疏水蛋白作為相穩定劑的用途的製作方法

2023-07-19 05:47:36 2

專利名稱：：疏水蛋白作為相穩定劑的用途的製作方法疏水蛋白作為相穩定劑的用途本發明涉及疏水蛋白和/或其衍生物之一用於在包含至少兩種液體相，特別是油和水的組合物中穩定相的用途。疏水蛋白是約100到150個胺基酸的小蛋白質，其是絲狀真菌，例如裂褶菌(Schizophyllmncommune)特有的。它們通常具有8個半胱氨酸單位。疏水蛋白都對界面具有顯著的親和力並且因此適於塗布表面，例如，以便通過形成兩親性膜改變界面的性質。例如，可以通過疏水蛋白塗布特氟隆以得到親水表面。可以從天然來源分離疏水蛋白。此外，疏水蛋白和它們的衍生物的生產方法是已知的。例如，德國專利申請DE102005007480乂>開了疏水蛋白和其^t生物的生產方法。現有技術已經提出了疏水蛋白對於多種應用的用途。WO96/41882提出使用疏水蛋白作為乳化劑、增稠劑、表面活性物質，用於使疏7K表面親水、提高親水基質的防水性，產生水包油乳劑或者油包水乳劑。還提出了藥學應用，如生產軟骨劑或者乳骨，和美容應用，如護膚或者生產洗髮劑或者染髮液。WO96/41882還描述了包含疏水蛋白的組合物，特別是用於藥物應用的組合物。EP-A1252516公開了用包含疏水蛋白的溶液在30到80。C的溫度下塗布窗戶、隱形眼鏡、生物傳感器、醫學裝置、用於進行測試或者貯存的容器、船體、固體顆粒或者交通工具的框架或者底盤。WO03/53383描述了疏水蛋白在美容應用中用於處理角蛋白物質的用途。WO03/10331公開了疏水蛋白具有表面活性性質。例如，公開了疏水蛋白塗布的傳感器，例如測試電極，其非共價結合其他物質，例如，電活性200680016796.3說明書第2/25頁物質、抗體或者酶。WO2004/000880給出了用疏水蛋白或者疏水蛋白樣物質塗布表面。WO01/74864涉及疏水蛋白樣蛋白質，也陳述它們可以用於穩定^lt體和乳劑。蛋白質用於相分離的用途原則上也是已知的。例如，EP-A05016962描述了使用蛋白質改進例如油/水或者燃料/水混合物的相分離。本領域技術人員公知取決於使用濃度和周圍的介質，兩親性分子對相界面可以具有穩定或者去穩定作用。GB195,876公開了使用膠體破裂油包水乳劑的方法。提到的膠體是例如蛋白質如明膠、酪蛋白、白蛋白或者多糖，如阿拉伯膠或西黃蓍膠。JP-A11-169177描述了使用具有脂肪酶活性的蛋白質破裂乳劑的用途。WO01/60916描述了至少一種水溶性蛋白質、至少一種水溶性多糖和至少一種水溶性聚合物，例如，聚氧乙烯的無表面活性劑的混合物的用途，關於多種用途，也包括用於去乳化原油。然而，所引用的文獻沒有一種公開了使用疏水蛋白防止再乳化的用途。使用蛋白質具有普遍的優點，它們是天然存在的物質，可以生物降解，所以不導致環境的持久汙染。在許多工業規模的應用中，例如，在原油-水乳液的分離中，一個重要的因素是非常快速相分離，另一種因素是避免或者防止相的再乳化。本發明的一個目的是提供通過使用蛋白質穩定相的改進方法。根據本發明，通過在包含至少兩種液相，特別是油和水的組合物中使用至少一種疏水蛋白實現了該目的。根據本發明，疏水蛋白原則上可以以任何量使用，條件是確保提高包含至少兩種液相的組合物中的相穩定。在本發明的上下文中，"相穩定的提高"理解為指對於向混合物中加入物質的情況，兩種液相的再乳化比不加入該物質的相同混合物中進行的更慢，或者加入該物質防止兩種液相的再乳化。在本發明的上下文中，還將疏水蛋白理解為指其衍生物或者經修飾的疏水蛋白。經修飾或衍生的疏水蛋白可以例如是疏水蛋白融合蛋白或者M酸序列與疏水蛋白的序列有至少60%,例如至少70%,尤其至少80%，更優選至少90%，特別優選至少95%同一性的蛋白質，並且其還在50%程度上，例如60%程度上，尤其70%程度上，更優選80%程度上滿足疏水蛋白的生物學性質，特別是這樣的性質通過用這些蛋白質塗布改變表面性質使得用所迷蛋白質塗布玻璃表面前後水滴的接觸角增加至少20°,優選至少25°，尤其至少30°。已經令人驚奇的發現相分離完成後，疏水蛋白或者其衍生物減小或者防止新形成乳液。當長期存在兩相或者將防止新乳液的發生時，也是特別有利的。在該上下文中，即使少量的疏水蛋白也是非常有效的。對於疏水蛋白的定義，其對於結構特異性是關鍵的並且對於疏水蛋白的序列特異性不是關鍵的。天然疏水蛋白的M酸序列非常多樣化，但是它們都具有8個保守半胱氨酸殘基的高度特徵性模式。這些殘基形成四個分子內二硫鍵。N末端和C末端在相對寬範圍內可變。這裡可能通過本領域技術人員已知的分子生物學技術加到具有10到500個胺基酸長度的融合配偶體蛋白上。此外，在本發明上下文中將疏水蛋白和其衍生物理解為指具有相似結構和功能等價性的蛋白質。在本發明的上下文中，術語"疏水蛋白"將在下文中理解為指結構通式(I)的多肽Xn-C，-Xi-50-C2-Xo-5-C3-Xi-ioo-C4-Xi-ioO-C5-Xi.50國C6國Xo-5-C7-Xi-5(rC8國Xm(I)其中X可以是20種天然存在的胺基酸(Phe，Leu，Ser，Tyr，Cys，Trp，Pro,His，Gln，Arg，Ile，Met，Thr，Asn，Lys，Val,Ala，Asp，Glu,Gly)的4壬一種。在該式中，X在每種情況下可以是相同或不同的。X旁的下標都是胺基酸數目，c是半胱氨酸、丙氨酸、絲氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸或者蘇氨酸，其中用C表示的至少四個殘基是半胱氨酸，並且下標n和m各自獨立地是0到500,優選15到300之間的自然數。式(I)的多肽的特徵還為這樣的性質，在室溫下，塗布玻璃表面後，在每種情況下與同等大小的水滴和未塗布的玻璃表面的接觸角相比，它們引起水的接觸角增加至少20°，優選至少25。，更優選30°。用d到CS表示的M酸優選為半胱氨酸；然而，它們還可以用具有相似空間填充的其他胺基酸替換，優選用丙氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、甲疏氨酸或者甘氨酸替換。然而，d到<:8位的至少4個，優選至少5個，更優選至少6個，尤其至少7個位置應該由半胱氨酸組成。在本發明蛋白質中，半胱氨酸可以以還原的形式存在或者相互形成二石危橋。