對幽門螺桿菌具有消毒作用的食品或飲料產品的製作方法

2023-08-11 06:45:11 3

專利名稱：對幽門螺桿菌具有消毒作用的食品或飲料產品的製作方法
技術領域：
本發明涉及對幽門螺桿菌(He1icobacter pylori，本文有時下稱H.pylori)具有消毒作用和/或防止幽門螺桿菌感染的加氏乳桿菌(Lactobacillus gasseri，本文有時下稱L.gasseri)，以及含該乳酸菌的食品或飲料產品。
現有技術自從1983年瓦倫(Warren)等人發現幽門螺桿菌是作為在胃中存活的細菌以來[Lancet,I.1273(1983)]，關注的重點放在其與慢性胃炎、胃潰瘍和十二指腸潰瘍之間的關係。最近已經證實受幽門螺桿菌感染的蒙古沙鼠在沒有給予任何致癌物的情況下出現了胃腺癌[Watanabe等人，胃腸病學(Gastroenterology),115；642(1988)]，而且幽門螺桿菌與胃癌的關係也已經被認為是作為一種病原細菌。
同時，對患消化性潰瘍和幽門螺桿菌呈陽性的病人進行幽門螺桿菌消毒能夠抑制消化性潰瘍的復發，因此，幽門螺桿菌的活性消毒療法已在歐洲和美國運用。就幽門螺桿菌的消毒方法而論，常用的有抗菌素(β-內醯胺，氨基糖苷，大環內酯，四環素類等)和抗潰瘍劑相組合的方法；例如，臨床採用三種藥物的結合治療方法，即兩類抗菌素(6-甲氧基紅黴素-甲硝唑或阿莫西林)加上一種抑制胃酸分泌的質子泵抑制劑(proton pump inhibitor)。但是，為消毒治療目的而施用抗菌素之類的藥物最嚴重的缺點是由於高劑量藥物的多重組合，增加了幽門螺桿菌抗藥發生頻率，以及產生嚴重的副作用，如腹瀉和過敏等。
為了代替抗菌素達到在胃中對幽門螺桿菌消毒的目的，已經檢查試驗過如下方法包括乳鐵傳遞蛋白給藥的方法(JP-公開130164/1998)，採用由脲酶和幽門螺桿菌鞭毛作為抗原對雞進行免疫獲得的特殊抗原的方法(JP-公開287585/1998)，包括採用特殊單一短乳桿菌(Lactobacillus brevis)菌株和/或唾液乳桿菌(Lactobacillus salivarius)菌株(JP-公開241173/1997)和嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)菌株(JP-公開98782/1994)的各種活細菌給藥的方法，這是作為使用乳酸菌的方法。然而，沒有令人滿意的方法見諸報導。
另一方面，由於乳酸菌可產生香味物質，並能夠產生象乳酸和細菌素一類的抗菌物質，故乳酸菌是在世界範圍內以發酵乳品等形式的傳統食品中非常安全的微生物。因此，可以說利用乳酸菌的抗菌作用對幽門螺桿菌消毒是簡單而有效的方法，同時沒有副作用。
在現有發明中，實現了對乳酸菌菌株的選擇，特別是短乳桿菌菌株和/或唾液乳桿菌(JP-公開241173/1997)，但這些發明不僅沒考慮到作為幽門螺桿菌的目標場所的胃的環境特性(要耐低PH環境)，而且沒有注意到作為使用該乳酸菌菌株製備的食品如發酵乳品的性能(乳酸菌菌株的存活率，風味及物理特性)。此外，一項報導說明臨床試驗所用的嗜酸乳酸菌是無效的[Bazzoli等人，胃腸病學(Gastroenterology),102,No.4,A38,(1992)]。再則，JP-公開98782/1994所述的嗜酸乳酸菌菌株培養物上清液顯示了對幽門螺桿菌的消毒可能性，但從未證明該作用可以得以保持[Michetti等人，胃腸病學(Gastroentero1ogy),108,No.4,A166,(1995)]。如上所述，為了製備適於消毒幽門螺桿菌的目標組合物，現有的乳酸菌需要在很多方面進行改進。本發明要解決的問題在目前這種工業狀況下，要求針對抗胃炎和抗十二指腸病症建立一種消毒幽門螺桿菌和防止幽門螺桿菌感染的體系，本發明人從安全和口服角度出發再次將注意力轉向了乳酸菌，並且已打算利用乳酸菌開發一種消毒幽門螺桿菌和防止幽門螺桿菌感染的體系。
