中的病毒的IC50相對於"野生型"病毒的IC50的比率為該患者體 內的病毒的藥物敏感性的倍數變化。
[0056] 最小血漿濃度或低谷濃度在治療疾病或病狀過程中可能是關鍵的，其中對藥物標 靶進行調節以克服藥效。這後一種現象的實例在如病毒感染等疾病中發現，如HIV、細菌感 染以及癌症。例如，藥物的存在對HIV蛋白酶產生突變壓力而逃脫藥物療法，並且不足抑制 劑濃度會促進此種逃脫。患者體內的藥物濃度的測定和使用這個值確定低谷濃度在獲得足 以產生治療有效濃度的劑量方面可能是重要的。
[0057] 本發明方法的一個方面是測定藥物在個體中的藥理學參數，包括低谷水平（Ct)、 最大濃度（C max)、曲線下面積（AUC)、清除速度等。這些參數可以輸入群體藥物動力學模型 中，並且可以計算藥物動力學變量，如Ct、C max以及AUC(W002 / 23186)。這些藥理學變量可 以用於例如估計某一劑量的潛在毒性、藥物暴露時間（例如在放射性化學物質的情況下） 或最小濃度。
[0058] 為了獲得有效治療，如通過例如低谷濃度或AUC確定的個體的藥物暴露必須超過 某一水平。這一水平是由病毒群體的性質決定。藥物暴露（低谷水平、AUC、其他）相對於抗 藥性（抗性倍數、IC50、IC90等）的比率可預測療法的成功性。這個比率可以表達為IQ(抑 制商）（IQ=Ct / IC50)。這個IQ值可以進一步標準化以便獲得針對蛋白結合加以調整的 值（標準化IQ，NIQ)。獲得這個調整值的一種方法是確定參考菌株（S卩，參考實驗室HIV菌 株）的群體平均Ct和活性成分IC50。這後兩個值的商產生（Ct / IC50)參考。標準化IQ 由以下商提供：[(Ct / IC50)]患者/ [(Ct / IC50)]參考。
[0059] 根據本發明，"生物樣品"包括來源於生物體（即，人類或動物）的任何樣品，其任 選地包含活性成分。生物樣品包括但不限於血液、血清、血漿、唾液、腦脊髓液、精液、乳腺導 管灌洗液以及毛髮。在某些優選實施方案中，樣品是血液。生物樣品另外包括從培養燒瓶、 孔及其他類型容器獲得的樣品。生物樣品可以包含一種或多種活性成分。
[0060] 活性成分可以包括任何化合物，包括化學物質、藥物、抗體、配體、反義化合物、適 配體、核糖酶、肽、非天然肽、蛋白質、PNA(肽核酸）以及核酸或包括至少一種化合物的組合 物。活性成分另外包含所施用的化合物和它們的代謝物。代謝物可以在生理學條件下產生。 如本發明中所使用，活性成分的水平意指所述活性成分在所述樣品中的量或濃度。生物樣 品中所存在的活性成分可以不同於參考物中的活性成分。在這些情形下，生物樣品的抑制 效能等於得自於參考標準曲線的活性成分的量或濃度。所述量可以表達為例如g、ml、mol。 所述濃度可以表達為例如ml / ml、g / 1、Μ等等。
[0061] 使用至少兩個數據點構建的藥物動力學曲線將用於產生ΡΚ參數，所述ΡΚ參數可 用於指導劑量調整。所述參數包括：AUCinf、Tmax、Cmax、高於閾值的時間、?\ / 2、Vd、CL、Vss、 乂2、1'_、\、指數、1等。這些包括得自於非房室？1(分析和房室？1(分析的參數（基於生理 學或不基於生理學）。這些ΡΚ參數是實際ΡΚ曲線的導數，並且可能需要一個或多個以便 足以進行劑量調整。參數或數量的測定將在藥物的臨床開發過程中由程序測定。基於個體 的ΡΚ曲線，可以調整劑量以降低毒性和/或提高指定藥物的效力。例如，與紫杉醇治療相 關的中性粒細胞減少跟高於50ηΜ紫杉醇的時間有關。所以，這個參數可用於指導劑量調整 以降低個體罹患中性粒細胞減少的風險。同樣，藥物暴露的量度（如AUC)可用於指導劑量 調整以提高效力。ΡΚ參數和ΡΚ曲線的複雜性將在臨床試驗後確定，從而將響應與ΡΚ曲線 和它的參數相比較。使用多變量分析、邏輯回歸、神經網絡以及其他合適的統計分析，將得 到適當界定的調整參數以促進劑量調整。
[0062] 可在具體藥物的預期中位數內進行劑量調整。例如，可以調整劑量以實現在所需 目標值的5 %、10 %、15 %或20 %內的水平。在藥物的有效劑量是已知的並且還對患者具 有可變性的情況下，將劑量調整為治療商以在不產生毒性的情況下維持足夠高的治療有效 性。在一些情況下，這是不可能的。
[0063] 使用藥物動力學曲線來指導投配將通過增加劑量不足的患者的劑量和降低劑量 過度的患者的劑量來降低投配的不可預測性、增加效力以及降低毒性。劑量不足和劑量過 度的患者是通過ΡΚ曲線和它的相關參數界定。
