從雷公藤中分離製備雷公藤內酯二醇的方法
2023-12-12 04:35:42 1
專利名稱：從雷公藤中分離製備雷公藤內酯二醇的方法
技術領域：
本發明涉及一種從雷公藤中分離製備雷公藤內酯二醇的方法。
背景技術：
雷公藤(Tripterygium Wilfordii Hook.f.)，系衛茅科雷公藤屬植物，全世界共有4種，中國產4種，3種入藥(李瑞林等主編，雷公藤的研究與臨床應用，第一版，北京，中國科學技術出版社，198911-12)。由於雷公藤具有抗炎、免疫、抗腫瘤、抗癌、抗生育等顯著生理活性，已廣泛應用在風溼病、皮膚病、腎病等疾病的治療上(Zhou Xue-ping et al.，Journal of Traditional ChineseMedicine(Engl.)，，2004，24(2)83-87；Hua Guo et al.，World Journal ofGastroenterology(Engl.)，2003，9(7)1550-1553；Wang Li-Ling et al.，Chinese Journal of Integrative Medicine(Engl.)，2003，9(3)191-194；HuYong-Xiu et al.，Chinese Medical Journal(Engl.)，2003，116(2)284-287；Qian，Shao Zhen et al.，Contraception，1995，51(2)121-129)。
雷公藤內酯二醇(Tipdiolide)，分子式是C20H24O7，是雷公藤中一種二萜類化合物(Journal of the American Chemical Society，S.Morris Kupchan etal，1972，94(20)7194)。雷公藤內酯二醇(又名雷公藤乙素)是雷公藤中主要活性成分之一(張崇璞等，藥學學報，1993，28(2)110-115；張建偉等，實用男科雜誌，1996，2(2)81-84；張亮等，中國藥科大學學報，1990，21(4)251-256)，為中藥雷公藤多甙片中的主要有效化合物(張崇璞等，中國藥學雜誌，1994，29(8)493-495)。
現有文獻報導分離得到雷公藤內酯二醇的方法一般為採用雷公藤提取物經過反覆柱層析(林綏等，藥學學報，2005，40(7)632-635)，過程繁瑣、耗時長，也有文獻(Wen-Zhen Gu，et al. International Journal ofImmunopharmacology，1995，17(5)351-356)報導採用製備高效液相製備分離雷公藤內酯二醇，是每次進樣操作樣品少，成本高，還有報導採用多維逆流色譜製備雷公藤內酯二醇(Jun Wei et al.，Journal of Liquid Chromatography Related Technologies，2005，281903-1911)，但此方法不適合於雷公藤內酯二醇大規模分離製備。本發明採用常用有機溶劑對雷公藤提取物進行分離，經過簡單的幾次溶劑萃取，最後過一次層析柱，用單一有機溶劑洗脫，結晶就可以得到雷公藤內酯二醇粗晶，重結晶兩次即可得到純晶。
發明內容
本發明的目的是提供一種從雷公藤中分離製備雷公藤內酯二醇的方法。