更具體地說，本發明要解決的問題是選擇一種乳酸菌菌株，該菌株在胃中具有高存活率和高繁殖特性，在動物實驗中具有明顯的抗幽門螺桿菌活性和用於食品如發酵乳品中的顯著性能(乳酸菌菌株的成活率，風味及物理特性)，以及利用該乳酸菌提供一種為消毒幽門螺桿菌和防止幽門螺桿菌感染的價廉且可每日攝取的新食品或飲料產品。
附圖簡要說明

圖1顯示了加氏乳桿菌OLL2716基因組DNA的ApaⅠ消化模式(脈衝場電泳)。
解決問題的手段本發明的目的是解決上述問題。為了篩選所需的乳酸菌，本發明人設立了下述標準並盡努力進行篩選工作。更具體地說，本發明人已通過研究從人腸道派生的大量乳桿菌中篩選出具有以下性質的一種細菌菌株1．高耐胃酸性；2．在低PH條件下生長良好；3．對幽門螺桿菌附著到人體胃癌細胞MKN45具有高抑制能力；4．在混合物中進行幽門螺桿菌培養時具有對幽門螺桿菌生長的高抑制能力；5．對受幽門螺桿菌感染的試驗鼠給藥劑時，具有高消毒能力；6．當用於食品時，具有高存活率、良好的風味和物理特性。本發明人已發現加氏乳桿菌OLL 2716作為細菌菌株可以滿足這些條件(細菌菌株的保藏號是FERM BP-6999，保藏機構是國立生命科學和人體技術研究所，通商產業省。該細菌菌株的細菌學特性如下1．形態學特徵細胞形態杆狀菌泳動度(mobility)無存在或不存在胞子不存在革蘭染色陽性2．生理學特性(陽性+；陰性-；弱陽性W)過氧化氫酶-產氣 -15℃生長 -葡萄糖酸的吸收-乳酸的旋光性 DL需氧生長 +3．碳水化合物的發酵性能(陽性+；陰性-；弱陽性W)樹膠醛醣 -木糖 -鼠李糖-核糖 -葡萄糖+
甘露糖 +果糖+半乳糖 +蔗糖+纖維二糖+乳糖+海藻糖 +密二糖 -密三糖 -松三糖 -澱粉w甘露醇 -山梨醇 -糊精w4．遺傳特徵DNA中鳥嘌呤(G)和胞核嘧啶(C)的含量是36.4％。另外，根據泰諾克(Tannock)等人的方法[微生物生態健康分布(Microbial.Ecol.Health Dis.),8:79-84,1995；環境應用微生物學(Appl.Environ.Microbiol),62:4608-4613]；培養加氏乳桿菌OLL 2716；該細菌固定在瓊脂糖栓(plug)上然後溶解；基因組DNA用限制性核酸內切酶(ApaⅠ)進行消化，經過脈衝場凝膠電泳處理(CHEF-DRⅡBIO-RAD)重新獲得圖1所示的帶形圖案。該圖中A表示加氏乳桿菌菌株OLL 2716；B表示尺寸標記。
5．胃酸耐受性胃酸耐受性實驗按以下方式進行。即，1毫升(ml)加氏乳桿菌OLL2716菌株的細菌懸浮液在MRS液體培養基(DIFCO)中經活化作用進行兩次培養(37℃,18小時)，用生理鹽水清洗兩遍，該細菌懸浮液加入到9ml人造胃酸液中
