用於檢測和治療脊柱和關節疼痛的生物標誌物和方法

2023-07-04 05:57:41

專利名稱：用於檢測和治療脊柱和關節疼痛的生物標誌物和方法
技術領域：
本發明通常涉及診斷與脊柱或關節相關疼痛相關的病變的方法以及用於治療脊柱或關節相關疼痛的組合物和方法。
背景技術：
脊柱和關節疼痛難於治療。具體而言，難於鑑定脊柱和關節疼痛的原因。對關節施加的漸增的力度導致關節損傷。異常的關節解剖結構通常是衰老的特徵，但是關節損傷也常見為外傷的結果。例如，軟骨損傷常見於運動員。由外傷引起的關節損傷通常與急性炎症有關，而由衰老導致的異常的關節解剖結構(例如，骨關節炎)是慢性疾病狀態。目前， 醫生還沒有可用於區別外傷引起的急性損傷和年齡相關的關節退變的系統或方法。目前， 由於常常不清楚患者的具體疾病狀態是急性還是慢性，所以難於為給定患者確定合適的治療安排。極其高比例的探查性膝關節鏡檢查突出了診斷半月板損傷的難度。MRI是目前診斷該病變的主要依靠，但MRI的低特異性使該問題更加嚴重。已經證實，MRI會將高達65% 的無症狀的人鑑定為半月板損傷，這使得用MRI作為診斷工具遭到質疑，並且突出了異常的半月板解剖結構和膝部疼痛之間缺乏關聯。異常的半月板解剖結構和膝部疼痛之間明確關聯的缺乏在多數發展為骨關節炎的老年患者人群中的問題尤其明顯。儘管大量證據質疑它的功效(Moseley, et al, N. Engl, J. Med. ,347(2) :81-8 ^00 )，但是僅在美國每年仍進行的膝關節鏡檢查就估計為660，000次(AA0S網站)。通常將脊柱相關疼痛分為椎間盤性疼痛、小關節性疼痛或神經根性疼痛。神經根性疼痛的表現常規上歸因於各種身體/機械異常，例如與諸如椎間盤突出、狹窄、脊椎前移、坐骨神經痛、梨狀肌症候群、閉孔症候群、囊性病變(例如，神經節和滑膜)、腫瘤和其它病變的疾病狀態相關的神經根壓迫或機械刺激。已經證實，將髓核施加到脊柱神經根可以導致軸突損傷和神經根顯微解剖結構的功能性改變，導致疼痛相關的行為。因此，已經推知將髓核釋放進硬膜外間隙的機械缺損可以引起神經根損傷，導致根性疼痛。該「化學性神經根病」僅可以解釋具有諸如椎間盤突出的機械缺損的患者人群的一部分中神經根性疼痛的存在，而其餘的患者仍無疼痛。很多研究試圖闡明脊柱相關疼痛的病變生理學，並且已經暫時涉及了數個分子途徑。然而，還未能證實從損傷或退變到疼痛狀態的清楚的因果關係途徑。分子標誌物可以與臨床症狀相關聯，並且作為開發診斷和治療工具的可能靶標。儘管一些研究已經提供了硬膜外間隙可以受椎骨間的椎間盤突出影響的證據，但是還沒有人測量硬膜外間隙中生物分子的濃度，從而檢測受累的人和未受累的人之間的差異。因此，本發明的一個目的是提供指示脊柱或關節疼痛的生物標誌物。本發明的另一目的是提供用於鑑定脊柱或關節中用於治療疼痛的位點的生物標誌物和方法。本發明的另一目的是提供可用於診斷或輔助診斷引起脊柱或關節相關疼痛的病變的存在的生物標誌物。本發明的另一目的是提供診斷或輔助診斷引起脊柱或關節相關疼痛的病變的存在的方法。本發明的另一目的是提供為經受脊柱或關節相關疼痛的個體確定合適療法的生物標誌物和方法。本發明的另一目的是提供監測和評估脊柱或關節相關疼痛的治療功效的生物標誌物和方法。本發明的另一目的是提供用於治療脊柱或關節疼痛的組合物和方法。另一目的是提供選擇脊柱或關節中的治療位點用於治療以抑制或減少疼痛的方法和組合物。發明概述已經鑑定出脊柱和/或關節疼痛相關的生物標誌物。生物標誌物包括含有纖連蛋白和聚集蛋白聚糖多肽或它們的片段的複合物或聚集物。在一些實施方案中，纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物包含聚集蛋白聚糖的G1、G2或G3結構域、上述結構域的纖連蛋白結合片段、或以上的組合。還提供了通過檢測脊柱或關節樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在或升高的水平來鑑定脊柱或關節中用於治療疼痛的治療位點的方法。在一些實施方案中，被鑑定為治療位點的位點也是脊柱或關節疼痛的來源位點。可以通過任何合適的方法獲得脊柱樣品，包括但不限於，硬膜外灌洗、椎間盤間隙灌洗和小關節灌洗。使用常規方法可以獲得關節樣品，包括但不限於，經皮或切開抽吸、活組織檢查或灌洗。可以使用任何合適的方法檢測包含纖連蛋白和聚集蛋白聚糖的複合物，包括但不限於，色譜法、選擇性結合測定、 質譜法、分光光度法或以上的組合。在一個實施方案中，可以從脊柱樣品、硬膜外間隙或腦脊液分離包含纖連蛋白和聚集蛋白聚糖的複合物。可以用於檢測纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的選擇性結合測定使用纖連蛋白、 聚集蛋白聚糖、或片段、或複合物的選擇性結合伴侶。可用的選擇性結合伴侶包括已知是纖連蛋白和聚集蛋白聚糖的體內結合伴侶的抗體和多肽。示例性的選擇性結合測定包括 Western印跡、免疫沉澱、ELISA和放射性免疫測定。特別優選的結合測定包括選擇性地檢測包含纖連蛋白和聚集蛋白聚糖的複合物而不會明顯檢測出不存在於纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物中的纖連蛋白或聚集蛋白聚糖的測定。還提供了用於在公開的檢測測定中檢測纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的陽性對照。所述陽性對照或參考標準通常是纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物，其中所述纖連蛋白和聚集蛋白聚糖來自序列與人類序列同源的相同或不同的物種。公開的檢測纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的方法可用於診斷或輔助診斷脊柱或關節的解剖結構和生理功能相關的疼痛症候群。來自脊柱的特定位置的樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的檢測可以用於診斷或輔助診斷神經根病、小關節疼痛、椎間盤性疼痛或關節疼痛。纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在還可以用於指示特定個體進行治療、確定個體的預後、或監測個體中脊柱或關節疼痛的治療功效。還提供了治療脊柱或關節疼痛的方法。所述方法包括對通過檢測纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在或升高的水平而鑑定出的個體疼痛位點進行治療。合適的治療方法包括本領域內任何已知的方法，包括但不限於，脊柱減壓的手術方法和使用留類和非甾類抗炎劑的治療。治療脊柱或關節疼痛的其它方法包括給予纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的拮抗劑。合適的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑抑制或減少纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的一種或多種生物活性、抑制或減少從纖連蛋白和聚集蛋白聚糖和/或它們的片段形成纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物、導致纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的解離、減少纖連蛋白和/或聚集蛋白聚糖的表達、或減少聚集蛋白聚糖從軟骨的降解和分解。示例性的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑包括但不限於，抗體和其它多肽、模擬肽、小的有機分子和抑制性RNA，所述抑制性RNA例如核酶、三螺旋形成寡核苷酸、反義DNA、siRNA和 miRNA。附圖簡要說明

圖1顯示了有症狀的人的樣品的尺寸排阻色譜法(SEC)的結果。圖中按照以分鐘計的洗脫時間的函數表示了從SEC柱洗脫出的蛋白在215nm處的光密度。箭頭標識出通過測定檢測出的纖連蛋白/聚集蛋白聚糖G3片段的峰。其它高分子量峰含有纖連蛋白與聚集蛋白聚糖的其它片段或更大片段的複合物。圖2顯示了無症狀的人的樣品的尺寸排阻色譜法(SEC)的結果。圖中按照以分鐘計的洗脫時間的函數表示了從SEC柱洗脫出的蛋白在215nm處的光密度。箭頭標識出通過測定檢測出的纖連蛋白/聚集蛋白聚糖G3片段的峰應該在的位置，但本圖中不存在該峰。 含有纖連蛋白與聚集蛋白聚糖的其它片段或更大片段的複合物的其它高分子量峰也不存在。圖3是顯示纖連蛋白的陰性ELISA結果和與純化的牛聚集蛋白聚糖G3片段體外預混的纖連蛋白的陽性ELISA結果的條形圖。數據表示為相對單位的光密度。圖4是取自通過ELISA分析的標出的椎間盤節段的脊柱樣品的Pfirrmarm值和術中VAS值的條形圖。圖5是顯示了用抗聚集蛋白聚糖-G3抗體進行捕獲和用抗纖連蛋白抗體進行檢測的ELISA線性圖。數據表示為450nm處的實際吸收值與450nm處的預計吸收值相對比。圖6是將來自單一人類個體的無症狀對照膝部與有症狀疼痛膝部的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖(G3)的異相ELISA(heterogeneous ELISA)測定的光密度(OD)進行比較的條形圖。發明的詳細描述I.定義本文所用的術語「根性疼痛」、「神經根病」、「神經根性疼痛」和「坐骨神經痛」是指從脊柱根節段或「根(radic) 」沿著一條或多條受刺激的腰部神經根的途徑傳出的肢體放射痛。就坐骨神經痛而言，這來源於組成坐骨神經的L4、L5和/或Sl脊柱神經根。放射痛還可能來自L3、L2或Ll區的上腰部椎間盤突出，或在頸部椎間盤突出、頸部神經根刺激或頸部椎間盤退變的情況下，放射痛可能來自任何頸部神經根。該疼痛不同於小關節或其它脊柱結構造成的被歸類為「牽涉性」疼痛的疼痛。放射痛還可能來自L3、L2或Ll區的上腰部椎間盤突出或頸部脊柱區。本文所用的「椎間盤性疼痛」是指從椎間盤產生的脊柱相關疼痛。椎間盤經受與髓核水化作用丟失有關的功能性降低。功能性降低與纖維環的損傷同時發生。該弱化可以導致解剖學病變，例如凸起的、脫出的、擠壓的或隔離的椎間盤。該弱化還可以導致由椎間盤內容物滲漏造成的可能的生化病變，這可以表現為背部疼痛或上述的化學性神經根病。本文所用的「小關節疼痛」或「小關節性疼痛」是指從小關節產生的疼痛。「小關節」或「關節突間關節」是具有軟骨、囊、半月形膜和滑膜特性的成對的真性滑液關節。本文所用的術語「脊柱疼痛」或脊柱相關疼痛」包括椎間盤性疼痛、小關節性疼痛和神經根性疼痛。本文所用的術語「急性疼痛」是指持續最多6個月的疼痛，例如，5個月、4個月、3 個月、2個月、4周、3周、2周、1周、6天、5天、4天、3天、2天或1天或更短。本文所用的術語「慢性疼痛」是指持續時間長於6個月的疼痛。本文所用的「生物樣品」是指來自患者的細胞或細胞群體或一定量的組織或液體。 這類樣品通常來自人，但是包括從非人靈長類，嚙齒類分離的組織，例如，小鼠、大鼠、羊、 牛、犬、馬和貓科動物。生物樣品還可以包括組織切片，例如活組織檢查樣品、用於組織學用途的冷凍切片和灌洗樣品。本文所用的術語「脊柱樣品」或「來自脊柱的樣品」是指來自脊柱的組織或液體的樣品，包括但不限於，「脊柱椎間盤樣品」、「硬膜外樣品，，和「小關節樣品」。通常地，這些樣品也被稱為「生物樣品」。本文所用的術語「關節」或「附肢骨骼關節」是指任何動關節。動關節也被稱為滑液關節。因此，術語「關節」是指含有骨、關節軟骨、關節囊、滑液組織襯膜和所述囊內部的潤滑滑液的任何關節。術語「軟骨的」是指關節的軟骨組分。術語「半月板」或「半月板的」 通常是指膝部的組分。本文所用的術語「正常關節」或「對照關節」是指對於個體來說是無關緊要的疼痛來源的關節。正常關節中可以存在的疼痛水平通常不會將患者生命的機能或質量影響到患者會尋求醫療的程度。本文所用的術語「關節樣品」或「來自關節的樣品」是指通過離體或體內方式來自關節的組織或液體的樣品，包括但不限於，滑液樣品和關節或組織灌洗液。通常，也將這些樣品稱為「生物樣品」。本文所用的短語生物樣品中的「生物標誌物的水平」或「纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的水平」或「纖連蛋白-聚集蛋白聚糖G3複合物的水平」是指生物樣品中存在的生物標誌物的量。不需要對「生物標誌物的水平」或「纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的水平」或「纖連蛋白-聚集蛋白聚糖G3複合物的水平」進行定量，而是可以進行簡單檢測，例如由人進行主觀的肉眼檢查，可以與對照樣品的水平或對照樣品的預期水平進行比較或不進行比較。
