包含天然的環加氧酶抑制劑的保健食品添加劑的製作方法

2023-06-23 16:07:31 3

專利名稱：包含天然的環加氧酶抑制劑的保健食品添加劑的製作方法
相關申請本申請要求1999年8月27日提交的美國臨時申請系列號60/151,280的優先權，題目是「從植物中濃縮類黃酮的方法」。本申請也與1999年8月27日提交的系列號為60/151,278的美國臨時申請有關並且將其特別在此引入作為參考。背景本發明涉及可用於減輕疼痛或者炎症的保健食品添加劑，其也可用於抑制與疼痛或者炎症傳遞有關係的生化途徑。本食品添加劑包含類黃酮，更特別地，包含某些花色素苷。
當今，許多消費者尋求合成藥劑的天然代用品以治療日常生活中經受的各種疾病。因此，最近，包含天然物質，如St.Johns麥芽汁，銀杏biloba，人參及其它的保健食品添加劑已經上市，其可用於各種目的。然而，迄今為止，人們相信，沒有任何包含天然物質的產品在減輕疼痛和/或炎症方面可以與非甾族消炎藥(「NSAIDs」)相媲美。
目前，疼痛和炎症通常用阿司匹林，布洛芬(Motrin，Advil)以及其它類似的通常被稱為NSAIDs的物質來治療。炎症部分地由被稱為前列腺素的一類化合物傳遞，它由主體在受到機械、熱、化學、細菌及其它傷害時作為反應而釋放(MonCada等人，Handbook of Exp.Pharm.，卷50-1，Springer Verlag，588-616頁，1978年；Samuelsson，Science，220568-575頁，1983年；Davies等人，Ann.Rev.Immunol.2335-357，1984年)，前列腺素是由普遍存在的微粒體酶類複合體以分段的方式得以合成。在該生物合成途徑中，第一種酶是前列腺素內過氧化物合酶。該酶在本領域中也被稱作脂肪酸環加氧酶。該酶有兩種異構體形式，分別被稱為環加氧酶1(COX-1)和環加氧酶-2(COX-2)(Smith，Am.J.Physiol.，268F181-F191，1992年)。
雖然許多物質，如阿司匹林可抑制前列腺素的產生並且因此可以抑制疼痛或者炎症，但它們可能會引起胃的問題和/或潰瘍。為解決這些問題，已經開發出許多針對特殊的痛覺傳導通道的藥，希望減少一些與阿司匹林、布洛芬及其它相似的物質有關的問題，如果不能完全將其消除的話。上述藥之一是CelebrexTM，其明顯把特殊的痛覺傳導通道作為目標，因此不存在一些與如阿司匹林的物質有關的缺點。尤其是，NSAIDs通過抑制酶通過人體中花生四烯酸/前列腺素通道而阻止前列腺素的產生。可是，許多藥，如CelebrexTM，把COX-1和COX-2區分開來，被認為其具有較少的與通常NSAIDs有關的副作用。
正如所指出的那樣，與合成藥物相比，許多消費者更喜歡天然物質。因此，顯然需要一種天然的且藥理學上可接受的消炎藥組合物，其可如人們所希望的那樣優先抑制COX-2酶。本發明通過提供包含一種提取物的保健食品添加劑而解決上述需求，所述提取物是從一種或多種Vaccinium屬植物原料中提取出來的，其含有能減輕疼痛、消炎和/或優先抑制COX-2的天然活性成分。該添加劑包含一定量的所述成分，其與其它組分的乾重比例顯著超過從植物物料中獲得的汁液中存在的所述成分的乾重比例。一般情況下，該活性成分含有類黃酮和，尤其是花色素苷。
在具體的實施方案中，果實選自甜櫻桃、酸櫻桃、西印度櫻桃、李子、歐洲越桔、黑莓、醋慄、北美沙果、越桔、草莓、酸果蔓紅、博伊森樹莓、葡萄、覆盆子、接骨木果及其混合物。在某些實施方案中，提取物的消炎活性通過抑制環加氧酶傳遞。在更特別的實施方案中，提取物對環加氧酶-2(COX-2)的抑制活性大於其對環加氧酶-1(COX-1)的抑制活性。在優選實施方案中，COX-2抑制活性與COX-1抑制活性之比為約1∶1-25∶1。當然，這是一個例證的比例範圍，這兩個值之間的任何比值同樣特別適合。
在某些實施方案中消炎活性由類黃酮傳遞，所述類黃酮選自花青素-3-糖苷，花青素-3-葡糖基芸香苷；花青素-3-龍膽二糖苷；花青素-3-芸香苷，甲基花青素-3-芸香苷，甲基花青素，花青素，花青素-3-槐糖苷，花葵素，翠雀素，3』-甲花翠素，錦葵苷元，堪非醇，橙皮苷，龍膽翠雀鹼，桔梗皂苷，瓜菊酯及其混合物。在一個特別關注的實施方案中，該果實提取物是接骨木果果實提取物，北美沙果果實提取物，酸櫻桃果實提取物或其混合物。在另一個優選實施方案中，該食品添加劑含有接骨木果提取物，歐洲越桔提取物及櫻桃提取物，優選酸櫻桃提取物。
本發明還注意到花色素苷水解形式，花青素與花色素苷相比，顯示出增加的COX抑制活性。因此，本發明的添加劑將上述類黃酮(花色素苷)引入添加劑中，以便使花色素苷在活體內水解以提供COX抑制活性。
食品添加劑可以製成凝膠，膠囊，片劑，糖漿，飲料或粉末。製造上述劑型的方法對於本領域技術人員來說是眾所周知的。另一方面，該食品添加劑還可以包含另外的添加劑，其選自維生素，礦物質，輔酶，纖維，藥草浸液或其結合。特別優選的藥草浸液包括姜提取物和乳香樹提取物。維生素可以選自維生素A，維生素D，維生素E，維生素B12，維生素B2，煙酸，泛酸，維生素B1，膽鹼，葉酸，維生素H，維生素K和維生素C。礦物質可以選自鈷，銅，鐵，錳，鋅和硒或其結合。
在具體實施方案中，消炎活性比天然果實的消炎活性大約2-100倍。在其它實施方案中，食品添加劑減輕疼痛的性能優於阿司匹林。
同樣關注具有消炎性能的食品添加劑，其中該食品添加劑含有選自歐洲越桔提取物，櫻桃提取物，接骨木果的果實提取物及其混合物，其消炎活性大於所述天然果實中發現的消炎活性。在具體的實施方案中，該食品添加劑還含有與以上所述的北美沙果果實提取物或其它果實提取物。
也提供在細胞中抑制COX-2活性的方法，包括使細胞與果實提取物接觸，所述果實提取物選自歐洲越桔，櫻桃，接骨木果提取物及其混合物，其消炎活性大於天然果實中發現的消炎活性。特定的實施方案還包括使細胞與上述的北美沙果果實提取物或其它果實提取物接觸。在特別優選的實施方案中，接骨木果和北美沙果果實提取物在相同的組合物中。在其它實施方案中，接骨木果果實提取物和北美沙果果實提取物處在單獨的組合物中。本發明的某些方面涉及哺乳動物細胞。其它實施方案關注人的細胞。在特別的實施方案中將果實提取物在活體外與細胞接觸。其它實施方案中在活體內接觸細胞。在優選的方案中，本發明的方法將添加劑製成凝膠，膠囊，片劑，糖漿，飲料或粉末。
本發明另一方面提供治療動物炎性反應的方法，包括對動物給予一種組合物和藥理上可接受的稀釋劑或賦形劑，所述組合物含有消炎活性大於在天然果實中發現的消炎活性的果實提取物。
在特定的實施方案中，炎症性反應可以選自關節炎，疼痛，過敏皮疹，炎性腸病和哮喘。當然，這些是炎性疾病的例子，本發明的食品添加劑可以對任何由於炎性反應引起的病症提供優良的草藥治療。本發明的添加劑可以呈凝膠，膠囊，片劑，糖漿，飲料或粉末形式。
應當理解，在此所述的食品添加劑單獨使用或與其它的消炎藥結合都將是有用的。在本發明的添加劑與其它的藥劑結合使用的實施方案中，本發明的方法還將對動物給予一種選自水楊酸鹽，糖皮質激素，對氨基苯酚衍生物，類鴉片，消炎痛，蘇靈大，止痛劑，丙酸衍生物和oxiCams的消炎劑。
本發明的另一實施方案包括一種含有含花色素苷的果實提取物的nutraCeutiCal，所述果實包括接骨木果果實，櫻桃(包括酸櫻桃)，歐洲越桔，北美沙果果實及其它本文中所述的含花色素苷的果實，其中，當吞下或者以其它方式用於受疼痛困擾的有機體時，nutraCeutiCal能減輕疼痛。具體地說，該疼痛可以是關節疼，月經性痙攣，頭疼，蟲咬疼痛或過敏皮疹。
本發明的另一個目的是提供一種消炎活性為天然果實消炎活性的約2-100倍的添加劑。例如，該添加劑可以包含消炎活性大於天然果實中發現的消炎活性的接骨木果果實提取物。
本發明的另一目的是提供一種在細胞中抑制COX-2活性的方法，該方法通過將細胞與消炎活性大於天然果實消炎活性的接骨木果果實提取物接觸而進行。一般情況下，該目的提供了一種治療動物炎性反應的方法，包括對動物給予一種組合物和藥理上可接受的稀釋性或賦性劑，所述組合物含具有的消炎活性大於在天然果實中發現的消炎活性的果實提取物。
從以下詳細說明中，本發明的其它目的，特徵和優點將顯而易見。然而，應該理解，詳細說明和特定的實施例，雖然指出了本發明的優選實施方案，但僅僅通過例證給以說明，因為根據該詳細說明，在本發明的精神和範圍之內的各種各樣的變化和修正對於領域普通技術人員來說將是顯而易見的。
除非另外特別說明，說明書和權利要求書中使用的全部百分數均為重量百分數。