，其PH為2.0，經過濾滅菌，於37℃下有氧接觸2小時；然後取1ml加入到9ml、PH6.5的磷酸鹽緩衝溶液中(67mM)以終止反應。初始細菌數量和接觸人造胃酸液後的細菌數量通過MRS瓊脂計數來計算存活比例。在人體腸道派生出的乳桿菌(150種菌株)中，加氏乳桿菌菌株OLL 2716的胃酸耐受性最強，與其他細菌菌株的胃酸耐受性相比，加氏乳桿菌菌株OLL 2716的胃液耐受性最強(表1)。各種乳桿菌對人造胃酸液的耐受性
6．低PH值條件下的生長10微升(μl)加氏乳桿菌菌株OLL 2716在MRS液體培養基(37℃,18小時)中經活化作用進行兩次培養，該乳桿菌接種到改性的MRS液體培養基上
，在37℃下進行需氧培養。從開始培養9小時後，測量培養基的濁度(OD650)作為生長程度。結果，加氏乳桿菌OLL 2716在低PH值條件下的生長度最大(表2)。各種乳桿菌在低PH值條件下的生長情況
7．對人體胃癌細胞(MKN 45)的附著力根據格拉納託(Granato)等人的方法，加氏乳桿菌OLL 2716和嗜酸乳桿菌CNCM I-1225對人體胃癌細胞MKN 45的附著力已作過測定[環境應用微生物學(Appl.Environ.Microbiol.),65(3),1071-1077,(1999)]，格拉納託等人測定了乳酸菌在人體大腸癌細胞上的附著力。採用10ml含10％FCS的RPMI 1640培養基(RPMI，Nissui Pharmaceuticals),MKN 45在37℃下培養3天。經培養後，該細胞被剝落並用RPMI衝洗，再將其懸浮於RPMI中使得細胞最終濃度為5×104細胞/毫升(cells/ml)，然後在96-井(池)微量培養板中分成0.1毫升/井(ml/well),37℃下又培養3天後，附著到微量培養板上的MKN 45用0.1M、PH 6磷酸鹽緩衝液衝洗以製備MKN 45單層。在MRS液體培養基(DIFCO)中培養後懸浮在0.1M、PH6磷酸鹽緩衝液中使之達到109℃FU/ml的0.1ml加氏乳桿菌0LL2716或嗜酸乳桿菌CNCM I-1225的懸浮液加入到該單層上；形成的混合物在37℃下培養(恆溫)30分鐘。用0.1M、PH6磷酸鹽緩衝液將MKN 45單層衝洗三遍；將從未附著的乳酸菌除去。附著在MKN 45上的乳酸菌進行革蘭染色並且通過顯微鏡計數。結果發現附著在MKN45上的加氏乳桿菌0LL 2716的細菌數量比嗜酸乳桿菌CNGM I-1225的細菌數量要大。換言之，這證明了加氏乳桿菌0LL 2716具有對人體胃癌細胞的高附著力(表3)。加氏乳桿菌菌株OLL 2716對人體胃癌細胞的附著力
**p＜0.01(Student實驗，n=4)加氏乳桿菌菌株0LL 2716被選擇作為一種細菌菌株，該菌株在人體胃環境中具有高的胃酸耐受性，在低Ph值條件下生長良好，通過以藥劑(抗胃炎劑，抗潰瘍劑)或食品(發酵乳品，液體，糊體，乾產品)形式施用該細菌菌株的活細菌能夠對幽門螺桿菌消毒並防止主體受幽門螺桿菌的感染，從而防止胃炎、胃潰瘍或十二指腸潰瘍的發作或復發。因此，加氏乳桿菌菌株OLL 2716的抗幽門螺桿菌活性，其酸牛奶產品性能(貨架壽命，風味和物理特性)，以及受幽門螺桿菌感染的試驗鼠給予藥劑時加氏乳桿菌菌株OLL 2716對幽門螺桿菌的消毒作用都將參照實施例作詳細描述，但本發明不受這些實施例的限制。
更具體地說，本發明涉及對幽門螺桿菌具有消毒作用和/或防止受幽門螺桿菌感染的食品，該食品包含至少一種對幽門螺桿菌具有高消毒能力的屬於加氏乳桿菌的乳酸菌，含該乳酸菌的原料和其加工的產品。
