抗體治療的製作方法

2023-06-01 03:50:46

專利名稱：抗體治療的製作方法
抗體治療相關申請本申請是2003年10月8日申請的中國國家申請號為200380105383. 9，國際申請 號為PCT/US2003/031801，發明名稱為「抗體治療」的發明申請的分案申請。本申請是遞交於2003年5月2日的美國臨時申請號60/467，161的部分後續。本 申請還要求遞交於2002年10月11日的國際申請號PCT/US/02/32307的優先權，而PCT/ US/02/32307則依次要求遞交於2002年10月8日的美國臨時申請號60/416，531的優選 權。
背景技術：
A.發明領域本發明涉及治療表達癌胚抗原(「CEA 「)的癌症，特別是甲狀腺髓樣癌(MTC)、非 甲狀腺髓樣癌(non-MTC)、結腸直腸癌、肝細胞癌、胃癌、肺癌、乳癌和其它表達CEA的癌症 的方法，其中所述治療是通過給藥一種包含一種與至少一種其它治療劑組合的抗體的免疫 試劑，所述的其它治療劑如另一種抗體、化學治療劑、放射劑、反義寡核苷酸、免疫調節物、 免疫偶聯物或其結合。本發明進一步涉及包含免疫試劑和至少一種以非偶聯形式存在的治 療劑的藥物組合物。特別地，本發明涉及通過在給藥治療劑之前、同時或之後給藥III類抗 癌胚抗原(抗「CEA」)單克隆抗體(「MAb」)，特別是具有結合親和性特性和相應的鼠III 類抗-CEA MAb的特異性的MAb，更加特別地是具有多種人抗體的抗原性和效應子特性的人 源化的、嵌合的或人的MAbs，來治療表達CEA的癌症的方法。在治療的方法中特別有用的 MAbs是人源化的MAbs，其中將抗CEA的鼠MAb的互補決定區(「CDRs」)移植入人抗體的框 架區。B.背景CEA是一種通常在許多種上皮癌症中表達的癌胚抗原，所述上皮癌症是那些大 多數出現在結腸還有在乳房、肺、胰、甲狀腺(髓型)和卵巢中的癌症(Goldenberg等，J Natl. CancerInst. 57 :11_22 (1976)，Shively,等，Crit. Rev. Oncol. Hematol. 2 :355_399 (1985))。一開始CEA被認為是結腸直腸癌的腫瘤特異性抗原(Gold等，J Exper. Med. , 122 467(1965))。但是，後來發現它存在於多種癌、良性腫瘤和病理組織中，以及正常的人結腸 中(Shively 等，Crit. Rev. Oncol. Hemato.，2 355(1985) ；von Kleist 等，Proc. Natl. Acad. Sci.U. S. Α. ,69 :2492(1972))。CEA已經顯示通過同型和異型相互作用調節細胞-細胞吸 附，這接著提示了 CEA在腫瘤發生的各個方面的作用。限於甲狀腺的甲狀腺髓樣癌(MTC)是可以通過甲狀腺全部切除和中樞淋巴節解 剖而冶愈的。但是，病症在這些病人的大約50%中復發。此外，患有不可切除的疾病或遠 端轉移的病人的預後很糟，小於30%的病人存活10年(Rossi等，Amer. J Surgery, 139 554(1980) ；Samaan 等，J Clin. Endocrinol. Metab. ,67 801(1988) ；Schroder 等，Cancer, 61 :806(1988)。這些病人剩下不多的治療機會(Principles and Practice of Oncology, DeVita, Hellman 和 Rosenberg (編輯)，紐約JB Lippincott Co. 1333-1435 (1989)； Cance等，Current Problems Surgery，22 :1 (1985))。化療價值不大而放療僅可用於控制局部疾病(Cance等；Tubiana等，Cancer，55 :2062 (1985))。因而，需要新的治療形式以控 制這種疾病。一種對癌症治療和診斷有用的方法包括利用靶向抗體直接向腫瘤位點遞送治療 劑和診斷劑。在過去的十年中，已經發展了許多腫瘤特異性抗體和抗體片段，以及將抗體 偶聯結合到如藥物的治療劑、毒素、放射性核素、如細胞因子的免疫調節劑和其它藥劑上， 並且將靶向腫瘤的偶聯物對病人給藥的方法。但是，用複合以鼠單克隆抗體(它是最常 用的對於人的靶向抗體)的藥物或放射性核素治療的病人產生循環性的人抗小鼠抗體 (HAMAs)，有些時候產生對偶聯物的抗體部位的一般性的立即的III型過敏性反應。但是 通過由許多不同的方法令這些鼠抗體的免疫原性更少已經使得這些問題最小化了，所述方 法包括通過化學修飾靶向抗體，如通過將聚乙二醇偶聯到靶向抗體上(聚乙二醇化)，或通 過鑑定抗體中的抗原性位點並且隨後將它去除來產生人源化的、嵌合的或人的抗體；例如， Fab'、F(ab)2和其它代替完整的IgG使用的抗體片段。此外，已經通過血漿去除將HAMA從 血中除去來進行減少HAMA副作用的嘗試。還使用抑制免疫力的技術來改善外源抗體的副 作用，所述外源抗體足以允許與靶向藥劑一起進行多次治療儘管有這些治療進步，依然存在提供更有效的治療表達CEA的癌症的方法的需 要。本發明提供利用抗CEA抗體，如在美國專利號5，874，540和Hansen等，Cancer, 71 3478(1993)中所介紹的III類抗CEAMAb鼠MN_14MAb，和也是在美國專利號5，874，540中 所介紹的III類抗CEA MAb的嵌合的和人源化的MN-14，以及在Primus等的美國專利號 4，818，709中所定義的NP-4，在此將所有文獻的全部內容併入作為參考。優選地，III類抗 CEA MAb是人源化的，並且與一種治療劑，特別是一種化療劑相結合使用，以用最小的毒性 產生對表達CEA的癌症有效的治療。此外，其它的抗CEA抗體，如II類MAbs，例如，MN-6 (見 Hansen 等，同上)，和 NP-3 (見 U. S. 4，818，709)，和 I 類 MAbs，如 MN-3 和 MN-15 (也見 Hansen 等，同上)提供了治療表達CEA的癌症的有效方法。另外，這兩種組分的分別給藥提供了增 強的結果以及適用於個別治療方法的多用性和靈活性。發明概述本發明中所要保護的是治療甲狀腺髓樣癌和非甲狀腺髓樣癌的組合物和方法。本發明的第一個實施方案是一種至少包含至少一種抗CEA單克隆抗體(MAb)或其 片段和至少一種治療劑的組合物，所述抗CEA單克隆抗體(MAb)或其片段優選為一種III 類抗CEA MAb或片段。優選地，抗體片段選自F(ab' )2、Fab'、Fab、Fv和scFv。還要優選 地，III類抗CEA MAb或其片段是嵌合性的MAb，並且其中嵌合性的MAb基本保留鼠III類 抗CEA MAb的III類抗CEA結合部位。仍然要優選地，III類抗CEA MAb或其片段為完整 的人MAb，並且其中所述完整的人MAb基本保留鼠III類抗CEA MAb的III類抗CEA結合部 位。其它優選的為此目的的抗CEA MAbs包括II類MAbs或其片段，它不是本文中更詳細討 論的⑶66a-d交互反應性的。另一個實施方案包括II類MAbs或其片段，它可以與⑶66a、 b和d反應但不與⑶66c或I類Mabs或其片段反應，I類Mabs或其片段與⑶66a、b和d以 及⑶66c反應(通過定義I類Mab結合⑶66c)。在本發明的一個實施方案中，III類抗CEA單克隆抗體或其片段優選為MN-14抗 體或其片段。更加優選地，MN-14抗體或其片段包含鼠MN-14單克隆抗體的互補決定區 (⑶Rs)，其中MN-14抗體的輕鏈可變區的⑶Rs包含含有胺基酸序列KASQDVGTSVA的⑶Rl ；含有胺基酸序列WTSTRHT的⑶R2 ；和含有胺基酸序列QQYSLYRS的⑶R3 ；並且III類抗CEA 抗體的重鏈可變區的CDR s包含含有TYWMS的CDRl ；含有EIHPDSSTINYAPSLKD的CDR2 ；和 含有LYFGFPWFAY的CDR3。還要優選地，MN-14單克隆抗體與CEA反應並且與正常的交叉反 應抗原(NCA)和胎糞抗原(MA)不反應。最優選地，MN-14單克隆抗體或其片段是人源化的、 嵌合的或完整的人MN-14抗體或其片段。在一個優選的實施方案中，人源化MN-14抗體的輕鏈和重鏈可變區的框架區 (FRs)包含至少一個來自鼠MN-14單克隆抗體的相應FR s的取代的胺基酸。具體地，人源 化MN-14抗體或其片段優選包含至少一個來自鼠MN-14抗體的相應FR的胺基酸，所述氨基 酸選自

圖14A-C的鼠重鏈可變區(KLHuVhAIGA)的胺基酸殘基24 (A)、28 (D)、30 (T)、48 (1)、 49 (G), 74 (A)和94(S)。同樣地，人源化的MN-14抗體或其片段還可以包含至少一個來自所 述鼠MN-14輕鏈可變區的相應FR的胺基酸。仍然要優選地，人源化的MN-14抗體或其片段 包含如圖13A所示的輕鏈可變區，以及圖14A-C中所示標明為KLHuVhAIGA的重鏈可變區。在本發明的第一個實施方案中，治療劑選自裸抗體、細胞毒性劑、藥物、放射性核 素、免疫調節劑、光敏治療劑、免疫偶聯物、激素或其組合，優選配製在一種可藥用的載體 中。這裡還要求治療劑不是達卡巴嗪(DTIC)。本發明的第二個實施方案描述了 一種治療髓性以及非髓性甲狀腺髓樣癌的方法， 包括同時或按順序向受試者給藥治療有效量的III類抗CEA單克隆抗體或其片段以及至 少一種治療劑，並且優選配製在一種可藥用的載體中。優選地，抗體片段選自F(ab' )2、 Fab'、Fab、Fv和scFv。還要優選地，III類抗CEA單克隆抗體或其片段為人源化的，其中 所述人源化的單克隆抗體基本保留了鼠III類抗CEA單克隆抗體的III類抗CEA結合特異 性。還要求III類抗CEA單克隆抗體或其片段為嵌合性的單克隆抗體，並且其中所述嵌合 性單克隆抗體基本保留了鼠III類抗CEA單克隆抗體的III類抗CEA結合特異性。在一個優選的實施方案中，III類抗CEA單克隆抗體或其片段為MN-14抗體或其 片段。優選地，MN-14抗體或其片段包含鼠MN-14單克隆抗體的互補決定區(⑶Rs)，其中 所述MN-14抗體的輕鏈可變區的⑶Rs包含含有胺基酸序列KASQDVGTSVA的⑶Rl ；含有氨 基酸序列WTSTRHT的⑶R2 ；和含有胺基酸序列QQYSLYRS的⑶R3 ；並且III類抗CEA抗體 的重鏈可變區的CDRs包含含有TYWMS的CDRl ；含有EIHPDSSTINYAPSLKD的CDR2 ；和含有 LYFGFPWFAY的CDR3。還要優選地，MN-14單克隆抗體是人源化的、嵌合的或完整的人MN-14 抗體，與CEA反應並且與正常的交叉反應抗原(NCA)和胎糞抗原不反應。還要優選地，MN-14 抗體或其片段以100-600毫克/劑/注射的劑量進行給藥。最為優選地，MN-14抗體或其 片段以300-400毫克/劑/注射的劑量進行給藥。在本發明的方法中，所述人源化MN-14抗體或其片段的輕鏈和重鏈可變區的框架 區(FRs)優選包含至少一個來自鼠MN-14單克隆抗體的相應FRs的胺基酸。更加優選地， 包含至少一個來自所述鼠MN-14抗體的所述相應FR的胺基酸的人源化MN-14抗體或其片 段選自如上面所提到的圖14A-C的鼠重鏈可變區的胺基酸殘基24、28、30、48、49、74和94。 還要優選地，人源化的MN-14抗體或其片段包含至少一個來自所述鼠MN-14輕鏈可變區的 相應FR的胺基酸。最為優選地，人源化的MN-14抗體或其片段包含如圖13A (中間序列) 或圖22A(hMN-14)或圖23A所示的輕鏈可變區，以及圖14A-C中所示標明為KLHuVhAIGA的 或圖22B(hMN-14)或圖23B中所示的重鏈可變區。