術語「多肽」、「肽」和「蛋白」在本文中可交替使用，是指胺基酸殘基的聚合物。這些術語適用於其中一個或多個胺基酸殘基是相應天然存在的胺基酸的人工化學模擬物的胺基酸聚合物，以及適用於天然存在的胺基酸聚合物、含有修飾過的殘基的那些天然存在的胺基酸聚合物和非天然存在的胺基酸聚合物。術語「試劑」或「治療劑」用來描述具有或可能具有藥學活性的化合物。試劑包括 已經是已知藥物的化合物、已經鑑定出藥學活性但正在進行進一步的治療評估的化合物、 和作為待篩查藥學活性的集合和庫的成員的化合物。所述術語包括有機或無機化學品，例如肽，包括抗體、蛋白和小分子和天然產物。本文所用的術語「免疫測定」是指使用一種抗體或多種抗體特異性地結合抗原的測定。所述免疫測定特徵為使用特定的一種抗體或多種抗體的特異性結合性質來檢測、定量和/或靶向抗原。諸如抗體的結合劑和諸如生物標誌物的蛋白之間的「特異性結合」是指捕獲劑或檢測劑優先與諸如生物樣品的混合物中存在的特定物質結合的能力。特異性結合還表示解離常數(Kd)小於約10_6M、優選小於約10_8M、且更優選小於約10_1。短語與抗體「特異性地(或選擇性地)結合」或「特異性地(或選擇性地)發生免疫反應」，當涉及蛋白或肽時，是指能確定蛋白的混雜群體和其它生物樣品中蛋白是否存在的結合反應。因此，在指定的免疫測定條件下，給定的抗體與特定蛋白或蛋白複合物的結合至少為背景的兩倍，並且所述給定的抗體基本上不以顯著的程度與樣品中存在的其它蛋白
糹口口。本文所用的「標記」或「可檢測部分」是可通過光譜學手段、光化學手段、生化手段、放射照相手段、免疫化學手段、化學手段或其它物理手段進行檢測的組合物。例如，有用的標記包括32p、螢光染料、電子緻密試劑、酶(例如，常用於ELISA中)、生物素、地高辛或半抗原和蛋白或可以例如通過將放射性標記併入肽中而變得可檢測的其它實體或用於檢測與肽發生特異性反應的抗體的其它實體。可以將標記在任何位置併入核酸、蛋白和抗體。可以利用本領域內已知的將抗體與標記結合的任何方法，例如，使用描述於Hermanson， Bioconjugate Techniques 1996, Academic Press, Inc. , San Diego 中的方法。本文所用的術語「抑制劑」或「拮抗劑」是指直接或間接地、部分地或全部地阻斷靶生物標誌物的活性，降低、阻止、延遲靶生物標誌物的活化，使靶生物標誌物的活性或表達失活、脫敏或下調的化合物或組合物。拮抗劑例如是諸如抗體的多肽和可溶性受體、以及諸如siRNA或反義RNA的核酸、以及包括小化學分子在內的天然存在的和合成的生物標誌物拮抗劑。II.脊柱或關節疼痛的生物標誌物指示脊柱或關節疼痛的生物標誌物是憑經驗確定的。在數個實施方案中，生物標誌物包含纖連蛋白與聚集蛋白聚糖的複合物，優選從脊柱樣品或關節樣品分離的纖連蛋白與聚集蛋白聚糖的複合物。下面的實例表明包含纖連蛋白與聚集蛋白聚糖的複合物的生物標誌物存在於來自經受脊柱或關節疼痛的個體的脊柱或關節的生物樣品中。生物標誌物可以包含成任何比例的纖連蛋白和聚集蛋白聚糖多肽。所述複合物可以包含全長的纖連蛋白和聚集蛋白聚糖多肽或可以包含纖連蛋白和/或聚集蛋白聚糖多肽的片段。術語「片段」是指多肽的任何子集，即全長蛋白的較短多肽。纖連蛋白或聚集蛋白聚糖的示例性片段包括來自纖連蛋白或聚集蛋白聚糖的、可以分別用抗纖連蛋白或抗聚集蛋白聚糖抗體進行檢測的20、30、40、50或更多個胺基酸。聚集蛋白聚糖的其它示例性片段包括聚集蛋白聚糖多肽的部分，所述部分含有聚集蛋白聚糖的Gl、I⑶、G2、KS、CSU CS2 或G3結構域中的一個或多個，或上述結構域的片段或組合。在一個實施方案中，所述生物標誌物包含纖連蛋白或纖連蛋白的片段與聚集蛋白聚糖的G3結構域或所述G3結構域的片段的複合物。在其它實施方案中，所述生物標誌物包含纖連蛋白或纖連蛋白的片段與聚集蛋白聚糖的Gl或G2結構域或所述Gl或G2結構域的片段的複合物。示例性的人纖連蛋白1序列可見於NCBI基因ID 2335 (FNl ；Ensembl ENSG00000115414 ；HPRD 00626 ；MIM =135600)。本文所用的「纖連蛋白」還包括任何天然存在的纖連蛋白變體，包括與疾病和病症相關的約20種已知的剪接變體和由於不同細胞類型的不同剪接而產生的纖連蛋白變體。聚集蛋白聚糖是硫酸軟骨素蛋白聚糖家族的成員，所述硫酸軟骨素蛋白聚糖家族還包括多功能蛋白聚糖、短小蛋白聚糖和神經蛋白聚糖。示例性的聚集蛋白聚糖1序列可見於 NCBI 基因 ID 176(ACAN ；Ensembl :ENSG00000157766 ；HPRD :01123 ；MIM :155760)。 示例性的多功能蛋白聚糖序列可見於NCBI基因ID(VCAN ；Ensembl :ENSG00000038427 ； UniProtKB :P13611)。示例性的短小蛋白聚糖序列可見於NCBI基因ID(BCAN ；Ensembl ENSG00000132692 ；UniProtKB :Q96GW7)。示例性的神經蛋白聚糖序列可見於NCBI基因 ID(NCAN ；Ensembl :ENSG00000130287 ；UniProtKB :014594)。該基因家族是高度同源的並且表現出相似的蛋白功能，該基因家族包含具有大於50%胺基酸同一性的大量蛋白結構域。 本文所用的「聚集蛋白聚糖」還包括聚集蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、短小蛋白聚糖和神經蛋白聚糖的任何天然存在的變體或剪接變體，以及由於不同細胞類型的剪接而產生的聚集蛋白聚糖、多功能蛋白聚糖、短小蛋白聚糖和神經蛋白聚糖的任何變體。纖連蛋白或聚集蛋白聚糖多肽或它們的片段也可以是纖連蛋白或聚集蛋白聚糖的變體或翻譯後修飾的變體。本文所用的「變體」多肽包含相對於對應野生型多肽的胺基酸序列的至少一個胺基酸序列改變。胺基酸序列改變可以是例如一個或多個胺基酸的取代、 缺失或插入。變體多肽可以具有胺基酸取代、缺失或插入的任何組合。在一個實施方案中， 纖連蛋白或聚集蛋白聚糖變體多肽具有整數數目的胺基酸改變，使得它們的胺基酸序列與野生型纖連蛋白或聚集蛋白聚糖多肽的胺基酸序列共享至少60、70、80、85、90、95、97、98、 99、99.5或100%的同一性。在優選的實施方案中，纖連蛋白和聚集蛋白聚糖變體多肽具有與野生型纖連蛋白或聚集蛋白聚糖多肽的胺基酸序列共享至少60、70、80、85、90、95、97、 98,99,99. 5或100%的同一性的胺基酸序列。可以用電腦程式或直接的序列比較來計算序列同一性百分比。測定兩個序列間同一性的優選的電腦程式方法包括但不限於，GCG程序包、FASTA、BLASTP和TBLASTN(參見例如，D. W. Mount, 2001, Bioinformatics :Sequence and Genome Analysis (生物信息學序列禾口基因組分析)，Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y.)。公眾可從NCBI和其它來源獲得BLASTP和TBLASTN程序。公知的Smith Waterman 算法也可以用來確定同一性。用於胺基酸序列比較的示例性參數包括DNeedleman and ^msch的算法(J Mol Biol. ,48 :443-453(1970)) ；2)Hentikoff and Hentikoff 的 BL0SSUM62 比較矩陣(Proc.Natl Acad. Sci U. S. Α.，89 10915-10919 (1992)) ；3)空位罰分=12;以及4)空位長度罰分 =4。公眾可獲得的利用這些參數的程序為「空位(gap) 」程序(Genetics Computer Group, Madison, Wis.)。上述參數是用於多肽比較的默認參數(沒有末端空位罰分)。可選擇地，可以使用下面的方程計算多肽序列同一性%同一性=(相同殘基數)/(胺基酸殘基的比對長度)*100。對於該計算，比對長度包括內部空位但不包括末端空位。III.鑑定用於治療脊柱或關節疼痛的治療位點的方法公開了通過檢測纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在或水平來確定用於治療脊柱疼痛或關節疼痛的治療位點的方法。A.脊柱疼痛脊柱內位點處的纖連蛋白和聚集蛋白聚糖複合物的存在或升高的水平的檢測可以用於將該位點鑑定為脊柱疼痛的需要治療的位點。在一些實施方案中，基於纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在或升高的水平而確定為治療脊柱疼痛位點的位點也是疼痛來源位點。在一些實施方案中，提出的方法包括從懷疑為疼痛來源的脊柱節段獲得一個或多個生物樣品，並且檢測和比較每個生物樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的水平。這在鑑定實際的疼痛位點而非放射痛位點中是有用的。適於檢測纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在或升高的水平的個體包括出現脊柱疼痛的任何個體。例如，個體可以正在經受懷疑為椎間盤性疼痛、小關節性疼痛或根性疼痛的疼痛。公開的方法可用於確定脊柱中用於治療脊柱疼痛的位置。這些位置還可以是脊柱中疼痛來源的位點。引起個體疼痛的位點的鑑定可用於診斷或輔助診斷個體中的病變或損傷。引起個體疼痛的位點的鑑定還可用於輔助確定受累個體的合適的治療。B.關節疼痛關節內纖連蛋白和聚集蛋白聚糖複合物的存在或升高的水平的檢測可以用於將該關節鑑定為用於治療關節疼痛的位點。在一些實施方案中，基於纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在或升高的水平而確定為治療關節疼痛位點的位點也是疼痛來源位點。在一些實施方案中，提出的方法包括從懷疑為疼痛來源的關節獲得一個或多個生物樣品，並且檢測生物樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的水平。適於檢測纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在或升高的水平的個體包括出現附肢骨骼關節疼痛的任何個體。例如，個體可以正在經受懷疑為骨關節炎、軟骨形成的疼痛、或與半月板、腱或或韌帶病變相關的疼痛。公開的方法可用於確定用於治療關節疼痛的治療位點。這些位置還可以是疼痛來源的關節。引起個體疼痛的關節的鑑定可用於診斷或輔助診斷個體中的病變或損傷。引起個體疼痛的關節的鑑定還可用於輔助確定受累個體的合適的治療。C.個體可以被選擇進行纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的檢測的個體包括出現脊柱或關節疼痛的任何個體。優選地，所述個體是人。個體可以正在經受脊柱相關的任何疼痛，包括但不限於椎間盤性疼痛、小關節性疼痛或神經根性疼痛。合適的個體可以被懷疑為正在經受關節的任何解剖結構相關的疼痛，所述解剖結構包括但不限於骨、關節軟骨或滑液組織襯膜。關節可以包括但不限於，大的動(滑液)關節(例如膝部、臀部、肩部)、小的動(滑液)關節(例如肘部、腕部、踝部、脊柱的關節突關節或小關節)以及微動關節(例如骶髂關節、胸鎖關節、顳下頌關節(「TMJ」))。個體可以正在經受關節相關的急性疼痛或可以患關節相關的慢性疼痛。在一個實施方案中，個體已經經受關節相關的疼痛或脊柱相關的疼痛持續30或 25周或更短。在另一個實施方案中，個體已經經受關節相關的疼痛或脊柱相關的疼痛持續 20、15、10、8或6周或更少。個體可以為任何性別或任何年齡。個體可以正在經受急性或慢性疼痛。D.纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的檢測1.從脊柱獲得生物樣品的方法本領域內已知的諸多方法都可以用來從脊柱獲得樣品，以用於檢測纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物。這些方法包括但不限於，從硬膜外間隙、椎間盤間隙和小關節間隙獲得樣品的方法。合適的方法在下面有更詳細的描述。方法1 硬膜外間隙灌洗(經尾部)1)將已用螢光鏡檢查確認的導入部位的皮膚和皮下組織進行浸潤；2)然後將導入針通過骶管裂孔插入，進行再一次的螢光鏡檢查確認；3)然後使導管通過所述針進入硬膜外間隙，利用螢光鏡檢查，使導管到達病變節段；4)在導管達到要求位置時，取出引導線；5)將含有約3cc生理鹽水(賂)的注射器連接到導管的遠端；6)然後將l/2cc增量的NS注射入硬膜外間隙，在每體積注射液時嘗試抽吸，在每次注射之後、再抽吸之前，允許停留3-5秒；7)然後將抽吸液置於含有蛋白酶抑制劑混合溶液的微離心管中，並立即置於冰上或乾冰上或浸入液氮中或使用任何其它快速冷凍的方法；8)然後將樣品轉移至-20°C或更低溫度的長期貯存庫中，直至分析。方法2 硬膜外(尾部海綿)1)將已用螢光透視確認的導入部位的皮膚和皮下組織進行浸潤；2)然後將導入針通過骶管裂孔插入，進行再一次的螢光檢查確認；
