製備棘白菌素衍生物的方法

2023-07-30 08:26:41 1

專利名稱：製備棘白菌素衍生物的方法
技術領域：
本發明的主題是製備棘白菌素衍生物的方法、中間體、所得產物和它們作為抗真菌藥物的用途。
現有技術中已知多種具有抗真菌活性的化合物。具體而言，可提及國際申請WO 99/29716中所定義的棘白菌素衍生物。
本發明的目的是提供製備棘白菌素衍生物的新方法並得到後者的新鹽。
棘白菌素可以以兩種稱作異構體A和異構體B的差向異構體形式存在，這兩種異構體對應於4位取代基的R和S構型。本發明的主題之一是在該方法中主要得到這兩種異構體之一，即至少大於50％(稱作A型的異構體，對應於式(I)的藥理學活性化合物)，這與WO 99/29716的方法不同，在後者中，經色譜柱純化前在方法中所得的活性異構體A佔少數。
此外，本發明的另一目的是避免中間產物的色譜純化並得到結晶產物，這使得產率顯著改進。
因此，本發明的主題是製備式(I)化合物的方法， 其中R代表含有至多30個碳原子的直鏈或支鏈或環狀鏈，任選含有一個或多個雜原子和一個或多個雜環，包括下列步驟
a)使式(II)化合物， 與式R-CO2H的酸進行作用，其中R如上所定義，所述酸視情況而定呈分離或非分離的活化形式，以便得到式(III)化合物， b)視情況而定使式(III)化合物在PPTS存在下通過式Alk-OH醇的作用而在5位進行醇的烷基化反應，其中Alk為含有1至4個碳原子的烷基，以便得到式(III』)化合物，
c)使式(III)或(III』)化合物進行脫水反應，以便得到式(IV)化合物， d)使式(IV)化合物在還原劑如路易斯酸存在下的NaBH3CN，或NaBH(OCOR』3)存在下通過乙二胺的作用而進行還原胺化反應，其中OCOR』代表Boc-L-Pro、Bzl-L-Pro或任何其它光學活性胺基酸以及任何其它手性或非手性羧酸，以便得到如上所定義的式(I)化合物，該化合物中活性異構體之一佔多數，然後視情況而定以任何合適的順序對所述式(I)化合物進行一個或多個下列操作-色譜純化，-結晶純化，-與鹼作用，-成鹽。
優選地，本發明的主題是前面所定義的方法，其中式(I)、(III)、(III』)或(IV)化合物含有代表下列基團的R基團 優選地，本發明的主題是前面所定義的方法，其中式(I)、(III)、(III』)或(IV)化合物含有代表下列基團的R基團 式(II)化合物根據國際申請WO 99/29716第18頁(製備2，「去氧牟倫多菌素核」)中所述方法製備。
式R-CO2H酸的活化根據本領域熟練技術人員已知的標準方法進行(Journet M.等人，J.Org.Chem.(1999)，64，2411-2417；P_chiauer P.等人，Tetrahedron 54(1998)3489-3494；Kunushima等人，Tetrahedron(1999)55 13159-13170)。具體地使用了五氟苯酚，以得到活化的五氟苯酚酯，將該酯在用於胺的醯化反應之前分離。另一方法是使用N-羥基琥珀醯亞胺(任選N-羥基苯並三唑)，以得到活化的N-羥基琥珀醯亞胺(任選羥基苯並三唑)酯，也將該酯分離。
接下來為得到式(III)化合物的醯化步驟在鹼存在下根據本領域熟練技術人員已知的方法進行，並且在下文所述實施例中闡述。還可在不分離活性酯和不添加鹼的情況下通過在氯化4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基-嗎啉鎓(DMTMM)存在下操作而進行該醯化。該後一替代方案的優點在於省去了分離步驟，從而改進了產率。
為得到式(IV)化合物的式(III)化合物的脫水步驟可按以下方式進行-脫水步驟在氫滷酸如HBr存在下、在MgI2存在下進行。該情況下，不必經由式(III』)中間體。
-通過方法變型，可期望在進行脫水步驟之前將5位的羥基烷基化。例如甲基化可以用甲醇在PPTS(對甲苯磺酸吡啶鎓)存在下進行，以便得到式(III』)化合物，其中Alk代表甲基。
-最後，該脫水反應還可在α-乙醯氧基異丁醯溴(AIBB)存在下於二氧雜環己烷中進行。在後一種情況下，該操作可在MgI2存在下對式(III』)化合物或直接對式(III)化合物進行。
優選地，然後將脫水反應後得到的化合物從DMF(二甲基甲醯胺)/MeCN(乙腈)混合物中結晶純化。還可使用下例溶劑的混合物DMF/丙酮和DMF/AcOEt(乙酸乙酯)。
為得到式(I)棘白菌素的式(IV)化合物的還原胺化反應根據文獻所述且本領域熟練技術人員已知的方法進行(Yamada K.等人，J.Chem.Soc.Perkin Trans I(1983)265-270；Hutchins R.等人，Org.prep.Proc.Int.11(5)(1979)201-246)。具體地在與TiCl4或任何其它路易斯酸偶聯的NaBH3CN存在下或在NaBH(OCOR』3)存在下使用乙二胺，其中OCOR』代表Boc-L-Pro、Bzl-L-Pro或任何其它光學活性胺基酸以及任何其它手性或非手性羧酸。