本發明的方法可以進一步包括同時或按順序地向受試者給藥治療有效量的 第二人源化的、嵌合的、人的或鼠的單克隆抗體或其片段，所述單克隆抗體或其片段選 自與 EGP-I、EGP-2(例如，17-1A)、IL-6、胰島素樣生長因子-1、MUC-1、MUC-2、MUC-3、 MUC-4、PAM-4、KC4、TAG-72、EGFR, HER2/neu、BrE3、Le-Y, A3、Α33、Ep-CAM, AFP、Τη、 Thomson-Friedenreich抗原、腫瘤壞死抗原、VEGF、胎盤生長因子(PlGF)或其它腫瘤血管 發生抗原、Ga 733、細胞粘合素、纖維結合素及其組合反應的單克隆抗體或其片段。類似地， 這些方法可以包括同時或按順序向受試者給藥治療有效量的第二人源化的、嵌合的、人或 鼠單克隆抗體或其片段，所述單克隆抗體或其片段選自如上所述的I類或II類或III類抗 CEA單克隆抗體或其片段。優選地，第二抗體或其片段既可以是裸的也可以是偶聯到一種治 療劑上的。在本文所述方法的一個優選實施方案中，治療劑選自裸抗體、細胞毒性劑、藥物、 放射性核素、免疫調節劑、光敏治療劑、CEA或非CEA抗體的免疫偶聯物、激素或其組合，優 選配製在一種可藥用的載體中。這裡還要求治療劑不是達卡巴嗪(DTIC)。優選地，治療劑為一種選自藥物或毒素的細胞毒性劑。例如，要求具有選自抗有絲 分裂的、烷基化的、抗代謝物的、抗血管生成的、凋亡的、生物鹼的、C0X-2和抗生素藥劑及其 組合的藥學特性。優選地，藥物選自氮芥、氮丙啶衍生物、烷基硫酸、亞硝基脲、三氮烯、葉酸 類似物、蒽環黴素、紫杉烷、C0X-2抑制劑、嘧啶類似物、嘌呤類似物、抗代謝物、抗生素、酶、 表鬼白毒素、鉬配位化合物、長春花生物鹼、取代脲、甲胼衍生物、腎上腺皮質抑制劑、拮抗 劑、內皮他丁、紫杉醇、喜樹鹼、奧沙利鉬、阿黴素和它們的類似物，及其組合。當治療劑為微生物的、植物或動物的毒素時，該藥劑可以選自蓖麻毒蛋白、相思豆 毒蛋白、α毒素、皂草毒蛋白、核糖核酸酶(RNA酶)、DNA酶I、金葡菌腸毒素Α、商陸抗病毒 蛋白、白樹毒蛋白、白喉毒素、假單胞菌外毒素和假單胞菌內毒素。在本發明的方法中還要求治療劑為選自細胞因子、幹細胞生長因子、淋巴毒素、造 血因子、集落刺激因子(CSF)、幹擾素(IFN)、幹細胞生長因子、紅細胞生成素及其組合。優 選地，淋巴毒素為腫瘤壞死因子(TNF)，所述造血因子為白介素(IL)，所述集落刺激因子為 粒細胞集落刺激因子(G-CSF)，所素幹擾素為幹擾素α、β或Y，所述幹細胞生長因子指定 為〃 Sl 因子〃。還要優選地，免疫調節劑包括11^-1、11^-2、11^-3、11^-6、11^-10、11^-12、11^-18、 IL-21、γ幹擾素、TNF-α或其組合。在美國專利號5，120，525中介紹了在暴露於細胞毒性 劑之前、同時或之後給藥一種細胞因子，所述暴露於細胞毒性劑導致骨髓或造血的毒性，在 此將該專利的全部內容併入作為參考。還要優選地，治療劑為一種為色素原或染料的光敏治療劑或者一種為達卡巴嗪的 烷基化劑。還要優選地，治療劑為具有介於20和10，OOOkeV之間能量的放射性核素。優選地， 該放射性核素選自 125I、131I、90Y、88Y、225Ac、mLu、188Re、186Re 及其組合。在另一個實施方案中，將如本文所述的一種免疫調節劑在給藥治療有效量的抗 CEA單克隆抗體或其片段之前進行給藥或者將一種免疫調節劑在給藥治療有效量的抗CEA 單克隆抗體以及至少一種治療劑之前進行給藥，其中這裡所述的任何這些組分都優選在一 種可藥用的載體中配製。附圖簡介圖1.在單獨hMN-14、單獨DTIC或hMN_14和DTIC結合治療之後比較腫瘤大小的 圖表。圖IA顯示以25和IOOyg/劑單獨或與250 μ g hMN-14抗體一起給藥的DTIC。圖 IB顯示以50和75 μ g/劑單獨或與100 μ g hMN-14抗體一起給藥的DTIC。圖2.以131I和9°Y-MN-14進行放射免疫治療(RAIT)之後比較腫瘤大小的圖表。圖3.比較幾種化療藥物在患有TT的小鼠中對腫瘤大小治療效果的圖表。幾種化療藥物的療效。給予患TT的小鼠阿黴素，20mg/m2 ；0、1和2天(70 μ g/劑) (O) ；DTIC，30mg/m2 ;0、1 和 2天(1.08mg/劑)(□)；阿黴素和 DTIC 如上(·)；環磷醯胺， 600mg/m2 ；0天(2. 16mg/劑)(Δ )；長春新鹼，4. 2 μ g/劑；0天(X)；所有四種藥物(阿黴 素、DTIC、環磷醯胺和長春新鹼)，以上面對於每種所述的劑量(■)；或未進行處理( )。 各組由6-9隻患有建立的TT腫瘤的裸鼠所組成。治療時的平均腫瘤體積為0. 51 士0. 33cm3。 點平均腫瘤大小。誤差條標準偏差，僅在符號上面顯示以便清楚。圖4.比較RAIT和9°Y標記的抗CEA單克隆抗體ΜΝ-14的組合治療與在RAIT之後 24小時開始的4種藥物的組合對於腫瘤大小的治療效果的圖表。以9°Υ標記的抗CEA單克隆抗體ΜΝ-14進行的RAIT和在RAIT之後的24小時開始 的4種藥物組合的組合治療的療效。患腫瘤的動物未進行處理( )；給予圖1中所述的4 種藥物方案，在第1、2和3天進行給藥(■)；在0天給予52. 5 μ Ci的9°Υ-ΜΝ-14，隨後在第 1、2和3天給予4藥物療法(▲)；在0天給予52. 5 μ Ci的9°Υ_ΜΝ_14 ( Δ )；或在0天給予 105 μ Ci的9°Υ-ΜΝ-14 (〇).對於未處理組N = 5，在處理組中η = 9_10。治療時的平均腫 瘤體積為0.28士0.12cm3。點平均腫瘤大小。誤差條標準偏差，僅在符號上面顯示以便 清楚。圖5.比較RAIT加上DTIC和RAIT加上阿黴素和DTIC在患有TT小鼠中的效果的圖表。與RAIT加上阿黴素和DTIC相比，RAIT加上DTIC的效果。患TT的小鼠未進行處 理( )；在0天給予105 μ Ci的9°Y-MN-14 (O)；在0天給予105 μ Ci的9°Υ_ΜΝ_14，隨後在 第1、2和3天以50%的全劑量給藥阿黴素和DTIC ( A )；在0天給予105 μ Ci的90Y-MN-H, 隨後在第1、2和3天以75%的全劑量給藥DTIC(X)；或在第1、2和3天以300mg/m2給藥 全劑量的DTIC(1.08mg/劑)(□)。對於未處理組N = 5，在處理組中η = 9_10。治療時的 平均腫瘤體積為0.39士0.20cm3。點平均腫瘤大小。誤差條標準偏差，僅在符號上面顯 示以便清楚。圖6.比較在患有TT的異種移植小鼠中裸hMN-14治療方案與的效果的圖表。動 物被給予TT細胞的皮下注射，並且被留下不進行治療(A)或在第1天(B)或更遲的第11 天(C)給予靜脈內注射0. 5mghMN-14。用裸hMN-14治療患TT小鼠的異種移植體.通過皮下注射給予動物TT細胞，並且 留下不進行治療㈧或在第1天⑶或更遲的第11天(C)給予靜脈內注射0. 5mghMN-14。 在A、B和C區中的線條代表個體動物的腫瘤體積。各個治療組的平均值示於D區申。誤差 條代表平均值的標準誤差，並且僅顯示於一個方向以便清楚。 ，未處理的；□，第1天處理 的；Δ，第11天處理的。
圖7.比較人源化的或鼠MN-14抗體在治療甲狀腺髓樣癌中的效果。給予動物皮下注射TT細胞，並且留下不進行治療或在之後的第1天給予靜脈內注射MAb (0. 5mg)。
治療的特異性。動物被給予皮下注射TT細胞，並且被留下不進行處理或在之後的第1 天給予靜脈內注射MAb (0. 5mg)。顯示各治療組的平均值。誤差條代表平均值的標準誤差並 且僅顯示於一個方向以便清楚。 ，未處理的；□，hMN-14 ；Δ鼠MN-14 ;X，hLL2。
圖8.比較不同的hMN-14劑量在治療甲狀腺髓樣癌中的效果。在皮下注射TT細胞之 後的第1天，給予靜脈內注射逐漸增多的hMN-14劑量。
hMN-14劑量的效果.在皮下注射TT細胞之後的第1天，給予動物靜脈內注射逐漸增 多的hMN-14劑量。顯示各治療組的平均值。 ，未處理的；·，0. 125mg ;〇，0. 25mg ;■， 0. 50mg ； X，1. Omg ；▲，2. Omgo誤差條代表平均值的標準誤差，並且僅對於未處理組和接受 了 0. 50mg hMN-14的組顯示以便清楚。
圖9.在患有TT的裸鼠中比較不同治療時間的效果的圖表。
治療時間的效果。在皮下注射TT細胞之後1天(眷)、3天(▲)或7天(■)，給予 動物靜脈內注射0. 25mg的hMN-14，，或留下不進行處理( )。顯示各治療組的平均值。誤 差條代表平均值的標準誤差，並且僅顯示於一個方向以便清楚。
圖10.比較用hMN-14加上DTIC、單獨的DTIC、單獨的hMN-14治療患有TT的裸鼠和未 治療小鼠的圖表。
