原血紅素和β‑葡萄糖醛酸苷酶聯合在前列腺細胞異質性增生檢測中的應用及試劑盒的製作方法
2023-07-30 09:25:36 3
本發明涉及液體活檢病理學檢測
技術領域：
，具體而言，涉及原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶聯合在前列腺細胞異質性增生檢測中的應用及試劑盒。
背景技術：
：前列腺細胞異質性增生的結果是前列腺癌。前列腺癌被形容為「沉默的殺手」，其早期不易被發現，通常確診時病情已發展至晚期，70％患者延誤治療，多名世界名人死於前列腺癌。主要症狀表現為尿血、尿痛及骨痛。數據顯示，前列腺癌已成為全球範圍內男性中第二位最常見的癌症，2012年新診斷的前列腺癌患者為110萬，約佔新增癌症病例總數的15％。近十年來，中國的前列腺癌發病率驟增，而大城市更成為「重災區」。北京市前列腺癌發病率由2001年的5.53/10萬上升至2010年的16.62/10萬，上海市20年間的前列腺癌發病率則增長了10餘倍。早發現、早診斷、早治療是提高前列腺癌治癒率、降低死亡率的有效措施。PIN(前列腺上皮內腫瘤)：形態學上具有一定異型性、尚保存原腺體結構或基底細胞層，無間質浸潤的病變統稱為PIN，是前列腺的癌前期病變。從生物學行為來看，DNA非整倍體的PIN常出現在非整倍體前列腺癌附近；前列腺癌及PIN均表現為8p染色體上的腫瘤抑制基因的缺失，上皮內腫瘤的增生細胞具有腫瘤細胞特徵，有進展為浸潤癌的潛能。臨床研究表明，從PIN轉化為腺癌至少需要10年或更多的時間，低度PIN往往在30多歲即出現。對PIN尤其是HGPIN患者進行篩查早期診斷和治療可能會降低前列腺癌的發病率，有助於預防前列腺癌，亦可能延緩前列腺癌的侵襲過程，從而推遲患者手術或放療時間，提高患者的生活質量。目前，前列腺癌常用的篩查方法是用直腸指檢加血清PSA濃度測定。但約有30％的患者PSA可能不升高，因而特異度不高。CT或MRI檢查可顯示前列腺形態改變、腫瘤及轉移。前列腺穿刺活檢，可作為確診前列腺癌的方法。未能穿刺取出腫瘤組織不能否定診斷。目前，臨床尚未發現便捷、快速、無創、經濟和準確的篩查方法。另外，目前臨床檢測前列腺細胞異質性增生的篩查方法都是針對單個的標誌物進行檢測，檢測結果的敏感度和特異度並不高，對前列腺癌的診斷結果不準確。有鑑於此，特提出本發明。技術實現要素：本發明的目的在於提供原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為聯合標誌物在製備前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒中的應用，將原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶同時作為聯合標誌物，用於檢測前列腺細胞異質性增生，具有敏感度和特異度高的特點，有助於提高對由前列腺細胞異質性增生引起的前列腺癌的診斷結果的準確性。本發明的另一目的在於提供一種前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒，該試劑盒以原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為標誌物進行聯合檢測，可用於對由前列腺細胞異質性增生引起的前列腺癌的篩查、早診、預後判斷及指導個體治療等領域，具有較高的敏感度和特異度。本發明是這樣實現的：原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為聯合標誌物在製備前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒中的應用。一種前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒，其以原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為標誌物進行聯合檢測，該前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒包括：用於檢測原血紅素的原血紅素檢測試劑膜和用於檢測β-葡萄糖醛酸苷酶的β-葡萄糖醛酸苷酶檢測試劑膜。