苯並吡喃胍衍生物,其製備方法,及其藥物組合物的製作方法

2023-07-29 10:11:16 4

專利名稱：苯並吡喃胍衍生物,其製備方法,及其藥物組合物的製作方法
背景技術：
1.本發明領域本發明涉及一種新的苯並吡喃胍衍生物，見式1。本發明也涉及該新化合物的製備方法，及含有一種或多種該化合物作為活性成分的藥物製劑。
本發明也涉及了苯並吡喃胍衍生物的藥物用途，尤其是在心臟、神經細胞或大腦損傷方面的保護，或者器官保護方面的用途，以及抑制NO生成、脂類物質的過氧化作用、血管生成或心臟再狹窄等方面的藥物用途式1 此處的R1，R2，R3，R4，R5，R6，n和*可不同。
2.現有技術描述缺血性心臟病通常是心肌缺血引起的，在此種情況下，由於供需之間的不平衡，與氧的需求量相比，氧氣的供給量明顯下降。大多數情況下，發現冠狀動脈疾病是缺血性心臟病的主要病因。如果冠狀動脈的內徑狹窄，血液供應量減少，從而氧氣的供給量減少，則出現心絞痛、心肌梗塞、急性心癱瘓、心率不齊等症狀。(G.J.Grover，Can.J.Physiol.75，309(1997)；G.D.Lopaschuk et al.，Science Medicine 42(1997))。除冠狀動脈疾病之外，別的複雜因素也能引起缺血性心臟病，因此，除手術方法如經皮冠狀動脈腔內成形術(PTCA)外，也使用藥物進行治療。因此，一些藥物開始被使用，這些藥物包括抗血栓藥物、動脈硬化治療藥物，尤其是一些β阻止劑、硝酸鹽、鈣離子拮鈧劑等，如硝苯吡啶、血栓溶解製劑、阿斯匹林，及血管緊張素轉化酶抑制劑(ACE)等。
與傳統的鉀離子通道開啟工具不同，式2表示的吡喃胍化合物(BMS-180448)可選擇性的作用於位於心臟的ATP敏感性鉀離子通道(KATP)。(K.S.Atwal et al.，J.Mde.Chem.36，3971(1993)；K.S.Atwalet al.，J.Me.Chem.38，1966(1995))人們發現，BMS-180448化合物可以在不明顯降低血壓的情況下對缺血性心臟進行保護，所以，人們就著手尋找一種新的保護心臟的藥物。
式2 完全缺血和局部缺血都可引起細胞的逐漸改變，並可產生大腦損傷。(M.D.Ginsburg，Neuros Scientist 1，95(1995))。即使血流恢復後，氧氣能增強產生自由基的生化反應，這將導致潛在的「再灌注損傷」現象出現。為防止出現缺血-再灌注引起的大腦損傷，必須對缺血期的大腦進行保護，以免再增加損傷，同時必須將病理性的細胞變化降至最小。為此，人們使用了神經保護的藥物，如刺激性胺基酸拮抗劑和抗氧化劑等。
引起各種神經疾病如中風、腦損傷、阿茲海默綜合症、帕金森綜合症、新生兒窒息症、青光眼以及糖尿病性神經疾病等的主要原因是神經細胞受到損傷或死亡。(G.J.Zoppo et al.，Drugs 54，9(1997)；I.Sziraki et al.，Neurosci.85，110(1998))。很多因素都可損傷神經細胞，典型的損傷方式是神經細胞中的鐵離子濃度增加，活性氧增加，過氧化物增加。(M.P.Mattson et al.，Methods Cell Biol.46，187(1995)；Y.Goodman et al.，Brain Res.706，328(1996))。
神經細胞中的鐵離子濃度增加導致大量的反應性羥基出現，大量的氧自由基加快了脂類物質的過氧化作用，因此，神經細胞中就積累了過氧化物。細胞中反應性自由基的積累可產生炎症，如關節炎、動脈硬化症、心肌梗塞、以及神經再生性疾病，如痴呆、由缺血-再灌注或細菌感染產生的內毒素所引起的急性和慢性組織和器官的損傷。
因此，人們尋找一些治療藥物，以減少神經細胞的損傷或死亡，包括抑制脂類物質的過氧化、NO形成，不讓細胞內毒素產生的活性氧出現等。目前有報導說，抗氧化劑可以改善神經細胞中的鐵離子濃度增加而引起的神經細胞的損傷和死亡的狀況。人們一直在努力開發一種能夠阻止因氧化物過多而引起神經損傷的藥物。(Y.Zhang et al.，J.Cereb.Blood Flow Metab.13，378(1993))。
新生兒窒息(IA)是由於傳導過程中暫時缺少氧的供應產生的，據報導，起因是由於產生的能量降低，氧自由基損傷了細胞膜，激動性的神經遞質被釋放出來，細胞內的離子濃度包括鈣離子濃度、鋅離子濃度等發生了改變。IA是一個世界性的問題，如果IA很嚴重，則死亡率就高(大約佔1/3的比率)。[C.F.Loid et.al.Physiology andBehavior 68；263-269(2000)]。此外，也可產生長久的後遺症，如運動障礙、學習障礙、癲癇症、肌張力障礙、大腦遲鈍及痙攣等。
抗氧化酶、別嘌呤醇、維他命C和E、自由基清道夫、激動性神經遞質抑制劑、鈣通道阻滯劑如尼莫地平和氟桂嗪、NO生成抑制劑、高血糖和低體溫治療等均可有助於保護大腦的損傷，但他們的臨床應用同樣受到了限制。因此，需要對新生兒窒息的治療進行更深入的研究。
青光眼是導致失明的一種原因，因為出現了視神經疾病，視神經的特徵發生了變化。人體的視神經是由1百萬個神經軸突組成，主要位於神經節細胞層，有一少部分在內神經層的內部。觀察剝離的視神經外觀，人們推測，青光眼是由於神經節細胞及軸突的死亡和隨後的缺失而引起的。[N.N.Osborne，et.Al.Survey of Ophthalmology，43；suppl.S102-s128(1999)]。用於青光眼治療的神經保護藥物可直接或間接的保護視網膜神經元的不死亡，尤其是神經節細胞不死亡。很多藥物，如NMDA受體拮抗劑、β-阻滯劑、鈣拮抗劑以及抗氧化劑等都能保護因缺血而引起的視網膜神經元的不死亡。
人們目前還不清楚糖尿病引起的神經損傷的病理原因，但存在兩種推測。一種是代謝異常，另一種是周圍神經的血流減少。[K.Naka et.Al.Diabetes Research and Clinical Practice，30153-162(1995)]。臨床上，使用乙醯-L-肉毒鹼刺激脂類物質的代謝，改善受損的神經細胞的感受反應性，使用Prosaptide以釋放嗜中性因子。另外，臨床上還應用美金剛，調節NMDA受體，對血管性痴呆有很好的效果。所以，要治療糖尿病引起的神經疾病需要開發不同作用機理的神經保護藥物。
人類患癌症的比率逐步增加。血管生成即形成新的血管，它被認為是實體瘤增生和轉移的主要過程。(Folkma，J.et al.，J.Biol.Chem.26710931-10934(1992))。血管生成受血管生成的誘導劑和抑制劑的雙重控制。當兩者之間的平衡被破壞，即誘導劑的量大於抑制劑時，則大量的新血管形成。血管生成與各種生理現象密切相關，如胚胎發育、傷口癒合、慢性炎症、血管瘤、糖尿病引起的視網膜疾病、風溼性關節炎、牛皮癬、愛滋病併發症以及惡性腫瘤的增長和轉移等。(Forkman，J.，Klagsbrun.M.Science 235442-447(1987))。血管生成包含一系列過程，如各種細胞的轉移、增殖、分化等，它也是腫瘤增生和轉移的一個重要前提。具體而言，就是因為增加的腫瘤細胞需要從母細胞中形成血管，則腫瘤中的血管生成促進劑就產生刺激作用，使腫瘤內出現血管增生。並且，惡性腫瘤周圍的血管又加快了腫瘤細胞向別的部位轉移。因此，血管生成抑制劑可阻止腫瘤的增生和轉移。作為開發抗腫瘤藥物的一個重複研究領域，人們十分關注尋找誘導劑的拮抗劑和血管生成抑制劑，以發現他們的作用機制。
人們發現，蛋白質，如prostamine，以及腫瘤壞死因子，即從軟骨組織中提取的因子，以及血管生成抑制劑類固醇可的松，和其它各種類固醇衍生物都是很好的血管生成抑制劑。另外，氫化可的松與肝素合用，則具有抗血管生成作用。(Lee，A.et al.，Science 2211185-1187(1983)；Crum，R.et al.，Science 2301375-1378(1985))。但是，由於這些藥物具有細胞毒性，所以，在治療癌症方面也存在一些潛在的問題。
由於在血管內壁中動脈粥樣硬化斑的生長，動脈粥樣患者血管內徑狹窄，經皮冠狀動脈介入法在治療冠狀動脈狹窄方面起到很大作用，治療成功率超過95％。但是，實施介入治療之後的6個月內，有20-50％的患者又出現了明顯的動脈狹窄現象。(Bult，H.Tips，21；274-279(2000))。雖然人們還沒有完全弄清再狹窄的生物機制，但再狹窄的主要細胞的作用機理包括血栓、血管平滑肌細胞的遷移和增生、及偶然的疤痕等。動脈硬化症有各種形式，再狹窄的形成不完全依賴於導致動脈粥樣化的血漿濃度或成分。
要尋找再狹窄病症的有效療法很困難，因為人們還沒有完全清楚再狹窄的生物機制，且缺少合適的動物模型。近來，臨床試驗證明，某些藥物，如糖蛋白IIb/IIIa拮抗劑，抗氧化劑丙丁酚等有潛在的臨床效用。(Bult，H.Tips，21；274-279(2000))。由於再狹窄與過度增生有關，所以，人們著手開發能降低血管平滑肌細胞增生的藥物。
發明人員在開發具有上述藥效的化合物的研究過程中發現，式1表示的苯並吡喃胍衍生物在缺血-再灌注和低氧損傷方面具有很好的心臟保護和神經保護作用。該化合物還具有其它藥效，包括保護神經細胞、防止脂類物質的過氧化作用、防止反應氧的形成、保護局部缺血的視網膜、改善患糖尿病大鼠受損感受傷害的反應，抑制NO的形成，以及抑制血管生成作用和再狹窄現象。本發明化合物可以用於防治與心血管循環有關的各種疾病，如心肌梗塞、充血性心臟衰竭，中風，神經損傷如新生兒窒息、青光眼、糖尿病引發的神經疾病和腦損傷，氧自由基引發的疾病如神經變性疾病和動脈硬化症，血管生成如癌症和糖尿病引發的視網膜疾病，或再狹窄；也可用來保存器官，如心臟、腎臟、肝臟和組織，也可用來保護在大的心血管外科手術中所用的器官。
本發明的另一目的是提供該苯並吡喃胍衍生物的製備方法。
本發明的另一目的是提供苯並吡喃胍衍生物的藥物用途。尤其是提供可用來保護局部缺血和缺氧引發的心臟和腦損傷、具有神經保護作用、抑制NO的形成、抑制脂類物質的過氧化作用、抑制反應氧的生成、抑制血管生成和再狹窄現象形成的苯並吡喃胍衍生物的用途。本發明的詳細描述本發明提供了苯並吡喃胍衍生物，見下式1，以及該苯並吡喃胍衍生物的藥用鹽。
式1 此處，R1可為H，滷素，CF3，NO2，CN，ORa，O(C＝O)Ra，COORa，NH2，NHS(O)mRa，NH(C＝O)Ra或S(O)mRa；Ra可為直鏈或支鏈的C1-C4烷基或芳基，m為整數0-2，R2可為直鏈或支鏈的C1-C4烷基，R3可為CH2ORa， 或 Ra如前所述；Rb和Rc各自獨立，分別代表直鏈或支鏈的C1-C4烷基；Z可為直鏈或支鏈的C1-C5烷基。
R4為OH、H、滷素、ONO2或O(C＝O)Ra；Ra如前所述，R5和R6各自獨立，分別代表H、滷素、直鏈或支鏈的C1-C3烷基、ORa，CX3，NO2，CO2Ra，-(C＝O)Ra或SO3Ra，Ra如前所述；X代表滷素；n為整數0-2。
*為手性中心。
在式1中，理想的情況是R1為NO2，CN，NH2，或S(O)mRa；Ra為直鏈或支鏈的C1-C2烷基或芳基；m為整數0-2，R2為CH3，R3為 或 Rb和Rc各自獨立，分別為直鏈或支鏈的C1-C3烷基；Z為直鏈或支鏈的C1-C5烷基，R4為OH，H或O(C＝O)Ra；和Ra為直鏈或支鏈的C1-C3烷基、ORa，CX3或NO2；R5和R6各自獨立，分別為H、滷素、直鏈或支鏈的C1-C3烷基、ORa、CX3或NO2；Ra為直鏈或支鏈的C1-C3烷基；X為滷素；n為整數0-2。
本發明包括能夠從式1表示的苯並吡喃胍衍生物製備而得的所有溶劑化物和水合物，以及式1表示的苯並吡喃胍衍生物和它們的藥用鹽。
本發明還包括所有單個的立體異構體，如在2、3和4位具有1個或多個手性中心的非對映純化合物或對映純化合物，以及式1表示的苯並吡喃胍衍生物的外消旋混合物或非對映異構體混合物。
當2、3和4位上有三個手性中心時，本發明3，4-二氫苯並吡喃衍生物可用光學異構體(I1)，(I2)，(I3)和(I4)表示。(見下式3)式3 此處的R1，R2，R3，R4，R5，R6和n如前所述。
本發明所述的理想的化合物為1)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；2)(2R，3R，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；3)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-氯苯基)胍；4)(2R，3R，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-氯苯基)胍；5)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-硝基苯)胍；6)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-三氟甲基苯)胍；
7)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-三氟甲基苯)胍；8)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苯)胍；9)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苯)胍；10)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；11)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；12)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-氯苯基)胍；13)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-氯苯基)胍；14)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-三氟甲基苯)胍；15)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-三氟甲基苯)胍；16)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苯)胍；17)(2S，3R，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苯)胍；18)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苯)胍；19)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苯)胍；20)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苯)胍；21)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苯)胍；
22)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；23)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；24)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；25)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；26)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；27)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；28)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-羥甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；29)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-羥甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；30)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；31)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；32)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(2-氯苯基)胍；33)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(2-氯苯基)胍；34)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(2-三氟甲基苯)胍；35)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(2-三氟甲基苯)胍；36)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(2-氯苯基)胍；
37)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(2-氯苯基)胍；38)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-乙醯氧基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；39)2S-N″-氰基-N-(6-硝基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；40)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；41)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-乙酸氨-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；42)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-甲基磺醯氨-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；43)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；44)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-氰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；45)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；46)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-氰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；47)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-溴-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；48)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3，4-二甲氧基苯)胍；49)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3，4-二甲氧基苯)胍；50)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苯)胍；51)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苯)胍；
52)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-硝基苯)胍；53)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-三氟甲基苯)胍；54)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-三氟甲基苯)胍；55)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-甲基磺醯氧-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；56)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-甲基磺醯氧-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；57)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；58)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；59)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；60)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]二氧戊環-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；61)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]二氧戊環-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；62)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]二噁烷-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；63)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]二噁烷-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；64)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]-5，5-二甲基二噁烷-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；65)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]-5，5-二甲基二噁烷-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；66)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二乙氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；
67)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二乙氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；68)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-甲氧羧基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；69)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-甲氧羧基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；70)(3S，4R)-N″-氰基-N-(8-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；71)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(8-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；72)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(8-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；本發明所述的更為理想化合物為(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；及(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-乙醯氧基-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；式1所表示的化合物可與藥學或生理學可接受的游離酸作用，製成藥用鹽。這些鹽如下所示，但不僅僅限於所示的部分與無機酸作用形成的鹽如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磺酸、磷酸、錫酸等，以及與有機酸作用形成的鹽，枸櫞酸、醋酸、乳酸、馬來酸、富馬酸、葡糖酸、甲磺酸、乙二醇酸、琥珀酸、酒石酸、4-甲苯磺酸、半乳糖醛酸、雙羥萘酸、穀氨酸、天冬氨酸等。
本發明的化合物酸性鹽可用常規方法製備，如將式1化合物溶解於過量酸溶液中，然後用水溶性有機溶劑如甲醇、乙醇、丙酮或乙腈進行沉澱。也可以將等量的式1化合物和在水或醇如乙二醇-甲醚中的酸同時加熱，然後蒸發、乾燥混合物，或使用抽濾器過濾沉澱出的鹽。
式1化合物也可為藥學上可接受的銨、鹼金屬鹽或鹼土金屬鹽。可製得式1化合物的鹼金屬鹽或鹼土金屬鹽，如將式1化合物溶解於等摩爾量的鹼金屬或鹼土金屬氫氧化物溶液中，濾除不溶解物質，蒸發過濾物至乾燥。鈉鹽、鉀鹽或鈣鹽是可藥用的。用適當的銀鹽如硝酸銀與鹼金屬鹽或鹼土金屬鹽反應，可製得相應的銀鹽化合物。
另外，本發明提供了製備式1所示的苯並吡喃胍衍生物的工藝方法。尤其提供了製備式1所示苯並吡喃胍衍生物的工藝方法，見方案1(製備方法I)方案1 此處的R1，R2，R3，R4，R5，R6和n如前所述。