以hMN-14加上DTIC治療患TT的裸鼠·在第2、3、4、5、7、8、9、10和11,15和22天以 100 μ g/劑給予動物腹膜內注射hMN-14，隨後每7天注射一次(〇)；在第2、3和4天給藥 75 μ g/劑的DTIC ( ▲)；這些hMN-14和DTIC療法的組合(Δ )；或不進行處理( )。顯 示各治療組的平均值。10隻動物/組。圖11.圖IlA和IlB顯示鼠ΜΝ-14的可變區重鏈(VH)的共有DNA序列以及由該 DNA序列編碼的胺基酸序列。⑶Rs被括於盒中。圖12.圖12Α和12Β顯示鼠ΜΝ-14的可變區輕鏈(VK)的共有DNA序列以及由該 DNA序列編碼的胺基酸序列。⑶Rs被括於盒中。圖13.圖13Α和13Β顯示鼠ΜΝ-14的可變區與人可變區NEWM VH和REI VK (圖 13Α)以及人KOL VH區(圖13Β)的比對。CDRs括入盒中，摻入人源化VH的鼠VH FRs以它 們根據 Kabat 等，SEQUENCES OFPROTEINS OF IMMUNOLOGICAL INTEREST, U. S. Government PrintingOffice, Washington, D. C.，1987的計數系統的位置進行標記。包括於KLHuVH中 的CDRs之外的鼠殘基用一個實心圓指示。圖14.圖14A-14C顯示在鼠和人源化MN-14VH f框架殘基(FR)之間的胺基酸序 列的比較。只顯示不同於小鼠的人FR殘基。NE麗和KOL的⑶Rs也沒有顯示。在各個FRs 中的胺基酸取代的區域以粗體進行突出，取代位置根據Kabat等的編號系統進行指示。將 3個⑶R括入盒中。圖15.圖15顯示踝hMN-14CEA Mab和DTIC治療在人甲狀腺髓樣癌模型中的效^ ο圖16.圖16顯示踝M1N-14CEA Mab和CPT-11治療在早期人結腸癌模型中的效^ ο圖17.圖17顯示祿hMN_14CEA Mab和CPT-Il治療在低腫瘤負擔的人結腸癌模 型中的效果。
圖18.圖18顯示在人結腸癌模型中的CPT-Il治療之前三天給予的裸hMN_14CEA Mab預治療的效果。圖19.圖19顯示在人結腸癌模型中裸hMN_14CEA Mab和CPT-Il的各種給藥順序 的比較。圖20.圖20顯示在人結腸癌模型中GM-CSF預處理對於裸hMN_14CEA Mab治療的 效果。圖21.圖21顯示在人結腸癌模型中裸hMN_14CEA Mab治療對於低CEA表達和高 (幹擾素誘導的)CEA表達腫瘤細胞的效果的比較。圖22.圖22A和圖22B顯示人REI和KOL抗體的Vk和VH區的人、鼠和人源化序列 分別與鼠和人源化MN-14的比較。將圖22A中REIVk的人序列與鼠和人源化MN_14Vk序列 比較。實心圓指示由人REI Vk序列保留的序列。將⑶Rs括入盒中。將圖22B中KOL VH的 人序列與鼠和人源化MN-14VH序列比較。實心圓指示由REI Vk序列保留的序列。將⑶Rs 括入盒中。圖23.圖23A和23B顯示hMN-14的Vk、可變輕鏈和VH、可變重鏈序列，所述hMN-14 是一種人源化的III類抗CEA抗體。CDR區以粗體和下劃線顯示。胺基酸殘基和核苷酸按 順序編號。輕鏈可變區顯示於圖23A中，而重鏈可變區顯示於圖23B中。優選實施方案的詳細描述1.概述本發明提供治療的方法，其中在治療期中按順序地或同時地給藥裸抗CEA抗體或 其片段以及至少一種治療劑。該方法對於治療甲狀腺髓樣癌特別有用，但是對於治療非甲 狀腺髓樣癌、結腸直腸癌、肝細胞癌、胰癌、乳腺癌、肺癌、頭和頸癌、膀胱癌、子宮癌和卵巢 癌以及甚至不高水平表達CEA的癌症也令人驚奇地有用。例如，考慮在以至少IOOng/克的 組織水平表達CEA的癌症中進行治療。本方法進一步提供包含抗CEA抗體的組合物，它優 選為III類抗CEA單克隆抗體或其抗體片段，其中抗體和治療劑彼此沒有偶聯或連接。如 本文所用的，短語「III類抗CEA」抗體或抗體片段意為結合CEA抗原(或CD66e)的抗體 或片段並且與正常的交叉反應抗原(NCA)、胎糞抗原(MA)、粒細胞和CD66a-d不反應(見， Primus等，美國專利號4，818，709，併入作為參考)。裸III類抗CEA抗體或其片段可以是 人源化的、嵌合的、人或鼠抗體。在一個優選的實施方案中，裸III類抗CEA抗體或其片段 為人源化的MN-14抗體或其片段。還要求用於本發明的是沒有⑶66a_d交叉反應性的II類Mabs。這些是與CEA結 構域tN-AlBl、A2B2反應的Mabs，這些結構域與胎糞抗原反應，但不與NCA反應並且不與粒 細胞反應。例如，NP-3和MN-6為在本發明中有用的II類抗CEA抗體。此外要求用於本發 明的是II類抗CEA單克隆抗體或其片段，它可以與⑶66a、b和d反應，但不與⑶66c或I 類Mabs或其片段反應，所述CD66c或I類Mabs或其片段與CD66a、b或d以及CD66c反應 (定義I類Mab與⑶66c結合)。令人驚奇的是，本文所述的組合物和方法還對於治療非甲狀腺髓樣癌，包括結腸 直腸癌、胰癌、乳癌、肺癌、肝細胞癌、膀胱癌、頭和頸癌以及卵巢癌有用。由於這類形式的癌 症比甲狀腺髓樣癌表達較少的CEA，所以出人意料的是裸III類抗CEA抗體與治療劑的結合 會對治療非甲狀腺髓樣癌有用。
裸III類抗CEA抗體殺死腫瘤細胞的機制並不是確定地已知的並且可能包括幾種 機制。假設單獨的祿抗體或與治療劑組合可以通過阻抑其各自的抗原的生物學活性或通 過刺激天然免疫功能，如抗體依賴性的細胞介導的細胞毒性(ADCC)或補體介導的溶胞作 用來影響腫瘤的生長。此外，單獨的丨課抗體或與治療劑結合可以通過抑制細胞生長和細胞 周期進程、誘導細胞凋亡、抑制血管發生、抑制轉移活性和/或影響腫瘤細胞粘附來治療和 控制癌症。事實上，本發明的抗CEA抗體或其片段可以在治療轉移灶中比治療原初癌症更 為有效，因為轉移灶可能對於腫瘤細胞粘附的拮抗劑更為敏感。本治療方法提供了一種治 療計劃，它可以通過允許對抗體和一種或多種不同治療劑進行滴定提供有效治療方案來進 行優化以提供對個體病人最大的抗腫瘤活性。在本發明的一個方面中，裸III類抗CEA抗體或其片段和治療劑可以與至少一種 額外的治療劑，如裸的或偶聯的人源化的、鼠的、嵌合的或人的抗體、融合蛋白或其片段一 起補充。例如，另一種非阻抑性的並且不結合粒細胞或CD66a-d的III類CEA抗體或抗體 片段；非阻抑性的並且不結合粒細胞或CD66a-d的II類抗CEA抗體或抗體片段；可以與 ⑶66a、b和d反應但不與⑶66c反應的II類抗CEA Mabs或其片段，與⑶66a、b或d以及 CD66c反應的I類Mabs或其片段(通過I類抗CEA Mabs或其片段)，或針對與不同癌症相 關的表位或抗原的抗體，可以被用作治療劑來與優選的人源化MN-14抗體一起進行組合治 療。如下面更加詳細介紹的，這種額外的抗體、融合蛋白或其片段可以結合CEA或另一種與 癌症或腫瘤相關的抗原。2.定義在接下來的介紹中，使用了許多術語並且提供下列定義以幫助理解本發明。如本文所述的，皿是指一種全長的(即，天然發生的或由正常的免疫球蛋白基 因片段重組過程所形成的)免疫球蛋白分子(例如，一種IgG抗體)或免疫球蛋白分子的 一種免疫活性(即，特異性結合)部分，比如一種抗體片段。「抗體片段」是抗體的一部分，如F (ab，)2、F (ab) 2、Fab，、Fv、scFv (單鏈Fv)等。不 考慮結構，抗體片段與被完整抗體識別的相同抗原結合。術語「抗體片段」還包括任何一種合成的或遺傳工程改造過的蛋白，它通過與特異 性抗原結合形成複合物而像抗體一樣發揮作用。例如，抗體片段包括由可變區組成的分離 片段，如由重鏈和輕鏈可變區組成的「Fv」片段、其中輕鏈和重鏈可變區通過肽鍵進行連接 的重組的單鏈多肽分子(「sFv蛋白」)，和由模擬高變區的胺基酸殘基組成的最小識別單位。 Fv片段可以以不同方式進行構建以產生多價體的和/或多特異性結合的形式。對於前者多 價體來說，它們相對於CEA表位與一個以上的結合位點反應，反之對於多特異性形式來說， 結合一個以上的表位(既可以是CEA的表位，也可以是針對CEA的和一種不同抗原的)。如本文所用的，術語抗體組分包括一種完全的抗體、融合蛋白及其片段。MS^通常是一種不與治療劑偶聯的完全抗體。之所以如此是因為抗體分子的Fc 部分提供效應子或免疫功能，如補體定位和ADCC (抗體依賴的細胞毒性)，它使可以導致細 胞裂解的機製得以實施。然而，Fv可能不是抗體的治療功能所必需的，但是其它機制，如凋 亡、抗血管發生、抗轉移活性、抗粘附活性如對異型和同型粘附的抑制，和對信號途徑的幹 擾可以得以發揮作用並且幹擾疾病的進程。裸抗體包括多克隆和單克隆抗體及其片段，包 括鼠抗體以及某些重組抗體，如嵌合的、人源化的或人抗體及其片段。如在本發明中所定義的，「裸的」是與「未偶聯的」同義的，並且意為不與它一起給藥的治療劑相連接或偶聯。嵌合抗體是一種重組的蛋白，它含有抗體重鏈和輕鏈的可變區，包括來源於一個 物種，優選為齧齒動物的抗體的互補決定區(CDRs)和可變結構域，而抗體分子的恆定區則 來源於人抗體的那些。對於獸醫應用，嵌合抗體的恆定區可以來源於其它物種，如貓或狗。人源化抗體是一種重組蛋白，其中來源於一個物種的抗體,例如嚙齒類的抗體的 CDRs，被從嚙齒類抗體的重鏈和輕鏈中轉移到人重鏈和輕鏈可變區中。抗體分子的恆定區 來源於人抗體的那些。人抗體是一種由轉基因小鼠所獲得的抗體，它已經講行「工稈化」以產牛適應抗 原脅迫的特異性人抗體。在本技術中，將人重鏈和輕鏈位點元件導入源自胚胎幹細胞系 的小鼠品系中，所述胚胎幹細胞系包含靶向的內源重鏈和輕鏈位點的破壞。轉基因小鼠 可以合成對人抗原特異的人抗體，並且該小鼠可以用於生產分泌人抗體的雜交瘤。Green 等，Nature Genet. 7 13 (1994)，Lonberg 等，Nature 368 :856 (1994)，和 Taylor 等，Int. Immun. 6 =579(1994)介紹了從轉基因小鼠中獲得人抗體的方法。通過基因或染色體轉染 方法以及病毒呈現技術還可以構建完整的人抗體，所有這些技術都是本領域已知的。見例 如，McCafferty等關於從來自未免疫供體的免疫球蛋白可變區的全部基因體外生產人抗 體或其片段的描述。在本技術中，將抗體可變區基因框內克隆入絲狀噬菌體的大的或小的 外殼蛋白基因，並且在噬菌體顆粒表面上呈現為功能性抗體片段。由於絲狀噬菌體顆粒包 含噬菌體基因組的單鏈DNA拷貝，基於該抗體功能特性的篩選還導致對編碼表現那些特性 的抗體基因的篩選。以此方式，噬菌體模仿B細胞的一些特性。噬菌體呈現能夠以許多格 式進行，關於它們的綜述，見例如 Johnson 和 Chiswell，Current Opinion inStructural Biology3 :5564_571 (1993)。人抗體還可以通過體外激活的B細胞生產。見美國專利號5，567，610和 5，229，275，將它們的全部內容併入作為參考。治療劑是一種單獨地、與抗體組分即抗體或抗體片段，或其亞片段一起同時或按 順序給藥的分子或原子，在疾病的治療中有用。