葉綠素a降解產物金屬絡合物、其製備方法及抗胃潰瘍藥物的製作方法

2023-07-05 15:47:26 1

專利名稱：葉綠素a降解產物金屬絡合物、其製備方法及抗胃潰瘍藥物的製作方法
技術領域：
本發明涉及藥物化學領域，具體涉及葉綠素a降解產物金屬絡合物、其製備方法及抗胃潰瘍藥物。
目前臨床應用抗胃潰瘍藥物的主要作用是直接或間接控制胃酸釋放和保護胃黏膜；直接的化學制酸劑如小蘇打、氫氧化鋁凝膠等，間接控制胃酸釋放的如H2受體阻斷劑和所謂的質子泵羅賽克等；次碳酸鉍等在黏膜上形成一層保護性薄膜機械地減少或減輕胃酸對黏膜的刺激和損傷。在一定意義上，這些都屬於治標(謝長和藥學進展1998，22(2)101；Peter A et alJ Med Chem 1990，33543；MarshallBJAm J Gastroenterol 1991，8616)。
已知葉綠素降解產物的某些金屬絡合物對各種不同原因引起的胃潰瘍有一定的防治作用，與現有抗胃潰瘍藥物不同，其主要的抗胃潰瘍作用的機理是減輕和消除病灶面的炎症，最終消除潰瘍病灶而達到治癒(許德餘，等國外藥學-合成藥-生化藥——製劑分冊1987，8(3)146；日本藥事研究會月刊藥事1988，30(3)69；陶海鵬化西醫科大學學報1990，21(3)31)。
本發明的目的在於提供葉綠素a穩定降解產物的金屬絡合物。
本發明的目的還在於提供葉綠素a穩定降解產物的金屬絡合物的製備方法。
本發明的目的又在於提供含葉綠素a穩定降解產物金屬絡合物的抗胃潰瘍藥物。
本發明提供的葉綠素a穩定降解產物金屬絡合物為鋅、銅和鈷脫鎂葉綠酸a(I*)、焦脫鎂葉綠酸a(II*)、二氫卟吩e4(III*)、紫紅素18(IV*)和二氫卟吩p6(V*)，它們分別具有下列化學結構
式中M＝Zn2+；Cu2+；Co2+本發明提供的葉綠素a穩定降解產物金屬絡合物的製備方法是以家蠶糞葉綠素初提物為基始原料，經酸、鹼降解得到葉綠素a穩定降解產物脫鎂葉綠酸、焦脫鎂葉綠酸a、二氫卟吩e4、紫紅素18及其開環異構體二氫卟吩p6，這些降解產物分別與鋅、鈷或銅鹽反應形成它們的絡合物。
本發明提供的抗胃潰瘍藥物含葉綠素a穩定降解產物金屬絡合物及藥學上可接受的載體。
以下對本發明作詳細描述。
本發明提供的葉綠素a穩定降解產物脫鎂葉綠酸a、焦脫鎂葉綠酸a、二氫卟吩e4、紫紅素18和二氫卟吩p6的金屬絡合物具有如下穩定的化學結構
式中M＝Zn2+；Cu2+；Co2+上述葉綠素a穩定降解產物均為墨綠色或類黑色固體，不溶於水，溶於甲醇、四氫呋喃等極性有機溶劑；易溶於乙醚、氯仿等非極性有機溶劑。
它們的前體脫鎂葉綠酸a、焦脫鎂葉綠酸a、二氫卟吩e4、紫紅素18和二氫卟吩p6具有如下結構
脫鎂葉綠酸a(I)
焦脫鎂葉綠酸a(II)
二氫卟吩e4(III)
紫紅素18(IV)
二氫卟吩P6(V)本發明以我國豐富的廉價資源家蠶糞葉綠素初提物為基始原料，經酸、鹼降解得到葉綠素a穩定降解產物脫鎂葉綠酸a、焦脫鎂葉綠酸a、二氫卟吩e4、紫紅素18及其開環異構體二氫卟吩p6並製成它們的金屬絡合物，具體製備方法如下1、脫鎂葉綠酸a和焦脫鎂葉綠酸a的製備將家蠶糞葉綠素初提物按1∶3-1∶10重量比(較佳為1∶4-1∶5)溶於非極性有機溶劑(較佳為乙醚、石油醚或汽油)，加入等體積或過量的濃鹽酸，室溫下攪拌反應0.5-5小時(較佳為1-2小時)，分取下層酸液，加水稀釋後用氫氧化鈉調節pH至5-6，濾集析出的沉澱，加水洗淨即得脫鎂葉綠酸a粗品，後者經矽膠柱色譜分離分別得到脫鎂葉綠酸a及焦脫鎂葉綠酸a的純品(色譜分離展開體系氯仿-甲醇-甲酸＝10∶1∶0.3)。
