一種利用靈芝轉化山藥生產功能性食品的方法與流程
2023-06-23 04:14:06 4
本發明涉及生物工程技術領域,具體涉及一種利用靈芝轉化山藥生產功能性食品的方法。
背景技術:
山藥為薯預科薯蕷屬中能形成地下肉質塊莖的栽培種,一年生或多年生纏繞性藤本植物,別名淮山、薯損、懷山藥等。山藥是一種藥食兼用的高產、高效經濟作物,幹制入藥為滋補強壯劑,對虛弱、慢性腸炎、糖尿病等有輔助療效。山藥富含蛋白質、胺基酸、澱粉等營養物質以及多糖、皂苷、維生素、尿囊素、多巴胺、山藥鹼、多酚氧化酶等生物活性成分。《本草綱目》山藥治諸虛百損,療五勞七傷,止腰痛、除煩熱、補心氣不足,開達心孔、多記事、強筋骨、益腎氣、健脾胃、止瀉痢、化痰涎、潤皮毛等功效,《醫學衷中參西錄》記載山藥具有止消渴(糖尿病)。現代醫學研究證明山藥具有調節或增強機體免疫、降低血壓和血脂功效以及抗腫瘤、抗氧化、抗衰老和抗突變等作用。
山藥最初食用方法是去皮、曬乾、磨粉後長期保藏,通常將山藥粉通過蒸煮做成各種食品或者將山藥直接煲成湯來食用。近些年來,隨著科學技術的進步,人們對山藥的開發也逐漸的向深層次發展,有關山藥產品研究開發的報導很多:將山藥直接乾燥製成全粉、精粉,將山藥直接打漿製成系列飲料,將山藥澱粉製成營養米粉,將山藥和純奶、大米等複合發酵成山藥酸奶和山藥酒等。目前,將山藥的有效成分直接提取出來開發成具有保健功能的食品正逐漸成為山藥開發利用的新思路。但是極少有報導利用藥食用真菌對山藥進行生物轉化的研究。
本案發明人經過深入研究和反覆工業化生產試驗,摸索出工業化規模轉化山藥生產功能性食品技術,本發明無論從產品的生產方式和生產的產品,都有別於以往的專利和文章報導的內容,即一種利用靈芝轉化山藥生產功能性食品的方法。
技術實現要素:
、要解決的問題
針對現有技術中存在的上述問題,本發明提供一種利用靈芝轉化山藥生產功能性食品的方法,其以打漿山藥和大米、小麥、玉米和高粱為固體基質,以靈芝為菌種通過固體發酵,轉化山藥,通過發酵使得靈芝菌絲體與山藥相互作用生產具有藥學功能的功能性食品,工藝簡單,且所得到的產品中,皂甙含量2~20mg/g幹基質,靈芝多糖含量10~100mg/g幹基質、靈芝酸含量1~20mg/g幹基質。該產品也可以進一步提取靈芝酸和皂甙、多糖由此製得的產品具有與發酵物相同的生藥學功能。
、技術方案
為了解決上述問題,本發明所採用的技術方案如下:
所述的一種利用靈芝轉化山藥生產功能性食品的方法,所述製備方法以打漿山藥、大米、小麥、玉米和高粱為主要基質,以靈芝為出發菌株,依次經過試管擴大培養、液體搖瓶培養和種子罐擴大培養、固體發酵培養等步驟;所述功能性食品可以再分別經過提取製得皂甙和靈芝酸提取物、靈芝多糖提取物,其中皂甙和靈芝酸提取物中皂甙和靈芝酸含量分別為25~60%和30~70%,靈芝多糖純度20~60%。
所述的一種靈芝轉化山藥生產功能性食品的的方法,該方法所使用的山藥原料包括:懷山藥(Dioscorea opposita Thunb)、方山藥(Dioscorea alata L.)及其變種腳板苕(Dioscorea alata L.f. flabella Makino.)、以及包括野山藥(Dioscorea japonicaThunb.)、褐苞薯(Dioscorea persimilis Prain et Burk.)、山薯(Dioscorea fordiiPrain et Burk.)或汀山藥(Dioscorea quinquelaba Thunb.)等土山藥,鐵棍山藥(Dioscorea opposita Foshou)或佛手山藥(Dioscorea opposita Iron-rod);所使用的靈芝菌種包括樹舌(Ganoderma applanatum)、靈芝(Ganoderma lucidum)或紫芝(Ganoderma sinensis)。
一種靈芝轉化山藥生產功能性食品的方法,按照下述步驟進行:
A1試管擴大培養:將靈芝斜面菌種接種於馬鈴薯葡萄糖培養基中進行培養,製得靈芝試管斜面菌種;
A2液體搖瓶培養:將步驟A1所製得的靈芝試管斜面菌種接種到裝有液體搖瓶培養基的搖瓶中,進行培養,製得靈芝液體搖瓶菌種;
A3種子罐擴大培養:將步驟A2所製得的靈芝液體搖瓶菌種接種到種子罐培養基中進行培養,製成靈芝種子罐菌種;
A4固體發酵培養:將步驟A3所製得的靈芝種子罐菌種接種到固體培養基中,並混合均勻,進行發酵培養,製得靈芝固體發酵物;
A5包裝:靈芝固體發酵物經過烘乾、粉碎、包裝製得靈芝轉化山藥的功能性食品。
優選地,一種利用靈芝轉化山藥生產功能性食品的方法,按照下述步驟進行:
B1試管擴大培養:將靈芝試管中斜面菌種切成3×3 mm小塊菌種,接種一小塊到試管斜面培養基中,20~35℃培養4~15天,製得試管斜面菌種,該試管斜面4℃保存備用;
B2液體搖瓶培養:將步驟B1所製得的試管斜面菌種切成3×3 mm小塊菌種,挑取3~10塊接種於裝有20~150mL液體搖瓶培養基的250mL三角瓶中,三角瓶在轉速為50~200轉/分,溫度20~35℃的條件下,培養18-86h,製成液體搖瓶菌種;
B3種子罐擴大培養:將步驟B2所製得的液體搖瓶菌種接種於種子罐擴大培養基中,且所述液體搖瓶菌種與種子罐擴大培養基按體積比為1~20%的接種量接種,在溫度為20~35℃,攪拌轉速為50~160轉/分,在每分鐘通入氣體的體積與種子罐擴大培養基體積比為0.2~1.8:1的通氣量條件下,培養18~96h,製成靈芝種子罐菌種;
B4固體發酵培養:將步驟B3所製得的靈芝種子罐菌種接入固體發酵培養基中,且所述靈芝種子罐菌種與固體發酵培養基按重量比為2~10%的接種量接種,在溫度20~35℃,溼度80%發酵5~20天,其中每隔3~6天,翻料一次,製得固體發酵物;
B5固體發酵物經過80~120℃烘乾10~24小時後,粉碎到100目以下,包裝得到可以食用的功能性食品;
步驟A4、A5或步驟B4、B5功能性食品進行靈芝酸和皂甙的提取方法包括如下步驟:
C1將所製得的靈芝轉化山藥固體發酵物烘乾粉碎至20目以下或功能性食品,加入菌絲體重量的5~20倍體積的60~100%的乙醇,反覆提取3~5次,得提取液;
C2將步驟C1所製得的提取液合併,然後減壓濃縮至原體積的1/30,加入剩餘體積5倍的水,於4℃條件下結晶3~18小時,然後抽濾乾燥,粉碎至100目以下,即得到含有皂甙和靈芝酸功能性食品,該食品皂甙和靈芝酸含量分別為25~60%和30~70%。
步驟A4、A5或步驟B4、B5功能性食品進行靈芝多糖的提取包括如下步驟:
D1將所製得的靈芝菌絲體烘乾,然後粉碎至20目,加入菌絲體重量的5~20倍體積的蒸餾水,80~100℃反覆提取3~5次,得提取液;
D2將步驟D1所製得的提取液合併,然後減壓濃縮至原體積的1/30,加入剩餘體積0.5~1.5倍的95%乙醇,於4℃條件下結晶5~18小時,過濾,濾液繼續加入提取剩餘液體積2.5~3.5倍的95%乙醇,於4℃條件下結晶5~18小時,然後抽濾乾燥,即得到靈芝多糖,靈芝多糖純度20~60%。
優選地,步驟B2中所述液體搖瓶培養基是在100~130℃條件下滅菌10~60 min製得,且每升液體搖瓶培養基中含有麩皮5~20g,10000轉/分鐘勻漿的山藥5~20g的原料.
