胸腺肽製劑用於製備逆轉腫瘤相關基因突變的試劑中的應用的製作方法
2023-12-11 23:50:32
胸腺肽製劑用於製備逆轉腫瘤相關基因突變的試劑中的應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了胸腺肽製劑用於製備逆轉腫瘤相關基因突變的試劑中的應用，拓寬了胸腺肽製劑的應用範圍，腫瘤患者幹預胸腺肽製劑後能夠使腫瘤相關基因突變逆轉，降低腫瘤相關基因的突變量，增生或息肉縮小，延長腫瘤患者的生存周期，為腫瘤的靶向治療提供新的思路，具有重要的臨床意義。
【專利說明】胸腺肽製劑用於製備逆轉腫瘤相關基因突變的試劑中的應用
【技術領域】
[0001]本發明屬於化學領域，特別涉及胸腺肽製劑用於製備逆轉腫瘤相關基因突變的試劑中的應用。
【背景技術】
[0002]癌症是基因突變累積的結果。換句話說，所有癌症的發生，都源自脫氧核糖核酸(DNA)序列的異常。國際癌症基因組聯合計劃參與單位之一、英國劍橋大學桑格研究所首席科學家斯特拉頓教授指出，癌變的形成要經過8-10年甚至更長，而這漫長的時間其實就是一個多基因突變並累積的過程。腫瘤相關基因可分為原癌基因和抑癌基因，其中起主要作用的突變屬於驅動型突變(driver mutation)。當抑癌基因突變失去抑制癌症作用，或原癌基因突變激活，就會誘發癌症。在正常細胞在向癌細胞轉化的過程中，發生多種不同原癌基因和抑癌基因突變。相比臨床檢測中常規使用的腫瘤蛋白血清標誌物，突變無疑是更特異的腫瘤標記。2009年12月，桑格研究所在《自然》雜誌上刊文宣布，他們率先在世界上破譯肺癌、皮膚癌和乳腺癌等5種腫瘤全部基因密碼，繪製出相應的腫瘤基因突變圖譜。
[0003]以往的一些研究表明在腫瘤組織、外周血(血漿/血清)、腫瘤累及器官相關的體液(如唾液、痰等)中均可以發現腫瘤相關的突變DNA癌變細胞可以釋放DNA到外周血或者體液中，因而可以檢測到腫瘤相關基因的突變。
[0004]肺癌相關基因有EGFR、KRAS等，檢測EGFR、KRAS基因突變可發現肺癌超早期信號、了解肺癌的發展預後，評估放化療效果等；乳腺癌相關突變基因BRCA1、BRCA2、RAD51C等；腸癌相關突變基因APC、KRAS, PTEN、TP53、BRAF等。EGFR外顯子19為肺癌常見突變，文獻報導突變比例為30-40% ;APC基因外顯子15為腸癌常見突變位點，文獻報導突變比例為70-80% ；BRCA2為乳腺癌常`見突變位點，文獻報導突變比例40_50%。另外，分子靶向藥物是根據腫瘤細胞與正常細胞分子生物學特徵差異而研發的，如易瑞沙(Iressa)、阿瓦斯汀(Avastin)等，為阻斷腫瘤細胞信號轉導途徑的新型抗癌藥物，但它們僅對部分有特殊基因突變或腫瘤標誌物表達的患者有較好的療效。
[0005]到目前為止人類還沒有攻破腫瘤治療的難關，雖然化療藥物和放療對腫瘤細胞的殺傷作用是肯定的，但是其對正常細胞的破壞作用也是不容忽視的。隨著科學研究的發展和進步，免疫調節劑也得到了很好的開發和應用。在腫瘤的治療過程中，使用免疫調節劑可以增強機體的免疫能力，保護化療和放療過程中受損的骨髓細胞和免疫細胞。胸腺肽製劑是一種在腫瘤臨床治療中應用廣泛的免疫調節劑，其主要作用是促進T細胞分化、成熟，能誘導前T細胞轉化為T細胞，並進一步分化為Th、Ts、Tc等T細胞亞群；能增強成熟T細胞對抗原或其他刺激的反應，如增強PHA或ConA誘導的淋巴細胞增殖反應，促進白介素-2生成，增強免疫排異和移植物抗宿主反應，提高NK細胞的活性，並能增強血清中超氧化物歧化酶的活性。動物實驗表明，它能使去胸腺小鼠部分或接近全部地恢復，能使萎縮的淋巴組織復生，淋巴細胞增殖，是幼淋巴細胞成熟，變為有免疫功能的淋巴細胞。胸腺肽製劑在腫瘤治療中的應用主要有胸腺肽、胸腺肽α 1、胸腺五肽三類。
