新型半乳糖苷神經醯胺類似體、使用這些類似體的β-葡糖腦苷酯酶活化劑、皮膚外用藥...的製作方法

2023-07-08 03:01:06 3

專利名稱：新型半乳糖苷神經醯胺類似體、使用這些類似體的β -葡糖腦苷酯酶活化劑、皮膚外用藥 ...的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種新型半乳糖苷神經醯胺類似體、使用這些類似體的β-葡糖腦苷酯酶活化劑、皮膚外用藥以及β-葡糖腦苷酯酶的活化方法。具體涉及一種利用特定的半乳糖苷神經醯胺類似體活化表皮中的β-葡糖腦苷酯酶的β-葡糖腦苷酯酶活化劑、皮膚外用藥以及β-葡糖腦苷酯酶的活化方法，這些有望改善粗糙皮膚以及各種皮膚病。
背景技術：
粗糙皮膚(乾燥皮膚)一般是指可以看出角質細胞的剝離現象的乾燥狀態皮膚。這種粗糙皮膚是由於膽固醇、神經醯胺、脂肪酸等角質細胞間脂質的洗脫以及由紫外線、洗劑等引起的角質細胞的變性或者因表皮細胞生長·角化的平衡遭到破壞所形成的不完整的角質層透過屏障而引起的。圍繞預防或者治癒粗糙皮膚，已經進行了一系列的研究，例如通過供給角質細胞間脂質成分或者類似的合成角質細胞間脂質，或者供服表皮生長因子(EGF；Epidermal Growth Factor)等表皮細胞生長·角化的調節物質等。
該角質細胞間脂質是，在有棘層和顆粒層細胞中生物合成的層狀顆粒，在角層的正下方被釋放到細胞間並伸展成層狀結構(lamella)，從而在細胞間擴展開的物質。層狀顆粒是由葡糖苷酯醯鞘氨醇、膽固醇、神經醯胺、磷脂等構成的，但在角質細胞間脂質中幾乎不含有葡糖苷酯醯鞘氨醇。即層狀顆粒中的葡糖苷酯醯鞘氨醇，因β-葡糖腦苷酯酶的作用經水解轉變成層狀結構的神經醯胺，由此可以作為角質細胞問脂質改善角層透過屏障的形成，起到防護粗糙皮膚的屏障的作用。例如，在遺傳上完全缺乏β-葡糖腦苷酯酶的2號型高歇氏病(Gaucher`s disease)患者身上能觀察到病態粗糙皮膚，而且通過對其表皮的組織學研究可以發現角質細胞間脂質的層狀結構上存在異常。另外，在人為地缺失β-葡糖腦苷酯酶的轉基因鼠身上也可以看出角質細胞間脂質的層狀結構的異常與皮膚粗糙有關。經進一步的實驗也可以看出，當破壞β-葡糖腦苷酯酶時可以觀察到粗糙皮膚和角質細胞間脂質層狀結構的異常。基於這些事實可以看出，若要形成正常的角層透過屏障，必須使葡糖苷酯醯鞘氨醇被β-葡糖腦苷酯酶水解成神經醯胺。因此，可以確認通過活化β-葡糖腦苷酯酶，可改善角層透過屏障的形成，由此可以改善粗糙的皮膚。
在這種背景下，作為以往的β-葡糖腦苷酯酶的活化因子，已知的有在豚鼠脾臟中發現的SAP-2、在高歇氏病人的脾臟中發現的Ala以及サポシンC。
但是，由於這些活化因子是蛋白質，因此在通過外用這些活化因子來活化表皮的β-葡糖腦苷酯酶時，在皮膚吸收性以及安全性方面存在著較大問題。另外，若要分離這些蛋白質而用在工業上，則在成本上存在非常大的困難。
另一方面，作為蛋白質以外的β-葡糖腦苷酯酶活化因子，已知的有β-半乳糖苷神經醯胺。
但實際可利用的β-半乳糖苷神經醯胺來自於牛腦提取物，外用時同樣存在較大的安全性問題。另外，β-半乳糖苷神經醯胺的大量合成非常困難而且成本極高，不利於產業上的應用。

發明內容