本發明提供了製備式1苯並吡喃胍衍生物的製備工藝，見方案2(製備方法II)方案2 此處，R1，R2，R3，R4，R5，R6和n如前所述。
本發明還提供了利用方案1或方案2製得的化合物(I′)製備式1的苯並吡喃胍衍生物的製備工藝，見方案3。
方案3 此處的R1，R2，R3，R4，R5，R6和n如前所述。
利用方案3的反應可以對R1，R2，R3，R4，R5，和R6的取代基進行修飾，或形成3，4-雙鍵。
以相應的光學異構體作為反應起始物，可以製備式1衍生物的光學活性異構體。
以外消旋混合物作為反應起始物，可製備式1的外消旋混合物，並且，可將外消旋混合物分離為單個的光學異構體。可使用普通的手性色譜柱或再結晶法分離該光學異構體。
使用下述反應和技術可合成式1化合物。將溶劑與適當的反應物在適當的反應條件下，進行反應。I.反應起始物的製備方案1或方案2的反應起始物是氨基醇化合物(III)，可用方案4的反應製備。
方案4 此處，R1，R2和R3分別如前所述，(OZ)為離去基團，Hal代表滷素原子。
方案4所述的環氧化物(II)的製備方法可見美國專利No.5,236,935和由本發明的發明者獲得的韓國專利No.096,546。
同樣，環氧化合物(II)也可用丙醚衍生物進行製備。(J.Med.Chem.26，1582(1983))。
(1)烯烴化合物(VIII)的製備烯烴化合物(VIII)以對映體(VIII1和VIII2)的形式存在，如式4所示。
式4 此處，R1，R2和R3如上所述。
可分別得到烯烴化合物(VIII)的光學活性化合物(VIII1)和烯烴化合物(VIII2)，見式4。本發明的發明者使用韓國專利申請No.96-7399所述的方法製備烯烴化合物(VIII)。
方案5描述了使用醇化合物(VII)製備烯烴化合物(VIII)具體工藝步驟。
方案5
此處，R1，R2和R3如上所述。
(2)環氧化物(II)的製備按照方案6所示，分別以方案5製得的化合物(VIII1)和(VIII2)作為原料，製備環氧化物，使用化合物(VIII1)製備環氧化物(II1)和(II2)，使用化合物(VIII2)製備環氧化物(II3)和(II4)。
方案6 此處，R1，R2和R3如上所述。
環氧化物(II1)和(II2)能分離成單個的光學異構體，所有分離出的環氧化物或其混合物可在下一步反應中使用。同樣，也可分離環氧化物(II3)和(II4)，所有被分離的環氧化物或其混合物可在下一步反應中使用。
可使用美國專利No.5,236,935和由本發明人獲得的韓國專利No.096,546中所述的工藝方法，分別用烯烴(VIII1)和(VIII2)製備環氧化物(II1)和(II2)以及環氧化物(II3)和(II4)。
也可用Mn(III)salen的環氧化催化劑，用石蠟(VIII1)或(VIII3)分別製備環氧化物的光學異構體(II1)，(II2)，(II3)和(II4)。(E.N.Jacobsenet al.，Tetrahedron Lett.，38，5055(1991))。使用(R，R)-Mn(III)salen做催化劑時，可將烯烴(VIII1)製成環氧化物(II1)，將石蠟(VIII2)製成環氧化物(II3)。使用(S，S)-Mn(III)salen做催化劑時，可將石蠟(VIII1)製成環氧化物(II2)，將烯烴(VIII2)製成環氧化物(II4)。該環氧化反應在二氯甲烷和水的混合物中進行，NaOCl做氧化劑。
(3)氨基醇化合物(III)的製備在方案4中，將環氧化物(II)和氨氣(NH3)或氫氧化銨(NH4OH)在適當的溶劑中反應，製備氨基醇(III)。首選溶劑為醇，如甲醇、乙醇、異丙醇等。反應溫度範圍5℃-所使用溶劑的沸點。
分別以環氧化物(II1)，(II2)，(II3)和(II4)作為反應起始物，則分別得到氨基醇(III1)，(III2)，(III3)和(III4)。以環氧化物(II1)和(II2)的混合物作為反應起始物，則可製得氨基醇(III1)和(III2)的混合物。以環氧化物(II3)和(II4)的混合物作為反應起始物，則可製得氨基醇(III3)和(III4)的混合物。
式5 此處R1，R2和R3分別如前所述。
式6 此處R1，R2和R3分別如上所述。II.製備方法I式1化合物的製備步驟包括將氨基醇(III)與硫脲(IV)在適當的縮合劑存在下，在適當的溶劑中反應。即製得式1中R4為OH的化合物(I′)，所述縮合劑包括碳二亞胺型縮合劑，如1-[3-(二甲氨基)丙基]-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，及N，N′-二環己基碳二亞胺等，水溶性碳二亞胺型縮合劑為最佳。
相對於氨基醇化合物(III)而言，最佳使用1-3當量的縮合劑。而且，相對於氨基醇化合物(III)而言，優選使用1-2當量的硫脲化合物(IV)。
最佳溶劑為二氯甲烷、氯仿、二甲基甲醯胺、二甲亞碸、四氫呋喃、1，2-二氯乙烷、二氧雜環己烷等。
反應溫度範圍5℃-40℃。
以氨基醇(III)化合物的單一立體異構體作為反應起始物，則可分別得到與反應起始物具有相同構型的產物。也就是說，式1所述的化合物(I1)，(I2)，(I3)和(I4)可分別由氨基醇化合物(III1)，(III2)，(III3)和(III4)製得。以氨基醇(III1)和(III2)的混合物作為反應起始物，可製成(I1)和(I2)的混合物。以氨基醇(III3)和(III4)的混合物作為反應起始物，可製成(I3)和(I4)的混合物。對式1化合物的混合物進行分離，得到分離出的光學異構體。可用普通的色譜柱或重結晶法分離這些光學異構體。
按照方案7所述，用異氰酸酯(IX)和氰化亞氨鈉(NaHNCN)在乙醇中反應，製備上述反應所需的硫脲化合物(IV)。
方案7 此處R5，R6和n分別如前所述。III.製備方法II另一種製備式1化合物的方法為1)在鹼性條件下，氨基醇(III)與氰基碳亞胺酸二苯酯(X)反應，生成化合物(V)(步驟1)；2)在適當的溶劑中，化合物(V)與適當的胺反應，生成化合物(I′)(步驟2)。
該反應製成的式1化合物(I′)中的R4為OH。
在步驟1中，可使用各種無機鹼和有機鹼。無機鹼如CaCO3，NaOH，KOH，Na2CO3，NaHCO3等。有機鹼包括醇的金屬鹽，如甲醇鈉(CH3ONa)，乙醇鈉(CH3CH2ONa)等；醋酸鈉(CH3COONa)；氨的金屬鹽；雙環胺，如1，8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)，1，5-二氮雜雙環[4.3.0]壬-5-烯(DBN)等；三乙胺；N，N-二異丙基乙胺；吡啶；二甲基吡啶；N，N-二甲基苯胺；4-(二甲基氨)-吡啶；1，4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷(DABCO)等。最佳的叔胺為三乙胺、N，N-二異丙基乙胺、吡啶、1，8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-6-烯、4-(二甲基氨基)-吡啶等。
相對氨基醇(III)而言，最好使用1-3當量的鹼。相對於氨基醇(III)而言，最好使用1-2當量的氰基碳亞胺酸二苯酯(X)。
優選所用溶劑為醇，如乙醇、異丙醇等，二甲基甲醯胺(DMF)、二甲亞碸(DMSO)、氯仿等。
反應溫度的最佳範圍是5℃至所用溶劑的沸點。
在步驟2中，相對氨基醇(III)而言，最佳使用1-5當量的胺化合物(VI)。
反應溶劑的實例為醇，如乙醇、異丙醇等，二甲基甲醯胺(DMF)、二甲亞碸、氯仿、二氯甲烷、四氫呋喃(THF)等。
反應溫度優選保持在5℃至所用溶劑的沸點的範圍內。
步驟2可在鹼性溶液中反應，所用的鹼的實例如上所述。
以氨基醇(III)的各光學異構體做為反應起始物，可得到相應的具有相同構型的產物(I′)。用氨基醇(III1)和(III2)的混合物做為反應起始物，則可得到化合物(I1)和(I2)的混合物。用氨基醇(III3)和(III4)的混合物做為反應起始物，則可得到化合物(I3)和(I4)的混合物。可分離這些光學異構體的混合物，得到化合物(I′)的單一光學異構體。可用普通的色譜柱或重結晶法分離光學異構體。IV.用化合物(I′)製備化合物(I)在方案3反應中，取代基R1，R2，R3，R4，R5或R6可被修飾成其它的官能團，並可在3，4-位形成雙鍵。在此反應中，化合物(I′)為反應起始物，由上述方案1或方案2製備。
反應起始物、反應物以及反應條件根據產物的結構來確定，也就是說，R1，R2，R3，R4，R5和R6是什麼取代基，以及是否在3，4-位形成雙鍵來確定。本發明包括了所有的可以製備式1化合物的所有可能的反應類型、反應物和反應條件。
按照方案3流程製備式1化合物的一些製備工藝將在下面詳細描述，但，本發明並不僅僅限於這些過程。
(1)在R4位引入乙醯氧基如下方案8所示，在適當催化劑存在的條件下，在適當溶劑中，乙酸酐和化合物(I′)反應，可在R4位引入乙醯氧基。
方案8 此處R1，R2，R3，R4，R5，R6和n如前所述。
在前面已經提到了比較好的鹼，最佳的鹼為三乙胺、吡啶或N，N-二異丙基乙胺。
比較好的催化劑是4-(二甲基氨基)吡啶。
相對化合物(I′)而言，使用1-3當量的鹼比較好。而且，相對於化合物(I』)而言，優選使用0.05-0.5當量的催化劑。
比較好的溶劑為二氯甲烷、氯仿、四氫呋喃、乙腈等，反應溫度0-40℃較好。
(2)在3，4-位引入雙鍵如方案9所示，用氫原子取代R4，按上述方案8製備流程製備的乙酸酯(Ia)，在適當的溶劑中與適當的鹼反應，則在3，4-位形成雙鍵。
方案9 此處R1，R2，R3，R4，R5，R6和n如前所述。
使用的較好的鹼前面已經討論過。最佳的是1，8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯、1，5-二氮雜雙環[4.3.0]壬-5-烯、或1，4-二氮雜雙環[2.2.2]辛烷等。
相對化合物(Ia)而言，使用1-3當量的鹼比較好。
理想溶劑為甲苯、苯、二甲苯、二氧雜環己烷等。理想反應溫度範圍5℃-溶劑的沸點。
(3)在R1引入NH2基式1化合物(Id)中，R1為NH2，可按方案10所示，對R1為NO2的化合物(Ic)進行還原而製得。
方案10 此處R2，R3，R5，R6和n如前所述。
在適當溶劑中，用金屬如鉑、鈀、碳載鈀(Pd/C)、阮內鎳等作催化劑，通過氫化反應，將NO2還原成NH2。理想溶劑為醇，如甲醇、乙醇等、和乙酸乙酯。
也可用還原劑將NO2還原成NH2，如在CuSO4，Cu(OAc)2，CoCl，SnCl2或NiCl2存在的情況下，用NaBH4還原。此時，理想的溶劑為水和甲醇的混合物，理想的反應溫度為室溫。
(4)在R1處引入NH(C＝O)Ra製備R1為NH(C＝O)Ra的式1化合物時，可在鹼性條件下，將按上述方案10所示製備的化合物(Id)和醯氯或酸酐反應而得。
理想的鹼前面已經論述。比較理想的鹼為三乙胺、N，N-二異丙基乙胺、吡啶或4-(二甲基氨基)吡啶。理想溶劑為二氯甲烷、氯仿、二甲亞碸、二甲基甲醯胺、四氫呋喃和二氧雜環己烷。
(5)在R1引入-NHS(O)mRa製備R1為-NHS(O)mRa的式1化合物時，可在鹼性條件下，將按上述方案10所示製備的化合物(Id)和烷基磺醯氯或芳基磺醯氯反應而得。
理想的鹼前面已經論述。比較理想的鹼為三乙胺、N，N-二異丙基乙胺、吡啶或4-(二甲基氨基)吡啶。理想溶劑為二氯甲烷、氯仿、二甲亞碸、二甲基甲醯胺、四氫呋喃和二氧雜環己烷。
此外，本發明還提供了含有權利要求1所述的苯並吡喃胍衍生物或他們的藥用鹽作為活性成分的藥物組合物。尤其是具有保護心臟、保護神經細胞或保護大腦不受損傷，或用於器官保存、抑制NO的生成，抑制脂質過氧化反應，或抑制血管增生和再狹窄現象出現的藥物組合物。
用大鼠的離體動脈做實驗，則與對照品KATP的開啟工具如克羅卡靈(Croma Kalim)和BMS-180448相比，本發明化合物具有明顯的弱血管舒張作用。KATP的開啟工具通過作用於心臟，產生心臟保護作用，通過影響平滑肌內的KATP，產生血管舒張作用。血管舒張作用不是必須的，在缺血的情況下還應當禁止有這種作用，如對組織進行灌注時，就有危險。換句話說，也就是這些化合物的血管舒張作用將限制它們在治療心肌缺血方面的應用。因此，本發明化合物幾乎沒有血管舒張作用，是具有心臟選擇性的高安全範圍的心臟保護藥物。
另外，還證明了本發明化合物的抗缺血活性，及在心臟選擇等方面具有明顯改善。在麻醉大鼠的缺血性心肌損傷模型中，與對照品BMS-180448相比，本發明化合物具有相同或更好的抗心肌缺血作用。再者，與BMS-180448相比，本發明化合物具有明顯的弱血管舒張活性，所以，與常用藥物相比，應為心臟保護劑的首選藥物。另外，在麻醉的狗的缺血性心肌損傷模型中，本發明化合物可明顯地減少梗塞範圍，這一作用以危險百分比(％IZ/AAR)表示，此作用優於對照品BMS-180448。
如前所述，本發明化合物幾乎不產生血管舒張作用，但在各種動物體內可產生很好的抗心肌缺血活性，所以，可被用於防治與心肌缺血有關的疾病，如缺血後收縮功能紊亂，同時也可被用作心肌梗塞、心絞痛和充血性心臟衰竭的心臟保護劑。
另外，本發明化合物還具有保護神經細胞作用。具體的說，本發明化合物可保護神經細胞免受鐵的劑量依賴性的氧化損傷。同樣，對於糖尿病大鼠而言，使用熱板通過改善受損的MNCV(運動神經傳導速度)和疼痛反應，表明本發明化合物也可防止視網膜細胞在缺血損傷劑量依賴性下的死亡，以此顯示出本發明化合物具有神經保護作用。在質子MRS(核磁共振光譜)中，通過降低脂質/NAA(N-乙醯基天冬氨酸)和脂質/Cr(肌氨酸)的值，本發明化合物可保護新生大鼠免受缺氧腦損傷。因此，本發明化合物也可用作神經保護製劑，用於治療因神經細胞的凋亡或死亡而引起的神經性疾病，如中風、大腦痴呆症、新生兒窒息、青光眼、糖尿病性神經病、以及腦外傷等。
另外，本發明化合物還可抑制大鼠動脈平滑肌細胞(A7r5)中的由鐵或銅和低密度脂蛋白的氧化作用而出現的脂質的過氧化反應，當加入H2O2後，其抗氧化效果更加明顯。另外，在ORAC(氧自由基吸收能力)實驗中，用AAPH(2.2′-偶氮(2-氨基丙烷)二氫二氯)作為自由基產生劑，本發明化合物還可抑制A7r5和HUVEC細胞中由H2O2引起的ROS(反應性氧)，並消除氧自由基。
另外，本發明化合物還具有抗氧化作用，可用於阻止脂質的過氧化反應，並可有效治療因神經細胞中自由基的種類積累而引起的神經疾病，如神經變性性疾病(中風和痴呆)、動脈硬化症及炎症等。
再者，本發明化合物還抑制NO(一氧化氮)的形成，NO的形成是由內毒素如具有劑量依賴性的脂多糖(LPS)等引發的。本發明化合物是NO生成抑制劑，可有效治療炎症，如關節炎、心肌梗塞、動脈硬化及痴呆等，這些是由於細胞內NO積累，引起細胞凋亡或死亡，對組織或器官造成了損傷。
本發明化合物可有效保護大腦免受缺血-再灌注損傷。本發明化合物優於對照物MK801。接受MK801治療的大鼠出現了運動功能降低的副反應，而用本發明化合物治療大鼠，沒有對運動變化產生明顯副反應。因此，本發明化合物可用作腦缺血-再灌注損傷的神經保護藥物，並可有效治療因腦缺血損傷引起的各種疾病，如血栓引起的缺血性腦血管閉塞症。
在血管緊張素II引發的新血管生成實驗中，本發明化合物可有效抑制血管增生，尤其是，按照劑量依賴性方式可幾乎完全抑制新血管的形成。因此，本發明化合物可用作血管增生抑制劑，用來治療因血管增生引起的各種疾病，如風溼性關節炎、牛皮癬、愛滋病綜合症、癌症。
在[3H]-胸苷合成實驗中，本發明化合物通過抑制DNA的合成，明顯抑制血管平滑肌細胞的分裂。所以，本發明化合物可用來防治再狹窄症，該症狀通常在經皮冠狀動脈介入術之後出現。
本發明化合物可用來保護保存的器官，如心臟、腎臟、肝臟和組織，在大的心血管外科手術中可用來保護器官。
本發明還包括藥物製劑，該藥物製劑中除含有無毒的、適當的惰性藥物添加劑之外，含有1種或多種本發明的活性成分，本發明還包括該藥物製劑的製備工藝。
本發明包括藥物製劑的劑量單位，對每個製劑的劑量單位而言，如片劑、包衣片劑、膠囊、丸劑、栓劑和安瓿，含有一種以上的相當於個體劑量的一部分或多倍的活性成分。如劑量單位中可含有個體劑量需要的活性成分的1，2，3或4倍，或1/2，1/3或1/4倍。理想的劑量單位是含有一定量的活性成分，適於一次使用，或含有相當於一日劑量的全部、一半劑量、1/3劑量或1/4劑量。
非毒性的惰性的適當的藥物賦形劑包括固態、半固態或液態的稀釋劑、填充劑和各種類型的藥物添加劑等。
理想的藥物劑型為片劑、包衣片、膠囊、丸劑、顆粒劑、栓劑、溶液、混懸液、乳液、糊劑、軟膏劑、凝膠劑、乳膏、洗液、撲粉和噴劑。
片劑、包衣片、膠囊、丸劑、顆粒劑除含有活性成分外，還可有含有多個添加劑，如(a)填充劑和稀釋劑，如澱粉、乳糖、蔗糖、葡糖、甘露醇和矽酸；(b)粘合劑，如羧甲基纖維素，藻酸鹽、明膠及聚乙烯吡咯烷酮；(c)溼潤劑，如甘油；(d)崩解劑，如瓊脂，碳酸鈣和碳酸鈉；(e)溶解緩釋劑，如石蠟；(f)吸收促進劑，如季銨化合物；(g)潤溼劑，如十六醇、甘油一硬脂酸酯；(h)吸附劑，如滑石粉、硬脂酸鈣以及固態的聚乙二醇；或上述(a)至(i)所列的物質的混合物。
片劑、包衣片、膠囊、丸劑、顆粒劑採用常規的包衣和膠殼製備而成，任意使用乳化劑；也可製成能釋放活性成分或只在腸內某一部位釋放活性成分的製劑，如需要，按延遲釋放的方式進行，如用聚合物和蜂蠟製成包埋組合物等。
如需要，可使用上述一種或多種賦形劑也可將一種或多種活性成分製成微膠囊。
栓劑中，除活性成分或藥物成分外，還含有常規的水溶性或水不溶性賦形劑，如聚乙二醇、脂肪，如可可脂，及高級酯(如C16-脂肪酸與C14-醇形成的酯)或這些物質的混合物。
乳膏、糊劑、軟膏劑、凝膠劑中，除活性成分或藥物成分外，還含有常規的賦形劑，如動植物脂肪、蜂蠟、石蠟、澱粉、黃芪膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、矽樹脂、皂土、矽酸、滑石、氧化鋅或它們的混合物。
撲粉和噴劑中，除活性成分或藥物成分外，可含有常規賦形劑如乳糖、滑石、矽酸、氫氧化鋁、矽酸鈣、聚醯胺粉末，或它們的混合物。噴劑中通常還含有常規的拋射劑，如含氯氟烴。
溶液製劑和乳液製劑中，除活性成分或藥物成分外，可含常規賦形劑如溶劑、增溶劑和乳化劑，如水、乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苄基醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲醯胺、油脂、尤其是棉花子油、花生油、玉米胚油、橄欖油、蓖麻油、芝麻油、甘油、正丙三醇、四氫糠醇、聚乙二醇、山梨聚糖的脂肪酸酯，及它們的混合物。
若是非經腸用藥，則溶液與乳液也可製成與血液等滲無菌形式。
混懸劑中，除活性成分或藥物成分外，可含常規賦形劑，如液體稀釋劑，如水、乙醇、丙二醇，及懸浮劑，如乙氧基化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和山梨酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、皂土、瓊脂-瓊脂、黃芪膠，或它們的混合物。
上述製劑也可含有著色劑，防腐劑和改善味道的添加劑，如薄荷油、銨樹油和甜味劑，如糖精。
在上述藥物製劑中，藥用活性成分的百分比濃度是約0.1-99.5，理想範圍是佔總物質重量的約0.5-95％。
上述藥物製劑中，除含有本發明化合物外，也可含有其它藥物活性化合物。
按常規的已知方法製備上述藥物製劑，如將活性成分或各組分與賦形劑進行混合。
以上提及的製劑可由人和動物使用，可口服、直腸用藥、注射用藥(靜脈注射、肌肉注射或皮下注射)、腦池內注射、陰道用藥、腹腔內用藥或局部用藥(撲粉、軟膏、滴劑)，也可用於中空體和體腔的感染症的治療。適當的製劑為注射用溶液、口服治療的溶液或混懸液，凝膠，輸注劑、乳液、軟膏或滴劑，眼用和皮膚用製劑、銀鹽或其它鹽、滴耳劑、眼用軟膏、撲粉或溶液，可用於局部治療。對動物而言，通過飲食或喝水來用藥比較合適。
凝膠、散劑、撲粉、片劑、緩釋片、預混劑、濃縮劑、顆粒劑、小糖丸、大藥丸、膠囊、氣霧劑、噴劑、和吸入劑等可為人、動物使用。本發明化合物可與其它載體物質結合，如塑料(局部治療用的塑料鏈)、膠原質或骨固物等。
已經證明，人類服用本發明所述的活性成分在達到每24小時服用的總量為0.1-100mg/kg體重時，理想情況是，每24小時服用0.1-20mg/體重時有效，若適當，採用上述幾個單劑量，則可達到希望的治療效果。當然，有時也可偏離上述劑量，具體地講，可根據患者體重和體質情況、病情的性質和嚴重程度、藥物製劑的特性及給藥的情況和給藥期間的長短等情況而進行變化。
在一些情況下，可服用小於上述劑量的活性成分，在另外一些情況下，則必須給藥大於上述的劑量的活性成分。理想的藥物劑量和所需活性成分的用藥方式由專家根據自己的專業知識確定。
使用IR光譜法、UV光譜法、NMR光譜法、質譜法、液相色譜法、X-光衍射法、旋光分析法和元素分析法對本發明化合物的分子結構進行了鑑定。
製備例方案1或方案2中的起始反應物(III)用下述製備例製備。製備例1製備(2R，3R，4S)-6-硝基-2-甲基-2-二甲氧甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃和(2R，3S，4R)-6-硝基-2-甲基-2-二甲氧甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃(步驟1)製備(2R)-6-硝基-2-甲基-2-二甲氧甲基-3，4-環氧基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃在溶於1L丙酮的75g(0.28mol)的(2R)-6-硝基-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-1-苯並吡喃的溶液中，加水1L，再將84g(0.99mol)碳酸氫鈉加入該混合物，攪拌混合物10分鐘，再加入174g(0.28mol)過硫酸氫鉀製劑，強烈攪拌。每15分鐘，加入碳酸氫鈉和過硫酸氫鉀製劑，共3次。過濾反應混合物，減壓除丙酮，用乙酸乙酯(500ml×2)萃取殘留物，有機層用無水硫酸鎂乾燥，過濾，濃縮，用矽膠色譜柱純化(正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)，得76g(產率95％)所需的白色固體化合物。
(步驟2)製備(2R，3R，4S)-6-硝基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃和(2R，3S，4R)-6-硝基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃將步驟1製得的8.8g環氧化物溶於250ml飽和氨乙醇中，室溫攪拌反應混合物7天。除溶劑，用矽膠色譜柱純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶4)殘留物，回收2.58g反應起始物，得到為外消旋混合物的反應產物5.6g(產率60％)。製備例2製備(2S，3R，4S)-6-硝基-2-甲基-2-二甲氧甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃和(2S，3S，4R)-6-硝基-2-甲基-2-二甲氧甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃(步驟1)製備(2S)-6-硝基-2-甲基-2-二甲氧甲基-3，4-環氧-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃在溶於100ml丙酮中的5g(19mmol)的(2R)-6-硝基-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-1-苯並吡喃的溶液中，加水100ml，再將5.6g(66mmol)碳酸氫鈉加入該混合物，攪拌混合物10分鐘，再加入11.6mg(19mmol)過硫酸氫鉀製劑，強烈攪拌。每15分鐘，加入碳酸氫鈉和過硫酸氫鉀製劑，共3次。過濾反應混合物，減壓除丙酮，用乙酸乙酯(100ml×2)萃取殘留物，有機層用無水硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮，用矽膠色譜柱純化(正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)，得5.1g(產率97％)所需的白色外消旋混合物固體。
(步驟2)製備(2S，3R，4S)-6-硝基-2-甲基-2-二甲氧甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃和(2S，3S，4R)-6-硝基-2-甲基-2-二甲氧甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃將步驟1製得的5.1g環氧化物溶於100ml飽和氨乙醇中，室溫攪拌反應混合物7天。除溶劑，用矽膠色譜柱純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶4)殘留物，得到4.4g目的化合物(產率80％)的外消旋混合物。製備例3製備(2R，3R，4S)-2-甲基-2-二甲氧甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃和(2R，3S，4R)-2-甲基-2-二甲氧甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃(步驟1)製備(2R)-2-甲基-2-二甲氧甲基-3，4-環氧-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃將400mg(1.82mmol)的(2R)-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-1-苯並吡喃溶於1ml的DMSO，向所得溶液中加82ul蒸餾水，將反應混合物冷卻至0℃，往混合物中緩慢加入647mg N-溴丁二醯亞胺，30分鐘後，加1ml水，用乙酸乙酯萃取混合物。有機層用無水硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮。將剩餘物溶於1ml二氧雜環己烷-水(3∶1)，加146mg NaOH，室溫攪拌反應混合物24分鐘，用乙酸乙酯萃取。有機層用無水硫酸鎂乾燥、過濾，減壓濃縮。用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝10∶1)純化剩餘物，得目的化合物358mg目的化合物(產率83％)，屬於外消旋混合物。