本發明的原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶聯合在前列腺細胞異質性增生檢測中的應用及試劑盒的有益效果是：相較於以單個的原血紅素或β-葡萄糖醛酸苷酶作為標誌物，本發明首次提出將原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為聯合標誌物，應用於檢測前列腺細胞異質性增生的情況，令人驚喜的發現，相較於單獨地以原血紅素或β-葡萄糖醛酸苷酶作為標誌物進行檢測，將原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為聯合標誌物進行檢測的敏感度(88％)、特異度(94％)以及約登指數(0.82)均明顯提高，其有助於提高對由前列腺細胞異質性增生引起的前列腺癌的診斷結果的準確性。附圖說明為了更清楚地說明本發明實施例的技術方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應當理解，以下附圖僅示出了本發明的某些實施例，因此不應被看作是對範圍的限定，對於本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他相關的附圖。圖1為本發明實施例1提供的原血紅素比色板的結構示意圖；圖2為本發明實施例1提供的β-葡萄糖醛酸苷酶比色板的結構示意圖。具體實施方式為使本發明實施例的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述。實施例中未註明具體條件者，按照常規條件或製造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未註明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規產品。下面對本發明實施例的原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶聯合在前列腺細胞異質性增生檢測中的應用及試劑盒進行具體說明。原血紅素是血紅素家族的重要成員，是血紅素在人體內的存在形式，是血紅素結合蛋白的活性基。它由原卟啉Ⅸ與二價鐵離子結合而成。據其分子結構和功能不同又分為原血紅素a、b、c，在腫瘤發生過程中被釋放，屬於醫學相關生物標誌(medicine-relatedbiomarker)。致癌因素導致前列腺細胞糖代謝異常，腫瘤細胞的耗糖量是正常細胞的十倍，而且磷酸戊糖途徑代謝活躍，稱為「瓦博格氏效應」。在腫瘤細胞能量代謝電子傳遞過程中，其間芬頓氏反應產生的羥自由基、過氧自由基等對線粒體造成氧化損傷，改變細胞蛋白的極性量值，使位居線粒體基膜中血紅素結合蛋白疏水核(又稱血紅素口袋)中的原血紅素釋放，導致前列腺液或精液中原血紅素含量增加，其釋放量與細胞癌變程度呈正相關。原血紅素具有過氧化物酶的作用，可以使過氧化物脫氧，進而使供氫體氧化成含顯色集團的物質。用比色法測定前列腺液或精液中原血紅素含量，即可顯示前列腺細胞是否存有異質性增生。β-葡萄糖醛酸苷酶是前列腺細胞異質性增生過程中活性增強的一種生物標誌物。它是由四個相同亞單位組成的糖蛋白，廣泛存在於人體的各種組織及體液中，生理狀態下具有參與細胞增生的作用，而在病理狀態下，β-葡萄糖醛酸苷酶可以作用於葡萄糖醛酸甙的β一糖苷鍵，水解癌周結締組織中的蛋白多糖及糖蛋白，破壞其網狀結構的防禦作用，有利於癌細胞的浸潤與擴散。有關前列腺癌β-葡萄糖醛酸苷酶活性增高的機制，一是為適應腫瘤生存引起的機體對酶代謝的改變，如癌細胞分泌β-葡萄糖醛酸苷酶增強，癌細胞膜對β-葡萄糖醛酸苷酶通透性改變，對該酶抑制劑的缺乏或增加；二是腫瘤組織浸潤並且破壞周圍正常組織，引起其它組織酶生成異常，或因腫瘤壓迫梗阻引起該酶的大量釋放，造成β-葡萄糖醛酸苷酶增高。