本發明的目的就是提供一種容易得到的β-葡糖腦苷酯酶活化劑、皮膚外用藥以及β-葡糖腦苷酯酶的活化方法，該活化劑通過活化β-葡糖腦苷酯酶，可以改善角質層透過屏障的形成，由此可達到改善粗糙皮膚的效果。
鑑於上述所存在的問題，本發明人專心研究了可以解決這些問題的方法，結果發現利用後述的特定化合物可以很容易而且較強地活化表皮中的β-葡糖腦苷酯酶，並在此基礎上完成了本發明。
即本發明涉及下述通式(1)以及通式(2)所示的半乳糖苷神經醯胺類似體、使用這些類似體的β-葡糖腦苷酯酶活化劑、皮膚外用藥以及β-葡糖腦苷酯酶的活化方法。
(式中，X、Y為S或者O，R1、R2為碳數9～35的烷基或烯基。R3為碳數2～30的烷基或烯基)。


圖1是表示表皮細胞的β-葡糖腦苷酯酶活化能測定試驗(試驗例1)結果的圖。
圖2是在因UVB所形成的粗糙皮膚上塗敷實施例4的化合物的效果(試驗例2的結果)圖。
圖3是在因UVB所形成的粗糙皮膚上塗敷實施例4的化合物的效果(試驗例2的結果)圖。
具體實施例方式
本發明中所用的半乳糖苷神經醯胺類似體，可用上述通式(1)或(2)表示。X、Y為硫原子或者氧原子，從效果上來說優選的是硫原子。R1以及R2的碳數為9～35，優選的是14～22，更為優選的是16～20。R3的碳數為2～30，優選的是14～22，最為優選的是6～14。另外R1、R2、R3可以是飽和，也可以是不飽和的。具體可列舉由下述化學式(3)～(6)所示的化合物。
利用已知的醯胺合成方法可以容易地製得這些化合物。下面簡單說明這些合成方法。如具有兩個烷基鏈的通式(2)所示的化合物，可以在已對胺、羧酸部分實施保護的絲氨酸或者半胱氨酸上，通過葡糖化反應引入半乳糖之後，經過氨基脫保護以及縮聚反應引入一個烷基，接著除去羧酸的保護基，在與三氯化磷反應形成酸氯化物之後，再與伯胺進行反應製得。另外也可以利用同樣的方法製得具有單鏈的通式(1)所示的化合物。
作為改善粗糙皮膚的有效成分，本發明的β-葡糖腦苷酯酶活化劑，為含有一種或者兩種以上上述通式(1)或者(2)所示半乳糖苷神經醯胺類似體的組合物。
本發明中的β-葡糖腦苷酯酶活化劑、皮膚外用藥，可以採用如軟膏、洗劑、乳液、奶液、糊劑、包劑(pack)、噴霧劑、泡沫、顆粒、粉末、凝膠等種種劑形。另外，本發明的皮膚外用藥，是以包括頭皮在內的身體所有皮膚作為對象的，也包括沐浴劑。對基材並無特別限定，可以使用一般的外用基質。另外最終可以製成化妝品、藥品、外用醫藥等形態。
半乳糖苷神經醯胺類似體在β-葡糖腦苷酯酶活化劑、皮膚外用藥中的配合量，以組合物總量為基準，優選的是佔總量的0.005～5.0重量％，更為優選的是佔總量的0.01～3.0重量％。在配合量不足0.005重量％時，不可能很好地達到本發明的效果，另一方面，即使超過5.0重量％也未必能獲得與其增加量相應的更好的效果。
實施例下面利用實施例進行更為詳細的說明。但本發明並不僅僅限於如下實施例。
實施例1N-[2-β-D-吡喃半乳糖基硫代-1-(十四基氨基甲醯基)乙基]十八醯胺[通式(5)的化合物]的製備(1)將300mg的1，2，3，4，6-五-O-乙醯基-β-D-半乳糖吡喃糖苷以及430mg的2-(苄氧基羰基胺基)-3-巰基丙酸甲酯溶解在4mL的氯仿中，冷卻至0℃後，加入1.3mL三氟化硼二乙醚配位化合物，在室溫下攪拌20小時。在反應混合液中加入氯仿，利用飽和碳酸氫鈉水溶液以及飽和食鹽水洗淨。利用分別取出薄層色譜法(顯譜溶劑；正己烷∶醋酸乙酯＝3∶2)精製濾渣，得到370mg的2-(苄氧基羰基胺)-3-(2，3，4，6-四-O-乙醯基-β-D-吡喃半乳糖基硫代)丙酸甲酯。