(步驟2)製備(2R，3R，4S)-2-甲基-2-二甲氧甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃和(2R，3S，4R)-2-甲基-2-二甲氧甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃將步驟1製得的560mg(2.37mmol)環氧化物溶於20ml飽和氨乙醇中，室溫攪拌反應混合物7天。除溶劑，用矽膠色譜柱純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)殘留物，得到340mg目的化合物(產率57％)外消旋混合物。製備例4製備(2R，3R，4S)-6-硝基-2-甲基-2-羥甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃和(2R，3S，4R)-2-甲基-2-羥甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃(步驟1)製備(2R)-6-硝基-2-甲基-2-羥甲基-3，4-環氧-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃按製備例1所述的步驟1的方法，反應起始物用708mg(3.20mol)(2R)-6-硝基-2-甲基-2-羥甲基-2H-1-苯並吡喃代替(2R)-6-硝基-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-1-苯並吡喃，剩餘物用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)純化，得目的產物625mg(產率82％)，屬於外消旋混合物。
(步驟2)製備(2R，3R，4S)-6-硝基-2-甲基-2-羥甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃和(2R，3S，4R)-2-甲基-2-羥甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃將步驟1製得的625mg(2.63mmol)環氧化物溶於10ml飽和氨乙醇中，室溫攪拌反應混合物7天。除溶劑，用矽膠色譜柱純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶5)殘留物，得到328mg目的化合物(產率49％)外消旋混合物。製備例5製備(2R，3R，4S)-6-硝基-2-甲基-2-甲氧甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃和(2R，3S，4R)-2-甲基-2-甲氧甲基-3-羥基4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃(步驟1)製備(2R)-6-硝基-2-甲基-2-甲氧甲基-3，4-環氧-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃按製備例1所述的步驟1的方法，反應起始物用580mlg(2.47mmol)(2R)-6-硝基-2-甲基-2-甲氧甲基-2H-1-苯並吡喃代替(2R)-6-硝基-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-1-苯並吡喃，剩餘物用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)純化，得目的產物607mg(產率98％)，屬於外消旋混合物。
(步驟2)製備(2R，3R，4S)-6-硝基-2-甲基-2-甲氧甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃和(2R，3S，4R)-2-甲基-2-甲氧甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃將步驟1製得的607mg(2.42mmol)環氧化物溶於10ml飽和氨乙醇中，室溫攪拌反應混合物7天。除溶劑，用矽膠色譜柱純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶4)殘留物，得到345mg目的化合物(產率53％)外消旋混合物。製備例6製備(2S，3S，4R)-6-氰基-2-甲基-2-二甲氧甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃按照實施例1的步驟1和步驟2的相同方法，用1.2g(4.90mmol)(2S)-6-氰基-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-1-苯並吡喃代替(2R)-6-硝基-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-1-苯並吡喃做反應起始物，剩餘物用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)純化，得目的產物0.65g(產率48％)，為(2S，3S，4R)立體異構體。製備例7製備(2S，3R，4S)-6-氰基-2-甲基-2-二甲氧甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃按照實施例6所述方法製備，剩餘物用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)純化，得目的產物0.30g(產率22％)，為(2S，3R，4S)立體異構體。製備例8製備(2S，3S，4R)-6-溴-2-甲基-2-二甲氧甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃按照實施例1的步驟1和步驟2的相同方法，用1.6g(5.35mmol)(2S)-6-溴-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-1-苯並吡喃代替(2R)-6-硝基-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-1-苯並吡喃做反應起始物，剩餘物用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶4)純化，得目的化合物1.28g(產率72％)，為(2S，3S，4R)立體異構體。製備例9製備(2S，3S，4R)-4-氨基-6-甲基磺醯-3，4-二氫-3-羥基2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-1-苯並吡喃按照實施例1的步驟1和步驟2的相同方法，用2.52g(8.45mmol)(2S)-6-甲基磺醯-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-1-苯並吡喃代替(2R)-6-硝基-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-1-苯並吡喃做反應起始物，剩餘物用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶5)純化，得目的化合物1.74g(產率62％)，為(2S，3S，4R)立體異構體。製備例10製備(2R，3S，4R)-4-氨基-甲基磺醯-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-1-苯並吡喃按照實施例1的步驟1和步驟2的相同方法，用0.79g(2.65mmol)(2S)-6-甲基磺醯-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-1-苯並吡喃代替(2R)-6-硝基-2-甲基-2-二甲氧甲基-2H-1-苯並吡喃做反應起始物，剩餘物用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶5)純化，得目的化合物0.60g(產率68％)，為(2R，3S，4R)立體異構體。製備例11製備(2S，3S，4R)-2-甲基-2-([1，3]二氧戊環-2-基)-6-硝基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃(步驟 1)製備(2S)-2-甲基-2-([1，3]二氧戊環-2-基)-6-硝基-2H-1-苯並吡喃將1g(3.77mmol)的(2S)-2-甲基-2-二甲氧甲基-6-硝基-2H-1-苯並吡喃、0.63ml(11.31mmol)1，2-亞乙基二醇和71.7mg(0.377mol)對甲苯亞磺酸溶於20ml甲苯，回流5h，用飽和NaHCO3溶液洗滌反應混合物，然後用水和乙酸乙酯萃取。有機層用無水硫酸鎂乾燥，過濾，減壓濃縮。萃取。用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝6∶1)純化剩餘物，得目的化合物0.93g(產率93％)。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.48(s，3H)，3.91-3.97(m，4H)，4.95(s，1H)，5.73(d，1H)，6.49(d，1H)，6.83(d，1H)，7.86(d，1H)，8.01(dd，1H)(步驟2)製備(2S，3S，4R)-2-甲基-2-([1，3]二氧戊環-2-基)-6-硝基-3，4-環氧-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃往100ml的單頸燒瓶中傾入25.6ml(14.08mmol)、0.55M的NaOCl水溶液和9.6ml、0.05M的Na2HPO4，冷卻混合物至0℃，然後加入步驟1製成的化合物0.93g(3.52mmol)和96.22mg(0.176mmol)的溶於7ml二氯甲烷的Jacobsen催化劑，室溫攪拌反應混合物8h，用cellite板過濾，除去Jacobsen催化劑。用鹽水洗滌二氯甲烷層，用Na2SO4乾燥、過濾、減壓濃縮，用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)純化剩餘物，得目的化合物470mg(產率48％)。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.57(s，3H)，3.73(d，1H)，3.80-3.90(m，4H)，4.02(d，1H)，4.96(s，1H)，6.88(d，1H)，8.13(dd，1H)，8.29(d，1H)
(步驟3)製備(2S，3S，4R)-2-甲基-2-([1，3]二氧戊環-2-基)-6-硝基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃將步驟2製成的化合物470mg(1.68mmol)溶於15ml乙醇，再加2.36ml(16.3mmol)，25％ NH4OH溶液，在25℃攪拌反應5日，減壓除乙醇。剩餘物用乙酸乙酯萃取，鹽水洗滌，Na2SO4乾燥、過濾，減壓濃縮。用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶3)純化剩餘物，得目的化合物400mg(產率80％)。製備例12製備(2S，3S，4R)-2-甲基-2-([1，3]二氧戊環-2-基)-6-硝基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃(步驟1)製備(2S)-2-甲基-2-([1，3]二氧戊環-2-基)-6-硝基-2H-1-苯並吡喃按實施例11所述步驟1，將1g(3.77mmol)(2S)-2-甲基-2-二甲氧甲基-6-硝基-2H-1-苯並吡喃與2.73ml 1，3-丙二醇反應。剩餘物用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝6∶1)純化，得目的化合物1g(產率96％)。
(步驟2)製備(2S，3S，4S)-2-甲基-2-([1，3]二氧戊環-2-基)-6-硝基-3，4-環氧-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃將步驟1製得的化合物作反應起始物，按實施例11的步驟2的方法反應。剩餘物用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)純化，得目的化合物0.57g(產率54％)。
(步驟3)製備(2S，3S，4R)-2-甲基-2-([1，3]二氧戊環-2-基)-6-硝基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃將步驟2製得的化合物做為反應起始物，按實施例11的步驟3的方法反應。剩餘物用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶3)純化，得目的化合物0.46g(產率76％)。製備例13製備(2S，3S，4R)-2-甲基-2-([1，3]-5，5-二甲基二氧戊環-2-基)-6-硝基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃(步驟1)製備(2S)-2-甲基-2-([1，3]-5，5-二甲基二氧戊環-2-基)-6-硝基-2H-1-苯並吡喃按實施例11所述步驟1反應，反應起始物為1g(3.77mmol)(2S)-2-甲基-2-二甲氧甲基-6-硝基-2H-1-苯並吡喃與2.80ml 2，2-二甲基-1，3-丙二醇。剩餘物用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝6∶1)純化，得目的化合物1.01g(產率88％)。
(步驟2)製備(2S，3S，4S)-2-甲基-2-([1，3]-5，5-二甲基二氧戊環-2-基)-6-硝基-3，4-環氧-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃將步驟1製得的化合物作反應起始物，按實施例11的步驟2的方法反應。剩餘物用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)純化，得目的化合物0.62g(產率58％)。
(步驟3)製備(2S，3S，4R)-2-甲基-2-([1，3]-5，5-二甲基二氧戊環-2-基)-6-硝基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃將步驟2製得的化合物做為反應起始物，按實施例11的步驟3的方法反應。剩餘物用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶3)純化，得目的化合物0.53g(產率82％)。製備例14製備(2S，3S，4R)-2-甲基-2-二甲氧甲基-6-硝基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃(步驟1)製備(2S)-2-甲基-2-二甲氧甲基-6-硝基-2H-1-苯並吡喃按實施例11所述步驟1反應，反應起始物為1g(3.77mmol)(2S)-2-甲基-2-二甲氧甲基-6-硝基-2H-1-苯並吡喃與3.0ml乙醇。剩餘物用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝6∶1)純化，得目的化合物1.01g(產率91％)。
(步驟2)製備(2S，3S，4S)-2-甲基-2-二乙氧甲基-6-硝基-3，4-環氧-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃將步驟1製得的化合物作反應起始物，按實施例11的步驟2的方法反應。剩餘物用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)純化，得目的化合物0.71g(產率67％)。
(步驟3)製備(2S，3S，4R)-2-甲基-2-二乙氧基甲基-6-硝基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃將步驟2製得的化合物做為反應起始物，按實施例11的步驟3的方法反應。剩餘物用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶3)純化，得目的化合物0.65g(產率86％)。製備例15製備(2S，3S，4R)-2-甲基-2-二甲氧甲基-6-甲酯基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃按照製備例1步驟1和步驟2的方法反應，但起始反應物為1.41g(5.32mmol)(2S)-2-甲基-2-二甲氧甲基-6-甲酯基-2H-1-苯並吡喃。剩餘物用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶4)純化，得目的化合物0.86g(產率52％)。製備例16製備(2R，3S，4R)-2-甲基-2-二甲氧甲基-6-甲酯基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃按照製備例1步驟1和步驟2的方法反應，但起始反應物為1.27g(4.79mmol)(2R)-2-甲基-2-二甲氧甲基-6-甲酯基-2H-1-苯並吡喃。剩餘物用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶4)純化，得目的化合物0.85g(產率57％)。製備例17製備(3S，4R)-2-甲基-2-二甲氧甲基-8-硝基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃按照製備例1步驟1和步驟2的方法反應，但起始反應物為1.82g(6.86mmol)(2S)-2-甲基-2-二甲氧甲基-8-硝基-2H-1-苯並吡喃。剩餘物用矽膠色譜柱(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶4)純化，得目的化合物1.31g(產率64％)。
實施例1 製備(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍在508mg N-氰基-N′-(4-氯苯基)硫脲鈉鹽和500mg(1.68mmol)製備例1製備的氨基醇化合物溶於5ml DMF所得的溶液中加入418mg1-[3-(二甲基氨基)]-2-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽。室溫下攪拌反應混合物5小時，加入10ml 1N HCl酸化該混合物，用乙酸乙酯萃取(30ml×2)。有機層用水和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥並減壓濃縮。將剩餘物經矽膠柱色譜純化。(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)，得到260mg(產率33％)所需立體化學結構(2R，3R，4S)化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.35(s，3H)，3.36(d，6H)，3.85(t，1H)，4.59(s，1H)，5.10(t，1H)，5.97(s，1H)，6.93(d，1H)，7.35(dd，4H)，7.62(d，1H)，8.01(d，2H)，9.44(s，1H)實施例2 製備(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍反應用與實施例1同樣方法進行。將剩餘物用矽膠柱色譜純化。(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶4)，得到200mg(產率25％)所需立體化學結構(2R，3S，4R)化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.23(s，3H)，3.42(d，6H)，4.07(t，1H)，4.48(s，1H)，4.99(t，1H)，5.80(s，1H)，6.96(d，1H)，7.36(dd，4H)，7.76(s，1H)，8.03(s，2H)，9.48(s，1H)實施例3 製備(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-氯苯基)胍在508mg N-氰基-N′-(4-氯室溫下苯基)硫脲鈉鹽和500mg製備例1中製備的氨基醇化合物溶於5ml DMF所得的溶液中加入418mg1-[3-(二甲基氨基)丙基]-2-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽。攪拌反應混合物6小時，加入10ml 1N HCl酸化該混合物，然後用乙酸乙酯萃取(30ml×2)。有機層用水和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥並減壓濃縮。將剩餘物經矽膠柱色譜純化。(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到230mg(產率29％)所需立體化學結構(2R，3R，4S)化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.35(s，3H)，3.38(d，6H)，3.88(s，3H)，4.59(s，1H)，5.11(s，1H)，5.97(s，1H)，6.94(d，1H)，7.28(m，4H)，7.79(d，1H)，8.04(m，2H)，9.49(s，1H)實施例4 製備(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-氯苯基)胍反應用與實施例3同樣方法進行。將剩餘物經矽膠柱色譜純化。(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶4)得到200mg(產率25％)所需立體化學結構(2R，3S，4R)化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.23(s，3H)，3.42(d，5H)，4.08(t，1H)，4.49(s，1H)，4.99(t，1H)，6.98(d，1H)，7.30(m，4H)，7.91(d，1H)，8.04(d，2H)，9.6(s，1H)實施例5 製備(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-硝基苯基)胍在532mg N-氰基-N′-(4-硝基苯基)硫脲鈉鹽和500mg 製備例1中製備的氨基醇化合物溶於5ml DMF所得的溶液中加入418mg1-[3-(二甲基氨基)丙基]-2-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽。攪拌反應混合物6小時室溫下，加入10ml 1N HCl酸化該混合物後，用乙酸乙酯萃取(30ml×2)。有機層用水和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥並減壓濃縮。將剩餘物經矽膠柱色譜純化。(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到210mg(產率26％)所需立體化學結構(2R，3R，4S)化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.36(s，3H)，3.38(d，6H)，3.88(t，1H)，4.60(s，1H)，5.12(t，1H)，6.2(s，1H)，6.97(d，1H)，7.48(d，1H)，8.04(dd，1H)，8.11(s，1H)，8.20(d，2H)，8.33(d，1H)，10.07(s，1H)實施例6 製備(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-三氟甲基苯基)胍在500mg N-氰基-N′-(4-三氟甲基苯基)硫脲鈉鹽和500mg製備例1中製備的氨基醇化合物溶於5ml DMF所得的溶液中加入418mg1-[3-(二甲基氨基)丙基]-2-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽。攪拌反應混合物5小時室溫下，加入10ml 1N HCl酸化該混合物後，用乙酸乙酯萃取(30ml×2)。有機層用水和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥並減壓濃縮。將剩餘物經矽膠柱色譜純化。(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到250mg(產率29％)所需立體化學結構(2R，3R，4S)化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.34(s，3H)，3.38(d，6H)，3.38(t，1H)，4.59(s，1H)，5.10(t，1H)，6.0(s，1H)，6.94(d，1H)，7.52(d，1H)，7.57(m，3H)，7.86(d，1H)，8.02(dd，1H)，8.09(s，1H)實施例7 製備(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-三氟甲基苯基)胍反應用與實施例6同樣方法進行。將剩餘物經矽膠柱色譜純化。(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到200mg(產率23％)所需立體化學結構(2R，3S，4R)化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.23(s，3H)，3.43(d，6H)，4.08(t，1H)，4.49(s，1H)，5.01(t，1H)，5.85(s，1H)，6.98(d，1H)，7.49(d，1H)，7.60(m，3H)，8.03(m，3H)，9.7(s，1H)實施例8 製備(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苯基)胍在500mg N-氰基-N′-(4-甲氧基 苯基)硫脲鈉鹽和500mg製備例1中製備的氨基醇化合物溶於5ml DMF所得的溶液中加入418mg1-[3-(二甲基氨基)丙基]-2-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽。室溫下攪拌反應混合物5小時，加入10ml 1N HCl酸化該混合物後，用乙酸乙酯萃取(30ml×2)。有機層用水和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥並減壓濃縮。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到49mg(產率6％)所需立體化學結構(2R，3R，4S)化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.24(s，3H)，3.35(d，6H)，3.70(s，3H)，4.08(t，1H)，4.45(s，1H)，5.64(d，1H)，5.78(t，1H)，6.93(m，3H)，7.24(d，2H)，8.02(d，2H)，8.17(s，1H)，9.59(s，1H)實施例9 製備(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苯基)胍反應用與實施例8同樣方法進行。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到190mg(產率24％)所需立體化學結構(2R，3S，4R)化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.33(s，3H)，3.38(d，6H)，3.72(s，3H)，3.87(t，1H)，4.58(s，1H)，5.10(t，1H)，5.88(s，1H)，6.91(d，3H)，7.20(d，3H)，7.97(s，1H)，9.14(s，1H)實施例10 製備(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍在508mg N-氰基-N′-(4-氯苯基)硫脲鈉鹽和500mg製備例1中製備的氨基醇化合物溶於5ml DMF所得的溶液中加入418mg 1-[3-(二甲基氨基)丙基]-2-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽。室溫下攪拌反應混合物5小時，加入10ml 1N HCl酸化該混合物後，用乙酸乙酯萃取(30ml×2)。有機層用水和鹽水洗滌，用無水硫酸鎂乾燥並減壓濃縮。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到260mg(產率33％)所需(2S，3R，4S)立體化學結構化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.35(s，3H)，3.37(d，6H)，3.85(t，1H)，4.59(s，1H)，5.11(t，1H)，5.97(s，1H)，6.93(d，1H)，7.35(dd，4H)，7.63(d，1H)，8.01(d，2H)，9.44(s，1H)實施例11 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍反應用與實施例10同樣方法進行。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到200mg(產率25％)所需(2S，3S，4R)立體化學結構化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.23(s，3H)，3.43(d，6H)，4.05(t，1H)，4.48(s，1H)，4.99(t，1H)，5.81(s，1H)，6.97(d，1H)，7.37(dd，4H)，7.76(s，1H)，8.03(s，2H)，9.49(s，1H)實施例12 製備(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-氯苯基)胍反應用與實施例10同樣方法進行。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到188mg(產率24％)所需(2S，3R，4S)立體化學結構化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.35(s，3H)，3.43(d，6H)，3.88(t，1H)，4.60(s，1H)，5.11(t，1H)，5.97(s，1H)，6.95(d，1H)，7.17(d，1H)，7.25(d，1H)，7.34(d，2H)，7.79(d，1H)，8.03(m，2H)，9.49(s，1H)實施例13 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-氯苯基)胍反應用與實施例12同樣方法進行。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到270mg(產率34％)所需(2S，3S，4R)立體化學結構化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.18(s，3H)，3.43(d，6H)，4.09(t，1H)，4.49(s，1H)，5.00(t，1H)，5.85(s，1H)，6.98(d，1H)，7.29(d，1H)，7.37(d，1H)，7.40(m，2H)，7.91(d，1H)，8.05(m，2H)實施例14 製備(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-三氟甲基苯基)胍反應用與實施例10同樣方法進行。但用582mg N-氰基-N′-(3-三氟甲基苯基)硫脲鈉鹽和500mg製備例2中製備的氨基醇化合物。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到220mg(產率26％)所需(2S，3R，4S)立體化學結構化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.34(s，3H)，3.43(d，6H)，3.88(t，1H)，4.60(s，1H)，5.11(t，1H)，5.95(s，1H)，6.95(d，1H)，7.45(d，1H)，7.57(m，3H)，7.88(d，1H)，8.03(dd，1H)，8.10(s，1H)，9.62(s，1H)實施例15 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-三氟甲基苯基)胍反應用與實施例14同樣方法進行。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到320mg(產率37％)所需(2S，3S，4R)立體化學結構化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.24(s，3H)，3.43(d，6H)，4.08(t，1H)，4.49(s，1H)，5.01(t，1H)，5.82(s，1H)，6.98(d，1H)，7.47(d，1H)，7.57(m，3H)，7.98(d，1H)，8.03(m，2H)，9.67(s，1H)實施例16 製備(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苯基)胍反應用與實施例10同樣方法進行。但用500mg N-氰基-N′-(4-甲氧基苯基)硫脲鈉鹽和500mg製備例2中製備的氨基醇化合物。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到170mg(產率21％)所需(2S，3R，4S)立體化學結構化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.33(s，3H)，3.36(d，6H)，3.72(s，3H)，3.86(t，1H)，4.58(s，1H)，5.09(t，1H)，5.88(s，1H)，6.91(d，3H)，7.20(d，3H)，7.97(s，1H)，8.00(d，1H)實施例17 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苯基)胍反應用與實施例16同樣方法進行。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到270mg(產率34％)所需(2S，3S，4R)立體化學結構化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.22(s，3H)，3.38(d，6H)，3.72(s，3H)，4.06(t，1H)，4.45(s，1H)，4.99(t，1H)，5.75(s，1H)，6.93(t，3H)，7.20(d，2H)，7.35(s，1H)，8.01(s，1H)，8.03(d，1H)，9.19(s，1H)實施例18 製備(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲基苯基)胍反應用與實施例1同樣方法進行。但用465mg N-氰基-N′-(4-甲基苯基)硫脲鈉鹽和500mg製備例2中製備的氨基醇化合物。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到158mg(產率21％)所需立體化學結構(2R，3R，4S)化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.34(s，3H)，2.26(s，3H)，3.37(d，6H)，3.87(s，1H)，4.59(s，1H)，5.11(t，1H)，5.93(s，1H)，6.92(d，1H)，7.16(s，3H)，7.38(d，1H)，8.00(1H，2H)，9.24(s，1H)實施例19 製備(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲基苯基)胍反應用與實施例18同樣方法進行。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到250mg(產率33％)所需立體化學結構(2R，3S，4R)化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.22(s，3H)，2.26(s，3H)，3.38(d，6H)，4.06(t，1H)，4.46(s，1H)，4.99(t，1H)，5.74(s，1H)，6.95(d，1H)，7.16(s，3H)，7.53(s，1H)，8.02(d，2H)，9.28(s，1H)實施例20 製備(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苄基)胍反應用與實施例1同樣方法進行。但用530mg N-氰基-N′-(4-甲氧基苄基)硫脲鈉鹽和500mg製備例1中製備的氨基醇化合物。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到134mg(產率16％)所需立體化學結構(2R，3R，4S)化合物。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.47(s，3H)，3.51(d，6H)，3.77(s，3H)，3.80(d，2H)，4.44(t，1H)，4.56(s，1H)，5.32(m，1H)，6.06(s，1H)，6.40(d，1H)，6.90(m，3H)，7.12(m，2H)，7.30(d，1H)，8.00(dd，1H)，8.03(s，1H)實施例21 製備(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苄基)胍反應用與實施例20同樣方法進行。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到140mg(產率17％)所需立體化學結構(2R，3S，4R)化合物。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ∑1.32(s，3H)，3.49(s，6H)，3.58(t，1H)，3.77(s，3H)，4.04(d，1H)，4.41(s，1H)，4.65(s，2H)，6.35(s，1H)，6.88(dd，4H)，7.26(d，2H)，8.04(dd，1H)，8.08(s，1H)實施例22 製備(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例1同樣方法進行。但用465mg N-氰基-N′-苄基硫脲鈉鹽和500mg製備例1中製備的氨基醇化合物。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到260mg(產率34％)所需立體化學結構(2R，3R，4S)化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.24(s，3H)，3.41(m，1H)，3.44(d，6H)，4.04(m，1H)，4.51(s，1H)，4.76(s，2H)，5.70(s，1H)，6.98(d，1H)，7.32(m，4H)，8.03(m，2H)，8.16(s，1H)實施例23 製備(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例22同樣方法進行。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到200mg(產率26％)所需立體化學結構(2R，3S，4R)化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.26(s，3H)，3.36(d，6H)，3.44(d，1H)，3.87(t，1H)，4.44(d，2H)，4.56(s，1H)，5.02(t，1H)，5.86(s，1H)，6.94(d，1H)，7.29(m，4H)，7.75(t，1H)，7.93(s，1H)，7.99(dd，1H)實施例24 製備(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例10同樣方法進行。但用508mg N-氰基-N′-苄基硫脲鈉鹽和500mg製備例2中製備的氨基醇化合物。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到170mg(產率22％)所需(2S，3R，4S)立體化學結構化合物。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.27(s，3H)，3.48(d，6H)，3.5(m，1H)，4.02(d，1H)，4.48(s，1H)，4.75(s，2H)，6.0(s，1H)，6.72(s，1H)，6.87(d，1H)，7.30(m，5H)，8.0(d，1H)，8.02(s，1H)實施例25 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例24同樣方法進行。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到190mg(產率25％)所需(2S，3S，4R)立體化學結構化合物。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.31(s，3H)，3.44(d，6H)，3.5(m，1H)，3.71(d，1H)，4.47(s，1H)，5.14(m，2H)，5.69(s，1H)，6.70(s，1H)，6.58(d，1H)，7.25(m，5H)，8.0(d，1H)，8.02(s，1H)實施例26 製備(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍反應用與實施例1同樣方法進行。但用500mg N-氰基-N′-(4-氯苯基)硫脲鈉鹽和500mg製備例3中製備的氨基醇化合物。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到170mg(產率23％)所需立體化學結構(2R，3R，4S)化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.25(s，3H)，3.37(d，6H)，3.82(t，1H)，4.52(s，1H)，5.00(t，1H)，5.45(s，1H)，6.71(d，1H)，6.90(t，1H)，7.10(m，2H)，7.24(d，2H)，7.38(d，2H)，7.54(d，1H)，9.24(s，1H)實施例27 製備(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍反應用與實施例26同樣方法進行。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到190mg(產率26％)所需立體化學結構(2R，3S，4R)化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.16(s，3H)，3.40(d，6H)，4.01(t，1H)，4.43(s，1H)，4.92(t，1H)，5.48(s，1H)，6.72(d，1H)，6.90(t，1H)，7.15(m，3H)，7.31(m，4H)，7.67(s，1H)，9.29(s，1H)實施例28 製備(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-羥基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍反應用與實施例1同樣方法進行。但用289mg N-氰基-N′-(4-氯苯基)硫脲鈉鹽和210mg 製備例4中製備的氨基醇化合物。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到40mg(產率11％)所需立體化學結構(2R，3R，4S)化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.35(s，3H)，3.5(m，1H)，3.75(m，1H)，4.95(t，1H)，5.2(t，1H)，6.0(s，1H)，6.97(d，1H)，7.4(m，4H)，7.7(d，1H)，8.0(m，2H)，9.51(s，1H)實施例29 製備(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-羥基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍反應用與實施例28同樣方法進行。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到40mg(產率11％)所需立體化學結構(2R，3S，4R)化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.2(s，3H)，3.65(m，2H)，4.11(t，1H)，5.08(t，1H)，5.85(s，1H)，7.01(d，1H)，7.4(m，4H)，7.9(d，1H)，8.1(d，2H)，9.58(s，1H)實施例30 製備(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍反應用與實施例1同樣方法進行。但用800mg N-氰基-N′-(4-氯苯基)硫脲鈉鹽和200mg製備例5中製備的氨基醇化合物。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到108mg(產率32％)所需立體化學結構(2R，3R，4S)化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.4(s，3H)，3.15(s，3H)，3.45(d，1H)，3.64(d，1H)，3.8(t，1H)，5.08(t，1H)，6.09(s，1H)，6.94(d，1H)，7.34(dd，4H)，7.64(s，1H)，8.01(d，2H)，9.5(s，1H)實施例31 製備(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍反應用與實施例30同樣方法進行。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到107mg(產率32％)所需立體化學結構(2R，3S，4R)化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.15(s，3H)，3.3(s，3H)，3.45(d，1H)，3.6(d，1H)，4.06(t，1H)，5.00(t，1H)，5.9(s，1H)，6.96(d，1H)，7.34(dd，4H)，7.8(s，1H)，8.0(m，2H)，7.48(s，1H)實施例32 製備(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(2-氯苯基)胍反應用與實施例10同樣方法進行。但用508mg N-氰基-N′-(2-氯苯基)硫脲鈉鹽和500mg製備例2中製備的氨基醇化合物。將剩餘物經矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)得到188mg(產率24％)所需(2S，3R，4S)立體化學結構化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.35(s，3H)，3.43(d，6H)，3.88(t，1H)，4.60(s，1H)，5.11(t，1H)，5.97(s，1H)，6.95(d，1H)，7.17(d，1H)，7.25(d，1H)，7.34(d，2H)，7.79(d，1H)，8.03(m，2H)，9.49(s，1H)實施例33 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(2-氯苯基)胍反應用與實施例32相同方法進行。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)，得到270mg(產率34％)所需化合物(2S，3S，4R)立體化學結構。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.24(s，3H)，3.43(d，6H)，4.10(t，1H)，4.49(s，1H)，5.00(s，1H)，5.85(s，1H)，6.98(d，1H)，7.19(d，1H)，7.28(d，1H)，7.35(m，2H)，7.90(d，1H)，8.05(d，1H)，9.53(s，1H)實施例34 製備(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(2-三氟甲基苯基)胍。
反應用與實施例10相同方法進行，但用582mg N-氰基-N′-(2-三氟甲基苯基)硫脲鈉鹽和500mg製備例2中製備的氨基醇化合物。用矽膠色譜法純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)，得到220mg(產率26％)所需(2S，3R，4S)立體化學結構化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.34(s，3H)，3.43(d，6H)，3.88(t，1H)，4.60(s，1H)，5.11(t，1H)，5.97(s，1H)，6.95(d，1H)，7.45(d，1H)，7.60(m，3H)，7.87(d，1H)，8.03(dd，1H)，8.10(s，1H)，9.62(s，1H)實施例35 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(2-三氟甲基苯基)胍反應用與實施例34相同方法進行。用矽膠色譜法純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)，得到320mg(產率37％)所需(2S，3S，4R)立體化學結構化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.24(s，3H)，3.43(d，6H)，4.08(t，1H)，4.49(s，1H)，5.00(s，1H)，5.82(s，1H)，6.98(d，1H)，7.47(d，1H)，7.61(dd，3H)，8.03(m，3H)，9.67(s，1H)實施例36 製備(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(2-氯苄基)胍反應用與實施例10相同方法進行，但用540mg N-氰基-N′-(2-氯苄基)硫脲鈉鹽和製備例2中製備的500mg氨基醇化合物。用矽膠色譜法純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)，得到73mg(產率9％)所需(2S，3R，4S)立體化學結構化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.36(s，3H)，3.47(d，6H)，3.68(s，1H)，4.13(m，1H)，4.39(s，1H)，4.52(s，2H)，5.57(s，1H)，6.6(s，1H)，6.88(m，1H)，7.25(m，6H)，8.01(d，1H)，8.16(s，1H)實施例37 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(2-氯苄基)胍反應用與實施例36相同方法進行。用矽膠色譜法純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)，得到100mg(產率12％)所需(2S，3S，4R)立體化學結構化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.28(s，3H)，3.5(d，6H)，3.6(s，1H)，3.98(d，1H)，4.53(m，3H)，5.61(d，1H)，5.89(t，1H)，6.88(d，1H)，7.25(m，3H)，7.40(d，1H)，8.02(m，2H)，8.14(s，1H)實施例38製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-乙醯氧基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍在68mg(0.15mmol)實施例25中製備的化合物溶於3ml二氯甲烷所得溶液中加入21ul乙酸酐，42ul三乙胺和2mg DMAP(4-(二甲氨基)吡啶)。室溫下攪拌反應混合物5小時，加入5ml水，後用乙酸乙酯萃取(10ml×2)。用水及鹽水洗滌有機層，用無水硫酸鎂乾燥、過濾並減壓濃縮。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)，得到67mg(產率90％)所需化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.3(s，3H)，1.25(s，1H)，2.1(s，3H)，3.3(s，3H)，3.5(s，3H)，4.35(s，1H)，4.52(s，2H)，5.25(m，1H)，5.32(s，1H)，6.98(d，2H)，7.38(s，5H)，8.15(d，2H)實施例39 製備(2S)-N″-氰基-N-(6-硝基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍在54mg(0.11mmol)實施例38中製備的化合物溶於2ml甲苯的溶液中加入24ul(0.1628mol)DBU。室溫下將反應混合物攪拌24小時，並用乙酸乙酯萃取。有機層用無水硫酸鎂乾燥、過濾並減壓濃縮。用矽膠色譜法純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)，得到31mg(產率64％)所需化合物。