3)然後使導管通過所述針進入硬膜外間隙，利用螢光鏡檢查，使導管到達病變的節段的最上方；4)取出導入器的引導線，並導入帶有吸收性材料的分析物線；5)將含有Icc生理鹽水(NS)的注射器連接到導入器口 ；6)然後注射NS，將所述吸收性材料浸溼；7)然後將導管拉回至病變的最下處，在損傷上方拉動吸收性材料；8)然後取出分析物線；9)然後將物質從吸收性材料洗入含有蛋白酶抑制劑混合溶液的微離心管中，並立即置於冰上或乾冰上或浸入液氮中或使用任何其它快速冷凍的方法；10)然後將微離心管轉移至-20°c或更低溫度的長期貯存庫中直至分析。可選擇地，在步驟9時，可以利用集中的實驗室分析或現場即時測定(point of care assay)立即分析樣品。
方法3 經椎間孔(硬膜外方法的改動)1)將已用螢光鏡透視確認的導入部位的皮膚和皮下組織進行浸潤；2)然後將小口徑針通過受累的椎間孔插入，進行再一次的螢光鏡檢查確認；3)將含有約1. 5cc生理鹽水(NS)的注射器連接到針上；4)然後將l/2cc增量的NS注射入硬膜外間隙，在每體積注射液時嘗試抽吸，在每次注射之後、再抽吸之前，允許停留3-5秒；5)然後將抽吸液置於含有蛋白酶抑制劑混合溶液的微離心管中，並立即置於冰上或乾冰上或浸入液氮中或使用任何其它快速冷凍的方法；6)然後將微離心管轉移至-20°C或更低溫度的長期貯存庫中直至分析。方法4 經椎間孔(Ab/吸收性海綿)1)將已用螢光鏡透視確認的導入部位的皮膚和皮下組織進行浸潤；2)然後將針通過受累的椎間孔插入，進行再一次的螢光鏡檢查確認；3)將帶有吸收性材料的分析物線通過針導入；4)將含有約Icc生理鹽水(賂)的注射器連接到針上；5)然後注射NS來浸溼吸收性材料；6)然後取出分析物線；7)然後將物質從吸收性材料洗入含有蛋白酶抑制劑混合溶液的微離心管中，並立即置於冰上或乾冰上或浸入液氮中或使用任何其它快速冷凍的方法；8)然後將微離心管轉移至-20°C或更低溫度的長期貯存庫中直至分析。可選擇地，在步驟7時，可以利用集中的實驗室分析或現場即時測定立即分析樣品。方法5:經椎板1)將導入部位的皮膚和皮下組織進行浸潤；2)然後將針插入，利用椎板間途逕到達硬膜外間隙。穿過黃韌帶時「砰」的聲響證實到達硬膜外間隙中的合適位置，可選擇地，可以利用螢光鏡檢查確認；3)將含有約3-5cc生理鹽水(賂)的注射器連接到針上；4)然後將約Icc增量的NS注射入硬膜外間隙，在每體積注射液時嘗試抽吸，在每次注射之後、再抽吸之前，允許停留3-5秒；5)然後將抽吸液置於含有蛋白酶抑制劑混合溶液的微離心管中，並立即置於冰上或乾冰上或浸入液氮中或使用任何其它快速冷凍的方法；6)然後將樣品轉移至-20°C或更低溫度的長期貯存庫中直至分析。方法6 椎間盤間隙(灌洗)1)將已用螢光鏡透視確認的導入部位的皮膚和皮下組織進行浸潤；2)利用單針或雙針技術，在螢光鏡引導下插入椎間盤間隙；3)將含有約1. 5cc生理鹽水(賂)的注射器連接到針上，並注射入椎間盤間隙；4)約3秒之後，再抽吸椎間盤的灌洗液；5)這可能需要重複，以獲得足夠的液體(約3/8cc)；6)然後將抽吸液洗入含有蛋白酶抑制劑混合溶液的微離心管中，並立即置於冰上或乾冰上或浸入液氮中；7)然後將微離心管轉移至-20°C或更低溫度的長期貯存庫中直至分析。
方法7 椎間盤間隙(吸收性海綿)1)將已用螢光鏡透視確認的導入部位的皮膚和皮下組織進行浸潤；2)利用單針或雙針技術，在螢光鏡引導下插入椎間盤間隙；3)取出導入器的引導線並導入帶有吸收性材料的分析物線；4)將含有約Icc生理鹽水(賂)的注射器連接到導入器口 ；5)然後注射NS來浸溼微離心管；6)然後取出分析物線；7)然後將物質從吸收性材料洗入含有蛋白酶抑制劑混合溶液的微離心管中，並立即置於冰上或乾冰上或浸入液氮中；8)然後將微離心管轉移至-20°C或更低溫度的長期貯存庫中直至分析。可選擇地，在步驟7時，可以利用集中的實驗室分析或現場即時測定立即分析樣品。方法8 小關節間隙(灌洗)1)將已用螢光鏡透視確認的導入部位的皮膚和皮下組織進行浸潤；2)利用單針或雙針技術，在螢光鏡引導下插入小關節；3)將含有約1. 5cc NS的注射器連接到針上，並注射入小關節間隙；4)約3秒之後，再抽吸椎間盤的灌洗液；5)這可能需要重複，以獲得足夠的液體(約3/8cc)；6)然後將抽吸液洗入含有蛋白酶抑制劑混合溶液的微離心管中，並立即置於冰上或乾冰上或浸入液氮中；7)然後將微離心管轉移至-20°C或更低溫度的長期貯存庫中直至分析。方法9 小關節間隙(ab/吸收性海綿)1)將已用螢光鏡透視確認的導入部位的皮膚和皮下組織進行浸潤；2)利用單針或雙針技術，在螢光鏡引導下插入小關節；3)取出導入器的引導線並導入帶有吸收性材料的分析物線；4)將含有約Icc生理鹽水(賂)的注射器連接到導入器口 ；5)然後注射NS來浸溼吸收性材料；6)然後取出分析物線；7)然後將物質從吸收性材料洗入含有蛋白酶抑制劑混合溶液的微離心管中，並立即置於冰上或乾冰上或浸入液氮中；以及8)然後將微離心管轉移至-20°C或更低溫度的長期貯存庫中直至分析。可選擇地，在步驟7時，可以利用集中的實驗室分析或現場即時測定立即分析樣品。優選的吸收性材料包括但不限於，海綿、泡沫材料、紗布、毛氈或布。吸收性材料是生物相容的，並且可以由天然的或合成的材料製成。天然的材料包括但不限於棉花。合成的材料包括但不限於聚合物，例如尼龍。2.從關節獲得樣品的方法本領域內已知的諸多方法都可以用來獲得關節樣品用於檢測纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物。合適的方法包括但不限於，經皮抽吸或切開抽吸、活組織檢查或灌洗。3.檢測纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的方法檢測生物樣品中多肽的存在的任何已知方法都可以用來定性地或定量地檢測脊柱或關節樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在。合適的方法包括但不限於，色譜法、選擇性結合測定、質譜法、分光光度法或以上的組合。示例性的結合測定包括免疫測定，例如酶聯免疫吸附測定。免疫測定可以用來定性地或定量地分析脊柱樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在。在很多容易獲得的手冊中可以找到可用技術的一般綜述，例如，Harlow & Lane，Cold Spring Harbor Laboratory Press, Using Antibodies :A Laboratory Manual (使用抗體實驗手冊) (1999)。a.選擇性結合伴侶在一些實施方案中，公開的方法和試劑盒利用纖連蛋白或聚集蛋白聚糖的選擇性結合伴侶來鑑定它們的存在或測定脊柱或關節的樣品中它們的水平。所述選擇性結合伴侶可以是與纖連蛋白或聚集蛋白聚糖或它們的片段或複合物特異性結合的抗體或其它生物分子。在一些實施方案中，使用單克隆抗體或多克隆抗體。抗體可以是本領域內任何已知的抗體，包括可商購的抗體。本領域技術人員公知的是，應當根據使用抗體的測定來考慮待用抗體的類型、來源和其它方面。在一些情況下，在Western印跡上識別抗原靶標(例如，纖連蛋白或聚集蛋白聚糖的一個表位或多個表位)的抗體可能不能用於所有的ELISA 或ELISpot測定，反之亦然。在一些實施方案中，可以用本領域內公知的製備單克隆抗體或多克隆抗體的技術來製備待用的抗體、抗體片段或單鏈抗體(參見例如，Coligan，Current Protocols in Immunology(現代免疫學實驗技術)(1991) ；Harlow & Lane，同上；Goding，Monoclonal Antibodies principles and Practice (單克隆抗體原理和應用)(第 2 版· 1986)；以及 Kohler & Milstein，Nature 256 :495-497 (1975)。這類技術包括通過從噬菌體或相似載體中的重組抗體庫選擇抗體來進行抗體製備，還包括通過免疫兔或小鼠來製備單克隆抗體或多克隆抗體(參見例如，Huse et al. ,Science 246 :1275-1281(1989) ；Ward et al,Nature 341 :544-546(1989))。來自纖連蛋白或來自聚集蛋白聚糖的多個免疫原可以用來產生與纖連蛋白和聚集蛋白聚糖和它們的片段特異性反應的抗體。例如，使用本領域技術人員公知的方法可以分離重組纖連蛋白或聚集蛋白聚糖或它們的抗原性片段。可以在真核細胞或原核細胞中表達重組蛋白。重組蛋白是用於製備單克隆抗體或多克隆抗體的常用免疫原。可選擇地，源於纖連蛋白和聚集蛋白聚糖已知序列並連至載體蛋白的合成的肽可以用作免疫原。也可以使用純化形式或不純形式的天然存在的蛋白。然後將產物注射入能產生抗體的動物中。可以產生單克隆抗體或多克隆抗體，隨後用於免疫測定來測定蛋白。在其它的實施方案中，與包含纖連蛋白和聚集蛋白聚糖的複合物特異性結合的抗體被用作特異性結合伴侶。在某些實施方案中，使用與纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物中存在的抗原特異性結合、但不與單獨的纖連蛋白或聚集蛋白聚糖結合的抗體。在其它的實施方案中，非抗體多肽被用作特異性結合劑以用於檢測纖連蛋白或聚集蛋白聚糖或它們的片段或複合物。與纖連蛋白特異性結合的多種蛋白在本領域內是已知的。可以用作纖連蛋白的選擇性結合伴侶的示例性蛋白包括但不限於，細胞表面整聯蛋白、 膠原蛋白、纖維蛋白、凝集素和硫酸肝素。可以用作聚集蛋白聚糖的選擇性結合伴侶的多肽包括但不限於，腱生蛋白-R、腱生蛋白-C、纖蛋白-1、纖蛋白-2和原纖蛋白-1。b.測定一旦獲得選擇性結合伴侶，可以通過包括免疫測定方法在內的各種選擇性結合測定來檢測每種具體生物標誌物。免疫學和免疫測定程序的綜述可參見Basic and Clinical Immunology(基礎免疫學和臨床免疫學)(Stites & Terr eds.，7th ed. 1991)。此外，可以按照數種編排的任何一種進行公開的選擇性結合測定。數種免疫測定編排在Enzyme Immunoassay ((酶學免疫測定)，Maggio，ed.，1980)中有深入的論述某些實施方案提供了使用纖連蛋白或聚集蛋白聚糖或它們的片段或複合物的特異性結合伴侶來檢測脊柱或關節樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖的存在和/或測定脊柱或關節樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖的水平的方法。所述方法通常包括a)使脊柱或關節樣品與纖連蛋白或聚集蛋白聚糖或它們的片段或複合物的特異性結合伴侶接觸；以及b)檢測所述特異性結合伴侶和樣品分子之間的結合。將特異性結合伴侶與樣品分子的特異性結合的檢測與合適的對照進行比較，可以指示所述樣品中存在生物標誌物。檢測特異性蛋白相互作用的各種方法在本領域內是已知的，並且可用於本方法中。方法包括競爭性測定和非競爭性測定。合適的方法包括但不限於，Western印跡、免疫沉澱、ELISA和放射性免疫測定。進行這些測定和其它合適測定的方法在本領域內是已知的。通常，直接地或間接地將用於檢測生物標誌物的特異性結合伴侶可檢測地標記。可以將脊柱或關節樣品與能固定細胞、細胞顆粒或可溶蛋白的固相支持物或載體接觸並固定在其上，所述固相支持物或載體例如膜 (即硝酸纖維素)或聚苯乙烯或磁珠。然後可以用合適的緩衝液洗滌所述支持物，隨後與可檢測地標記的選擇性結合伴侶接觸。優選的方法包括，與不是存在於纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物中的纖連蛋白或聚集蛋白聚糖相比，能選擇性地檢測包含纖連蛋白和聚集蛋白聚糖多肽或它們的片段的複合物的那些方法。對於這樣的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的選擇性檢測來說，合適的結合測定包括使用選擇性結合伴侶的測定，所述選擇性結合伴侶與纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物結合，但不會檢測不在該複合物中存在的纖連蛋白和/或聚集蛋白聚糖。用於這些測定中的合適的選擇性結合伴侶包括這樣的抗體所述抗體識別纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物中存在的、但是不存在於纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物中的纖連蛋白或聚集蛋白聚糖中不存在的表位。與非複合的纖連蛋白或聚集蛋白聚糖相比，纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的特異性表位可以部分由這些多肽中的每一個的胺基酸序列形成。以這種方式，每個多肽都對所述表位做出貢獻。與非複合的纖連蛋白或聚集蛋白聚糖相比，纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的特異性表位可以存在的另一個原因是，由於複合物中這些多肽的構象差異，導致通常「被掩蓋的」表位變得可被抗體或其它多肽結合。其它合適的測定包括聯合使用纖連蛋白和聚集蛋白聚糖中每一種的特異性結合伴侶來檢測纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的那些測定。