將還原劑NaBH3CN與路易斯酸、尤其是TiCl4偶聯對於選擇性而言是必備要素，從而得到其中活性異構體A佔多數的異構體A和異構體B的混合物。通常，得到的異構體A的比例大於70％、具體地為為80至85％。該情形與上述其它試劑相似。
特別地，對於式(Ia)化合物，在該步驟中得到的異構體A/異構體B比例分別為80至85％/20至15％，而WO 97/29716所述方法得到的混合物中異構體A佔少數或半數(外消旋A和B混合物)。
在還原胺化步驟中，可視情況而定在還原前將反應中間體分離，因此該中間體也是本發明的主題。它是式(IV』)或(IV』a)的咪唑烷，
此時R代表-Ph-Ph-O-C8H17基團。
可以期望通過色譜法或通過重結晶將所得一種或多種產物純化。該操作根據本領域熟練技術人員已知的常規方法進行。當所得產物在色譜分離之後具體地為三氟乙酸鹽形式時，可以期望通過鹼的作用消除該鹽，以便得到鹼形式的式(I)化合物。
成鹽反應根據本領域熟練技術人員已知的常規方法進行。鹽酸鹽或二鹽酸鹽的製備在鹽酸存在下於甲醇中進行。
非常特別的是，本發明的主題是製備式(Ia)化合物的方法 包括下列步驟
a)使式(II)化合物， 與式C8H17-O-Ph-Ph-CO2H的酸進行作用，所述酸視情況而定為活化的分離或非分離形式，以便得到式(IIIa)化合物， b)視情況而定使式(IIIa)化合物在PPTS存在下通過甲醇的作用而在5位進行醇的烷基化反應，以便得到式(IIIa』)化合物，
c)使式(IIIa)或(IIIa』)化合物進行脫水反應，以便得到式(IVa)化合物， d)使式(IVa)化合物在還原劑如與TiCl4偶聯的NaBH3CN、NaH(Boc-L-pro)3或NaH(Bzl-L-Pro)3存在下通過乙二胺的作用而進行還原胺化反應，以便得到如上所定義的式(Ia)化合物，該化合物中活性異構體之一佔多數，以合適的順序對所述式(Ia)化合物進行一個或多個下列操作-色譜純化，-結晶，-與鹼作用，-與鹽酸作用而成鹽。
可發現式(Ia)化合物為稱作異構體A或異構體B的兩種差向異構體(4位的不對稱碳)的混合物形式。根據如上所定義的方法得到的式(I)化合物可以以約70-85％/30-15％的異構體A/異構體B混合物的形式存在。
在還原胺化反應之後進行的純化/結晶和成鹽步驟可選擇性地得到式(Ia)化合物的活性差向異構體A。
優選地，式(Ia)化合物經矽膠色譜、然後經反相色譜、使用有機溶劑、水和三氟乙酸的混合物純化，以便得到式(Ia)化合物的三氟乙酸鹽。然後使該鹽與鹼作用例如與碳酸氫鈉水溶液作用，以便得到鹼形式的式(Ia)化合物。然後，使所得鹼與鹽酸作用而成鹽，以便得到相應的鹽，即式(Ia)化合物的二鹽酸鹽。
因此，本發明的非常特別主題是前面所定義的方法，其特徵在於對式(Ia)化合物接連進行下列操作a)使用有機溶劑、水和三氟乙酸的混合物經矽膠色譜純化、然後經反相色譜純化，以便得到式(Ia)化合物的三氟乙酸鹽；b)與鹼作用例如與碳酸氫鈉水溶液作用，得到鹼形式的式(Ia)化合物；c)與鹽酸作用而成鹽，得到相應的鹽，即式(Ia)化合物的二鹽酸鹽。
因此，本發明非常特別的主題是前面所定義的方法，其特徵在於酸的活化反應在五氟苯酚、N-羥基琥珀醯亞胺或任選N-羥基苯並三唑存在下進行。
因此，本發明非常特別的主題是前面所定義的方法，其特徵在於在分離的活化酸存在下的醯化反應在二異丙基乙基胺存在下進行。
因此，本發明非常特別的主題是前面所定義的方法，其特徵在於活化反應和隨後在分離的活化酸存在下的醯化反應在N-甲基吡咯烷酮和DMTMM存在下進行。
因此，本發明非常特別的主題是前面所定義的方法，其特徵在於脫水反應在AIBB和視情況而定的MgI2存在下進行。
因此，本發明非常特別的主題是前面所定義的方法，其特徵在於脫水反應在HBr-AcOH和MgI2存在下進行。
因此，本發明非常特別的主題是前面所定義的方法，其特徵在於得自脫水作用的產物通過從二甲基甲醯胺(DMF)/乙腈、DMF/丙酮或DMF/AcOEt混合物中結晶而純化。
因此，本發明非常特別的主題是前面所定義的方法，其特徵在於還原胺化反應在選自與TiCl4偶聯的NaBH3CN，NaH(Boc-L-pro)3和NaH(Bzl-L-Pro)3的還原劑存在下進行。
因此，本發明的主題還有4S或4R形式或兩種立體異構體混合物形式的1-[4-[(2-氨基乙基)氨基]-N2-[[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-L-鳥氨酸]-4-[4-(4-羥基苯基)-L-蘇氨酸]-5-L-絲氨酸棘白菌素B的二鹽酸鹽。
前述方法使得通過色譜法分離各異構體之前可得到佔多數的式(I)或(Ia)化合物的異構體A。
因此，本發明的主題還有由前述方法得到的活性異構體A形式的1-[4-[(2-氨基乙基)氨基]-N2-[[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-L-鳥氨酸]-4-[4-(4-羥基苯基)-L-蘇氨酸]-5-L-絲氨酸棘白菌素B的二鹽酸鹽。