1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ1.43(s，3H)，3.29(s，3H)，3.39(s，3H)，4.21(s，1H)，4.59(d，2H)，5.45(s，1H)，7.02(d，1H)，7.36(m，5H)，8.29(dd，2H)，8.82(d，1H)實施例40 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍在1.11g實施例24中製備的化合物溶於20ml甲醇的溶液中加入10ml飽和的乙酸銅溶液。在該混合物中緩慢地加入276mg硼氫化鈉。室溫下將反應混合物攪拌3小時，加入50ml水後用100ml乙酸乙酯萃取。有機層用無水硫酸鎂乾燥、過濾並減壓濃縮。用矽膠色譜法純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶3)，得到576mg(產率56％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，300MHz)δ1.21(s，3H)，3.58(s，3H)，3.59(s，3H)，4.14(d，1H)，4.30(s，1H)，4.45(d，1H)，4.47(d，1H)，5.46(d，1H)，6.60-6.66(m，3H)，7.32-7.36(m，5H)實施例41 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-乙醯氧氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍在50mg實施例40中製備的化合物溶於2ml二氯甲烷的溶液中加入25ul三乙胺和10ul乙醯氯。室溫下將反應混合物攪拌1小時，用10ml水和20ml乙酸乙酯萃取。有機層用無水硫酸鎂乾燥、過濾並減壓濃縮。用矽膠色譜法純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到51mg(產率92％)所需化合物。
1H NMR(DMSO-d6，200MHz)δ1.15(s，3H)，1.96(s，3H)，3.38(s，3H)，3.51(s，3H)，3.98(m，2H)，4.30(s，1H)，4.38-4.49(m，2H)，5.22(br s，1H)，5.48(br s，1H)，6.64(d，1H)，7.31(br s，5H)，7.61(br s，1H)，7.94(s，1H)，9.76(s，1H)實施例42 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-甲磺醯氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍在91mg實施例40中製備的化合物溶於2ml二氯甲烷的溶液中加入45ul三乙胺和20ul甲磺醯氯。室溫下將反應混合物攪拌2小時用10ml水和20ml乙酸乙酯萃取。有機層用無水硫酸鎂乾燥、過濾並減壓濃縮。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到90mg(產率85％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.25(s，3H)，2.90(s，3H)，3.57(s，6H)，4.10(d，1H)，4.25(d，1H)，4.34(s，1H)，4.43(d，1H)，4.50(d，1H)，4.61(t，1H)，5.83(d，1H)，6.78(d，1H)，7.20-7.38(m，7H)，8.18(br s，1H)實施例43 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍在製備例6中製備的100mg(2S，3S，4R)-6-氰基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃溶於3ml DMF的溶液中加入92mg N-氰基-N′-(4-氯苯基)硫脲鈉鹽和89mg 1-[3-(二甲氨基)丙基]-2-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽。室溫下將反應混合物攪拌6小時，加入5ml 1N HCl酸化該混合物之後用30ml乙酸乙酯萃取。有機層用無水硫酸鎂乾燥並減壓濃縮。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)，得到70mg(產率43％)所需(2S，3R，4S)立體化學結構化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.36(s，3H)，3.49(s，3H)，3.53(s，3H)，3.58(t，1H)，4.34(s，1H)，4.99(t，1H)，5.62(s，1H)，6.86(d，1H)，7.25-7.55(m，5H)，7.69(s，1H)實施例44 製備(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-氰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍反應用與實施例43相同方法進行，但用製備例中7製備的99mg(0.35mmol)(2S，3R，4S)-6-氰基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃作原料。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)，得到68mg(產率42％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.50(s，3H)，3.44(s，3H)，3.48(s，3H)，3.66(t，1H)，4.43(s，1H)，5.24(d，2H)，6.84(d，1H)，7.27-7.44(m，4H)，7.55(s，1H)，8.53(s，1H)實施例45 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍(步驟1)製備(2S，3S，4R)-4-[[(氰基-亞氨基)苯氧甲基]氨基]-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-6-腈在150mg製備例6中製備的(2S，3S，4R)-6-氰基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃溶於3ml異丙醇-DMF(2∶1)的溶液中加入141mg氰基碳亞胺酸二苯酯和97ul三乙胺。將反應混合物攪拌18小時室溫下，用10ml水和30ml乙酸乙酯萃取。有機層用無水硫酸鎂乾燥、過濾並減壓濃縮。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到182mg(產率80％)所需化合物。
(步驟2)製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍在182mg上述步驟1中製備的化合物溶於2ml DMF的溶液中加入0.42ml苄基胺。將反應混合物攪拌12小時室溫下用20ml水和50ml乙酸乙酯萃取。有機層用無水硫酸鎂乾燥、過濾並減壓濃縮。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到163mg(產率68％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.29(s，3H)，3.45(s，3H)，3.52(s，3H)，4.09(t，1H)，4.35(s，2H)，4.43(d，1H)，4.81(t，1H)，5.94(s，1H)，6.83(d，1H)，7.28-7.40(m，7H)實施例46 製備(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-氰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例45步驟1和步驟2同樣方法進行，但用製備例7中製備的150mg(2S，3R，4S)-6-氰基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃作原料。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到160mg(產率69％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.35(s，3H)，3.43(s，3H)，3.44(s，3H)，3.75(t，1H)，3.82(s，2H)，4.47(s，1H)，5.05(t，1H)，5.60(s，1H)，6.81(d，1H)，7.20-7.40(m，7H)實施例47 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-溴-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例45步驟1和步驟2同樣方法進行，但用製備例8中製備的98mg(2S，3S，4R)-6-溴-2-甲基-2-二甲氧基甲基-3-羥基-4-氨基-3，4-二氫-2H-1-苯並吡喃作原料。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到86mg(產率83％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3)δ1.21(s，3H)，3.39(s，3H)，3.42(s，3H)，4.10(d，1H)，4.29(s，1H)，4.42(dd，2H)，4.65(m，2H)，5.61(d，1H)，7.20-7.40(m，4H)實施例48製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3，4-二甲氧基苄基)胍(步驟1)製備(2S，3S，4R)-4-[[(氰基亞氨基)苯氧甲基]氨基]-6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃將製備例2中製備的化合物用矽膠色譜(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶4)分離，得到400mg(2S，3S，4R)-6-硝基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃。
在400mg(1.34mmol)(2S，3S，4R)-6-硝基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃溶於3ml DMF的溶液中加入352mg(1.48mmol)氰基碳亞胺酸二苯酯和243ul(1.74mmol)三乙胺。室溫下將反應混合物攪拌12小時，用20ml水和30ml乙酸乙酯萃取。有機層用無水硫酸鎂乾燥、過濾並減壓濃縮。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到498mg(產率84％)所需化合物。
(步驟2)製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3，4-二甲氧基苄基)胍在327mg(0.74mmol)上述步驟1製備的化合物溶於3ml DMF的溶液中加入371mg(2.22mmol，3當量)(3，4-二甲氧基苄基)胺。室溫下將反應混合物攪拌12小時，用20ml水和30ml乙酸乙酯萃取。有機層用無水硫酸鎂乾燥、過濾並減壓濃縮。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到338mg(產率89％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.33(s，3H)，3.53(s，3H)，3.57(s，3H)，3.86(s，3H)，3.87(s，3H)，4.14(d，1H)，4.38(s，1H)，4.24-4.50(m，2H)，4.82(brt，1H)，6.15(s，1H)，6.61(t，1H)，6.84(m，3H)，6.92(d，1H)，8.08(dd，1H)，8.35(s，1H)實施例49 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3，4-二甲氧基苄基)胍在209mg(0.41mmol)實施例48中製備的化合物溶於5ml甲醇的溶液中加入0.5ml(0.2mmol，0.5當量)0.4M Cu(OAc)2水溶液。在該混合物中緩慢地在30分鐘內加入155mg(4.1mmol，10當量)硼氫化鈉。室溫下將反應混合物攪拌1小時，用10ml乙酸乙酯萃取並過濾除去黑色沉澱物。加入10ml飽和NaHCO3水溶液後，濾液用30ml乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌有機層，用無水硫酸鎂乾燥、過濾並減壓濃縮。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝9∶1)，得到169mg(產率85％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.20(s，3H)，3.57(s，6H)，3.87(s，6H)，4.29(s，1H)，4.04-4.12(m，2H)，4.32-4.58(m，2H)，5.46(d，1H)，6.50-6.69(m，3H)，6.84(m，3H)，7.26(br s，1H)實施例50 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧苄基)胍反應用與實施例48步驟2同樣方法進行，但用360mg實施例48步驟1製備的化合物作原料和333mg(2.43mmol)4-甲氧苄基胺代替(3，4-二甲氧基苄基)胺。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到343mg(產率87％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.47(s，3H)，3.51(d，6H)，3.77(s，3H)，3.80(d，2H)，4.44(t，1H)，4.56(s，1H)，5.32(m，1H)，6.06(s，1H)，6.40(d，1H)，6.90(m，3H)，7.12(m，2H)，7.30(d，1H)，8.00(dd，1H)，8.03(s，1H)實施例51 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧苄基)胍反應用與實施例49相同方法進行，但用304mg(0.62mmol)實施例50中製備的化合物作原料。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶4)，得到241mg(產率85％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200 MHz)δ1.21(s，3H)，3.58(s，6H)，3.81(s，3H)，4.15(d，1H)，4.17(d，1H)，4.30(s，1H)，4.36-4.54(m，3H)，5.48(d，1H)，6.52-6.71(m，3H)，6.88(d，2H)，7.09(br s，1H)，7.24(d，2H)實施例52 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-硝基苄基)胍反應用與實施例48步驟2同樣方法進行，但用358mg(0.81mmol)實施例48步驟1製備的化合物作原料，用458mg(2.43mmol)3-硝基苄基胺鹽酸鹽代替(3，4-二甲氧基苄基)胺。將剩餘物用矽膠色譜純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)得到302mg(產率74％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.18(s，3H)，3.43(d，6H)，4.09(t，1H)，4.49(s，1H)，5.00(t，1H)，5.85(s，1H)，6.98(d，1H)，7.29(d，1H)，7.37(d，1H)，7.40(m，2H)，7.91(d，1H)，8.05(m，2H)實施例53 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-三氟甲基苄基)胍反應用與實施例48步驟2同樣方法進行，但用443mg(1.0mmol)實施例48步驟1製備的化合物作原料，用525mg(3.0mmol)(3-三氟甲基)苄基胺代替(3，4-二甲氧基苄基)胺。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到497mg(產率95％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.33(s，3H)，3.55(s，3H)，3.59(s，3H)，4.19(d，1H)，4.38(s，1H)，4.40(m，1H)，4.54(d，1H)，4.78(m，1H)，6.48(brs，1H)，6.84(br s，1H)，6.94(d，1H)，7.53(m，5H)，8.09(dd，1H)，8.56(s，1H)實施例54 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-三氟甲基苄基)胍反應用與實施例49相同方法進行，但用278mg(0.53mmol)實施例53中製備的化合物作原料。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶4)，得到192mg(產率73％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200 MHz)δ1.23(s，3H)，3.59(s，6H)，4.16(d，1H)，4.31(s，1H)，4.40-4.67(m，3H)，5.53(d，1H)，6.57-6.74(m，3H)，7.31(brt，1H)，7.46-7.59(m，5H)實施例55製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-甲磺醯氧-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍(步驟1)製備(2S，3S，4R)-4-[[(氰基亞氨基)苯氧甲基]氨基]-6-甲磺醯氧-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-1-苯並吡喃反應用與實施例48步驟1同樣方法進行，但用58mg(0.18mmol)製備例9中製備的化合物作原料。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到64mg(產率74％)所需化合物。
(步驟2)製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-甲磺醯氧-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例48步驟2同樣方法進行，但用64mg(0.13mmol)上述步驟1製備的化合物和28ul(0.26mmol)作原料。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)，得到32mg(產率49％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.28(s，1H)，3.21(s，3H)，3.58(s，3H)，3.59(s，3H)，4.15(m，1H)，4.35(s，1H)，4.52(m，1H)，4.63(m，1H)，5.45(d，1H)，6.87(d，1H)，6.92(br s，1H)，7.20-7.42(m，6H)實施例56 製備(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-甲磺醯氧-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍(步驟1)製備(2R，3S，4R)-4-[[(氰基亞氨基)苯氧甲基]氨基]-6-甲磺醯氧-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-1-苯並吡喃反應用與實施例55步驟1同樣方法進行，但用63mg(0.19mmol)製備例10中製備的化合物作原料。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到75mg(產率79％)所需化合物。