2、紫紅素18和二氫卟吩p6的製備按1∶30-1∶50重量比將粗品脫鎂葉綠酸a和焦脫鎂葉綠酸a混合物溶於非極性有機溶劑(較佳為乙醚或石油醚)，加入鹼金屬醇溶液(較佳為1/10體積的25％KOH正丙醇溶液)，反應液均勻通空氣3-5小時，然後加水稀釋後，調節pH至2-3，加氯仿萃取，氯仿萃取液乾燥後，減壓蒸乾，所得紫紅素18粗品經矽膠柱色譜分離得到純紫紅素18(HPLC分析紫紅素18含量≥95％)。
3、二氫卟吩e4的製備粗品脫鎂葉綠酸a和焦脫鎂葉綠酸a混合物按1∶5-1∶8(W/V)與鹼金屬醇溶液(較佳為30％KOH乙醇溶液)加熱回流0.5-2小時(較佳為0.5-1小時)，冷卻後用稀鹽酸調節pH至4，加水稀釋，濾集析出的沉澱，乾燥後經矽膠柱色譜分離得到二氫卟吩e6純品(HPLC分析保留時間8.02min；相對峰面積≥95％)。將二氫卟吩e6按1∶20(W/V)溶於吡啶，回流反應0.5-3小時。反應液冷卻後，加入2倍量水，用稀鹽酸調節pH至5-6。濾集析出的沉澱物，乾燥後經矽膠柱色譜分離得到二氫卟吩e4純品。
4、脫鎂葉綠酸a、焦脫鎂葉綠酸a、二氫卟吩e4、紫紅素18及其開環異構體二氫卟吩p6金屬絡合物的製備脫鎂葉綠酸a、焦脫鎂葉綠酸a、二氫卟吩e4、紫紅素18/二氫卟吩p6的極性有機溶劑溶液在室溫下分別與鋅鹽、銅鹽或鈷鹽的相同溶劑的飽和溶液攪拌反應0.5-3h(較佳為1-2h)，加水稀釋，濾集析出的沉澱，用水充分洗去未反應金屬鹽，減壓乾燥，經矽膠色譜分離得相應的金屬絡合物純品。
所述極性有機溶劑為甲醇、四氫呋喃、嗎啉等。
所述鋅鹽、銅鹽或鈷鹽選自Zn2+、Co2+、Cu2+等的氯化物、醋酸鹽、硫酸鹽或硝酸鹽等，較佳為Zn2+、Co2+、Cu2+等的氯化物或醋酸鹽。
上述製備方法的反應流程可簡示如下
葉綠素a穩定降解產物的製備反應
M＝Cu2+；Co2+；Zn2+葉綠素a穩定降解產物金屬絡合物的製備反應本發明提供的抗胃潰瘍藥物包含治療有效量的葉綠素a穩定降解反應產物脫鎂葉綠酸a、焦脫鎂葉綠酸a、二氫卟吩e4、紫紅素18或二氫卟吩p6的金屬絡合物及藥學上可接受的載體。
本發明所述的「治療有效量」指5-50mg/kg體重，較佳為7-30mg/kg體重，更佳為10-20mg/kg體重，最佳為15mg/kg體重。
本發明所述的藥學上可接受的載體選自乳糖、蔗糖、果糖、澱粉、聚乙二醇(PEG)、甲殼素、矽酸鎂、人體必需胺基酸如賴氨酸等以及藥用助溶劑吐溫系列等。
以下用實施例對本發明進行舉例說明，這些實施例旨在闡述本發明的最佳實施方案。本領域技術人員根據本發明的啟示，結合本領域的常識所做的各種變更，均落在本申請權利要求的範圍內。
實施例1脫鎂葉綠酸a和焦脫鎂葉綠酸a的製備取蠶沙葉綠素初提物100g溶於300mL乙醚，加入36％鹽酸600mL，攪拌反應2小時。靜置分層，分取下層酸液，加水500mL稀釋，用10mol/L NaOH調節pH至5-6，濾集析出的沉澱，水洗後減壓乾燥，得粗品脫鎂葉綠酸a和焦脫鎂葉綠酸a混合物20g，經矽膠柱色譜分離(展開劑氯仿-甲醇-甲酸10∶1∶0.3)得到純脫鎂葉綠酸a 6g和焦脫鎂葉綠酸a 4g。二者化學結構的波譜測定結果如下脫鎂葉綠酸aFABMS(m/z)594(M+2)，593M+1)，592(M)，533(M-COOCH3)；1H-NMR(δppm)1.60(3H，s，4b-CH3)，1.80(3H，d，8a-CH3)，2.25-2.60(4H，m，7a-，7b-CH2)，3.10(3H，s，3a-CH3)，3.40(3H，s，1a-CH3)，3.59(2H，q，4a-CH2)，3.60(3H，，s，5a-CH3)，3.84(3H，s，10b-CH3)，4.19(1H，q，7-CH)，4.46(1H，q，8-CH)，6.25(2H，s，10-CH2)，6.10-6.30(2H，dd，2b-CH2)，7.90(1H，dd，2a-H)，8.51(1H，s.