本發明的主題還有作為藥物並尤其作為抗真菌藥物的、4S或4R形式或兩種立體異構體混合物形式的1-[4-[(2-氨基乙基)氨基]-N2-[[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-L-鳥氨酸]-4-[4-(4-羥基苯基)-L-蘇氨酸]-5-L-絲氨酸棘白菌素B的二鹽酸鹽。
最後，本發明的主題是含有4S或4R形式或兩種立體異構體混合物形式的1-[4-[(2-氨基乙基)氨基]-N2-[[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-L-鳥氨酸]-4-[4-(4-羥基苯基)-L-蘇氨酸-S-L-絲氨酸棘白菌素B的二鹽酸鹽和可藥用載體的藥物組合物。
在WO 99/29716中，製備了鹼或三氟乙酸鹽形式的1-[4-[(2-氨基乙基)氨基]-N2-[[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-L-鳥氨酸]-4-[4-(4-羥基苯基)-L-蘇氨酸]-5-L-絲氨酸棘白菌素B(實施例14)。該二鹽酸鹽的優點是具有更好的穩定性和水中的溶解性。而且，該二鹽酸鹽是優選的可藥用鹽，即為本發明的主題。
實施例11-[4-[(2-氨基乙基)氨基]-N2-[[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-L-鳥氨酸]-4-[4-(4-羥基苯基)-L-蘇氨酸]-5-L-絲氨酸棘白菌素B的二鹽酸鹽I)第一階段將式(II)化合物醯化，得到式(III)化合物1-[(4R，5R)-4，5-二羥基-N2-[[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-L-鳥氨酸]-4-[4-(4-羥基苯基)-L-蘇氨酸]-5-L-絲氨酸棘白菌素B路線1經由分離的五氟苯酚的活化酯步驟1活化酯的製備4』-辛氧基-聯苯基-4-甲酸五氟苯基酯將100g 4-辛氧基聯苯基-4』-甲酸和62g五氟苯酚引入1L二氯甲烷中。攪拌15分鐘，並在15分鐘內加入69.6gN，N』-二環己基碳二亞胺的500mL二氯甲烷溶液。將深褐色的懸液在室溫下攪拌20分鐘。過濾二環己基脲並濃縮濾液。通過規律添加乙醇至蒸氣溫度為74℃，蒸餾至恆定體積。將反應介質冷卻至室溫，然後攪拌1小時，過濾，之後用乙醇洗滌。乾燥後，得到晶體形式的145.7g期望產物。
產率96.5％NMR(CDCl3)8.23-7.72(AA』BB』)4H；7.01-7.60(AA』BB』)4H；4.02(t)2H；1.82(五重峰)2H；1.48(五重峰)2H；1.32(m)8H；0.89(t)3H。
步驟2醯化引入60mL DMF中的23.2g式(II)化合物(根據WO 99/29716的製備2製備的「去氧牟倫多菌素核」)和14.1g以上所得的酯。將6.7mL二異丙基乙基胺引入該懸液中，並在氮氣氛和室溫下攪拌24小時。將該均相反應介質在10分鐘內傾入1L水中，同時適度攪拌，將該懸液攪拌2小時，過濾並用水洗滌固體。將該固體在真空和室溫下乾燥，然後於100mL二氯甲烷中在氮氣氛下回流，同時攪拌2小時(40℃)，之後在1小時內冷卻至室溫，攪拌1小時，過濾固體，將該固體用二氯甲烷衝洗三次，並在真空和室溫下乾燥。得到米色固體形式的26.9g期望產物。
產率91.5％
TLCRf0.13矽膠板；UV 254nm顯影；洗脫劑CH2Cl2-MeOH-水86-13-1NMR(DMSO)蘇氨酸8.16(1H)，4.85(1H)，4.41(1H)，1.13(3H)；γ-羥基脯氨酸4.42(1H)，1.92-2.28(2H)，4.44(1H)，3.86-3.70(2H)；β-羥基高酪氨酸7.36(1H)，4.23(1H)，4.20(1H)，2.53-2.46(2H)，6.98(2H)，6.68(2H)；絲氨酸7.40(1H)，4.86(1H)，3.66-3.60(2H)；β-羥基-γ-甲基脯氨酸4.27(1H)，4.03(1H)，2.38(1H)，0.99(3H)，3.25-3.93(2H)；鳥氨酸7.98(1H)，5.16(1H)，3.96(1H)，8.54(1H)，4.44(1H)，1.98(2H)；芳族和辛氧基鏈7.98(2H)，7.71(2H)，7.68(2H)，7.02(2H)，4.00(2H)，1.72(2H)，1.41(2H)，1.28(2H)，1.25(2H)，1.31(2H)，1.27(2H)，0.86(3H)。
路線2經由分離的HOSu的活化酯步驟1活化酯的合成4』-辛氧基-聯苯基-4-甲酸2，5-二氧代-吡咯烷酯引入9.3g辛氧基聯苯基甲酸、93mL二氯甲烷、3.8g N-羥基琥珀醯亞胺和6.3g EDC，並在室溫下攪拌3小時。加入6mL水，攪拌10分鐘，之後潷析並用45mL二氯甲烷反萃取。將有機相用水洗滌(3×45mL)並經硫酸鈉乾燥。真空乾燥後，得到晶體形式的12.05g期望產物。