(2)將370mg 2-(苄氧基羰基胺基)-3-(2，3，4，6-四-O-乙醯基-β-D-吡喃半乳糖基硫代)丙酸甲酯溶解在5mL 1，4-二噁烷與5mL甲醇的混合溶劑中，加入200mg的20％氫氧化鈀-碳，在氫氣流下攪拌18小時。利用氟鎂石(セライト)TM過濾不溶物之後，減壓蒸發濾液。將濾渣溶解在6mL DMF中，加入硬脂酸193mg、EDC[；1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亞胺]180mg、HOBt(；1-羥基苯並三唑)140mg，並在室溫下攪拌一晚上。利用醋酸乙酯萃取反應混合液，然後利用2mol/L的鹽酸和飽和碳酸氫鈉水溶液進行洗滌，再利用無水硫酸鎂乾燥醋酸乙酯層，接著在減壓下蒸餾溶劑。最後利用中壓柱層析法精製濾渣(洗提溶劑；正己烷∶醋酸乙酯＝4∶1)，得到313mg的2-(十八醯胺基)-3-(2，3，4，6-四-O-乙醯基-β-D-吡喃半乳糖基硫代)丙酸甲酯。
(3)將313mg的2-(十八醯胺基)-3-(2，3，4，6-四-O-乙醯基-β-D-吡喃半乳糖基硫代)丙酸甲酯溶解在6mL的吡啶中，加入515mg的碘化鋰之後，在氮氣環境下加熱回流4小時。利用醋酸乙酯萃取反應混合液，並用2mol/L鹽酸洗淨之後，用無水硫酸鎂乾燥醋酸乙酯層，接著在減壓下蒸餾溶劑。最後利用中壓柱層析法(洗提溶劑；氯仿∶甲醇＝15∶1)精製得到的濾渣，得到了247mg的2-(十八醯胺基)-3-(2，3，4，6-四-O-乙醯基-β-D-吡喃半乳糖基硫代)丙酸。
(4)將247mg的2-(十八醯胺基)-3-(2，3，4，6-四-O-乙醯基-β-D-吡喃半乳糖基硫代)丙酸溶解在4mL的DMF中，加入80mg的正十四胺、100mgEDC、80mg的HOBt，在室溫下攪拌17小時。利用醋酸乙酯萃取反應混合液，用2mol/L的鹽酸和飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌之後，利用無水硫酸鎂乾燥醋酸乙酯層，接著在減壓下蒸餾溶劑。最後利用中壓柱層析法(洗提溶劑；正己烷∶醋酸乙酯＝3∶1)精製得到的濾渣，得到278mg的N-[1-(十四基氨基甲醯基)-2-(2，3，4，6-四-O-β-D-吡喃半乳糖基硫代)乙基]十八醯胺。
(5)將278mg的N-[1-(十四基氨基甲醯基)-2-(2，3，4，6-四-O-β-D-吡喃半乳糖基硫代)乙基]十八醯胺溶解在5mL THF和5mL甲醇的混合溶劑中，加入催化劑量的28％甲醇鈉的甲醇溶液，在室溫下攪拌1小時。反應混合液利用陽離子交換樹脂(ダウエツクスTM50-X8)進行中和，之後過濾樹脂，減壓蒸發濾液。最後利用甲醇使得到的濾渣結晶化，從而得到202mg的N-[2-β-D-吡喃半乳糖基硫代-1-(十四基氨基甲醯基)乙基]十八醯胺的白色結晶。