δ-H)，9.21(1H，s，α-H)，9.40(1H，s，β-H)；IR(νcm-1)3450，2900-2800，1750(C＝O)，1710(C＝O)，1625(C＝C)，1510(二氫卟吩骨架)，1225(C-N)；UV/VIS(λmaxnm)411，509，538，611，669。
上述波譜測定結果與結構式(I)相符。
焦脫鎂葉綠酸aFABMS(m/z)536(M+2)，535(M+1)，534(M)，461(M-CH2CH2COOH)；1H-NMR(δppm)1.66(3H，t，4b-CH3)，1.82(3H，d，8a-CH3)，2.35-2.66(4H，m，7a-，7b-CH2)，3.18(3H，s，3a-CH3)，3.38(3H，s，1a-CH3)，3.60(2H，q，4a-CH2)，3.62(3H，s，5a-CH3)，4.28(1H，m，7-CH)，4.46(1H，m，8-CH)，5.12-5.27(2H，q，10-CH2)，6.15(1H，dd，2b-Ha)，6.24(1H，dd，2b-Hb)，7.90(1H，dd，2a-H)，8.52(1H，s，δ-H)，9.24(1H，s，α-H)，9.34(1H，s，β-H)；IR(νcm-1)3430，2990-2980，1710(C＝O)，1635(C＝C)，1510(二氫卟吩骨架)，1230，1040(C-N)；UV/VIS(λmaxnm)412，509，540.5，611，666。
上述測定結果與結構式(II)一致。
實施例2二氫卟吩e4的製備取實施例1所述方法製得的脫鎂葉綠酸a和焦脫鎂葉綠酸a粗品混合物20g，加入150mL 39％KOH乙醇溶液，回流反應1小時，冷卻後用稀鹽酸調節pH至4，加水稀釋，濾集析出的沉澱，水洗後，減壓乾燥，所得為粗品二氫卟吩e6，經矽膠柱色譜分離得黑色粉末狀純二氫卟吩e67g。取上述二氫卟吩e6純品5g溶於100mL吡啶，加熱回流1小時，冷卻後加入2倍量水，用稀鹽酸調節pH至5-6，濾集析出的沉澱，水洗後，減壓乾燥，所得粗品經矽膠柱色譜分離(展開劑氯仿-甲醇-甲酸/100∶5∶1v/v/v)得到純二氫卟吩e4黑色粉末狀固體3.8g。其結構分析結果如下FABMS(m/z)509(M)；1HNMR(δppm)1.61(3H，t，4b-CH3)，2.27-2.68(4H，m，7a-，7b-CH2)，3.20(3H，s，3a-CH3)，3.43(3H，s，1a-CH3)，3.56(3H，s，5a-CH3)，3.39(3H，s，10-CH3)，4.52-4.63(2H，m，7，8-CH)，6.05-6.09(1H，dd，2b-Ha)，6.30-6.36(1H，dd，2b-Hb)，8.10-8.20(2H，m，2a-H)，9.041h，s，δ-H)，9.521H，s，α-H)，9.65(1H，s，β-H)；IR(νcm-1)3350(NH)，2960-2870(CH)，1715(C＝O)，1620(C＝C)，1450(二氫卟吩骨架)，1230(C-N)；UV/VIS(λmaxnm)402，498，534，559，608，664。
上述波譜測定結果與結構式(III)相一致。