治療劑的例子包括抗體、抗體片段、免疫 偶聯物、藥物、細胞毒性劑、毒素、核酸酶、激素、免疫調節劑、螯合劑、硼化合物、光敏劑或染 料、放射性同位素或放射性核素、反義寡核苷酸、免疫偶聯物或其組合。免疫偶聯物是一種與治療劑偶聯的抗體組分。合適的治療劑如上所述。如本文所用的，術語抗體融合蛋白是一種重組牛產的抗原結合分子，其中兩個或 更多的相同或不同的天然抗體、單鏈抗體或具有相同或不同特異性的抗體片段部分相連。 III類抗CEA融合蛋白包含至少一個CEA結合位點。優選地，III類抗CEA融合蛋白是MN-14 融合蛋白。融合蛋白的效價表明融合蛋白的結合臂或位點具有抗原(s)或表位(s)；即單價、 二價、三價或多價的。抗體融合蛋白的多價性意指可以利用在與抗原結合中的多重相互作 用，因而增強與抗原或不同抗原結合的親和力。特異性表明抗體融合蛋白能夠結合多少種 不同類型的抗原或表位；即，單特異性的、雙特異性的、三特異性的、多特異性的。利用這些 定義，天然抗體，例如IgG是雙價的，因為它具有兩個結合臂，但是為單特異性的，因為它結 合一種類型的抗原或表位。一種單特異性的多價的融合蛋白具有一個以上的對於相同抗原 或表位的結合位點。例如，單特異性的雙抗體是具有與相同抗原反應的兩個結合位點的融合蛋白。融合蛋白可以包含不同抗體組分或相同抗體組分的多個拷貝的多價或多特異性 組合。例如，本發明的融合蛋白可以是多特異性的，其中融合蛋白的一個臂(例如，scFv或 Fab)是靶向⑶66e的III類抗CEA mAb而融合蛋白的另一個臂來自靶向⑶66a_d的另一個 CEA交叉反應抗體。根據本發明的一個優選的雙特異性融合蛋白具有一個相對於III類CEA表位的 臂，和一個針對在粒細胞上表達的⑶66a-d表位(II類)的臂。在這些實施方案中，⑶66a-d 結合部分應該不能夠固定補體或結合Fc受體以影響ADCC(它會導致來自粒細胞的細胞因 子的釋放)。儘管補體固定和ADCC是本發明裸治療方案的優選特性，但是應當在與雙特異 性融合蛋白相關的本發明實施方案中避免它們。在正常的結腸細胞上NCA-50/90和CEA都 得以表達，但它們受限於正常上皮細胞的頂面，該面僅存在於結腸內腔中，並且對注射的抗 體是不可達到的。以CEA形式從這些正常細胞中釋放的CEA或與死亡的正常細胞結合的CEA 在糞便中被除去。當結腸癌形成時這種極化作用喪失，並且隨後NCA-50/90和CEA都在癌 細胞膜上表達，所述癌細胞膜正在入侵下面的錨定正常上皮細胞的正常基膜。預期雙特異 性抗體如hMN3/hMN14與在這些入侵細胞上的CEA和NCA-50/90反應。而且，由於NCA50/90 存在於粒細胞上，這種雙特異性預期指引粒細胞殺死入侵的結腸癌細胞。一種根據本實施 方案的更加優選的構建體是具有一個與NCA50/90反應的臂和兩個僅與CEA反應的臂的雙 特異性的三價蛋白。另一個實施方案是具有結合NCA50/90的兩條臂的雙特異性蛋白。一種優選的也與粒細胞反應的融合蛋白是一種雙抗體，具有針對NCA-50/90 (例 如hMN-3)的一條臂，以及針對CEA上的III類表位(hMN14)的一條臂。這些融合蛋白沒 有Fc區，所以它們不會激活細胞因子從粒細胞中的釋放。一種更加優選的融合蛋白是具 有一條hMN-3臂和兩條hMN14臂的三抗體。這種雙抗體和三抗體的構建在美國申請系 列號60/404，919 (遞交於2002年8月22日)、60/345，641 (遞交於2002年1月8日)、 60/328，835 (遞交於2001年10月15日)和60/341，881遞交於2001年12月21日)中進 行了介紹。任何一種由hMN14/NP_3特異性的mabs製成的多特異性抗體也都是優選的並 且可以具有一個能夠固定補體/激活ADCC的Fc區。例如，可以使用一種hMN14-IgGl/ [NP-3-scFv]2 ；其生產在美國申請系列號09/337，756中進行了教示。仍然是根據本發明的另一種優選類型的多特異性抗體是hMN_3MAb，它具有一個缺 乏固定補體/影響ADCC能力的Fc區。融合蛋白可以另外包含一種治療劑。例如，至少一種抗體或其片段，如靶向⑶66e 或其scFv或Fab的III類抗CEA mAb可以偶聯到細胞因子上，如幹擾素或集落刺激因子， 如GM-CSF或G-CSF或白介素，本文對它們所有的進行介紹。免疫調節劑是在本發明中所定義的當呈現、改變、抑制或刺激身體免疫系統時的 治療劑。一般地，在本發明中有用的免疫調節劑刺激免疫細胞增殖或在免疫反應級聯中變 得激活，如巨噬細胞、B細胞和/或T細胞。如本文所述的免疫調節劑的一個例子是一種細 胞因子，它是一種細胞群落(例如，原初T淋巴細胞)在接觸特異性抗原之後釋放的大約 5_20kDa的可溶性小蛋白質，它作為細胞之間的胞內介質發揮作用。如熟練的技術人員會理 解的，細胞因子的例子包括淋巴因子、單核因子、白介素和幾種相關的信號分子，如腫瘤壞 死因子(TNF)和幹擾素。趨化因子是細胞因子的一個亞類。某些白介素和幹擾素是刺激T細胞或其它免疫細胞增殖的細胞因子的例子。I·秘，伺遍輔、λ·細λ秘單克隆抗體(MAbs)是對於特定抗原的抗體的同類群體並且該抗體僅包含一種 類型的抗原結合位點並且只結合抗原決定簇上的一個表位。通過本領域技術人員所公 知的方法可以獲得對於特定抗原的嚙齒類單克隆抗體。見，例如，Kohler和Milstein， Nature256 :495 (1975)，和Coligan等(編輯)，CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY, VOL. 1, 2. 5. 1-2. 6. 7 頁(John Wiley 和 Sons 1991)[下文中〃 Coligan"]。簡言之，單克隆抗體 可以通過用含有抗原的組合物注射小鼠、通過移除血清樣品來檢驗抗體產品的存在、移除 脾以獲得B淋巴細胞、將B淋巴細胞與骨髓瘤細胞相融合來產生雜交瘤、克隆該雜交瘤、選 擇產生針對該抗原的抗體的陽性克隆、培養產生針對該抗原的抗體的克隆以及從雜交瘤培 養物中分離抗體而獲得。通過許多充分建立的技術可以從雜交瘤培養物中分離和純化MAbs。這種分離技術 包括使用蛋白-A瓊脂糖凝膠的親和層析法、大小排阻層析法和離子交換層析法。參見，例 如，Coligan 於 2. 7. 1-2. 7. 12 頁和 2. 9. 1-2. 9. 3 頁。還參見Baines 等，「免疫球蛋白 G(IgG) 的純化」，分子生物學的方法，第10卷，79-104頁(TheHumana Press, Inc. 1992)。通過公知的抗體生產方法來生產針對肽骨架的抗體。例如，注射在完全Freimd佐 劑中的免疫原，如(肽)n_KLH，其中KLH是鎖眼形血藍蛋白，η = 1_30，隨後向免疫活性動 物中注射兩次相同的懸浮於不完全Freimd佐劑中的免疫原。最後給予動物靜脈內注射強 化抗原，接著在三天後收集脾細胞。隨後將收集的脾細胞與Sp2/0-Agl4骨髓瘤細胞相融合 並且利用直接結合ELISA對得到的克隆的培養物上清液的抗肽反應性進行分析。利用起始 免疫原的肽片段可以分析產生抗體的良好特異性。利用自動肽合成儀可以輕易地製備這些 片段。對於抗體生產來說，分離酶缺陷的雜交瘤以能夠篩選融合的細胞系。這種技術還能 夠用於針對一種或多種包含聯結子的螯合物，例如In (III)-DTPA螯合物來培育抗體。針對 In(III)-DTPA的單克隆小鼠抗體是已知的(授予Barbet的美國專利號5，256，395)。生產抗體的另一種方法是通過在轉基因家畜的乳中進行生產。見，例如，Colman, A.，Biochem. Soc. Symp. ,63 :141_147，1998 ；美國專利 5，827，690，在此將二者的全部內容 併入作為參考。製備兩種分別含有編碼成對的免疫球蛋白重鏈和輕鏈的DNA片段的構建 體。將DNA片段克隆入含有一個啟動子序列的表達載體中，所述啟動子序列優選在哺乳類 上皮細胞中進行表達。例子包括但不限於來自兔、牛和羊酪蛋白基因、牛α-乳球蛋白基 因、羊β-乳球蛋白基因和小鼠乳清酸蛋白基因的啟動子。優選地，插入的片段在來自哺乳 類特異性基因的同源基因組序列3』端的側翼。這提供了多聚腺苷酸化位點和轉錄穩定序 列。將表達盒共注入受精的哺乳類卵的前核中，隨後將該卵移植入受體雌體的子宮中並且 讓其孕育。出生後，通過Southern分析就兩種轉基因的存在對子代進行篩選。抗體要存在， 重鏈和輕鏈基因都必須同時在相同的細胞中表達。利用本領域已知的標準免疫學方法就抗 體或抗體片段的存在和功能性對轉基因雌體進行分析。可以利用本領域已知的標準方法從 乳中純化抗體。在開始培育針對免疫原的抗體之後，可以將單克隆抗體的可變基因從雜交瘤細胞 中進行克隆、測序並且隨後通過重組技術進行製備。例如，出版物Orlandi等，Proc. Nat' 1 Acad. Sci. USA 86:3833(1989)介紹了克隆鼠免疫球蛋白可變區的一般方法，將該文獻的全部內容併入作為參考。鼠抗體和抗體片段的人源化和嵌合化是本領域技術人員所公知 的。嵌合抗體是一種重組蛋白，它包含包括CDRs的可變區，所述CDRs源自動物的一個物 種，如一種嚙齒類抗體，而抗體分子的其它部分，即恆定區則源自人抗體。源自人源化和嵌 合的單克隆抗體的抗體組分的使用減少了與鼠恆定區免疫原性相關聯的潛在的問題。構 建嵌合抗體的技術是本領域技術人員所公知的。作為一個例子，Leimg等，Hybridoma 13 469 (1994)，描述了他們是如何通過結合編碼LL2單克隆抗體的Vk和Vh結構域的DNA序列 與各自的人k和IgGl恆定區結構域來生產LL2嵌合體的，所述LL2單克隆抗體是一種抗 CD22抗體。還可以通過用一個或多個不同的人FR替換嵌合的MAb的可變區中的鼠FR的序列 來將嵌合的單克隆抗體(MAb)人源化。具體地，通過將小鼠互補決定區由小鼠免疫球蛋白 的重鏈和輕鏈可變區轉移到人可變區中，並且隨後取代鼠對應部分的框架區中的人殘基來 生產人源化的單克隆抗體。由於簡單地將小鼠CDRs轉移到人FRs中經常導致抗體親和性 的減弱甚至是喪失，因此可能需要額外的修飾以便保持鼠抗體的原始親和性。這可以通過 將FR區中的一個或多個人殘基用它們的鼠的對應物進行替換來實現，以便獲得一種對其 表位具有良好的結合親和性的抗體。見，例如，Tempest等，Biotechnology 9 =266(1991)和 Verhoeyen 等，Science 239 1534 (1988)。在一個優選的實施方案中，在人源化的抗CEA抗體或其片段中的一些人殘基被它 們的鼠對應物所替換。