尤其優選分子內形成C-C橋，特別具有至少一個分子內二硫橋，優選2個，更優選3個，最優選4個分子內二硫橋。對於上述半胱氨酸用具有相似空間填充的胺基酸交換的情況，此類C位置有利地成對交換，其可以相互形成分子內二石克橋。如果在稱作X的位置中也使用半胱氨酸、絲氨酸、丙氨酸、甘氨酸、曱硫氨酸或者蘇氨酸，那麼可以對應地改變通式中各個C位置的編號。優選使用通式(II)的疏水蛋白formulaseeoriginaldocumentpage7(II)進行本發明，其中當X,C和X和C旁的下標每個如上定義時，下標n和m每個是0到300之間的數字，並且該蛋白質額外特徵是上述接觸角的改變，和此外至少6個用C表示的殘基是半胱氨酸。更優選地，所有C殘基是半胱氨酸。尤其優選使用通式(III)的疏水蛋白formulaseeoriginaldocumentpage7(III)其中當X，C和X旁的下標每個如上定義時，下標n和m每個是O到200之間的數字，並且該蛋白質額外特徵是上述接觸角的改變，和至少6個用C表示的殘基是半胱氨酸。更優選地，所有C殘基是半胱氨酸。Xn和Xm殘基可以是天然地也結合到疏水蛋白的肽序列。然而，一個或兩個殘基也可以是天然不結合疏水蛋白的肽序列。這理解為指那些Xn和/或Xm殘基，其中在疏水蛋白中天然存在的肽序列通過在疏水蛋白中天然不存在的肽序列加長。如果Xn和/或Xm是天然不結合到疏水蛋白的肽序列，那麼此類序列長為通常至少20個，優選至少35個，更優選至少50個，最優選至少100個胺基酸。此類不天然結合到疏水蛋白的殘基在下文中也稱作融合配偶體。這意在表達蛋白質可以由至少一個疏水蛋白部分和在自然中不以該形式一起發生的融合配偶體部分組成。融合配偶體部分可以選自多種蛋白質。還可能的是多個融合配偶體將結合到一個疏水部分，例如，在疏水蛋白部分上的氨基末端(Xn)和羧基末端(Xm)。然而，還可能例如兩個融合配偶體將結合到本發明蛋白質的一個位置(Xn或Xm)。尤其適宜的融合配偶體是在微生物，特別在大腸桿菌(E.COli)或者枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)中天然存在的蛋白質。此類融合配偶體的實例;Uf列yaad(SEQIDNO:15和16)、yaae(SEQIDNO:17和18)，和石充氧還蛋白。還非常適宜的是這些序列的片段或衍生物，其包含所提到序列的僅僅一些，例如，70到99%，優選5到50%，更優選10到40%，或者其中與所提到的序列相比個別胺基酸或者核苷酸已經改變，在該情況中百分數各自^於狄酸數目。在進一步優選的實施方案中，融合疏水蛋白，以及作為Xn和Xm基團的融合配偶體，也具有所稱作的親和結構域(親和標記/親和尾)。以原理上已知的方式，這包含錨定基團，其可以與特定互補基團相互作用並且可以用於蛋白質的更容易的操作和純化。此類親和結構域的實例包含(His)k、(Arg)k、(Asp)k、(Phe)k或(Cys)k基團，其中k通常是從1到10的自然數。它可以優選是(His)k基團，其中k為4到6。序列中修飾，例如，通過糖基化、乙醯化或者通過化學交聯，例如，用戊二醛化學交聯。根據本發明使用的疏水蛋白或者其衍生物的一個性質是當用該蛋白質塗布表面時，表面性質改變。可以通過實驗確定表面性質的改變，例如，通過測量用蛋白質塗布表面之前和之後水滴的接觸角，並確定這兩次測量的差異。接觸角測量的進行原則上是本領域技術人員已知的。測量是基於室溫和5nl水滴和使用玻璃板作為基質。在實驗部分給出了測量接觸角的合適方法的實例的確切的實驗條件。在所提到的條件下，在每種情況下與相等大小具有增加接觸角至少20°,優選至少25。，更優選至少30。的性質。用於進行本發明的尤其優選的疏水蛋白是dewA、rodA、hypA、hypB、sc3、basfl、basf2型疏水蛋白，其結構特徵在於下面的序列表。它們也可以僅僅是其部分或者衍生物。還可能的是多個、優選2或者3個相同或者不同結構的疏水蛋白部分相互結合和結合到對應的合適的多肽序列，該多肽序列在自然中不結合疏水蛋白。才艮據本發明還尤其合適的是融合蛋白yaad-Xa-dewA-his(SEQIDNO:20)、yaad-Xa-rodA國his(SEQIDNO:22)或yaad-Xa-basfl-his(SEQIDNO:24)，其多肽序列在括號中指出，和編碼所述多肽序列的核酸序列，特別是根據SEQIDNO:19，21，23的序列。這樣的蛋白質也是尤其優選的實施方案，所述蛋白質通過交換、插入或者缺失至少一個到10個，優選5個胺基酸，更優選5%的所有胺基酸，從SEQIDNO:20，22或24中所示的多肽序列加工而來，並且仍然在至少50%的程度上保留起始蛋白質的生物學性質。蛋白質的生物學性質在本文中理解為指接觸角改變至少20°，其已經描述。尤其適於進4亍本發明的衍生物是從yaad-Xa-dewA-his(SEQIDNO:20)、yaad-Xa-rodA國his(SEQIDNO:22)或yaad-Xa-basfl-his(SEQIDNO:24)通過截短yaad融合配偶體衍生的殘基。代替具有294個胺基酸的完整的yaad融合配偶體(SEQIDNO:16)，可以有利地使用截短的yaad殘基。然而，截短的殘基將包含至少20，更優選至少35個氣基酸。例如，可以4吏用具有20到293，優選25到250,更優選35到150,例如35到100個胺基酸的截短的基團。疏水蛋白和一個或多個融合配偶體之間的切割位點可以用於以非衍生的形式釋放純的疏水蛋白(例如，通過在甲石危氨酸BrCN切割，因子Xa切割，腸激酶切割，凝血酶切割，TEV切割，等等)。還可能從一個融合配偶體，例如，yaad或者yaaed，和甚至不同序列的多個疏水蛋白，如DewA-RodA或者Sc3-DewA，Sc3-RodA連續產生融合蛋白。同樣可能使用疏水蛋白片段(例如，N-或C-末端截短)或者突變蛋白，其具有高達70%同源性。在每種情況下，最佳的構建體都關於特定用途，即將分離的液相來選擇。肽合成方法，例如，通過Merrifield固相合成化學製備。通過合適的方法可以從天然來源分離天然存在的疏水蛋白。參考例如，Wiistenet.al"Eur.JCellBio.63，122-129(1994)或WO96/41882。