免疫共沉澱和異相ELISA測定是這些測定類型的示例。在這些測定中，第一多肽的第一特異性結合伴侶用來「捕獲」複合物，第二多肽的第二選擇性結合伴侶用來檢測所述複合物。通過異相ELISA和通過免疫共沉澱、隨後通過Western印跡來檢測多肽複合物的方法在本領域內是已知的。下面的實例展示了異相ELISA系統的應用，其中使用抗纖連蛋白抗體和抗聚集蛋白聚糖抗體來檢測人樣品中的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物。在所有的特異性結合測定中，將發生的非特異性結合的量降至最低是理想的，尤其是當特異性結合伴侶附著於基底時。降低這些非特異性結合的方法是本領域技術人員所公知的。通常，該技術涉及用蛋白質組合物包被基底。具體而言，諸如牛血清白蛋白(BSA)、 脫脂奶粉和明膠的蛋白組合物被廣泛使用。除蛋白質材料之外或代替蛋白質材料，可以將各種去垢劑和/或鹽用於免疫測定以最小化非特異性相互作用。在測定的全過程中，在每次試劑結合之後，可能需要孵育和/或洗滌步驟。孵育和洗滌時間取決於數種因素，包括測定形式、特異性結合伴侶對於生物標誌物的親和力、溶液體積、濃度。一個實施方案提供了可以用在檢測測定中的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的陽性對照，例如用於使檢測測定標準化。在某些實施方案中，纖連蛋白和聚集蛋白聚糖來自不同的來源，例如來自不同的物種。纖連蛋白可以是人纖連蛋白而聚集蛋白聚糖可以是牛、 豬或馬聚集蛋白聚糖。可選擇地，纖連蛋白可以是牛、豬或馬的而聚集蛋白聚糖可以是人的。應當理解，可以使用任何組合，只要纖連蛋白和聚集蛋白聚糖來自與人序列具有序列同源性的相同或不同物種。纖連蛋白和聚集蛋白聚糖可以是重組的、天然的或其組合。c.可檢測的標記包括免疫測定在內的特異性結合測定通常使用標記劑來特異性地結合由特異性結合伴侶與被檢測的分析物形成的複合物，並允許檢測所述複合物。標記劑可以是用於檢測分析物的特異性結合伴侶的一部分。可選擇地，標記劑可以是第三部分，例如與特異性結合伴侶和被檢測的分析物所形成的複合物特異性結合的二抗。能特異地結合免疫球蛋白恆定區的其它蛋白也可以用作標記劑，例如蛋白A或蛋白G。這些蛋白表現出對來自多種物種的免疫球蛋白恆定區的強親和力(參見例如，Kronval et al.，J. Immunol. Ill 1401-1406(1973) ；Akerstrom et al.，J. Immunol. 135 :2589-2542 (1985))。可以用諸如生物素的可檢測部分修飾標記劑，諸如抗生物素蛋白鏈菌素的另一個分子可以與所述可檢測部分特異性地結合。各種可檢測的部分是本領域技術人員所公知的。可檢測的標記可以是具有可檢測的物理或化學特性的任何材料。很多有用的可檢測的標記在本領域內是已知的，且包括可通過分光鏡、光化學、生物化學、免疫化學、放射照相，電學、光學或化學手段檢測的任何標記。標記的選擇可取決於所需的敏感度、與化合物綴合的容易程度、穩定性要求、可用的器械和配置供給。有用的標記包括磁珠(例如， DYNABEADS )、螢光染料(例如，異硫氰酸螢光素、德克薩斯紅、羅丹明等)、放射性標記 (例如，3H、125I、35S、14C或32P)、酶(例如，辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶和常用於ELISA中的其它酶)以及諸如膠體金或有色玻璃或塑料珠(例如，聚苯乙烯、聚丙烯、膠乳等)的比色標記。通常，通過間接的方式連接非放射性標記。通常，將配體分子(例如，生物素)與分子共價結合。然後，所述配體與另一分子(例如，抗生物素蛋白鏈菌素)結合，所述另一分子是固有可檢測的或與信號系統共價結合，所述信號系統例如可檢測的酶、螢光化合物或化學發光化合物。配體及其靶標可以與識別生物標誌物的抗體或識別生物標誌物的抗體的二抗以任何合適的方式組合使用。也可以將分子與產生信號的化合物直接綴合，例如，通過與酶或螢光團綴合。可以用作標記的酶主要是水解酶，尤其是磷酸酶、酯酶和糖苷酶，或氧化酶，尤其是過氧化物酶。示例性的螢光化合物包括但不限於，螢光素及其衍生物、羅丹明及其衍生物、丹醯和傘形酮。示例性的化學發光化合物包括但不限於，蟲螢光素和2，3_ 二氫酞嗪二酮(2， 3-dihydrophthalazinediones)。檢測標記的方法是本領域技術人員所公知的。E.診斷和預後檢測纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物從而鑑定脊柱或關節中疼痛來源位點的方法可以用來診斷或輔助診斷患有與脊柱或關節的解剖結構和生理功能相關的疼痛症候群的個體。1.脊柱疼痛的診斷和預後例如，硬膜外間隙、椎間盤或小關節中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的鑑定可以用來診斷或輔助診斷神經根病、小關節疼痛或椎間盤性疼痛。能夠將脊柱中的特定位置指示為特定個體的疼痛來源的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的量取決於多種因素，包括但不限於，患者的年齡、性別、病史等，提取生物樣品的位點以及用於檢測生物標誌物的測定形式。在一些實施方案中，不對生物樣品中的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的水平進行定量或與對照樣品直接比較，而是相對於纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的「診斷存在」進行檢測，其中「診斷存在」是指能指示獲取樣品的位置處引起疼痛的病變或損傷的存在或存在的可能性的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的量。在一些實施方案中，在簡單的測定中可檢測「診斷存在」，從而給出陽性或陰性結果， 其中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的「診斷存在」的陽性「檢測」表明獲取樣品的位置處存在引起疼痛的病變或損傷。對於待檢測的「診斷存在」，不需要對纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的水平進行定量。然而，可以使用確定纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的水平是否高於正常或對照的水平的任何方法。此外，「診斷存在」並非指纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的任何絕對量， 而是指根據生物樣品、測定條件、患者的疾病狀態等足以將受累患者中的水平與正常或對照患者的水平區分開的量。無論具體對照樣品中是否正常存在或者預計存在纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物，都可以使用所公開的方法。例如，使用特定的測定在某些正常脊柱樣品(例如，椎間盤間隙內或硬膜外間隙灌洗液)中可能無法檢測到纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物，這導致對照生物樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物完全不存在。對於這類生物樣品，「診斷存在」是指使用相同測定時纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的任何可檢測的量。然而，在其它情況下，正常或對照樣品中可能存在可檢測水平的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物，則「診斷存在」代表高於正常水平的水平，優選代表統計學上顯著高於正常水平的增加。在一些實施方案中，生物樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的「診斷存在」高於對照樣品至少約 1.5、2、5、10、100、200、500、1000倍或更多倍。對照樣品可以是取自未經受脊柱疼痛的一個個體或一組個體的樣品。可選擇地，對照樣品可以獲自未懷疑為疼痛來源的脊柱節段。例如，在經受椎間盤性疼痛的個體中，對照樣品可以獲自同一患者的未受累的或無症狀的椎間盤間隙。脊柱特定節段中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在或水平可以用來診斷或輔助診斷脊柱疼痛的具體類型，例如椎間盤性疼痛、小關節性疼痛或神經根性疼痛。此外或可選擇地，脊柱樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在或水平可以用來將脊柱病變或損傷導致的疼痛與起源於諸如肌肉疼痛的另一來源的疼痛區分開。在一些實施方案中，沿著脊柱的特定位置處的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在或水平指示該特定位置處的病變或損傷。例如，如果在L5椎間盤灌洗液中檢測到纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物，則患者在L5處有損傷或病變。此外，纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在可以用來診斷特定位置的損傷和在特定位置實施治療，無論用諸如MRI的其它的方法是否可檢測到損傷。通常，通過將治療劑給予損傷或病變的位點，即纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物存在的位點，來對患者進行治療。生物樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在或水平可以用來將患者指定為特定治療的候選者。分析獲自患者的脊柱樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物是否存在。如果在脊柱樣品中檢測到纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物，則選擇該患者進行治療。 然後，可以根據纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在或水平所確定的疾病狀況的嚴重程度，調整治療類型，例如抗炎劑或外科手術，。特定位點存在的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的水平也可用於確定受試個體的預後。例如，脊柱樣品中存在的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的水平可以表明脊柱急性損傷的程度，並且可以輔助從業者確定損傷或病變成功修復或康復所達到的程度。2.關節疼痛的診斷和預後檢測纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物從而鑑定作為治療關節相關疼痛的位點的關節的方法可以用來診斷或輔助診斷患有與附肢骨骼的滑液關節的解剖結構和生理功能相關的疼痛症候群的個體。例如，關節中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的鑑定可以用來診斷或輔助診斷骨關節炎、半月板病變、肩袖撕裂、腱或韌帶病變、軟骨溶解或肌筋膜疼痛。能指示作為治療特定個體的關節相關疼痛的位點的關節的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的量取決於多種因素，包括但不限於，患者的年齡、性別、病史等，提取生物樣品的位點以及用於檢測生物標誌物的測定形式。在一些實施方案中，不對生物樣品中的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的水平進行定量或與對照樣品直接比較，而是相對於纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的「診斷存在」進行檢測，其中「診斷存在」是指能指示獲取樣品的位置處引起疼痛的病變或損傷的存在或存在的可能性的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的量。在一些實施方案中，在簡單的測定中可檢測「診斷存在」，從而給出陽性或陰性結果， 其中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的「診斷存在」的陽性「檢測」表明獲取樣品的位置處存在引起疼痛的病變或損傷。對於待檢測的「診斷存在」，不需要對纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的水平進行定量。然而，可以使用確定纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的水平是否高於正常或對照的水平的任何方法。