優選地,步驟B3中所述種子罐擴大培養基是在100~130℃條件下滅菌10~60 min製得,且每升液體搖瓶培養基中含有麩皮5~20g,10000轉/分鐘勻漿的山藥5~20g的原料。
優選地,步驟B4中所述固體發酵培養基是在100~130℃條件下滅菌90~360 min製得,且每千克10000轉/分鐘勻漿的山藥加入加入200~400g大米、100~300g小麥、100~300g玉米和700~300g高粱等固體基質原料。
優選地,所述固體發酵培養基中的原料按重量比為1:0.6~1.5的比例與水混合。
、有益效果
相比於現有技術,本發明的有益效果為:
(1)本發明在吸取中藥發酵製藥技術的基礎上,結合現代固態發酵的優點,採用固態發酵轉化山藥,克服了液態發酵過程中基質(蕎麥的活性成分)對靈芝菌絲生長的抑制作用,同時無液態發酵廢水和廢渣汙染;
(2)本發明所述的一種利用靈芝轉化山藥生產功能性食品的方法,不是單純的利用分離提純方法提取山藥的活性成分和靈芝的活性成分然後進行復配而成,而是以靈芝為菌種通過固體發酵,轉化山藥後直接食用,既提高了山藥活性成分的功效,又增強了靈芝活性成分靈芝多糖和靈芝酸的量,可實現工業化大規模生產;
(3)本發明所述的一種靈芝轉化山藥生產功能性食品的方法,其產品中皂甙含量2~20mg/g幹基質,靈芝多糖含量10~100mg/g幹基質、靈芝酸含量1~20mg/g幹基質。具有調節血脂、血糖和血壓、抗輻射和抑制腫瘤等功效。從本產品中提取的靈芝酸和皂甙、靈芝多糖同樣具有調節血脂、血糖和血壓、抗輻射和抑制腫瘤功能。
附圖說明
圖1為本發明所述的一種利用靈芝轉化山藥生產功能性食品的方法的製備流程示意圖。
具體實施方式
所述的皂甙含量的測定採用分光光度法(唐忠厚、史新敏、孫健、李洪民、張愛君:山藥總皂甙含量測定及其基因型差異研究.江西農業學報2011,23(2):50~52).
所述的靈芝酸含量的測定採用紫外分光光度法(王翔飛,潘旭東,劉雯霞,等.黃花瓦松中總三萜成分的含量的測定.中國民族民間醫藥,2009,18(10):11)。
所述的靈芝多糖含量等於總糖減去還原糖,總糖的測定採用硫酸-苯酚法(趙陽楠,常繼東.苯酚硫酸法和間接碘量法測定靈芝多糖含量比較[J].食用菌, 2007,(3): 58~61.),還原糖含量測定採用3,5-二硝基水楊酸法(Miller GL. Use of dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing sugars. Analytical Chemistry. 1959, 1: 426 ~428.)。
所述的靈芝轉化山藥生產功能性食品調節血脂的評價方法採用高血脂模型鼠評價(曹敏等: 三七花總皂苷降壓作用研究.光明中醫,2012,27(7):1314-1315)。具體操作為:40 只小鼠以基礎飼料適應餵養 5d 後,取尾血測定血清中甘油三酯含量,以甘油三酯水平隨機分為 4 組:正常對照組、高血脂對照組、低劑量實驗組、高劑量實驗組。正常對照組小鼠飼餵基礎飼料(12%酪蛋白,60.98%玉米 澱粉,15%蔗糖,7%玉米油,1%維生素糖粉,4%礦物鹽,0.02%魚肝油);高脂模型對照組飼餵高脂飼料(15.75%熟豬油,7.79% 蔗糖,2%膽固醇,0.5%膽酸,73.96%基礎飼料;低劑量和高劑量組小鼠飼餵每公斤高脂飼料含有10克和20克的靈芝轉化山藥功能性食品。各組小鼠均自由攝食和飲水,動物室溫度18~22℃。連續給藥四周後,尾部靜脈取血,分析血清三磷酸甘油酯、總膽固醇、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白含量
所述的靈芝轉化山藥生產功能性食品調節血脂的評價方法採用巴比妥和結紮左腎動脈聯合誘導的高血壓模型大鼠評價(黃志新等:槲寄生、杜仲的降血壓作用和急性毒性的實驗研究. 天然產物研究與開發,2003,15(3):245-248)。高血壓模型鼠分為三組空白對照組、低劑量組和高劑量組分別飼餵基礎飼料、每公斤含有10克的靈芝轉化薯蕷功能性食品的基礎飼料和每公斤含有20克的靈芝轉化薯蕷功能性食品的基礎飼料。連續給藥14天測定給藥前和給藥後的血壓。
所述的靈芝轉化山藥生產功能性食品調節血糖的評價方法採用四氧嘧啶誘導的糖尿病模型鼠評價。模型鼠的誘導參照文獻(Zhicai Zhang等Effect of FeSO4 treatment on glucose metabolism in diabetic rats. Biometals (2008) 21:685–691)進行。高血糖模型鼠分為三組空白對照組、低劑量組和高劑量組分別飼餵基礎飼料、每公斤含有10克的靈芝轉化薯蕷功能性食品的基礎飼料和每公斤含有20克的靈芝轉化薯蕷功能性食品的基礎飼料。連續給藥28天測定給藥前和給藥後的血糖值。
所述的靈芝轉化山藥生產功能性食品抗輻射的評價方法採用輻射照射大鼠進行評價(梁龍彥.蜂皇漿抗輻射損傷的效應研究. 黑龍江醫學,2012,36(10):724-726)。30隻SD雄性大鼠分別飼餵基礎飼料、含1%和2%靈芝轉化山藥功能性食品的基礎飼料15天後,大鼠飼用60Coγ射線進行全身照射,距輻射源1.0 m劑量率2.0 Gy,總劑量200rad。照射10天後測量體重、老鼠死亡率,尾部靜脈取血分析白細胞數量。