發明詳述前列腺素(包括PGE2，PGD2，PGF2，PGI2及其它相關化合物)表示不同組的源於脂肪酸代謝的自分泌和旁分泌荷爾蒙。它們屬於一族天然存在的類花生酸(前列腺素，凝血噁烷和白細胞三烯)，該類花生酸並不以這樣的的形式貯存在細胞中，但是卻可根據需要從花生四烯酸，一種來源於細胞膜磷脂分解的20碳脂肪酸生物合成。在正常情況下，生成少量的類花生酸作為許多不同的細胞機能的重要的介質，上述細胞機能在不同種類的細胞中可能極其懸殊。但是，該前列腺素在病理生理學中也起著重要的作用。具體地說，炎症至少部分地在受損害的細胞中既由前列腺素的過量產生引發，又由其維持。下面的事實著重說明了前列腺素在炎症中所起的主要作用，即在許多病理學炎症性狀態的治療中最有效的阿司匹林類非甾族消炎藥(NSAIDS)均通過抑制前列腺素合成而起作用。不幸的是，這些藥的使用經常由於副作用(胃腸出血，潰瘍，腎衰竭等)而受到限制，所述副作用是由正常細胞中前列腺素的不希望的減少引起的，此時，正常細胞缺乏維持正常生理機能所需的自分泌和旁分泌機能。將來，疼痛和炎症治療的目標是開發出新的替代品，更準確地說，這種替代品將通過減少發炎細胞中的前列腺素但不改變其它細胞中前列腺素的產生而起作用。
環加氧酶反應是前列腺素合成途徑中的第一步；帶有前列腺素G/H合成活性的酶(PGHS)將花生四烯酸轉化成內過氧化物PGG2，然後內過氧化物PGG2分解為PGH2(這兩個反應經由一種單一的酶進行)。PGH2依次由一種或多種前列腺素合酶(PGE2合酶，PGD2合酶等)代謝以產生最終的″2-系列″前列腺素，PGE2，PGD2，PGF2，PGI2及其它，包括凝血噁烷，TXA2。第一步(PGHS)對於前列腺素合成來說是控速步。因此，PGHS傳遞反應是消炎藥藥效的主要目標；抑制PGHS活性產生了NSAIDS(阿司匹林，acetominophen，布洛芬，萘普生，消炎痛)的活性，也可以限制炎症中前列腺素的過量產生(希望的治療目標)和減少未發炎細胞中前列腺素的正常產生(其產生不希望的副作用)。
除了與炎症有關的異常變化外，在實驗條件下影響前列腺素產生的多種其它因子是公知的。這些因子包括生長因子，cAMP，輔助致癌因子，src激活因子和白介素1和2，所有這些均會增加總的細胞PGHS活性。腎上腺糖皮質激素和相關的合成消炎性甾體也能抑制前列腺素合成，但是他們作用的代謝位置沒有明確界定。
大多數非甾族消炎藥的主要而且也許是唯一的作用是抑制酶前列腺素G/H合酶，亦稱環加氧酶，其為前列腺素生物合成中的首要關鍵步驟。
業已證實，環加氧酶存在兩種異構體形式，COX-1和COX-2。人們對組成型表示形式COX-1已經進行了廣泛的研究並提出它維持前列腺素傳遞的生理機能。相反，可誘導的形式COX-2在正常情況下存在的數量較少，但是其在發炎條件下在活體內大量誘導產生。顯而易見COX-1和COX-2具有不同的生理和病理機能。
最廣泛使用的NSAIDs是非選擇性的環加氧酶抑制劑，對兩種異構體形式不加區別地進行抑制。自從人們發現酶有兩種不同的異構體形式後，人們就在尋求有選擇性的COX-2抑制劑。近來，已經開發出特定的COX-2抑制劑，但有人提出它們有副作用。因此需要一種安全有效的炎症治療方法。本發明旨在解決這種需求。
本發明描述一種NSAIDs的天然代用品，其優先抑制COX-2活性並改善由COX-2傳遞的炎症。本發明表明，某些果實提取物具有的消炎活性大於在天然果實中發現的消炎活性。利用這一結果來提供一種包含果實提取物和藥理上可接受的稀釋劑或賦形劑的食品添加劑，其中果實提取物的消炎活性大於在天然果實中發現的消炎活性，換句話說，本發明提供從含花色素苷植物，特別是果實中獲得的提取物以選擇性地抑制COX-2。
做為選擇，來自於含花色素苷植物的提取物可以選擇性地抑制COX-1的活性。因此，本發明涉及包含至少一種來源於含花色素苷植物提取物的花色素苷以選擇性地抑制COX-1或COX-2的活性。
更特別地，在一個實施方案中，人們發現接骨木果和北美沙果提取物具有高的消炎活性。該消炎活性由果實提取物(特別是當其水解後)中的花色素苷化合物傳遞，提供比COX-1抑制更強的COX-2抑制。利用這一發現的方法和組合物在下文中將進行更詳細的描述。但是，一般說來，該實施方案的提取物選自含花色素苷的植物並能選擇性地抑制COX，優選COX-2的活性。人們相信當提取物被哺乳動物經口攝食時，所存在的花色素苷將會在活體內水解成相應的花青素，其將提供COX抑制。在特定的實施方案中，已經發現某些果實具有比COX-1更優先的COX-2消炎活性。在本發明特別優選的實施方案中，希望獲得消炎活性的COX-2/COX-1比值在約2∶1-25∶1之間的果實提取物。在某些實施方案中，發現酸櫻桃提取物的COX-2/COX-1為約4.6∶1，北美沙果的比值為約7.5∶1，接骨木果的比值為約10.1∶1。實際上，在某些方面，這種消炎活性可能比一種公認的合成COX-2抑制劑CelebretTM的消炎活性更大。
因此認為一種從北美沙果，接骨木果，歐洲越桔，酸櫻桃，或其混合物中提取的提取物具有有益的消炎性能。在特定的實施方案中涉及含有一種這些果實提取物的營養添加劑。做為選擇，可以考慮含有兩種或更多這種果實提取物的食品添加劑。經過比較，發現聲稱具有特定的COX-2抑制活性的藥物消炎劑CelebreXTM的COX-2/COX-1抑制活性比值為7.0。
在一個優選實施方案中，營養食物或食品添加劑包含約0.1-99％，優選約5-95％，希望約10-90％，更優選約30-90％的含花色素苷的提取物。含花色素苷提取物的量可以由任何的上述含花色素苷果實提取物，以及任何其它的含花色素苷植物提取物來提供。
在這方面，單一劑型(即以單一片劑，膠囊服用(無論是液體或是固體))包含約1-500毫克，優選約5-100毫克，更優選約20-70毫克的總花色素苷。在目前優選的配方中，提供的片劑(單一劑型)包含約50毫克的總花色素苷。術語「總花色素苷」指的是存在於上述單一劑型中的花色素苷的總量。
對單一劑型來說，本發明的食物或食品添加劑提供的消炎活性成分的量為約0.1-99％，優選約5-95％，希望約10-90％，更優選約30-90％。消炎活性成分可以來自含花色素苷植物，提取物或能提供消炎活性的植物或提取物(如姜，乳香樹)。A.花色素苷作為NSAIDs的天然代用品對於包含在植物中天然發現的有益的植物化學品的食物添加劑存在著不斷增長的需要。這些天然存在的植物化學品可以分類成幾種不同類型。一個較重要的組是類黃酮，其又可以被分類成幾種類型。類黃酮的一個重要類型為花色素苷。花色素苷大多存在於紅色，藍色和中間色的花和果實中，例如櫻桃(甜，酸)，西印度櫻桃，李子，歐洲越桔，黑莓，黑醋慄，北美沙果，越桔，草莓，酸果蔓紅，博伊森樹莓，葡萄，覆盆子和接骨木果。已經發現，花色素苷可用作抗氧化劑。本發明描述了花色素苷將消炎活性賦予食品添加劑的應用。
根據本發明，花色素苷從含花色素苷的植物中獲得。決定植物是否包含花色素苷的方法是已知的，因此在這裡不進行論述。適合的含花色素苷植物的例子包括如下植物的果實，這些植物選自甜櫻桃，酸櫻桃，西印度櫻桃，李子，歐洲越桔，黑莓，黑醋慄，北美沙果，越桔，草莓，酸果蔓紅，博伊森樹莓，葡萄，覆盆子，接骨木果及其混合物。
可以用於提供消炎活性的花色素苷包括但是不局限於花青素-3-糖苷；花青素-3-葡糖基芸香苷；花青素-3-龍膽二糖苷；花青素-3-芸香苷，花青素-3-黑接骨木苷，花青素-3-samb-5-糖苷，花青素-3-半乳糖苷，甲基花青素-3-芸香苷，甲基花青素-3-糖苷，甲基花青素-3-半乳糖苷，甲基花青素，花青素，花青素-3-槐糖苷，花葵素，翠雀素，翠雀素-3-糖苷，翠雀素-3-半乳糖苷，3′-甲花翠素，3′-甲花翠素-3-糖苷，3′-甲花翠素-3-半乳糖苷，二甲花翠素，二甲花翠素-3-阿拉伯糖苷，二甲花翠素-3-糖苷，二甲花翠素-3-半乳糖苷，堪非醇，橙皮苷，龍膽翠雀鹼，桔梗皂苷，瓜菊酯等。
這些物質的化學基礎是2-苯基苯並吡喃(黃鹽)，其具有以下結構 如果該基礎結構式在2，3，4，5，7，3』或5』上用羥基或甲氧基取代，得到的化合物被稱為花青素，其在水中不溶，對光不穩定而且被鹼迅速破壞，因此在植物中經常不能發現。但是，花色素苷是上述化合物的苷，更穩定，是在植物的葉子、花和果實中發現的天然物質。因此花色素苷水解產生花青素(糖苷配基形式)和糖。