實施例3紫紅素18/二氫卟吩p6的製備取實施例1所述方法製得的脫鎂葉綠酸a和焦脫鎂葉綠酸a粗品混合物10g，溶於250mL乙醚，加入20mL 25％KOH正丙醇溶液，室溫通空氣反應5小時。反應完畢後，加水250mL稀釋，用稀鹽酸調節pH至2-3。酸液用氯仿(150mL×3)萃取，萃取液加無水硫酸鈉乾燥過夜，減壓蒸除溶劑，所得殘存物經矽膠柱色譜分離(展開劑氯仿-乙醚-甲酸/100∶2∶1v/v/v)得到純紫紅素18紫紅色粉末狀固體2.3g。其結構分析數據如下FABMS(m/z)566(M+2)，565(M+1)，564(M)，491(M-CH2CH2COOH)；1HNMR(δppm)1.65(3H，t，4b-CH3)，1.76(3H，d，8-CH3)，2.10-2.51(4H，m，7-CH2CH2)，3.17(3H，s，3-CH3)，3.34(3H，s，1-CH3)，3.62(2H，q，4a-CH2)，3.77(3H，s，5-CH3)，4.42(1H，q，8-CH)，5.24(1H，m，7-CH)，6.20(1H，d，2b』-CH)，6.29(1H，d，2b-CH)，7.87(1H，dd，2a-H)，8.63(1H，s，δ-H)，9.40(1H，s，α-H)，9.63(1H，s，β-H)；IR(νcm-1)3360(NH)，30002800(CH)，1740，1710(C＝O)，1600(C＝C)，1530(二氫卟吩骨架)，1300(CN)，990(CH＝)；UV/VIS(λmaxnm)412，478，510，547，645，701。
上述波譜測定數據與結構式(IV)完全一致。
將1g紫紅素18溶於50mL 0.1mol/L NaOH中，得到的是二氫卟吩p6鈉鹽水溶液(pH＞9)。
紫紅素18開環生成的二氫卟吩p6隻存在於鹼性水溶液中，失水後即環合成紫紅素18。故無法得到其結構參數。
實施例4鋅脫鎂葉綠酸a的合成取按實施例1製得的脫鎂葉綠酸a 1g，溶於50mL甲醇，加入50mL ZnCl2甲醇飽和溶液，室溫下攪拌反應2小時，將反應混合物傾於500mL冰水中，濾集析出的沉澱，水洗，乾燥後經矽膠柱色譜分離得到綠色粉末狀鋅脫鎂葉綠酸a固體0.7g。其結構分析結果如下FABMS(m/z)657(M+2)，656(M+1)，655(M)，596(M-COOCH3)；1HNMR(δppm)1.62(3H，s，4b-CH3)，1.76(3H，d，8a-CH3)2.25-2.58(4H，m，7a-，7b-CH2)，3.10(3H，s，3a-CH3)，3.37(3H，s，1a-CH3)，3.60(3H，s，5a-CH3)，3.82(3H，s，10-b-CH3)，4.15(1H，q，7-CH)，4.43(1H，q，8-CH)，6.15(2H，s，10-CH2)，7.93(1H，dd，2a-H)，8.52(1H，s，δ-H)，9.28(1H，s，α-H)，9.44(1H，s，β-H)；IR(νcm-1)2920-2780，1750(C＝O)，1625(C＝C)，1525(二氫卟吩骨架)，UV/VIS(λmaxnm)431，515，556，605，670。
上述測定結果與結構式(I*)一致。