通過聯合應用形態學細胞水平的免疫組化技術、亞細胞水平的免疫電鏡技術和機能學的ELISA技術，對前列腺癌組織及前列腺液或精液中β-葡萄糖醛酸苷酶進行的同步檢測顯示，β-葡萄糖醛酸苷酶在前列腺癌患者組織及前列腺液或精液中增高，是由癌細胞自身的生物學特性決定的，緣於腫瘤細胞為適應其快速過度增殖和異常分化的自主性生長的生存方式而產生的自我調控，由其自身獨特的生長方式決定並成為內因的。在最適溫度與PH條件下，酚酞葡萄糖醛酸甙經β-葡萄糖醛酸苷酶催化水解，釋放出遊離酚酞。加鹼性溶液終止反應，酚酞呈紅色。觀察酚酞指示的顏色變化，即可了解樣本液中β-葡萄糖醛酸苷酶的活性，顯示前列腺細胞是否存有惡變及其程度。但是，以單個的原血紅素a/b/c作為標誌物檢測前列腺細胞異質性增生的特異度比較低，而以單個的β-葡萄糖醛酸苷酶作為標誌物檢測前列腺細胞異質性增生的敏感度比較低。鑑於此，一方面，本發明提供了原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為聯合標誌物在製備前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒中的應用。進一步地，上述的前列腺細胞為前列腺腺泡上皮細胞。進一步地，上述的前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒使用前列腺液或精液作為檢驗樣本，檢測樣本內是否含有異質性增生的前列腺腺泡上皮細胞。本發明首次提出將原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為聯合標誌物，用於檢測前列腺細胞尤其是前列腺腺泡上皮細胞異質性增生情況。相較於單獨地以原血紅素或β-葡萄糖醛酸苷酶作為標誌物，將原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為聯合標誌物，用於檢測前列腺細胞異質性增生情況，這兩種標誌物的檢測結果可相互印證，相互補充，從而彌補其各自的不足，因而具有更高的敏感度和特異度，有助於提高對由前列腺細胞異質性增生引起的前列腺癌的診斷結果的準確性。另一方面，本發明還提供了一種前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒，其以原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為標誌物進行聯合檢測，該前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒包括：用於檢測原血紅素的原血紅素檢測試劑膜和用於檢測β-葡萄糖醛酸苷酶的β-葡萄糖醛酸苷酶檢測試劑膜。本發明所提供的前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒可同時對前列腺細胞異質性增生的標誌物原血紅素和β葡萄糖醛酸苷酶進行同時聯合檢測，具有操作簡單，檢測結果準確的特點。其可用於對由前列腺細胞異質性增生引起的前列腺癌的篩查、早診、預後判斷及指導個體治療等領域，具有較高的敏感度和特異度。進一步地，上述前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒還包括樣本前處理液，該樣本前處理液由pH為6.8-7.8、濃度為0.05mol/L的Tris-Hcl(三羥甲基氨基甲烷-鹽酸)緩衝液與EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)混合製得。優選地，Tris-Hcl緩衝液的pH為7.4。優選地，EDTA在樣本前處理液中的濃度為0.01-0.03mol/L，更優選地，EDTA在樣本前處理液中的濃度為0.02mol/L。