此外，已知嵌合的抗CEA與其鼠的對應物相比顯示結合親和性，在 人源化抗CEA MAb的起始版本中的檢測性設計，如果有的話，可以通過將嵌合的抗CEA的 輕鏈和重鏈與人源化版本的那些相混合和配對而進行鑑定。優選地，人源化的抗CEA抗體 為人源化的MN-14抗體，它的製備和序列在U. S. 5，874，540中進行了介紹，將它的全部內 容併入作為參考。儘管兩種人抗體REI和NEWM是用於製備人源化的和嵌合的MN-14優選 的抗體，還可以將來自2種或多種不同人抗體的框架序列的組合用作V1^P VK。Jones等， Nature321 522 (1986)，Riechmann 等，Nature 332 323 (1988)，Verhoeyen 等，Science239 1534 (1988)，Carter 等，Proc. Nat 『 IAcad. Sci. USA 89 4285 (1992)，Sandhu, Crit. Rev. Biotech. 12 :437(1992)，和 Singer 等，J Immun. 150 2844(1993)介紹了人源化 MAbs 的生 產，特此將每一篇文獻都併入作為參考。另外，針對一個具體表位的人源化的、嵌合的和人 MAbs的親和性可以通過CDRs的突變得以提高，從而較低劑量的抗體與較高劑量的突變前 較低親和力的MAb —樣有效。參見例如，W00029584A1。在另一個實施方案中，本發明的抗體為人III類抗CEA單克隆抗體。可以從轉基因 非人動物中獲得抗CEA MAb或另一種人抗體。見，例如，Mendez等，Nature Genetics, 15 146-156(1997)和美國專利號5，633，425，將它們的全部內容併入作為參考。例如，可以從 一隻具有人免疫球蛋白位點的轉基因小鼠中回收人抗體。優選地，抗CEA抗體為MN-14抗 體。通過滅活內源免疫球蛋白基因和導入人免疫球蛋白位點來對小鼠體液免疫系統進行人 源化。人免疫球蛋白位點非常複雜並且包含大量的不連續片段，它總共佔了人基因組的大 約0.2%。為了確保轉基因小鼠能夠產生足夠完整的抗體，人重鏈和輕鏈位點的大片段必 須被導入小鼠基因組中。這通過一個逐步的過程得以實現，開始是形成在胚繫結構中含有 人重鏈或輕鏈免疫球蛋白位點的酵母人工染色體(YACs)。由於每個插入物的大小為大約 1Mb，所以YAC構建物需要免疫球蛋白位點重疊片段的同源重組。通過融合含有酵母球芽和小鼠胚胎幹細胞將兩種YAC分別導入融合小鼠，所述兩種YAC中的一種含有重鏈位點，另一 種含有輕鏈位點。隨後將胚胎幹細胞的克隆微注射入小鼠胚泡中。對得到的嵌合雄體就其 通過它們的胚系轉運YAC的能力進行篩選，並且與鼠抗體生產缺陷的小鼠一起繁殖。繁殖 兩種轉基因品系，一種含有人重鏈位點而另一種含有人輕鏈位點，產生了響應免疫而生產 人抗體的子代。還可以通過微細胞介導的染色體轉移(MMTC)來將未重排過的人免疫球蛋白基因 導入小鼠胚胎幹細胞中。見，例如，Tomizuka等，Nature Genetics，16 133 (1997)。在該方 法中含有人染色體的微細胞與小鼠胚胎幹細胞相融合。轉移的染色體被穩定地保持，並且 成年嵌合體顯示合適的組織特異性表達。作為一種選擇，本發明的抗體或抗體片段可以源於分離自免疫球蛋白組合文庫的 人抗體片段。見，例如，Barbas 等，METHODS ACompanion to Methods in Enzymology 2 119(1991)，和 Winter 等，Ann. Rev. Immunol. 12 :433 (1994)，將它們併入作為參考。利用噬 菌體呈現通過工程化設計並且在大腸桿菌(E.Coli)中表達抗體片段可以克服與由B細胞 無限增殖化產生單克隆抗體相關聯的許多困難。為了確保高親和性單克隆抗體的回收，免 疫球蛋白組合文庫必須包含大的全部組織部分。一種典型的策略利用由免疫過的小鼠的 淋巴細胞或脾細胞獲得的mRNA利用反轉錄酶合成cDNA。通過PCR分別擴增重鏈和輕鏈基 因並且連接入噬菌體克隆載體。產生兩種不同的文庫，一種含有重鏈基因，一和含有輕鏈基 因。從每種文庫中分離噬菌體DNA，將重鏈和輕鏈序列連接在一起並且進行包裝以形成組合 文庫。每個噬菌體都包含重鏈和輕鏈cDNAs的隨機配對，並且在大腸桿菌的感染之後指導 感染細胞中抗體鏈的表達。為了鑑定識別目標抗原的抗體，將噬菌體文庫塗平板，將存在於 噬斑中的抗體分子轉移至濾器。將濾器與放射性標記的抗原一起溫育並且隨後進行洗滌以 除去多餘的未結合的配體。在放射自顯影照片上的放射性斑鑑定了含有結合該抗原的抗體 的噬斑。可以例如，從STRATAGENE Cloning Systems (La Jolla，CA)中獲得對於生產人免 疫球蛋白噬菌體文庫有用的克隆和表達載體。在一個實施方案中，如在Hansen等，美國專利號5，874，540 ；Hansen等，Cancer, 71 3478(1993) ；Primus 等，美國專利號 4，818，709，和 Shively 等，美國專利號 5，081，235 中所介紹的來生產本發明的抗體，將這些文獻的全部內容併入作為參考。抗體片段的生產本發明要求III類抗CEA抗體，優選MN-14抗體的片段的應用。本發明的III類 抗CEA抗體或其片段並不結合粒細胞或66a-d。識別特異性表位的抗體片段可以通過已知 的技術進行生產。例如，可以通過抗體的蛋白水解或通過編碼該片段的DNA在大腸桿菌中 的表達來製備抗體片段。抗體片段是一種抗體的抗原結合部分，如F(ab' )2、Fab'、Fab、 Fv、scFv等，可以通過傳統方法對完整抗體進行胃蛋白酶和木瓜蛋白酶消化而獲得。例如，可以通過用胃蛋白酶進行酶切以提供稱作F (ab 『 ) 2的IOOKd的片段來產生 從二硫鏈的剪切所得的抗體片段。該片段可以利用一種硫醇還原劑，以及任選地一種巰基 的保護基團進一步剪切，以產生50Kd的Fab'單價片段。或者，利用木瓜蛋白酶的酶切直接 產生兩個單價Fab片段和一個Fc片段。Goldenberg，美國專利號4，036，945和4，331，647 以及包含其中的參考文獻對這些方法進行了介紹，這裡將這些專利的全部內容併入作為 參考。
Nisonoff 等，ArchBiochem. Biophys. 89 230 (1960) ；Porter, Biochem. J 73 119(1959) ,Edelman 等，in METHODS IN ENZYMOLOGY VOL. 1，422 頁(學術出版社 1967)，禾口 Coligan 於 2. 8. 1-2. 8. 10 和 2. 10. -2. 10. 4 頁。還可以使用其它剪切抗體的方法，如重鏈的分離以形成單價輕-重鏈片段，進一 步剪切片段，或可以使用其它酶學的、化學的或遺傳學的技術，只要片段能結合被完整抗體 所識別的抗原。例如，Fv片段包含Vh和Vl鏈的聯合。如在Inbar等，Proc. Nat 『 1. Acad. Sci. U. S. Α. 69:2659 (1972)中所述，這種聯合是非共價的。或者，可變鏈可以通過分子間二 硫鍵連接或通過化學藥品如戊二醛進行交聯。見，例如，Sandhu, Crit. Rev. Biotech. 12 437(1992)。優選地，Fv片段包含通過肽鍵連接的Vh和\鏈。通過構建一種含有編碼通過寡核 苷酸連接的區的DNA序列的結構基因來製備這些單鏈抗原結合蛋白質(sFv)。將該 結構基因插入一種表達載體中，隨後將所述的表達載體導入一種宿主細胞，如大腸桿菌中。 重組的宿主細胞合成一種單鏈多肽，在兩個V區之間有一個連接肽。Whitlow等，Methods =A Companion to Methods in Enzymology，2 :97 (1991)介紹了生產 sFvs 的方法。還見 Bird 等，Science 242 423 (1988)，Ladner 等，美國專利號 4，946，778 ；Pack 等，BioTechnology 11 1271 (1993)和 Sandhu，在前。抗體片段的另一種形式是編碼單個互補決定區(CDR)的肽。CDR是抗體可變區 的一段，它在結構上與抗體結合的表位相互補並且比可變區的其餘部分更加易變。因此， ⑶R—些時候稱為高可變區。一個可變區包含三個⑶Rs。⑶R肽可以通過構建編碼目標 抗體的⑶R的基因而獲得。這種基因例如是通過利用多聚酶鏈式反應以合成來自抗體 生產細胞的RNA的可變區而進行製備的。參見例如，Larrick等，Methods :A Companion to Methods in Enzymology 2:106(1991) ；Courtenay-Luck, " Genetic Manipulation of MonoclonalAntibodies, 「 in MONOCLONAL ANTIBODIES PRODUCTION， ENGINEERING AND CLINICAL APPLICATION, Ritter 等(編輯)，I66-I79 頁(劍橋大學出版社 I"5)；和 Ward 等，「Genetic Manipulation andExpression of Antibodies, " in MONOCLONAL ANTIBODIES PRINCIPLES AND APPLICATIONS, Birch 等(編輯)，137-185 頁(ffiley-Liss, Inc. 1995)。還可以使用其它剪切抗體的方法，如分離重鏈以形成單價輕-重鏈片段，進一步 剪切片段，或其它酶學的、化學的或遺傳學的技術，只要片段能結合被完整抗體所識別的抗原。治療用的人源化、嵌合的和人抗CEA抗體本發明中所介紹的是利用鼠、嵌合的、人源化的和人III類抗CEA抗體或其片段進 行治療的組合物和方法。優選地，III類抗CEA抗體或其片段為MN-14抗體或其片段。本 發明的抗體可以用於治療甲狀腺髓樣癌(MTC)，以及非MTC的表達CEA的癌症。例示性的非 MTC的表達CEA的癌症包括結腸直腸癌、胰癌、肝細胞癌、胃癌、肺癌、頭頸癌、膀胱癌、子宮 癌、乳癌和卵巢癌。組合物本文考慮的是含有至少一種III類抗CEA單克隆抗體(MAb)或其片段以及至少一 種治療劑的組合物，所述抗體和治療劑彼此不相偶聯，並且因而作為每種組分的非偶聯形式存在於組合物中。在包含一種以上的抗體或其片段，如一種第二個III類抗CEA抗體的 組合物中，該第二個抗體為非阻抑性的(即，不會阻抑第一個III類抗CEA抗體或抗體片段 的結合)。