優選通過遺傳工程方法可以製備融合蛋白，其中編碼融合配偶體的一種核酸序列，特別是DNA序列與編碼疏水蛋白部分的一種核酸序列以這樣的方式組合使得由於組合的核酸序列的基因表達的結果，在宿主生物中產生所希望的蛋白質。此類製備方法例如公開在德國專利申請DE102005007480.4中。用於所提到的製備方法的合適的宿主生物(生產生物)可以是原核生物(包括古細菌)或者真核生物，特別是包括嗜鹽菌和methanococcia的細菌、真菌、昆蟲細胞、植物細胞和哺乳動物細胞，更優選大腸桿菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、巨大芽胞桿菌(Bacillusmegaterium)、米麴黴(Aspergillusoryzea)、構巢麴黴(Aspergillusnidulans)、黑麴黴(Aspergillusniger)、巴斯德畢赤酵母(Pichiapastoris)、假單胞菌(Pseudomonasspec.)、乳桿菌(Lactobacilli)、多形漢遜酵母(Hansenulapolymorpha)、裡氏木黴(Trichodermareesei)、SF9(或相關細胞)，等等。^研究還涉;MJ^建體的用途，所述構建體包含處於調節核酸序列的遺傳控制下的核酸序列，其編碼用於本發明的多肽，和包含至少一個這些表達構建體的載體。使用的構建體優選包含從特定編碼序列的5'上遊的啟動子，和3'下遊的終止子序列，和如果合適，其他常用的調節元件，在每種情況下有效連接到編碼序列。在本發明上下文中，"有效連接"理解為指啟動子、編碼序列、終止子和如果合適，其他調節元件的順序排列，使得每個調節元件可以完成它的如在編碼序列的表達中預期的功能。可有效連接的序列的實例是尋耙序列，和增強子、多聚腺苷酸化信號，等等。其他調節元件包括選擇標記、擴增信號、複製起點，等等。合適的調節序列例長口描述於Goeddel，GeneExpressionTechnology:MethodsinEnzymology185，AcademicPress,SanDiego,CA(1990)。除了這些調節序列外，這些序列的天然調節可以存在於實際的結構基因的上遊，並且如果合適，已經被遺傳修飾以便關閉天然調節和增加所述基因的表達。優選的核酸構建體也有利地包含一個或多個所稱作的"增強子"序列，其功能上連接啟動子，能夠增加核酸序列的表達。還在DNA序列的3，末端，可能插入額外的有利的序列，如其他調節元件或者終止子。核酸可以以一個或多個拷貝存在於構建體中。如果合適，在構建體中還可能存在其他標記，如抗生素抗性或者互補營養缺陷型的基因的其他標記用於構建體的選擇。用於製備的有利的調節序列存在於例如啟動子中，如cos、tac、trp、tet、trp-tet、Ipp、lac、Ipp誦lac、Iaclq曙T7、T5、T3、gal、trc、ara、rhaP(rhaPBAD)SP6、lambda-PR或imlambda-P啟動子，其有利地用於革蘭氏陰性細菌中。其他有利的調節序列存在於例如革蘭氏陽性啟動子amy和SP02和酵母或者真菌啟動子ADC1、MFalpha、AC、P-60、CYC1、GAPDH、TEF、rp28、ADH中。還可能使用合成的啟動子用於調節。為了在宿主生物中表達，將核酸構建體有利地插入到載體，如質粒或者噬菌體中，其能夠在宿主中最佳地表達基因。除了質粒和噬菌體外，還將載體理解為本領域技術人員已知的所有其他載體，如病毒，如SV40、CMV、杆狀病毒和腺病毒、轉座子、IS元件、噬粒、粘粒、和線性或環狀DNA，以及農桿菌系統。這些載體可以在宿主生物中自主複製或者在染色體中複製。合適的質粒為例如，在大腸桿菌中，pLG338、pACYC184、pBR322、pUC18、pUC19、pKC30、pR印4、pHSl、pKK223-3、pDHE19.2、pHS2、pPLc236、pMBL24、pLG200、pUR2卯、pIN-III"3陽Bl、tgtll或pBdCI、在鏈黴菌中，pIJ101、pIJ364、pIJ702或pIJ361,在芽孢桿菌中，pUB110、pC194或pBD214，在棒桿菌中，pSA77或pAJ667、在真菌中，pALSl、pIL2或pBB116，在酵母中，2alpha、pAG-l、YEp6、YEpl3或pEMBLYe23或在植物中，pLGV23、pGHIac+、pBIN19、pAK2004或pDH51。所提到的質粒構成了可能的質粒的一小部分。其他質粒是本領域技術人員已知的並且可以例如從書籍CloningVectors(Eds.PouwelsP.H.等人Elsevier,Amsterdam-NewYork-Oxford,1985，ISBN0444卯4018)4尋到。有利地，用於表達存在的其他基因的核酸構建體還包含用於增強表達的3，-和/或5，-末端調節序列，其取決於所選的宿主生物和基因被選擇用於最佳表達。這些調節序列意在使得能夠控制基因表達和蛋白質表達。取決於宿主生物，這可以指例如僅在誘導後基因表達或過表達，或者它可以立即表達和/或過表達。調節序列或者因子可以優選地積極地影響從而增加所導入的基因的基因表達。從而，通過使用強轉錄信號，如啟動子和/或增強子，可以在轉錄水平上有利地實現調節元件的擴增。此外，還可能通過例如提高mRNA的穩定性增強翻譯。在載體的另一實施方案中，包含核酸構建體或者核酸的栽體還可以有利地以線性DNA的形式被導入微生物中並且通過異源或者同源重組整合到宿主生物的基因組中。該線性DNA可以由線性化的栽體如質粒組成，或者僅僅由核酸構建體或者核酸組成。對於異源基因在生物中的最佳表達，有利地根據該生物中使用的特定"密碼子選擇"改變核酸序列。按照其他已知基因在所述生物中的計算機評估，可以容易地確定"密碼子選擇"。通過合適的啟動子與合適的編碼核苷酸序列和終止子信號或者多聚腺苷酸化信號的融合，可以製備表達盒。為此，使用常規的重組和克隆技術，例:i口見T.Maniatis，E.F.Fritsch和J.Sambrook，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,NY(1989)和T.J.Silhavy，M.L.Berman和L.W.Enquist，ExperimentswithGeneFusions,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,NY(1984)和Ausubel，F.M.