所述的靈芝轉化山藥生產功能性食品抑制腫瘤的評價方法採用抑制原發性肝癌細胞Hepg2生長的作用(周寧, 陳江濤, 於文燕. 無花果水提取液對抑制腫瘤細胞增殖作用的初步研究. 新疆醫科大學學報. 2016, 39(1):42-47)。Hepg2細胞組用完全培養液調整細胞濃度為2×104個/mL,接種於96孔板,每孔總體積為200μL,培養過夜使細胞貼壁,次日分別用不同劑量的靈芝轉化山藥功能性食品的乙醇提取液和水提取液(基質:水(或無水乙醇)=1:10,70℃提取4小時)分別處理細胞24h,對照組加入PBS處理24h,每個測定接種3個復孔,置於37℃、5%CO2孵箱處理24後,每孔加入5mg/mL噻唑藍(MTT)試劑20μL,繼續培養4h,再加二甲基亞碸(DMSO)150μL,振蕩混勻10min,用酶標儀(λ=490nm)測定OD值(OD值與活細胞數成正比),細胞抑制率=1-(加藥組OD值/對照組OD值),實驗重複3次。
下面結合具體實施例對本發明進一步進行描述。
實施例1
如圖1所示,一種利用靈芝轉化山藥生產功能性食品的方法具體包括如下步驟:
(1)試管擴大培養:將紫芝(Ganoderma sinense )CGMCC 5.69試管斜面菌種切成3×3 mm小塊菌種,接種一小塊到試管斜面培養基中,20℃培養15天,製得試管斜面菌種,該試管斜面4℃保存備用;
(2)液體搖瓶培養:將步驟(1)所製得的試管斜面菌種切成3×3 mm小塊菌種,挑取10塊接種於裝有150mL液體搖瓶培養基的250mL三角瓶中,三角瓶在轉速為50轉/分,溫度35℃的條件下,搖床培養18h,製成液體搖瓶菌種;所述液體搖瓶培養基是在130℃條件下滅菌10 min製得,且每升液體搖瓶培養基中含有麩皮5g,10000轉/分鐘勻漿的山藥20g的原料;
(3)種子罐擴大培養:將步驟(2)所製得的液體搖瓶菌種接種於種子罐擴大培養基中,且所述液體搖瓶菌種與種子罐擴大培養基按體積比為1%的接種量接種,在溫度為35℃,攪拌轉速為160轉/分,在每分鐘通入氣體的體積與種子罐擴大培養基體積比為0.2:1的通氣量條件下,培養96h,製成靈芝種子罐菌種;所述種子罐擴大培養基是在130℃條件下滅菌10 min製得,且每升液體搖瓶培養基中含有麩皮5g,10000轉/分鐘勻漿的山藥20g的原料;
(4)固體發酵培養:將步驟(3)所製得的靈芝種子罐菌種接入裝有懷山藥(Dioscorea opposita Thunb)固體發酵培養基中,且所述靈芝種子罐菌種與固體發酵培養基按重量比為10%的接種量接種,在溫度20℃,溼度80%發酵40天,其中每隔6天,翻料一次,製得固體發酵物;所述固體發酵培養基是在130℃條件下滅菌360 min製得,且固體培養基按每千克10000轉/分鐘勻漿的山藥加入200g大米、100g小麥、100g玉米和700g高粱等固體基質原料製得;所述固體發酵培養基中的原料按重量比為1:1.1的比例與水混合;
(5)將步驟(4)所製得的固體發酵物經過120℃烘乾10小時後,粉碎到100目以下,包裝得到可以食用的功能性食品;所述的功能性食品含有2mg/g幹基質的皂甙,10mg/g幹基質的靈芝多糖、1mg/g幹基質的靈芝酸,動物試驗證明,該產品具有調節血脂、血糖和血壓、抗輻射和抑制腫瘤等功效;
(6)提取分離:將步驟(4)或(5)所製得的靈芝轉化山藥生產的功能性食品分別經過提取,分別得到含有皂甙和靈芝酸的產品以及靈芝多糖的產品。
值得注意的是,步驟(6)中所述從含有皂甙和靈芝酸的產品的方法包括如下步驟:
C1將所製得的靈芝轉化山藥固體發酵物烘乾粉碎至20目以下或功能性食品,加入菌絲體重量的5倍體積的60%的乙醇,反覆提取5次,得提取液;
C2將步驟C1所製得的提取液合併,然後減壓濃縮至原體積的1/30,加入剩餘體積5倍的水,於4℃條件下結晶3小時,然後抽濾乾燥,粉碎至100目以下,即得到含有皂甙和靈芝酸功能性食品,該食品皂甙和靈芝酸含量分別為25%和70%。
在本實施例中,步驟(6)中所述從含有靈芝多糖產品的方法包括如下步驟:
D1將所製得的靈芝菌絲體烘乾,然後粉碎至20目,加入菌絲體重量的5倍體積的蒸餾水,80℃反覆提取5次,得提取液;
D2將步驟D1所製得的提取液合併,然後減壓濃縮至原體積的1/30,加入剩餘體積0.5倍的95%乙醇,於4℃條件下結晶5小時,過濾,濾液繼續加入提取剩餘液體積2.5倍的95%乙醇,於4℃條件下結晶5小時,然後抽濾乾燥,即得到靈芝多糖,靈芝多糖純度20%;
動物試驗證明,皂甙和靈芝酸功能性食品和靈芝多糖功能性食品都具有調節血脂、血糖和血壓、抗輻射和抑制腫瘤等功效。
實施例2
一種利用靈芝轉化山藥生產功能性食品的方法具體包括如下步驟:
(1)試管擴大培養:將赤芝(Ganoderma lucidum)CICC 14045試管斜面菌種切成3×3 mm小塊菌種,接種一小塊到試管斜面培養基中,35℃培養4天,製得試管斜面菌種,該試管斜面4℃保存備用;
(2)液體搖瓶培養:將步驟(1)所製得的試管斜面菌種切成3×3 mm小塊菌種,挑取3塊接種於裝有20mL液體搖瓶培養基的250mL三角瓶中,三角瓶在轉速為200轉/分,溫度20℃的條件下,搖床培養86h,製成液體搖瓶菌種;所述液體搖瓶培養基是在100℃條件下滅菌60 min製得,且每升液體搖瓶培養基中含有麩20g,10000轉/分鐘勻漿的山藥5g的原料;
(3)種子罐擴大培養:將步驟(2)所製得的液體搖瓶菌種接種於種子罐擴大培養基中,且所述液體搖瓶菌種與種子罐擴大培養基按體積比為20%的接種量接種,在溫度為20℃,攪拌轉速為50轉/分,在每分鐘通入氣體的體積與種子罐擴大培養基體積比為0.2~1.8:1的通氣量條件下,培養18h,製成靈芝種子罐菌種;所述種子罐擴大培養基是在100℃條件下滅菌60min製得,且每升液體搖瓶培養基中含有麩皮20g,10000轉/分鐘勻漿的山藥5g的原料;