NMR(DMSO-d6)δ0.86(t，3H，J＝5.9Hz)，1.24(s，46H)，1.35-1.55(m，4H)，2.15-2.50(m，2H)，3.71(bs，1H)，4.24(dt，1H)，7.71(bt，1H)，7.92(d，1H，J＝7.9Hz)。
TOF-MSm/z 768(M+Na)+，784(M+K)+。
元素分析值(作為C41H80N2O7S·1/10H2O)計算值(％)C，65.93；H，10.82；N，3.75；S，4.29實測值(％)C，65.67；H，10.82；N，3.68；S，4.29。
實施例2N-[2-(β-D-吡喃半乳糖基氧代)乙基]十八醯胺[通式(4)的化合物]的製備(1)將1.8g的1，2，3，4，6-五-O-乙醯基-β-D-半乳糖吡喃糖苷以及1.2g的2-(苄氧基羰基胺基)乙醇溶解在10mL的1，2-二氯乙烷中，冷卻至0℃後，加入3.6mL三氟化硼二乙醚配位化合物，在室溫下攪拌17小時。進一步在反應混合液中加入氯仿，用飽和碳酸氫鈉水溶液以及飽和食鹽水洗淨。利用矽膠柱層析法(洗提溶劑正己烷∶醋酸乙酯＝3∶1)精製濾渣，得到1.3g的2-(2，3，4，6-O-四-苯甲醯基-β-D-吡喃半乳糖基氧代)乙基氨基甲酸苄酯。
(2)將250mg的2-(2，3，4，6-O-四-苯甲醯基-β-D-吡喃半乳糖基氧代)乙基氨基甲酸苄酯溶解在3mL1，4-二噁烷與3mL甲醇的混合溶劑中，加入170mg的20％的氫氧化鈀-碳，在氫氣流下攪拌18小時。利用氟鎂石TM過濾不溶物之後，減壓濃縮濾液。將濾渣溶解在5mL DMF中，加入123mg硬脂酸、90mgEDC、75mg的HOBt，在室溫下攪拌一晚上。利用醋酸乙酯萃取反應混合液，並用2mol/L的鹽酸與飽和碳酸氫鈉水溶液進行洗淨之後，利用無水硫酸鎂乾燥醋酸乙酯層，接著在減壓下蒸餾溶劑。最後利用矽膠柱層析法(洗提溶劑；正己烷∶醋酸乙酯＝1∶1)精製得到的濾渣，得到103mg的N-[2-(2，3，4，6-四-O-苯甲醯基-β-D-吡喃半乳糖基氧代)乙基]十八醯胺。
(3)將103mg的N-[2-(2，3，4，6-四-O-苯甲醯基-β-D-吡喃半乳糖基氧代)乙基]十八醯胺溶解在2mL 1，4-二噁烷與2mL甲醇的混合溶劑中，加入催化劑量的28％甲醇鈉的甲醇溶液，在室溫下攪拌4小時。利用陽離子交換樹脂(ダウエツクスTM50-X8)中和反應混合液之後，過濾樹脂，減壓濃縮濾液。最後利用甲醇使得到的濾渣結晶化，從而得到59mg的N-[2-(β-D-吡喃半乳糖基氧代)乙基]十八醯胺的白色結晶。
NMR(DMSO-d6)δ0.84(t，3H，J＝6.4Hz)，1.26(s，28H)，1.45-1.50(m，2H)，2.04(t，2H，J＝7.5Hz)，3.40-3.50(m，3H)，3.61(bs，1H)，3.68(dt，1H，J＝5.8，10.2Hz)，4.05(d，1H，J＝6.7Hz)，4.32，4.56，4.67，4.81(4bs，4H)，7.72(t，1H，J＝5.6Hz)。