等人，CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingAssoc.andWileyInterscience(1987)。為了在合適的宿主生物中表達，有利地將重組核酸構建體或者基因構建體插入到宿主特異性載體中，該載體使得所述基因在宿主中最佳表達。載體是本領域技術人員已知的並且可以例如從"CloningVectors"(PouwelsP.H.等人，編著，Elsevier,Amsterdam-NewYork-Oxford,1985)得到。藉助載體，可能製備重組微生物，其已經例如用至少一種載體轉化並且可以用於生產根據本發明使用的疏水蛋白或者其衍生物。有利地，將上述重組構建體導入合適的宿主系統中並表達。優選使用本領域技術人員熟悉的克隆和轉染方法，例如，共沉澱、原生質體融合、電穿孔、逆轉錄病毒轉染等等，以便引起所提到的核酸在特定表達系統中表達。合適的系統描述於例如CurrentProtocolsinMolecularBiology,F.Ausubel等人，編著，WileyInterscience,NewYork1997或Sambrook等人MolecularCloning:ALaboratoryManual.第二版，ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,1989。還可能製備同源重組的微生物。為此，製備包含至少一部分將使用的基因或者編碼序列的載體，其中如果合適，已經導入至少一個^J^酸缺失、添加或者替代以便改變，例如功能性破壞該序列("敲除"載體)。所導入的序列例如還可以是相關^t生物的同源物或者來自哺乳動物、酵母或者昆蟲來源。用於同源重組的載體可以備選地這樣構造使得對於同源重組的情況，內源基因已經以另一種方式突變或者改變，但是仍然編碼功能蛋白質(例如，可以改變上遊調節區使得內源蛋白質的表達改變)。根據本發明使用的基因的改變的部分在同源重組栽體中。用於同源重組的合適的載體的構建描迷於例如Thomas,K.R.和Capecchi，M.R.(1987)Cell51:503中。原則上，對於此類核酸或者此類核酸構建體，所有原核或者真核生物都可以用作重組宿主生物。有利地，使用的宿主生物是孩i生物，如細菌、真菌或者酵母。有利地，使用革蘭氏陽性或者革蘭氏陰性細菌，優選來自腸桿菌科(Enterobacteriaceae)、假單月包菌科(Pseudomonadaceae)、才艮瘤菌科(Rhizobiaceae)、鏈黴菌科(Streptomycetaceae)或i若卡氏菌科(Nocardiaceae)，更優選埃希氏菌屬(Escherichia)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、鏈黴菌屬(Streptomyces)、諾卡氏菌屬(Nocardia)、伯克霍爾德氏菌屬(Burkholderia)、沙門氏菌屬(Salmonella)、農桿菌屬(Agrobacterium)或紅球菌屬(Rhodococcus)的細菌。用於上述融合蛋白的製備方法中的生物取決於宿主生物，以本領域技術人員已知的方式生長或培養。微生物通常在液體培養基中在0到100。C,優選10到60。C的溫度下用氧氣噴射下生長，該培養基包含碳源(通常為糖的形式)、氮源(通常為有機氮源的形式，如酵母抽提物)，或者鹽，如硫酸銨、微量元素，如鐵、錳和鎂鹽，以及如果合適，維生素。營養物液體的pH可以保持在固定值，即在生長期間受到調節或者不受調節。可以以分批式、半分批式或者連續發酵式實現培養。營養物可以在發酵開始時導入或者半連續或者連續補充。酶可以通過實施例中描述的方法從生物分離或者作為粗提物用於反應。可以通過用於重組製備的方法製備用於本發明的疏水蛋白、或者其功能性的生物活性片段，在該方法中，培養產生多肽的^:生物，如果合適"^秀導蛋白質的表達，並將它們從培養物分離。如果希望，還可以在工業M^上以這種方式生產蛋白質。可以通過已知的方法培養和發酵重組微生物。細菌可以例如在TB或者LB培養基中和20到4(TC的溫度和6到9的pH下繁殖。合適的培養條件特別描述於例如T.Maniatis，E.F.Fritsch和J.Sambrook，MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,NY(1989)。如果蛋白質不分泌到培養基中，那麼將細胞破碎並通過已知的蛋白質分離方法從裂解物得到產物，如果需要，可以通過高頻超聲波、通過高壓、例如，在弗氏壓碎器中，通過滲透裂解，通過去汙劑的作用，裂解酶或者有機溶劑，通過勻漿器或者通過多種所列方法的組合破碎細胞。通過已知的層析方法可以純化蛋白質，所述方法為諸如分子篩層析(凝膠過濾)，如Q瓊脂糖(S印harose)層析、離子交換層析和疏水層析，以及使用其他常規的方法，如超濾、結晶、鹽析、透析和非變性凝膠電泳。合適的方法描迷於例如Cooper,F.G.，BiochemischeArbeitsmethoden生物化學技術j，VerlagWaterdeGruy國ter，Berlin,NewYork或Scopes,R.，ProteinPurification,SpringerVerlag,NewYork,Heidelberg,Berlin。可以尤其有利的是通過對融合疏水蛋白提供特定的錨定基團而容易分離和純化所述融合疏水蛋白，所述錨定基團可以結合到固相支持體，特別是合適的聚合物上對應的互補基團。此類固相支持體可以例如用作層析柱的填料，並且以這種方式一般可以顯著提高分離效率。此類分離方法也稱作親和層析。為了摻入錨定基團，在蛋白質的製備中，可以使用載體系統或者寡核苷酸，其延長cDNA特定的核苷酸序列並且因此編碼改變的蛋白質或者融合蛋白。為了更容易純化，經修飾的蛋白質包含作為錨的所稱作的"標記"，例如稱作六組氨酸錨的修飾。用組氨酸錨修飾的融合疏水蛋白可以層析純化，例如，使用鎳-瓊脂糖(Sepharose)作為柱填料。可以通過合適的洗脫劑，如咪唑溶液從柱子隨後再次洗脫融合疏水蛋白。在筒化的純化方法中，可以免除層析純化。為此，通過合適的方法，例如，首先通過微濾或者通過離心從培養液除去細胞。