(4)固體發酵培養:將步驟(3)所製得的靈芝種子罐菌種接入裝有方山藥(Dioscorea alata L.)固體發酵培養基中,且所述靈芝種子罐菌種與固體發酵培養基按重量比為2%的接種量接種,在溫度35℃,溼度80%發酵20天,其中每隔3天,翻料一次,製得固體發酵物;所述固體發酵培養基是在100℃條件下滅菌90min製得,且固體培養基按每千克10000轉/分鐘勻漿的山藥加入400g大米、300g小麥、300g玉米和300g高粱等固體基質原料製得;所述固體發酵培養基中的原料按重量比為1:1.5的比例與水混合;
(5)將步驟(4)所製得的固體發酵物經過80℃烘乾10小時後,粉碎到100目以下,包裝得到可以食用的功能性食品;所述的功能性食品含有20mg/g幹基質的皂甙, 100mg/g幹基質的靈芝多糖、20mg/g幹基質的靈芝酸,動物試驗證明,該產品具有調節血脂、血糖和血壓、抗輻射和抑制腫瘤等功效;
(6)提取分離:將步驟(4)或(5)所製得的靈芝轉化山藥生產的功能性食品分別經過提取,分別得到含有皂甙和靈芝酸的產品以及靈芝多糖的產品。
值得注意的是,步驟(6)中所述從含有皂甙和靈芝酸的產品的方法包括如下步驟:
C1將所製得的靈芝轉化山藥固體發酵物烘乾粉碎至20目以下或功能性食品,加入菌絲體重量的20倍體積的100%的乙醇,反覆提取3次,得提取液;
C2將步驟C1所製得的提取液合併,然後減壓濃縮至原體積的1/30,加入剩餘體積5倍的水,於4℃條件下結晶18小時,然後抽濾乾燥,粉碎至100目以下,即得到含有皂甙和靈芝酸功能性食品,該食品皂甙和靈芝酸含量分別為60%和30%。
在本實施例中,步驟(6)中所述從含有靈芝多糖產品的方法包括如下步驟:
D1將所製得的靈芝菌絲體烘乾,然後粉碎至20目,加入菌絲體重量的20倍體積的蒸餾水,100℃反覆提取3次,得提取液;
D2將步驟D1所製得的提取液合併,然後減壓濃縮至原體積的1/30,加入剩餘體積1.5倍的95%乙醇,於4℃條件下結晶5~18小時,過濾,濾液繼續加入提取剩餘液體積3.5倍的95%乙醇,於4℃條件下結晶18小時,然後抽濾乾燥,即得到靈芝多糖,靈芝多糖純度60%;
動物試驗證明,皂甙和靈芝酸功能性食品和靈芝多糖功能性食品都具有調節血脂、血糖和血壓、抗輻射和抑制腫瘤等功效。
實施例3
一種利用靈芝轉化山藥生產功能性食品的方法具體包括如下步驟:
(1)試管擴大培養:將樹舌(Ganoderma applanatum) GIM5.282試管斜面菌種切成3×3 mm小塊菌種,接種一小塊到試管斜面培養基中,28℃培養10天,製得試管斜面菌種,該試管斜面4℃保存備用;
(2)液體搖瓶培養:將步驟(1)所製得的試管斜面菌種切成3×3 mm小塊菌種,挑取7塊接種於裝有80mL液體搖瓶培養基的250mL三角瓶中,三角瓶在轉速為120轉/分,溫度28℃的條件下,搖床培養57h,製成液體搖瓶菌種;所述液體搖瓶培養基是在120℃條件下滅菌35 min製得,且每升液體搖瓶培養基中含有麩皮13g,10000轉/分鐘勻漿的山藥13g的原料;
(3)種子罐擴大培養:將步驟(2)所製得的液體搖瓶菌種接種於種子罐擴大培養基中,且所述液體搖瓶菌種與種子罐擴大培養基按體積比為10%的接種量接種,在溫度為28℃,攪拌轉速為110轉/分,在每分鐘通入氣體的體積與種子罐擴大培養基體積比為1:1的通氣量條件下,培養57h,製成靈芝種子罐菌種;所述種子罐擴大培養基是在120℃條件下滅菌35min製得,且每升液體搖瓶培養基中含有麩皮13g,10000轉/分鐘勻漿的山藥13g的原料;
(4)固體發酵培養:將步驟(3)所製得的靈芝種子罐菌種接入裝有腳板苕(Dioscorea alata L.f. flabella Makino.)山藥固體發酵培養基中,且所述靈芝種子罐菌種與固體發酵培養基按重量比為6%的接種量接種,在溫度28℃,溼度80%發酵30天,其中每隔4.5天,翻料一次,製得固體發酵物;所述固體發酵培養基是在120℃條件下滅菌260 min製得,且固體培養基按每千克10000轉/分鐘勻漿的山藥加入300g大米、200g小麥、200g玉米和500g高粱等固體基質原料製得;所述固體發酵培養基中的原料按重量比1:0.6的比例與水混合;
(5)固體發酵物經過100℃烘乾17小時後,粉碎到100目以下,包裝得到可以食用的功能性食品;所述的功能性食品含有11mg/g幹基質的皂甙,54mg/g幹基質的靈芝多糖、11mg/g幹基質的靈芝酸,動物試驗證明,該產品具有調節血脂、血糖和血壓、抗輻射和抑制腫瘤等功效;
(6)提取分離:將步驟(4)或(5)所製得的靈芝轉化山藥生產的功能性食品分別經過提取,分別得到含有皂甙和靈芝酸的產品以及靈芝多糖的產品。
值得注意的是,步驟(6)中所述從含有皂甙和靈芝酸的產品的方法包括如下步驟:
C1將所製得的靈芝轉化山藥固體發酵物烘乾粉碎至20目以下或功能性食品,加入菌絲體重量的12倍體積的80%的乙醇,反覆提取4次,得提取液;
C2將步驟C1所製得的提取液合併,然後減壓濃縮至原體積的1/30,加入剩餘體積5倍的水,於4℃條件下結晶11小時,然後抽濾乾燥,粉碎至100目以下,即得到含有皂甙和靈芝酸功能性食品,該食品皂甙和靈芝酸含量分別為43%和50%。
在本實施例中,步驟(6)中所述從含有靈芝多糖產品的方法包括如下步驟:
D1將所製得的靈芝菌絲體烘乾,然後粉碎至20目,加入菌絲體重量的13倍體積的蒸餾水,90℃反覆提取4次,得提取液;