產率99.9％NMRCDCl38.2-7.65(AA』BB』)4H；7.6-6.97(AA』BB』)4H；4.02(t，2H)；2.93(寬)4H；1.83(五重峰2H)；1.45(m)2H；1.3(m)8H；0.9(t)3H。
步驟2醯化將1.43g如上製備的琥珀醯亞胺酯溶解於6mL DMF中。引入2.42g「去氧牟倫多菌素核」(根據WO 99/29716的製備2製備)和0.66mL二異丙基乙基胺。將該溶液在室溫下攪拌18小時。引入35mL水並在室溫下攪拌2小時。過濾後，在反應容器中攪拌2小時將固體溶於30mL水中，之後過濾並用水衝洗。將固體在真空和室溫下乾燥，得到米色固體形式的2.75g期望產物。
產率98.2％路線3用DMTMM直接活化的合成法將2.8g去氧牟倫多菌素(根據WO 99/29716的製備2製備)溶解於8.3mL N-甲基吡咯烷酮中。加入1.12g辛氧基聯苯基甲酸和0.95g氯化4-(4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪-2-基)-4-甲基-嗎啉鎓(DMTMM)。在室溫下攪拌24小時後，在攪拌下將反應介質傾入133mL水中。攪拌20分鐘，將固體過濾並用水衝洗三次(3×7mL)。在真空和40℃下乾燥後，得到米色固體形式的2.66g期望產物。
產率73.5％II)第二階段脫水(得到式(IVa)化合物)1-[N2-[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-4-氧代-L-鳥氨酸]-4-[4-(4-羥基苯基)-L-蘇氨酸]-5-L-色氨酸-棘白菌素B路線1經由式(IIIa』)化合物步驟1烷基化1-[(4R，5R)-4-羥基-5-甲氧基-N2-[[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-L-鳥氨酸]-4-[4-(4-羥基苯基)-L-蘇氨酸]-5-L-絲氨酸棘白菌素B(IIIa』)將283g第一階段中所得的產物IIIa溶解於5.67L甲醇中。在攪拌下一次性加入22.7g對甲苯磺酸吡啶鎓，並在回流(42℃)下攪拌6小時，在室溫下攪拌12小時。真空濃縮至兩個殘餘物體積，然後加入1.2升水。將懸液攪拌18小時。過濾固體並用水衝洗兩次。在烘箱中於真空和室溫下乾燥後，得到米色粉末形式的270.5g期望產物。
產率94.2％NMR(DMSO)蘇氨酸8.11(1H)，4.84(1H)，4.41(1H)，1.11(3H)；γ-羥基脯氨酸4.40(1H)，1.91-2.27(2H)，4.42(1H)，3.67-3.87(2H)；β-羥基-高酪氨酸7.32(1H)，4.22(1H)，4.18(1H)，2.51-2.44(2H)，6.96(2H)，6.65(2H)，9.03(1H)；絲氨酸7.36(1H)，4.87(1H)，3.58-3.63(2H)；β-羥基-γ-甲基脯氨酸4.32(1H)，4.05(1H)，2.37(1H)，1.00(3H)，3.27-3.94(2H)；鳥氨酸7.88(1H)，4.94(1H)，4.06(1H)，8.50(1H)，4.43(1H)，3.16(3H)；1.93-2.03(2H)；芳族和辛氧基鏈7.97(2H)，7.70(2H)，7.65(2H)，7.02(2H)，4.00(2H)，1.73(2H)，1.43(2H)，1.32(2H)，1.27-1.28(6H)，0.87(3H)。
步驟2脫水將265.3g以上所得的甲氧基化產物(IIIa』)溶解於5.3L二氧雜環己烷中。在20分鐘內加入71.8mLα-乙醯氧基異丁醯溴(AIBB)。將該介質攪拌7小時。在15分鐘內加入4.1L飽和碳酸氫鈉(NaHCO3)水溶液。攪拌15分鐘，並在真空和不超過30℃的溫度下蒸餾二氧雜環己烷。加入3.2L水並在室溫下攪拌15小時。過濾固體並用水衝洗2次。在烘箱中真空乾燥後，得到赭色固體形式的251.2g期望產物。
產率97.5％將該產物根據下述製備法結晶。
路線2從第一階段中所得產物(IIIa)開始，與AIBB/MgI2/二氧雜環己烷作用將23.26g無水碘化鎂懸浮於500mL二氧雜環己烷中並攪拌30分鐘。引入12.25mLα-乙醯氧基異丁醯溴(AIBB)，並將赭色懸液在室溫下攪拌45分鐘。在1小時內加入50g第一階段中所得產物(IIIa)溶解於400mL二氧雜環己烷中的溶液，並用25mL二氧雜環己烷衝洗該添加漏鬥。將該懸液在室溫下攪拌19小時。在30分鐘內引入5g碳酸氫鈉溶解於50mL水中的溶液(添加結束時pH為5-6)。攪拌2小時，之後在內部溫度低於35℃下真空蒸餾至殘餘體積為250mL。重新使氮壓達到大氣壓，加入200mL二甲基甲醯胺，之後真空蒸餾至殘餘體積為250mL，並將該溶液在室溫下傾入2.8L水中。用DMF衝洗後，攪拌1小時。過濾固體並用水衝洗。將固體在真空和30℃下乾燥24小時。得到米色固體形式的46g期望產物。