TOF-MSm/z 512(M+Na)+，528(M+K)+，元素分析值(作為C26H51NO7·1/5H2O)計算值(％)C，63.31；H，10.50；N，2.84實測值(％)C，63.14；H，10.22；N，2.86實施例3N-[2-(β-D-吡喃半乳糖基硫代)乙基]十八醯胺[通式(3)的化合物]的製備(1)將1.0g的2-(2，3，4，6-四-O-苯甲醯基-β-D-吡喃半乳糖基硫代)乙基氨基甲酸苄酯溶解在10mL的甲醇與10mL的1，4-二噁烷的混合溶劑中，加入1g氫氧化鈀，在氫氣流下攪拌6小時。利用氟鎂石TM過濾不溶物之後，減壓濃縮濾液。將濾渣溶解在10mLDMF中，加入432mg硬脂酸、364mgEDC、257mg的HOBt，在室溫下攪拌一晚上。利用氯仿稀釋反應混合液，並用2mol/L的鹽酸和飽和碳酸氫鈉水溶液進行洗淨之後，利用無水硫酸鎂乾燥氯仿層，接著在減壓下餾去溶劑。最後利用矽膠柱層析法精製得到的濾渣(洗提溶劑；正己烷∶醋酸乙酯＝3∶1)，得到442mg的N-[2-(2，3，4，6-四-O-苯甲醯基-β-D-吡喃半乳糖基硫代)乙基]十八醯胺。
(2)將440mg的N-[2-(2，3，4，6-四-O-苯甲醯基-β-D-吡喃半乳糖基硫代)乙基]十八醯胺溶解在10mL二噁烷與15mL甲醇的混合溶劑中，加入催化劑量的28％甲醇鈉的甲醇溶液，在室溫下攪拌2小時。利用陽離子交換樹脂(ダウエツクスTM50-X8)中和反應混合液之後，過濾樹脂，減壓濃縮濾液。最後利用甲醇使得到的濾渣結晶化，從而得到209mg的N-[2-(β-D-吡喃半乳糖基硫代)乙基]十八醯胺的白色結晶。
NMR(DMSO-d6)δ0.85(t，3H，J＝6.6Hz)，1.26(s，30H)，1.45-1.50(m，2H)，2.00-2.10(t，2H，J＝7.2Hz)，2.55-2.70(m，2H)，3.20-3.25(m，2H)，3.30-3.40(m，2H)，3.45-3.50(m，2H)，3.68(bs，1H)，4.20(d，1H，J＝9.0Hz)，4.37(d，1H，J＝4.8Hz)，4.55(d，1H，J＝5.4Hz)，4.76(d，1H，J＝5.4Hz)，4.92(d，1H，J＝5.4Hz)，7.84(bt，1H)。
TOF-MSm/z 528(M+Na)+，544(M+K)+。
元素分析值(作為C26H51NO6S)計算值(％)C，61.75；H，10.16；N，2.77；S，6.34實測值(％)C，61.65；H，10.10；N，2.77；S，6.35實施例4N-[2-(β-D-吡喃半乳糖基氧代)-1-(己基氨基甲醯基)乙基]十八醯胺[通式(6)的化合物]的製備
(1)將2.4g的2-(2，3，4，6-四-O-苯甲醯基-β-D-吡喃半乳糖基硫代)乙基氨基甲酸苄酯以及1g的3-羥基-2-(十八醯胺基)丙酸甲酯溶解在35mL的氯仿中，冷卻至0℃後，加入1.4g的N-一碘代琥珀酸亞胺與0.13mL的三氟甲磺酸，在室溫下攪拌3小時。接著在反應液中加入氯仿，利用飽和碳酸氫鈉水溶液以及10％的硫代硫酸鈉水溶液洗淨。用無水硫酸鎂乾燥氯仿層之後，過濾無水硫酸鎂，減壓濃縮濾液。最後利用矽膠柱層析法精製得到的濾渣(洗提溶劑；正己烷∶醋酸乙酯＝3∶1)，得到1.4g的2-(十八醯胺基)-3-(2，3，4，6-四-O-苯甲醯基-β-D-吡喃半乳糖基氧代)丙酸甲酯。