此外，「診斷存在」並非指纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的任何絕對量， 而是指根據生物樣品、測定條件、患者的疾病狀態等足以將受累患者中的水平與正常或對照患者的水平區分開的量。無論具體對照樣品中是否正常存在或者預計存在纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物，都可以使用所公開的方法。例如，使用特定的測定在某些正常關節樣品(例如，滑液樣品)中可能無法檢測到纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物，這導致對照生物樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物完全不存在。對於這類生物樣品，「診斷存在」是指使用相同測定時纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的任何可檢測的量。然而，在其它情況下，正常或對照樣品中可能存在可檢測水平的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物，則「診斷存在」代表高於正常水平的水平，優選代表統計學上顯著高於正常水平的增加。在一些實施方案中，生物樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的「診斷存在」高於對照樣品至少約1.5、2、5、10、100、200、 500、1000倍或更多倍。對照樣品可以是取自未經受關節相關疼痛的一個個體或一組個體的樣品。可選擇地，對照樣品可以獲自受試個體的未受累的或無症狀的關節。尤其適於獲得對照樣品的關節是被檢測纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的診斷存在的關節的對側未受累的或無症狀的關節。例如，在經受左膝疼痛的個體中，對照樣品可以獲自同一個體的右膝，只要右膝是未受累的或無症狀的。特定關節中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在或水平可以用來診斷或輔助診斷關節相關疼痛的具體類型，包括但不限於，骨關節炎、半月板病變、肩袖撕裂、腱或韌帶病變、軟骨溶解或肌筋膜疼痛。在一些實施方案中，關節中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在或水平指示該特定關節的病變或損傷。此外或可選擇地，關節樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在或水平可以用來將關節相關疼痛與來自諸如脊柱的另一解剖或生理來源的疼痛區分開。例如，與對照樣品相比，關節樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在或升高的水平可以用來將關節相關疼痛與神經根性疼痛區分開。纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的檢測可以單獨使用或與其它診斷方法聯合使用來診斷關節相關疼痛。示例性的診斷方法包括但不限於，病史和物理檢查、X射線照相、 MRI和關節內注射。然而，纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在可以用來診斷特定位置的損傷和在特定位置實施治療，無論用諸如MRI的其它方法是否可檢測到損傷。通常，通過將治療劑給予損傷或病變的位點，即纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物存在的位點，來對患者進行治療。生物樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在或水平可以用來將患者指定為特定治療的候選者。然後，可以根據纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在或水平所確定的疾病狀況的嚴重程度，調整治療類型，例如給予抗炎劑或外科手術。特定位點存在的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的水平也可用於確定受試個體的預後。例如，關節樣品中存在的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的水平可以表明關節急性損傷的程度，並且可以輔助從業者確定損傷或病變成功修復或康復所達到的程度D.監測治療功效所公開的方法也可以用來評估治療或療程的功效。例如，在指示神經根病的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的「診斷存在」為檢測陽性的神經根病患者中，可以隨著時間監測纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的水平來評估抗炎治療的功效。將取自治療後患者的生物樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的水平與取自治療前或治療早期的同一患者的樣品中的水平進行比較，水平的降低表明有效的治療。在關節樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的「診斷存在」為檢測陽性的關節相關疼痛患者中，可以隨著時間監測治療的關節中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的水平來評估抗炎治療的功效。例如，將取自治療後患者的生物樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的水平與取自治療前或治療早期的個體的樣品中的水平進行比較，水平的降低表明有效的治療。
IV.治療疼痛的方法一旦通過纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在鑑定出疼痛來源的位點，可以使用本領域內已知的任何方法來治療疼痛或治療引起疼痛的病變。例如，如果診斷為神經根病或椎間盤性疼痛或小關節性疼痛，可以應用本領域內已知的用於治療脊柱疼痛諸多方法來治療患者。合適的方法包括但不限於，椎板切開術、椎板切除術、椎間盤摘除術、微創椎間盤摘除術、經皮椎間盤摘除術、內窺鏡椎間盤摘除術、雷射椎間盤摘除術、椎間孔切開術、融合術、增生療法、其它的手術減壓、使用或使不用器械的融合術進行的減壓、也可以通過標準非手術方法來治療脊柱疼痛，包括給予留類或非留類抗炎劑。 非甾類抗炎劑(NSAID)在本領內是公知的。可以使用非留類試劑，所述非留類試劑包括 NSAID，例如布洛芬、阿司匹林或撲熱息痛。諸如糖皮質激素的留類化合物也可以用於治療， 甾類化合物通過與皮質留醇受體結合來減少炎症。本領域內已知的治療關節相關疼痛的諸多方法可以用來治療患者。合適的方法包括手術和非手術方法，包括但不限於，關節鏡清理術或給予留類或非留類抗炎劑。A.生物標誌物拮抗劑在一些實施方案中，纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的一種或多種拮抗劑可以用來治療脊柱或關節疼痛。合適的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑可以直接或間接抑制或降低纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的生物活性。其它合適的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑抑制或減少從纖連蛋白和聚集蛋白聚糖單體形成纖連蛋白和聚集蛋白聚糖複合物，或導致含有纖連蛋白和聚集蛋白聚糖的已有複合物的解離。其它合適的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑抑制或降低纖連蛋白或聚集蛋白聚糖的表達。1.抗體在一個實施方案中，纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑是抗體。與纖連蛋白或聚集蛋白聚糖特異性結合的抗體或抗體片段可以用來抑制或減少纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的形成、解離已有的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物和/或抑制或降低纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的生物活性。產生抗體的方法是公知的並且在本領域技術人員的能力之內，在下面有更詳細的描述。本文公開的抗體與纖連蛋白或聚集蛋白聚糖多肽或它們的片段特異性地結合，並且能減少或抑制纖連蛋白與聚集蛋白聚糖的結合，或纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物與介導引起疼痛的信號轉導的生物靶標的結合。其它合適的抗體與纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物特異性地結合，而不與這些多肽中的任一個單獨結合。這些抗體是特別有用的，因為它們並不幹擾纖連蛋白和聚集蛋白聚糖在複合物中的功能之外的功能。將公開的抗體稱為「阻斷性」 「功能阻斷性」或「拮抗性」抗體。用來產生抗體的免疫原可以是纖連蛋白或聚集蛋白聚糖的任何免疫原性部分。在一個實施方案中，用來產生抗聚集蛋白聚糖抗體的免疫原是聚集蛋白聚糖的G3結構域。用本領域內已知的各種方法產生免疫原，例如，使用常規重組方法進行的克隆基因的表達、合成肽複合物、從來源細胞、 表達高水平的纖連蛋白或聚集蛋白聚糖的細胞群體中進行分離。在另一個實施方案中，免疫原包含纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物。可以從來自個體的生物樣品分離複合物，或可以通過從纖連蛋白和聚集蛋白聚糖單體體外形成複合物來產生複合物。抗體可以是多克隆抗體或單克隆抗體。抗體可以是異種的、同種異體的、同基因的或以上的修飾過的形式，例如人源化抗體或嵌合抗體。抗體也可以是抗獨特型抗體。本文所用的抗體還包括抗體片段和製備為單鏈抗體或scFv而不是正常多聚體結構的抗體，所述抗體片段包括Fab和F(Eib)2片段。抗體可以是諸如IgGl、IgG2、IgG3或IgG4的IgG或 IgM、IgA、IgE或IgD同種型。可以根據所需的效應功能來選擇抗體重鏈恆定結構域。輕鏈恆定結構域可以是κ或λ恆定結構域。可以使用與纖連蛋白或聚集蛋白聚糖結合的可商購的或本領域內已知的其它抗體。例如，與纖連蛋白結合的人源化抗體在美國專利第6，329，511號和第7，183，390號中描述。
2.其它多肽在另一個實施方案中，生物標誌物拮抗劑是多肽，但並不是與纖連蛋白或聚集蛋白聚糖或它們的複合物結合的抗體。纖連蛋白結合多肽或聚集蛋白聚糖結合多肽可以用來減少或抑制包含纖連蛋白和聚集蛋白聚糖的複合物的形成和/或抑制或降低纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的生物活性。產生多肽的方法在本領域內是公知的。在一些實施方案中，所述多肽是纖連蛋白受體或聚集蛋白聚糖受體的可溶性片段。示例性的纖連蛋白受體包括纖連蛋白受體1和2。其它合適的可溶性多肽包括已知與纖連蛋白或聚集蛋白聚糖結合的病毒蛋白。例如，可以使用與各種纖連蛋白結合的嵌合病毒受體。3.小分子和其它拮抗劑應當理解，可以篩查具有拮抗活性的其它生物活性劑。在一個實施方案中，篩查候選生物活性劑的抑制或減少包含纖連蛋白和聚集蛋白聚糖的複合物的形成或解離已有複合物的能力。在另一個實施方案中，篩查候選生物活性劑的減少纖連蛋白和聚集蛋白聚糖複合物與生物靶標的結合的能力或抑制或降低纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的生物活性的能力。本文所用的術語「候選生物活性劑」是指任何分子，例如蛋白、小有機分子、小無機分子、有機金屬分子、碳水化合物(包括多糖)、多核苷酸、脂質等。通常，平行地檢測不同試劑濃度的多個測定混合物，以獲得對各種濃度的差異性反應。通常，這些濃度中的一個充當陰性對照，即在零濃度或在檢測水平以下。此外，可以使用陽性對照，即使用已知與纖連蛋白或聚集蛋白聚糖結合的試劑。候選試劑包括有機的、無機的、有機金屬的、合成的、半合成的和天然存在的小分子。候選試劑包括諸多化學種類，但通常是有機分子，優選為分子量大於100且小於約 2，500道爾頓的小有機化合物，更優選為100-2000，更優選為約100-約1250，更優選為約 100-約1000，更優選為約100-約750，更優選為約200-約500道爾頓。候選試劑包含與蛋白結構上相互作用、特別是形成氫鍵所必需的官能團，通常包括至少一個胺基、羰基、羥基或羧基，優選包括所述化學官能團中的至少兩個。