D2將步驟D1所製得的提取液合併,然後減壓濃縮至原體積的1/30,加入剩餘體積1倍的95%乙醇,於4℃條件下結晶12小時,過濾,濾液繼續加入提取剩餘液體積3倍的95%乙醇,於4℃條件下結晶12小時,然後抽濾乾燥,即得到靈芝多糖,靈芝多糖純度41%;
動物試驗證明,皂甙和靈芝酸功能性食品和靈芝多糖功能性食品都具有調節血脂、血糖和血壓、抗輻射和抑制腫瘤等功效。
實施例4
一種利用靈芝轉化山藥生產功能性食品的方法具體包括如下步驟:
(1)試管擴大培養:將紫芝(Ganoderma sinense )CGMCC 5.69試管斜面菌種切成3×3 mm小塊菌種,接種一小塊到試管斜面培養基中,23℃培養12天,製得試管斜面菌種,該試管斜面4℃保存備用;
(2)液體搖瓶培養:將步驟(1)所製得的試管斜面菌種切成3×3 mm小塊菌種,挑取8塊接種於裝有30mL液體搖瓶培養基的250mL三角瓶中,三角瓶在轉速為75轉/分,溫度20~35℃的條件下,搖床培養30h,製成液體搖瓶菌種;所述液體搖瓶培養基是在100℃條件下滅菌55 min製得,且每升液體搖瓶培養基中含有麩皮8g,10000轉/分鐘勻漿的山藥12g的原料;
(3)種子罐擴大培養:將步驟(2)所製得的液體搖瓶菌種接種於種子罐擴大培養基中,且所述液體搖瓶菌種與種子罐擴大培養基按體積比為4%的接種量接種,在溫度為25℃,攪拌轉速為120轉/分,在每分鐘通入氣體的體積與種子罐擴大培養基體積比為0.6:1的通氣量條件下,培養35h,製成靈芝種子罐菌種;所述種子罐擴大培養基是在100℃條件下滅菌55 min製得,且每升液體搖瓶培養基中含有麩皮8g,10000轉/分鐘勻漿的山藥15g的原料;
(4)固體發酵培養:將步驟(3)所製得的靈芝種子罐菌種接入裝有野山藥(Dioscorea japonica Thunb.)固體發酵培養基中,且所述靈芝種子罐菌種與固體發酵培養基按重量比為4%的接種量接種,在溫度22℃,溼度80%發酵25天,其中每隔3天,翻料一次,製得固體發酵物;所述固體發酵培養基是在100℃條件下滅菌100 min製得,且固體培養基按每千克10000轉/分鐘勻漿的山藥加入250g大米、150g小麥、150g玉米和600g高粱等固體基質原料製得;所述固體發酵培養基中的原料按重量比1:1.0的比例與水混合;
(5)將步驟(4)所製得的固體發酵物經過90℃烘乾22小時後,粉碎到100目以下,包裝得到可以食用的功能性食品;所述的功能性食品含有18mg/g幹基質的皂甙,90mg/g幹基質的靈芝多糖、5mg/g幹基質的靈芝酸,動物試驗證明,該產品具有調節血脂、血糖和血壓、抗輻射和抑制腫瘤等功效;
(6)提取分離:將步驟(4)或(5)所製得的靈芝轉化山藥生產的功能性食品分別經過提取,分別得到含有皂甙和靈芝酸的產品以及靈芝多糖的產品。
值得注意的是,步驟(6)中所述從含有皂甙和靈芝酸的產品的方法包括如下步驟:
C1將所製得的靈芝轉化山藥固體發酵物烘乾粉碎至20目以下或功能性食品,加入菌絲體重量的7倍體積的70%的乙醇,反覆提取5次,得提取液;
C2將步驟C1所製得的提取液合併,然後減壓濃縮至原體積的1/30,加入剩餘體積5倍的水,於4℃條件下結晶6小時,然後抽濾乾燥,粉碎至100目以下,即得到含有皂甙和靈芝酸功能性食品,該食品皂甙和靈芝酸含量分別為31%和41%。
在本實施例中,步驟(6)中所述從含有靈芝多糖產品的方法包括如下步驟:
D1將所製得的靈芝菌絲體烘乾,然後粉碎至20目,加入菌絲體重量的7倍體積的蒸餾水,85℃反覆提取5次,得提取液;
D2將步驟D1所製得的提取液合併,然後減壓濃縮至原體積的1/30,加入剩餘體積0.7倍的95%乙醇,於4℃條件下結晶7小時,過濾,濾液繼續加入提取剩餘液體積2.8倍的95%乙醇,於4℃條件下結晶7小時,然後抽濾乾燥,即得到靈芝多糖,靈芝多糖純度31%;
動物試驗證明,皂甙和靈芝酸功能性食品和靈芝多糖功能性食品都具有調節血脂、血糖和血壓、抗輻射和抑制腫瘤等功效。
實施例5
一種利用靈芝轉化山藥生產功能性食品的方法具體包括如下步驟:
(1)試管擴大培養:將赤芝(Ganoderma lucidum)CICC 14045試管斜面菌種切成3×3 mm小塊菌種,接種一小塊到試管斜面培養基中,32℃培養6天,製得試管斜面菌種,該試管斜面4℃保存備用;
(2)液體搖瓶培養:將步驟(1)所製得的試管斜面菌種切成3×3 mm小塊菌種,挑取4塊接種於裝有40mL液體搖瓶培養基的250mL三角瓶中,三角瓶在轉速為160轉/分,溫度30℃的條件下,搖床培養36h,製成液體搖瓶菌種;所述液體搖瓶培養基是在128℃條件下滅菌28 min製得,且每升液體搖瓶培養基中含有麩皮6g,10000轉/分鐘勻漿的山藥20g的原料;
(3)種子罐擴大培養:將步驟(2)所製得的液體搖瓶菌種接種於種子罐擴大培養基中,且所述液體搖瓶菌種與種子罐擴大培養基按體積比為15%的接種量接種,在溫度為30℃,攪拌轉速為160轉/分,在每分鐘通入氣體的體積與種子罐擴大培養基體積比為0.6:1的通氣量條件下,培養68h,製成靈芝種子罐菌種;所述種子罐擴大培養基是在128℃條件下滅菌28 min製得,且每升液體搖瓶培養基中含有麩皮15g,10000轉/分鐘勻漿的山藥7g的原料;