實施例5鋅焦脫鎂葉綠酸a的合成取按實施例1製得的焦脫鎂葉綠酸a 1g，按實施例4方法操作，得到深綠色鋅焦脫鎂葉綠酸a粉末狀固體0.8g。其結構分析數據如下FABMS(m/z)598(M+2)，597(M+1)，596(M)，524(M-CH2CH2COOH)；1HNMR(δppm)1.20(3H，t，4b-CH3)，1.40(3H，d，8a-CH3)，1.73(2H，m，7a-CH2)，96(2H，m，7b-CH2)，2.27(3H，s，3a-CH3)，2.73(3H，s，1a-CH3)，3.02(2H，q，4a-CH2)，3.12(3H，s，5a-CH3)，3.86(1H，m，7-CH)，4.19(1H，m，8-CH)，5.01(2H，q，10-CH2)，5.82(1H，dd，2a-Ha)，5.92(1H，dd，2b-Hb)，7.63(1H，m，2a-CH)，8.17(1H，s，δ-H)，8.59(1H，s，α-H)，8.67(1 H，s，β-H)；IR(νcm-1)3000-2800(CH)，1720(C＝O)，1620(C＝)，1560(二氫卟吩骨架)，1355(C-N)，1235(C-O)；UV/VIS(λmaxnm)427，524，566，611，656。
上述結構測定數據與結構式(II*)一致。
實施例6鋅二氫卟吩e4的合成取實施例2製得的二氫卟吩e41g按實施例3所述方法製得鋅二氫卟吩e40.65g。其結構測定數據如下FABMS(m/z)617M+2)，615(M+1)，614(M)；IR(νcm-1)3000-2800(CH)，1740，1715(C＝O)，1620(C＝C)，1445(二氫卟吩骨架)，1385(CN)，990(C＝H)；UV/VIS(λmaxnm)416，514，550，591，632。
上述結構測定數據與結構式(III*)一致。
實施例7鋅紫紅素18的合成取實施例3製得的紫紅素18 1g，按實施例3所述方法製得黑色鋅紫紅素18粉末狀固體0.67g。其結構分析數據如下FABMS(m/z)628(M+2)，626(M)；1HNMR(δppm)1.51(3H，t，4b-CH3)，1.62(3H，d，8a-CH3)，2.03-2.38(4H，m，7a，7b-CH3)，2.87(3H，s，3a-CH3)，3.21(3H，s，1a-CH3)，3.46(2H，q，4a-CH2)，3.53(3H，s，5a-CH3)，4.05(1H，m，8-CH)，4.85(1H，m，7_CH)，5.99(1H，dd，2b-Ha)，6.07(1H，dd，2b-hb)，7.76(1H，q，(2a-CH)，8.22(1H，s，δ-H)，9.08(1H，s，α-H)，9.301H，s，β-H)；IR(νcm-1)3000-2800(CH)，1750，1715(C＝O)，1615(C＝C)，1565(二氫卟吩骨架)，1305(CN)，1210(C-O)，980(-CH＝)；UV/VIS(λmaxnm)423，521，561，673。
上述測定數據與結構式(IV*)一致。
實施例8銅焦脫鎂葉綠酸a的合成將1g焦脫鎂葉綠酸a和1g Cu(AcO)2.2H2O溶於100mL四氫呋喃，攪拌回流2xs。反應液冷卻後，加500mL水稀釋，濾集析出的沉澱，水洗，減壓乾燥後經矽膠柱色譜分離(展開劑氯仿-甲醇-甲酸/100∶10∶2)得到銅焦脫鎂葉綠酸a墨綠色粉末狀固體0.76g。其結構分析數據如下FABMS(m/z)597(M+2)，596(M+1)，595(M)；IR(νcm-1)3000-2800(CH)，1740，1700(C＝O)，1640(C＝C)，1560(二氫卟吩骨架)，1350(CN)，1220(C-O)，970(-CH＝)；UV/VIS(λmaxnm)422，560，607，657。
上述結構測定數據與結構式(II*)一致。