隨後，通過合適的方法，例如，通過已經在上面提到的方法破碎細胞，可以分離細胞碎片和內含體。所述分離可以有利地通過離心實現。最後，可以原則上以已知的方式破碎內含體以便釋放融合疏水蛋白。這可以例如通過酸、鹼和/或去汙劑進行。具有用於本發明的融合疏水蛋白的內含體可以一般完全溶解，甚至使用0.1MNaOH在約1小時內完全溶解。以這種簡化的方法得到的融合疏水蛋白的純度基於所有蛋白質的量按重量計一般為60到80%。通過所述簡化的純化方法得到的溶液可以不用進一步純化而用於進行該發明。如所述的製備的疏水蛋白可以直接用作融合蛋白，或者脫離和除去融合配偶體後，用作"純的"疏水蛋白。當意在除去融合配偶體時，適當的是在融合蛋白中疏水蛋白部分和融合配偶體部分之間摻入潛在的切割位點(蛋白酶的特定識別位點)。合適的切割位點特別是在疏水蛋白部分和在融合配偶體部分中都不發生的那些肽序列，其可以用生物信息學工具容易地確定。特別合適的實例是曱疏氨酸處的BrCN切割，或者蛋白酶介導的切割與因子Xa切割，腸激酶切割，凝血酶切割，TEV(菸草蝕紋病毒蛋白酶)切割。根據本發明，疏水蛋白或者其衍生物可以用於穩定包含至少兩個液相的組合物中已經分離的相。組合物原則上可以是任何組合物，只要它們具有至少兩種液相。具體地，組合物可以是這樣的組合物，在加入至少一種疏水蛋白或者其衍生物前，組合物以乳液的形式存在，然後在延長的過程(優選大於1分鐘，特別大於5分鐘)中分離成兩相，然後僅僅與疏水蛋白混合。在本發明上下文中，組合物以及至少兩個液相可以原則上還包含其他相。所述至少兩種液相是不同密度的兩種液相，優選油和水，不同密度的兩種有機溶液，燃料和水或者溶劑和水。在本發明上下文中，水性溶液是包含水，任選與其他溶劑組合的溶液。在本發明上下文中，每種液相可以包含其他物質。根據本發明，油優選原油。合適的溶劑是與水形成兩相混合物的所有液體，特別是有機溶劑，如醚、芳族化合物，如甲苯或者苯，醇、烷、烯、環烷、環烯、酯、酮、環烷或者面化烴。在另一實施方案中，本發明因此涉及至少一種疏水蛋白或者其至少一種衍生物的如上述的用途，所述組合物包含油，優選原油，和水，或者其他燃料和水。在本發明上下文中，組合物可以還包含其他相，如固相或者液相，特別是固相。疏水蛋白或者其衍生物可以用於本領域技術人員已知的所有用途。具體地，在本發明上下文中，應該提及用作汽油燃料/水混合物、其他燃料/水混合物、原油提取或者原油運輸中的原油和水相，和通過用7JC提取原油對原油脫鹽和隨後所得相的進一步處理中的相穩定劑。可能通過加入破乳劑破乳。例如，提取的原油通常以相對穩定的油包水乳液存在，根據沉積的類型，可以佔高達水重量的卯％。在原有的操作和純化中，除去大部分水後，原油將仍然包含按重量計約2到3%的所得到的水。這與油形成穩定的乳液，其甚至通過離心和加入常規的破乳劑也不能完全除去。這是有問題的，因為水首先具有高鹽含量，因此具有腐蝕作用，並且殘留的水還增加將運輸和儲存的體積，其導致成本增加。已經發現可以使用疏水蛋白或者其衍生物以便改善這些組合物中的相分離。實現了非常快速的分離。在該情況中，必須根據將乳化的油和脂肪和存在的任何乳化劑和表面活性劑調節破乳劑，以便實現最佳的作用。乳液的破碎還可以額外通過升高溫度來促進，例如0到100'C,例如，10到80。C,特別是20到60。C的溫度。另一發明性用途是水包油或者油包水混合物中的相穩定，例如，二相系統，其已經用作冷卻潤滑劑並且將被回收。還例如在船上得到7K/油混合物作為船底汙水。在該情況中，乳液的分離和分離相的保持是必要的，以便能夠可靠地除去水。使用的疏水蛋白或衍生物的量可以在寬範圍內改變，有利地將根據組合物自身和組合物中存在的任何其他組分調節用量。當例如組合物包含延遲或者惡化至少兩種液相的相分離的物質，如表面活性劑或者乳化劑時，有利地使用更大量的疏水蛋白或者衍生物。因為油，特別是原油由許多化合物組成，由於油的不同的化學組成，水和鹽含量和乳液分裂的特定條件，如溫度、乳液分裂的持續時間、定量加入的類型和與混合物中其他組分的相互作用，必須根據特定條件調節破乳劑。已經令人驚奇地發現，甚至少量的疏水蛋白或者其衍生物也可導致相穩定的提高。根據本發明，疏水蛋白或者其衍生物可以以任何合適的量使用。通常，至少一種疏水蛋白或者其衍生物基於總體組成以0.001到100ppm的量；優選0.001到80ppm的量，更優選0.001到20ppm，最優選0.01到10ppm的量使用。在本發明的上下文中，單位卯m指mg/kg。在另一實施方案中，本發明因此涉及如上述的用途，其中疏水蛋白或者其至少一種衍生物基於總體組成以0.001到100ppm的量使用。本領域技術人員根據待穩定的相組合物的類型確定使用的濃度。當組合物是包含燃料和水的組合物時，疏水蛋白或者其衍生物通常以0.001到20ppm，優選0.005到2ppm，特別0.01到lppm,更優選0.05到lppm的量4吏用。當組合物是包含原油和水的組合物時，疏水蛋白或者其衍生物通常以0.01到100ppm，優選0.1到80ppm，特別0.1到50ppm,更優選0.1到20ppm的量^吏用。根據本發明，還可能的是所述組合物以及至少一種疏水蛋白或者其衍生物包含提高相穩定的其他化合物。所述化合物可以是本領域技術人員已知用於此類應用的所有化合物。用於提高相穩定，特別用作原油生產中的乳液破碎劑的合適的其他化合物的實例是烷氧基化的苯酚-甲醛樹脂、EO/PO嵌段共聚物、交聯的雙環氧化合物、聚醯胺或者其烷氧基化物，磺酸鹽、乙氧基化脂肪胺、琥珀酸鹽和DE102005006030.7中指出的用於此類用途的化合物。在另一實施方案中，本發明涉及如上述的用途，其中使用提高相穩定的至少一種其他化合物以及至少一種疏水蛋白或者其至少一種衍生物。在另一方面，本發明還涉及穩定包含至少兩種液相的組合物中液相的方法，其包括向該組合物中加入至少一種疏水蛋白或者其至少一種衍生物。組合物可以是如上述的組合物，包含至少兩種液相，例如，包含油，優選原油，和水的組合物，或者包含燃料和水的組合物。根據本發明的方法可以包含其他步驟，例如，首先進行乳液的相分離或者破碎，隨後向7jC相中加入疏水蛋白。根據本發明，可以將疏水蛋白或者其衍生物加入2相系統的水相中，或者加入包含燃料的製劑中。該製劑與水接觸時，這使得穩定相或者防止再乳化。