含該乳酸菌的原料包括乳酸菌的懸浮液；乳酸菌的培養物(包括該細菌，培養物上清液，培養基組分)；通過從乳酸菌培養物中丟棄固體而製備的乳酸菌培養液；乳酸菌發酵乳品，包括通過發酵乳酸菌製備的食品或飲品，如乳酸菌飲料、酸奶(acid milk)和酸牛奶(yogurt)等等。
加工產品包括乳酸菌濃縮物，含乳酸菌的原料，以及發酵乳；其糊狀產品；幹品(噴霧乾燥產品，凍乾產品，真空乾燥產品，轉鼓乾燥產品等)；其液體產品；其稀釋產品等。此外，活細菌、溼細菌和幹細菌等都可適用作乳酸菌。
本發明的食品或飲品含有至少一種乳酸菌，含該菌的原料和其加工的產品作為有效成分，它可用作健康食品。
要混合的有效成分的量是任意的，可以根據其應用目的(預防、保健或治療目的)適當地確定。合適的用量範圍通常為0.0001-10％。為健康和保健目的或為健康控制目的而長期服用時，該用量可能應低於上述範圍；由於該有效成分從安全角度考慮不成問題，它絕對可以按上述用量範圍使用。給老鼠餵食10天的準確毒性實驗的結果證明按5000毫克/公斤/天(mg/kg/day)的口服劑量沒有發現死亡。
有效成分可直接用於食品或飲品，或者按常規方法與其它食物原料和食物成分適當地組合。使用該有效成分的本發明組合物可呈糊狀、液體和懸浮物的任何形式，但該組合物優選通過使用在飲品生產中慣常使用的甜味劑、酸味劑、維生素和其它多種成分將該組合物製備成健康飲品。
根據本發明，加氏乳桿菌菌株OLL 2716的活菌可通過例如發酵乳的形式而攝入，發酵乳主要包括酸牛奶(天然味酸牛奶(plainyogurt)，水果酸牛奶，酸牛奶飲料，和冷凍酸牛奶)，乳酸菌飲料，粉狀食品，顆粒食品以及糊狀食品等。當加氏乳桿菌菌株OLL 2716用於製備上述發酵乳品時，該菌株在產品性能方面(貨架壽命，風味，物理性能)特別優異。因此，以發酵乳形式將加氏乳桿菌OLL 2716給藥方法是最理想的。為了製備發酵乳，採用以下菌與加氏乳桿菌菌株OLL 2716一起作為發酵劑的方法是有效的乳桿菌屬中的乳酸菌，鏈球菌屬(Streptococcus)，明串珠菌屬(Leuconostoc)，足球菌屬(Pediococcus)等，長雙歧桿菌屬(Bifidobacterium longum)的雙歧桿菌，短桿菌(B.breve)，嬰兒雙歧桿菌(B.Infantis)，雙叉桿菌(B.bifidum)等，以及酵母等。另外，製備發酵乳的加氏乳桿菌菌株OLL 2716也可用於按製備原培養物，擴大培養用發酵劑和生產用發酵劑這種順序的方法中，還可用作較大細菌量的濃縮發酵劑(冷凍產品或凍乾產品)，該發酵劑可直接接種成為生產用發酵劑或進行產品生產，而不需要擴大培養用發酵劑的步驟。
試驗例1根據卡比爾(Kabir)等人的方法[Gut,41(1)；49-55,(1997)],幽門螺桿菌菌株NCTC 11637在人體胃癌細胞(MKN45)上的附著可由加氏乳桿菌菌株OLL 2716得到抑制。
為了製備幽門螺桿菌菌株CNTC 11637帶螢光標記的細菌溶液，首先，幽門螺桿菌菌株NCTC 11637在含5％FCS(小牛胎兒血清)的Brucella液體培養基中和稍有氧條件下經活化作用進行兩次培養(37℃,72小時)，然後將其用PBS衝洗並懸浮於一種細胞螢光標記工具PKH-2(Dai-Nippon Parmaceuticals,Co)的稀釋液中使終濁度(OD650)為2.0。利用產氣袋Aneropack Helico(Mitsubishi GasChemicals,Co.)進行稍有氧培養來培養該螺桿菌。