[0064] 合適的藥物測試裝置或方法的非限制性實例包括用於測定樣品中的分析物濃度 的側流裝置，其包括提供側流試紙條以用於測量所述分析物。可以測試的分析物的實例包 括治療藥物、藥物代謝物以及激素。將樣品施用到側流試紙條導致樣品中的分析物的一部 分與側流試紙條的組分結合，從而產生與所述樣品中的分析物濃度成比例的可檢測信號。
[0065] 可選地，可通過任何合適的測定對個體提交到實驗室的樣品進行定量，所述測定 包括但不限於所述領域中目前已知的那些，如ELISA、液相色譜-質譜（LC-MS)、薄層色譜 (TLC)、高效液相色譜（HPLC)以及質譜（MS)或在中心實驗室用於藥物監測的已被充分說明 的其他傳統測定。樣品可以是在手指刺破後收集於合適的基質上並且作為幹血斑形式存儲 的全血，它被運送或以其他方式遞送到實驗室以供測試。採樣可以用毛細管和/或設計用 於將精確且少量的血液遞送到幹血斑卡的裝置來進行。 實施例：
[0066] 實施例1.理論PK曲線示於圖1中。如圖1中所示，PK曲線具有兩個主分量，即 剛施用之後曲線的吸收部分和最大血液濃度（C max)之後曲線的衰減/清除部分。這個主題 從丸式施用情況下的即時Cmax到經口施用情況下的延遲C max變化。介於之間的是靜脈內輸 注、鼻內、頰內、肌肉內、腹膜內等。PK曲線的三個主要特徵為：Cmax(最大血液濃度）、平均滯 留時間（MRT)以及AUC(曲線下面積）。AUC常用於指示血液暴露。然而，具有相同AUC的 兩條曲線，如圖1中所描繪，可以具有很不一樣的曲線。靜脈內丸式投配展現較高初始血液 濃度，如由C max=劑量/血液容量所定義。口服投配由於延遲吸收而展現較長的藥物滯留時 間。藥物開發在正常情況下依賴於定義如何以最佳方式遞送藥物以得到極大活性和最小毒 性的實驗。令人驚訝的是，治療藥物監測（TDM)僅依賴於單一 PK參數或單一血液濃度測定 值。本發明建議全體PK數據（PK曲線分析）都應用於治療藥物監測，因為影響藥物吸收或 藥物清除的因素是尚無法預計的個人特徵。直接測定個人PK曲線應為個性化投配的工具。 [0067] 實施例2.為了證明僅改變藥物攝入量將改變PK曲線，我們使用Taxol的公開 藥物動力學資料研究了以3小時輸注速率和24小時較慢輸注速率投配的Taxol的PK曲 線（Ohtsu T, Sasaki Y, Tamura T, Miyata YNakanomyo H, Nishiwaki YSaijo N. (1995) Clinical pharmacokinetics and pharmacodynamics of paclitaxel :a3_hour infusion versus a24_hour infusion. Clin Cancer Res. 1 :599-606. ；Wiemik PH, Schwartz EL, Einzig A,Strauman JJ,Lipton RB,Dutcher JP. (1987)Phase I trial of taxol given as a24~hour infusion every21days ：responses observed in metastatic melanoma. J Clin Oncol. 5 :1232-9. ;Tamura T，Sasaki Y，Eguchi K，Shinkai T，Ohe Y Nishio M，Kunikane H， Arioka H， Karato A， Omatsu H 等，(1994)Phase I and pharmacokinetic study of paclitaxel by24_hour intravenous infusion. Jpn J Cancer Res. 85 ： 1057-62. ；Tamura T，Sasaki Y Nishiwaki Y Saijo N. (1995)Phase I study of paclitaxel by three-hour infusion ：hypotension just after infusion is one ofthe major dose-limiting toxicities. Jpn J Cancer Res. 86:1203-9.)。在僅改變輸注時間的情況下以相同劑量投 配的紫杉醇得到完全不同的AUC(圖2)。與24小時輸注相比，3小時輸注得到較高AUC或 藥物暴露。改變吸收效率一它會以與縮短輸注時間相同的方式影響曲線一顯示強烈影響如 PK曲線分析所定義的藥物暴露。這就強化了以下原理：PK曲線具有高度變化性並且受已知 因患者而異的參數影響。這些包括吸收效率、血液外和組織內分布速率以及蛋白結合特徵 等。如AUC等單一因素無法定義藥物暴露。