進一步地，上述的原血紅素檢測試劑膜由以下方法製得：(1)將聚乙烯吡咯烷酮與磷酸緩衝液混合，得到第一混合液；(2)將原血紅素空白試劑膜浸泡於上述第一混合液中，去除上述原血紅素空白試劑膜的水分後，得到原血紅素試劑膜半成品；其中，去除上述原血紅素空白試劑膜的水分為：淋去原血紅素空白試劑膜上的多餘試劑，烘乾，得到原血紅素試劑膜半成品，當然，也可按其他的方法將浸泡後的原血紅素空白試劑膜的水分除去，其也屬於本發明的保護範圍。(3)將上述原血紅素試劑膜半成品浸泡於第二混合液中，去除上述原血紅素試劑膜半成品的水分後，得到成品的原血紅素檢測試劑膜，上述第二混合液由3，3』，5，5』-四甲基聯苯胺、無水乙醇和過氧化羥基異丙苯混合製得。其中，去除上述原血紅素試劑膜半成品的水分為：淋去原血紅素試劑膜半成品上多餘的試劑，均勻地烘乾即可。優選地，上述的磷酸緩衝液的濃度為0.8-2mol/L、pH為3.2-6.8。更優選地，上述的磷酸緩衝液的濃度為1.75mol/L、pH為4.5。優選地，上述的第一混合液中的聚乙烯吡咯烷酮的濃度為7-9g/100ml。即每100ml第一混合液中含有聚乙烯吡咯烷酮7-9g。更優選地，上述的第一混合液中的聚乙烯吡咯烷酮的濃度為8g/100ml。優選地，上述的第二混合液按以下方法製得：將0.5-1g的3，3』，5，5』-四甲基聯苯胺加入到500ml的無水乙醇中，然後加入1-2ml的過氧化羥基異丙苯後製得第二混合液。更優選地，3，3』，5，5』-四甲基聯苯胺的加入量為0.75g，過氧化羥基異丙苯的加入量為1ml。進一步地，上述β-葡萄糖醛酸苷酶檢測試劑膜由以下方法製得：(1)將聚乙烯吡咯烷酮、酚酞葡萄糖醛酸苷辛可尼丁鹽與醋酸緩衝液混合，得到第三混合液；(2)將β-葡萄糖醛酸苷酶空白試劑膜浸泡於上述第三混合液中，去除上述β-葡萄糖醛酸苷酶空白試劑膜的水分後，得到β-葡萄糖醛酸苷酶試劑膜半成品；其中，去除上述β-葡萄糖醛酸苷酶空白試劑膜的水分為：淋去β-葡萄糖醛酸苷酶空白試劑膜上的多餘試劑，避光條件下，28℃流動空氣乾燥2小時。(3)將上述β-葡萄糖醛酸苷酶試劑膜半成品浸泡於甘氨酸緩衝液中，去除β-葡萄糖醛酸苷酶試劑膜半成品的水分，得到β-葡萄糖醛酸苷酶檢測試劑膜。其中，去除β-葡萄糖醛酸苷酶試劑膜半成品的水分為：淋去β-葡萄糖醛酸苷酶試劑膜半成品上多餘的試劑，於40℃均勻地烘乾。優選地，醋酸緩衝液的濃度為0.1-0.3mol/L、pH為6.5-7.58，更優選地，醋酸緩衝液的濃度為0.2mol/L、pH為5.0。優選地，上述第三混合液中的酚酞葡萄糖醛酸苷辛可尼丁鹽的濃度為0.5-1g/100ml，更優選地，第三混合液中的酚酞葡萄糖醛酸苷辛可尼丁鹽的濃度為0.79g/100ml。優選地，第三混合液中的聚乙烯吡咯烷酮濃度為7-9g/100ml，更優選地，第三混合液中的聚乙烯吡咯烷酮濃度為8g/100ml。優選地，甘氨酸緩衝液的濃度為0.2-0.3mol/L、pH為9-12。更優選地，甘氨酸緩衝液的濃度為0.22mol/L、pH為10.5。進一步地，前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒的檢測樣本為前列腺液或精液。需要說明的是，本發明提供的原血紅素檢測試劑膜和β-葡萄糖醛酸苷酶檢測試劑膜的製作方法並不限於上述的製作方法，在其他的實施例中，按其他的方法所製作得到的可用於檢測的原血紅素的原血紅素檢測試劑膜和可用於檢測的β-葡萄糖醛酸苷酶檢測試劑膜，只要將其同時應用於檢測原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶，將二者作為聯合標誌物，用於檢測前列腺細胞尤其是前列腺腺泡上皮細胞異質性增生則均屬於本發明的保護範圍。還需要說明的是，在本發明的實施例中，上述製作方法中所用的原血紅素空白試劑膜可為31ET濾紙；β-葡萄糖醛酸苷酶空白試劑膜也可為31ET濾紙，在其他的實施例中，原血紅素空白試劑膜可和β-葡萄糖醛酸苷酶空白試劑膜也可以是其他的類型的濾紙，其並不限於31ET濾紙。以下結合實施例對本發明的特徵和性能作進一步的詳細描述。