在自然界中發現的花色素苷的總量非常大，因為許多單、二和三糖在3，5或7位置可以被糖基化，而且也因為糖在位置3可以被醯化(經常用對香豆酸)。因此，一種具體的果實可能含有20種或更多的花色素苷，包括花青素，翠雀素，3′-甲花翠素，花葵素和二甲花翠素的3，5-二糖苷，3-單糖苷，3-(6-0-p-香豆芳基-糖苷)-5-糖苷和3-(6-0-p-香豆芳基-糖苷)。花色素苷的顏色由其分子結構和它們存在的介質的生理化學性質來決定。
根據本發明，提取物包含一種或多種花色素苷，其選自甲基花青素，花青素，花葵素，翠雀素，3』-甲花翠素，二甲花翠素，堪非醇，橙皮苷，龍膽翠雀鹼，桔梗皂苷，瓜菊酯，它們的苷衍生物及其混合物。在一個優選實施方案中，花色素苷選自花青素，甲基花青素，二甲花翠素，3′-甲花翠素，翠雀素，它們的苷衍生物及其混合物。
已經發現，水解的花色素苷，即花青素的COX抑制活性比花色素苷和其苷衍生物更大。因此，相信本發明優於現行COX抑制劑，例如NSAIDs。相信花色素苷幾乎不提供任何可能有的COX抑制，尤其是對COX-1的抑制。因此，如果攝食包含花色素苷的食品添加劑，在胃腸區域(″GI″)將幾乎沒有COX-1抑制，於是有可能會減少副作用。B.提取花色素苷的方法對本領域技術人員來說，有各種各樣的已知的提取花色素苷的方法。其中一些方法描述在，例如美國專利5,817,354；美國專利5,200,186；美國專利5,912,363；美國專利4,211,577；美國專利4,302,200中(每個均在此引入作為參考)。
美國專利5,817,354描述了從柑桔屬產品中除去引起苦味的類黃酮的方法。包括將包含一種或多種這些苦味類黃酮的流體與聚苯乙烯-二乙烯基苯樹脂接觸來將該類黃酮粘附到樹脂上。通常，在與聚苯乙烯-二乙烯基苯樹脂接觸以前使用離心或超濾步驟。然後通過洗脫樹脂可以收集類黃酮。雖然該專利沒有描述怎樣將類黃酮從樹脂上洗脫(除下)，但Chandra等人(J.Agric.Food Chem.，第41卷，第7期，1062-64頁，(1993))中描述了通過利用乙醇來洗脫花色素苷。然後將洗脫出的溶液真空乾燥除去乙醇。
美國專利5,912,363描述了從植物物質中提取原花色素的方法。該方法包括加熱固體植物物質的含水混合物，任選地在增加壓力和減少氧下隨後通過各種各樣的分離、過濾和吸附步驟，和將吸附的原花色素用極性溶劑洗脫。該方法也可以將極性溶劑再生並循環到該方法的洗脫階段，以使溶劑消耗量降低並使該方法更有效益。
美國專利4,211,577描述了通過處理不純物質而提取植物花色素苷色素，以確保溶液中存在離散的單體花色素苷分子，然後將該溶液經過超濾膜以保留可溶的和/或渾濁的大分子例如膠體，產生老化、渾濁並沉澱的上遊雜質，將下遊的單體花色素苷進一步濃縮為液體或粉末以得到穩定的可用作著色劑的濃色母料。用這樣的方式，果實固體可以用二氧化硫溶液處理以電離、脫色並確保單體狀態的顏料分子(從花色素苷轉化為色酮2和4-磺酸鹽)。溶液超濾將花色素苷同向下流，同時大分子組分如果膠，丹寧酸，蛋白質，其複合物等保留在上遊。任選從超濾後的溶液中汽提二氧化硫以從色酮磺酸鹽中回收原始的花色素苷。然後，花色素苷可以通過蒸發濃縮得到高濃度的液體，從這種液體可以任選地將在分子中含有醯基的不穩定顏料在降低的溫度下通過可控沉澱除去。
美國專利4,302,200描述了用於從天然產物中提取花色素苷的方法，該方法通過將含花色素苷的天然產物與含亞硫酸根離子的水溶液在85℃或更高的溫度下接觸30分鐘或更少，之後將最先接觸天然產物的水溶液的亞硫酸根離子含量調節到至少10,000ppm(以SO2計)。
美國專利3,963,700描述了從植物物質如葡萄廢物中回收花色素苷的方法，該方法使用酒石酸-鏈烷醇萃取法，接著過量的酒石酸可控沉澱為酒石酸氫鉀。該專利還描述了花色素苷在製備利用花色素苷提取物進行著色的人造葡萄飲料中的用途。
雖然注意到上述專利方法對產生用於本文所述的消炎性質的花色素苷將是有用的，但本發明人開發了另一種從天然源提取花色素苷的方法。
該方法旨在不通過利用不希望的化學品而從植物中提取類黃酮。該方法包括將包含一種或多種類黃酮的溶液經過超濾膜以提供上清液和保留物。然後使上清液經由反滲透膜以得到保留液和滲透物，然後收集反滲透的保留液。
超濾膜的截留分子量優選為約100,000-1,000,000。反滲透膜的分子量截優選為約1,000-10,000。
收集的保留液具有本發明所述的消炎，COX-2抑制性能。在優選實施方案中，該保留液可以被乾燥和與一種或多種賦形劑相結合以得到食物添加劑。
現在參考

圖1，闡述本發明一個實施方案的方法流程圖。根據該實施方案，植物源1，特別是包含類黃酮的果實，更特別是包含花色素苷化合物的果實經過提取過程10進行加工得到提取物或汁液2。例如，該植物可以進行榨汁操作或壓制操作，如螺杆擠壓或袋壓以獲得團塊和汁液。做為選擇，未加工的植物可以被磨碎、粉碎或進行加工以增加植物的表面積，以促使希望的類黃酮化合物從鬆散固形物中萃取和分離出來。
為幫助分離和獲得所希望的花色素苷化合物較好的最終收率，希望使植物與萃取劑3接觸以得到富含類黃酮(尤其是花色素苷化合物)的提取物(汁液)，並形成鬆散的固體殘渣或團塊4。優選，萃取劑為水，以使更進一步的分離過程步驟減到最少。萃取步驟可以使用傳統的萃取設備，以逆流、批量或多級萃取方式進行。
另外，團塊可以同樣進行萃取加工，以增加希望的花色素苷化合物的收率。如果進行該萃取步驟，希望將從這一步驟中得到的萃取液與上面步驟中得到的汁液和/或萃取液合在一起。
汁液可以以任何已知的方式，使用容積分離設備，如離心機，篩子，壓濾器或過濾器與團塊分離。希望在超濾之前，通過任何已知的容積分離設備將鬆散固體與液體分離。例如可以使用下列離心機，過濾器，篩子，壓濾器等。
之後，超濾過程20用於除去懸浮粒子和分子量大於約200,000道爾頓的膠質高分子量組分。超濾膜可以是管型，毛細管型，螺旋型，中空纖維或其它適合的類型。該膜可以是聚碸，聚丙烯腈，聚醚碸，聚偏二氟乙烯或其它適合的物料。超濾優選使用交叉流動錯流進行。膜的截留分子量可以為約20,000道爾頓-300,000道爾頓，優選約200,000道爾頓。如果在超濾以前沒有過濾，優選使用更高截留分子量的膜以便獲得可接受的過濾速率。因此，可以在超濾步驟以前引入微濾步驟。
例如，微濾器可以用來除去粒度為約0.01-1微米的懸浮粒子。
超濾可以在約5-25巴的壓力和約20℃-80℃的溫度下進行。這一步驟主要除去脂質、蛋白質和類似的膠體、細胞碎片、澱粉等，其優點是隨後的RO步驟可以在沒有膜汙染的情況下進行，否則其將導致過濾速率降低。
超濾步驟的結果是得到富含花色素苷化合物的滲透液5和包含不希望要的化合物的保留物7。為增加類黃酮和希望的花色素苷化合物的最終收率，可以為超濾膜提供雙濾6。
將超濾滲透液5進行反滲透30，得到富含類黃酮(包括花色素苷化合物)的保留液8和滲透液10，其基本上不含類黃酮(包括花色素苷化合物)。為增加類黃酮和希望的花色素苷化合物的最終收率可以向超濾膜提供雙濾9。用於本發明RO的膜可以是聚醚碸，聚碸，醋酸纖維素或聚醯胺膜。
反滲透可以在約30-70巴的壓力和約30℃-80℃的溫度下進行，優選該溫度維持在約30℃-45℃範圍內。通常，反滲透膜的截留分子量在約1,000-10,000範圍內，優選約2,000以得到保留液。
保留液包含比起始植物物質中發現的濃度更高的希望要的花色素苷化合物。保留液可以以溶液的形式保留，但也可以進一步經乾燥40進行濃縮以除去一些水或完全乾燥形成粉末11。
當希望更濃的溶液時，可以通過傳統方法除去一些水，包括使用NaCl保留值大於90％的反滲透膜。
噴霧乾燥是優選的乾燥方式，但是其它乾燥法，例如閃蒸乾燥、冷凍乾燥、流態化床乾燥、環管幹燥、微米乾燥、盤式乾燥、真空乾燥、射頻烘燥或微波烘燥均適宜用作這一乾燥步驟。
在乾燥之前，希望加入一種或多種流動調節劑，如麥芽糖糊精(如M100)、氫氧化鎂或其它已知的流動調節劑或載體。通常，希望加入流動調節劑的量為保留液中固含量的約20-60％。
當使用噴霧乾燥時，保留物的總固含量應該為漿液總重量的至少約1％，儘管希望更高的至少約20-35％固體的總固體含量。希望更高的固含量是因為必須在乾燥步驟過程中除去的水量會相應地降低。結果，保留液的固含量將達到可能獲得的最高含量，而且還允許有效的加工。保留液中固含量的上限一般由用於反滲透/納濾步驟的膜以及使用的烘乾器的操作限制條件決定。
保留液的溫度不是關鍵的。通常優選約10-25℃的室溫。可以使用更高的漿液溫度，對於某些種類的乾燥設備可能希望這樣的溫度。