同樣有利的是向原油_水相中加入疏水蛋白或者其衍生物以便例如，在運輸過程中防止乳液的再次形成。在本發明的上下文中，包含燃料的製劑可以包含通常存在於此類製劑中的其他添加劑。合適的添加劑例如在WO2004/087808中指出。在本發明的上下文中，將燃料理解為指輕的、中等的或者重的燃料油。在本發明的上下文中，將燃料理解為指汽油燃料、柴油^U燃料或者氣輪機燃料。燃料更優選是汽油燃料。所提到的添加劑以本領域技術人員認為適合具體應用的量使用。本發明的製劑可以還與其他常規組分和添加劑組合。這裡應該提到例如沒有顯著的去汙劑作用的載體油。合適的礦物載體油是原油加工中得到的餾分，如例如來自SN500-2000類的具有粘性的光亮油或者基油；以及芳香烴、石蠟烴和烷氧基鏈烷醇。根據本發明同樣合適的是稱作"加氫裂解油"並且在石油精煉中得到的餾分(具有360到500。C沸騰範圍的真空切取餾分，可以從天然石油催化加氫和異構化以及在高壓下脫蠟得到)。同樣合適的是上述礦物載體油的混合物。根據本發明使用的合成的載體油的實例選自聚烯烴(聚a-烯烴或者聚內烯烴)、聚酯、聚烷氧化物、聚醚、脂族聚醚胺、烷基酚-開始的聚醚、烷基酚-開始的聚醚胺和長鏈鏈烷醇的氛基酯。其他合適的栽體油系統例如在DE-A3826608、DE-A4142241、DE-A4309074、EP誦A0452328和EP誦A0548617中描述，將它們明確引入作為參考。其他合適的合成的載體油是烷氧基化烷基酚，如DE-A10102913.6中所述。所提到的載體油以本領域技術人員對於具體應用認為合適的量使用。其他常規的添加劑是腐蝕抑制劑，如基於有機羧酸的銨鹽的腐蝕抑制劑，所述銨鹽傾向於形成膜，或者對於非鐵的金屬腐蝕保護，基於雜環芳香化合物的腐蝕抑制劑；抗氧化劑或者穩定劑，例如基於胺如對-苯二胺、二環己胺或者其衍生物的抗氧化劑或者穩定劑，或者基於酚，如2，4-二-叔丁基笨酚或者3，5-二叔丁基-4-羥基苯基丙酸的抗氧化劑或者穩定劑；其他常規破乳劑；抗靜電劑；金屬茂，如二茂鐵；甲基環戊二烯三g錳；潤滑性改進劑(潤滑性添加劑)，如特定脂肪酸，烯基琥珀酸酯，二(羥基烷基)月旨肪胺，羥基乙醯胺或者蓖麻油；和染料(標記)。如果合適，還加入胺以降低燃料的pH。將所提到的具有極性部分(a)到(i)的去汙劑添加劑通常以按重量計10到5000卯m，特別按重量計50到1000ppm的量加入到燃料中。如果需要，將所提到的其他組分和添加劑以常規量加入。根據本發明，合適的燃料是本領域技術人員已知的所有燃料，例如，汽油，如Ullmann的EncyclopediaofIndustrialChemistry,第五版1990，A16巻，p.719ff中所述。根據本發明，合適的燃料是內燃機燃料、煤油和噴氣式飛機燃料。具體地，具有按體積計不多於60%，例如按體積計不多於42%的芳香族化合物含量和按重量計不多於2000ppm，例如按重量計不多於150ppm的硫含量的汽油燃料是合適的。汽油燃料中的芳香族化合物含量為例如按體積計10到50%,例如，按體積計30到42%,特別按體積計32到40%汽油燃料中的石危含量為例如按重量計2到500ppm，例如，按重量計5到150%，或者按重量計10到100ppm。此外，合適的汽油燃料可以具有例如按體積計高達50%,例如按體積計6到21%,特別按體積計7到18%的烯烴含量；按體積計高達5%，例如按體積計0.5到1.0%,特別按體積計0.6到0.9%的苯含量，和/或按重量計高達25%,例如按重量計高達10%，或者按重量計1.0到2.7%，特別按重量計1.2到2.0%的氧含量。具體地，作為實例可以提及那些汽油燃料，其通常具有按體積計不多於38%的芳香族化合物含量，按體積計不多於21%的烯烴，按重量計不多於50ppm硫含量，按體積計不多於1.0%的苯含量和按重量計1.0到2.7%的氧含量。汽油燃料中醇和醚的含量可以在寬範圍內變動。典型的最大含量的實例是按體積計15%甲醇，按體積計65%乙醇，按體積計20%異丙醇，按體積計15%叔丁醇，按體積計20%異丁醇和按體積計30%的在分子中具有5個或更多碳原子的醚。根據本發明合適的汽油燃料的夏天蒸汽壓通常不大於70kPa，特別60kPa(每種情況下在37°C)。汽油燃料的RON通常為75到105。對應的MON的常規範圍為65到95。所提到的規格通過常規方法(DINEN228)確定。在下文通過實施例詳細闡明本發明。實施例實施例1克隆yaad-His6/yaaE-His6的準備用寡核苷酸Hal570和Hal571(Hal572/Hal573)進行聚合酶鏈式反應。使用的模板DNA是枯草芽孢桿菌的基因組DNA。所得的PCR片段包含枯草芽孢桿菌yaaD/yaaE基因的編碼序列，在每端分別具有Ncol和BgUI限制性切割位點。純化PCR片段並用限制性內切核酸酶Ncol和BglII切割。該DNA片段用作插入片段並克隆到來自Qiagen的栽體pQE60中，其已經事先用限制性內切核酸酶Ncol和BglII線性化。所形成的載體pQE60YAAD#2/pQE60YaaE#5可以用於表達由YAAD::HIS6或YAAE::HIS6組成的蛋白質。Hal570:gcgcgcccatggctcaaacaggtactgaHal571:gcagatctccagccgcgttcttgcatacHal572:ggccatgggattaacaataggtgtactaggHal573:gcagatcttacaagtgccttttgcttatattcc實施例2克隆yaad疏水蛋白DewA-His6用寡核苷酸KaM416和KaM417進行聚合酶鏈式反應。使用的模板DNA是構巢麴黴的基因組DNA。所得的PCR片段包含疏水蛋白基因dewA的編碼序列和N-末端因子Xa蛋白酶切割位點。純化PCR片段並用限制性內切核酸酶BamHI切割。該DNA片段用作插入片段並克隆到事先用限制性內切核酸酶BglII線性化的載體pQE60YAAD#2中。所形成的載體#508可以用於表達由YAAD::Xa::dewA::HIS6組成的融合蛋白。KaM416:GCAGCCCATCAGGGATCCCTCAGCCTTGGTACCAGCGCKaM417:CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCAT-GAAGTTCTCCGTCTCCGC實施例3克隆yaad疏水蛋白RodA-His6類似地4吏用寡核香酸KaM434和KaM435將質粒#513克隆到質粒#518中。