(4)固體發酵培養:將步驟(3)所製得的靈芝種子罐菌種接入裝有褐苞薯(Dioscorea persimilis Prain et Burk.)山藥固體發酵培養基中,且所述靈芝種子罐菌種與固體發酵培養基按重量比為6%的接種量接種,在溫度30℃,溼度80%發酵28天,其中每隔5天,翻料一次,製得固體發酵物;所述固體發酵培養基是在128℃條件下滅菌320 min製得,且固體培養基按每千克10000轉/分鐘勻漿的山藥加入350g大米、250g小麥、250g玉米和400g高粱等固體基質原料製得;所述固體發酵培養基中的原料按重量比1:0.6的比例與水混合;
(5)固體發酵物經過90℃烘乾18小時後,粉碎到100目以下,包裝得到可以食用的功能性食品;所述的功能性食品含有4mg/g幹基質的皂甙,24mg/g幹基質的靈芝多糖、16mg/g幹基質的靈芝酸,動物試驗證明,該產品具有調節血脂、血糖和血壓、抗輻射和抑制腫瘤等功效;
(6)提取分離:將步驟(4)或(5)所製得的靈芝轉化山藥生產的功能性食品分別經過提取,分別得到含有皂甙和靈芝酸的產品以及靈芝多糖的產品。
值得注意的是,步驟(6)中所述從含有皂甙和靈芝酸的產品的方法包括如下步驟:
C1將所製得的靈芝轉化山藥固體發酵物烘乾粉碎至20目以下或功能性食品,加入菌絲體重量的17倍體積的90%的乙醇,反覆提取3次,得提取液;
C2將步驟C1所製得的提取液合併,然後減壓濃縮至原體積的1/30,加入剩餘體積5倍的水,於4℃條件下結晶15小時,然後抽濾乾燥,粉碎至100目以下,即得到含有皂甙和靈芝酸功能性食品,該食品皂甙和靈芝酸含量分別為25%和61%。
在本實施例中,步驟(6)中所述從含有靈芝多糖產品的方法包括如下步驟:
D1將所製得的靈芝菌絲體烘乾,然後粉碎至20目,加入菌絲體重量的18倍體積的蒸餾水,95℃反覆提取3次,得提取液;
D2將步驟D1所製得的提取液合併,然後減壓濃縮至原體積的1/30,加入剩餘體積1.4倍的95%乙醇,於4℃條件下結晶16小時,過濾,濾液繼續加入提取剩餘液體積3.2倍的95%乙醇,於4℃條件下結晶16小時,然後抽濾乾燥,即得到靈芝多糖,靈芝多糖純度52%;
動物試驗證明,皂甙和靈芝酸功能性食品和靈芝多糖功能性食品都具有調節血脂、血糖和血壓、抗輻射和抑制腫瘤等功效。
實施例6
一種利用靈芝轉化山藥生產功能性食品的方法具體包括如下步驟:
(1)試管擴大培養:將樹舌(Ganoderma applanatum) GIM5.282試管斜面菌種切成3×3 mm小塊菌種,接種一小塊到試管斜面培養基中,32℃培養5天,製得試管斜面菌種,該試管斜面4℃保存備用;
(2)液體搖瓶培養:將步驟(1)所製得的試管斜面菌種切成3×3 mm小塊菌種,挑取4塊接種於裝有20mL液體搖瓶培養基的250mL三角瓶中,三角瓶在轉速為170轉/分,溫度25℃的條件下,搖床培養60h,製成液體搖瓶菌種;所述液體搖瓶培養基是在110℃條件下滅菌50 min製得,且每升液體搖瓶培養基中含有麩皮16g,10000轉/分鐘勻漿的山藥8g的原料;
(3)種子罐擴大培養:將步驟(2)所製得的液體搖瓶菌種接種於種子罐擴大培養基中,且所述液體搖瓶菌種與種子罐擴大培養基按體積比為15%的接種量接種,在溫度為25℃,攪拌轉速為120轉/分,在每分鐘通入氣體的體積與種子罐擴大培養基體積比為1.6:1的通氣量條件下,培養29h,製成靈芝種子罐菌種;所述種子罐擴大培養基是在110℃條件下滅菌50 min製得,且每升液體搖瓶培養基中含有麩皮14g,10000轉/分鐘勻漿的山藥10g的原料;
(4)固體發酵培養:將步驟(3)所製得的靈芝種子罐菌種接入裝有汀山藥(Dioscorea quinquelaba Thunb.)固體發酵培養基中,且所述靈芝種子罐菌種與固體發酵培養基按重量比為6%的接種量接種,在溫度25℃,溼度80%發酵26天,其中每隔5天,翻料一次,製得固體發酵物;所述固體發酵培養基是在110℃條件下滅菌250 min製得,且固體培養基按每千克10000轉/分鐘勻漿的山藥加入400g大米、150g小麥、150g玉米和500g高粱等固體基質原料製得;所述固體發酵培養基中的原料按重量比1:0.8的比例與水混合;
(5)將步驟(4)所製得的固體發酵物經過110℃烘乾16小時後,粉碎到100目以下,包裝得到可以食用的功能性食品;所述的功能性食品含有6mg/g幹基質的皂甙,56mg/g幹基質的靈芝多糖、18mg/g幹基質的靈芝酸,動物試驗證明,該產品具有調節血脂、血糖和血壓、抗輻射和抑制腫瘤等功效;
(6)提取分離:將步驟(4)或(5)所製得的靈芝轉化山藥生產的功能性食品分別經過提取,分別得到含有皂甙和靈芝酸的產品以及靈芝多糖的產品。
值得注意的是,步驟(6)中所述從含有皂甙和靈芝酸的產品的方法包括如下步驟:
C1將所製得的靈芝轉化山藥固體發酵物烘乾粉碎至20目以下或功能性食品,加入菌絲體重量的11倍體積的63%的乙醇,反覆提取4次,得提取液;
C2將步驟C1所製得的提取液合併,然後減壓濃縮至原體積的1/30,加入剩餘體積5倍的水,於4℃條件下結晶12小時,然後抽濾乾燥,粉碎至100目以下,即得到含有皂甙和靈芝酸功能性食品,該食品皂甙和靈芝酸含量分別為55%和37%。
在本實施例中,步驟(6)中所述從含有靈芝多糖產品的方法包括如下步驟:
D1將所製得的靈芝菌絲體烘乾,然後粉碎至20目,加入菌絲體重量的13倍體積的蒸餾水,90℃反覆提取4次,得提取液;
D2將步驟D1所製得的提取液合併,然後減壓濃縮至原體積的1/30,加入剩餘體積1倍的95%乙醇,於4℃條件下結晶13小時,過濾,濾液繼續加入提取剩餘液體積3.0倍的95%乙醇,於4℃條件下結晶13小時,然後抽濾乾燥,即得到靈芝多糖,靈芝多糖純度45%;