可以使用通用的噴霧乾燥設備，為噴霧乾燥領域技術人員所熟知的作業程序適用於該方法的噴霧乾燥步驟。乾燥器(乾燥劑氣體)出口溫度通常用於控制成品粉末的殘留水分。在噴霧乾燥過程中，乾燥器出口溫度通常在約40-100℃範圍內。通常，希望維持出口溫度低於約80℃以將所希望的花色素苷化合物的分解可能性減到最小。應當理解，相應的乾燥器進口溫度更高，通常在約90℃-200℃範圍內，但優選低於約150℃。
從乾燥操作中回收的產品是自由的流動的微粒固體，其典型地具有細粒狀粉末外觀並適於用作食物或食品添加劑。在這方面，包含所希望的一種或多種花色素苷化合物的產品粉末作為食品或食物添加劑是有用的。
反滲透滲透液可以通過，例如濃縮器50進一步加工以獲得可以用來製備果汁飲料的濃縮液12。
當然，以上所述僅僅是一個方法，應當理解，能得到具有消炎活性大於天然果實中發現的消炎活性的果實提取物的任何方法均可用於本發明。
雖然上述任何方法均適於獲得希望的花色素苷，但也可考慮，市售的提取物也可以用來滿足本發明產品的一些或所有的需要。例如，眾所周知，Fort Wayne，IN的Artemis International供應的果汁濃縮物和粉末包含花色素苷及其它類黃酮。在使用商品產品時，優選提取物中的花色素苷含量為提取物產品重量的至少10％。C.花色素苷和新型消炎化合物的表徵以上描述了從果實提取物中提取消炎活性的方法，其中提取物的消炎活性比天然果實的更高。根據這些說明，也將可能獲得含有新型化合物的提純組合物，所述化合物使果實提取物具有上述消炎活性。這一部分旨在提供提純和表徵這類化合物的一般說明。
通常，果實提取物按本文上述製備。這種果實提取物含有類黃酮化合物的混合物，其中有一些具有COX-2選擇活性，其它具有COX-1選擇活性，還有另外一些具有廣譜的環加氧酶抑制活性，還有一些不具有任何明顯的環加氧酶抑制活性。
為證明某些果實提取物具有消炎活性，使用例如下文所述的試驗或其它為本領域技術人員所知的等同試驗來測定COX活性，可以將果實提取物的個別組分進行分離。分離技術對本領域技術人員是眾所周知的。例如，本領域技術人員可以使用色譜法，如薄層色譜法、氣相色譜法、高效液相色譜法、紙色譜法、親和色譜法、離子交換色譜法、超臨界流體色譜法等來分離個別的類黃酮組分(見Freifelder，PhysiCal BioChemistry AppliCations to BioChemistry andMoleCular Biology，第二版，Wm.Freeman and Co.，紐約，1982，其對色譜技術進行了綜述)。
分配色譜法的理論基礎是如果兩相彼此接觸，而且如果一相或兩相構成溶質，該溶質將在這兩相之間分配其本身。通常，分配色譜使用一種裝填了吸附劑和溶劑的柱。包含溶質的溶液在柱的上部分層。然後，溶劑連續地通過該柱，其使得溶質通過柱填充材料移動。然後根據其移動速率收集溶質。最普通的兩種分配色譜的類型為紙色譜和薄層色層(TLC)；這兩者合在一起稱為吸附色譜。在這兩種情況下，基質包含結合液體。其它的分配色譜的例子是如氣-液和凝膠色譜。
紙色譜是分配色譜的一種變形，即在以紙張形式的纖維素柱上進行。即使當其極其乾燥時，纖維素也包含大量的結合水。因此分配在結合水和展開溶劑之間發生。經常使用水作溶劑。通常將極少量的欲進行分離的溶液混合物置於紙的上端並將其乾燥。毛細作用拉動溶劑經過該紙，溶解樣品並沿流動方向移動組分。紙色譜可以設計為上升式或者下降式溶劑流動。在第一次運行之後將軸偏轉90度可以進行雙向分離。
薄層色譜(TLC)通常用於分離脂質並因此被認為是本發明的一個優選實施方案。TLC具有紙色譜的優點，但是它允許使用任何可以被細分散和形成均勻層的物質。在TLC中，固定相是在玻璃或塑料板上均勻伸展的吸附劑層。通常，在沿著板的周長的一個選定的高度上，放置一根帶子從而產生一個槽之後，將吸附劑傾倒在凝膠的表面上形成吸附劑漿液，從而製造所述板。吸附劑乾燥之後，除去帶子並象處理紙色譜法中的紙一樣處理該板。施加樣品並使板和溶劑接觸。一旦溶劑幾乎到達板的末端，移去該板並將其乾燥。然後樣點可以通過螢光、免疫學鑑定、放射性計算或在其表面上噴塗不同的試劑以產生變色進行鑑定。
歐洲越桔提取物的花色素苷的TLC由Petri等人(1994年)進行了描述。該參考文獻也描述了其它可用於花色素苷試劑的鑑定和表徵的光譜分光光度技術和色譜技術。
在氣-液色譜(GLC)中，流動相是氣體，固定相是液體，其或者被吸附在管或柱的內表面，或者被吸附在載體上。液體通常作為溶於揮發性溶劑，如醚中的固體使用。樣品可以是可揮發的任何樣品，其以液體的形式與惰性氣體，如氦、氬或氮氣一起引入，然後加熱。該氣體混合物經過管。揮發的化合物本身不斷地在氣體流動相和液體固定相之間依照其分配係數進行重新分配。
GLC的優點在於可以分離小分子。其靈敏度和速度相當好，速度接近標準液相色譜的1000倍。通過使用非破壞性檢測器，GLC可以用於初步提純克級物料。
凝膠色譜或分子篩色譜是一種以分子大小為基礎的特殊類型的分配色譜。凝膠色譜背後的理論是由包含小孔的細粒惰性物質製備的柱在大小分子經過或位於孔周圍時，根據其粒度將大分子與小分子分離開來。只要用於製造粒子的物料不吸附分子，決定流動速率的唯一因素就是粒度，因此，只要形狀相對固定，分子就以粒度逐漸減少的順序從柱中洗脫出來。凝膠色譜對於分離不同粒度的分子是非常卓越的，因為分離與所有其它因素如pH值、離子強度、溫度等均無關。事實上，凝膠色譜分離也沒有吸附，區域擴展較小，在單一物質中洗脫體積與分子量相關。
用於凝膠色譜的凝膠原料是三維網狀組織，其結構通常是無規的。凝膠劑由通常為惰性的、不粘結或與所分析的物質不起化學反應的、不帶電的交聯聚合物組成。凝膠中的填充空間充滿液體而且該液體佔據大部分的凝膠體積。常見的凝膠劑是葡聚糖、瓊脂糖和聚丙烯醯胺；它們以水溶液來使用。
高效液相色譜法(HPLC)的特點在於非常快的具有卓越的峰解析度的分離。這通過使用非常細的粒子和高壓以維持足夠的流速而實現。分離可以在幾分鐘或至多一小時內完成。而且，僅僅需要非常少量的樣品，因為粒子如此之小而且裝得緊緊的以致於空隙容積佔柱床體積的非常小的部分。同樣，樣品的濃度也不必太大，因為區域如此狹窄以致於樣品幾乎沒有稀釋。裝配有光電二極體陣列檢測系統的HPLC常用於研究類黃酮，如芸香苷及其它櫟精苷、根皮苷以及某些花色素苷(Paganga和Rice-Evans，FEBS Lett.401(1)78-82，1997)。反相HPLC梯度程序已經被描述用於12種花色素苷的分離和定量測定(Petri等人，Acta Pharm.Hung.，64(4)117-122，1994)。櫟精化合物也可以用HPLC技術表徵，Laires等人(Food Chem.ToxiCol.，31(12)，989-994，1993)對其進行了描述。這種方法被認為可能適合於本發明表徵和鑑定新型類黃酮。
親和色譜是一種色譜分析程序，分析基礎是被分離的物質與可特別地與其結合的分子之間特定的親合力。這是一種受體-配位體型相互作用。柱填充材料通過將該鍵合對中的一個與不溶基質共價偶合而成。然後柱填充材料能特定地吸附溶液中的物質。通過把條件轉變到不會發生鍵結(改變pH值、離子強度、溫度等)而進行洗脫。
基質應該是本身不吸附分子到任何明顯程度的物質，而且具有寬範圍的化學、物理和熱穩定性。配位體應該以不影響自身鍵合性能的方式耦合。配位體還應該提供相對強的鍵合，而且應該可以在不破壞樣品或配位體的情況下洗脫該物質。親和色譜的一個最普通的形式是免疫親和層析，其使用與所檢測的具體物質直接相對的抗體。
利用上述技術分離的花色素苷的結構可以通過如下參考文獻所述的質譜和核磁共振光譜來表徵，如Saito等人(PhytoChemistry，41(6)，1613-1620，1996和PhytoChemistry，43(6)，1365-1370，1996)；Takeda等人(PhytoChemistry，36(3)，613-616，1994)。另外的核磁共振技術由Terahara等人(BioSci.Biotech.Biochem.，58(7)，1324-1325，1994)；Nerdal等人(Acta.Chem.Scand.，46(9)，872-876，1992)描述。Johansen等人(Phytochemistry，30(12)，4137-4141，1991)描述了用於分離花色素苷的各種各樣的方法，包括離子交換樹脂、液滴反流(droplet-Counter)色譜法和凝膠過濾，隨後使用如下技術，如化學降解、色譜法和光譜法，尤其是同核和雜核二維核磁共振技術來表徵分離的花色素苷化合物。本領域技術人員都會明白，上述任何技術均可用於分離和進一步提純本文所述果實提取物，以表徵具有消炎活性的單獨的化合物。D.消炎活性的測定試驗在本發明中描述了含花色素苷的果實提取物具有消炎活性。更具體說，這樣的提取物被證明有抑制COX-2活性優於抑制COX-1活性。因此，這些提取物成為傳統的NSAIDs的優良替代物，因為它們對COX-2具有選擇性。這些抑制提取物還比最近開發出的COX-2專用″特級阿司匹林″優良，因為這些提取物是天然提取物，與對心臟病、中風及其它不利的心血管病的增加傾向沒有關係。