[0068] 實施例3.為了證明組織分布速率增加且因此血液中藥物累積速率降低會改變PK 曲線，我們研究了 Abraxane相對於Taxol的PK曲線。如圖3中所示，與配製為Taxol的紫 杉醇（Cremophor EL)相比，配製為Abraxane的紫杉醇（ABI-007)展現較低AUC。在較快吸 收/輸注（30分鐘輸注Abraxane相對於3小、時輸注Taxol)的情況下未觀察到AUC增加。 FDA在2005年批准Abraxane? (白蛋白綴合型紫杉醇，Abraxis BioSciences)用於轉移 性乳癌。已知Abraxane製劑產生較快組織穿透，已知這種性質因個體而異，取決於它們的 紫杉醇結合蛋白的水平等。這再次例證使用全體PK數據的PK曲線分析更適合於治療藥物 監測。我們發現如Genexol (圖4)和Nanoxel (圖5)等其他不含Cremophor的製劑也是一 樣。Genexol-PM? (甲氧基-PEG-聚（D，L_丙交酯）紫杉酚；Samyang，Korea)在南朝鮮已 批准用於轉移性乳癌，而第II階段在美國用於胰腺癌。
[0069] 實施例4.比較AbraxaneMBI-OO?)和Taxol的PK曲線清楚地顯示需要PK曲 線分析來預計反應和調整劑量。如上文所述，Abraxane PK曲線不同於Taxol PK曲線，其 中在相同劑量下AUC高於Taxol。圖6展示平均紫杉醇濃度相對於開始輸注Abraxane或 Taxol之後0到72小時的時間。當Abraxane以260mg / m2投配且Taxol是以175mg / m2投配時，他們展現幾乎相同的PK參數（表I)。Abraxane和Taxol的PK曲線在這 個劑量濃度下非常相似（Sparreboom A，Scripture CD，Trieu V，Williams PJ，De T， Yang A， Beals B， Figg WD, Hawkins M， Desai N. (2005)Comparative preclinical and clinical pharmacokinetics of a cremophor-free， nanoparticle albumin-bound paclitaxel(ABI-007)and paclitaxel formulated in Cremophor(Taxol). Clin Cancer Res. 11 :4136-43.);但是，ABI-007與標準紫杉醇相比顯示顯著更高的反應速率（分別為 33%相對於19%;P=. 001)和顯著更長的腫瘤進展時間（分別為23.0周相對於16. 9周；危 險比=0.75 ;Ρ=0· 006) (Gradishar WJ，Tjulandin S，Davidson N，Shaw H，Desai N，BharP， Hawkins M,0/ ShaughnessyJ. (2005)Phase III trial of nanoparticle albumin-bound paclitaxel compared with polyethylated castor oil-based paclitaxel in women with breast cancer. J Clin Oncol. 23 :7794-803.)。這就強化了需要 PK 曲線或全體 PK 數據用來評估藥物劑量的效力。
[0070] 表1 (圖19)是Abraxane和Taxol的估計紫杉醇血液藥物動力學變量的總結（藥 物動力學群體）。
[0071] 實施例5.為了確定Abraxane PK是否具有足以受益於治療藥物監測的變化 性，我們使用關於Abraxane PK的所有公開文獻進行了 PK分析。以下展示若干次研究 的 Abraxane PK 的曲線圖（圖 7) (Yamada K，Yamamoto N，Yamada Y，Mukohara T，Minami H， Tamura T. (2010)Phase I and pharmacokinetic study of ABI-007, albumin-bound paclitaxel,administered every3weeks in Japanese patients with solid tumors. Jpn J Clin Orncol. 