動物試驗證明,皂甙和靈芝酸功能性食品和靈芝多糖功能性食品都具有調節血脂、血糖和血壓、抗輻射和抑制腫瘤等功效。
實施例7
一種利用靈芝轉化山藥生產功能性食品的方法具體包括如下步驟:
(1)試管擴大培養:將紫芝(Ganoderma sinense )CGMCC 5.69試管斜面菌種切成3×3 mm小塊菌種,接種一小塊到試管斜面培養基中,23℃培養13天,製得試管斜面菌種,該試管斜面4℃保存備用;
(2)液體搖瓶培養:將步驟(1)所製得的試管斜面菌種切成3×3 mm小塊菌種,挑取10塊接種於裝有130mL液體搖瓶培養基的250mL三角瓶中,三角瓶在轉速為150轉/分,溫度23℃的條件下,搖床培養36h,製成液體搖瓶菌種;所述液體搖瓶培養基是在115℃條件下滅菌53 min製得,且每升液體搖瓶培養基中含有麩皮9g,10000轉/分鐘勻漿的山藥20g的原料;
(3)種子罐擴大培養:將步驟(2)所製得的液體搖瓶菌種接種於種子罐擴大培養基中,且所述液體搖瓶菌種與種子罐擴大培養基按體積比為15%的接種量接種,在溫度為21℃,攪拌轉速為120轉/分,在每分鐘通入氣體的體積與種子罐擴大培養基體積比為0.2:1的通氣量條件下,培養81h,製成靈芝種子罐菌種;所述種子罐擴大培養基是在115℃條件下滅菌53 min製得,且每升液體搖瓶培養基中含有麩皮19g,10000轉/分鐘勻漿的山藥18g的原料;
(4)固體發酵培養:將步驟(3)所製得的靈芝種子罐菌種接入裝有鐵棍山藥(Dioscorea opposita Foshou)固體發酵培養基中,且所述靈芝種子罐菌種與固體發酵培養基按重量比為4%的接種量接種,在溫度21℃,溼度80%發酵34天,其中每隔6天,翻料一次,製得固體發酵物;所述固體發酵培養基是在110℃條件下滅菌250 min製得,且固體培養基按每千克10000轉/分鐘勻漿的山藥加入400g大米、150g小麥、250g玉米和400g高粱等固體基質原料製得;所述固體發酵培養基中的原料按重量比1:1.0的比例與水混合;
(5)固體發酵物經過115℃烘乾16小時後,粉碎到100目以下,包裝得到可以食用的功能性食品;所述的功能性食品含有20mg/g幹基質的皂甙, 100mg/g幹基質的靈芝多糖、1mg/g幹基質的靈芝酸,動物試驗證明,該產品具有調節血脂、血糖和血壓、抗輻射和抑制腫瘤等功效;
(6)提取分離:將步驟(4)或(5)所製得的靈芝轉化山藥生產的功能性食品分別經過提取,分別得到含有皂甙和靈芝酸的產品以及靈芝多糖的產品。
值得注意的是,步驟(6)中所述從含有皂甙和靈芝酸的產品的方法包括如下步驟:
C1將所製得的靈芝轉化山藥固體發酵物烘乾粉碎至20目以下或功能性食品,加入菌絲體重量的9倍體積的75%的乙醇,反覆提取5次,得提取液;
C2將步驟C1所製得的提取液合併,然後減壓濃縮至原體積的1/30,加入剩餘體積5倍的水,於4℃條件下結晶10小時,然後抽濾乾燥,粉碎至100目以下,即得到含有皂甙和靈芝酸功能性食品,該食品皂甙和靈芝酸含量分別為38%和45%。
在本實施例中,步驟(6)中所述從含有靈芝多糖產品的方法包括如下步驟:
D1將所製得的靈芝菌絲體烘乾,然後粉碎至20目,加入菌絲體重量的10倍體積的蒸餾水,88℃反覆提取5次,得提取液;
D2將步驟D1所製得的提取液合併,然後減壓濃縮至原體積的1/30,加入剩餘體積0.8倍的95%乙醇,於4℃條件下結晶10小時,過濾,濾液繼續加入提取剩餘液體積2.9倍的95%乙醇,於4℃條件下結晶10小時,然後抽濾乾燥,即得到靈芝多糖,靈芝多糖純度38%;
動物試驗證明,皂甙和靈芝酸功能性食品和靈芝多糖功能性食品都具有調節血脂、血糖和血壓、抗輻射和抑制腫瘤等功效。
實施例8
一種利用靈芝轉化山藥生產功能性食品的方法具體包括如下步驟:
(1)試管擴大培養:將赤芝(Ganoderma lucidum)CICC 14045試管斜面菌種切成3×3 mm小塊菌種,接種一小塊到試管斜面培養基中,29℃培養10天,製得試管斜面菌種,該試管斜面4℃保存備用;
(2)液體搖瓶培養:將步驟(1)所製得的試管斜面菌種切成3×3 mm小塊菌種,挑取8塊接種於裝有60mL液體搖瓶培養基的250mL三角瓶中,三角瓶在轉速為160轉/分,溫度33℃的條件下,搖床培養80h,製成液體搖瓶菌種;所述液體搖瓶培養基是在120℃條件下滅菌30 min製得,且每升液體搖瓶培養基中含有麩皮19g,10000轉/分鐘勻漿的山藥19g的原料;
(3)種子罐擴大培養:將步驟(2)所製得的液體搖瓶菌種接種於種子罐擴大培養基中,且所述液體搖瓶菌種與種子罐擴大培養基按體積比為18%的接種量接種,在溫度為33℃,攪拌轉速為140轉/分,在每分鐘通入氣體的體積與種子罐擴大培養基體積比為1.8:1的通氣量條件下,培養90h,製成靈芝種子罐菌種;所述種子罐擴大培養基是在120℃條件下滅菌30 min製得,且每升液體搖瓶培養基中含有麩皮18g,10000轉/分鐘勻漿的山藥18g的原料;
(4)固體發酵培養:將步驟(3)所製得的靈芝種子罐菌種接入裝有佛手山藥(Dioscorea opposita Iron-rod)固體發酵培養基中,且所述靈芝種子罐菌種與固體發酵培養基按重量比為9%的接種量接種,在溫度33℃,溼度80%發酵37天,其中每隔6天,翻料一次,製得固體發酵物;所述固體發酵培養基是在105℃條件下滅菌350 min製得,且固體培養基按每千克10000轉/分鐘勻漿的山藥加入280g大米、220g小麥、270g玉米和380g高粱等固體基質原料製得;所述固體發酵培養基中的原料按重量比1:1.4的比例與水混合;