KaM434:GCTAAGCGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCATTGCTGCKaM435:CCAATGGGGATCCGAGGATGGAGCCAAGGG實施例4克隆yaad疏水蛋白BASF1-His6類似地使用寡核苷酸KaM417和KaM418將質粒#507克隆到質粒#508中。使用的模板DNA是合成的DNA序列(疏水蛋白BASF1)(見附件，SEQIDNO:ll和12)。KaM417:CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCGTCTCCGCKaM418:CTGCCATTCAGGGGATCCCATATGGAGGAGGGAGACAG實施例5克隆yaad疏水蛋白BASF2-His6類似地4吏用寡核苷酸KaM417和KaM418將質粒#506克隆到質粒#508中。使用的模板DNA是合成的DNA序列(疏水蛋白BASF2)(見附件，SEQIDNO:13和14)。KaM417:CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCGTCTCCGCKaM418:CTGCCATTCAGGGGATCCCATATGGAGGAGGGAGACAG實施例6克隆yaad疏水蛋白SC3-His6類似地〗吏用寡核苷酸KaM464和KaM465將質粒#526克隆到質粒#508中。使用的模板DNA是來自Schyzophyllumcommune的cDNA(見附件,SEQIDNO:9和10)。KaM464:CGTTAAGGATCCGAGGATGTTGATGGGGGTGCKaM465:GCTAACAGATCTATGTTCGCCCGTCTCCCCGTCGT實施例7重組大腸桿菌菌林yaad疏水蛋白DewA-His6的發酵在15mlGreiner管中的3mlLB液體培養基中接種表達yaad疏水蛋白DewA-His6的大腸桿菌菌林。在搖床上37。C下以200rpm(轉/分鐘)培養8小時。在每種情況下，兩個1升的帶擋板的錐形瓶和25011111^培養基(+100jig/ml氨千青黴素)在每種情況下接種lml初步培養物並在搖床上以180rpm在37。C下培養9小時。在20升發酵罐中用0.5升初步培養物(OD柳礎1:10，對1120測量)接種13.5升LB培養基(+100jig/ml氨千青黴素)。在~3.5的OD6。。nm下，加入140ml100mMIPTG。3小時後，冷卻發酵罐到IO'C並離心除去發酵液。細胞沉澱用於進一步純化。實施例8純化重組的疏水蛋白融合蛋白將100g細胞沉澱(IOO-500mg疏水蛋白)用pH7.5的50mM磷酸鈉緩衝液補充到總體積200ml，並重懸浮。將懸浮液用Ultraturrax型T25(Janke和Kunkel;IKA-Labortechnik)處理10分鐘並隨後在室溫下用500單位Benzonase(Merck,Darmstadt;訂單號L01697.0001)溫育1小時以降解核酸。細胞破碎前，用玻璃柱體(P1)實現過濾。對於細胞破碎和斷裂剩餘的基因組DNA，在1500巴下進行兩次勻漿器循環(MicrofluidizerM-110EH;MicrofluidicsCorp.)。離心勾漿物(SorvallRC-5B，GSA-轉子，250ml離心杯，60分鐘，4'C,12000rpm，23000g),將上清液置於冰上並將沉澱物重懸浮在100ml磷酸鈉緩沖液，pH7.5中。重複離心和重懸浮3次，在第三次重複時磷酸鈉緩衝液包含1%SDS。重懸浮後，攪拌混合物1小時並進行最後的離心(SorvallRC-5B，GSA-轉子，250ml離心杯，60分鐘，4'C，12000rpm，23000g)。根據SDS-PAGE分析，最後離心後，在上清液中存在疏水蛋白(圖1)。實驗表明疏水蛋白可能以內含體的形式存在於對應的大腸桿菌細胞中。向用50mMTris-CIpH8.0緩衝液平衡的50ml鎳-瓊脂糖HP(SepharoseHighPerformance)17-5268-02柱(Amersham)應用50ml包含疏水蛋白的上清液。用50mMTris-CIpH8.0緩衝液洗潦柱子並隨後用包含200mM咪唑的50mMTris-CIpH8.0緩衝液洗脫疏水蛋白。為了除去咪唑，對50mMTris-CIpH8.0緩衝液透析溶液。圖l顯示了所製備的疏水蛋白的純化泳道A:應用於鎳-瓊脂糖柱(l:IO稀釋)泳道B:穿過液-洗滌步驟洗脫液泳道C-E:OD280最大值的洗脫級分(WP1，WP2，WP3)泳道F顯示了應用的標記。圖1的疏水蛋白具有約53kD的分子量。一些較小的帶代表疏水蛋白的降解產物。實施例9性能測試；通過玻璃上水滴的接觸角的改變表徵疏水蛋白基質玻璃(窗玻璃，StiddeutscheGlas，Mannheim):使用根據實施例8純化的疏水蛋白。-溶液中疏水蛋白的濃度lOOjig/ml,溶液還包含50mM乙酸鈉緩沖液和0.1Vo聚氧乙烯(20)-單月桂酸山梨聚糖(Tweei^20),溶液的pH:4-將玻璃板浸入該溶液中過夜(溫度80°C)-然後將疏水蛋白塗布的玻璃板從溶液取出並用蒸餾水洗滌，-然後溫育10分鐘/80。C/蒸餾水中1%SDS溶液-用蒸餾水再次洗滌在空氣中乾燥樣品，並在室溫下測定5^il水滴與經塗布的玻璃表面的接觸角(度)。在DataphysicsOCA15+接觸角系統，軟體SCA20.2.0.(2002年11月)上測量接觸角。根據生產商的使用說明書實現測量。未處理的玻璃得到30±5°的接觸角。用根據實施例8的疏水蛋白(yaad-dewA-his6)塗布的玻璃板得到75±5°的接觸角。=>接觸角增加45°實施例10疏水蛋白的相穩定實驗在每種情況下，向snaplid玻璃瓶中引入SOml原石油(同質的原石油，WintershallAG，Emiichheim,才笨頭60、64、83、87、301和507)的乳液和水。通過UUraturrax攪拌器(2^00rpm下4分鐘的攪拌時間)在約50ml水中乳化1000ppm原石油製備乳液。