40 :404-11. ;Gardner ER，Dahut WL，Scripture CD，Jones J，Aragon_Ching JB， Desai N， Hawkins MJ， Sparreboom A， Figg WD. (2008)Randomized crossover pharmacokinetic study of solvent-based paclitaxel and nab-paclitaxel. Clin Cancer Res. 14 :4200-5 ；Nyman DW, Campbell KJ，Hersh E，Long K，Richardson K， Trieu V，Desai N，Hawkins MJ，Von Hoff DD. (2005)Phase I and pharmacokinetics trial of ABI-007, a novel nanoparticle formnulation of paclitaxel in patients with advanced nonhematologic malignancies. J Clin Oncol. 23 :7785-93.)〇 所有 變量的範圍分別為￥2、八加、（：_、0^以及1'1/2的平均值的209%、142%、458%、200%、 69%。相比之下，我們計算出5-FU AUC展現3.9到16.41的範圍和9.05的平均值 或138%的變化性（￥(311〇11]\1，〇1^：[>0111'<1，？;!_叫116七？，&311^'六， <1011113眞，1'0^31^0， Bressolle F. (1999)Individual5-FU dose adaptation schedule using bimonthly pharmnacokinetically-modulated LV5-FU2regimen:a feasibility study in patients with advanced colorectal cancer. Anticancer Res. 19 :2229-35.) 0 因為 5-FU 已被 證明受益於治療藥物監測劑量調整（Gamelin，E，Delva，R，Jacob，J等，"Individual fluorouracil dose adjustment based on pharmacokinetic follow-up compared with conventional dosage ：Results of a multicenter randomized trial of patients with metastatic colorectal cancer". J Clin Oncol. 13 :2099_2105, 2008.)-儘管是使用得自 於單次採樣而非得自於PK曲線分析的數據一所以，我們的分析強烈表明Abraxane投配將 受益於治療藥物監測，尤其是使用PK曲線進行劑量調整。預期Genexol-PM和Nanoxel會 具有相同的PK變化。Abraxane的變化性較寬相當令人驚訝。治療藥物監測的作用在於降 低這種變化性。儘管Abraxane和Taxol的PK曲線相似，但存在差異。然而，這些差異較小 並且可以被Abraxane / Taxol的PK的較大變化掩蓋。
[0072] 實施例6.為了確定藥療是否用於輔助生殖，即FSH(卵泡刺激激素），我們使用關 於FSH PK已發表的文獻進行了 PK分析。以下展示若干次研究的FSH PK的曲線圖（圖8 和 9) (Duijkers IJ，Klipping C，Boerrigter PJ，Machielsen CS，De Bie JJ, Voortman G(2002)，Single dose pharmacokinetics and effects on follicular growth and serum hormones of a long-acting recombinant FSH preparation(FSH-CTP) in healthy pituitary-suppressed females. Hum Reprod. 17 :1987-93. ；0ut HJ，Schnabel Pq， Rombout F， Geurts TB, Bosschaert MA, Coelingh Bennink HJ. (1996)A bioequivalence study of two urinary follicle stimulating hormone preparations ：Follegon and Metrodin. Hum Reprod. 11 :61-3.)。