它是將含雷公藤內酯二醇的雷公藤根皮提取物做原料，用混合溶劑萃取數次，得到的固體物分散在水中用有機溶劑萃取數次，收集有機相，蒸乾得到的固體物上一次矽膠柱或中性氧化鋁柱，用二氯甲烷、三氯甲烷或二氯乙烷洗脫，得到雷公藤內酯二醇粗品，用二氯甲烷—乙醚結晶，得到雷公藤內酯二醇粗晶，重結晶兩次，即得純晶本發明的優點是雷公藤在中國南方分布廣泛，因此廉價易得，工藝簡單易行、快捷，從原料開始經過數次簡單的萃取，最後只過一次層析柱，用單一有機溶劑洗脫，結晶就可以得到雷公藤內酯二醇粗晶，重結晶兩次即可得到純晶。所用溶劑基本都可回收，對環境汙染小，所獲得的雷公藤內酯二醇成本較低、純度高，適合工業規模化生產。
具體實施例方式
本發明的步驟如下1)將雷公藤根皮粉碎，將雷公藤根皮粉碎(過60目篩)，用8倍量的(80-95％)乙醇浸提3-5次，每次10小時，合併濃縮回收乙醇得到浸膏，浸膏用乙酸乙酯或氯仿萃取數次，萃取物進行矽膠或中性氧化鋁柱層析，用甲醇—氯仿(3∶97、5∶95、10∶90)梯度洗脫，分步收集，減壓濃縮含雷公藤內酯二醇部分，蒸乾所得固體為原料即可2)原料用正丁醇∶乙醇∶水＝30-35∶0.1-0.5∶30-35的溶劑系統萃取數次，薄層層析檢測，收集含雷公藤內酯二醇的下相，減壓濃縮回收溶劑，得到固體物。
3)步驟2萃取得到的固體物分散在水中用乙酸乙酯、三氯甲烷或乙醚萃取數次，收集上相，減壓回收溶劑，得到固體物。
4)步驟3得到的固體物上矽膠柱或者中性氧化鋁柱，二氯甲烷、三氯甲烷或二氯乙烷洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮回收有機溶劑，得到雷公藤內酯二醇粗品。
5)雷公藤內酯二醇粗品用二氯甲烷—乙醚結晶，得到雷公藤內酯二醇粗晶，重結晶兩次，即得純晶。
實施例1雷公藤根皮經過乙醇浸提、乙酸乙酯萃取、矽膠柱層析，用甲醇—氯仿(3∶97，5∶95，10∶90)梯度洗脫，分步收集，減壓濃縮含雷公藤內酯二醇部分，蒸乾所得固體為原料。原料用正丁醇∶乙醇∶水＝30∶0.1∶30(v/v)的溶劑系統進行萃取。首先按上述體積比配製0.5l溶劑置於分液漏鬥中，加入10g原料搖晃3分鐘，靜置分層，等平衡一段時間後，分出上下兩相，上相減壓濃縮後按照上述步驟再萃取3次，合併下相濃縮得固體物。得到的固體物分散在水中，加入100ml乙酸乙酯，按照乙酸乙酯∶水＝1∶1(v/v)的比例萃取2次，收集上相減壓回收溶劑，得到的雷公藤內酯二醇粗品過矽膠柱(粗品/矽膠＝1∶30，w/w)，用二氯甲烷洗脫，二氯甲烷—乙醚結晶得到粗晶，重結晶兩次得到雷公藤內酯二醇純晶，得率為0.95％(以原料計)。
實施例2雷公藤根皮經過乙醇浸提、乙酸乙酯萃取、矽膠柱層析，用甲醇—氯仿(3∶97，5∶95，10∶90)梯度洗脫，分步收集，減壓濃縮含雷公藤內酯二醇部分，蒸乾所得固體為原料。原料用正丁醇∶乙醇∶水＝30∶0.2∶30(v/v)的溶劑系統進行萃取。首先按上述體積比配製0.5l溶劑置於分液漏鬥中，加入10g原料搖晃3分鐘，靜置分層，等平衡一段時間後，分出上下兩相，上相減壓濃縮後按照上述步驟再萃取3次，合併下相濃縮得固體物。得到的固體物分散在水中，加入100ml乙醚，按照乙醚∶水＝1∶1(v/v)的比例萃取2次，收集上相減壓回收溶劑，得到的雷公藤內酯二醇粗品過矽膠柱(粗品/矽膠＝1∶30，w/w)，用三氯甲烷洗脫，二氯甲烷—乙醚結晶得到粗晶，重結晶兩次得到雷公藤內酯二醇純晶，得率為0.91％(以原料計)。
實施例3雷公藤根皮經過乙醇浸提、乙酸乙酯萃取、矽膠柱層析，用甲醇—氯仿(3∶97，5∶95，10∶90)梯度洗脫，分步收集，減壓濃縮含雷公藤內酯二醇部分，蒸乾所得固體為原料。原料用正丁醇∶乙醇∶水＝35∶0.1∶35(v/v)的溶劑系統進行萃取。首先按上述體積比配製0.5l溶劑置於分液漏鬥中，加入10g原料搖晃3分鐘，靜置分層，等平衡一段時間後，分出上下兩相，上相減壓濃縮後按照上述步驟再萃取3次，合併下相濃縮得固體物。得到的固體物分散在水中，加入100ml乙酸乙酯，按照乙酸乙酯∶水＝1∶1(v/v)的比例萃取2次，收集上相減壓回收溶劑，得到的雷公藤內酯二醇粗品過中性氧化鋁柱(粗品/中性氧化鋁＝1∶30，w/w)，用二氯乙烷洗脫，二氯甲烷—乙醚結晶得到粗晶，重結晶兩次得到雷公藤內酯二醇純晶，得率為0.92％(以原料計)。