抑制酶到其最高活性的50％的任何抑制劑的濃度稱作IC50或I50。IC50越小，用於酶抑制作用的相應的抑制劑越強或越有效。因此，如果化合物可以被吸收、代謝、傳遞到有問題的或患病的位置上，則用於消炎和減輕疼痛的添加劑配方的抑制劑的需要量就較小。
一些物質、化合物或植物濃縮物可以選擇性地抑制COX-1或COX-2酶。這可稱作物料的選擇性。選擇性可以通過比值I50(COX-1)/I50(COX-2)用數字表示。當比值等於1時，抑制劑對於任何一個同功酶沒有選擇性，即抑制劑相等地抑制COX-1和COX-2酶。當比值低於1時，抑制劑對COX-1更有選擇性。當比值大於1時，抑制劑對COX-2抑制更有選擇性。對慢性消炎和減輕疼痛的藥或添加劑來說，選擇性在副作用中有重要的作用。副作用主要是由抑制胃腸道內的COX-1酶而引起的胃腸(GI)出血，在胃腸道上前列腺素對胃腸包膜具有正常的機能。
在非甾醇消炎藥(NSAIDs)中，選擇性是一個重要的問題，因為除了期待吸收作用和輸送到發炎的和疼痛的位置外，NSAIDs僅僅具有一種活潑體可以抑制胃腸道中基本用COX-1表示的酶並引起胃腸道出血。雖然尚末證明，天然產物，如含花色素苷的植物提取物，可能具有一定的優勢，因為它們同時有非活潑體和活潑體，因此可能不會在胃腸道中引起副作用。可能存在不同的吸收、代謝和輸送機制。有可能非活潑形式(含糖的糖苷形式)可以被吸收或通過胃腸道而不抑制在那裡的COX-1酶，因此，胃腸道上的COX-1酶產生的前列腺素的量正常或足夠高以維持GI包膜。在吸收之後，糖片斷被分開，活潑體(糖苷配基體，花青素)被輸送到COX-2酶大量誘導的位置，雖然COX-1也將被抑制(但程度低)。在該位置兩種酶的抑制對於消炎和減輕疼痛將是非常有效的。
本發明的某些方面，有必要確定一種具體的果實提取物或其成分是否具有消炎活性。這樣的活性可以利用本領域技術人員公知的消炎試驗法來測定。利用前列腺素內過氧化物合酶-1和-2同功酶將很容易確定一種具體的提取物是否有適當的活性。這些試驗法測定這些酶將花生四烯酸轉換為前列腺素的能力。做為選擇，可以使用如下所述的免疫測定方法。
試劑如花生四烯酸和COX-1和COX-2酶微粒體懸浮液對於本領域技術人員來說很容易獲得(如從Oxford BiomediCal ResearCh，Oxford，MI，USA獲得)。
因此，一種具體提取物的COX-2抑制活性可以用通常包括如下步驟的方法測定(a)得到COX-2微粒體組合物；(b)將待測提取物與COX-2微粒體組合物混合；和(c)測定待測提取物抑制COX-2活性的能力。
COX-2活性可以通過得到COX-2的微粒體膜製劑而測定，如(在適當的緩衝液中濃度為5-10毫克蛋白質/毫升)。COX-2試驗在37℃下按如下文獻所述通過監測O2吸取速率來進行，如(DeWitt等人，Am.J.Med.，95(2A)，40S-44S，1993；ArCh.BioChem.Biophys.，306(1)，96-102；1993)。該試驗主要測定花生四烯酸向前列腺素內過氧化物-2的轉化。因此，一單位的環加氧酶活性表示1nmol花生四烯酸/分鐘的氧化(DeWitt等人，1993，supra)。做為選擇，COX-2活性可以用色譜法通過測定COX-2酶產品的量來測定，可使用例如薄層色譜、氣相色譜、高效液相色譜等。另一種測定COX-2活性的方法是使用酶作用物放射性標記並監測放射性標記的COX-2反應成品的量。無論使用什麼方法，本領域技術人員可以將最終測定結果概括為環加氧酶活性，如使用的O2量/毫克環加氧酶/分鐘；毫克產品/毫克環加氧酶/分鐘；產生的μCi放射性標記的產品/毫克環加氧酶/分鐘；使用的μCi放射性標記的花生四烯酸酯/毫克環加氧酶/分鐘。
為確定果實提取物能否抑制COX-2，就要在沒有加入待測提取物的情況下測定或確定微粒體製劑的COX-2活性。然後將該待測提取物加入製劑中，在有待測提取物的情況下再測定其活性。如果待測提取物的存在使花生四烯酸酯氧化的量相對於待測提取物不存在時花生四烯酸酯氧化的量降低，則表明待測提取物具有COX-2抑制能力。
可以用已知的COX活性抑制劑進行對照實驗，如阿司匹林，布洛芬，CelebrexTM，萘普森等。通過比較果實提取物的結果與這些有用的已知抑制劑存在下的COX-2活性，還可以測定相對活性。
花生四烯酸酯氧化明顯降低，如用帶有O2電極的氧消耗法，色譜技術(通過光密度法或液體閃爍光譜學對成品進行的定量)測定，表示為COX-2活性量降低至少約20-40％，最優選降低至少約50％，當然也有可能降低更高。測定花生四烯酸代謝物的色譜法試驗和測定前列腺素形成的COX酶活性試驗在本領域中是眾所周知的，而且可以在活體外或活體內進行。
本發明不需要進行果實提取物的抑制性能體外定量試驗，因為通常假設形成本發明的nutraceutical的果實提取物往往與在完整果實中發現的天然化合物相同。當然，應當理解，形成本文所述的果實提取物的COX-2抑制組分的花色素苷和類黃酮化合物在攝食後還可在活體內被改性，產生消炎化合物。
同樣，也不必進行體內試驗。但是，本領域技術人員可以使用發炎動物模型來測定這些化合物的活體內活性。例如，有發炎區域的齧齒動物模型可以用來測試已經通過如上面描述的試驗表徵的COX-2抑制劑的消炎效果。在試驗中使用這樣的動物樣品時，需要使用例如至少兩隻有相似炎症的動物，一隻與待測消炎組合物接觸，另一隻與對比或空白對照劑組合物接觸，該空白對照劑組合物包含除消炎成分之外待測組合物的全部組分。與進行對比或空白對照劑組合物接觸的動物相比，與待測組合物接觸的動物炎症減輕將表示該待測組合物具有消炎活性。E.花色素苷與另外的消炎藥的結合本發明在某些方面描述了攝入具有消炎性能的食品添加劑是有益的，其中該食品添加劑含有消炎活性大於在天然果實中發現的消炎活性的果實提取物。本領域技術人員應該理解，這樣的食品添加劑可以有利地與另外的消炎藥結合。當然，與本發明的果實提取物相比，上述另外的消炎藥將是次要的，並且可以是任何通常公認的消炎劑或甚至可以是通過本文上述試驗表徵的消炎劑。
不管另外的消炎劑是否是已知消炎藥或是用本發明的方法表徵的消炎藥，本發明將涉及可以使用的各種各樣的結合。因此，當果實提取物為「A」，另一消炎劑為「B」時，可以有如下結合A/B/A B/A/B B/B/A A/A/B A/B/B B/A/A A/B/B/B B/A/B/BB/B/B/A B/B/A/B A/A/B/B A/B/A/B A/B/B/A B/B/A/AB/A/B/A B/A/A/B A/A/A/B B/A/A/A A/B/A/A A/A/B/A果實提取物和另外的消炎劑可以與細胞在活體內或者在活體外接觸或在活體內或活體外暴露於細胞以抑制該細胞的COX-2活性。本文使用的術語「接觸」和「暴露」，當用於細胞時用來描述果實提取物和第二消炎劑傳遞到目標細胞或直接與目標細胞接近的過程。為達到有益的效果，兩種藥劑可以以有效結合量傳遞到細胞，該用量用來抑制COX-2活性、減少炎症和減少炎症引起的前列腺素的產生或其它效果以便降低細胞或細胞所位於的個別對象中的發炎反應。
對本領域技術人員來說，消炎劑是公知的，包括如水楊酸衍生物(如阿司匹林)，對氨基酚衍生物(如乙醯氨基酚)，吲哚和茚乙酸類(吲哚美辛、舒林酸和依託度酸)，雜芳乙酸類(託美丁、雙氯芬酸和酮咯酸)，芳基丙酸衍生物(布洛芬，萘普森，keopren，fenopren，奧沙普秦)，鄰氨基苯甲酸類(甲芬那酸，甲氯芬那酸)，烯醇酸類(吡羅昔康，替諾昔康，保泰松和oxyphenthatrazone)。這些及其它消炎劑對本領域技術人員來說是公知的並且對這些藥劑不需要提供另外的描述。F.配方本發明提供由果實提取物製成的天然食品添加劑，其中該食品添加劑含有消炎活性大於在天然果實中發現的消炎活性的果實提取物。本發明提供的果實提取物可以以粉末、液體或固體形式存在。下文實施例中給出特定的配方，這一部分論述配方的形式和組分，這些將是所希望的並且根據本發明的說明可以很容易地製造。