產率98.6％然後將該產物根據下述方法結晶。
路線3從第一階段中得到的產物IIIa開始，與HBr-AcOH/MgI2/MEK作用將10g階段I)所得的產物溶解於180mL甲乙酮(MEK)中。引入4.65g無水碘化鎂和10mL MEK。在室溫下攪拌35分鐘，然後冷卻至20℃。引入3mL 33％的HBr的AcOH溶液。將該懸液在20℃下攪拌4小時。加入10mL飽和NaHCO3(碳酸氫鈉)水溶液。在20℃下攪拌1小時(溶解)。將該溶液在2小時內傾入700mL水中，同時在真空和40℃下蒸餾MEK。蒸餾進行至殘餘體積為430mL。加入100mL水，繼續蒸餾至殘餘體積為430mL。重複該操作兩次。使該懸液達到室溫並攪拌過夜。將固體過濾並用水洗滌3次，每次用50mL。在真空和室溫下乾燥後，得到米色粉末形式的9.3g期望產物。
將該產物根據下述方法結晶純化。
產率94.5％，不考慮溶劑。
以上所得式(IVa)產物(路線1、2或3)的結晶將10g 1-[N2-[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-4-氧代-L-鳥氨酸]-4-[4-(4-羥基苯基)-L-蘇氨酸]-5-L-色氨酸-棘白菌素B(以上路線1、2或3所得)在1小時內在攪拌和室溫下溶解於30mL二甲基甲醯胺(DMF)中。引入51mg引發劑(根據路線1、2或3得到產物的晶體)並攪拌2小時。然後在2小時內逐步引入67mL乙腈。在引入結束時，攪拌19小時，之後過濾並用乙腈衝洗三次，每次用10mL。在真空和室溫下乾燥後，得到白色晶體形式的7.10g期望產物。
產率71％TLCRf＝0.28矽膠60F254，UV 254nm
流動相CH2Cl2/MeOH/水86/13/1NMR(DMSO)蘇氨酸7.94(1H)，4.50(1H)，4.25(1H)，1.18(3H)；γ-羥基脯氨酸4.39(1H)，1.93-2.20(2H)，4.40(1H)，3.85-3.71(2H)；β-羥基高酪氨酸7.53(1H)，4.06(1H)，4.25(1H)，2.44-2.53(2H)，6.96(2H)，6.66(2H)，9.06(1H)；絲氨酸7.74(1H)，4.96(1H)，3.72(2H)；β-羥基-γ-甲基脯氨酸4.33(1H)，3.98(1H)，2.31(1H)，0.99(3H)，3.26-4.0(2H)；鳥氨酸8.37(1H)，3.84-3.64(2H)，8.11(1H)，4.83(1H)，2.82-3.11(2H)；芳族和辛氧基鏈7.91(2H)，7.69(2H)，7.66(2H)，7.02(2H)，4.02(2H)，1.74(2H)，1.43(2H)，1.32-1.28(6H)，1.28(2H)，0.87(3H)。
III第三階段將式(IVa)化合物還原胺化，得到式(Ia)化合物1-[4-[(2-氨基乙基)氨基]-N2-[[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-L-鳥氨酸]-4-[4-(4-羥基苯基)-L-蘇氨酸]-5-L-絲氨酸棘白菌素B路線1將8g根據階段II得到的式(IVa)化合物和2.52mL乙二胺溶解於80mL四氫呋喃(THF)中，同時在氮氣和室溫下攪拌30分鐘至1小時。在30分鐘內引入0.36g四氯化鈦溶解於80mL THF中的溶液。攪拌1小時，之後冷卻至5℃。加入溶解於16mL THF中的3.2mL冰醋酸。在5℃下攪拌1小時，然後冷卻至0℃，在15分鐘內加入1.04g氰基硼氫化鈉溶解於24mLTHF中的溶液。使反應介質在30分鐘內升溫至5℃並在該溫度下攪拌30分鐘。然後升溫至室溫，同時攪拌3小時，之後真空蒸餾至體積為40mL，加入7.2g碳酸氫鈉溶解於80mL水中的溶液，真空蒸餾至殘餘體積為80mL，然後加入32mL甲醇和128mL乙酸乙酯。攪拌10分鐘，之後潷析，用乙酸乙酯/甲醇混合物對水相進行反萃取，並在真空下蒸餾所有有機相至殘餘體積為40mL。引入40mL DMF，繼續蒸餾至殘餘體積為60mL。將該溶液在20分鐘內傾入320mL水中，並在室溫下攪拌15小時。必要時用稀蘇打將pH調節至9-9.5，之後過濾並用1.2g碳酸氫鈉的水溶液(pH9-9.5)衝洗。將固體於烘箱中在真空和30℃下乾燥18小時後，得到白色固體形式的8.55g期望的粗鹼。
產率100％異構體比例A/B＝80/20路線2在攪拌和氮氣氛下將10g階段II)所得的式(IV)產物引入600mL THF中。然後依次加入20g 3_分子篩、3.16mL乙二胺和110.4g三-苄基-L-脯氨酸硼氫化鈉。將該均相溶液在室溫下攪拌6小時，之後將分子篩過濾並用THF衝洗。將濾液在真空和低於40℃的內部溫度下蒸餾至幹。將600mL飽和碳酸氫鈉水溶液緩慢加至所得樹脂上，同時攪拌。將20g HyflosupercelKieselgühr過濾劑加入該懸液中，並在室溫下攪拌16小時，之後過濾並用水洗滌。通過使100mL甲醇通過四次將濾餅溶解。將甲醇濾液在真空和不超過40℃的溫度下濃縮至幹。得到21.25g期望產物。