向1ml該懸浮液中加入50μl螢光標記染料PKH-2，在室溫下反應15分鐘；之後，通過離心分離回收該細菌(每分鐘3000轉(rpm),10分鐘(min))，用Hank’s平衡鹽水溶液(HGS)衝洗，並懸浮於1mlHGS中；形成的該溶液被指定為螢光標記細菌溶液。然後，0.1ml幽門螺桿菌菌株NCTC11637的螢光標記細菌溶液(OD650=2.0)和0.1ml加氏乳桿菌菌株OLL2716的細菌溶液(OD650=4.0)同時加入到0.8ml MKN45的細胞懸浮液中(1×106cell/ml),37℃下有氧震搖1小時。MKN45的細胞懸浮液單用作空白樣(0.8ml MKN45的細胞懸浮液+0.2ml HGS)；加有HGS的溶液代替加氏乳桿菌菌株OLL 2716細菌溶液用作陰性對照樣。經震搖後，加入9ml含15％蔗糖的Dulbecco’s PBS[細胞培養技術第6版(Cell Culture Technique(the six edition)),AsakuraShoten,pp.20(1991)]，該細胞通過離心分離(1000rpm,10min)收集，HGS衝洗，再離心分離(1000rpm,10min)；然後將所得細胞再懸浮於1ml HGS中；將250μl所得懸浮液加入到96-井微量培養板中進行螢光化驗；其螢光強度(激發波長490nm，測量波長530nm)用螢光板讀出器測量。
假定幽門螺桿菌菌株NCTC 11637單獨在胃癌細胞上的附著率定義為100％，那麼在添加加氏乳桿菌菌株OLL 2716的體系中幽門螺桿菌菌株NCTC 11637的附著率為92.8％；因此證明了該細菌菌株對幽門螺桿菌在胃癌細胞上的附著具有抑制作用。試驗例2在加氏乳桿菌菌株OLL 2716抑制幽門螺桿菌菌株NCTC 11637生長的試驗中，幽門螺桿菌菌株NCTC 11637和加氏乳桿菌菌株OLL2716在活化作用下培養兩次並分別接種在含5％FCS以及終菌落形成單位為106CFU/ml和105CFU/ml的200ml Brucella液體培養基(DIFCO)中，37℃下稍有氧培養。幽門螺桿菌菌株NCTC 11637和加氏乳桿菌菌株OLL 2716的活菌數量從培養開始後0,24和48小時進行計數。為了檢測幽門螺桿菌菌株NCTC 11637和加氏乳桿菌菌株OLL 2716，分別採用如下的培養基和培養條件改性Skirrow培養基[馬血(7％),BHI瓊脂(52g)三甲氧苄氨嘧啶(5mg/l),多粘菌素B(2500U/ml),萬古黴素(10mg/l)，桿菌肽(5mg/l)，蒸餾水(1000ml)](37℃,7天，稍有氧培養)，和MRS瓊脂(37℃,48小時，有氧培養)。
結果，幽門螺桿菌菌株NCTC 11637的活菌數量在其單獨培養48小時後增加到約5倍，但是在有加氏乳桿菌菌株OLL 2716共存的情況下，該活菌數量減少到約1/10；這證明了加氏乳桿菌菌株OLL 2716具有抑制幽門螺桿菌菌株NCTC 11637生長的能力(表4)。加氏乳桿菌菌株OLL 2716對抑制幽門螺桿菌菌株NCTC 11637生長的作用