果實提取物可以是可重新組成的粉末組合物，當用例如水，牛奶或其它類似的液體重新組成時會得到飲料，其可以用來對需要的對象提供消炎活性。粉末組合物和由此製備的飲料尤其可在疼痛或炎症處理程序中用作腸內給藥成分，上述處理使用許多精心設計的各種形式的產品，如奶昔，湯，鮮果汁，零食棒及其它固體形式如片劑，膠囊等，因此，它可以在疼痛處理時段內混合搭配以對患者提供更誘人的和更有效的幫助，特別是對那些處於後續護理情況中的患者。
除了飲料外，本發明的果實提取物還可以用於食物中。這種果實提取物可以與任何其它的食物相結合，例如，包含本發明提取物的油可以用作烹調油、煎炸用油或色拉油和可以用於任何油基食物，如人造黃油、蛋黃醬或花生醬。添加了本發明化合物的糧食麵粉可以用於食物，如烘烤製品，麥片，義大利麵製品和湯。包含果實提取物和來自果實提取物的新型花色素苷的油可以被乳化和用於各種水基食物，如飲料，包括如上所討論的飲料混合物。將上述食物包含在低脂肪、低膽固醇或其它限定的食譜內是有利的。
「nutraceutical」是除提供營養效果外，還能提供其它效果的任何功能性食品。這一種類可包括營養飲料，節食飲料(如，SlimfastTM，BoostTM等)以及運動草藥及其它加強飲料。本發明提供可以用作消炎劑的nutraceutical組合物。因此，它可用於減輕任何由COX-2的作用傳遞的症狀，包括但不限於關節炎，頭痛，過敏皮疹，炎性腸病，關節疼痛，慢性疲勞，纖維肌痛等。
除提純的果實提取物外，nutraceutical或食物也可包含各種其它的有益組分，包括但不限於必需的脂肪酸、維生素和礦物質。這些組分對於本領域技術人員來說是公知的，但是，在不受縛於任何特別配方或用量的情況下，這一部分簡要討論可以成為本發明食品添加劑的一部分的那些組分。營養添加劑的含量和生產的另外描述公開在如下的文獻中，如美國專利5,902,797；5,834,048；5,817,350；5,792,461；5,707,657；5,656,312(每個均在此引入作為參考)。
必需的脂肪酸，如γ-亞麻酸(ω-3)和亞油酸(ω-6)可以加入到本發明的食品添加劑中。研究表明，在除人以外的動物中，n-3與n-6脂肪酸的比甚至比脂肪酸的絕對用量更重要。參見Boudreau MD等人的「抑制從花生四烯酸生物合成類花生酸中在恆定n-3/n-6脂肪酸比值下食物n-3脂肪酸劑量缺乏反應」，Am.J.Clin.Nutr.，54111-117(1991)。必需的脂肪酸不但涉及到心血管健康而且維護免疫系統。這些必需脂肪酸的不平衡可能導致膽固醇代謝差。另外，免疫系統機能可能受損，導致發炎。
在其它機能之中，鈣和鎂均與骨質健康有關。鈣和鎂之間不平衡的一個可能的結果是骨質礦物質的不平衡，它可能影響骨生長和骨更新(骨斷裂和生長)。對骨健康和降低骨質疏鬆症風險來說，鎂與鈣同等重要，它影響男性也影響婦女(Purvis，J.R.，「不依賴胰島素製劑的糖尿病患者中口服補鎂因子在選擇的心血管危險度方面的影響，Archives of Family MediCine，3503-508(1994)〕。
礦物質鋅和銅兩者都與心血管健康有關，並應該以鋅∶銅為5∶1的比值提供。這兩種礦物質之間的不平衡可能會引起鋅在銅上的拮抗效應。這種影響可能會妨礙身體將銅應用於心血管健康的能力。較之銅太多的鋅將會妨礙身體製造SOD(超氧化物歧化酶)的能力，SOD是一種重要心臟防護酶。此外，要達到適當的HDL(高密度脂蛋白)與LDL(低密度脂蛋白)平衡也要求適當的鋅∶銅比值。一般，在美國人飲食中鋅攝入僅僅為RDA的33-75％，因此人們會考慮含有鋅的食物添加劑。
此外，硒和碘也有一個對其機能最有效的比值，這一比值為硒∶碘為約2∶1。這些礦物質影響甲狀腺功能，因此也會對甲狀腺功能變化所引起的代謝產生影響。甲狀腺功能不平衡可能對身體產生不適當的壓力，結果是造成食物中營養素的吸收障礙，隨後這可能使生長發育延遲。
在預防血管病症中，吡哆素，葉酸和鈷胺素也有一個對它們發揮機能最有效的比值。吡哆素(維生素B6)比葉酸比氰鈷胺(維生素B12)的最佳比值分別為大約100∶4∶1。這些維生素通過降低潛在的有害的胺基酸同型半胱氨酸的量來影響心血管功能。這一比值使人認識到處於心臟病危險之中的個人從他們的飲食中吸收的這些維生素的量不平衡而且也不充分。
另外，也可提供維生素C，維生素B1(硫胺素)和維生素E。吸菸者對於維生素C的要求增加，而且抽菸是產生肺癌主要因素。維生素B1在能量轉化中起著很重要的作用。硫胺素二磷酸鹽(TDP)是碳水化合物轉化為能量所必需的輔酶。因為目前美國男性總卡路裡的45％從碳水化合物中吸收，在其飲食中最佳選配維生素B1是所希望的。
與維生素B6一起，維生素B12和葉酸補充幫助調整血的同型半胱氨酸的量，因此，它們將成為本發明食物添加劑配方的有用組分。維生素D(鈣化醇)對於骨骼形成和體內礦物平衡是必不可少的。沒有維生素D，小腸就不能吸收足夠的鈣，不管有多少鈣可用來被吸收。因此，這表明維生素D作為營養添加劑的一個組分可用來生成強壯的骨骼。
錳在驅動金屬酶，錳-超氧化物歧化酶(錳-SOD)中的作用已經清楚地得到認同，其在其它的金屬酶體系(穀氨醯胺合成酶、精氨酸酶和丙酮酸羧化酶)中也有類似的作用。業已表明，許多酶系統也受到錳的活化，即使它們不是錳金屬酶。錳-SOD連結可能具有特殊的臨床重要性，因為這種形式的金屬酶看起來好象是細胞線粒體膜內唯一的工作形式，因此它可能在保護線粒體和保證身體的氧化能量生成系統中起著獨特的作用。在食物添加劑中將所希望包含錳。
可以包括在添加劑中的其它微量營養素包括但不局限於維生素如維生素A，維生素C，維生素E，維生素B2，煙酸，煙醯胺，泛酸，吡哆素，氰鈷胺，維生素H，肌醇，酒石酸氫膽鹼，甜菜鹼和維生素K以及礦物質如鉬，鉻和鉀。
緊張，運動及其它狀況在身體內產生自由基，其可能損害身體的組成部分。為對抗自由基，本發明可以包含除上述維生素C和E以外的下列抗氧化劑柑桔屬生物類黃酮，混合類胡蘿蔔素，綠茶提取物及N-乙醯半胱氨酸。
另外，本領域技術人員公知的其它調味品和添加劑也可以加入到配方中以使得它們更加可口。例如，配方可以包含姜，乳香，果實調味品，色素，防腐劑等。
當以固體形式被攝食時，本發明的nutraceutical組合物可以另外包含固體載體如明膠或助劑。當以液體形式給藥時，可以加入液體載體如水，石油產品，動物油或植物油如花生油、礦物油、豆油或芝麻油，或合成油。本發明的nutraceutical組合物也可以包含穩定劑、防腐劑、緩衝劑、抗氧化劑或其它本領域技術人員公知的添加劑。
在一個優選實施方案中，提供了一種食物或營養添加劑或nutraceutical，其包含約0.1-99％，優選約30-90％的含花色素苷的果實提取物。在這方面，單一劑型(即以單一片劑，膠囊服用(無論是液體或是固體中))包含花色素苷的總量約1-500毫克，優選約5-100毫克，更優選約20-70毫克。在目前優選的配方中，提供的片劑(單一劑型)包含約50毫克總花色素苷。術語「總花色素苷」指的是存在於單一劑型中的花色素苷的總量。
從含花色素苷植物中獲得的提取物選自甲基花青素，花青素，花葵素，翠雀素，3』-甲花翠素，二甲花翠素，堪非醇，橙皮苷，龍膽翠雀鹼，桔梗皂苷，瓜菊酯，包括它們的苷衍生物及其混合物。在一個優選實施方案中，花色素苷選自花青素，甲基花青素，二甲花翠素，3′-甲花翠素，翠雀素，它們的苷衍生物及其混合物。
營養添加劑包含穩定的花色素苷是有利的，其將在活體內水解成糖苷配基形式(花青素)，以提供COX抑制活性。
一種優選的營養添加劑包含果實提取物，其中果實提取物選自接骨木果，酸櫻桃，歐洲越桔和其混合物的提取物。更具體地說，果實提取物含有含量為果實提取物重量的約2-98％的接骨木果提取物，含量為果實提取物重量的約1-49％的酸櫻桃提取物，含量為果實提取物重量的約1-49％的歐洲越桔提取物。優選，提取物含有約90-98％(更優選約96％)的接骨木果提取物，約1-5％(更優選約2％)的櫻桃提取物(優選酸櫻桃)，和約1-5％(更優選約2％)的歐洲越桔提取物。
在這個優選的營養添加劑中，花青素包括至少約90重量％存在於接骨木果提取物中的總花色素苷。優選，花青素含有約95重量％，更優選約96重量％存在於接骨木果提取物中的總花色素苷。在這種情況下，該花青素以花青素-3-糖苷，花青素-3-黑接骨木苷，花青素-3，5-二葡糖苷和花青素-3-samb-5-糖苷的混合物存在。
同樣，花青素含有至少約90重量％存在於酸櫻桃提取物中的總花色素苷。優選，花青素含有約95重量％，更優選約96重量％存在於酸櫻桃提取物中的總花色素苷。與接骨木果相反，該花青素以花青素-3-芸香苷-己糖，花青素-3-芸香苷戊糖，花青素-3-芸香苷和甲基花青素-3-芸香苷的混合物存在。