在一個實施方案中，III類抗CEA單克隆抗體或其片段是人源化的、嵌合的或完整 的人的，其中人源化的、嵌合的，或完整的人MAb基本上保持鼠III類抗CEA MAb的III類 抗CEA結合特異性。在一個優選的實施方案中，III類抗CEA單克隆抗體或其片段是MN-14抗體或其片 段。優選地，MN-14單克隆抗體或其片段包含鼠MN-14單克隆抗體的互補決定區(⑶Rs)，其 中所述MN-14單克隆抗體的輕鏈可變區的⑶Rs包含含有胺基酸序列KASQDVGTSVA的⑶Rl ； 含有胺基酸序列WTSTRHT的⑶R2 ；和含有胺基酸序列QQYSLYRS的⑶R3 ；並且所述III類抗 CEA抗體的重鏈可變區的CDRs包含含有TYWMS的CDRl ；含有EIHPDSSTINYAPSLKD的CDR2 ； 和含有LYFGFPWFAY的CDR3。還要優選地，MN-14單克隆抗體與CEA反應並且與正常的交叉 反應抗原(NCA)和胎糞抗原不反應。但是，針對這些交叉反應決定簇的抗體可以用於和CEA 特異性抗體一起進行的組合治療，如與MN-14單克隆抗體組合。在本發明的另一個實施方案中，MN-14單克隆抗體或其片段是人源化的或完整的 人MN-14抗體或其片段。人源化MN-14抗體或其片段的輕鏈和重鏈可變區的框架區(FRs) 優選包含至少一個來自鼠MN-14單克隆抗體的相應FRs的胺基酸。還要優選地，人源化 MN-14抗體或其片段包含選自如上面所提到的圖14A-C的鼠重鏈可變區(KLHuVhAIGA)的 胺基酸殘基24、28、30、48、49、74和94的至少一個胺基酸。優選的人源化重鏈可變區的 胺基酸序列還在Hansen等，美國專利號5，874，540中給出，將其全部內容併入作為參考。 還要優選地，人源化重鏈可變區包含圖14A-C中所示的胺基酸序列，表示為KLHuVhAIG和 KLHuVhAIGAY。在另一個實施方案中，人源化MN-14抗體或其片段包含至少一個來自鼠 MN-14輕鏈可變區的相應FR的胺基酸。最為優選地，人源化的MN-14抗體或其片段包含圖 13A或圖22k或圖23A的輕鏈可變區。本發明的另一個實施方案是一種包含嵌合MN-14單 克隆抗體或其片段以及至少一種治療劑的組合物，所述抗體和治療劑彼此不相偶聯，並且 因而作為每種組分的非偶聯形式存在於組合物中。優選地，嵌合MN-14抗體或其片段包含 圖13A或圖22A或圖23A中所示的MN-14輕鏈可變區的⑶Rs以及如圖14A-C或圖22B或 圖23B中所示的鼠MN-14重鏈可變區的⑶Rs。本文還介紹了一種包含裸鼠的、人源化的、嵌合的或人的III類抗CEA抗體或其片 段和一種治療劑，以及一種第二個裸的或偶聯的III類抗CEA抗體或其抗體片段，它是非阻 抑性的，即，不會阻抑第一個III類抗CEA抗體或其片段的結合，並且在一種可藥用的載體 中配製。換句話說，III類抗CEA抗體或其片段對於彼此都是非阻抑性的，因而允許抗體或 其片段結合CEA(66e)。此外，本發明的III類CEA抗體或其抗體片段，以及用於組合治療中 的那些，並不結合粒細胞或CD66a-d。與本發明的抗體片段的裸III類抗CEA抗體一起作 為裸抗體或作為免疫偶聯物的組分適於組合治療的其它III類抗體包括在Kuroki等，JP R Cancer Res. ,78(4) 386 (1987) andHammarstrom(Cancer Res. 52(8) 2329(1992))中所述 的非阻抑性抗體或其片段，它也不結合粒細胞或CD66a-d。此外，其它的抗CEA抗體，如II類或I類抗CEA抗體，可以以裸的或偶聯的形式 用於與本發明的III類抗CEA抗體的組合中。這種可以用作組合治療的II類抗體或抗體片段是非阻抑性的並且不結合粒細胞或CD66a-d，但是與胎糞抗原(MA)和CEA反應。例 如，一種或多種嵌合的或人源化的II類抗CEA抗體或其片段，如MN-6或NP-3，可以與本 發明的一種III類抗CEA抗體或其片段相結合。這兩種抗體不與CD66a-d或粒細胞反 應(Hansen 等，Cancer 1993Junl ；71 (11) :3478_85)。許多出版物公開了識別 CEA 和 CEA 基因家族不同成員的 MAbs，如 Thompson 等，J Clin. Lab. Anal. 5 :344(1991) ；Kuroki 等， J BioL Chem. 266 :11810 (1991) ；Nagel 等，Eur. J Biochem. 214 :27 (1993) ；Skubitz 等，J Immunol. 155 5382(1995) ；Skubitz 等，J. Leukoc. Biol. 60 106(1996)；和 Chen 等，Proc. Natl. Aca d. Sci. 93 14851 (1996)。而且，第二抗體或抗體片段是未偶聯(裸的)的或與至少一種治療劑(免疫偶聯 物)偶聯的。可以通過間接地將一種治療劑偶聯至一種抗體組分而製備免疫偶聯物。在 Shih 等，Int. R Cancer，41 :832 (1988) ；Shih 等，Int. J Cancer, 46 1101(1990)；和 Shih 等，美國專利號5，057，313中介紹了一般的技術。一般的方法涉及將一種具有氧化的糖部 分的抗體組分與一種載體聚合物反應，所述載體聚合物具有至少一種游離的胺功能官並且 裝填了多種藥物、毒素、螯合劑、硼衍生物或其它治療劑。這種反應導致SchifT鹼(亞胺) 連接，它可以通過還原成仲胺進行穩定化以形成最終的偶聯物。優選地，用於治療的組合物 中的抗CEA抗體或其片段為MN-14抗體或其片段。更加優選地，MN-14抗體或其片段是人 源化的。本發明還要求一種含有裸的人源化的、嵌合的、鼠的或人的III類抗CEA抗體或 其片段和一種治療劑，以及一種偶聯的或非偶聯的第二抗體或其抗體片段。在一個實施例 中，第二抗體或其片段是非偶聯的(裸的)或偶聯到至少一種治療劑上。適於組合治療的 非I類、II類或III類抗CEA抗體和其片段包括，但不限於，與癌症相關聯的抗體和其片 段。與癌症相關聯的抗體和抗體片段的例子結合EGP-l、EGP-2(e. g.，17-1A)、MUC_1、MUC_2、 MUC-3、MUC-4、PAM-4、KC4、TAG-72、EGFR、HER2/neu、BrE3、Le-Y, A3、Α33、Ep-CAM、AFP、Τη、 Thoms on-Friedenreich抗原、腫瘤壞死抗原、VEGF, PlGF或其它腫瘤血管發生抗原、Ga 733、IL-6、胰島素樣生長因子-1、細胞粘合素、纖維結合素或其組合。如上面所討論的，不結 合⑶66a-d或粒細胞的非阻抑性的II類和III類抗CEA MAbs,或者選擇性地，結合⑶66a、 b和d的II類抗CEA MAbs或者結合CD66a、b和d，以及CD66c的I類抗CEA MAbs,也可以 與III類CEA抗體組合使用。適於組合治療的其它抗體和抗體片段也包括靶向癌基因標記 或產物的那些，或針對腫瘤脈管系統標記，如血管發生因子、胎盤生長因子(PlGF)的抗體， 和針對某些免疫反應調節劑的抗體，如針對CD40的抗體。方法本發明中還介紹了治療甲狀腺髓樣癌和非甲狀腺髓樣癌的方法。非甲狀腺髓樣 癌包括結腸直腸癌和任何其它表達CEA的腫瘤，如胰癌、乳癌、肝細胞癌、卵巢癌，某些類型 的表達可變數量的CEA的肺癌、頭頸癌、子宮內膜癌、膀胱癌和肝癌。在這些類型的癌症中 CEA的水平比存在於甲狀腺髓樣癌中的要低得多，但是必要的是CEA的水平足夠高從而111 類抗CEA療法提供有效的治療。正常的結腸黏膜層具有大約100-500ng/克但是以大約 5mcg/克組織水平的表達CEA的癌適於用本發明所述的方法進行治療。例如，本文要求一種治療甲狀腺髓樣癌或非甲狀腺髓樣癌的方法，包括向受試者 同時或按順序地給藥治療上有效量的III類抗CEA單克隆抗體或其片段和至少一種治療劑，並且優選在一種可藥用的載體中進行配製。優選地，III類抗CEA單克隆抗體或其片段 是嵌合的、鼠的、人源化的或人的，其中嵌合的、人源化的、鼠的或人的III類抗CEA MAb基 本上保留了鼠MAb的III類抗CEA抗體的結合特異性。更加優選地，III類抗CEA抗體是人 源化的，最優選地，是如本文和美國專利5，874，540中所述的人源化的MN-14單克隆抗體。 治療劑優選是一種細胞毒性劑，更加優選是一種烷基化劑，最優選是達卡巴嗪(DTIC)。但是 在另一個實施方案中，治療劑也可以不是DTIC。其它類別的抗腫瘤的細胞抑制劑和細胞毒 性劑，如5-氟尿嘧啶、CPT-Il (也稱為依立替康和camptosar)和奧沙利鉬也可以用於與這 些抗體的組合，特別是在結腸直腸癌的治療中。在其它的癌症類型中，已知有效的癌症藥物 也是與用於本文所提出的抗體治療相結合的良好候選物。本文還要求一種治療甲狀腺髓樣癌或非甲狀腺髓樣癌的方法，包括向受試者同時 或按順序給藥治療上有效量的III類抗CEA單克隆抗體或其片段和至少一種治療劑，以及 一種裸的或偶聯的第二人源化的、嵌合的、人的或鼠的單克隆抗體或其片段，並且優選在一 種可藥用的載體中進行配製。優選地，第一 III類抗CEA MAb是人源化的MN-14抗體或其 片段。在一個實施方案中，第二抗體或其片段是與癌相關的抗體或其片段，選自與TAG-72、 EGFR、HER2/neu、MUC1、MUC2、MUC 3、MUC4、EGP-1、EGP-2、AFP、Tn、IL-6、胰島素生長因子 1， 或另一種如上所述的這類與腫瘤關聯的抗原反應的單克隆抗體或其片段。在另一個實施方 案中，第二抗體或其片段可以是一種不同的IIII類抗CEA抗體或其片段，它是非阻抑性的 並且不結合粒細胞或⑶66a-d。在另一個實施方案中，第二抗CEA抗體是一種II類抗體或其片段，如在 Hammarstrom和Kuroki中所述的那些，條件是它們不與粒細胞或CD66a_d結合。在另一個 實施方案中，這種抗體包括I類Mabs或其片段，它與⑶66a、b或d以及⑶66c反應。抗體 和其片段可以同時或按順序地給藥或與治療劑一起給藥。在一個實施方案中，第二抗體或 其片段可以是裸的也可以是偶聯到一種治療劑上的。因此，本發明要求保護按順序地或同時地與一種或多種治療劑一起給藥祿的鼠 的、人源化的、嵌合的和人的抗CEA抗體和其片段，或作為多模式療法進行給藥。在本發明 中，優選III類抗CEA抗體，但是任何靶向腫瘤細胞的抗CEA抗體都是有用的。如本文所述 的裸III類抗CEA抗體可以顯著地提高癌細胞對於一種或多種治療劑的化學敏感性。例 如，在用一種治療劑，如CPT-11、5』 -氟尿嘧啶(5-FU)或奧沙利鉬處理之前或同時，用一種 如本文所述的裸III類抗CEA抗體MN-14處理結腸癌細胞，提高了細胞對於治療劑，如細胞 毒性藥物的反應。