試驗例3已經證明幽門螺桿菌能夠在強酸條件下存活，因為幽門螺桿菌有能力降解脲和產生氨。為了測定加氏乳桿菌菌株OLL 2716在脲存在時對幽門螺桿菌菌株NCTC 11637生長的抑制能力，檢測了該菌株和嗜酸乳桿菌菌株CNCM I-1225在低PH值條件下對幽門螺桿菌菌株NCTC 11637生長的抑制作用。幽門螺桿菌菌株NCTC 11637和加氏乳桿菌菌株OLL 2716或嗜酸乳桿菌菌株CNCM I-1225在活化作用下培養兩次並分別接種在200ml PH為4.0的Brucella液體培養基中於37℃下稍有氧培養，該培養基含有5％FCS,5mM脲和終菌落形成單位分別為105CFU/ml和107CFU/ml。幽門螺桿菌菌株NCTC 11637和加氏乳桿菌菌株OLL 2716或嗜酸乳桿菌菌株CNCM I-1225的活菌數量從培養開始後0,6和12小時進行計數。
結果證明，在脲存在下經過6和12小時培養後，加氏乳桿菌菌株OLL 2716對幽門螺桿菌菌株NCTC 11637的抑制能力比嗜酸乳桿菌菌株CNCM I-1225要高。這亦證明了該細菌菌株即使在脲存在下仍對幽門螺桿菌生長具有高抑制力(表5)。在脲存在下，加氏乳桿菌菌株OLL 2716對抑制幽門螺桿菌生長的作用
實施例1使用加氏乳桿菌菌株OLL 2716製備天然味酸牛奶。更具體地，加氏乳桿菌菌株OLL 2716，保加利亞乳桿菌(L.bulgaricus)JCM1002T和嗜熱酵母(S.thermophilus)ATCC 19258分別以1％的量接種到10％脫脂乳粉的培養基中，37℃培養15小時製備生產用發酵劑。在經過95℃熱處理5分鐘的酸牛奶混合物(SNF:9.5％,FAT:3.0％)中接種1％保加利亞乳桿菌JCM 1002T和1％嗜熱酵母ATCC 19258的發酵劑以及5％加氏乳桿菌菌株OLL 2716的發酵劑；所得酸牛奶混合物在43℃下發酵4小時。在發酵後立即冷卻，之後，加氏乳桿菌菌株OLL 2716，保加利亞乳桿菌JCM 1002T和嗜熱酵母ATCC 19258的活菌數量分別為9.0×107CFU/ml,6.4×107CFU/ml,11.0×108CFU/ml,制出的酸牛奶具有良好的風味和物理性能。該酸奶在10□C儲存2周後，加氏乳桿菌菌株OLL 2716，保加利亞乳桿菌JCM 1002T和嗜熱酵母ATCC 19258的活菌數量分別為3.7×107CFU/ml,2.7×107CFU/ml,10.8×108CFU/ml，加氏乳桿菌菌株OLL 2716的活菌數量只有很少降低。該儲存產品的風味和物理性能俱佳。對照例1使用唾液乳桿菌菌株WB 1004(FERM-15360)製備天然味酸牛奶。更具體地說，採用與實施例1相同的步驟，其不同之處在於用唾液乳桿菌菌株WB 1004(FERM-15360)代替加氏乳桿菌菌株OLL2716。在發酵並冷卻剛剛完成之後，唾液乳桿菌菌株WB 1004，保加利亞乳桿菌JCM 1002T和嗜熱酵母ATCC 19258的活菌數量分別為5.3×107CFU/ml,6.0×107CFU/ml,12.5×108CFU/ml，制出的酸奶具有良好的風味和物理性能。該酸牛奶在10℃儲存2周後，唾液乳桿菌菌株WB1004，保加利亞乳桿菌JCM1002T和嗜熱酵母ATCC19258的活菌數量分別為0.1×107CFU/ml,4.5×107CFU/ml,8.8×108CFU/ml，唾液乳桿菌菌株WB1004(FERM-15360)的活菌數量減小到約1/50。
實施例和對照例1的情況可總結為下表。