(2)將1.4g的2-(十八醯胺基)-3-(2，3，4，6-四-O-苯甲醯基-β-D-吡喃半乳糖基氧代)丙酸甲酯溶解在26mL的吡啶中，加入1.7g的碘化鋰之後，在氮氣環境下加熱回流4小時。在反應混合液中加入氯仿，利用2mol/L的鹽酸洗淨，用無水硫酸鎂乾燥氯仿層，接著減壓餾去溶劑。最後利用矽膠柱層析法精製得到的濾渣(洗提溶劑；氯仿∶甲醇＝60∶1)，從而得到940mg的2-(十八醯胺基)-3-(2，3，4，6-四-O-苯甲醯基-β-D-吡喃半乳糖基氧代)丙酸。
(3)將940mg的2-(十八醯胺基)-3-(2，3，4，6-四-O-苯甲醯基-β-D-吡喃半乳糖基氧代)丙酸溶解在10mL的DMF中，加入120mL的正己胺、285mg的EDC、201mg的HOBt，在室溫下攪拌4小時。反應混合液中加入氯仿，利用2mol/L的鹽酸以及飽和碳酸氫鈉水溶液洗淨之後，利用無水硫酸鎂乾燥氯仿層，接著在減壓下餾去溶劑。最後利用矽膠柱層析法精製得到的濾渣(洗提溶劑；正己烷∶醋酸乙酯＝3∶1)，得到295mg的N-[1-(己基氨基甲醯基)-2-(2，3，4，6-四-O-苯甲醯基-β-D-吡喃半乳糖基氧代)乙基]十八醯胺。
(4)將290mg的N-[1-(己基氨基甲醯基)-2-(2，3，4，6-四-O-苯甲醯基-β-D-吡喃半乳糖基氧代)乙基]十八醯胺溶解在5mL的1，4-二噁烷與5mL的甲醇的混合溶劑中，加入催化劑量的28％甲醇鈉的甲醇溶液，在室溫下攪拌3小時。利用陽離子交換樹脂(ダウエツクスTM50-X8)中和反應混合液之後，過濾樹脂，減壓濃縮濾液。最後利用蒸餾水使得到的濾渣結晶化，從而得到144mg的N-[2-(β-D-吡喃半乳糖基氧代)-1-(己基氨基甲醯基)乙基]十八醯胺的白色結晶。
NMR(DMSO-d6)δ0.85(t，6H，J＝6.0Hz)，1.24(s，34H)，1.30-1.40(m，2H)，1.40-1.50(m，2H)，2.10-2.15(m，2H)，3.00-3.10(m，2H)，3.34(t，1H，J＝6.6Hz)，3.45-3.55(m，3H)，3.62(bs，1H)，3.89(dd，1H，J＝4.8，10.2Hz)，4.07(d，1H，J＝7.2Hz)，4.35(d，1H，J＝4.8Hz)，4.40(dt，1H，J＝5.4，7.8Hz)，4.55(t，1H，J＝5.4Hz)，4.69(d，1H，J＝5.4Hz)，4.85(d，1H，J＝3.6Hz)，7.67(t，1H，J＝5.4Hz)，7.85(d，1H，J＝8.4Hz)。
TOF-MSm/z 639(M+Na)+，655(M+K)+。
元素分析值(作為C33H64N2O8S)計算值(％)C，64.25；H，10.46；N，4.54實測值(％)C，64.02；H，10.32；N，4.55試驗例1表皮細胞的β-葡糖腦苷酯酶的活化能測定試驗(1)方法(a)培養表皮細胞使用市售的正常人表皮角質細胞(EpidercellTMクラボウ社制)。
(b)培養細胞用培養基培養基使用的是Medium154S(クラボウ社制)，另外作為增長因子使用添加到其中的添加劑HKGS(クラボウ社制)。
(c)配製Hepes緩衝液將7.15g Hepes、1.8g葡萄糖、0.22g的氯化鉀、7.7g的氯化鈉、以及0.27g的磷酸氫二鈉·12水合物，溶解在純水中，利用1mol/L的氫氧化鈉水溶液調整pH值至7.4後，標定成1L。