(步驟2)製備(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-甲磺醯氧-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例55步驟2同樣方法進行，但用75mg(0.15mmol)上述步驟1製備的化合物和28ul(0.26mmol)作原料。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到57mg(產率74％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.26(s，3H)，3.16(s，3H)，3.41(s，3H)，3.47(s，3H)，3.72(d，1H)，4.43(s，1H)，4.46(d，1H)，5.02(t，1H)，5.25(d，1H)，6.59(t，1H)，6.84(d，1H)，7.02-7.20(m，2H)，7.22-7.40(m，4H)實施例57製備(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例49相同方法進行，但用884mg(1.94mmol)實施例24中製備的化合物作原料。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶3)，得到313mg(產率38％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，500MHz)δ1.41(s，3H)，1.75(br s，1H)，3.39(s，3H)，3.45(s，3H)，3.46(d，1H)，3.72(d，1H)，4.40(s，1H)，4.46(d，2H)，4.78(d，1H)，5.22(m，1H)，6.41(m，1H)，6.50(m，1H)，6.59(d，1H)，6.73(m，1H)，7.30-7.37(m，4H)實施例58 製備(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例49相同方法進行，但用1.2g(2.7mmol)實施例22中製備的化合物作原料。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶3)，得到547mg(產率48％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，500MHz)δ1.21(s，3H)，1.80(br s，2H)，3.57(s，3H)，3.58(s，3H)，4.10-4.13(m，1H)，4.20-4.38(m，1H)，4.31(s，1H)，4.48(dd，1H)，4.50(dd，1H)，5.60(s，1H)，6.58-6.79(m，2H)，7.28-7.37(m，6H)實施例59 製備(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例49相同方法進行，但用1.07g(2.3mmol)實施例23中製備的化合物作原料。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到589mg(產率60％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，500MHz)δ1.41(s，3H)，1.75(br s，1H)，3.39(s，3H)，3.45(s，3H)，3.46(d，1H)，3.72(d，1H)，4.40(s，1H)，4.46(d，2H)，4.78(d，1H)，5.22(m，1H)，6.41(m，1H)，6.50(m，1H)，6.59(d，1H)，6.73(m，1H)，7.30-7.37(m，4H)實施例60製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]二氧戊環-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍(步驟1)製備(2S，3S，4R)-4-[[(氰基亞氨基)苯氧甲基]氨基]-6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]二氧戊環-2-基)-2H-1-苯並吡喃反應用與實施例48步驟1同樣方法進行，但用400mg(1.35mmol)製備例11中製備的化合物作原料。用矽膠色譜純化剩餘物(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶3)，得到400mg(產率67％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.40(s，3H)，3.2(d，1H)，3.81-3.92(m，4H)，4.69(s，1H)，5.15(t，1H)，6.98(d，1H)，7.15-7.42(m，5H)，8.12(dd，1H)，8.30(d，1H)(步驟2)製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]二氧戊環-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例48步驟2同樣方法進行，但用400mg(0.1mmol)上述步驟1製備的化合物作原料，0.3ml(2.7mmol)苄基胺代替(3，4-二甲氧基苄基)胺。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到350mg(產率85％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.35(s，3H)，3.95-4.15(m，4H)，4.49(dd，2H)，4.91(t，1H)，5.05(s，1H)，5.62(s，1H)，6.61(t，1H)，6.95(d，1H)，7.29-7.41(m，5H)，8.12(dd，1H)，8.21(d，1H)實施例61 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]二氧戊環-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例49相同方法進行，但用200mg(0.44mmol)實施例60中製備的化合物作原料。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶3)，得到90mg(產率48％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.24(s，3H)，3.92-4.14(m，4H)，4.45(dd，2H)，4.97(s，1H)，5.51(d，1H)，6.45-6.80(m，3H)，7.12(s，1H)，7.25-7.42(m，3H)實施例62 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]二噁烷-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍(步驟1)製備(2S，3S，4R)-4-[[(氰基亞氨基)苯氧甲基]氨基]-6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]二噁烷-2-基)-2H-1-苯並吡喃反應用與實施例60步驟1同樣方法進行，但用700mg(2.26mmol)製備例12中製備的化合物作原料。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)，得到840mg(產率83％)所需化合物。
(步驟2)製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]二噁烷-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例48步驟2同樣方法進行，但用840mg(1.85mmol)上述步驟1製備的化合物作原料，用0.61ml(5.56mmol)苄基胺代替(3，4-二甲氧基苄基)胺。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到750mg(產率87％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.31(s，3H)，1.4-1.52(m，1H)，2.13-2.26(m，1H)，3.80-3.98(m，2H)，4.18-4.31(m，3H)，4.45(dd，2H)，4.75(s，1H)，4.81(t，1H)，5.81(s，1H)，6.75(t，1H)，6.96(d，1H)，7.28-7.40(m，5H)，8.1(dd，1H)，8.35(d，1H)實施例63 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]二噁烷-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例49相同方法進行，但用350mg(0.75mmol)實施例62中製備的化合物作原料。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到278mg(產率85％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.23(s，3H)，1.40-1.50(m，1H)，2.12-2.22(m，1H)，3.8-3.96(m，2H)，4.15-4.32(m，3H)，4.48(dd，2H)，4.70(s，1H)，5.41(d，1H)，6.52-6.71(m，3H)，7.15(s，1H)，7.30-7.39(m，5H)實施例64製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]-5，5-二甲基二噁烷-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍(步驟1)製備(2S，3S，4R)-4-[[(氰基亞氨基)苯氧甲基]氨基]-6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]-5，5-二甲基二噁烷-2-基)-2H-1-苯並吡喃反應用與實施例60步驟1同樣方法進行，但用1.1g(3.60mmol)製備例13中製備的化合物作原料。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到1g(產率86％)所需化合物。
(步驟2)製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]-5，5-二甲基二噁烷-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例48步驟2同樣方法進行，但用1g(2.1mmol)上述步驟1製備的化合物作原料。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到900mg(產率87％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ0.78(s，3H)，1.21(s，3H)，1.34(s，3H)，3.54(dd，2H)，3.76(d，2H)，4.20(d，2H)，4.44(dd，2H)，4.65(s，1 H)，4.81(t，1H)，5.82(s，1H)，6.72(t，1H)，6.96(d，1H)，7.29-7.41(m，5H)，8.11(dd，1H)，8.38(d，1H)實施例65 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]-5，5-二甲基二噁烷-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例49相同方法進行，但用400mg(0.81mmol)實施例64中製備的化合物作原料。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶3)，得到350mg(產率93％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ0.79(s，3H)，1.21(s，3H)，1.27(s，3H)，3.51(dd，2H)，3.74(d，2H)，4.2(d，1H)，4.35(d，1H)，4.51(dd，2H)，4.61(s，1H)，4.73(s，1H)，5.44(dd，1H)，6.52-6.75(m，3H)，7.16(s，1H)，7.28-7.41(m，5H)實施例66 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二乙氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍(步驟1)製備(2S，3S，4R)-4-[[(氰基亞氨基)苯氧甲基]氨基]-6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二乙氧基甲基-2H-1-苯並吡喃反應用與實施例48步驟1同樣方法進行，但用234mg(0.72mmol)製備例14中製備的化合物作原料。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到237mg(產率70％)所需化合物。
(步驟2)製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二乙氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例48步驟2同樣方法進行，但用217mg(0.46mmol)上述步驟1製備的化合物作原料。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到200mg(產率90％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.29(m，9H)，3.74(m，5H)，4.20(d，1H)，4.50(m，3H)，4.83(br s，1H)，5.92(m，1H)，6.52(m，1H)，6.90(d，1H)，7.34(m，5H)，8.11(dd，1H)，8.30(s，1H)實施例67 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二乙氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例49相同方法進行，但用122mg(0.25mmol)實施例66中製備的化合物作原料。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶3)，得到91mg(產率80％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.25(m，9H)，3.78(m，4H)，4.18(d，1H)，4.30(m，4H)，5.53(d，1H)，6.68(m，3H)，7.18(br，1H)，7.36(m，5H)實施例68 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-甲氧基羰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍(步驟1)製備(2S，3S，4R)-4-[[(氰基亞氨基)苯氧甲基]氨基]-6-甲氧基羰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-1-苯並吡喃反應用與實施例48步驟1同樣方法進行，但用399mg(1.28mmol)製備例15中製備的化合物作原料。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到397mg(產率68％)所需化合物。
(步驟2)製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-甲氧基羰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例48步驟2同樣方法進行，但用397mg(0.93mmol)上述步驟1製備的化合物和0.21ml(1.98mmol)苄基胺作原料。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到270mg(產率67％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.21(s，3H)，3.55(d，6H)，3.86(s，3H)，4.13(d，1H)，4.17(s，1H)，4.48(m，2H)，5.77(d，1H)，6.83(m，1H)，6.85(d，1H)，7.33(m，4H)，7.93(dd，1H)，7.99(s，1H)實施例69 製備(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-甲氧基羰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍(步驟1)製備(2R，3S，4R)-4-[[(氰基亞氨基)苯氧甲基]氨基]-6-甲氧基羰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-1-苯並吡喃反應用與實施例48步驟1同樣方法進行，但用121mg(0.39mmol)製備例16中製備的化合物作原料。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到131mg(產率74％)所需化合物。
(步驟2)製備(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-甲氧基羰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例48步驟2同樣方法進行，但用131mg(0.31mmol)上述步驟1製備的化合物和60ul(0.61mmol)苄基胺作原料。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到107mg(產率79％)所需化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.26(s，3H)，3.43(d，6H)，3.82(d，1H)，3.77(s，3H)，4.45(s，1H)，4.48(m，2H)，5.64(d，1H)，6.81(m，1H)，6.83(d，1H)，7.29(m，4H)，7.80(dd，1H)，7.84(s，1H)實施例70 製備(3S，4R)-N″-氰基-N-(8-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍(步驟1)製備(3S，4R)-4-[[(氰基亞氨基)苯氧甲基]氨基]-8-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-1-苯並吡喃反應用與實施例48步驟1同樣方法進行，但用0.97g(3.24mmol)製備例17中製備的化合物作原料。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到1.16g(產率81％)所需化合物。
(步驟2)製備(3S，4R)-N″-氰基-N-(8-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例48步驟2同樣方法進行，但用1.16g(2.6mmol)上述步驟1製備的化合物和0.85ml(7.8mmol)苄基胺作原料。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶2)，得到0.94g(產率79％)所需化合物，為(2S，3S，4R)-和(2R，3S，4R)立體化學結構的外消旋混合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.23(s，3H)，1.32(s，3H)，3.37-3.40(s，3H)，3.48(s，3H)，3.84-3.87(d，1H)，4.17-4.21(d，1H)，4.36-4.38(d，1H)，4.41-4.45(d，1H)，4.8(t，1H)，5.04(t，1H)，5.82(d，1H)，6.09(d，1H)，6.82-6.96(m，2H)，7.27(s，5H)，7.57-7.69(q，1H)實施例71 製備(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(8-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例49相同方法進行，但用298mg(0.66mmol)實施例70製備的外消旋混合物作原料。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶4)，得到117mg(產率42％)所需(2S，3S，4R)立體化學結構化合物。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.25(s，3H)，3.58(s，3H)，3.8(s，1H)，4.39-4.47(m，4H)，5.62(d，1H)，6.58-6.61(d，1H)，6.74-6.78(d，1H)，7.12(s，1H)，7.27-7.34(m，5H)實施例72 製備(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(8-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍反應用與實施例49相同方法進行，但用298mg(0.66mmol)實施例70製備的外消旋混合物作原料。用矽膠色譜對剩餘物進行純化(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶4)，得到106mg(產率38％)所需化合物(2R，3S，4R)立體化學結構。
1H NMR(CDCl3，200MHz)δ1.46(s，3H)，3.41(s，3H)，3.46(s，3H)，3.73-3.81(m，2H)，4.44(s，1H)，4.46(s，1H)，4.87(m，1H)，5.2(m，1H)，6.59-6.60(d，1H)，6.63-6.76(t，2H)，7.26-7.36(m，5H)上述實施例中製備的化合物列於表1
表1
表1(續) 實驗例對式1化合物進行了下列實驗，以研究其藥理作用。實驗例1大鼠離體血管的血管舒張作用進行了如下實驗，以考察式1化合物是否具有擴張血管作用。
敲擊雄性Sprague-Dawly大鼠(350-450g，來自the ExperimentalAnimal Team of the Korea Research Institute of Chemical Technology(韓國化學技術研究院實驗動物組))枕骨部位，將動物擊昏，用斷頸法殺死動物，並切開胸部。快速除去脂肪組織後，將胸主動脈切成3mm寬的主動脈環。用改進的Krebs Henseleit緩衝劑(生理鹽水溶液，PSS)浸溼的棉棒輕輕磨擦主動脈內壁，以除去內上皮層。當血管組織懸浮於含生理緩衝液的器官浴液時，在2g的靜止張力作用下平衡，在37℃放置1小時，為保持穩定通入含95％ O2-5％ CO2的碳合氣(carbogen)。
然後將血管組織用10-5M苯腎上腺素收縮，並用PSS洗幾次，此過程再重複一次，以保證血管平滑肌可反覆收縮/舒張，穩定的反應性。
另外，用3×10-6M甲氧胺誘導血管平滑肌強烈收縮。當血管收縮被甲氧胺誘導至最大程度時，將受試化合物和對照品逐漸加入到器官浴中，濃度為1，3，10和30uM，以誘導血管舒張。對照品是Cromakalim和BMS-180448(式2化合物)，二者均為第一代KATP激動劑，具強烈的血管舒張和保護心臟作用。
加入藥物之後，計算出被甲氧胺誘導的最大收縮變化，繪製濃度-擴張反應曲線圖。經線性回歸分析，獲得每種藥物的IC50，即血管組織擴大50％時藥物濃度，結果見下表2。
表2式1化合物對血管舒張和抗缺血作用(保護心臟作用)實驗例1 實驗例2 實驗例3血管舒張作用抗-局部缺血作用抗-局部缺血作用受試藥物(離體，大鼠主動脈) (體內，大鼠) (體內，狗)(IC50，μM) (0.3mg/kg i.v.) (2mg/kg/10min，i.v.)AAR/LVIZ/AAR AAR/LV IZ/AAR(％) (％) (％) (％)賦形劑 - 39.75 60.7837.6152.39Cromakalim 0.067BMS-180448 1.38 38.83 39.1437.7338.02實施例1514.07實施例249.78 37.92 48.4835.3328.03實施例25＞30 36.88 48.55實施例323.57 42.49 44.72實施例3824.4838.26 51.13實施例41＞30 33.59 30.25實施例41＞30Cromakalim的IC50是0.067uM，對經甲氧胺(3uM)收縮的大鼠離體主動脈表現出有力的血管擴張作用，而BMS-180448的IC50是1.38uM，是Cromakalim血管舒張活性的1/20。另外，本發明的化合物IC50的排列，從9.78uM至大於30uM，所以其血管舒張作用非常小，甚至比對照物Cromakalim和BMS-180448還小。
當作用於心臟KATP時，本發明的化合物對心臟起保護作用，另外，苯並吡喃胍衍生物作用於外周血管KATP時，可擴張血管，降低血壓。因此，本發明的化合物因其具較低血管舒張活性，具有更有效的保護心臟作用。
如上所示，本發明的化合物有低的擴張血管活性，以致在心臟保護功能方面被改進。實驗例2對大鼠缺血性心臟模型的保護心臟活性為確定式1化合物對缺血性心臟是否具有保護作用，確定該化合物對大鼠的抗缺血作用進行如下。
雄性大鼠(350-450g，來自韓國化學技術研究院實驗動物組)經腹膜注射戊巴比妥(劑量為75mg/kg)麻醉，切開氣管後，對大鼠施以人工呼吸，心率為60/分，心搏量為10ml/kg。在fermoral靜脈和動脈插入導管，將fermoral靜脈和動脈分別作為給藥及測血壓入口。
在缺血性心肌損傷模型中，體溫對結果有重要影響。為避免體溫的改變，在每隻大鼠的直腸中插入體溫計探頭，藉助於等溫毯控制單元，使體溫保持恆定的37℃。
之後，在試驗中，連續測定大鼠的動脈血壓和心率。為測血壓，使用壓力傳感器，如使用Grass Ins.，MA，U.S.A.製造的Model StathamP23XL。用一種流速計，如製造於Gould Inc.，OH，U.S.A.的Biotachometer來測心率。另外，用Gould Inc製造的Gould 2000圖表記錄器將發生的所有變化記錄下來。
按照Selye H.的方法堵塞左側冠狀動脈，將大鼠左胸切開，形成部分開胸，用左手中指壓迫右胸，將心臟推出。立即在左前下行冠狀動脈後(以下稱LAD)仔細地用5-0號結紮絲線和縫合針縫合，將心臟重新放回胸腔中，同時將絲線兩端置於胸腔外。將絲線相對的兩端穿過一個PE管(PE100，2.5cm)並放鬆20分鐘，以使其穩定。經由插入股動脈的套管，將賦形劑或藥物對大鼠給藥，等待30分鐘，以使藥效充分發揮作用。用BMS-180448作對照藥，受試藥與對照藥的靜脈注射用量均為0.3mg/kg。
然後，將穿過雙股扎線的PE管推向心臟，用止血鉗緊拉絲線端，使PE管垂直，同時壓迫冠狀動脈。將PE管放置45分鐘，以堵塞冠狀動脈，接著拿掉止血鉗，然後重新灌注90分鐘。
按上述方法重新堵塞冠狀動脈後，給大鼠經靜脈給2ml 1％伊文斯蘭，然後給予過量戊巴比妥靜脈注射，以處死大鼠，然後取出心臟，去除右心室和兩個心房。將左心室從心尖水平切成5-6片，稱重。從每片表面獲得的圖像用Hi-scope輸入帶有圖像分析程序(Image ProPlus)的計算機中。從輸入計算機的圖像測定在計算機監視器上呈蘭色的正常血流組織區域或無色的區域，計算每片無色區佔總區域的百分比並乘以每片重，確定每片的危險面積(AAR)。將所得的每片的AAR加在一起所得的總AAR除以左心室總重量，得到的％ AAR，見如下數學式1數學式1 另外，將心臟切片在2，3，5-三苯基四唑鹽酸鹽(TTC)磷酸鹽緩衝液(pH 7.4)中於37℃溫育15分鐘，在10％福馬林溶液中固定20-24小時。固定期間，2，3，5-三苯基四唑鹽酸鹽被心肌脫氫酶還原成formazan染料及其輔助因子NADH，使正常組織區域染為磚紅色。相反，組織的梗塞區缺乏脫氫酶及其輔助因子，2，3，5-三苯基四唑鹽酸鹽不發生還原，所以不變色。
根據組織區域是否被2，3，5-三苯基四唑鹽酸鹽染色測量每片心室切片正常和梗死區面積。將每片梗死區面積相加，將和除以總AAR重量或總左心室重量，得％ IZ見如下數學式2數學式2 在這些試驗模型中，測定出一些受試藥物具有更高的抗缺血活性，因為其％ IZ較小。結果見上表2。
如表2所示，在麻醉大鼠缺血心肌損傷模型中，給賦形劑的對照組心肌梗塞率比危險區率(IZ/AAR)是60.78％，表明心肌發生了嚴重的損傷。BMS-180448組的心肌梗塞率是39.14％，表明有明顯抗缺血活性。僅用心肌梗塞率一項比較，本發明的化合物類似或優於BMS-180448。但因本發明的化合物在血管舒張活性方面比BMS-180448顯著降低，所以大大優於常規心臟-選擇性抗缺血活性藥物。尤其是實施例40化合物具有極低的血管舒張活性(IC50＞30uM)，其心肌梗塞率低至30.25％，與BMS-180448相比，在血管舒張方面表現出更好的心臟-選擇性活性。而且，本發明的化合物不降低血壓。因此本發明的化合物可用作缺血性疾病的治療，因其對於缺血性心血管疾病具有良好的保護活性。實驗例3比格狗缺血性心臟模型中的保護心臟活性為確定式1化合物對大動物缺血性心臟是否具有保護活性，如下進行了測定化合物對比格狗抗缺血作用的實驗。對比格狗的實驗方法按Grover et al.(G.J.Grover et al.，J.Cardiovasc.Pharmacol.25，40(1995)).