另外，這些單獨用裸的III類抗CEA抗體處理或結合一種治療劑進行處 理的治療方法可以進一步通過給藥一種如本文所述的免疫調節劑而得到改進，所述免疫調 節劑的給藥是在裸抗體的給藥或裸抗體與至少一種治療劑的給藥之前。本發明的多模式療法包括使用一種III類抗CEA抗體或其片段和一種治療劑的免 疫治療，補充以一種非偶聯的或偶聯的抗體、非偶聯的或偶聯的融合蛋白或其片段的給藥。 例如，一種非偶聯的人源化的、嵌合的、鼠的或人的MN-HMAb或其片段可以與另一種裸的 人源化的、鼠的、嵌合的或人的III類抗CEA抗體(如一種相對於CEA上不同表位的並且也 不結合粒細胞或CD66a-d的抗體)，或一種人源化的、嵌合的、鼠的或人的III類抗CEA抗 體的免疫偶聯物相結合，所述免疫偶聯物偶聯到一种放射性同位素、化療劑、細胞因子、酶、 酶抑制劑、激素或激素拮抗劑、金屬、毒素、反義寡核苷酸(例如，反bcl-2)或其組合上。裸III類抗CEA抗體或其片段也可以與一種偶聯的或非偶聯的鼠融合蛋白、人源化的、嵌合的 或人的III類抗CEA抗體相結合。但是，用於組合治療的III類抗CEA抗體彼此是非阻抑 性的並且不能結合粒細胞或CD66a-d。優選地，將裸III類抗CEA抗體與第二個裸的或偶聯 的抗體、融合蛋白或其片段按順序地或同時進行給藥。還要優選地，用於組合治療的抗體或 抗體片段之一是一種裸的人源化的MN-14抗體或其片段。此外，作為裸的或偶聯的抗體、融 合蛋白或其片段使用的第二抗體可以是一種人的、人源化的、嵌合的或鼠的II類CEA抗體 或其片段，它是非阻抑性的並且不能結合粒細胞或CD66a-d。根據本實施方案的一個優選的 抗體組合將包括一種缺乏效應子功能的裸的交叉反應性的抗CD66a-d抗體，它不激活補體 並且不誘導細胞因子的釋放。此外，交叉反應性的抗⑶66a_d Fab'或甚至是F(ab' )2可 能不破壞粒細胞並且可以與一種III類抗CEAMAb或一種NP-3型的II類抗CEA MAb 一起 使用。在本文所述的方法中，受試者至少接受一種裸的III類抗CEA抗體或其片段，它是 在一種治療劑之前、之後或與之一起給藥。在一個實施方案中，一種III類抗CEA抗體被用 於預處理細胞，即在治療劑之前給藥。優選地，III類抗CEA抗體是一種MN-14抗體，如人 源化的MN-14 (hMN-14)，它在一種治療劑，如5-FU或CPT-Il之前至少1個小時進行給藥。優選地，治療劑為用於標準的癌症化療中的藥物，如卵巢癌中的紫杉烷或鉬藥物、 結腸直腸癌中的氟尿嘧啶、CPT-Il和奧沙利鉬藥物，用在胰癌和其它癌症中的吉西他濱，或 用在乳癌中的紫杉烷衍生物。C0X-2抑制劑仍然代表另一類藥劑，它在癌症化療中與典型的 細胞毒性劑相結合而顯示活性，並且可以在本發明中以同樣的方式使用，但是結合以除了 單獨的CEA抗體之外的藥劑以及結合以其它的與癌症關聯的抗體。優選地，這些藥劑可以 與放射性標記的抗體結合使用，所述放射性抗體既有CEA抗體偶聯物也有與上述種類的其 它癌關聯的抗體的放射性偶聯物。還優選地，III類抗CEA抗體或其片段是MN-14抗體或 其片段。還要優選地，MN-14抗體或其片段是人源化的。在一個優選的實施方案中，裸III類抗CEA抗體或其片段與達卡巴嗪(DTIC)、阿黴 素、環磷醯胺或長春新鹼，或這些的任意組合按順序地(之前或之後)或同時地進行給藥。 例如，DTIC和環磷醯胺可以與裸III類抗CEA抗體或其片段按順序地或同時地進行給藥。 優選地，抗CEA抗體或其片段是人源化的MN-14抗體或其片段。類似地，5-氟尿嘧啶結合 以單獨的亞葉酸或結合以依立替康(CPT-Il)或結合以奧沙利鉬，是用於治療結腸直腸癌 的一種療法。其它合適的組合化療療法對於本領域技術人員是公知的，如單獨用奧沙利鉬， 或結合以這些其它的藥物。因此，根據所用的療法，與任何這些化療劑和裸III類抗CEA抗 體或其片段的組合療法都能夠用於治療MTC或非MTC。在甲狀腺髓樣癌中，仍然可以優選化 療劑，如一種烷基化劑(例如，DTIC)，以及吉西他濱和其它更加新近類別的細胞毒性劑。化 療藥物和裸III類抗CEA抗體或其片段可以以任何順序或一起給藥。換句話說，抗體和治療 劑可以同時或按順序地進行給藥。在一個優選的多模式療法中，在給藥一種根據本發明的 偶聯的或非偶聯的抗CEA抗體、融合蛋白或其片段之前、之後或同時給藥化療藥物和裸III 類抗CEA抗體或其片段。優選地，III類抗CEA抗體或其片段為人源化MN-14抗體或其片 段。一種優選的多模式療法的治療方案給藥hMN-14和DTIC3天，僅在第7、14、21天 給藥hMN-14，並且隨後每個第21天給藥一次，持續12個月的治療期。hMN-14的劑量是
220. 5-15mg/kg體重/每次輸液，更加優選2-8，並且依然更加優選3_5mg/kg體重/每次輸液， 而DTIC的劑量如目前臨床應用的優選劑量，但是也可以給予應用的最大優選劑量的2/3或 更少，由此降低與藥物相關的副作用。可以給予重複的藥物循環，如每1-6個月，伴隨著持 續的裸抗體治療，或伴隨著放射性抗體、藥物偶聯的抗體，以及包括某些細胞因子如G-CSF 和/或GM-CSF的不同方案，調整每種劑量從而使對於病人的毒性不被治療組合所增強。細 胞因子生長因子，如G-CSF的應用，可以使要給藥甚至更高劑量的骨髓抑制劑，如放射性標 記的抗體或細胞毒性藥物成為可能，並且這些方案和劑量將根據病人的疾病狀態和以往的 治療而對病人個別地進行調整，所有的疾病狀態和以往的治療都影響骨髓狀態和對於其它 細胞毒性治療的耐受性。在一個優選的實施方案中，以100-600毫克蛋白質/劑/注射的 劑量給藥MN-14抗體或其片段。仍要優選地，以300-400毫克蛋白質/劑/注射的劑量給 藥MN-14抗體或其片段，優選重複的劑量。根據許多因素，包括疾病的程度和在病人血液中 循環的CEA的量，優選的抗體方案是每周1次或以更小的頻率進行輸液，更小的頻率如每兩 周一次或甚至是每三周一次。治療劑這裡所列舉的治療劑是對於分別與如本文所述的裸抗體一起給藥也有用的那些 藥劑。合適的治療劑可以選自細胞毒性劑、毒素、激素、放射性核素、免疫調節劑、光敏治療 劑(如色素原或染料)、反義寡核苷酸、免疫偶聯物、另一種裸抗體、激素，或其組合。治療 劑包括，例如化療藥物如長春花生物鹼和其它生物鹼、蒽環黴素、表皮葉毒素、紫杉烷S、抗 代謝藥、烷基化劑、抗生素、C0X-2抑制劑、抗有絲分裂劑、抗血管生成素和凋亡劑，特別是 阿黴素、氨甲蝶呤、紫杉醇、CPT-11、喜樹鹼，和來自這些和其它類別的抗癌劑的其它藥劑 等。其它對於製備免疫偶聯物和抗體融合蛋白有用的癌症化療藥物包括氮芥、烷基硫酸、亞 硝基脲、三氮烯、奧沙利鉬、葉酸類似物、C0X-2抑制劑、嘧啶類似物、嘌呤類似物、鉬配位化 合物、激素、毒素(例如，核糖核酸酶、假單胞菌外毒素)等。根據要治療的腫瘤的不同，優 選的治療劑包括DTIC、CPT-IU5-氟尿嘧啶、紫杉醇、奧沙利鉬、阿黴素、環磷醯胺和長春新 鹼，或其組合。合適的化療劑在 REMINGTON' S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 19th Ed. (Mack PublishingCo. 1995)，和在 GOODMAN AND GILMAN ' S THE PHARMACOLOGICAL BASISOF THERAPEUTICS，第七版.(MacMillan Publishing Co. 1985)，以及這些出版物的修訂版本中 進行了介紹。其它合適的化療劑，如實驗性的藥物，是本領域技術人員公知的。毒素，如假單胞菌外毒素，也可以與一種裸III類抗CEA抗體或其片段一起給藥。 優選地，III類抗CEA抗體或其片段是人源化的MN-14或其片段。其它在裸的III類抗CEA 抗體或其片段給藥之前、之後或同時地非偶聯給藥的合適微生物、植物或動物毒素包括蓖 麻毒蛋白、相思豆毒蛋白、核糖核酸酶(RNA酶)、DNA酶I、金葡菌腸毒素A、商陸抗病毒蛋 白、白樹毒蛋白、白喉毒素、假單胞菌外毒素和假單胞菌內毒素。見，例如，Pastan等，Cell 47 :641(1986)，和 Goldenberg，CA-A Cancer Journalfor Clinicians 44 :43(1994)。其它 的適用於本發明的毒素是本領域技術人員所公知的並且在美國專利號6，077，499中公開， 將它的全部內容併入作為參考。這些可以源自，例如動物、植物和微生物來源，或化學地或 重組地工程化設計的。該毒素可以是一種植物的、微生物的或動物的毒素，或其合成性的 變異體。免疫調節劑，如細胞因子也可以對本發明的嵌合的、人源化的或人的III類抗CEA抗體或其片段非偶聯地進行給藥。如本文所用的，術語「免疫調節物」包括細胞因子、幹細 胞生長因子、淋巴毒素如腫瘤壞死因子(TNF)、造血因子如白介素(例如，白介素I(IL-I)、 IL-2、IL-3、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18和IL-21)、集落刺激因子(例如，粒細胞集落刺激因 子(GM-CSF)和粒細胞巨噬細胞-集落刺激因子(GM-CSF))、幹擾素(例如，幹擾素α、β或 Y)、被指定為"Sl因子"的幹細胞生長因子、紅細胞生成素和血小板生成素。合適的免疫 調節劑包括 IL-2、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18、IL-21、γ 幹擾素、TNF-α 等。所以，受試者 可以接受一種裸的III類抗CEA抗體或其片段以及一種單獨給藥的細胞因子，所述細胞因 子可以在裸的III類抗CEA抗體或其片段的給藥之前、同時或之後進行給藥。由於一些抗 原也可以是免疫調節劑，CD40抗原，例如，也可以與一種裸III類抗CEA抗體或其片段聯合 給藥，在裸抗體或抗體組合的給藥之前、同時或之後進行給藥。此外，適於治療患病組織的 放射性核素包括，但不限於，32P、33P、47Sc、59Fe、64CU、67CU、75Se、77AS、89Sr、9°Y、99Mo、105Rh^109Pd, mAg、125I、131I、142Pr、143Pr、212Pb，和 213Bi、58Co、67Ga、80mBr,99mTc,103mRh^109Pt,111In^119Sb,161Ho, 189m0s、192Ir、152Dy、211At、212Bi、223Ra、219Rn、215P0、211Bi、225AC、221Fr、217At、213Bi、88Y 和 255Fm。