最後，歐洲越桔包含二甲花翠素，甲基花青素，花青素，3′-甲花翠素和翠雀素的混合物。這些花色素苷中的每一個包括約95重量％，更優選約96重量％存在於歐洲越桔提取物中的總花色素苷。更具體地說，二甲花翠素以二甲花翠素-3-阿糖苷，二甲花翠素-3-糖苷，二甲花翠素-3-半乳糖苷存在。甲基花青素以甲基花青素-3-糖苷，甲基花青素-3-半乳糖苷存在。花青素、3′-甲花翠素和翠雀素以3-糖苷和3-半乳糖苷存在。
下表闡明特別優選的實施方案中的每項具體含量。
G.實施例下列實施例用於說明本發明的優選實施方案。但是，本領域技術人員應該理解，在不背離本發明精神和範圍的情況下，根據本公開內容，在公開的具體實施方案中可以進行許多變化，並仍能獲得相同或相似的結果。
之後，使用截留分子量為4,000的膜對來自超濾裝置的滲透液進行反滲透。持續反滲透步驟直到保留液包含約1重量％或更少的固體。
將保留液收集到儲罐中並用真空蒸發器將其濃縮到固含量為至少20重量％，真空蒸發在低於約52℃溫度下進行以避免濃縮的類黃酮分解。
將濃縮物與麥芽糖糊精合併，並進行噴霧乾燥，該噴霧乾燥器的出口溫度給持在低於約27℃。
將從袋壓裝置保留下來的果肉收集起來，乾燥、壓碎。
超濾膜為PVDF聚合物膜，其額定截留分子量為100,000(道爾頓)。適合的膜可以以商品名FP從PCI Membrane Systems購得。
在超濾結束時，收集到53.7千克包含5重量％固體的滲透液和3.49千克包含0.3重量％固體的保留物。然後將滲透液進行納濾/反滲透，進料壓力為40巴，流速範圍從起始的1290g/min到最終的1380g/min，溫度範圍從該過程起始溫度24℃到該過程結束溫度41°F。雙濾中使用72.4千克水。
使用截留分子量為4,000(道爾頓)的聚醚碸膜。適合的膜可以以商品名ES404從PCI Membrane Systems購得。
這一步驟結束時，收集到6.4千克包含1重量％固體的保留液，回收了117千克包含2重量％固體的滲透液。
為製成粉末，將保留液與79克麥芽糖糊精M100合併並混合，將得到的產品引入進口溫度為約140℃，出口溫度為約90℃的噴霧乾燥器中製得約105克粉末。
每天都製備新鮮的氯化鉀溶液(15g/100ml蒸餾水)，並按照廠家說明書裝配電極，保持測量室溫在37℃。
使用前列腺素測定器材，測定裝置類似於對COX-1所描述的測定方式。簡短來說，將50μl石炭酸加入到20ml的100mM Tris緩衝液中，加熱到37℃，保持1分鐘(工作緩衝劑)。在一管正鐵血紅素中加入0.9ml的該工作緩衝劑。將50μl濃度為0.1的NaOH加入到花生四烯酸管瓶中並旋轉。加入0.43ml水並將溶液再次混合。稱量提取物樣品並將其溶於工作緩衝劑得到最終濃度為0.1g/ml。緩衝劑，樣品或稀釋的樣品直接用於酶活性測定。
按照廠商指導進行酶活性測定，這對本領域技術人員來說是公知的。簡短地說，將600μl工作緩衝劑從溢流口吸入室內，關閉噴射閥，將主出口連接到右方的注射器上，將攪拌棒速率設定為3k/min。在1分鐘間隔時，注入5μl酶，15μl正鐵血紅素溶液，6μl緩衝劑或樣品或稀釋的樣品和8μl花生四烯酸溶液。將氧濃度變化轉變成mV並將其記錄。當加入花生四烯酸時，可以看到的氧消耗或氧濃度減少。
從下表中可以看出所測試的樣品中選擇性的明顯趨勢。
表1.COX-1和COX-2的IC50值和具體的活性
*該數越大，提取物對COX-2的選擇性越高，相反對COX-1的選擇性越小。
另外，對於一種公認的COX-2特效抑制劑Celebrex，檢測了其COX-2潛力。
表2.相對於Celebrex的COX-2性能用上述方法測定了各種待測抑制劑的COX-2抑制並與已知的COX-2抑制劑Celebrex進行了比較。
以上數據清楚地表明Artemis黑莓樣品對COX-2的選擇性。實施例4下面描述一個測定待測抑制劑是否抑制COX-1或COX-2的優選方法。通常，對每個待測抑制劑，六個不同的濃度都用於COX-1和COX-2酶反應。來自標準樣品或酶反應的PG-f2α的量用免疫測定法進行定量。在標準樣品中的PG-f2α量用於繪製標準曲線(光密度/濃度)，標準曲線用來計算每個樣品的酶反應(回歸)的PG-f2α量。然後，從同一種待測抑制劑的六個不同反應濃度得到的PG-f2α量用來繪製樣品曲線。最後，從樣品曲線中獲得抑制酶到其最高活性(沒有抑制劑時)的50％的待測抑制劑的濃度，或I50。為保持結果的一致性，一個待測抑制劑或藥作為正(positive)對照物用於每組實驗。
COX-1和COX-2酶來自肯塔基州大學的Dr.Daniel Tai。它們的製備如下COX-1酶從來自於肯塔基州中心血庫的人的血小板濃縮物中提取。在1,000xg下將血小板懸浮液離心10分鐘。用相同體積的磷酸鹽緩衝鹽水洗滌小粒，懸浮液再次進行離心。血小板被懸浮在5體積的50mMTris鹽酸緩衝劑中，pH為7.5，在4℃下進行超聲處理3×20秒。在5,000xg下將懸浮液離心10分鐘。上清液進一步在100,000xg下離心60分鐘。小粒(微粒體)懸浮在5ml的50mM Tris鹽酸緩衝劑中，pH為7.5，並於-80℃下以200μl的等分部分來貯存。這一部分用作COX-1酶源。
重組體人的COX-2酶從感染了攜帶有COX-2 cDNA的重組體杆狀病毒的昆蟲細胞(Sf9)中獲得。簡而言之，將Sf9細胞(1×107)種在75cm2的組織培養燒瓶中，內有20ml完全的TNF-FH介質。允許細胞附著1小時。移走介質，在約10多重性因子下加入4ml包含重組病毒的Grace介質。允許細胞連續生長72小時。通過500xg下離心10分鐘，收集細胞。將細胞懸浮在1毫升50mM的Tris鹽酸緩衝劑中(pH為7.5)，並在0℃超聲處理3×10秒。在5,000xg簡短旋轉勻漿5秒以除去細胞碎片。然後將上清液於-80℃下以200μl的等分部分來貯存。這一部分用作COX-2酶源。
製備如下的緩衝劑1.包被用緩衝劑0.1M的NaHCO3/Na2CO3，pH9.52.酶免疫測定(「EIA」)用緩衝劑0.1M的KH2PO4/K2HPO4，pH7.5，包含0.9％的NaCl和0.1％牛血清清蛋白(ELISA或RIA級)3.抗體穩定用的緩衝劑EIA緩衝劑加蔗糖(5g每100毫升)
4.洗滌用緩衝劑0.01M的KH2PO4/K2HPO4，pH7.5，包含0.05％的Tween205.酶反應緩衝劑和樣品稀釋緩衝劑50mM Tris鹽酸，pH7.56.PBS(磷酸鹽緩衝液鹽水)10mM的KH2PO4/K2HPO4，pH7.5，包含0.9％NaCl7.A蛋白溶液1mg/ml，在磷酸鹽緩衝鹽水中用於免疫測定法的加樣孔通過如下的方法進行包被處理(a)在19.9毫升表皮緩衝劑中加入100μlA蛋白溶液，攪拌加樣孔，傾倒入配藥託盤中；(b)移取200μl上述溶液至每個加樣孔中(在轉移入加樣孔中以前衝洗多次)；(c)在室溫下將盤子貯存4-5小時或在37℃貯存2-3小時或在4℃貯存過夜；(d)移取100μl的EIA緩衝劑到每個加樣孔以佔據未填滿的部位，搖動並在室溫下保溫2小時或在4℃保溫過夜。如果加樣孔裝有水，盤子可以在4℃貯存不確定的時間。
製備如下的溶液1.花生四烯酸1毫克/毫升的乙醇溶液2.異丙基腎上腺素2.5毫克/毫升，在使用以前馬上製備3.血色素3.2毫克/毫升，在使用以前馬上製備4.SnCl250毫克/毫升的乙醇溶液5.HCI1N6.K-藍色底物緩衝劑Neogen，Lexington，KY7.COX-1酶(如上所述)稀釋30倍，每次測定使用5μl8.COX-2酶(如上所述)稀釋5倍，每次測定使用5μl9.PGF-2α抗體(Dr.Tai)稀釋5,000倍，每個加樣孔使用50μl10.PGF-2α-HRP(Dr.Tai)稀釋2,000倍，每個加樣孔使用100μl製備下列PGF-2α標準樣品A.1μg/mlB.20μlA(1μg/ml)加上980μl的EIA緩衝劑---1,000pg/50μlC.200μlB加上1.8ml的EIA緩衝劑-----100pg/50μlD.200μlC加上1.8ml的EIA緩衝劑-----10pg/50μl
當待測抑制劑是含花色素苷植物的提取物時，花色素苷被提取、濃縮和水解以提供糖苷配基形式，例如花青素。同樣，當待測抑制劑為市售提取物時，提取物被水解以提供糖苷配基形式。在所有情況下，所測試的均是花色素苷的糖苷配基形式。然後，將水解的花色素苷溶於0.1％的鹽酸乙醇溶液以用於測試。
PGF-2α是一種前列腺素，進行酶反應是為了測定待測抑制劑是否能有效地抑制COX-1或者COX-2(這取決於所使用的酶)。PGF-2a是間接穩定的前列腺素，其由通過酶反應形成的前列腺素產品還原得到。