路線3還原胺化反應的中間體(式IV』a)的分離1-[4-[N，N』-咪唑烷]-N2-[[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-L-鳥氨酸]-4-[4-(4羥基苯基)-L-蘇氨酸]-5-L-絲氨酸棘白菌素B將階段II)中所得的式(IVa)產物在40mL二氯甲烷和0.32mL乙二胺中的懸液攪拌18小時。加入80mL乙醚並攪拌5小時。將固體過濾並用乙醚衝洗幾次。於烘箱中在真空和室溫下乾燥15小時後，得到白色固體形式的0.76g期望化合物。然後使該中間體進行前面路線1或2的還原反應。該分離的化合物是新化合物並且構成本發明的組成部分。
產率73％MASS(FAB)MH+1100；MNa+1122NMR蘇氨酸8.51(1H)，4.72(1H)，4.38(1H)，1.20(3H)；γ-羥基脯氨酸4.37(1H)，1.90-2.22(2H)，4.42(1H)，3.88-3.66(2H)；β-羥基-高酪氨酸7.46(1H)，4.17(1H)，4.17(1H)，2.46(2H)，6.96(2H)，6.65(2H)；絲氨酸7.47(1H)，4.84(1H)，3.65-3.60(2H)；β-羥基-γ-甲基脯氨酸4.22(1H)，3.93(1H)，2.29(1H)，0.95(3H)，3.22-3.90(2H)；鳥氨酸7.45(1H)，2.72-3.51(2H)，9.55(1H)，4.28(1H)，1.63-2.12(2H)；咪唑烷2.63-2.94(2H)；2.78-3.02(2H)；芳族和辛氧基鏈7.87-7，72(2H，2H)，7.66(2H)，7.03(2H)，4.02(2H)，1.72(2H)，1.27、1.32、1.43(4×2H)，1.29(2H)，0.88(3H)。
IV)第四階段前面所得的式(Ia)化合物(根據路線1、2或3)的色譜純化和兩種異構體A和B(A或B對應於4位的立體異構體R或S)的分離1-[4-[(2-氨基乙基)氨基]-N2-[[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-L-鳥氨酸]-4-[4-(4-羥基苯基)-L-蘇氨酸]-5-L-絲氨酸棘白菌素B的二-三氟乙酸鹽利用二氯甲烷(43)-乙腈(50)-甲醇(7)-水(5)-三氟乙酸(1)混合物作為流動相，以將2.5g Merck 11763矽膠填充Prochrom LC 200柱並使之平衡。將24g以上所得的化合物(階段III，路線1)溶解於126mL由乙腈(50)-甲醇(7)-水(5)-TFA(1)組成的混合物中。將該溶液過濾並加入86mL二氯甲烷。將該溶液注入柱中。以76L/h的流速並在14巴的壓力下洗脫。在280nm處進行檢測，之後在真空和不超過40℃的內部溫度下蒸餾收集的各級分。得到36.75g產物，為固體二-TFA鹽的形式。
異構體比例A/B＝99.3/0.7V)第五階段二-三氟乙酸鹽的色譜純化(除去其它鹽)利用水(90)-乙腈(10)-三氟乙酸(0.1)混合物作為流動相，以300g反相Daisogel SP 120n°5/1502矽膠填充Prochrom LC 50柱並使之平衡。將以上第一次色譜分離中所得的36.75g鹽溶解於含57.3mL水(90)-乙腈(10)-三氟乙酸(0.1)和26.8mL純乙腈的混合物中。將該溶液過濾並將其注入柱中。首先用水(90)-乙腈(10)-三氟乙酸(0.1)洗脫以除去無機鹽，然後用水(50)-乙腈-(50)-三氟乙酸(0.1)洗脫以除去產物。將收集的各級分在真空和不超過40℃的內部溫度下蒸餾。將所得的清澈水溶液凍幹。得到15.59g期望產物，為絮狀白色固體的二-TFA鹽的形式。
異構體比例A/B＝99.4/0.6
兩次色譜分離的累積產率53.8％氨基還原的產率28.7％VI)第六階段返回到鹼1-[4-[(2-氨基乙基)氨基]-N2-[[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-L-鳥氨酸]-4-[4-(4-羥基苯基)-L蘇氨酸]-5-L-絲氨酸棘白菌素B將14.37g以上所得的凍幹的二-三氟乙酸鹽形式的化合物溶解於143.7mL水中。在氮氣下攪拌15分鐘，並在15分鐘內在室溫下加入57.5mL飽和碳酸氫鈉水溶液。攪拌17小時。加入430mL乙酸乙酯/甲醇的8/2混合物並攪拌15分鐘。潷出上層有機相併用288mL乙酸乙酯(8)-甲醇(2)混合物對水相進行反萃取。將各有機相合併、小心潷析並在真空和不超過35℃的溫度下蒸餾至幹。向幹萃取物中加入143.7mL水，並將該懸液攪拌30分鐘，之後過濾並用水洗滌，直至不再有氟化物。在將固體於真空和40℃下乾燥後，得到白色粉末形式的10.91g期望產物。
產率91.6％微量分析(水8.8％)