為了比較它與5-FU數據，我們使用變化性作為SD /平 均值。對於頂Follegon和Metrodin，AUC變化性分別計算為26. 08%和20. 57% ;對於sc Normegon、Follegon 以及 Metrodin，分別為 17. 72%、18. 42%、17. 69%。令人驚訝的是，這 個變化接近於 5-FU 的變化性 34.42% (Ychou M，Duffour J，Pinguet F，Kramar A，Joulia JM， Topart D， Bressolle F. (1999)Individual5-FU dose adaptation schedule using bimonthly pharmacokinetically-modulated LV5-FU2regimen ：a feasibility study in patients with advanced colorectal cancer. Anticancer Res. 19 :2229-35.) 〇 該分析表 明，針對FSH的治療藥物監測可能與5-FU的治療藥物監測同樣有益。
[0073] 實施例7.確定為PK曲線分析所必需的最小數據點。
[0074] 對於單一可及池模型，在丸式注射量D到池中後，可以用以下這個方程中所示的 一般形式的指數方程的和來描述藥物動力學數據rakoru τ1+···+αΤ/τηι。
[0075] 這就允許在定義指數之後定量PK變量。必須處理得自於充分藥物動力學研究的 臨床數據以便可定義指數（τ )。可以使用能夠進行房室模型化的任何藥物動力學程序來進 行定義指數的模型化。它們將包括如 WinNonlin、EquivTest、Kinetica、Phoenix/WinNonlin 以及PK Solutions等程序。在定義後，指數可用於使用n+1份樣品產生完整PK曲線。如 以下（圖10)所示（對於單指數而言，這將意指收集兩個數據點以便它們撐起PK曲線），優 選下降部分前四分之一早期和下降部分後四分之一晚期的時間點。尋常PK曲線不會具有 至少兩個指數。每一個額外指數需要兩個額外數據點。數據點將必須位於下降部分前四分 之一和下降部分後四分之一，下降部分終止於兩個分量相交處。這是必需的，因為指數僅能 沿著它的主要區段用兩個數據點精確地模型化。因為指數1的第2個數據點與指數2的第 1個數據點重疊，所以僅需要3個數據點（或η+1)。這示於圖11中。對於具有吸收階段的 IV輸注和其他施用模式，將必須把生物利用率和吸收速率輸入這些指數頂部的方程式中。 那些也通過指數來調節並且可以用相同方式處理。
[0076] 單指數ΡΚ曲線的典型曲線圖，假定是丸式施用。兩個數據點足以確定單指數ΡΚ 的ΡΚ曲線。起始濃度布置在100 %處，並且τ為100的緩慢衰減ΡΚ顯示為頂部第一曲線， 而隨後的曲線的τ逐漸降低。觀察指數可以適當地布置數據點。第1個和第2個數據點 將布置在75到100和0到25血液藥物濃度處。
[0077] 圖11展示以兩個指數為特徵的ΡΚ曲線。曲線的早期部分（分布階段）由指數1 控制，而曲線的稍後部分（清除階段）由指數2控制。觀察指數可以適當地布置數據點。對 於指數1，第1 / 2個數據點將布置在0到1小時和2到4小時；對於指數2,第1 / 2個數 據點將布置在2到4小時和29到39小時。
[0078] 實施例8.根據用於ΡΚ曲線分析的原型側流測定檢測紫杉醇。為了能夠進行ΡΚ 曲線分析，我們開發了針對不同的分析物（其中之一為紫杉醇）的照護點測定。紫杉醇通 常用LC / MS / MS以1到5ng/ml的檢測水平進行檢測。還開發了具有相當檢測水平的使 用針對紫杉醇的mAb的ELISA。這些ELISA測定儘管比LC / MS / MS方法簡單但對於要求 抽血、將血液分離成血清並且由受過訓練的人員按臨床實驗室中的微量滴定板形式進行測 試的現場應用而言仍不實用。我們的創新之處在於開發了一種可以接受手指刺破取血並且 由部署在照護點（家中、醫生辦公室或中心實驗室）的讀數器進行讀數的側流測定。容易 採樣和測試與治療過程中的多次採樣相容，從而可獲得詳細藥物動力學數據。
[0079] 通過將纖維素吸收墊（纖維素纖維樣品墊17mmX100m CFSP001700(Millipore， Bedford，ΜΑ))和玻璃複合纖維（玻璃纖維複合墊8_X100m GFCP000800(Millipore， Bedford，ΜΑ))粘接到薄膜卡片（Hi-Flow Plus240 薄膜卡片 60m X 301mm HF240MC100(Millipore，Bedford，MA))上來構建測試用試紙條。用鍘刀式切紙機切割所組 裝的卡片以產生4mm試紙條。可就地利用的閘刀式切紙機為得自於A-Point Technologies Inc. (Gibbstown，NJ，USA)的 Index Cutter II。