候選試劑通常包含被一個或多個上述官能團取代的環形碳或雜環結構和/或芳香結構或多芳香結構。在生物分子中也發現了候選試劑，所述生物分子包括肽、糖、脂肪酸、留類、嘌呤、吡咯烷、以上的衍生物、結構類似物或組合。特別優選的是肽，例如，模擬肽。例如，可以按照WO 98156401所述製備模擬肽。從多種來源獲得候選試劑，包括合成化合物或天然化合物的庫。例如，多種手段可用於隨機和定向合成多種有機化合物和生物分子，包括隨機化寡核苷酸的表達。可選擇地，細菌、真菌、植物和動物提取物形式的天然化合物的庫是可獲得的或容易製備的。此外，通過常規的化學、物理和生化手段可容易地對天然的庫或通過合成產生的庫和化合物進行修飾。可以將已知的藥學試劑用於定向的或隨機的化學修飾以產生結構類似物，所述化學修飾例如醯化、烷化、酯化、醯胺化。在優選的實施方案中，候選生物活性劑是有機化學部分或小分子化學組合物，在本領域內可獲得很多這樣的有機化學部分或小分子化學組合物4.降低或抑制纖連蛋白或聚集蛋白聚糖表達的拮抗劑在另一個實施方案中，拮抗劑降低或抑制纖連蛋白或聚集蛋白聚糖的表達。降低或抑制纖連蛋白或聚集蛋白聚糖表達的拮抗劑包括抑制性核酸，包括但不限於，編碼纖連蛋白或聚集蛋白聚糖的核酸的特異性的核酶、三鏈形成寡核苷酸(TFO)、反義DNA、siRNA和微 RNA。有用的抑制性核酸包括與對照相比將編碼纖連蛋白或聚集蛋白聚糖的RNA的表達降低至少20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%或95%的那些核酸。通過本領域技術人員公知的方法可以檢測纖連蛋白或聚集蛋白聚糖的表達，包括northern印跡和定量聚合酶鏈式反應(PCR)。抑制性核酸及其製備方法是本領域內所公知的。例如可在httD://i.CS.hku. hk/ sirna/software/sirna. php獲得siRNA設計軟體。核酸的合成是公知的，例如參見 Molecular Cloning :A Laboratory Manual (Sambrook and Russel eds.第三版)Cold Spring Harbor, New York (2001)。術語「 siRNA」 表示小幹擾 RNA，其是無毒性的、短長度的、雙鏈RNA。通常，對siRNA的長度沒有特別的限制，只要它不表現出毒性。「siRNA」的長度可以是，例如15-49bp，優選15_35bp且更優選21_30bp。可選擇地，待表達的siRNA的最終轉錄產物的雙鏈RNA部分的長度可以是，例如15-49bp，優選15_35bp， 且更優選21-30bp。siRNA中兩條RNA鏈配對的雙鏈RNA部分並非限制於完全匹配，並且由於錯配(對應的核苷酸不是互補的)和凸起(一條鏈上缺少對應的互補核苷酸)可以含有非配對的部分。含有的非配對部分的程度應使得它們不幹擾siRNA形成。本文所用的「凸起」優選包含1-2個非配對核苷酸，且siRNA中兩條RNA鏈配對的雙鏈RNA區優選包含1_7 個，更優選1-5個凸起。此外，siRNA中兩條RNA鏈配對的雙鏈RNA區中包含的本文所用的 「錯配」的數量優選為1-7個，更優選為1-5個。在優選的錯配中，其中一個核苷酸是鳥嘌呤，另一個是尿嘧啶。這樣的錯配是由於在編碼有義RNA的DNA中的從C至T、從G至A的突變或以上突變的組合，但並非特別局限於此。此外，siRNA中兩條RNA鏈配對的雙鏈RNA 區可以包含凸起和錯配，它們的總數優選為1-7個，更優選1-5個。siRNA的末端結構可以是平的或粘性的(懸突)，只要由於該siRNA的RNAi效應， 其能沉默、降低或抑制靶基因表達。粘性(懸突)末端結構不僅限於3'懸突，也可以包括 5'懸突結構，只要它能誘導RNAi效應。此外，懸突核苷酸的數量不限於已有報導的2或3 個，可以為任何數量，只要該懸突能誘導RNAi效應。例如，懸突由1-8個，優選2-4個核苷酸組成。在本文中，將具有粘性末端結構的siRNA的總長度表示為配對的雙鏈部分的長度和包含兩端的懸突單鏈的對的長度之和。例如，對於在兩端具有4個核苷酸懸突的19bp雙鏈RNA部分，總長度表示為23bp。此外，由於該懸突序列與靶基因具有低特異性，所以它不必與靶基因序列互補(反義)或相同(有義)。此外，只要siRNA能保持其對靶基因的基因沉默效應，siRNA可以，例如在它一端的懸突部分中含有低分子量RNA(可以是諸如tRNA、rRNA或病毒RNA的天然RNA分子，或人工RNA分子)。此外，siRNA的末端結構未必如上文所述在兩端為截斷結構，而可以具有莖-環結構，其中雙鏈RNA的一側末端由連接子RNA連接。例如，雙鏈RNA區(莖-環部分)的長度可以是15-49bp，優選15-35bp，且更優選21_30bp。可選擇地，例如，待表達的siRNA的最終轉錄產物的雙鏈RNA區的長度是15-49bp，優選15_35bp，且更優選21_30bp。此外，對連接子的長度沒有特別的限制，只要它的長度不會阻礙莖部分的配對。例如，為了莖部分的穩定配對和抑制編碼該部分的DNA之間的重組，連接子部分可以具有苜蓿葉狀tRNA結構。例如，即使連接子的長度阻礙莖部分的配對，但是也可以構建包含內含子的連接子部分，使得在前體RNA加工成成熟RNA的過程中該內含子被切除，進而允許莖部分的配對。對於莖-環 siRNA，RNA中沒有環結構的任一端(頭或尾)可以具有低分子量RNA。如上述，該低分子量 RNA可以是諸如tRNA、rRNA或病毒RNA的天然RNA分子、或人工RNA分子。通過Dicer樣酶對短的莖-環前體的切割來產生miRNA ；而通過長的雙鏈RNA分子的切割來產生siRNA。miRNAs是單鏈的，而siRNA是雙鏈的。製備siRNA的方法在本領域內是已知的。因為纖連蛋白或聚集蛋白聚糖的序列是已知的，所以本領域技術人員使用公眾可獲得的信息可容易地製備能下調纖連蛋白或聚集蛋白聚糖表達的siRNA。5.負責纖連蛋白和/或聚集蛋白聚糖降解的聚集蛋白聚糖酶和基質金屬蛋白酶 (MMP' s)的抑制劑在一個實施方案中，可以將已知的抑制劑，例如已知的聚集蛋白聚糖酶或MMP' s 的螯合劑，以能有效抑制或減緩聚集蛋白聚糖片段的釋放的量給予有需要的個體，這將有效減少或消除纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的形成，進而減輕個體的疼痛。B.藥物組合物提供了包含纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑的藥物組合物。包含肽或多肽的藥物組合物可以用於通過腸胃外(肌肉內、腹膜內、靜脈內(IV)或皮下注射)、經皮(被動經皮或使用離子電滲法或電穿孔法)或經黏膜(鼻腔、陰道、直腸或舌下)途徑進行給藥。還可以使用可生物消化的插入物來給予組合物，並且可以將組合物直接遞送至諸如椎間盤、硬膜外間隙和小關節的脊柱結構或遞送至動關節。可以將組合物配製成適於每種給藥途徑的劑量形式。還可以將包含不是肽或多肽的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑的組合物配製成用於經腸給藥。將本文所公開的拮抗劑以治療有效量給予個體。本文所用的術語「有效量」或「治療有效量」表示足以治療、抑制或緩解有需要的個體的脊柱疼痛的劑量。根據各種因素，精確的劑量會改變，例如取決於個體的可變因素(例如，年齡等)、被治療的損傷或病變、以及正實行的治療。對於本文公開的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑，當進行進一步的研究時，關於治療不同患者的不同疾病狀態的合適劑量水平的信息會顯現出來，並且本領域技術人員在考慮接受者的治療背景、年齡和一般健康狀況的情況下能確定合適的劑量。所選的劑量取決於給藥途徑和所需的治療持續時間。通常，給予哺乳動物的劑量水平為每天 0. OOl-lOmg/kg體重。通常，對於靜脈內注射或輸注，劑量可以更低。在一個實施方案中，將纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑的水性溶液通過腸胃外注射、椎間盤內注射、小關節內注射、鞘內注射、硬膜外注射或關節注射進行給藥，所述拮抗劑包括含有肽和多肽的那些拮抗劑。在優選的實施方案中，將纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑直接給予個體中疼痛來源的脊柱區域內。例如，當在硬膜外間隙中檢測到纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物時，可以將纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑通過直接注射入硬膜外間隙中而進行給藥。可選擇地，當在椎間盤間隙、小關節或動關節檢測到纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物時，可以將纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑通過直接注射入這些間隙中而進行給藥。製劑也可以為懸液或乳液形式。通常，提供的藥物組合物包含有效量的肽或多肽， 且任選地包含藥學上可接受的稀釋劑、防腐劑、增溶劑、乳化劑、佐劑和/或載體。這類組合物包含稀釋劑，無菌水、具有不同緩衝容量的(例如，Tris-HCl、醋酸鹽、磷酸鹽)、pH和離子強度的緩衝鹽水；並且任選地包含諸如去垢劑和增溶劑(例如，吐溫 20、吐溫 80、 聚山梨醇酯80)的添加劑、抗氧化劑(例如，抗壞血酸、焦亞硫酸鈉)以及防腐劑(例如， Thimersol、苯甲醇)和填充物質(例如，乳糖、甘露醇)。非水性溶劑或介質的實例是丙二醇、聚乙二醇、諸如橄欖油和玉米油的植物油、明膠以及諸如油酸乙酯的可注射的有機酯。 還可以將製劑凍幹，在即將使用前進行再溶解/再懸浮。例如，通過使製劑通過細菌截留濾器進行過濾、通過將滅菌劑摻入組合物、通過對組合物進行照射或通過加熱組合物可以將製劑滅菌。也可以將纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑以控釋製劑進行給藥，所述拮抗劑包括含有肽和多肽的那些拮抗劑。可以製備控釋聚合物裝置，用於在植入聚合物裝置 (杆、圓柱體、薄膜、盤)或注射(微顆粒)之後的系統性長期釋放。基質可以為諸如微球的微顆粒形式，其中肽分散在固體聚合物基質或微膠囊中，其中核心是不同於聚合物殼的材料，且所述肽分散或懸浮於所述核心中，所述核心的性質可以為液體或固體。除非本文具體定義，微顆粒、微球和微膠囊可交換使用。可選擇地，聚合物可以被鑄為範圍從納米至4釐米的薄板或薄膜、可以是通過研磨或其它標準技術產生的粉末或者甚至可以是諸如水凝膠的凝膠。非生物可降解的或生物可降解的基質都可以用於遞送纖連蛋白_聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑，但是優選生物可降解的基質。這些基質可以是天然的或合成的聚合物，但是優選合成的聚合物，這是由於對合成的聚合物的降解和釋放性質可以更好地表徵。基於所需的釋放時間來選擇聚合物。在一些情況下，線性釋放是最有用的，而在其它情況下，脈衝釋放或「集中釋放(bulk release)」可提供更有效的結果。聚合物可以為水凝膠形式(通常吸收以重量計多至約90%的水)，且可任選地與多價離子或聚合物交聯。可以通過溶劑蒸發、噴霧乾燥、溶劑提取和本領技術人員已知的其它方法形成基質。可以使用開發用於製備藥物遞送微球的任何方法來製備可生物消化的微球，例如， 如 Mathiowitz and Langer, J controlledled Release, 5 13-22 (1987) ；Mathiowitz, et al. ， Reactive Polymers, 6 275-283 (1987) ； L^i,^ Mathiowitz, et al. ， J Appl. Polymers Sci, 35 755-774(1988)中所描述。可以將所述裝置製成用於治療植入或注射區域的局部釋放或製成用於系統性遞送，所述局部釋放遞送的劑量通常遠小於全身治療的劑量。可以將這些裝置皮下植入或注射入肌肉、脂肪，或可以吞服這些裝置。