實施例1本實施例提供了一種前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒，該試劑盒以原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為標誌物進行聯合檢測。通過對原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶的檢測結果，可用於判斷樣本的前列腺細胞例如前列腺腺泡上皮細胞異質性增生情況。本實施例提供的前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒，其包括用於檢測原血紅素的原血紅素檢測試劑膜和用於檢測β-葡萄糖醛酸苷酶的β-葡萄糖醛酸苷酶檢測試劑膜。其中，本發明提供的原血紅素檢測試劑膜按如下方法製作：1.1、製作磷酸緩衝液。緩衝液為1.75mol/L、PH值4.5磷酸鹽緩衝液。1.2、把定量聚乙烯吡咯烷酮K30加入上述磷酸緩衝液中，得到第一混合液，攪拌至全溶；其中，聚乙烯吡咯烷酮K30用量為8g/100ml。即每100ml磷酸緩衝液中加入8g聚乙烯吡咯烷酮K30。s1.3、將裁切好的31ET濾紙(即原血紅素空白試劑膜)在以上步驟製得的第一混合液中均勻浸泡至透，淋去多餘試劑，烘乾，為原血紅素試劑膜半成品。1.4、將定量3，3』，5，5』-四甲基聯苯胺加入到無水乙醇500ml中，攪拌至完全溶解；其中，3，3』，5，5』-四甲基聯苯胺為0.75g。1.5、將定量過氧化羥基異丙苯加入到上述溶液中，得到第二混合液，攪拌至完全溶解；過氧化羥基異丙苯加入量為1ml。1.6、將步驟1.3製得的原血紅素試劑膜半成品在步驟1.5製得的第二混合液中均勻浸泡至透，淋去多餘試劑，均勻地烘乾，即得原血紅素檢測試劑膜。1.7、避光、乾燥條件下保存。本發明提供的β-葡萄糖醛酸苷酶檢測試劑膜按如下方法製作：2.1、取100ml0.2mol/LpH5.0的醋酸緩衝液。2.2、將定量0.79g的酚酞葡萄糖醛酸苷辛可尼丁鹽(PGA)溶於步驟2.1的醋酸緩衝液中混勻。2.3、把定量聚乙烯吡咯烷酮K30加入上述步驟2.2得到的混合溶液中，得到第三混合液攪拌至全溶；聚乙烯吡咯烷酮K30為8g/100ml。2.4、將裁切好的31ET濾紙(β-葡萄糖醛酸苷酶空白試劑膜)在步驟2.3製得的第三混合液中均勻浸泡至透，淋去多餘試劑，得β-葡萄糖醛酸苷酶試劑膜半成品。2.5、避光條件下，28℃流動空氣乾燥2小時。2.6、取0.22mol/L、PH值為10.5的鹼性甘氨酸緩衝液。2.7、將步驟2.4製得的β-葡萄糖醛酸苷酶試劑膜半成品在步驟2.6製得的甘氨酸緩衝液中均勻浸泡至透，淋去多餘試劑，40℃均勻地烘乾，即得到β葡萄糖醛酸苷酶檢測試劑膜。2.8、避光、乾燥條件下保存。本發明提供的前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒參考如下步驟進行檢測：3.1、將來自某個體(前列腺癌患者、或非前列腺癌患者、或疑似前列腺癌患者)的前列腺液或精液樣本與樣本前處理液(購買或配製)混合，得到樣本混合液。3.2、取前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒中的原血紅素檢測試劑膜和β-葡萄糖醛酸苷酶檢測試劑膜分別插入至樣本混合液中，根據顯色結果，與相應的比色板相比較，判斷出單個標物的情況。通常情況下，原血紅素檢測試劑膜呈現藍色為陽性，即樣本中含有原血紅素，否則為陰性；β-葡萄糖醛酸苷酶檢測試劑膜呈現紅色為陽性，即樣本中含有β-葡萄糖醛酸苷酶，否則為陰性。具體地，原血紅素檢測結果判讀標準參考圖1，圖1示出了原血紅素比色板的顏色(藍色)深淺所對應的判讀結果(陰性、可疑陽性、陽性或強陽性)，根據原血紅素檢測試劑膜的顯色深淺與圖1所示的原血紅素比色板相比較，進而判讀出樣本中的原血紅素結果(陰性、可疑陽性、陽性或強陽性)。β-葡萄糖醛酸苷酶檢測檢測結果判讀標準可參考圖2，圖2示出了β-葡萄糖醛酸苷酶比色板的顏色(紅色)深淺所對應的判讀結果(陰性、可疑陽性、陽性或強陽性)。