[0080] 對紫杉醇-BSA(20 :1比率）和各mAb (以pi計）在lmg / ml下的mAb膠體結合 進行初始測試以確定陽性結合。圖12中所示的實驗指示紫杉醇-BSA /抗紫杉醇mAb-膠 體金結合對產生了充分信號。然而，當mAb在所述薄膜上形成斑點並且BSA-紫杉醇流過所 述薄膜時BSA-紫杉醇/抗紫杉醇mAb-膠體金配對的信號強得多（左圖，圖12)。如所示 (右圖，圖12)，當抗紫杉醇mAb固定在硝化纖維薄膜上並且紫杉醇-金結合物流過所述薄 膜時檢測到強得多的信號。將紫杉醇與血清混合併且用納米金粒子直接標記所述混合物。 檢測極限有可能降到20ng / ml紫杉醇。
[0081] 實施例9.使用Qiagen側流讀數器進行定量側流測定。本實施例展示可如何使用 適當讀數器（如Qiagen所生產的那些）將側流卡匣轉變成定量照護點裝置。
[0082] 使用常規hCG側流卡匣構建hCG的定量照護點側流測定，其中使用Qiagen側流 讀數器進行定量，所述側流讀數器經過配置以便將校準曲線嵌入2D條形碼中，壓印這些卡 匣，從而允許將所有定量過程上傳到現場的讀數器上，並且在照護點/使用點在不需要專 家技術支持的背景下進行定量。
[0083] 圖13展示-hCG的定量側流TDM的結果，hCG是一種常用於誘導排卵以輔助生殖的 激素。通過用於hCG的定量側流裝置對與濃度增加的hCG (從上到下=0到1694mIU / mL) 摻混的血清進行測試（圖13A)。利用讀數器掃描所述裝置並且所述掃描示於圖13B中。將 T和C的峰面積的比率相對於濃度繪圖以確定校準曲線（圖13C)。校準裝置用於對未知的 hCG濃度進行定量，其中期望值與實驗值之間具有優良一致性（圖13D)。所有這些數據都 存儲為可以用任何讀數器讀取的二維條形碼以確定用於分析未知樣品的參數。
[0084] 實施例10.使用由與裝備有Evolution MP照相機的Olympus SXX16顯微鏡所捕 捉的圖像耦合的圖像分析儀ImagePro程序的定量側流測定。本實施例顯示任何圖像分析 程序（如ImagePro)和任何照相機系統（包括行動電話照相機）的使用。只要圖像的品質 足以比較測試系相對於對照系的強度，就有可能使用它來定量，所述定量可以在原地或遠 處發生。開發了 FSH濃度增加的FSH側流卡匣，並且通過ImagePro分析所捕捉的圖像，並 且將測試相對於對照的強度比用來繪製強度相對於濃度的曲線圖，所述曲線圖顯示出良好 定量傾向。所述測定在它的當前形式下由於鉤狀效應（即，在極端FSH濃度下信號減少） 而受到困擾。所述鉤狀效應相當重要並且正在開發避免它的手段。
[0085] 實施例11.穩定側流裝置信號以便日後在使用點/照護點或在集中實驗室進行 定量，因為信號的穩定性允許在照護點進行開發之後將裝置運送回集中實驗室。
[0086] 在完成流動時（即15到20分鐘）進行定量，並且監測到72小時以確保信號的穩 定性。為了將所述卡匣運送回中心測試實驗室，信號穩定性是必需的。如以下所示，我們迄 今為止開發的所有定量測試都展現至少72小時的穩定性。在大部分情況下，穩定性持續數 周和數月。使用適當卡匣配置、緩衝條件以及樣品體積大小來確保穩定性。在信號穩定後， 我們發現它將保持穩定至少若干個月。
[0087] 圖15說明FSH定量納米金側流信號的穩定性。
[0088] 實施例12.構建hCG、LH以及FSH的定量照護點測定。IVF在每個起動周期具有 約22%的分娩率和接近於250, 000個孩子，其中26%的妊娠是雙胞胎並且2. 5%是三胞胎。 IVF方案（以產生介於8與15個之間的卵母細胞為目標）是複雜、費時、昂貴的，並且可能 引起顯著患者不適並且增加併發症的機率，尤其是卵巢過度刺激綜合症（0HSS)。最經常用 於卵巢過度刺激的藥物方案由以下各項組成：用於調節月經周期的類固醇避孕預處理；在 刺激前周期中用於抑制LH釋放的GnRH激動劑模擬物；用於促進多個卵泡發育的幾乎持續 2周的每日促性腺激素注射；以及用於誘導成熟卵母細胞排卵的丸式劑量的hCG。在許多國 家，藥療和監測費用重於IVF程序本身的成本。所以，重點從適度刺激轉移到適度卵巢反應 通過基於初始患者特徵（如年齡、體重以及卵巢儲備特徵）開發出更具個性化的治療方案 而正在降低作廢率和過度反應率。為了促進能降低藥療成本和由於過度藥療所致的0HSS 風險的個性化治療方案，我們開發了廣泛用於IVF的促性腺激素（即，FSH、LH以及hCG)的 照護點治療藥物監測。