(d)培養細胞利用Mediuml54S將正常人表皮細胞的細胞數調整為2.5×104個/mL，在60mm塗有膠原的板上(フアルコン社制)以4mL為單位進行播種，然後在95％空氣(V/V)-5％二氧化碳(V/V)的環境中，37℃下靜置培養4天。
吸去培養液的上清液，將加入上述實施例1、2、4中製備的各藥劑的200μmol/L乙醇溶液而把濃度至調製5μmol/L的Mediuml54S往各盤中各加入4mL。然後將該盤在95％空氣(V/V)-5％二氧化碳(V/V)的環境中，37℃下靜置培養4天。另外將不含半乳糖苷神經醯胺類似體的乙醇作為比較例。
(e)萃取粗酶液吸去培養液上清液，利用1mL的磷酸緩衝生理食鹽水洗滌2次後，利用細胞刮板(cell scraper)(住友ベ一クライト社制)將細胞從盤上取下來。然後加入0.1mmol/L含氟化苯基甲基磺醯的磷酸緩衝生理食鹽水，利用超音波處理裝置(ンニツクスアンドマテリアルズ社制)進行粉碎，離心回收上層粗酶液。
(f)測定β-葡糖腦苷酯酶的活性利用ミエル與フアンデルフルク方法(British Journal of Dermatology，95卷，271-274頁，1976年)進行測定。即在50μL的粗酶液中，加入500μL的100mmol/L檸檬酸-200mmol/L磷酸緩衝液(pH5.6)、和500μL的10mmol/L牛磺膽酸-100mmol/L檸檬酸緩衝液(pH5.6)，37℃下加熱10分鐘。接著加入50μL的0.5mmol/L 4-甲基ウンベリフエル-β-D葡糖苷(シグマ社制)，在37℃下加熱60分鐘。然後加入200mmol/L碳酸鈉-碳酸氫鈉緩衝液(pH10.5)，在激發波長360nm、吸收波長450nm下測定其螢光強度。以由4-甲基傘形酮標準品(シグマ社制)螢光強度製作的標準曲線為基準計算酶的活性。
(2)結果如圖1所示，N-[2-(β-D-吡喃半乳糖基氧代)乙基]十八醯胺[實施例2；通式(4)的化合物]、N-[2-β-D-吡喃半乳糖基硫代-1-(十四基氨基甲醯基)乙基]十八醯胺[實施例1；通式(5)的化合物]、N-[2-(β-D-吡喃半乳糖基氧代)-1-(己基氨基甲醯基)乙基]十八醯胺[實施例4；通式(6)的化合物]中，全都可以看出β-葡糖腦苷酯酶活化效果。
試驗例2 對老鼠粗糙皮膚的回覆試驗(1)方法(a)試驗動物利用一組5隻的試驗開始時9周大的無毛老鼠。
(b)測定裝置以及條件經皮膚的水分蒸發量(以下簡稱為TEWL)，按如下方法使用連續出汗測定裝置自記水位計(hydrograph)AMU-100(ケイアンドエス社制)進行測定。將1平方釐米的囊狀器(カプセル)密接在皮膚上，在囊狀器內導入氮氣(300mL/min)，測定輸入囊狀器前氮氣與從囊狀器中回收的氮氣中的水蒸氣量。利用該值差計算每一分鐘從每一平方釐米皮膚所蒸發出來的水分量(mg/cm2)作為TEWL。
(c)試樣與試驗方法使用基質(丙二醇∶乙醇＝3∶7)將實施例4的化合物[通式(6)的化合物]調製為0.1％、1.0％的濃度。利用0.05mL調製後的試樣，在事先測定了TEWL的無毛老鼠的背部皮膚(直徑2.5cm)上一天一次、一周5次連續塗用4周。然後，預塗布的最後塗布後的第三天利用B波長紫外線(UVB)以0.15J/cm2照射一次。測定在照射UVB前、照射後的第3以及4天的TEWL，根據其與塗用基質前TEWL的比進行比較評價。