試驗實施例4為了測定服用加氏乳桿菌菌株OLL 2716或唾液乳桿菌菌株WB1004(FERM-15360)活菌在體內對幽門螺桿菌的消毒作用，讓無菌老鼠(BALB/c)感染幽門螺桿菌NCTC 11637，劑量為每隻鼠1×109CFU；四周後，單獨給這些受幽門螺桿菌感染的老鼠服用加氏乳桿菌菌株OLL 2716和唾液乳桿菌菌株WB 1004(FERM-15360)，劑量為每隻鼠1×109CFU，第一周餵3次，從第二周至第七周每周餵1次。服用加氏乳桿菌菌株OLL 2716或唾液乳桿菌菌株WB 1004(FERM-15360)八周後，老鼠胃中的幽門螺桿菌數量和加氏乳桿菌菌株OLL2716或唾液乳桿菌菌株WB 1004(FERM-15360)數量分別在改性Skirrow培養基和MRS瓊脂中進行計數，而血清抗幽門螺桿菌抗體效價(滴定值)(在492nm處的吸收)通過酶聯和免疫吸收劑(ELISA)化驗方法進行化驗。
因此，八周後對照組老鼠(只服用幽門螺桿菌)胃中的幽門螺桿菌數量被檢測為105CFU/g，而服用加氏乳桿菌菌株OLL 2716和唾液乳桿菌菌株WB 1004(FERM-15360)活菌的老鼠其胃中的幽門螺桿菌數量被減低至可檢出的極限值(103CFU/g或更低).但是，與對照組老鼠相比，服用加氏乳桿菌菌株OLL 2716的老鼠其抗幽門螺桿菌抗體效價被降低至1/5或更低，與服用唾液乳桿菌菌株WB 1004(FERM-15360)的老鼠相比，該效價仍降低至1/4或更低(表6)。因此，證明了加氏乳桿菌菌株0LL 2716對幽門螺桿菌的消毒作用比唾液乳桿菌菌株WB 1004(FERM-15360)要高。另外還證明加氏乳桿菌菌株OLL 2716在胃中有繁殖能力，因為在服用加氏乳桿菌菌株OLL 2716八周後老鼠中的該服用細菌菌株被檢測為106CFU/g。胃中乳桿菌的繁殖數量和對幽門螺桿菌NCTC 11637的消毒作用
*P＜0.05(謝夫實驗(Scheffe test))試驗例5為了證明加氏乳桿菌菌株OLL 2716在人體中的功效，給年齡在40至60歲的30個幽門螺桿菌呈陽性的人(對象)服用含加氏乳桿菌菌株OLL 2716的酸奶。按照實施例l同樣方法製備的90克(g)酸奶每天服用2次，共8周。對幽門螺桿菌的作用通過脲呼吸試驗，血胃蛋白酶原(Ⅰ)，胃蛋白酶原(Ⅱ)和內窺鏡檢查(6例)。
由此，作為消毒幽門螺桿菌標記的血胃蛋白酶原(Ⅰ/Ⅱ)之比在30人中有26人得到改善；在脲呼吸試驗中，發現28人中有21人得到改進。另外，對參加內窺鏡檢查的6人作了胃細胞中的幽門螺桿菌數量計數；結果表明在所有6人中幽門螺桿菌的數量都減少到服用前的1/10至1/100。參考例1加氏乳桿菌菌株OLL 2716接種到5升(L)MRS液體培養基(DIFCO)中，37℃靜置培養18小時。培養結束後，該培養物在7000轉/分(rpm)下離心分離15分鐘，獲得體積為液體培養物體積1/50的細菌濃縮物。該細菌濃縮物然後與等體積的含10％重量脫脂乳粉和1％重量穀氨酸鈉的分散培養基混合，並將PH值調至7，所得混合物隨後進行凍幹。該凍乾產物粉碎後過60目篩，得到凍幹細菌粉。參考例2根據第13次修訂版《日本藥典指南》的「通用藥物製備規則中『粉劑』的規定」，400g乳糖(根據JP。)和600g土豆澱粉(根據JP.)加入到上述實施例所獲得的1g加氏乳桿菌菌株OLL 2716的凍幹細菌粉中，並均勻混合製備成粉劑。
另一方面，製備含有15％蔗糖和適量酸味劑，風味劑及染料的糖溶液，將其均質，70℃至80℃滅菌20至30分鐘，冷卻至5℃，即為所指定的糖溶液。
將所得的糖溶液和酸奶按65∶35的比例混合，製備出酸奶飲料。
基於以下組合物製備一種抗潰瘍劑(1)50g脫脂乳粉的培養基中的細菌菌株培養物的凍乾產品；(2)90g乳糖；(3)29g玉米澱粉；和(4)1g硬脂酸鎂。