[0089] 使用針對LH、FSH以及hCG的成對mAb構建側流測定。使用反射儀光學讀數器， 所述讀數器利用具有較小的距離目標比的共焦光學器件。將得自於青春期前女性的血 清、尿液以及得自於女性供體的血液用作基質來混入標準物，並且因而產生這些實驗的樣 品。所使用的體積是每個卡匣40uL。對於hCG血液分析，所述體積降到每個卡匣30ul。使 用以下標準物：得自於Genway (San Diego, CA)的LH參考標準物（批次號A11072104)、 得自於Genway (San Diego, CA)的FSH參考標準物（批次號11-663-45941)以及得自於 AbdSerotec(Raleigh，NC)的 hCG 參考標準物（批次號 120811)。使用 GraphPad Prism(San Diego, CA)將數據繪圖並分析。
[0090] 所描述的實施方案在所有方面都應僅被視為說明性的而非限制性的，並且本發明 的範圍不限於以上描述。本領域的技術人員能認識到仍然可歸入本發明範圍內的改變、替 換、改進以及其他修改。
【權利要求】
1. 一種使用藥物動力學曲線分析對經過藥物治療的個體進行治療藥物監測的方法，所 述方法包括： 使用在適於構建藥物動力學曲線的時間點獲自所述個體的至少兩份樣品中的藥物濃 度來構建所述藥物在所述個體中的藥物動力學曲線，所述至少兩份樣品是在照護點或使用 點通過採樣或自採樣而收集在照護點裝置或使用點裝置上，各裝置能夠定量所述藥物；或 收集在適合於在由實驗室定量所述藥物之前存儲所述至少兩份樣品的基質上，所述藥物動 力學曲線包括適合於指導對所述個體投配所述藥物的藥物動力學參數。
2. 根據權利要求1所述的方法，其中至少兩份樣品包括2到12份樣品。
3. 根據權利要求1或2所述的方法，其中至少兩份樣品是在長達8小時、長達24小時、 長達48小時或長達72小時的時間段內收集。
4. 根據權利要求1到3中任一項所述的方法，其中所述藥物動力學參數包括選自由以 下各項組成的群組的至少一個參數:AUC、AUC inf、Tmax、Cmax、高於閾值的時間、穩態濃度、吸收 率、清除率、分布率、終末/ 2或得自非房室PK或房室PK分析（包括基於生理學模型的房 室PK分析）的參數。
5. 根據權利要求1到4中任一項所述的方法，其進一步包括產生一份包括所述個體的 藥物動力學曲線的報告。
6. 根據權利要求5所述的方法，其中所述報告包括基於所述個體的藥物動力學曲線對 投配的建議。
7. 根據權利要求1到6中任一項所述的方法，其中基於一個或多個藥物動力學參數指 示減少藥物劑量以降低毒性風險。
8. 根據權利要求7所述的方法，其中基於高於閾值的時間指示減少藥物劑量，其中所 述閾值是高於其時會出現毒性的藥物濃度，或AUC、AUCinf、MRT、定義所述PK曲線的指數、 Vss、Vz或足以描述所述PK曲線的一組PK變量的組合中的一者或多者。
9. 根據權利要求1到6中任一項所述的方法，其中基於一個或多個藥物動力學參數指 示藥物劑量調整以提高效力。 1〇.根據權利要求9所述的方法，其中基於4此4此丨1^、1?1\定義所述？1(曲線的指數、 Vss、Vz或足以描述所述PK曲線的一組PK變量的組合中的一者或多者指示增加藥物劑量。
11. 根據權利要求7到10中任一項所述的方法，其中將所述劑量調整到所需目標值的 5%到25%以內。
12. 根據權利要求1到11中任一項所述的方法，其中將所述至少兩份樣品各自施用於 所述照護點裝置或所述使用點裝置以測定所述藥物的濃度，其中所述照護點裝置或所述使 用點裝置包括側流試紙條，所述側流試紙條的構造和組成使得將所述至少兩份樣品中的一 份或多份施用到所述側流試紙條上會引起所述樣品中的一部分藥物與所述側流試紙條的 組分結合，從而產生與所施用樣品中的藥物濃度成比例的可檢測信號。
13. 根據權利要求1到11中任一項所述的方法，其中將至少兩份樣品施用於適合在由 實驗室定量之前存儲所述至少兩份樣品的基質。
14. 根據權利要求13所述的方法，其中將至少兩份樣品以幹血斑的形式存儲。
15. 根據權利要求13或14所述的方法，其中所述藥物濃度是通過ELISA或LCMS來測 量。
16. 根據權利要求1到15中任一項所述的方法，其中所述藥物選自化學治療劑、生育能 力治療劑以及抗病毒劑。
17. 根據權利要求16所述的方法，其中所述藥物是化學治療劑。