經靜注戊巴比妥35mg/kg將狗麻醉後，雄性比格狗(8-12kg)再用戊巴比妥鈉經右側頭靜脈灌注，劑量是3-4mg/kg，以保持持續麻醉。在每隻狗呼吸道插入導管，以保證實驗過程中呼吸，然後藉助於導管(如CWE Inc.，PA，U.S.A生產的呼吸管Model SAR-830)呼吸，利用室內空氣和供氧，使CO2分壓保持在30-35mmHg。每小時從插入股動脈的導管中取血0.5ml，用Ciba-Corning，MA，U.S.A.製造的BloodgasAnalyzer 280測定血氧濃度。同時觀察直腸溫度，通過控制放置實驗動物的實驗臺溫，使動物體溫保持在38℃。為測定血壓和心率，在股動脈插入一根肝素化的導管。用Grass Ins.，MA，U.S.A.製造的ModelStatham P23XL傳感器測量血壓。用Gould Inc.，OH，U.S.A.製造的Biotachometer流速計測量心率。另外用Gould Inc.製造的Gould 2000圖表記錄器連續記錄實驗中發生的變化。
切開第5肋間打開胸腔，從周圍組織中分出。然後將結紮絲線掛在LAD周圍，以堵塞LAD。將LAD上部結紮絲線從鄰近組織中分出，並定量測定血流。用MFE Ins.，MA，U.S.A.製造的1400 Thermal ChartRecorder圖表記錄器記錄。用Grass Model 7E多道生理儀，記錄和閱讀(Lead II)心電圖。為對實驗比格狗進行灌注，在左頭靜脈中插入導管並固定。手術後，待所有參數穩定下來後，將試驗化合物和對照物賦形劑從靜脈給藥。
在LAD堵塞前，將實驗動物分為對照組(PEG 400)和實驗組(KR-31372，50ug/kg/分鐘)。LAD堵塞前10分鐘通過靜脈灌注試驗藥物。灌注試驗藥物和對照物持續40分鐘(總劑量2mg/kg，總PEG400體積4ml或較少)。開始灌注10分鐘後，LAD被完全堵塞，90分鐘後，重新灌注以保持冠狀動脈血流5小時。5小時後，將導管插入LAD，以與血壓同樣壓力用Ringer’s溶液灌注。
將一種蘭紫色溶液(1mg/kg，10mg/ml)注射進左心房，然後給心臟進行電擊並去除。兩側心房都去除後，橫切心室，間隔0.5cm。用數位相機拍下橫切後產生的心室切片。為測量IZ值，將該組織切片在1％ 2，3，5-三苯基四唑鹽酸鹽磷酸鹽緩衝液中於37℃溫育30分鐘。然後再用數位相機拍下心室橫切片。用圖像分析程序(Image-Pro Plusver.3.0.1，Media Cybernetics，Maryland，U.S.A.)測定和分析AAR和IZ值。IZ以AAR的百分比表示(參照數學式2)。較低IZ值意味受試藥物對此比格狗模型更有效。結果見上表2。
在表2麻醉比格狗的缺血性心肌損傷模型中，本發明的化合物也顯示出在危險面積(AAR)中相當低的心肌梗塞發生率。具體數字是，使用溶劑組心肌梗塞率比危險面積(IZ/AAR)是52.39％，表明心肌發生嚴重損傷。使用BMS-180448組測定結果是38.02％心肌梗塞率，表明有較好的抗缺血活性。另外，用本發明的化合物時，心肌梗塞率減低至28.03％(實施例24化合物)。當然，使用本發明的化合物未發現有明顯的降低血壓作用。
如上所述，本發明的化合物對比格狗具有良好的抗缺血活性。其抗缺血活性優於對照組BMS-180448。因此，本發明的化合物可用作預防與治療缺血性心臟病有關的藥物。實驗例4對神經細胞的保護活性為考察式1化合物是否具有對鐵誘導的神經元的死亡的保護作用，進行實驗如下。從17-18日齡大鼠晶胚分離出腦皮層神經細胞，然後在5％ CO2孵箱中37℃培養7-9。將該皮層神經細胞培養物用極限必需培養基(MEM)洗兩次，以降低漿液濃度至0.2％，再用10uM和30uM每種受試化合物預處理30分鐘。將受試化合物溶於DMSO並在培養基中稀釋。此時，DMSO終濃度不得超過0.2％。對照組只用藥物的賦形劑。
受試化合物或賦形劑預處理之後，加入FeSO4至終濃度為50uM，將該培養物置CO2孵箱中24小時。培養期間，因鐵的氧化毒性神經細胞死亡，乳酸脫氫酶(LDH)被釋放入培養基中。通過測定LDH分泌在培養基中的量，可測定神經損傷的程度。計算治療組與對照組相比LDH的減少率，可評價受試化合物對神經的保護作用。結果見下表3。
表3式1所示化合物對神經元的保護作用化合物 濃度(μM) ％保護實施例24 30471029實施例25 306910實施例38 30781056實施例40 30971045如表3所示，本發明的化合物保護神經免受鐵損傷與劑量有關。實施例38化合物甚至在濃度為10uM時保護神經高達56％。另外，實施例40化合物顯示出保護率高達97％，表明該化合物對抗鐵誘導的神經損傷有強大的保護力。
由於本發明的化合物顯示出良好的神經保護作用，可用作預防或治療因神經損傷或死亡引起的神經紊亂的治療，如腦中風或痴呆以及炎症性疾病，如關節炎、心梗和急慢性組織損傷。實驗例5對脂質過氧化反應抑制活性(1)對鐵誘導的脂質過氧化反應的抑制作用為考察式1化合物是否可抑制鐵誘導的脂質過氧化反應，進行了如下實驗。
用Krebs緩衝液(15mM HEPES，10mM葡萄糖，140mM NaCl，3.6mM KCl，1.5mM CaCl2，1.4mM KH2PO4，0.7mM MgCl2，pH 7.4)對大鼠腦勻漿，以轉速12,000rpm離心10分鐘分出上清液，用作下步實驗。在終濃度為400uM腦勻漿中加入FeCl2，然後在37℃靜置30分鐘。為方便氧化，每種受試化合物以100uM濃度加入，藥物賦形劑作為對照。
鐵催化腦勻漿氧化，產生脂質過氧化反應產物丙二醛(MDA)，因此，MDA的量決定脂質過氧化反應。受試化合物對脂質過氧化反應的抑制作用可通過計算受試化合物比較對照組對MDA的還原比率而得出。
經典的MDA定量方法是將樣品與2-硫巴比妥酸(TBA)反應，然後測定在530nm處的吸光度。但該方法不適於大規模處理樣品，因有沸騰步驟。因此，在本實驗中，用N-甲基-2-苯基吲哚代替TBA。這種情況下，一分子MDA與兩分子N-甲基-2-苯基吲哚反應，形成在586nm有大吸收的發色團，且無需沸騰。用BioxytechRLPO-586Kit試劑盒定量MDA，結果見下表4a。
表4a式1所示化合物對由鐵引起的脂質過氧化的抑制效果化合物 濃度(μM) ％抑制實施例7100 70實施例24 100 12實施例25 100 2實施例32 100 86實施例38 100 4實施例40 100 79如表4a所示，本發明的化合物抑制鐵誘導的脂質過氧化反，應特別是實施例7，32和40化合物顯示出很強的抑制活性，對抗鐵誘導的脂質過氧化反應，抑制作用分別是70％，86％和79％。
(2)對銅誘導的LDL氧化抑制作用為考察式1化合物對銅誘導的LDL(低密度脂蛋白)氧化抑制作用，進行了如下實驗。
將人LDL(sigma)溶於蒸餾水，濃度為1mg/ml。在4℃用磷酸鹽緩衝液在氧化前透析LDL 18小時，更換三次磷酸鹽衝液，以除去EDTA(乙二胺四乙酸)。在CuSO4(10uM)存在下，無EDTA的LDL(100ug LDL蛋白/ml)在無EDTA磷酸鹽緩衝液中在37℃溫育18小時，預處理時將受試化合物或生育酚(tochopherol)終濃度設為10-9，10-7和10-5M。不加CuSO4的受試化合物作為空白對照，賦形劑作為溶劑對照組。通過加入EDTA(200uM)，在4℃終止氧化。
銅Cu+2)催化LDL氧化，產生丙二醛(MDA)，因此與上述實施例5(1)相同，MDA的量決定脂質過氧化反應。用樣品與2-硫巴比妥酸(TBA)的反應定量MDA，並測定在530nm處的吸收。1，1，3，3-四甲氧基丙烷(Sigma)用作標準物，計算每mg蛋白與MDA等價的nmol量。受試化合物對脂質過氧化反應的抑制作用可通過計算受試化合物比較對照組對MDA的還原比率而得出。結果見下表4b。
表4b式1所示化合物對由銅引起的脂質過氧化的抑制效果化合物 濃度(M) ％抑制實施例40 10-97.610-724.310-527.6生育酚10-918.510-721.310-529.7
如表4b所示，實施例化合物40在濃度為10-7和10-5M時明顯抑制銅誘導的LDL氧化，其作用類似於生育酚。
(3)對A7r5介導的LDL氧化的抑制作用為考察式1化合物是否具有抑制A7r5介導的LDL氧化的抑制作用，進行了如下實驗。
用補充了10％熱滅活FBS(胎牛血清)和1％抗生素的DMEM培養基(Dulbecco′s改進的Eagle′s培養基)，將A7r5(ATCC CRL-1444，平滑肌，胸大動脈，BDIX大鼠)細胞在24孔板上培養。用磷酸鹽緩衝液和補充了10％ FBS和1％抗生素的DMEM在衝洗板上衝洗生長至匯合的A7r5，每孔衝洗液的量是0.5ml。在有或無受試化合物(10-6-10-4M)或生育酚(10-6-10-4M)存在下，將細胞(2×105個/ml)在37℃預培養30分鐘。然後將A7r5單獨或A7r5加H2O2(10-7M)暴露於LDL(100ug/ml)24小時。
如同上述實施例5(2)，受試化合物對脂質過氧化反應的抑制作用可通過計算受試化合物比較對照組對MDA的還原比率而得出。結果見下表4c。
表4c式1所示化合物對由A7r5介導的LDL氧化的抑制效果化合物 濃度(M) ％抑制LDL LDL+H2O2(10-7M)實施例4010-640.949.710-551.462.510-457.564.3生育酚 10-641.143.210-557.053.010-473.763.9
如表4c所示，在所有濃度的試驗中，實施例40化合物和生育酚明顯抑制A7r5介導的LDL氧化。尤其是當加入H2O2時，實施例40化合物表現出更明顯的抑制LDL氧化作用。
由於從上述試驗例5(1)，(2)(3)可以看出抑制脂質過氧化物反應活性，本發明的化合物可用作防治因脂質過氧化反應及其脂質在組織中蓄積引起的神經變性的疾病的藥物，如腦中風或痴呆以及炎症性疾病，如關節炎、心梗和急慢性組織損傷。實驗例6對NO產物的抑制作用為考察式1化合物抑制一氧化氮(NO)形成的作用，進行了如下實驗。
37℃在5％ CO2孵箱中用加有10％胎牛血清(FBS)的RPMI1640培養基培養RAW 264.7細胞(來自American Type Culture Collection)，鼠巨噬細胞系。收穫RAW264.7，用加有5％胎牛血清(FBS)的RPMI培養基調整細胞密度至5×105/ml，並放置於96孔板上，每孔5×104細胞。然後在CO2孵箱中培養，去除培養基後，細胞用含33uM和100uM受試化合物的新鮮培養基預處理1小時。將受試化合物溶於DMSO並在培養基中分別稀釋。為儘量減少孔中DMSO影響RAW264.7細胞對一氧化氮形成，培養基中DMSO的允許濃度為0.1％或更少。
完成預處理後，加入脂多糖(LPS，大腸桿菌血清型055B5)激活細胞，然後在CO2孵箱中放置24小時。RAW264.7細胞被LPS激活，結果形成NO。NO以亞硝酸形式NO2-釋放入培養基，用格裡斯試劑定量測定。對照組除用賦形劑代替化合物外，進行同樣試驗。用亞硝酸標準品顯示受試藥物本身不影響NO的定量測定。
根據NO量的減少，測定了與對照組相比受試化合物對產生NO的抑制作用。結果見下表5。
表5式1所示化合物對NO形式的抑制效果化合物 濃度(μM)％抑制實施例7 100 88實施例24 100 483316實施例25 100 543339實施例32 100 83實施例38 100 853356實施例40 100 26如表5所示，本發明的化合物在抑制因內毒素，如LPS，誘導產生NO方面顯示出劑量依賴型作用。特別是，實施例38化合物甚至在濃度低至33uM時，抑制產生NO活性仍高達56％。另外，實施例7和32的化合物在濃度為100uM時，抑制率分別高達88％和83％，表明本發明的化合物具有很強的抑制LPS誘導產生NO的活性。
由於具有很好的抑制產生NO的活性，本發明的化合物可用作預防或治療因釋放大量NO使神經損傷或死亡引起的神經紊亂的治療，如腦中風或痴呆以及用於炎症性疾病，如關節炎、心梗和急慢性組織損傷的治療。實驗例7對腦缺血重新灌注引起的腦損傷的預防作用為考察式1化合物對腦缺血重新灌注引起的腦損傷的保護作用，進行了如下實驗。
雄性Sprague-Dawley大鼠(350±50g，來自SamYook ExperimentalAnimals Co.，Korea)注射戊巴比妥鈉麻醉動物，劑量為40mg/kg，之後在股靜脈和動脈插入PE-10導管，同時暴露左頸動脈。手術前5分鐘，在動物腹腔注射20ug/kg硫酸肝磷脂。為連續測量血壓，在股動脈插入一個測量血壓裝置。從股靜脈取血約10ml，以降低血壓至30mmHg。如再抽取7ml血，血壓也不能低於100mmHg，這樣的大鼠被認為有較高交感神經過敏症。此種情況下，這些大鼠從實驗動物中剔除，因為血壓不會降至30mmHg，或者即使能成功降低血壓，這種大鼠在手術後也會出現高死亡率。
血壓在30mmHg保持20分鐘後，暴露的左頸動脈用動脈瘤夾堵塞20分鐘，造成腦局部缺血。然後除去頸動脈夾，將抽出的血重新灌注。為使系統酸中毒程度降至最小，對大鼠重新灌注5ml含0.84％碳酸氫鈉的鹽水(碳酸氫鈉鹽水)。在手術期間和恢復期間，用電熱毯和白熾燈泡保持體溫在37±0.5℃。在手術中恢復期間，體溫保持恆定2小時或更長時間。待完全恢復後，將大鼠轉移到觀察室，該處處於溫度(27℃)、溼度(60％)和光照時間(12-12小時)均穩定的條件。
手術後24小時，在操作臺上處死大鼠迅速拿出腦(3分鐘)。將取出的腦置於冰上，用腦切片機切成6個2mm厚切片。將切片在37℃浸入2％2，3，5-三苯基四唑鹽酸鹽溶液中30分鐘。拍下浸過的腦切片照片後，列印，測量梗塞面積佔總腦面積的百分比。並用圖像分析儀(Image-Pro Plus ver.3.0.1)進行分析。
手術前30分鐘及頸動脈堵塞後2、4及16小時，將受試化合物經腹膜注射入大鼠，劑量為30mg/kg。對照組注射賦形劑。陽性對照物MK801(RBI，10，11-二氫-5H-二苯並[a，d]環庚-5，10-亞胺氫化馬來酸(SR，10S)-(+)-5-甲酯)給藥劑量是3mg/kg，以同樣的間隔時間給藥。
受試化合物對因腦缺血再灌注引起的腦損傷的保護作用，以與對照組相比腦梗塞減少的百分比表示。結果見下表6。
表6式1所示化合物對由腦局部缺血-再灌注引起的腦損傷的保護效果被測藥物劑量 梗死面積No.
(mg/kg)平均±SD(％) 減少(％)賦形劑 039.7±1.6 10MK801 329.8±1.5 24.8*7實施例4030 23.0±3.3 42.0*11*P＜0.01與只施給賦形劑的對照組相比大鼠給MK801，劑量為3mg/kg的陽性對照組，其梗塞面積是29.8％，比空白對照組減少24.8％。用實施例40化合物組，其梗塞面積是23.0％，比空白對照組減少42.0％。因此，實施例42化合物對因腦缺血再灌注引起的腦損傷的保護作用是常規藥物MK801效果的兩倍。
用MK801的治療組，大鼠表現出低活動性的副作用，而用實施例40化合物組，大鼠未出現任何副作用，包括行為改變如活動性方面的副作用。
由於具有對因腦缺血再灌注引起的腦損傷的保護活性，本發明的化合物可用作預防或治療神經紊亂的藥物，如因腦血管栓塞誘發的腦損傷所引起的中風或腦缺血。實驗例8對血管生成的抑制作用為考察式1化合物對新血管形成的抑制作用，進行了如下實驗。
(1)對99mTc-DTPA的清除作用5mm×直徑12mm大小的聚酯海綿作為血管生長的基質。每個海綿內用線固定住一根長5mm的聚乙烯管。用劑量為300mg/kg水合氯醛腹腔注射將Sprague-Dawley大鼠麻醉。剃除大鼠頸部附近毛，在裸露的部位切開一長10mm的口，以保證皮下有足夠大的空間放置海綿。將海綿置於皮下切口中後，固定好以防管子搖動。為避免感染，除給藥時外，管口封閉。
為誘導血管生成，使用血管緊張素II。將血管緊張素II溶於加有磷酸鹽緩衝液的鹽水(PBS)。注射50ul濃度為100nmol的溶液。本發明的化合物溶於PBS，通過管子注射，劑量為0.1，0.3和1.0mg/kg。用賦形劑PBS或單用血管緊張素II以同樣劑量作為對照。受試化合物對血管生成的抑制作用在注射後測定7日。
通過測定血流中99mTc-DTPA(二乙撐三胺戊乙酸鎝(technetium-diethylenetriamine pentaacetic acid))清除量，檢查在移入的海綿中血管生成的程度。注射受試化合物後7日，再次對大鼠腹腔注射水合氯醛使其麻醉，劑量為30mg/kg，然後再通過管道小心注射50ul99mTc-DTPA(0.5mCi)在無菌PBS中的溶液。定量測定99mTc-DTPA 60分鐘。用伽瑪閃爍檢測器，用伽瑪相機，如帶有低能高解析度裝置的ADACVERTEX/SOLUS伽碼相機操作，用60秒時間拍下每個海綿60個鏡頭畫面。將這樣得到的連續圖像輸入計算機(Pegasys Sun計算機)供分析。
根據下列數學式3計算99mTc-DTPA清除率，結果見下表7a。[數學式3]
表7a式1所示化合物對血管生成的抑制效果被測藥物劑量99mTC的清除率(mg/kg)(p.o) (％)對照(PBS)- - 30.3對照AII(100nmol) - - 44.71試驗組 0.1 26.90AII(100nmol)+ 實施例24 0.3 18.22被測藥物1.0 3.38p.o.口服從表7a中明顯看出，通過比較給PBS對照組(30.3％)與給血管緊張素II對照組(44.71％)對99mTc-DTPA的清除率，血管緊張素II誘導新血管形成。當給予劑量為0.1mg/kg實施例24化合物，清除99mTc-DTPA 26.90％，清楚地表明該化合物抑制血管形成。另外，當給予劑量為0.3和1.0mg/kg實施例24化合物，清除99mTc-DTPA分別是18.22％和3.38％，表明本發明化合物抑制新血管形成是劑量依賴型的。特別是，劑量為1.0mg/kg的實施例24化合物表現出幾乎完全的抑制血管緊張素II誘導血管形成作用，其99mTc-DTPA清除低至3.38％。
(2)對HUVEC管形成的抑制作用為考察式1化合物在細胞水平是否對新血管有抑制作用，進行了如下實驗。
培養HUVEC(人類臍靜脈內皮細胞，ATCC CRL-1730)，放置在Matrigel培養基表面幾小時，以在血管內皮細胞誘導管生成。比較受試化合物與賦形劑對照組對管形成的作用，以直接證實其體外的抗血管生成作用。結果見表7b。
表7b對HUVEC管形成的抑制效果對管形成的抑制效果化合物濃度(μM) 10μM 100μM實施例2 +++實施例10 +++實施例16 +/- +/-實施例24 nd +實施例40 +++實施例52 +/- ++-無效 +/-弱效+中度有效 ++強效nd未檢測如表7b所示，濃度為10uM時，HUVEC管形成受到抑制，濃度為100uM時，實施例2，10，40和52表現出強烈抑制作用，並以劑量依賴方式。
由於具有良好的抑制血管形成活性，本發明的化合物可有效地用於各種因血管形成誘導的疾病的治療，如風溼性關節炎、牛皮癬、愛滋病併發症、癌症、糖尿病、視網膜病等。實驗例9對過氧化氫誘導的細胞內ROS的抑制作用為考察式1化合物對過氧化氫誘導的細胞內ROS的抑制作用，進行了如下實驗。
用H2DCFDA(2′，7′-二氯二氫螢光素雙乙酸鹽，Molecular Probes，Eugene，OR，USA生產)確定細胞內的ROS(反應性氧)的測定。H2DCFDA是一種非極性化合物，易於擴散入細胞，並在細胞內被酯酶水解為極性的衍生物H2DCF(2′，7′-二氯二氫螢光素)。該物質不能穿過細胞膜，因此被留在細胞內。H2DCF是低螢光性的，但可被細胞內的ROS轉化為高螢光性的DCF(2′，7′-二氯螢光素)。因此，細胞內的ROS形成可從轉化的DCF的量來確定。使用HUVEC(人類臍帶血管內皮細胞)或A7r5(大鼠胸主動脈平滑肌細胞)。在加有10％熱滅活FBS、0.1mg/ml肝磷脂鈉，0.03-0.05mg/ml ECGS(內皮細胞生長補充因子)及1％抗生素的Kaighn′s F12K培養基中培養HUVEC。A7r5在加有10％熱滅活FBS及1％抗生素的DMEM中培養。為測定細胞內的ROS，HUVEC或A7r5在受試化合物(10-7-10-5M)存在下被預培養30分鐘。然後，細胞用H2O2(10-6和10-5M)激活20分鐘)，然後在暗處於37℃在含5uM H2DCFDA的50mM磷酸鹽緩衝液(pH 7.4)中培養2小時。用螢光板閱讀器(FL600，Biotek Instruments生產)測定DCF螢光素(485nm激發，530nm發射)的量。結果見表8。
表8對由H2O2誘導的細胞內ROS的抑制效果細胞化合物 濃度(μm) 抑制(％)H2O2H2O2(10-6M) (10-5M)HUVEC 生育酚10-713.88.810-643.230.710-560.851.0實施例10-717.612.040 10-646.125.810-563.154.9A7r5丙丁酚10-772.010-6184.110-5185.3實施例10-772.024 10-6110.710-5185.3如表8所示，在HUVEC細胞中，實施例40化合物抑制H2O2誘導的ROS，其作用類似或優於生育酚。實施例24化合物濃度在10-6和10-5M時，完全抑制ROS。
由於其良好的抗氧化劑作用，可以抑制細胞內的ROS形成，本發明的化合物可用作防治神經變性類疾病，如腦中風和腦缺血；炎症性疾病，如關節炎、動脈硬化、心梗和因ROS引起的急慢性組織損傷。實驗例10或AC試驗為考察式1化合物是否可去除氧自由基，進行了如下實驗。
ORAC(氧自由基吸收能力)測驗是一種體外方法，能夠評定一種藥物在水環境中對氧自由基的吸收能力。該方法利用β-PE(β-藻紅蛋白)作為指示劑蛋白，並用AAPH(2，2′-偶氮雙(2-脒基丙烷)二鹽酸鹽)作為過氧化物指示劑。反應混合物由受試化合物(10-6M和10-4M)，β-PE(1.76×10-8M)，和AAPH(3×10-3M)在75mM磷酸鹽緩衝液(pH 7.0)中的溶液組成。在24孔板上使用終體積為2ml。先將受試化合物溶於丙酮，然後加至反應混合物中。一待加入AAPH，反應即在37℃開始進行，每5分鐘用螢光素閱讀器(FL600，Biotek Instrument)測定螢光素一次。根據受試化合物存在下β-PE的螢光曲線下的面積計算ORAC單位，與1uM Trolox產生的面積相比較。1 ORAC單位代表1uM Trolox產生的淨保護值。結果見表9。
表9ORAC測驗化合物 濃度(μM)ORAC單位生育酚10-61.010-41.568丙丁酚10-61.32710-41.566實施例40 10-62.04710-43.250
如表9所示，實施例40化合物比生育酚和丙丁酚在濃度為10-6和10-4M時，ORAC單位大約高2倍，表明具有良好的自由基吸收能力。
由於具有良好抗氧化劑除去氧自由基的作用，本發明的化合物可用作防治神經變性類疾病，如腦中風和腦缺血；炎症性疾病，如關節炎、動脈硬化、心梗和自由基引起的急慢性組織損傷。實驗例11對缺血性視網膜細胞的保護作用為考察式1化合物是否可保護缺血性視網膜細胞，進行了如下實驗。
受試化合物溶於DMSO以製備貯備液(100mM)，用生理鹽水稀釋到濃度為100，50和30uM。受試化合物在局部缺血前經玻璃體注射給藥。
成年大鼠經腹膜內注射水合氯醛(400mg/Kg)麻醉，然後在右眼中滴入1％託品醯胺散瞳。眼內壓(IOP)升到160-180mmHg，高於正常血壓(140mmHg)，在前房插入管子與流體壓力計連接。經檢眼鏡檢查血流證實血流被中斷，提高的IOP保持30分鐘。局部缺血30分鐘後摘除雙眼，分離視網膜，觀察細胞的損傷。計算在神經節細胞層(250×25um)和核內層((150×25um))中的細胞數，然後計算活細胞與非手術左眼中正常細胞對照的百分比。結果見表10。
表10對缺血性視網膜細胞的保護作用活細胞(％)神經節細胞層 核內層正常對照 100100缺血組34.5 51.7實施例40 30μM 40.7 54.850μM 60.2 69.8100μM 77.9 82.6如表10所示，實施例40化合物在視網膜局部缺血後保護神經節細胞層與核內層，並顯示劑量依賴方式。
由於在視網膜神經節細胞層與核內層具有良好的抑制缺血性神經細胞死亡的保護作用，本發明的化合物可用作治療因局部缺血引起的青光眼和視神經疾病。實驗例12對糖尿病大鼠的MNCV(運動神經傳導速率)的作用為考察式1化合物是否可改善糖尿病大鼠損傷的MNCV，進行了如下實驗。