VII)第七階段成鹽(鹽酸)1-[4-[(2-氨基乙基)氨基]-N2-[[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-L-鳥氨酸]-4-[4-(4-羥基苯基)-L-蘇氨酸]-5-L-絲氨酸棘白菌素B的二鹽酸鹽將10.53g前面階段得到的化合物溶解於263mL甲醇中，同時在室溫下攪拌30分鐘，之後過濾並用31.6mL甲醇衝洗2次。在攪拌、氮氣氛和室溫下加入2.1mL 36％的鹽酸。攪拌30分鐘，之後在真空和不超過35℃的溫度下蒸餾至幹。將幹萃取物溶解於105.3mL二異丙基醚中。將所得懸液攪拌2小時。之後過濾並用二異丙基醚洗滌2次，每次用21.1mL。在將固體於烘箱中在真空和40℃下乾燥後，得到白色粉末形式的10.52g期望產物。
產率93.7％微量分析(水5.75％)
VIII第八階段鹽酸鹽的結晶1-[4-[(2-氨基乙基)氨基]-N2-[[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-L-鳥氨酸]-4-[4-(4-羥基苯基)-L-蘇氨酸]-5-L-絲氨酸棘白菌素B的二鹽酸鹽將2.75g根據階段VII所得的化合物溶解於235.4mL乙腈和14.8mL去除礦物質水的混合物中，同時加熱回流(77.4℃)。在77℃下攪拌15分鐘，然後將反應介質在45分鐘內冷卻至+50℃。用41.25mg結晶化合物引發，之後在30分鐘內逐步冷卻至20℃，並攪拌2小時15分鐘，使結晶得以發展。將該懸液真空濃縮至殘餘體積為55mL，同時使溫度從5℃升至20℃。重新建立常壓氮氣，之後在20分鐘內冷卻至0℃，在0℃下攪拌17小時，在氮氣壓下過濾並用11mL乙腈衝洗。在將結晶固體於烘箱中在真空和40℃下乾燥後，得到白色結晶固體形式的2.29g期望產物。
產率83.3％HPLCRt＝5.8(異構體A)；Rt＝7.1(異構體B)Kromasil C18，15cm，4.6mm，5μm流動相乙腈-水-TFA 50/50/0.1
210nm，35℃，1mL/min。
NMRCDCl39.07(m)1H；8.48(d，j＝8)1H；8.00(d，j＝8)2H；7.96(d，j＝8.5)2H；7.71(d，j＝8.5)2H；7.64(d，j＝8.5)2H；7.60(d，j＝9)1H；7.37(d，j＝9.5)1H；7.02(d，j＝8.5)2H；6.97(d，j＝8.5)2H；6.65(d，j＝8.5)2H；4.90(m)1H；4.77(m)1H；4.66(m)1H；4.45(m)1H；4.42(m)1H；4.39(m)1H；4.34(s)1H；4.26(m)1H；4.22(m)1H；4.08(m)1H；4.01(t，j＝6.5)2H；3.88(m)3H；3.70(m)21H；3.51(m)2H；3.48(m)1H；3.31(m)2H；3.28(m)1H；3.16(m)2H；2.53(dd，j＝6和13.5)1H；2.44(dd，j＝7.5和13.5)1H；2.27(m)1H；2.25(m)1H；2.15(m)2H；1.94(m)1H；1.74(m)2H；1.44(m)2H；1.22-1.40(m)8H；1.13(d，j＝6)3H；0.99(d，j＝6.5)3H；0.88(t，j＝7)3H。
實施例2藥物組合物製備含有如下組分的片劑實施例1的產物 150mg賦形劑s.q.f. 1g賦形劑的具體實例澱粉、滑石、硬脂酸鎂。
權利要求
1.製備式(I)化合物的方法， 其中R代表含有至多30個碳原子的直鏈或支鏈或環狀鏈，任選含有一個或多個雜原子和一個或多個雜環，包括下列步驟a)使式(II)化合物， 與式R-CO2H的酸作用，所述酸視情況而定呈分離或非分離的活化形式，以便得到式(III)化合物， b)視情況而定使式(III)化合物在PPTS存在下通過式Alk-OH醇的作用而在5位進行醇的烷基化反應，其中Alk代表含有1至4個碳原子的烷基，以便得到式(III』)化合物， c)使式(III)或(III』)化合物進行脫水反應，以便得到式(IV)化合物， d)使式(IV)化合物在還原劑如路易斯酸存在下的NaBH3CN，或NaBH(OCOR』3)存在下通過乙二胺的作用而進行還原胺化反應，其中OCOR』代表Boc-L-Pro、Bzl-L-Pro或任何其它光學活性胺基酸以及任何其它手性或非手性羧酸，以便得到如上所定義的式(I)化合物，該化合物中活性異構體之一佔多數，然後視情況而定以任何合適的順序對所述式(I)化合物進行一個或多個下列操作-色譜分離，-結晶，-與鹼作用，-成鹽。
2.權利要求1所定義的方法，其中式(I)、(III)、(III』)或(IV)化合物含有代表下列基團的R基團
3.權利要求1所定義的方法，其中式(I)、(III)、(III』)、(IV)化合物含有代表下列基團的R基團