(5)固體發酵物經過85℃烘乾23小時後,粉碎到100目以下,包裝得到可以食用的功能性食品;所述的功能性食品含有18mg/g幹基質的皂甙,94mg/g幹基質的靈芝多糖、3mg/g幹基質的靈芝酸,動物試驗證明,該產品具有調節血脂、血糖和血壓、抗輻射和抑制腫瘤等功效;
(6)提取分離:將步驟(4)或(5)所製得的靈芝轉化山藥生產的功能性食品分別經過提取,分別得到含有皂甙和靈芝酸的產品以及靈芝多糖的產品。
值得注意的是,步驟(6)中所述從含有皂甙和靈芝酸的產品的方法包括如下步驟:
C1將所製得的靈芝轉化山藥固體發酵物烘乾粉碎至20目以下或功能性食品,加入菌絲體重量的16倍體積的97%的乙醇,反覆提取3次,得提取液;
C2將步驟C1所製得的提取液合併,然後減壓濃縮至原體積的1/30,加入剩餘體積5倍的水,於4℃條件下結晶15小時,然後抽濾乾燥,粉碎至100目以下,即得到含有皂甙和靈芝酸功能性食品,該食品皂甙和靈芝酸含量分別為26%和67%。
在本實施例中,步驟(6)中所述從含有靈芝多糖產品的方法包括如下步驟:
D1將所製得的靈芝菌絲體烘乾,然後粉碎至20目,加入菌絲體重量的18倍體積的蒸餾水,95℃反覆提取3次,得提取液;
D2將步驟D1所製得的提取液合併,然後減壓濃縮至原體積的1/30,加入剩餘體積1.4倍的95%乙醇,於4℃條件下結晶16小時,過濾,濾液繼續加入提取剩餘液體積3.2倍的95%乙醇,於4℃條件下結晶6小時,然後抽濾乾燥,即得到靈芝多糖,靈芝多糖純度57%;
動物試驗證明,皂甙和靈芝酸功能性食品和靈芝多糖功能性食品都具有調節血脂、血糖和血壓、抗輻射和抑制腫瘤等功效。
實施例9
一種利用靈芝轉化山藥生產功能性食品的方法具體包括如下步驟:
(1)試管擴大培養:將樹舌(Ganoderma applanatum) GIM5.282試管斜面菌種切成3×3 mm小塊菌種,接種一小塊到試管斜面培養基中,24℃培養6天,製得試管斜面菌種,該試管斜面4℃保存備用;
(2)液體搖瓶培養:將步驟(1)所製得的試管斜面菌種切成3×3 mm小塊菌種,挑取4塊接種於裝有24mL液體搖瓶培養基的250mL三角瓶中,三角瓶在轉速為58轉/分,溫度24℃的條件下,搖床培養20h,製成液體搖瓶菌種;所述液體搖瓶培養基是在100℃條件下滅菌59 min製得,且每升液體搖瓶培養基中含有麩皮5g,10000轉/分鐘勻漿的山藥5g的原料;
(3)種子罐擴大培養:將步驟(2)所製得的液體搖瓶菌種接種於種子罐擴大培養基中,且所述液體搖瓶菌種與種子罐擴大培養基按體積比為3%的接種量接種,在溫度為24℃,攪拌轉速為58轉/分,在每分鐘通入氣體的體積與種子罐擴大培養基體積比為1.8:1的通氣量條件下,培養25h,製成靈芝種子罐菌種;所述種子罐擴大培養基是在100℃條件下滅菌59 min製得,且每升液體搖瓶培養基中含有麩皮5g,10000轉/分鐘勻漿的山藥6g的原料;
(4)固體發酵培養:將步驟(3)所製得的靈芝種子罐菌種接入裝有山薯(Dioscorea fordii Prain et Burk.)山藥固體發酵培養基中,且所述靈芝種子罐菌種與固體發酵培養基按重量比為3%的接種量接種,在溫度24℃,溼度80%發酵23天,其中每隔3天,翻料一次,製得固體發酵物;所述固體發酵培養基是在100℃條件下滅菌150 min製得,且固體培養基按每千克10000轉/分鐘勻漿的山藥加入360g大米、240g小麥、160g玉米和540g高粱等固體基質原料製得;所述固體發酵培養基中的原料按重量比1:1.3的比例與水混合;
(5)固體發酵物經過110℃烘乾13小時後,粉碎到100目以下,包裝得到可以食用的功能性食品;所述的功能性食品含有2mg/g幹基質的皂甙,10mg/g幹基質的靈芝多糖、20mg/g幹基質的靈芝酸,動物試驗證明,該產品具有調節血脂、血糖和血壓、抗輻射和抑制腫瘤等功效;
(6)提取分離:將步驟(4)或(5)所製得的靈芝轉化山藥生產的功能性食品分別經過提取,分別得到含有皂甙和靈芝酸的產品以及靈芝多糖的產品。
值得注意的是,步驟(6)中所述從含有皂甙和靈芝酸的產品的方法包括如下步驟:
C1將所製得的靈芝轉化山藥固體發酵物烘乾粉碎至20目以下或功能性食品,加入菌絲體重量的15倍體積的81%的乙醇,反覆提取4次,得提取液;
C2將步驟C1所製得的提取液合併,然後減壓濃縮至原體積的1/30,加入剩餘體積5倍的水,於4℃條件下結晶14小時,然後抽濾乾燥,粉碎至100目以下,即得到含有皂甙和靈芝酸功能性食品,該食品皂甙和靈芝酸含量分別為57%和36%。
在本實施例中,步驟(6)中所述從含有靈芝多糖產品的方法包括如下步驟:
D1將所製得的靈芝菌絲體烘乾,然後粉碎至20目,加入菌絲體重量的13倍體積的蒸餾水,92℃反覆提取4次,得提取液;
D2將步驟D1所製得的提取液合併,然後減壓濃縮至原體積的1/30,加入剩餘體積1倍的95%乙醇,於4℃條件下結晶12小時,過濾,濾液繼續加入提取剩餘液體積3.1倍的95%乙醇,於4℃條件下結晶12小時,然後抽濾乾燥,即得到靈芝多糖,靈芝多糖純度42%;
動物試驗證明,皂甙和靈芝酸功能性食品和靈芝多糖功能性食品都具有調節血脂、血糖和血壓、抗輻射和抑制腫瘤等功效。
以上示意性的對本發明及其實施方式進行了描述,該描述沒有限制性,實際的結構並不局限於此。所以,如果本領域的普通技術人員受其啟示,在不脫離本發明創造宗旨的情況下,不經創造性的設計出與該技術方案相似的結構方式及實施例,均應屬於本發明的保護範圍。