實施例4雷公藤根皮經過乙醇浸提、乙酸乙酯萃取、矽膠柱層析，用甲醇—氯仿(3∶97，5∶95，10∶90)梯度洗脫，分步收集，減壓濃縮含雷公藤內酯二醇部分，蒸乾所得固體為原料。原料用正丁醇∶乙醇∶水＝35∶0.5∶35(v/v)的溶劑系統進行萃取。首先按上述體積比配製0.5l溶劑置於分液漏鬥中，，加入10g原料搖晃3分鐘，靜置分層，等平衡一段時間後，分出上下兩相，上相減壓濃縮後按照上述步驟再萃取3次，合併下相濃縮得固體物。得到的固體物分散在水中，加入100ml乙酸乙酯，按照乙酸乙酯∶水＝1∶1(v/v)的比例萃取2次，收集上相減壓回收溶劑，得到的雷公藤內酯二醇粗品過矽膠柱(粗品/矽膠＝1∶30，w/w)，用二氯甲烷洗脫，二氯甲烷—乙醚結晶得到粗晶，重結晶兩次得到雷公藤內酯二醇純晶，得率為0.85％(以原料計)。
權利要求
1.一種從雷公藤中分離製備雷公藤內酯二醇的方法，其特徵在於它是將含雷公藤內酯二醇的雷公藤根皮提取物做原料，用混合溶劑萃取數次，得到的固體物分散在水中用有機溶劑萃取數次，收集有機相，蒸乾得到的固體物上一次矽膠柱或中性氧化鋁柱，用二氯甲烷、三氯甲烷或二氯乙烷洗脫，得到雷公藤內酯二醇粗品，用二氯甲烷-乙醚結晶，得到雷公藤內酯二醇粗晶，重結晶兩次，即得純晶本發明所用原料廉價易得，對環境汙染小，工藝簡單易行、快捷，所獲得的雷公藤內酯二醇成本較低、純度高，適合工業規模化生產。
2.根據權利要求1所述的一種從雷公藤中分離製備雷公藤內酯二醇的方法，其特徵在於所述的含雷公藤內酯二醇的雷公藤根皮提取物的提取方法為將雷公藤根皮粉碎(過60目篩)，用8倍量的(80-95％)乙醇浸提3-5次，每次10小時，合併濃縮回收乙醇得到浸膏，浸膏用乙酸乙酯或氯仿萃取數次，萃取物進行矽膠或中性氧化鋁柱層析，用甲醇-氯仿(3∶97，5∶95，10∶90)梯度洗脫，分步收集，減壓濃縮含雷公藤內酯二醇部分，蒸乾所得固體為原料即可。
3.根據權利要求1所述的一種從雷公藤中分離製備雷公藤內酯二醇的方法，其特徵在於所述的混合溶劑是正丁醇、乙醇、水的混合物。
4.根據權利要求3所述的混合溶劑，其特徵在於所述的混合溶劑的比例為正丁醇∶乙醇∶水＝30-35∶0.1-0.5∶30-35
5.根據權利要求1所述的一種從雷公藤中分離製備雷公藤內酯二醇的方法，其特徵在於所述的有機溶劑是乙酸乙酯、三氯甲烷或乙醚。
全文摘要
本發明公開了一種從雷公藤中分離製備雷公藤內酯二醇的方法。它是將含雷公藤內酯二醇的雷公藤根皮提取物做原料，用混合溶劑萃取數次，得到的固體物分散在水中用有機溶劑萃取數次，收集有機相，蒸乾得到的固體物上一次矽膠柱或中性氧化鋁柱，用二氯甲烷、三氯甲烷或二氯乙烷洗脫，得到雷公藤內酯二醇粗品，用二氯甲烷－乙醚結晶，得到雷公藤內酯二醇粗晶，重結晶兩次，即得純晶。本發明所用原料廉價易得，對環境汙染小，工藝簡單易行、快捷，所獲得的雷公藤內酯二醇成本較低、純度高，適合工業規模化生產。
文檔編號C07D493/12GK1800188SQ20061004899
公開日2006年7月12日 申請日期2006年1月11日 優先權日2006年1月11日
發明者何潮洪, 歐陽小琨, 喻均 申請人:浙江大學