根據β-葡萄糖醛酸苷酶檢測試劑膜的顯色深淺與圖2所示的β-葡萄糖醛酸苷酶比色板相比較，進而判讀出樣本中的β-葡萄糖醛酸苷酶結果(陰性、可疑陽性、陽性或強陽性)。對個體的前列腺細胞異質性增生的情況按表1的判讀規則進行判讀。其中，樣本前處理液參考下方法製作：稱取Tris試劑6.05g，少許水溶解，水定容至500ml；3.6ml濃鹽酸用蒸餾水定容到420ml；二者混合，再加入水80ml，共1000ml的Tris-Hcl緩衝液；取7.44gEDTA加入前述的1000mlTris-Hcl緩衝液中，混合保存。表1.採用本實施例提供的細胞異質性增生檢測試劑盒對檢測結果的判讀規則表1中的檢測結果的臨床意義如下：前列腺細胞異質性增生判讀結果為陽性是指：前列腺細胞存在異質性增生；前列腺細胞異質性增生判讀結果為陰性是指：前列腺細胞不存在異質性增生；前列腺細胞異質性增生判讀結果為可疑陽性是指：前列腺細胞可能存在異質性增生。採用本實施例提供的前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒對樣本的檢測結果可供臨床醫生在對受檢者進一步檢查時參考。本實施例提供的試劑盒以原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為標誌物進行聯合檢測，可用於前列腺細胞的異質性增生進行判斷，具有較高的敏感度和特異度，並可進一步對由前列腺細胞異質性增生引起的前列腺癌的進行篩查、早診、預後判斷及用於指導個體治療等領域。實施例2本實施例提供了一種前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒，該試劑盒以原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為標誌物進行聯合檢測。通過對原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶的檢測結果，用於判斷樣本的細胞異質性增生情況。本實施例提供的前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒，其包括用於檢測原血紅素的原血紅素檢測試劑膜、用於檢測β-葡萄糖醛酸苷酶的β-葡萄糖醛酸苷酶檢測試劑膜以及用於對樣本進行處理的樣本前處理液。其中，原血紅素檢測試劑膜、β-葡萄糖醛酸苷酶檢測試劑膜以及樣本前處理液的製作方法可參考實施例1。本實施例提供的前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒的效果同實施例1。實施例3本實施例提供了將原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為聯合標誌物用於檢測前列腺細胞異質性增生的敏感度、特異度以及約登指數的驗證。靈敏度(sensitivity)：又稱敏感度，是指篩檢方法能將實際有病的人正確地判定為患者的比例；特異度(specificity)：是指篩檢方法能將實際無病的人正確地判定為非患者的比例。3.1敏感度驗證3.1.1標本來源：某醫療單位臨床檢驗室收納的前列腺癌病人前列腺液標本100份。前列腺癌均經病理學確診。3.1.2檢測方法：採用實施例2提供的前列腺細胞異質性增生檢測試劑盒對上述的100份樣本進行原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶的聯合檢測，並按實施例1提供的判讀規則進行判讀。(需要說明的是，也可以採用其他的試劑盒或方法檢測100份樣本原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶，只要以原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為聯合標誌物用於對前列腺細胞的異質性增生進行檢測即可)，前列腺異質性增生的檢測結果見表2。