V.試劑盒利用諸如免疫測定的特異性結合測定的檢測方法特別適於對患者進行現場醫療應用。這類方法允許對患者進行立即診斷和/或預後評價。還提供了用於上述診斷、研究和治療應用的試劑盒。在診斷和研究應用中，這類試劑盒可以包括以下中的任何一種或全部測定試劑、緩衝液和用於公開的生物標誌物的選擇性結合伴侶，以上所有都可以裝入適於運輸的容器中。選擇性結合伴侶可以包括與纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物選擇性地結合的抗體，或用於聯合使用的與這些組分的每一種單獨結合的抗體。在一些實施方案中，試劑盒包括位於連續固體表面上的選擇性結合伴侶。示例性的試劑盒包括具有檢測結合伴侶和用於檢測纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的陽性對照的容器。所述陽性對照可以是纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物或用於產生纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的組分。纖連蛋白和聚集蛋白聚糖序列可以是人的序列或聚集蛋白聚糖和纖連蛋白與人的序列同源的任何其它物種。纖連蛋白和聚集蛋白聚糖兩者可以來自相同的物種或不同的物種。可以從天然來源純化纖連蛋白和/或聚集蛋白聚糖片段，或通過固相方法合成或通過重組方法方法產生纖連蛋白和/或聚集蛋白聚糖片段。試劑盒還可以包括被結合在基底上的捕獲結合伴侶，所述基底例如連續的固體表面。捕獲結合伴侶通常與纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物中的聚集蛋白聚糖結合，檢測結合伴侶與纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物中的纖連蛋白結合，但是應當理解，捕獲結合伴侶可以與纖連蛋白結合，檢測結合伴侶可以與聚集蛋白聚糖結合。在一些實施方案中，用於提取生物樣品的裝置也包括在試劑盒中。在一些實施方案中，諸如注射器、針和導管的提取裝置，可以直接地將生物樣品從可能受累的椎間盤或硬膜外間隙或關節提取至含有生物標誌物選擇性結合伴侶的小室中。因此，在某些情況下，試劑盒允許對生物標誌物的存在和/或水平進行立即評價。這些試劑盒類型特別適於現場醫療應用。現場醫療診斷系統的實例在美國專利第6，267，722號中描述。其它裝置的設計也可以進行調整而用於本發明的試劑盒，例如美國專利第7，198，522號和第6，818，455號中描述的裝置。在一些實施方案中，試劑盒可以包括用於從脊柱或關節提取生物樣品的溶液。包括在試劑盒中的該溶液可以是例如，生理溶液，例如鹽水。在一些實施方案中，試劑盒可以包括一種或多種治療劑，可以通過與提取樣品所用的相同的裝置或通過不同的裝置給予所述治療劑。此外，試劑盒可以包括帶有如何使用試劑盒提供的材料的指導(即，流程)的說明性材料。說明性材料通常包括書面或印刷材料，但也可以將它們提供為能存儲這類操作說明並能將它們與終端用戶聯繫起來的任何媒介。合適的媒介包括但不限於，電子存儲媒介 (例如，磁碟、磁帶、盒式磁帶、晶片)和光學介質(例如，CD ROM)。所述介質可以包括提供說明性材料的網際網路網址。
實施例實施例1.應用色譜法從人的樣品中純化纖連蛋白_聚集蛋白聚糖複合物為了從椎間盤灌洗樣品或滑液中純化纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物，進行尺寸排阻色譜法(SEC)，隨後進行陰離子交換色譜法。使用配備有BioLogic QuadTec ; UV/VIS檢測器和傳導性監測器的Bio-Rad BioLogic DuoFlow · 計算機控制的HPLC系統進行SEC 和陰離子交換色譜法。使用串聯的兩個Bio-Rad. SEC-400-5柱進行SEC，其中使用pH8. O的50mM Tris/ HClUOOmM NaCl進行等度洗脫。分析得到的流分的總蛋白含量(A28tlnm和A215J和發現的由聚集蛋白聚糖片段和纖連蛋白複合物組成的生物標誌物的存在。圖1顯示了有症狀樣品的 SEC-HPLC洗脫譜(A215J，圖2顯示了相同條件下的無症狀樣品的SEC-HPLC洗脫譜。隨後的實驗表明流分14和15是僅有的含有通過成熟的測定可檢測到纖連蛋白_聚集蛋白聚糖複合物水平的流分。基於該柱的分子量標準，推測流分14和15中洗脫的蛋白的分子量為 250Kda-700Kda。可以用陰離子交換色譜法對纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物進行進一步的純化。 將所述複合物與柱結合，用PH 8. O的50mM Tris/HCl、150mM NaCl平衡，並用Tris/HCl緩衝液中的150mM NaCl-230mM NaCl的線性鹽梯度從柱上洗脫複合物。還可以用陽離子交換色譜法對纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物進行純化。將所述複合物與柱結合，用PH 6. O的50mM醋酸鈉、IOOmM NaCl平衡，並用醋酸鹽緩衝液中的IOOmM NaCl-300mM NaCl的線性鹽梯度從柱上洗脫複合物。實施例2.銀染和使用抗纖連蛋白和抗聚集蛋白聚糖(G3結構域)的特異性抗體的Western印跡分析實施例1說明了通過SEC-HPLC對人的樣品進行流分分離。將來自SEC分析的流分14和15進行SDS-PAGE分離，隨後進行銀染或Western印跡，以確定流分中蛋白的大小並探測它們的一致性。使用抗纖連蛋白單克隆特異性抗體(DiaPharma Group, Inc.來自 DPGR028A纖連蛋白ELISA試劑盒的檢測抗體)和抗聚集蛋白聚糖單克隆特異性抗體(G3 結構域)(Santa Cruz Biotechnology，聚集蛋白聚糖C20，sc-16493)，利用標準方法進行 Western 印跡。銀染分析證實兩個流分中都存在大於250Kd範圍的蛋白。使用抗纖連蛋白單克隆抗體和抗聚集蛋白聚糖單克隆抗體(G3結構域)的Western印跡顯示出400_600Kd分子量範圍的免疫反應條帶，這表明蛋白共同遷移通過聚丙烯醯胺凝膠。數據表明蛋白複合物的存在，該蛋白複合物與抗纖連蛋白抗體和抗聚集蛋白聚糖抗體(G3)都發生免疫反應。實施例3.與纖連蛋白共同遷移通過聚丙烯醯胺凝膠的聚集蛋白聚糖結構域的分析如實施例1所述，對單個人類樣品進行尺寸排阻色譜，將來自SEC的洗脫流分 8-20進行SDS-PAGE分離，然後轉移至膜，用於使用多克隆抗聚集蛋白聚糖Gl抗體(Santa Cruz Biotechnology，聚集蛋白聚糖D20，sc-16492)、抗聚集蛋白聚糖G2抗體(Santa Cruz Biotechnology，聚集蛋白聚糖E12，sc-67513)或抗聚集蛋白聚糖G3抗體(Santa Cruz Biotechnology，聚集蛋白聚糖 C20，sc-16493)進行的 Western 印跡。使用抗聚集蛋白聚糖G3結構域抗體的Western印跡顯示出流分8_20中不同分子大小的免疫反應條帶，這些條帶對應於聚集蛋白聚糖的含有G3結構域的不同蛋白水解片段。使用抗聚集蛋白聚糖Gl結構域抗體的Western印跡顯示出流分8_20中的免疫反應條帶，這些條帶表現出的條帶模式不同於用抗聚集蛋白聚糖G3結構域抗體時所觀察到的。使用抗聚集蛋白聚糖G2結構域抗體的Western印跡顯示出流分8_20中的免疫反應條帶，這些條帶表現出的條帶模式不同於用抗聚集蛋白聚糖Gl或G3結構域抗體時所觀察到的。對使用抗聚集蛋白聚糖Gl、G2和G3抗體所獲得的條帶模式的分析提示聚集蛋白聚糖的G1、 G2和G3結構域存在於與纖連蛋白或纖連蛋白片段形成的不同的複合物中。實施例4.纖連蛋白-聚集蛋白聚糖蛋白複合物的異相ELISA分析前面的實施例提示人類樣品中存在纖連蛋白和聚集蛋白聚糖(G3)複合物。為了進一步證實該複合物的存在，開發和使用了異相ELISA夾心測定。材料和方法如實施例1所述，對單個人類樣品進行尺寸排阻色譜，並將流分14和15用於進一步的分析。將抗纖連蛋白單克隆抗體(DiaPharma Group, Inc.來自DPGR028A纖連蛋白ELISA 試劑盒的檢測抗體)固定於聚苯乙烯平板上來發揮捕獲抗體的功能。然後，將來自人類樣品SEC的流分14和15等分到含有纖連蛋白捕獲抗體的平板上。孵育之後，棄去樣品，洗滌平板，並將平板與作為檢測抗體的抗聚集蛋白聚糖G3結構域多克隆抗體(Santa Cruz Biotechnology，聚集蛋白聚糖C20，sc-16493)孵育。洗滌平板，使用HRP標記的二抗和然後進行的光學檢測來檢測纖連蛋白與聚集蛋白聚糖G3結構域的複合物的存在。還進行了其它的實驗，其中將抗聚集蛋白聚糖G3結構域抗體用作捕獲抗體，將抗纖連蛋白抗體用作檢測抗體。流分14顯示了最高的光密度，流分15也是陽性的但光密度較低。這些結果表明在 SEC流分中存在相互作用的纖連蛋白和聚集蛋白聚糖(G3結構域)不均一複合物，該複合物與相互作用的蛋白複合物的分子量一致，無論哪種抗體用於捕獲和哪種抗體用於檢測。實施例5.用加熱和還原劑將纖連蛋白和聚集蛋白聚糖(G3)複合物解離為了進一步證實含有纖連蛋白和聚集蛋白聚糖G3結構域的複合物的存在，測試了加熱和還原劑對Western印跡上條帶遷移的作用。材料和方法如實施例1所述，對單個人類樣品進行尺寸排阻色譜，並將洗脫的流分14和15用於進一步的分析。在4-20% SDS-聚丙烯醯胺凝膠上將來自流分14和15的蛋白分離。對樣品不進行處理，或在沸水浴中加熱3分鐘處理樣品，或在還原劑DTT存在下在沸水浴中加熱3分鐘處理樣品。然後如上面的實施例所述，將蛋白轉移到膜上，用於使用抗聚集蛋白聚糖G3結構域單克隆抗體或抗纖連蛋白單克隆抗體的Western印跡。結果當沒有通過加熱或用還原劑處理樣品時，Western印跡顯示了與抗纖連蛋白單克隆抗體和抗聚集蛋白聚糖(G3)單克隆抗體免疫反應的單一條帶。當通過在沸水浴中加熱3分鐘處理樣品時，隨後的Western印跡顯示了單一的抗纖連蛋白和抗聚集蛋白聚糖(G3)免疫陽性條帶被分成多個較低分子量的條帶。這與纖連蛋白-聚集蛋白聚糖(G3結構域)複合物的二聚體形式被部分解離為纖連蛋白單體和聚集蛋白聚糖(G3結構域)複合物是一致的。當在DTT存在下在沸水浴中加熱3分鐘處理樣品時，隨後的Western印跡顯示了單一的抗纖連蛋白和抗聚集蛋白聚糖(G3)免疫陽性條帶被分成多個較低分子量的條帶。 這與纖連蛋白-聚集蛋白聚糖(G3結構域)複合物被解離為分別的纖連蛋白和聚集蛋白聚糖(G3結構域)亞單元是一致的。此外，纖連蛋白被分解為由二硫鍵保持在一起的數個肽。本實施例表明纖連蛋白和聚集蛋白聚糖(G3結構域)陽性條帶的凝膠遷移特性可以受加熱和還原的影響，這與蛋白_蛋白複合物的解離是一致的。實施例6.纖連蛋白-聚集蛋白聚糖(G3)複合物作為人椎間盤疼痛的生物標誌物的研究對通過臨床和放射照相特徵而被診斷為腰部髓核突出(HNP)的45歲女性通過椎間盤造影術進行進一步的評估。通過使用Phirrmarm評級的放射照相評估確定椎間盤退變的程度。還對個體進行疼痛的直觀類比評級(VAS)，患者報告的VAS值為5。VAS為1_10級， 1相當於無疼痛而10相當於最強烈的疼痛。在進行椎間盤造影術之前，用椎間盤間隙灌洗法(方法6)對人椎間盤的椎間盤內間隙進行取樣。在椎間盤造影術進行期間，獲得每個腰椎間盤節段的術中VAS值。如表1所示，在表現出退變的最大程度的放射照相測量值以及強烈的術中疼痛測量值的兩個腰椎間盤節段中，生物標誌物複合物ELISA都是陽性的。表1 經受MRI和椎間盤造影術程序的患有疼痛的同一名自願者不同腰部水平的特徵。
權利要求
1.包含纖連蛋白和聚集蛋白聚糖的分離的複合物，其中所述複合物分離自脊柱樣品或關節樣品。
2.如權利要求1所述的複合物，其中所述複合物包含聚集蛋白聚糖的G1、IGD、G2、KS、 CS1、CS2或G3結構域或上述結構域的片段、纖連蛋白及其片段、或以上的組合。
3.如權利要求1所述的複合物，其中所述複合物包含纖連蛋白的聚集蛋白聚糖結合片段。
4.如權利要求1所述的複合物，其中所述纖連蛋白和聚集蛋白聚糖是重組的、天然的或合成的或以上的組合。
5.鑑定個體中用於治療脊柱疼痛或炎症的治療位點的方法，包括a)從所述個體脊柱中的一個或多個可能治療位點獲得一個或多個生物樣品，以及b)在來自治療脊柱疼痛的治療位點的所述一個或多個生物樣品中選擇具有一種或多種脊柱疼痛相關的生物標誌物的治療位點。
6.如權利要求5所述的方法，其中所述一種或多種生物標誌物由纖連蛋白和聚集蛋白聚糖的複合物、或它們的片段、或以上片段的複合物、或上述的組合組成。
7.如權利要求5所述的方法，其中所述一種或多種生物標誌物是纖連蛋白或纖連蛋白的片段與聚集蛋白聚糖或聚集蛋白聚糖的片段的複合物。
8.如權利要求7所述的方法，其中所述生物標誌物包含聚集蛋白聚糖的G3結構域或所述G3結構域的片段。
9.如權利要求5所述的方法，其中使用選自以下的技術獲得所述一個或多個生物樣品灌洗、抽吸、注射-抽吸、活組織檢查、細針抽吸活組織檢查、組織芯活檢、內窺鏡活組織檢查或切開活組織檢查；以及其中所述樣品獲自選自以下的脊柱間隙硬膜外間隙、椎間盤內間隙、椎間盤外間隙或小關節關節內間隙；以及其中通過選自下述到達脊柱的方式獲得樣品經椎間孔、經尾部、椎板間、經皮、內窺鏡、切開、從前部、從後部或從側部；以及其中抽吸液、組織或液體樣品選自注射的鹽水、其它注射的水性溶液、注射的非水性液體和溶液、滑液、髓核、纖維環、硬膜外脂肪、骨、關節囊、韌帶或腱；以及其中藉助於其它吸收劑、吸附劑、或選自海綿、芯、紗布、縫線、親水性導管、疏水性導管或空腔導管的毛細材料或裝置收集樣品液體或組織。
10.如權利要求5所述的方法，其中使用色譜技術、結合測定、免疫技術或質譜法來檢測所述一種或多種生物標誌物。
11.如權利要求5所述的方法，其中所述治療位點是疼痛或炎症來源位點。