實施例9-11銅脫鎂葉綠酸a、銅二氫卟吩e4、銅紫紅素18的合成取實施例1、2、3製得的脫鎂葉綠酸a、二氫卟吩e4、紫紅素18分別按實施例7所述方法合成得到銅脫鎂葉綠酸a、銅二氫卟吩e4和銅紫紅素18。其結構分析數據分別為銅脫鎂葉綠酸aFABMS(m/z)538(M+2)，537(M+1)，536(M)；IR(νcm-1)3000-2800(CH)，1735(C＝O)，1645(C＝C)，1545(二氫卟吩骨架)，1325(CN)，980(-CH＝)；UV/VIS(λmaxnm)416，550，615，660。
銅二氫卟吩e4FABMS(m/z)614(M+1)，613(M)；IR(νcm-1)3000-2800(CH)，1740，1700(C＝O)，1610(C＝C)，1460(二氫卟吩骨架)，1385(CN)，1220C-O)，990(-CH＝)；UV/VIS(λmaxnm)422，555，603，650。
銅紫紅素18FABMS(m/z)626(M+1)；IR(νcm-1)3000-2800(CH)，1760，1725(C＝O)，1615(C＝C)，1565(二氫卟吩骨架)，1300(CN)，1220(C＝-O)，990(-CH＝)』UV/VIS(λmaxnm)418，507，549，669。
上述各組測定數據分別與結構式(I*)、(III*)和(IV*)相一致。
實施例12鈷焦脫鎂葉綠酸a的合成取實施例1製得的焦脫鎂葉綠酸a 1g及醋酸鈷1g，溶於100mL四氫呋喃，攪拌回流0.5小時，冷卻後加水500mL稀釋，濾集析出的沉澱，水洗，乾燥。所得粗品經矽膠柱色譜分離得到黑色粉末狀鈷焦脫鎂葉綠酸a 0.3g。
實施例13-15鈷脫鎂葉綠酸a、鈷二氫卟吩e4及鈷紫紅素18的合成取實施例1、2、3製得的脫鎂葉綠酸a、二氫卟吩e4及紫紅素18各1g，按實施例12方法合成得鈷脫鎂葉綠酸a、鈷二氫卟吩e4及鈷紫紅素18。
實施例12-15合成得的四種鈷絡合物經快原子轟擊質譜分析結果如下鈷脫鎂葉綠酸a534(M+2)，533(M+1)，532(M)；
鈷二氫卟吩e4609(M+2)，608(M+1)，607(M)；鈷紫紅素18623(M+2)，622(M+1)，621(M)；鈷焦脫鎂葉綠酸a593(M+2)，592(M+1)，591(M)。
說明因銅和鈷原子具有抗磁性，它們的絡合物無核磁共振譜信號。故實施例8-15各標題化合物均無核磁共振譜測定數據。
實施例16葉綠素a降解產物鋅、銅、鈷絡合物片劑配方(每片)葉綠素a降解產物鋅、銅和/或鈷絡合物100mg甘草浸膏 100mg甘氨酸20mg澱粉 100mg滑石粉適量按常規工藝製成糖衣片葉綠素降解產物鋅、銅和/或鈷絡合物100mg以其他藥學上常用載體代替甘草浸膏及甘氨酸，按同樣方法製成葉綠素降解產物鋅、銅和/或鈷絡合物糖衣片。
上述藥學上常用載體可選自乳糖、蔗糖、果糖、澱粉、聚乙二醇(PEG)、甲殼素、矽酸鎂、人體必需胺基酸如賴氨酸等以及藥用助溶劑吐溫系列等。
實施例17葉綠素降解產物鋅、銅和/或鈷絡合物膠囊劑配方(每粒)葉綠素降解產物鋅、銅和/或鈷絡合物 100mg甘草浸膏100mg甘氨酸 20mg藥學常用載體適量按常規工藝充裝於1號藥用膠囊。
如實施例16所述，以藥學上常用載體代替甘草浸膏和甘氨酸，按同樣方法製成葉綠素a降解產物鋅、銅和/或鈷絡合物膠囊。
上述藥學上常用載體可選自乳糖、蔗糖、果糖、澱粉、聚乙二醇(PEG)、甲殼素、矽酸鎂、人體必需胺基酸如賴氨酸等以及藥用助溶劑吐溫系列等。