酶反應程序依如下所述進行(a)製備385μl緩衝劑(50mM的Tris-HCl，pH7.5)並在室溫下將其與50μl異丙基腎上腺素，10μl血色素，5μl SnCl2和5μl酶混合(取決於將要進行測試的酶，例如如上所述的COX-1或COX-2)；(b)在裝有40μl待測抑制劑的管中加入455μl的混合物(a)，並混合；(c)在每個管中加入5μl花生四烯酸溶液，混合，並在37℃保溫5分鐘；(d)通過加入30μl的1N的HCl並混合以停止反應；(e)通過加入30μl的1M Tris-鹼進行中和。
酶免疫測定程序是用來測定由酶反應產生的PGF-2α量的方法。酶免疫測定按下面的方式進行(a)將加樣孔中的全部液體搖出並塗在紙巾上形成斑點；(b)每次用200μl洗滌用的緩衝劑洗滌2次，搖動並吸印；(c)加入50μl的PGF-2α抗體；(d)加入50μl的STD(PGF-2α)或上述酶反應產品(用EIA緩衝劑稀釋50倍)；(e)加入100μl的PGF2α-HRP(在EIA緩衝劑中)；(f)搖動並允許盤於在室溫下保持1小時；(g)通過重複步驟(b)將加樣孔洗滌三次；(h)在每個加樣孔中加入100μl底物緩衝劑；(i)在室溫下培養3-30分鐘，培養時間長短取決於顯色；(j)開啟計算機和96-well生物測定讀數裝置並遵循操作指南(Molecular Devices，Vmax動力學微量培養板讀數裝置)；(k)加入30μl的1N HCl以終止反應；(1)在420nm讀數；(m)保存數據。
通過如下方法對數據進行分析(a)將數據複製到一個電子數據表中；(b)根據標準PGF-2a免疫測定結果繪製標準曲線；(c)使用回歸從標準曲線查找所有樣品酶反應的PGF-2a量；(d)分別對每個樣品畫出曲線；和(e)測定I50。根據該程序，評價幾個待測抑制劑，將其結果列於下表3中。
表3
A是包含40％的含7％花色素苷的歐洲越桔的片劑B是來自包含25％歐洲越桔的Nutritech的市售提取物C是來自包含25％歐洲越桔的Nutritech的市售提取物，其生產批量不同於樣品BD是包含39.17％的含15％花色素苷的接骨木果的片劑E是包含39.17％的含20％花色素苷的接骨木果的片劑F是包含11.76％的接骨木果和19％的歐洲越桔的片劑，其中接骨木果中含15％花色素苷，歐洲越桔中含7.2％花色素苷接骨木果含有98％的花青素和花色素苷。歐洲越桔含有23％的花青素和花色素苷。
從上明顯可知，花青素含量提高，其性能和選擇性增加。
表4
注1.對所有的果實樣品，總花色素苷用花青素-3-糖苷的數量表示2.活性含量以試驗結果為基礎計算並表示為活性物質的百分數如，在接骨木果，北美沙果和酸櫻桃中，100％的花色素苷是活性花青素的苷。
*指從水解和XAD柱提純的果實測試的COX抑制活性。
根據以上結果，用於炎症治療的食品添加劑優選提供COX-1抑制與COX-2抑制的比至少為1，優選大於1.3。因此，食品添加劑將提供選擇性的COX-2抑制。配方本實施例提供包含一種或多種來自於含花色素苷植物的果實提取物用作消炎藥的配方。當然這些僅僅是示範性的配方，本領域技術人員將會理解，根據具體的說明書可以對這些配方作出改變，這些改變仍然相當於本發明的配方。
表5 消炎配方1
表6 消炎配方2
表7 消炎配方3
根據本公開，不進行過多的實驗即可以製備本文公開的和要求權利的所有組合物和/或實施本文公開的和權利要求的方法。雖然本發明的組合物和方法已經通過優選實施方案進行了描述，但對本領域技術人員來說，很顯然，在不背離本發明的原理，精神和範圍的情況下，可以對本文所述的組合物和/或方法以及方法的步驟或其順序進行變化。更準確地說，很顯然，當能達到相同或相似的結果時，在化學性質和生理學上均相關的某些試劑可以用來代替本文所述藥劑。所有這種相似的代用品和對本領域技術人員顯而易見的改變均被認為在隨後由權利要求書所定義的本發明的精神，範圍和原理範圍之內。
權利要求
1.一種具有消炎性能的食品添加劑，其中該食品添加劑包括a.消炎活性大於在其天然果實中發現的消炎活性的富含花色素苷的果實提取物；和b.藥理上可接受的稀釋劑或賦形劑。
2.權利要求1的食品添加劑，其中果實提取物來自於選自如下的果實甜櫻桃，酸櫻桃，西印度櫻桃，李子，歐洲越桔，黑莓，醋慄，北美沙果，越桔，草莓，酸果蔓紅，博伊森樹莓，葡萄，覆盆子，接骨木果及其混合物。
3.權利要求1的食品添加劑，其中提取物的消炎活性通過抑制環加氧酶進行傳遞。
4.權利要求1的食品添加劑，其中提取物提供的對環加氧酶2(COX-2)的抑制活性大於對環加氧酶1(COX-1)的抑制活性。
5.權利要求1的食品添加劑，其中提取物提供的對環加氧酶1(COX-1)的抑制活性大於對環加氧酶2(COX-2)的抑制活性。
6.權利要求4的食品添加劑，其中對COX-2的抑制活性與對COX-1的抑制活性之間的比值為約1∶1-25∶1。
7.權利要求1的食品添加劑，其中消炎抑制活性通過花色素苷傳遞，所述花色素苷選自甲基花青素，花青素，花葵素，翠雀素，3』-甲花翠素，二甲花翠素，堪非醇，橙皮苷，龍膽翠雀鹼，桔梗皂苷，瓜菊酯，它們的苷衍生物及其混合物。
8.權利要求1的食品添加劑，其中果實提取物包含一種或多種花色素苷，其量為該提取物重量的至少約10％。
9.權利要求1的食品添加劑，其中果實提取物包含一種花色素苷，所述花色素苷選自花青素，其苷衍生物及其混合物。
10.權利要求1的食品添加劑，其中添加劑製成凝膠，膠囊，片劑，糖漿，飲料或粉末。
11.權利要求1的食品添加劑，其中消炎活性比天然果實的消炎活性大約2-100倍。
12.權利要求1的食品添加劑，還包括一種具有消炎活性的植物或提取物。
13.一種在人身上抑制COX-2的方法，包括提供一種含花色素苷的提取物的步驟，其中花色素苷水解成其糖苷配基形式以使對COX-1的抑制低於對COX-2的抑制。
14.一種在細胞中抑制COX-2活性的方法，包括將所述細胞與果實提取物接觸的步驟，所述果實提取物選自甜櫻桃，酸櫻桃，西印度櫻桃櫻桃，李子，歐洲越桔，黑莓，黑醋慄，北美沙果，越桔，草莓，酸果蔓紅，博伊森樹莓，葡萄，覆盆子，接骨木果及其混合物，並且其消炎活性大於在天然果實中發現的消炎活性。
15.權利要求14的方法，其中細胞是哺乳動物細胞。
16.權利要求15的方法，其中細胞是人的細胞。
17.權利要求14的方法，其中細胞在活體外和果實提取物接觸。
18.權利要求14的方法，其中細胞在活體內接觸。
19.一種治療動物發炎反應的方法，包括給予該動物一種組合物，所述組合物包含a.消炎活性大於在其天然果實中發現的消炎活性的果實提取物；和b.藥理上可接受的稀釋劑或賦形劑。
20.權利要求19的方法，其中發炎反應選自關節炎，疼痛，過敏皮疹，炎性腸病和哮喘。
21.權利要求19的方法，其中果實提取物包含一種花色素苷，所述花色素苷選自甲基花青素，花青素，花葵素，翠雀素，3』-甲花翠素，二甲花翠素，堪非醇，橙皮苷，龍膽翠雀鹼，桔梗皂苷，瓜菊酯，它們的苷衍生物及其混合物。
22.權利要求21的方法，其中花色素苷在活體內水解以使COX-2被選擇性地抑制。
23.一種用於從含花色素苷植物中濃縮花色素苷的方法，包括a.將所述植物和水的混合物均勻化以形成一種包含一種或多種花色素苷的水溶液和固體，所述花色素苷選自甲基花青素，花青素，花葵素，翠雀素，3』-甲花翠素，二甲花翠素，堪非醇，橙皮苷，龍膽翠雀鹼，桔梗皂苷，瓜菊酯，它們的苷衍生物及其混合物；b.從該溶液中分離固體；c.將該水溶液通過截留分子量在約100,000-1,000,000的超濾膜以得到上清液；d.將上述上清液通過截留分子量在約1,000-10,000的反滲透膜以得到富含花色素苷的保留物；e.收集該保留物；f.在低於約80℃溫度下乾燥該保留物。
24.權利要求23的方法，其中在收集的保留液中加入流動性控制劑以形成一種混合物，通過噴霧乾燥完成乾燥以形成粉末。
25.權利要求24的方法，還包括將粉末與一種賦形劑結合以得到食物添加劑。
全文摘要
本發明描述了包含一種或多種果實提取物,用於減輕疼痛和消炎的食品添加劑,該食品添加劑可用來抑制由環加氧酶,更具體地由環加氧酶－2傳遞的炎症。
文檔編號A61K9/06GK1384713SQ00814997
公開日2002年12月11日 申請日期2000年8月25日 優先權日1999年8月27日
發明者M·G·奈爾, H·王, D·L·德維特, D·W·克雷姆平, Y·錢, D·K·莫迪 申請人:密執安州大學, 美國安利有限公司