在大鼠腹腔內注射鏈脲黴素(65mg/Kg)，誘發糖尿病，然後將受試化合物溶於2ml溶媒(生理鹽水∶乙醇∶吐溫80＝8∶1∶1)中的溶液，每日一次飼喂。用三氟溴氯乙烷將大鼠麻醉，然後暴露出坐骨神經以測定MNCV。在神經的兩點進行刺激。第一個刺激電極插在近側端，第二個刺激電極插在髖部的凹口。共軸的針狀電極插入指間的肌肉，然後通過兩極的刺激誘發肌肉動作電位。傳導速度的計算是兩個刺激點間的距離除以反應時間差。用硫辛酸(100mg/Kg)與式1化合物對比，以比較對糖尿病大鼠損傷的MNCV的恢復率。根據下列式4計算MNCV恢復率(％)。結果見表11。 [數學式4]表11對糖尿病大鼠中MNCV的作用NMCV(秒) 恢復(％)正常對照 51.937 100糖尿病大鼠40.647 -硫辛酸56.070 136.6(100mg/Kg)實施例40 47.756 63.0(30mg/Kg)如表11所示，糖尿病大鼠的MNCV比正常對照組明顯降低。硫辛酸(100mg/Kg)可完全恢復糖尿病大鼠損傷的MNCV。使用實施例40(30mg/Kg)糖尿病大鼠明顯提高了MNCV。實驗例13糖尿病大鼠傷害疼痛試驗(熱板試驗)為考察式1化合物是否可改善糖尿病大鼠受損的感受傷害的反應，進行了如下實驗。
用熱板考察了受試化合物對大鼠傷害的反應。
對大鼠誘發糖尿病及處理受試化合物方法相同。將大鼠置於50℃熱板上，然後測定受傷害的作用時間，如舔爪時間。根據下列式5計算糖尿病大鼠對受傷害反應的恢復率(％)。結果見表12。 表12對糖尿病大鼠的受傷害反應的作用感受傷害反應(秒)恢復(％)正常對照 4.698 100糖尿病大鼠對照 3.986 -硫辛酸 4.371 60.2實施例40 4.791 106.5如表12所示，在熱板試驗中硫辛酸明顯改善糖尿病大鼠受損的感受傷害反應，實施例40化合物完全恢復了糖尿病大鼠受損的感受傷害反應。
由於從上述實驗例12和13中可看出，本發明的化合物具有明顯提高糖尿病大鼠MNCW和改善受損的感受傷害的反應活性，以及具有抗氧化劑活性和神經細胞保護作用。本發明的化合物可用作防治糖尿病性神經病變及糖尿病外周神經失調。實驗例14對腦缺氧損傷保護作用為考察式1化合物保護新生大鼠腦缺氧損傷，用MRS(磁共振譜)進行了如下試驗Focal，新生大鼠腦缺氧損傷模型，最常用來研究新生兒窒息，因其腦成熟程度近似於人類嬰兒大腦，且容易得到足夠所需動物數量，以確定作用。據報導，由於破壞了細胞膜，包括血腦屏障[A.Bizzi et.al.，Magnetic Resonance Imagin 14 581-592(1996)]，造成的缺血性神經細胞傷害，在MRS(磁共振譜)中的脂峰增高，而且脂質和凋亡濃度與凋亡密切相關[Van der A.Toorn et al.，Magnetic Resonamce inMedicine，36，914-922(1996)].N-乙醯基天冬氨酸(NAA)和肌氨酸(Cr)是神經細胞的標誌物。證實脂質/NAA(N-乙醯基天冬酸)值和脂質/Cr(肌氨酸)與缺氧腦損傷形態上的改變和凋亡程度相關。
新生大鼠(7日內，10-15g)置於低氧倉內2小時，以誘發缺氧，在造成缺氧前1小時將受試化合物經腹腔內注射。獲得腦損傷一天後的質子MRS，確定脂質/NAA和脂質/Cr值。
表13對缺氧腦損傷的保護作用脂質/NAA脂質/Cr缺氧對照 4.634.11實施例40 2.512.33(50mg/Kg)如表13所示，實施例40化合物明顯降低脂質/NAA和脂質/Cr的值，提示對腦損傷具有保護作用。由於其對新生大鼠腦缺氧損傷具有良好的保護作用，本發明的化合物可用作防治新生兒窒息。實驗例15抑制血管平滑肌細胞增殖的作用為考察式1化合物是否可抑制血管平滑肌細胞增殖，進行了如下實驗。
通過測定[3H]-胸腺嘧啶核苷結合進DNA，評價抑制細胞增殖。在含10％ FBS的DMEM的24孔板上生長大鼠主動脈平滑肌細胞3日，至接近匯合。然後衝洗去含10％ FBS的DMEM。細胞再在無血清的DMEM中靜置培養48小時。加入受試化合物之後15分鐘加入血管緊張素II(10-7M)，該物質可刺激細胞增殖，然後溫育72小時。在溫育的最後4小時期間加入[3H]-胸腺嘧啶核苷(1uCi/ml)。除去放射性培養基並用DMEM(3×1ml)衝洗細胞三次，以除去未結合的同位素，用15％ TCA(三氯乙酸)處理至少2小時，接著加入0.2N NaOH(0.25ml)保持30分鐘。用玻璃微纖過濾器真空過濾樣品(GF/B.Whatmann)。用2ml 5％ TCA衝洗濾器3次後，摻入了放射性活性的DNA用液體閃爍計數計(Liquid Scintillation Counter)(Packard，TRI-CARB，2100TR)計數，然後計算[3H]-胸腺嘧啶核苷的百分摻入率。結果見表14。
表14對[3H]-胸苷摻入DNA百分比的影響化合物 摻入血管緊張素II 100實施例737.8實施例553.6實施例259.0實施例14 60.0實施例22 64.0如表14表示，實施例2、5和7化合物明顯抑制DNA合成，表現出低於60％的[3H]-胸腺嘧啶核苷的百分摻入率。尤其是實施例化合物7表現出37.8％的低摻入率。
由於對血管平滑肌細胞增殖良好的抑制作用，本發明的化合物可用作防治冠狀動脈堵塞介入術後發生再狹窄。實驗例16大鼠急性口服毒性試驗確定式化合物1毒性的試驗進行如下本試驗用六周齡SPF SD大鼠，每組2隻大鼠。將實施例1，2，3，5，7，8，9，10，13，14，15，19，22，23，24，25，26，28，29，30，31，32，33，34，35，36，37，38，39，40，41，44，46，47，48，49，51，52，57，58，60，62，64，67，68，69，71和72化合物分別懸浮於0.5％甲基纖維素，用球形端針對大鼠口服給藥，單次劑量是1g/kg，總劑量是10ml/kg。給藥後觀察動物的臨床毒性或死亡率及測量體重的變化。觀察期末將所有存活動物經乙醚麻醉後剖腹，並從腹主動脈取血，做血液學試驗和生化分析。處死動物後做屍檢，進行器官和組織的宏觀檢查。取出重要器官和組織樣品，用10％中性緩衝的福馬林溶液固定，然後經標準組織病理學方法處理，並在顯微鏡下檢查。在臨床症狀、體重和死亡率方面無明顯改變。在血液學、血清化學參數與宏觀觀察方面也未觀察到與藥物有關的改變。結果表明至劑量為1g/kg，所有受試化合物未對大鼠顯示毒性，大鼠口服藥物的半數致死量(LD50)大於1g/kg。
本發明已用說明的方式進行了闡述，但應理解為，所用的術語只是為說明本發明的性質，而非對其限制。按上述方法可對本發明進行許多修改和變更。因此應理解為，本發明的範圍僅在所附權利要求之內，並不限於以上特定的描述。
權利要求
1.下列式1所示的苯並吡喃胍衍生物，其立體化學異構體和其藥物可接受的鹽式1 其中，R1代表H，滷素，CF3，NO2，CN，ORa，O(C＝O)Ra，COORa，NH2，NHS(O)mRa，NH(C＝O)Ra或S(O)mRa；Ra代表C1-C4直鏈或支鏈烷基或芳基；m是整數0-2，R2代表C1-C4直鏈或支鏈烷基，R3代表CH2ORa， 或 Ra如上定義；Rb和Rc互相獨立，分別代表C1-C4直鏈或支鏈烷基；Z代表C1-C5直鏈或支鏈烷基，R4代表OH，H，滷素，ONO2或O(C＝O)Ra；Ra如上定義；R5和R6互相獨立，代表H，滷素，直鏈或支鏈C1-C3烷基，ORa，CX3，NO2，CO2Ra，-(C＝O)Ra或SO3Ra；Ra如上定義；X代表滷素，及n是整數0-2。
2.根據權利要求1的苯並吡喃胍衍生物，其立體化學異構體及其藥物可接受的鹽，其中，R1代表NO2，CN，NH2或S(O)mRa；Ra代表直鏈或支鏈C1-C2烷基，或芳基；m是整數0-2，R2代表CH3，R3代表 或 Rb和Rc互相獨立，分別代表直鏈或支鏈C1-C3烷基；Z代表直鏈或支鏈C1-C5烷基，R4代表OH，H或-O(C＝O)Ra；Ra代表直鏈或支鏈C1-C3烷基；R5和R6互相獨立，代表H，滷素，直鏈或支鏈C1-C3烷基，ORa，CX3或NO2；Ra代表直鏈或支鏈C1-C3烷基；X代表滷素，及n是整數0-2。
3.根據權利要求1的苯並吡喃胍衍生物，其立體化學異構體及其藥物可接受的鹽，其中，式1化合物選自1)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；2)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；3)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-氯苯基)胍；4)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-氯苯基)胍；5)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-硝基苯基)胍；6)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-三氟甲基苯基)胍；7)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-三氟甲基苯基)胍；8)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苯基)胍；9)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苯基)胍；10)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；11)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；12)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-氯苯基)胍；13)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-氯苯基)胍；14)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-三氟甲基苯基)胍；15)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-三氟甲基苯基)胍；16)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苯基)胍；17)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苯基)胍；18)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲基苯基)胍；19)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲基苯基)胍；20)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苄基)胍；21)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苄基)胍；22)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；23)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；24)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；25)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；26)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；27)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；28)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-羥基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；29)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-羥基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；30)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；31)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；32)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(2-氯苯基)胍；33)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(2-氯苯基)胍；34)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(2-三氟甲基苯基)胍；35)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(2-三氟甲基苯基)胍；36)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(2-氯苄基)胍；37)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(2-氯苄基)胍；38)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-乙醯氧基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；39)(2S)-N″-氰基-N-(6-硝基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；40)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；41)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-乙醯氧基氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；42)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-甲磺醯氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；43)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；44)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-氰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-氯苯基)胍；45)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；46)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-氰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；47)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-溴-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；48)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3，4-二甲氧基苄基)胍；49)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3，4-二甲氧基苄基)胍；50)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苄基)胍；51)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(4-甲氧基苄基)胍；52)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-硝基苄基)胍；53)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-三氟甲基苄基)胍；54)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-(3-三氟甲基苄基)胍；55)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-甲磺醯氧基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；56)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-甲磺醯氧基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；57)(2S，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；58)(2R，3R，4S)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；59)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；60)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]二氧戊環-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；61)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]二氧戊環-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；62)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]二噁烷-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；63)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]二噁烷-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；64)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]-5，5-二甲基二噁烷-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；65)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-([1，3]-5，5-二甲基二噁烷-2-基)-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；66)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二乙氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；67)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二乙氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；68)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-甲氧基羰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；69)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(6-甲氧基羰基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；70)(3S，4R)-N″-氰基-N-(8-硝基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；71)(2S，3S，4R)-N″-氰基-N-(8-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍；及72)(2R，3S，4R)-N″-氰基-N-(8-氨基-3，4-二氫-3-羥基-2-甲基-2-二甲氧基甲基-2H-苯並吡喃-4-基)-N′-苄基胍。
4.製備權利要求1所述苯並吡喃胍衍生物的方法，包括將氨基醇化合物(III)與硫脲化合物(IV)在縮合劑存在下進行反應，得化合物(I′)方案1 其中，R1，R2，R3，R4，R5，R6及n定義如上。
5.權利要求4所述的方法，其中，縮合劑選自水溶性的碳二亞胺型縮合劑，包括1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽及N，N′-二環己基碳化二亞胺。
6.權利要求4所述的方法，其中反應溶劑選自二氯甲烷、氯仿、二甲基甲醯胺和二甲亞碸。
7.製備權利要求1所述的苯並吡喃胍衍生物的方法，包括以下步驟1)將氨基醇化合物(III)與氰基碳亞胺酸二苯酯(X)在鹼存在下製備化合物(V)(步驟1)；及2)將化合物(V)與胺化合物(VI)反應，製備化合物(I′)(步驟2)，方案2 其中，R1，R2，R3，R4，R5，R6和n定義如上。
8.權利要求7所述的方法，其中，步驟1中所用的鹼選自叔胺，包括三乙胺、N，N-二異丙基乙胺、吡啶、1，8-二氮雜雙環[5.4.0]十一碳-7-烯和4-(二甲基氨基)吡啶。
9.權利要求7所述的方法，其中，步驟1或步驟2所用反應溶劑選自醇，包括乙醇和異丙醇；二甲基甲醯胺；二甲亞碸及氯仿。
10.用於保護心臟的藥物組合物，其可作為防治心肌梗塞和充血性心力衰竭及心絞痛的藥物，所述藥物組合物含權利要求1所述的苯並吡喃胍衍生物或其藥物可接受的鹽作為活性成分。
11.抑制脂質過氧化反應的藥物組合物，含權利要求1所述的苯並吡喃胍衍生物或其藥物可接受的鹽作為活性成分。
12.用於抑制NO產生的藥物組合物，含權利要求1所述的苯並吡喃胍衍生物或其藥物可接受的鹽作為活性成分。
13.保護因腦缺血再灌注引起的腦損傷的藥物組合物，含權利要求1所述的苯並吡喃胍衍生物或其藥物可接受的鹽作為活性成分。
14.通過抑制血管生成用於治療癌症和糖尿病性視網膜病的藥物組合物，含權利要求1所述的苯並吡喃胍衍生物或其藥物可接受的鹽作為活性成分。
15.通過抑制脂質過氧化反應和反應性氧用於防治神經變性疾病的藥物組合物，所述神經變性疾病包括阿爾茲海默氏症和老年性痴呆及動脈硬化症，所述藥物組合物含權利要求1所述的苯並吡喃胍衍生物或其藥物可接受的鹽作為活性成分。
16.通過保護神經細胞用於防治新生兒窒息、青光眼、糖尿病性神經病和腦外傷的藥物組合物，含權利要求1所述的苯並吡喃胍衍生物或其藥物可接受的鹽作為活性成分。
17.通過抑制細胞增殖用於防治心瓣手術後再狹窄的藥物組合物，含權利要求1所述的苯並吡喃胍衍生物或其藥物可接受的鹽作為活性成分。
18.用於保護保存器官以及用於保護主要用在心血管外科的器官的藥物組合物，所述保存器官包括心、腎、肝和組織，所述藥物組合物含權利要求1所述的苯並吡喃胍衍生物或其藥物可接受的鹽作為活性成分。
全文摘要
本發明涉及新型式1所示苯並吡喃胍衍生物、其製備方法和苯並吡喃胍衍生物的藥物用途。本發明的苯並吡喃胍衍生物可用於保護心臟、神經細胞或腦損傷及保存器官。苯並吡喃胍衍生物還可作為抑制NO產生的藥物,並用於抑制脂質過氧化反應、血管生成或心瓣手術後再狹窄。式1其中,R
文檔編號A61K31/155GK1382134SQ00814655
公開日2002年11月27日 申請日期2000年10月20日 優先權日1999年10月21日
發明者柳聖殷, 李圭亮, 李仙卿, 金洛貞, 徐知希, 樸泳淑, 黃仙慶, 辛和燮, 李柄皓, 徐浩源, 林弘, 金善玉, 趙仁善, 南宮美愛, 張銅洙 申請人:東部韓農化學株式會社