實驗例1葉綠素a降解產物金屬鈷絡合物的抗胃潰瘍效應按照衛生部頒布的《新藥(西藥)臨床前藥學及藥理毒理學研究指導原則彙編》規定的方法，測定了脫鎂葉綠酸a、焦脫鎂葉綠酸a、二氫卟吩e4、紫紅素18和二氫卟吩p6的鋅、銅、鈷絡合物對實驗性胃潰瘍的療效(見下表)。脫鎂葉綠酸a、焦脫鎂葉綠酸a、二氫卟吩e4、紫紅素18的鋅、銅、鈷絡合物對實驗性胃潰瘍的作用受試化合物※劑量(mg/kg) 動物數潰瘍個數潰瘍指數(mm)I*-Zn2+8062.27±1.53**21.11±11.40*I*-Co2+8064.54±2.66**6.85±4.46**I*-Cu2+8063.21±2.05**3.05±1.78**II*-Zn2+8063.79±2.08**5.27±4.32**II*-Cu2+8066.58±4.39**3.78±1.43**II*-Co2+8063.95±2.29**5.63±2.64**III*-Zn2+8063.25±1.73**4.18±4.01**III*-Cu2+8067.26±5.48**4.33±3.90**III*-Co2+8062.25±1.49**3.24±3.05**IV*-Zn2+8063.56±1.44**4.23±4.15**IV*-Cu2+8066.68±6.13**4.05±4.29**IV*-Co2+8064.67±4.54**4.21±3.94**法莫替丁 3010 8.00±5.19**5.10±3.10**空白對照 - 10 42.00±22.4341.59±24.07*P＜0.05；**P＜0.01(與空白對照相比)。
實驗例2葉綠素a降解產物金屬絡合物的急性毒性試驗將本發明的葉綠素a降解產物金屬絡合物在乳缽中用CMC研磨成漿狀物，以最大可耐受的容量給20隻小鼠(18-22g)灌服，劑量為5g/kg，觀察7天，無一小鼠死亡，也未見明顯的毒劑反應。
以上結果表明，葉綠素a降解產物脫鎂葉綠酸a、焦脫鎂葉綠酸a、二氫卟吩e4、紫紅素18的鋅、銅、鈷絡合物對大鼠實驗性胃潰瘍均有顯著的治療作用，而其急性毒性則均遠低於法莫替丁等目前臨床應用的抗胃潰瘍藥物，因而是一類高效低毒和標本兼治的理想抗胃潰瘍新藥。
參考和引用文獻1.Vernon LP and Seely GR葉綠素(The Chlorophylls).Academic Press，1966，NewYork and Lodon.2.Hynninen PH應用選擇性水解原理由葉綠素混合物製備符賓衍生物(Preparation of porbin derivatives from chlorophyll mixture ultilizing the pricipleof selective hydrolysis.)Synthesis 1980，46(7)539.3.Wasielewski et al葉綠素a、焦葉綠素a、葉綠素b和菌綠素a共價連結二聚體衍生物的合成(Synthesis of covalently linked dimeric derivatives of chlorophylla，pyrochlorophyll a，chlorophyll b and bacteriochlorophyll a.)J Org Chem1980，451969.4.方瑛，許德餘二氫卟吩醚衍生物的合成。有機化學反應995，15493。5.胡龍勤，許德餘葉綠素衍生物在醫藥上的應用。國外醫學—合成藥、生化藥製劑分冊1987，8(3)146。6.許德餘腫瘤光動力療法原理，藥物，臨床導論。中國醫藥科技出版社，1996年6月第一版，北京。7.許德餘腫瘤光動力診治藥物的研究進展。醫藥工業1987，1831。8.胡龍勤，許德餘新型腫瘤光化學診治劑脫鎂葉綠酸a的研究。第二軍醫大學學報1986，7405。9.Ravindra KD et al作為光動力療法潛在光敏化劑的二氫卟吩和卟啉衍生物(Chlorin and porphyrin derivatives as potential photosensitizer in photodynamicthrapy.)Photochem Photobil 1991.5365。