18. 根據權利要求16所述的方法，其中所述藥物是紫杉烷。
19. 根據權利要求17所述的方法，其中所述藥物是紫杉醇製劑。
20. 根據權利要求19所述的方法，其中所述紫杉醇製劑選自由以下各項組成的群組： 白蛋白綴合紫杉醇、聚合膠粒紫杉醇、紫杉醇的聚合納米顆粒製劑、基於維生素 E的紫杉醇 乳劑、聚穀氨酸紫杉醇。
21. 根據權利要求16所述的方法，其中所述藥物是生育能力治療劑。
22. 根據權利要求21所述的方法，其中所述生育能力治療劑選自由以下各項組成的群 組：FSH、LH 以及 hCG。
23. 根據權利要求16所述的方法，其中所述藥物是抗病毒劑。
24. 根據權利要求23所述的方法，其中所述藥物是抗HIV劑。
25. 根據權利要求23或24所述的方法，其中所述藥物是抗逆轉錄病毒劑。
26. 根據權利要求1到25中任一項所述的方法，其中藥物經配製以用於施用，所需求的 施用途徑示例為但不限於口服施用、靜脈內施用、肌肉內注射、陰道內施用、口腔內施用、眼 眶內施用、鼻內施用、經皮施用。
27. 根據權利要求26所述的方法，其中所述藥物經配製以用於口服施用，並且所述藥 物動力學參數包括C_和穩態水平中的至少一者。
28. 根據權利要求27所述的方法，其中所述藥物選自：化學治療劑、抗高膽固醇血症 齊?、抗高血壓劑、抗微生物劑、抗真菌劑、抗線蟲劑、免疫抑制劑、抗精神病藥、促睡眠劑、麻 醉藥、基於嗎啡的止痛藥。
29. 根據權利要求26所述的方法，其中所述藥物是經配製以用於靜脈內施用的小分 子，並且所述藥物動力學參數包括Cmax和AUC中的至少一者。
30. 根據權利要求26所述的方法，其中所述藥物是經配製以用於靜脈內施用或肌肉內 注射的生物製劑，並且所述藥物動力學參數包括穩態濃度、吸收以及終末?\ / 2中的至少一 者。
31. 根據權利要求30所述的方法，其中所述生物製劑是激素、抗體-藥物綴合物，或者 抗體或抗體衍生物、生物學活性蛋白質或肽。
32. 根據權利要求12所述的方法，其中所述樣品中的藥物與所述側流試紙條中以可檢 測方式標記的分子競爭結合抗體或配體。
33. 根據權利要求12所述的方法，其中所述藥物與固定在所述側流試紙條的限定區域 中的分子競爭結合以可檢測方式標記的抗體或配體。
34. 根據權利要求12、32或33中任一項所述的方法，其進一步包括檢測所述側流試紙 條的可檢測信號並且將所述信號與所述樣品中的所述分析物的濃度相關聯。
35. 根據權利要求12、13、32或33中任一項所述的方法，其中所述樣品是全血。
36. 根據權利要求12、32或33中任一項所述的方法，其中所述側流試紙條包含兩種或 更多種對所述藥物具有不同的親合力的不同抗體。
37. 根據權利要求12、32、33或36中任一項所述的方法，其中所述藥物選自由小分子和 生物製劑組成的群組的治療藥物。
38. 根據權利要求37所述的方法，其中所述分析物是小分子。
39. 根據權利要求38所述的方法，其中所述小分子是化學治療劑或抗病毒劑。
40. 根據權利要求39所述的方法，其中所述小分子是化學治療劑。
41. 根據權利要求40所述的方法，其中所述化學治療劑是紫杉醇。
42. 根據權利要求39所述的方法，其中所述小分子是抗病毒劑。
43. 根據權利要求42所述的方法，其中所述小分子是抗逆轉錄病毒劑。
44. 根據權利要求36所述的方法，其中所述生物製劑是激素或抗體。
45. 根據權利要求44所述的方法，其中所述激素選自由以下各項組成的群組：FSH、LH、 hCG、催乳激素、TSH以及胰島素。
46. 根據權利要求45所述的方法，其中所述激素是包含促性腺激素的生物製劑。
47. 根據權利要求44所述的方法，其中所述生物製劑進一步包含細胞毒素部分。
48. 根據權利要求37所述的方法，其中所述生物製劑是與治療部分綴合的抗體。
49. 一種使用藥物動力學曲線分析對以藥物治療的個體進行治療藥物監測的試劑盒， 所述試劑盒用於根據權利要求1所述的方法，所述試劑盒包含： 多個能夠對所述至少兩份樣品中的藥物進行定量的照護點裝置或使用點裝置，或適合 於在由實驗室定量之前存儲所述至少兩份樣品的基質。
50. 根據權利要求49所述的試劑盒，其進一步包括關於收集所述至少兩份樣品的說明 書。
【文檔編號】G01N33/00GK104160274SQ201280038476
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2012年5月30日 優先權日:2011年5月30日
【發明者】武永·恩戈·特裡優 申請人:奧德特裡克公司