[0006]胸腺肽是一種從新生小牛胸腺組織中提取的多肽類製劑，主要化學成分為TF5，具有調節和增強人體細胞免疫功能的作用，能促使T淋巴細胞成熟。鄧琴等報導66例肺癌患者，隨機分組分析血常規及免疫功能，結果胸腺肽組各項指標均比治療前有顯著改善。成瑞玲報導胃癌根治術後患者62例分兩組觀察，胸腺肽治療結果有顯著差異。黃凌等回顧性探討63例小劑量使用胸腺肽對老年腫瘤患者化療毒副作用和生活質量的影響，也得到了肯定的療效。綜上所述，胸腺肽具有促進體內細胞因子分泌及淋巴細胞功能的作用，能增強機體的免疫功能，在腫瘤治療中起著重要的輔助作用。
[0007]胸腺肽α I能夠刺激外周血淋巴細胞絲裂原，從而促進T淋巴細胞的成熟，增加抗原或絲裂原激活後T細胞分泌的幹擾素α、幹擾素Y以及白介素_2、白介素-3等淋巴因子水平，同時增加T細胞表面淋巴因子受體水平。它還可通過對CD4細胞的激活，增強異體和自體的混合淋巴細胞反應。揚帆等對80例術後NSCLC患者隨機分組，觀察NSCLC術後患者化療聯合胸腺肽α I的近期反應，結果各項免疫指標及白細胞計數顯著提高。李豔麗通過回顧原發性肝癌37例隨機分組觀察，發現胸腺肽α I可明顯改善免疫功能。徐然等通過對14例經胸腺肽α I治療的胰腺癌患者免疫指標進行檢測，並與同期未使用胸腺肽α I治療的患者進行比較，也得到同樣的結果。多篇報導顯示胸腺肽α I是一種生物反應調節因子，它可以促使T細胞及自然殺傷細胞(NK)的分化與成熟，對腫瘤患者免疫功能的改變作用肯定。
[0008]胸腺五肽為免疫雙向調節劑，具有誘導和促進T淋巴細胞及其亞群分化、成熟和活化的功能，調節T淋巴細胞的比例，使CD4/CD8趨於正常；調節和增強人體細胞免疫功能的作用，能促使有絲分裂原激活後外周血中的T淋巴細胞成熟，增加T細胞在各種抗原或致有絲分裂原激活後各種淋巴因子的分泌，增加T細胞上淋巴因子受體水平；它同時通過對T輔助細胞的激活作用來增強淋巴細胞反應，同時還可增強NK細胞毒性。林芳將NSCLC患者200例隨機分組進行對照研究，評價胸腺五肽在NSCLC中的作用，發現胸腺五肽治療組患者免疫指標和白細胞計數明顯提高。胸腺五肽(ΤΡ-5)是胸腺生成素II的有效成分，由精氨酸、賴氨酸、天門冬氨酸、纈氨酸、酪氨酸5種胺基酸組成，與胸腺肽有著相同的生理功能和藥效，其特點是藥物純度高、含量穩定(為激活T-淋巴細胞的最佳劑量)、安全可靠，且不含有大分子蛋白質，其有效成分為動物胸腺提取物84-102倍，ΤΡ-5具有使血液中超氧化物歧化酶(SOD)含量升高，朝氧負離子自由基含量顯著下降的功能。
[0009]上述研究表明胸腺肽製劑作為一種免疫調節劑，在腫瘤治療中的作用是肯定的，但胸腺肽製劑逆轉腫瘤超早期突變、改善腫瘤術後預後差的患者生存、腫瘤治療效果、腫瘤復發監控方面的作用未見報導。
【發明內容】
[0010]有鑑於此，本發明的目的在於提供胸腺肽製劑用於製備逆轉腫瘤相關基因突變的試劑中的應用。
[0011]為實現上述發明目的，提供如下技術方案:
[0012]胸腺肽製劑用於製備逆轉腫瘤相關基因突變的試劑中的應用。
[0013]優選的，所述突變為早期突變、療效指示突變、預後指示突變或復發監控突變。[0014]優選的，所述腫瘤相關基因為原癌基因或抑癌基因。
[0015]更優選的，所述原癌基因為EGFR，KRAS, C-KIT或PIK3CA。
[0016]更優選的，所述抑癌基因為P53、APC、BRCA1、BRCA2、PTEN 或 N0EY2。
[0017]最優選的，所述胸腺肽製劑為胸腺肽、胸腺肽α I或胸腺五肽。
[0018]本發明的有益效果在於:本發明公開了胸腺肽製劑在製備逆轉腫瘤相關基因突變的試劑中的應用，將患者用胸腺肽製劑幹預後能夠逆轉腫瘤相關基因早期突變，降低療效指示突變基因的突變量，預後指示突變的突變量和復發監控相關基因的突變量，並對腫瘤患者具有療效，減輕患者症狀，延長患者的生存周期，為臨床治療腫瘤提供了新的靶向藥物。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0019]為了使本發明的目的、技術方案和有益效果更加清楚，本發明提供如下附圖:
[0020]圖1為007號樣本胸腺肽幹預前後EGFR基因外顯子19缺失突變檢測圖。
[0021]圖2為033號樣本胸腺肽幹預前後APC基因外顯子15點突變檢測圖。
[0022]圖3為085號樣本胸腺肽幹預前後BRCA2基因外顯子11缺失突變檢測圖。
[0023] 圖4為093號樣本胸腺肽幹預前後EGFR基因外顯子21突變檢測圖。
[0024]圖5為149號樣本胸腺肽幹預前後KRAS基因外顯子2突變檢測圖。
[0025]圖6為165號樣本胸腺肽幹預前後KRAS基因外顯子3突變檢測圖。
[0026]圖7為207號樣本胸腺肽幹預前後C-KIT外顯子9突變檢測圖。
[0027]圖8為243號樣本胸腺肽幹預前後BRCA15382位點突變檢測圖。
[0028]圖9為297號樣本胸腺肽幹預前後PTEN外顯子6突變位點檢測圖。
[0029]圖10為350號樣本胸腺肽幹預前後PIK3CA外顯子9突變位點檢測圖。
[0030]圖11為411號樣本胸腺肽幹預前後Ν0ΕΥ26141位點檢測圖。
[0031]圖12為600號樣本胸腺肽幹預前後EGFR外顯子19突變檢測圖。
[0032]圖13為633號樣本胸腺肽幹預前後BRCA2外顯子11突變檢測圖。
[0033]圖14為749號樣本胸腺肽幹預前後EGFR外顯子21突變檢測圖。
[0034]圖15為801號樣本胸腺肽幹預前後KRAS外顯子2突變檢測圖。
[0035]圖16為936號樣本胸腺肽幹預前後KRAS外顯子3突變檢測圖。
[0036]圖17為胸腺肽幹預前後β -tubulin突變檢測圖。
[0037]圖18為胸腺肽幹預前後GAPDH突變檢測圖。
【具體實施方式】
[0038]下面將結合附圖，對本發明的優選實施例進行詳細的描述。實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，例如分子克隆實驗指南(第三版，J-薩姆布魯克等著)中所述的條件，或按照製造廠商所建議的條件。
[0039]實施例1胸腺肽製劑在逆轉腫瘤超早期突變方面的應用
[0040]入組無臨床症狀人員1000名，其中男性500名，女性500名，分別抽取5mL靜脈血，用肝素抗凝血，提取血漿游離DNA，DNA提取使用QIAGEN公司試劑盒，貨號為51183，提取方法按試劑盒說明書操作。[0041]檢測提取DNA中原癌基因和抑癌基因的突變情況，檢測的原癌基因有EGFR，KRAS，C-KIT和PIK3CA，檢測的抑癌基因有P53、APC、BRCAl、BRCA2、PTEN和N0EY2，同時以非癌相關基因β -tubulin和GAPDH為對照，檢測位點和檢測引物如表1所示:
[0042]表1.檢測原癌基因和抑癌基因突變的引物序列
[0043]
【權利要求】
1.胸腺肽製劑用於製備逆轉腫瘤相關基因突變的試劑中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於:所述突變為早期突變、療效指示突變、預後指示突變或復發監控突變。
3.根據權利要求1所述的應用，其特徵在於:所述腫瘤相關基因為原癌基因或抑癌基因。
4.根據權利要求3所述的應用，其特徵在於:所述原癌基因為EGFR，KRAS,C-KIT或PIK3CA。
5.根據權利要求3所述的應用，其特徵在於:所述抑癌基因為P53、APC、BRCA1、BRCA2、PTEN 或 N0EY2。
6.根據權利要求1-5任一項所述的應用，其特徵在於:所述胸腺肽製劑為胸腺肽、胸腺肽α I或胸腺五肽。
【文檔編號】A61P35/00GK103721245SQ201410003120
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2014年1月3日 優先權日:2014年1月3日
【發明者】王弢, 渠香雲, 秦勇 申請人:蘇州工業園區為真生物醫藥科技有限公司