權利要求
1.葉綠酸a降解產物脫鎂葉綠酸a、焦脫鎂葉綠酸a、二氫卟吩e4、紫紅素18/二氫卟吩p6的金屬絡合物(I*)-(V*)，其特徵在於分別具有以下化學結構
式中，M＝Cu2+；Co2+；Zn2+
2.如權利要求1所述葉綠素a降解產物金屬絡合物的製備方法，其特徵在於(1)以家蠶糞葉綠素初提物為起始原料，經酸、鹼降解得到脫鎂葉綠酸a(I)、焦脫鎂葉綠酸a(II)、二氫卟吩e4(III)、紫紅素18(IV)和二氫卟吩p6(V)；
葉綠素a降解產物脫鎂葉綠酸a、焦脫鎂葉綠酸a、二氫卟吩e4，紫紅素18(二氫卟吩p6)的製備反應(2)上述葉綠素a降解產物分別與鋅、銅和鈷鹽等反應生成相應的金屬絡合物(I*)-(V*)。
M＝Cu2+；Co2+；Zn2+
3.如權利要求2所述方法，其中脫鎂葉綠酸a和焦脫鎂葉綠酸a按如下方法製備蠶糞葉綠素初提物溶於非極性溶劑中，加入等體積或過量濃鹽酸，室溫下攪拌反應0.5-5小時，分取酸層，調節pH至4-6，濾集析出的沉澱，水洗，乾燥，得粗品脫鎂葉綠酸a和焦脫鎂葉綠酸a混合物，經矽膠柱色譜分離得到脫鎂葉綠酸a和焦脫鎂葉綠酸a純品。
4.如權利要求2所述方法，其中紫紅素18/二氫卟吩p6按如下方法製備將粗品脫鎂葉綠酸a溶於非極性溶劑中，加入鹼金屬醇溶液，通空氣反應3-5小時，加水稀釋後，調節pH至2-3，氯仿萃取，萃取液乾燥後，蒸乾得紫紅素18粗品，經矽膠柱色譜分離得到純紫紅素18；紫紅素18在鹼性水溶液中開環生成二氫卟吩p6。
5.如權利要求3或4所述方法，其中所述非極性溶劑選自乙醚、石油醚和汽油等。
6.如權利要求2所述方法，其中二氫卟吩e4按如下方法製備粗品脫鎂葉綠酸a在無氧條件下於鹼金屬醇溶液中加熱回流0.5-2小時，冷卻後，調節pH至3-4，濾集析出的沉澱，乾燥後，經矽膠柱色譜分離得到二氫卟吩e6，後者在吡啶中加熱回流0.5-3小時，冷卻後加水稀釋，調pH至5-6，濾集析出的沉澱，乾燥後，經矽膠柱色譜分離得到純二氫卟吩e4。
7.如權利要求2所述的方法，其中葉綠素a降解產物金屬絡合物的製備方法如下所述各種葉綠素a穩定降解產物I-V的惰性溶劑溶液，分別與鋅鹽、銅鹽、或鈷鹽的相同溶劑飽和溶液攪拌反應0.5-3小時，加水稀釋，濾集析出的沉澱，用水充分洗滌，減壓乾燥，所得粗品經色譜分離得到相應金屬絡合物純品。
8.如權利要求7所述的方法，其中所述惰性有機溶劑為甲醇、四氫呋喃、嗎啉等。
9.如權利要求7所述的方法，其中所述鋅鹽、銅鹽或鈷鹽選自Zn2+、Cu2+、Co2+的氯化物、硫酸鹽、醋酸鹽、硝酸鹽。
10.抗胃潰瘍藥物，包括有效量的權利要求1所述葉綠素a降解產物的金屬絡合物(I*)-(V*)和藥學上可接受的載體。
全文摘要
本發明提供如下所示葉綠素a穩定降解產物的金屬絡合物及其製備方法。將蠶沙葉綠素初提物經酸降解分離得(Ⅰ)和(Ⅱ);(Ⅰ)在無氧條件下鹼降解製得二氫卟吩e
文檔編號C07D487/22GK1260347SQ99119878
公開日2000年7月19日 申請日期1999年10月28日 優先權日1999年10月28日
發明者許德餘 申請人:許德餘