4.製備式(Ia)化合物的方法 包括下列步驟a)使式(II)化合物， 與式C8H17-O-Ph-Ph-CO2H的酸作用，所述酸視情況而定呈分離或非分離的活化形式，以便得到式(IIIa)化合物， b)視情況而定使式(IIIa)化合物在PPTS存在下通過甲醇的作用而在5位進行醇的烷基化反應，以便得到式(IIIa』)化合物， c)使式(IIIa)或(IIIa』)化合物進行脫水反應，以便得到式(IVa)化合物， d)使式(IVa)化合物在還原劑如與TiCl4偶聯的NaBH3CN、NaH(Boc-L-pro)3或NaH(Bzl-L-Pro)3存在下通過乙二胺的作用而進行還原胺化反應，以便得到如上所定義的式(Ia)化合物，該化合物中活性異構體之一佔多數，對所述式(Ia)化合物進行一個或多個下列操作-色譜分離，-結晶，-與鹼作用，-與鹽酸作用而成鹽。
5.根據權利要求4的方法，其特徵在於對式(Ia)化合物接連進行下列操作a)使用有機溶劑、水和三氟乙酸的混合物經矽膠色譜、然後經反相色譜純化，以便得到式(Ia)化合物的三氟乙酸鹽；b)與鹼作用、例如與碳酸氫鈉水溶液作用，以便得到鹼形式的式(Ia)化合物；c)與鹽酸作用而成鹽，以便得到相應的鹽，即式(Ia)化合物的二鹽酸鹽。
6.根據權利要求1至5中任一項的方法，其特徵在於酸的活化反應在五氟苯酚、N-羥基琥珀醯亞胺或任選N-羥基苯並三唑存在下進行。
7.根據權利要求1至5中任一項的方法，其特徵在於在分離的活化酸存在下的醯化反應在二異丙基乙基胺存在下進行。
8.根據權利要求1至5中任一項的方法，其特徵在於活化反應和隨後在非分離的活化酸存在下的醯化反應在N-甲基吡咯烷酮和DMTMM存在下進行。
9.根據權利要求1至5中任一項的方法，其特徵在於脫水反應在AIBB和視情況而定的MgI2存在下進行。
10.根據權利要求1至7中任一項的方法，其特徵在於脫水反應在HBr-AcOH和MgI2存在下進行。
11.根據權利要求9和10的方法，其特徵在於得自脫水作用的產物通過從DMF/丙酮或DMF/AcOEt混合物中結晶而純化。
12.根據權利要求1至5中任一項的方法，其特徵在於還原胺化反應在選自與TiCl4偶聯的NaBH3CN，NaH(Boc-L-pro)3和NaH(Bzl-L-Pro)3的還原劑存在下進行。
13.通過權利要求1至4和6至8中任一項所定義的式(II)化合物的醯化反應而製備式(III)或(IIIa)化合物的方法。
14.通過權利要求1至4和9至11中任一項所定義的式(III)、(III』)、(IIIa)或(IIIa』)化合物的脫水反應而製備式(IV)或(IVa)化合物的方法。
15.通過權利要求1至4和12中任一項所定義的式(IV)或(IVa)化合物的還原胺化反應而製備式(I)或(Ia)化合物的方法。
16.4S或4R形式或立體異構體混合物形式的1-[4-[(2-氨基乙基)氨基]-N2-[[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-L-鳥氨酸]-4-[4-(4-羥基苯基)-L-蘇氨酸]-5-L-絲氨酸棘白菌素B的二鹽酸鹽。
17.能夠通過權利要求1至15中所述方法得到的活性異構體A形式的1-[4-[(2-氨基乙基)氨基]-N2-[[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-L-鳥氨酸]-4-[4-(4-羥基苯基)-L-蘇氨酸]-5-L-絲氨酸棘白菌素B的二鹽酸鹽。
18.作為藥物的權利要求16或17所定義的1-[4-[(2-氨基乙基)氨基]-N2-[[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-L-鳥氨酸]-4-[4-(4-羥基苯基)-L-蘇氨酸]-5-L-絲氨酸棘白菌素B的二鹽酸鹽。
19.作為抗真菌藥物的權利要求16或17所定義的1-[4-[(2-氨基乙基)氨基]-N2-[[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-L-鳥氨酸]-4-[4-(4-羥基苯基)-L-蘇氨酸]-5-L-絲氨酸棘白菌素B的二鹽酸鹽。
20.藥物組合物，含有權利要求1 6或17所定義的1-[4-[(2-氨基乙基)氨基]-N2-[[4』-(辛氧基)-[1，1』-聯苯基]-4-基]羰基]-L-鳥氨酸]-4-[4-(4-羥基苯基)-L-蘇氨酸]-5-L-絲氨酸棘白菌素B的二鹽酸鹽和可藥用載體。
21.作為中間體化合物的權利要求1和6所定義的式(III』)或式(IIIa』)化合物。
22.作為中間體化合物的式(IV』)化合物，其中R如權利要求1至2中任一項所定義，或式(IVa』)化合物，此時R代表基團Ph-Ph-OC8H17，
全文摘要
本發明涉及製備式(I)化合物的方法，如右式其中R如說明書所定義，以及它們的鹽、它們的中間體、它們的二鹽酸鹽作為藥物的用途和含有它們的藥物組合物。
文檔編號C07K7/56GK1604908SQ02824928
公開日2005年4月6日 申請日期2002年12月12日 優先權日2001年12月14日
發明者P·博費利, A·布魯亞爾, C·科拉當, S·德魯, M·埃爾特, D·費魯, G·勒邁特, J·帕拉迪諾 申請人:安萬特醫藥股份有限公司