表2.以原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為聯合標誌物與單獨的以原血紅素或β-葡萄糖醛酸苷酶作為標誌物的檢測前列腺癌樣本的敏感度標誌物強陽性陽性陰性可疑陽性敏感度(％)原血紅素334719181β-葡萄糖醛酸苷酶74840560原血紅素+β-葡萄糖醛酸苷酶861121988註：表中數據為相應檢測結果的前列腺癌樣本數。表2顯示了以原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為聯合標誌物與單獨的以原血紅素或β-葡萄糖醛酸苷酶作為標誌物的檢測前列腺癌樣本的敏感度，從表2可知，單獨地以原血紅素作為標誌物檢測樣本的敏感度明顯高於單獨地以β-葡萄糖醛酸苷酶作為標誌物檢測樣本的敏感度(p<0.01)；以原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為聯合標誌物檢測樣本的敏感度高於單獨地以β-葡萄糖醛酸苷酶作為標誌物檢測樣本的敏感度(p0.05)。3.2特異度驗證3.2.1標本來源：與步驟3.1.1中的相同醫療單位臨床檢驗室收納的非前列腺癌患者前列腺液標本100份。非前列腺癌患者為其它原因需要進行病理學檢查，均除外前列腺癌者。3.2.2檢測方法：同步驟3.1.2。異質性增生的檢測結果見表3。表3.以原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為聯合標誌物與單獨的以原血紅素或β-葡萄糖醛酸苷酶作為標誌物的檢測非前列腺癌樣本的特異度標誌物強陽性陽性陰性可疑陽性特異度(％)原血紅素42766369β-葡萄糖醛酸苷酶09829191原血紅素+β-葡萄糖醛酸苷酶24643094註：表中數據為相應檢測結果的非前列腺癌樣本數。表3顯示了以原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為聯合標誌物與單獨的以原血紅素或β-葡萄糖醛酸苷酶作為標誌物的檢測非前列腺癌樣本的特異度，從表3可看出，以原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為聯合標誌物檢測樣本的特異度明顯高於單獨地以原血紅素作為標誌物檢測樣本的特異度(p0.05)。3.3約登指數3.3.1單獨地以原血紅素作為標誌物檢測的約登指數為0.50；3.3.2單獨地以β-葡萄糖醛酸苷酶作為標誌物檢測的約登指數為0.51；3.3.3以原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為聯合標誌物檢測的約登指數為0.82。約登指數是指：敏感度與特異度之和減去1，其表示篩檢方法發現真正的患者與非患者的總能力，指數越大說明篩查實驗的效果越好，真實性越大。由上述結果可知，以原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為聯合標誌物用於篩查前列腺細胞的異質性增生的效果更好，其真實性越大，相應地診斷結果也準確，大大地提高了對由前列腺細胞尤其是前列腺腺泡上皮細胞異質性增生引起的前列腺癌的診斷結果的準確性。綜上，本發明首次以原血紅素和β-葡萄糖醛酸苷酶作為聯合標誌物用於檢測前列腺細胞異質性增生情況，令人驚訝的結果是其敏感度達到88％、特異度達到94％、約登指數達到0.82，均明顯高於單獨地以原血紅素或β-葡萄糖醛酸苷酶作為標誌物的檢測，且漏診率和誤診率都非常低，符合篩查試劑的要求，適合於做大數據人群的由前列腺細胞異質性增生引起的前列腺癌篩查，有助於提高對由前列腺細胞異質性增生引起的前列腺癌的診斷結果的準確性。以上所述僅為本發明的優選實施例而已，並不用於限制本發明，對於本領域的技術人員來說，本發明可以有各種更改和變化。凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。當前第1頁1 2 3