(2)結果如圖2以及圖3所示，N-[2-(β-D-吡喃半乳糖基氧代)-1-(己基氨基甲醯基)乙基]十八醯胺[實施例4的化合物；通式(6)的化合物]，與只用基質時相比時，在1.0％濃度下以p＜0.01(Dunnett多重測定)的臨界係數表現出其TEWL值的明顯的減少，由此改善了粗糙皮膚。
實施例5各取10g實施例1～4中得到的半乳糖苷神經醯胺類似體的10％乙醇溶液，用80℃的水浴加熱，然後加入經混合的下述成分，得到四種100g洗劑。
乳酸 0.3g
檸檬酸鈉 0.1g甘油 2.0g防腐劑、香料以及表面活性劑適量純水 總量為100g時的餘量產業上的利用可能性如上所述，本發明提供了一種簡便而且容易合成的表皮β-葡糖腦苷酯酶的活化劑。另外利用本發明可以預防和防禦粗糙皮膚並改善各種皮膚病。
權利要求
1.一種半乳糖苷神經醯胺類似體，用下記通式(1)或者(2)表示， 其中，X、Y為S或者O，R1、R2為碳數9～35的烷基或烯基，R3為碳數2～30的烷基或烯基。
2.一種半乳糖苷神經醯胺類似體，用下記通式(3)表示。
3.一種半乳糖苷神經醯胺類似體，用下記通式(4)表示。
4.一種半乳糖苷神經醯胺類似體，用下記通式(5)表示。
5.一種半乳糖苷神經醯胺類似體，用下記通式(6)表示。
6.含有權利要求1所述的半乳糖苷神經醯胺類似體的皮膚外用藥。
7.以權利要求1所述的半乳糖苷神經醯胺類似體為有效成分的β-葡糖腦苷酯酶活化劑。
8.如權利要求6所述的皮膚外用藥，其中含有0.005～5.0重量％的通式(1)或(2)所示半乳糖苷神經醯胺類似體。
9.如權利要求6所述的皮膚外用藥，其中含有0.01～3.0重量％的通式(1)或(2)所示半乳糖苷神經醯胺。
10.如權利要求7所述的β-葡糖腦苷酯酶活化劑，其中含有0.005～5.0重量％的通式(1)或(2)所示半乳糖苷神經醯胺類似體。
11.如權利要求7所述的β-葡糖腦苷酯酶活化劑，其中含有0.01～3.0重量％的通式(1)或(2)所示半乳糖苷神經醯胺類似體。
12.一種β-葡糖腦苷酯酶的活化方法，其特徵在於將通式(1)或(2)所示的半乳糖苷神經醯胺類似體適用於皮膚，並活化β-葡糖腦苷酯酶。
13.如權利要求12所述的β-葡糖腦苷酯酶活化方法，其特徵在於使用含0.005～5.0重量％的通式(1)或(2)所示半乳糖苷神經醯胺類似體的組合物。
14.如權利要求12所述的β-葡糖腦苷酯酶活化方法，其特徵在於使用含0.01～3.0重量％的通式(1)或(2)所示半乳糖苷神經醯胺類似體的組合物。
15.一種改善粗糙皮膚的方法，是通過活化β-葡糖腦苷酯酶而改善粗糙皮膚的方法，其特徵在於將通式(1)或(2)所示的半乳糖苷神經醯胺類似體適用於皮膚。
全文摘要
本發明涉及如下式(1)或者(2)所示的半乳糖苷神經醯胺類似體。(式中，X、Y為S或者O，R
文檔編號C07H15/04GK1522263SQ02813148
公開日2004年8月18日 申請日期2002年6月27日 優先權日2001年6月28日
發明者植松季榮, 中島史雄, 吉田雅宏, 福永恭子, 原真理子, 井上紳太郎, 西村紳一郎, 一郎, 太郎, 子, 宏, 雄 申請人:鍾紡株式會社