12.鑑定個體中作為治療關節相關疼痛或炎症的位點的關節的方法，所述方法包括a)從所述個體的一個或多個關節獲得一個或多個生物樣品，所述一個或多個關節是關節相關疼痛或炎症的可能治療位點，以及b)在所述一個或多個生物樣品中選擇具有一種或多種與關節相關疼痛或炎症相關的生物標誌物的關節作為治療關節相關疼痛或炎症的位點。
13.如權利要求12所述的方法，其中所述一種或多種生物標誌物選自纖連蛋白、聚集蛋白聚糖、它們的片段、或纖連蛋白、聚集蛋白聚糖或它們的片段的複合物、或以上的組合。
14.如權利要求13所述的方法，其中所述一種或多種生物標誌物是纖連蛋白或纖連蛋白的片段與聚集蛋白聚糖或聚集蛋白聚糖的片段的複合物。
15.如權利要求14所述的方法，其中所述生物標誌物是纖連蛋白或纖連蛋白的片段與聚集蛋白聚糖的G3結構域或所述G3結構域的片段的複合物。
16.如權利要求12所述的方法，其中通過選自以下的方法獲得所述一個或多個生物樣 灌洗、抽吸、注射-抽吸、活組織檢查、細針抽吸活組織檢查、組織芯活檢、內窺鏡活組織檢查或切開活組織檢查；以及其中所述樣品獲自選自以下的關節種類滑膜關節(即動關節)、微動關節和不動關節；以及其中所述關節選自肩關節、肘關節、腕關節、掌關節、指(趾)關節、肩鎖關節、胸鎖關節、肩胛關節、肋關節、骶髂關節、髖關節、膝關節、踝跗關節、蹠關節；以及其中抽吸液、組織或液體樣品選自注射的鹽水、其它注射的水性溶液、注射的非水性液體和溶液、滑液、髓核、纖維環、硬膜外脂肪、骨、關節囊、韌帶或腱；以及其中藉助於其它吸收劑、吸附劑、或選自海綿、芯、紗布、縫線、親水性導管、疏水性導管或空腔導管的毛細材料或裝置收集樣品液體或組織。
17.如權利要求12所述的方法，其中使用分離法、免疫技術或質譜法來檢測一種或多種生物標誌物。
18.如權利要求12所述的方法，其中所述治療位點是疼痛或炎症來源位點。
19.用於檢測樣品中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的試劑盒，所述試劑盒包括包含檢測結合伴侶的容器；和用於檢測纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的陽性對照，其中所述陽性對照包含權利要求1所述的複合物。
20.如權利要求19所述的試劑盒，還包含捕獲結合伴侶，其中所述捕獲結合伴侶被結合在基底上。
21.如權利要求20所述的試劑盒，其中所述捕獲結合伴侶與纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物中的聚集蛋白聚糖結合，且所述檢測結合伴侶與纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物中的纖連蛋白結合。
22.如權利要求19所述的試劑盒，其中所述捕獲結合伴侶與纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物中的纖連蛋白結合，且所述檢測結合伴侶與纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物中的聚集蛋白聚糖結合。
23.如權利要求19所述的試劑盒，其中所述捕獲結合伴侶和所述檢測結合伴侶與纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物上的不同表位結合。
24.如權利要求19所述的試劑盒，其中所述捕獲結合伴侶和所述檢測結合伴侶與纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物上的相同表位結合。
25.如權利要求19所述的試劑盒，其含有陽性對照或參考標準，所述陽性對照或參考標準包含來自相同或不同物種的纖連蛋白和聚集蛋白聚糖或它們的片段的複合物。
26.如權利要求25所述的試劑盒，其中第一物種是人。
27.如權利要求25所述的試劑盒，其中第二物種選自牛、豬和馬或纖連蛋白或聚集蛋白聚糖序列與人同源的任何哺乳動物。
28.如權利要求25所述的試劑盒，其中第一物種是人且第二物種是牛。
29.如權利要求19所述的試劑盒，其中所述複合物包含聚集蛋白聚糖的Gl、IGD、G2、 KS、CS1、CS2或G3結構域、上述結構域的纖連蛋白結合片段、或以上的組合。
30.如權利要求19所述的試劑盒，其中所述複合物包含纖連蛋白的聚集蛋白聚糖結合片段。
31.如權利要求19所述的試劑盒，其中所述纖連蛋白和聚集蛋白聚糖是重組的、天然的或合成的或以上的組合。
32.如權利要求19所述的試劑盒，還包括用於從個體獲得生物樣品的裝置。
33.如權利要求19所述的試劑盒，還包括指示病變或損傷的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的參考水平。
34.如權利要求19所述的試劑盒，其中所述檢測結合伴侶與纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的表位結合。
35.如權利要求34所述的試劑盒，其中所述檢測結合伴侶不與單獨的纖連蛋白或單獨的聚集蛋白聚糖可檢測地結合。
36.如權利要求19所述的試劑盒，其中所述捕獲結合伴侶和所述檢測結合伴侶選自 抗體或其抗原結合片段、纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物受體或所述受體的能與纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物結合的片段、或以上的組合。
37.抑制或減少脊柱疼痛或炎症的方法，包括a)按照權利要求5的方法鑑定脊柱中的治療位點，以及b)對所述治療位點實施治療，以抑制或減少脊柱疼痛或炎症。
38.如權利要求37所述的方法，其中所述治療選自椎板切開術、椎板切除術、椎間盤摘除術、微創椎間盤摘除術、經皮椎間盤摘除術、內窺鏡椎間盤摘除術、雷射椎間盤摘除術、椎間孔切開術、融合術、增生療法、其它的手術減壓、使用或使不用器械的融合術進行的減壓、 運動節省裝置、椎間盤成形術、小關節成形術、椎間裝置、動態固定裝置、椎弓根螺釘、杆、 鉤、椎間體裝置、髓核置換或增大裝置、纖維環修復或修復裝置或給予留類或非留類抗炎劑。
39.抑制或減少脊柱疼痛或炎症的方法，包括給予有需要的個體有效量的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑，以拮抗所述個體脊柱中的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物。
40.如權利要求39所述的方法，其中所述纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑抑制或減少纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的形成、導致纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的解離或抑制或減少個體脊柱中的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的生物活性。
41.如權利要求39所述的方法，其中所述纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑是多肽。
42.如權利要求39所述的方法，其中所述纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑包括與纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的表位結合的抗體，所述纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物由纖連蛋白、聚集蛋白聚糖或它們的片段形成。
43.如權利要求42所述的方法，其中所述抗體與纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物選擇性地結合，並且不與單獨的纖連蛋白或單獨的聚集蛋白聚糖可檢測地結合。
44.鑑定待治療的椎間盤以抑制或減少有需要的個體的脊柱疼痛或炎症的方法，包括測定所述個體的兩個或更多個椎間盤中的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的水平； 選擇與沒有脊柱疼痛或炎症的個體椎間盤中纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的水平相比具有升高的、降低的或不同的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物水平的椎間盤用於治療。
45.如權利要求44所述的方法，其中用權利要求5的方法測定纖連蛋白的水平。
46.選擇個體進行脊柱疼痛或炎症治療的方法，包括分析從所述個體獲得的脊柱樣品的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物；以及如果在所述脊柱樣品中檢測到纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物，則選擇該個體進行脊柱疼痛治療。
47.如權利要求45所述的方法，其中使用選自以下的技術獲得所述脊柱樣品灌洗、抽吸、注射-抽吸、活組織檢查、細針抽吸活組織檢查、組織芯活檢、內窺鏡活組織檢查或切開活組織檢查；以及其中所述樣品獲自選自以下的脊柱間隙硬膜外間隙、椎間盤內間隙、椎間盤外間隙或小關節關節內間隙；以及其中通過選自下述達到脊柱的方式獲得樣品經椎間孔、經尾部、椎板間、經皮、經內窺鏡、切開、從前部、從後部或從側部；以及其中抽吸液、組織或液體樣品選自注射的鹽水，其它注射的水性溶液、注射的非水性液體和溶液、滑液、髓核、纖維環、硬膜外脂肪、骨、關節囊、韌帶或腱；以及其中藉助於其它吸收劑、吸附劑、或選自海綿、芯、紗布、縫線、親水性導管、疏水性導管或空腔導管的毛細材料或裝置收集樣品液體或組織。
48.藥物組合物，包含能有效減少脊柱疼痛或關節疼痛或炎症的量的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑。
49.抑制或減少關節相關疼痛或炎症的方法，包括a)按照權利要求12的方法鑑定作為治療關節相關疼痛或炎症的位點的關節，以及b)對所述治療位點實施治療，以抑制或減少關節相關疼痛或炎症。
50.如權利要求49所述的方法，其中所述治療選自手術方法或給予留類或非留類抗炎劑。
51.抑制或減少關節相關疼痛或炎症的方法，包括給予有需要的個體有效量的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑，以拮抗所述個體的一個或多個關節中的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物。
52.如權利要求51所述的方法，其中所述纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑抑制或減少纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的形成、導致纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的解離或抑制或減少所述個體的一個或多個關節中的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的生物活性。
53.如權利要求52所述的方法，其中所述纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑是多肽。
54.如權利要求53所述的方法，其中所述纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物拮抗劑包括與纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的表位結合的抗體，所述纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物由纖連蛋白、聚集蛋白聚糖或它們的片段形成。
55.如權利要求M所述的方法，其中所述抗體相對於纖連蛋白或聚集蛋白聚糖與纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物選擇性地結合。
全文摘要
提供了生物標誌物和檢測它們的方法，所述生物標誌物包括脊柱或關節疼痛和炎症相關的分離的纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物。還提供了通過檢測纖連蛋白-聚集蛋白聚糖複合物的存在或升高的水平來鑑定治療疼痛和炎症中脊柱或關節中的治療位點的方法。還提供了治療脊柱或關節疼痛和炎症的方法。
文檔編號G01N33/68GK102246045SQ200980149541
公開日2011年11月16日 申請日期2009年9月30日 優先權日2008年10月16日
發明者劉易斯·S·漢納, 蓋塔諾·J·斯谷德瑞, 羅伯特·寶瑟 申請人:希託尼克斯公司