首先，將(1)，(2)和(3)(這裡用17g)混合，再與由(3)(這裡用7g)製備的糊狀物一起造粒。向所得顆粒中加入(3)(這裡用7g)和(4)，所得混合物進行完全混合；該混合物再通過壓片機製備成100片藥片，每一藥片含40mg活性組分。
本發明的優點根據本發明，可以有效地實現對幽門螺桿菌的消毒和/或防止幽門螺桿菌感染，而且沒有副作用。本發明的組合物絕對不存在安全性方面的問題，可以隨意地以乳品和各種其他食品或飲品形式製備，因此，健康人以及小孩和嬰兒，老人，虛弱者以及恢復期病人等都可長期攝取該組合物，該組合物可以提供特別優異的對胃炎和胃潰瘍等病的預防和/或治療作用。
根據細則第13-2條有關保藏微生物的情況1．加氏乳桿菌OLL 27161)微生物進行保藏的保藏機構名稱及地址名稱國際貿易和工業部，工業科技代理處，國家生命科學和人類技術研究所(National Institute of Bioscience and Human-Technology,Agency of Industrial Science and Technology,Ministry of International Trade and Industry)地址1-3,Higashi 1-chome,Tsukuba-shi,Ibaraki-ken,Japan(305-8566)2)在保藏機構的保藏日期1999年5月24日3)保藏時由保藏機構給予的保藏號FERM RP-6999
權利要求
1．一種對幽門螺桿菌具有消毒作用和/或防止幽門螺桿菌感染的食品或飲料產品，該食品或飲料產品包含至少一種對幽門螺桿菌具有高消毒能力的屬於加氏乳桿菌的乳酸菌，含該乳酸菌的原料和其加工的產品。
2．一種對幽門螺桿菌具有消毒作用和/或防止幽門螺桿菌感染的食品或飲品，該食品或飲料產品包含至少一種屬於加氏乳桿菌的乳酸菌，該乳酸菌對幽門螺桿菌具有高消毒能力，耐受低PH環境以及當製備作為口服劑量組合物時具有高存活率，含該乳酸菌的原料和其加工的產品。
3．根據權利要求1或2所述的食品或飲料產品，其中乳酸菌是加氏乳桿菌OLL 2716。
4．根據權利要求1至3任一權利要求所述的的食品或飲料產品，其中含乳酸菌的原料是至少選至以下物質中的一種乳酸菌懸浮物，乳酸菌培養物，乳酸菌培養液，以及來自乳酸菌的發酵乳。
5．根據權利要求1至4任一權利要求所述的的食品或飲料產品，其中該加工的產品是至少選至以下物質中的一種濃縮產品，糊狀產品，幹品(至少一種選自噴霧乾燥產品，凍乾產品，真空乾燥產品和轉鼓乾燥產品)，液體產品以及稀釋產品。
6．根據權利要求1至5任一權利要求所述的的食品或飲料產品，其中食品或飲料產品是健康食品。
7．加氏乳桿菌0LL 2716(FERM BP-6999)。
全文摘要
一種對幽門螺桿菌具有高消毒作用和/或防止幽門螺桿菌感染的食品或飲品包含對幽門螺桿菌具有高消毒能力的加氏乳桿菌OLL2716(FERM BP－6999)作為有效成分。使用乳酸菌製備的食品或飲品,如酸奶等,適於作為食品或飲品長期攝入,該食品或飲品對幽門螺桿菌具有高消毒作用和/或防止幽門螺桿菌感染。
文檔編號A61P31/04GK1306400SQ00800008
公開日2001年8月1日 申請日期2000年1月21日 優先權日1999年6月24日
發明者木村勝紀, 平田晴久, 古賀泰裕 申請人:明治乳業株式會社, 若素製藥株式會社