向該乳液中力p入在A例中不加入破乳劑，在B例中10ppm來自實施例8的疏水蛋白在C例中10ppmPolyDADMAC(固體含量為28到32%的破乳劑(IS03251),粘度從200到800mPas(IS02595))在D例中10ppmLupasolSK(用聚乙烯亞胺接枝的聚^J^胺，生產商NipponShokubai，Japan)之後，讓樣品靜置3天，期間乳液分離(見圖2中的圖示，上排)。然後用手通過多次圓形移動輕微搖動樣品。在A、C和D例中，這再次形成高不透明性(乳液形成)；對於B例(包含疏水蛋白)，保留相分離。在各例中，在包含10卯m的疏水蛋白的樣品B中還形成薄片，但是它們立即上升到上面的油相(見圖2圖示的下排)。這些實驗表明疏水蛋白比商業破乳劑更好地穩定已經分離成兩個分離相的乳液。也可以在乳液分裂後向水相中加入疏水蛋白。實施例11相穩定化的比較首先以3:1二曱苯/異丙醇混合物(基於體積)製備表中所列的破乳劑的按重量計5%的溶液。加入前1小時，將實施例8的疏水蛋白用蒸餾水製備為1%溶液(0.25%活性物質)。例如，使用的破乳劑為PluronicPE6800:(氧化乙烯/氧化丙烯共聚物)BasorolP380:(三元醇多元醇聚醚)BasorolHP:(四元醇-氧化乙烯/氧化丙烯共聚物)將原油乳液((WintershallAG，Emlichheim，探頭60、64、83、87、301和507,水含量按體積計為62%，通過DINISO3733蒸餾方法測定)在密封容器中水浴中加熱到52。C約2小時。通過搖動原油乳液約30秒勻漿並且在每種情況中，將100ml原油乳液填充到100ml搖動圓筒中。將裝油的搖動圃筒置於水浴中。將Eppendorf移液器在每種情況中用於計量50pl按重量計50%的上述破乳劑溶液到包舍原油乳液的搖動圓筒中，將圓筒用玻璃塞封住。之後，從水浴取出搖動圓筒，搖動60次並減壓。然後將搖動圓筒放回到水浴中(52'C)並在30和240分鐘讀出分離的水的體積。結果在下面的表中給出。240分鐘後，通過注射器將表中陳述的疏水蛋白的量導入在每種情況下通過一次性注射器分離的水中。隨後，在每種情況下搖動混合物30秒。之後，讓樣品在52。C靜置1分鐘，然後測定分離的水的量。結果在表中編輯。tableseeoriginaldocumentpage27tableseeoriginaldocumentpage28可以清楚地看出疏水蛋白的加入加速了相的再分離。因此，通過該蛋白質似乎減小了水相向油相的再乳化。還令人驚奇的是從O.l到1ppm低濃度的疏水蛋白足夠實現所述結果。權利要求1.至少一種疏水蛋白在包含至少兩種液相的組合物中用於相穩定的用途。2.根據權利要求i的用途，其中該組合物具有水相和有才;^目。3.根據權利要求1和2任一項的用途，其中疏水蛋白是融合疏水蛋白。4.根據權利要求1到3任一項的用途，其中所述融合疏水蛋白是選自yaad-Xa-dewA-his(SEQIDNO:20)、yaad-Xa-rodA陽his(SEQIDNO:22)或yaad-Xa-basfl-his(SEQIDNO:24)的至少一種，其中yaad也可以是yaad的具有20到293個胺基酸的截短的融合配偶體。5.根據權利要求1到4任一項的用途，其中所述包含至少兩種液相的組合物是包含油和水的組合物或者包含燃料和水的組合物。6.根據權利要求1到5任一項的用途，其中至少一種疏水蛋白以基於總的組合物0.001到80ppm的量使用。7.根據權利要求1到6任一項的用途，其中所述組合物是原油-水組合物並且疏水蛋白以基於總的組合物0.001到20ppm的量使用。8.根據權利要求1到6任一項的用途，其中所述組合物是燃料-水組合物並且疏水蛋白以基於總的組合物0.01到10ppm的量使用。9.根據權利要求1到8任一項的用途，其中使用提高相穩定性的至少一種其他化合物以及至少一種疏水蛋白。10.在包含至少兩種液相的組合物中穩定液相的方法，其包括向組合物中加入至少一種疏水蛋白。11.根據權利要求10的方法，其中所述疏水蛋白是融合疏水蛋白或者其衍生物。12.根據權利要求10和11任一項的方法，其中所述融合疏水蛋白是選自yaad-Xa國dewA-his(SEQIDNO:20)、yaad-Xa-rodA-his(SEQIDNO:22)或yaad-Xa-basfl-his(SEQIDNO:24)的至少一種，其中yaad也可以是yaad的具有20到293個胺基酸的截短的融合配偶體。13.根據權利要求10到12任一項的方法，其中所述包含至少兩種液相的組合物是包含油和水的組合物或者包含燃料和水的組合物。14.根據權利要求10到13任一項的方法，其中所述疏水蛋白以基於總的組合物0.001到80ppm的量使用。15.根據權利要求10到14任一項的方法，其中所述組合物是原油-水組合物並且疏水蛋白以基於總的組合物0.001到20ppm的量使用。16.根據權利要求10到14任一項的方法，其中所述組合物是燃料-水組合物並且疏水蛋白以基於總的組合物0.001到20ppm的量使用。17.根據權利要求10到16任一項的方法，其中首先將相分裂，然後向7jc相中加入疏水蛋白。18.製劑，其包含由燃料和/或原油組成的至少一種有機相和包含至少一種疏水蛋白的水相。19.根據權利要求18的製劑，其中所述疏水蛋白以基於總的製劑0.001到80ppm的量存在。20.根據權利要求18或19的製劑，其中所述製劑包含至少一種燃料並且所述疏水蛋白或者其衍生物以基於總的製劑0.01到lppm的量存在於製劑中。21.根據權利要求20的製劑，其中所述燃料是選自汽油燃料、柴油機燃料或者氣輪機燃料的燃料。22.根據權利要求18到21任一項的製劑，其中所述疏水蛋白是融合疏水蛋白或者其衍生物。23.根據權利要求18到22任一項的製劑，其中所述融合疏水蛋白是選自yaad-Xa-dewA-his(SEQIDNO:20)、yaad-Xa-rodA誦his(SEQIDNO:22)或yaad-Xa-basfl-his(SEQIDNO:24)的至少一種，其中yaad也可以是yaad的具有20到293個胺基酸的截短的融合配偶體。全文摘要本發明涉及尤其適於穩定雙相液體系統的疏水蛋白。文檔編號B01D17/05GK101175540SQ200680016796公開日2008年5月7日申請日期2006年3月29日優先權日2005年4月1日發明者M·古茨曼,P·埃克,U·鮑斯申請人:巴斯福股份公司