優選 的放射性核素為125I、1311、9°Y、mLu和225Ac。還優選地，放射性核素具有介於20和10，OOOkeV 之間的能量。可藥用的載體要遞送給受試者的裸鼠的、人源化的、嵌合的和人的III類抗CEA MAbs可以包含 一種或多種可藥用的載體、一種或多種其它的成分，或這些的某種組合。本發明的非偶聯的III類抗CEA抗體和其片段可以根據已知的製備藥用組合物的 方法進行配製。優選地，III類抗CEA抗體或其片段為MN-14抗體或其片段。滅菌的磷酸緩 衝液鹽水是可藥用載體的一個例子。見，例如，Ansel等，PHARMACEUTICAL DOSAGE FORMS AND DRUGDELIVERY SYSTEMS,第 5 版(Lea&Febiger 1990)，和 Gennaro (編輯)，REMINGTON' S PHARMACEUTICAL SCIENCES，第 18 版(Mack Publishing Company 1990)，及其修訂版。可以將本發明的非偶聯的III類抗CEA抗體和其片段配製以進行靜脈內給藥，所 述靜脈內給藥通過例如丸劑注射或持續輸液的方式進行。優選地，III類抗CEA抗體或其 片段為MN-14抗體或其片段。注射用的劑型可以以單位劑量形式給出，例如，與一種防腐劑 一起共存於安瓿瓶中或共存於多劑量容器中。組合物可以採用在油狀或水樣載體中的懸浮 液、溶液或乳劑的形式，並且可以包含成型劑如懸浮劑、穩定劑和/或分散劑。或者，在使用 前活性成分可以是粉末形式以構成一種穩定的載體，如滅菌的無熱原水。可以利用其它的藥學方法控制藥劑和視抗體或其片段作用的持續時間。控制 釋放的製劑可以通過使用聚合物來複合或吸收裸抗體來製備。例如，生物相容性的聚合物 包括聚(乙烯-共-醋酸乙烯基酯)的基質和硬脂酸二聚體和癸二酸的聚酐共聚物的基 質。Sherwood等，BiolTechnology 10:1446(1992)。從這種基質中釋放抗體或其片段的 速率依賴於免疫偶聯物或抗體的分子量、基質內抗體的量和分散顆粒的大小。Saltzman 等，Biophys. R 55 :163(1989) ;Sherwood等，見前。其它固體配藥形式在Ansel等， PHARMACEUTICAL D0SAGEF0RMS AND DRUG DELIVERY SYSTEMS，第 5 版(Lea&Febiger 1990)， 和 Gennaro (編輯)，REMINGTON' S PHARMACEUTICAL SCIENCES，第 18 版(Mack Publishing Company 1990)，及其修訂版中進行了介紹。非偶聯的III類抗CEA抗體或其片段也可以以皮下方式或甚至通過其它腸胃外途徑對哺乳類給藥。而且，給藥可以是通過持續的輸液或通過單次或多次的丸劑。通常，給人 類給藥裸抗體或其片段的劑量將根據病人的年齡、體重、身高、性別、一般醫學條件和以往 病史而變化。一般地，單次靜脈輸液在大約0. 5mg/kg-20mg/kg範圍的裸抗體或其片段的劑 量是合乎需要的，儘管根據情況要求可以給藥較低或較高的劑量。這種劑量可以如需要進 行重複，例如每月1次持續4-10個月，優選每兩周一次持續16周，並且更加優選每周一次 持續8周。還可以以更少的頻率給藥，如每兩周一次持續幾個月或者以更大的頻率和/或 持續更長時間地給藥。可以通過各種腸胃外途徑給藥，適當調整劑量和方案。為了治療的目的，向哺乳類給藥治療上有效量的III抗CEA抗體或其片段以與 未處理的對照實驗相比減小腫瘤的大小。優選地，III類抗CEA抗體或其片段是人源化的 MN-14抗體或其片段。適於本發明的受試者通常是人，儘管還考慮非人的哺乳類或動物受試 者。述及以「治療上有效量」來給藥抗體製品，如果給藥的量是生理上有意義的話。如果一 種藥劑的存在導致受體哺乳類生理上可檢測的變化，那麼這種藥劑是生理上有意義的。特 定地，本發明的抗體製品是生理上有意義的，如果它的存在引起抗腫瘤反應的話。生理上有 意義的效應還可以是受體哺乳類中體液和/或細胞免疫的誘發。本發明進一步包括下列編號的實施方案1. 一種包含至少一種抗CEA單克隆抗體(MAb)或其片段和至少一種治療劑的組合 物。實施方案1的組合物，其中所述抗CEA MAb為I類、II類或III類抗CEA MAb,當所述 MAb為I類或II類MAb並且與粒細胞反應時，所述MAb是MAb的單價形式。2.實施方案1的組合物，其中所述抗CEA MAb或其片段是人源化的，並且其中所述 人源化的MAb基本上保留了鼠抗CEA MAb的抗CEA的結合特異性。3.實施方案1的組合物，其中所述抗CEA MAb或其片段是一種嵌合的MAb，並且其 中所述嵌合的MAb基本上保留了鼠抗CEA MAb的抗CEA結合特異性。4.實施方案1的組合物，其中所述抗CEA MAb或其片段是完整的人MAb，並且其中 所述人MAb基本上保留了鼠抗CEA MAb的抗CEA的結合特異性。5.實施方案1的組合物，其中所述抗CEA單克隆抗體或其片段是一種MN-14抗體 或其片段。6.實施方案5的組合物，其中所述MN-14抗體或其片段包含鼠MN-14單克隆抗 體的互補決定區(CDRs)，其中所述MN-14抗體的輕鏈可變區的CDRs包含含有胺基酸序列 KASQDVGTSVA的CDRl ；含有胺基酸序列WTSTRHT的CDR2 ；和含有胺基酸序列QQYSLYRS的 ⑶R3。抗CEA單克隆抗體或其片段包含所述MN-14抗體的重鏈可變區的⑶Rs，所述重鏈可 變區的 CDRs 包含含有 TYWMS 的 CDRl ；含有 EIHPDSSTINYAPSLKD 的 CDR2 ；和含有 LYFGFPWFAY 的⑶R3。另外，抗CEA的單克隆抗體或其片段包含輕鏈和重鏈可變區的⑶Rs。7.實施方案1的組合物，其中所述抗CEA的單克隆抗體與CEA反應並且與正常的 交叉反應性抗原(NCA)和胎糞抗原(MA)不反應。8.實施方案7的組合物，其中所述MN-14單克隆抗體或其片段是人源化的MN-14 抗體或其片段。9.實施方案7的組合物，其中所述MN-14單克隆抗體或其片段是嵌合的MN-14抗 體或其片段。10.實施方案7的組合物，其中所述MN-14單克隆抗體或其片段是完整的人MN-14抗體或其片段。11.實施方案8的組合物，其中所述人源化MN-14抗體或其片段的輕鏈和重鏈可變 區的框架區(FRs)包含至少一個來自鼠MN-14單克隆抗體的相應FRs的取代的胺基酸。12.實施方案11的組合物，其中所述人源化MN-14抗體或其片段包含至少一個來 自所述鼠MN-14抗體的所述相應FR的胺基酸，所述胺基酸選自圖14A-C或圖22B (hMN-14) 或圖23B的鼠重鏈可變區(KLHuVhAIGA)的胺基酸殘基24、28、30、48、49、74和94。13.實施方案11的組合物，其中所述人源化MN-14抗體或其片段包含至少一個來 自所述鼠MN-14輕鏈可變區的所述相應FR的胺基酸。14.實施方案8的組合物，其中所述人源化MN-14抗體或其片段包含如圖13A或 圖22A或圖23A中所示的輕鏈可變區，以及圖14A-C中所示標明為KLHuVhAIGA的或圖 22B(hMN-14)或圖23B中所示的重鏈可變區。15.實施方案9的組合物，其中所述嵌合的MN-14抗體或其片段包含如圖13A中所 示標明為MN-14V κ的輕鏈可變區和圖14A-C中標明為麗-14VH的重鏈可變區。16.實施方案1-15任一項的組合物，其中所述片段選自F(ab' ) 2、Fab'、Fab、 Fv 禾口 ScFv017.實施方案1-15任一項的組合物，其中所述治療劑選自裸抗體、細胞毒性劑、 藥物、放射性核素、免疫調節劑、光敏治療劑、免疫偶聯物、激素、毒素、反義寡核苷酸或其組 合，任選地在一種可藥用的載體中進行配製。18.實施方案17的組合物，其中所述其組合包含長春新鹼、阿黴素、奧沙利鉬、 CPT-11、氟尿嘧啶、DTIC和環磷醯胺。19.實施方案17的組合物，其中所述治療劑是裸抗體或免疫偶聯物。20.實施方案19的組合物，其中所述裸抗體或所述免疫偶聯物的抗體部分包 含一種人源化的、嵌合的、人的或鼠的單克隆抗體或其片段，所述單克隆抗體或其片段 選自與 EGP-1、EGP-2(例如，17-1A)、IL-6、胰島素樣生長因子-1、MUC-U MUC-2、MUC-3、 MUC-4、PAM-4、KC4、TAG-72、EGFR, HER2/neu、BrE3、Le-Y, A3、Α33、Ep-CAM, AFP、Τη、 Thomson-Friedenreich抗原、腫瘤壞死抗原、VEGF、胎盤生長因子(PlGF)或其它腫瘤血管 發生抗原、Ga 733、細胞粘合素、纖維結合素及其組合反應的單克隆抗體或其片段。21.實施方案20的組合物，其中所述片段選自F(ab' )2、F(ab)2、Fab『、Fab、Fv 禾口 ScFv022.實施方案1-15任一項的組合物，其中所述治療劑不是DTIC。23. 一種治療非甲狀腺髓樣癌的方法，包括向受試者同時或按順序地給藥治療有 效量的抗CEA抗體或其片段和至少一種治療劑，任選地在一種可藥用的載體中進行配製。24.實施方案23的方法，其中所述抗CEA MAb或其片段是人源化的，其中所述人源 化的MAb基本上保留了鼠抗CEA MAb的抗CEA結合特異性。25.實施方案23的方法，其中所述抗CEA MAb或其片段是嵌合的MAb，其中所述嵌 合的MAb基本上保留了鼠抗CEA MAb的抗CEA結合特異性。26.實施方案23的方法，其中所述抗CEA單克隆抗體或其片段是MN-14抗體或其 片段。27.實施方案23的方法，其中所述MN-14單克隆抗體或其片段包含鼠MN-14單
26克隆抗體的互補決定區(CDRs)，其中所述MN-14抗體的輕鏈可變區的CDRs包含含有氨 基酸序列KASQDVGTSVA的⑶R1 ；含有胺基酸序列WTSTRHT的⑶R2 ；和含有胺基酸序列 QQYSLYRS的⑶R3 ；所述抗CEA抗體的重鏈可變區的⑶Rs包含含有TYWMS的⑶R1 ；含有 EIHPDSSTINYAPSLKD 的 CDR2 ；和含有 LYFGFPWFAY 的 CDR3。28.實施方案27的方法，其中所述抗CEA單克隆抗體與CEA反應並且與正常交叉 反應性抗原(NCA)和胎糞抗原(MA)不反應。29.實施方案28的方法，其中所述MN-14單克隆抗體或其片段是人源化的MN-14 抗體或其片段。30.實施方案28的方法，其中所述MN-14單克隆抗體或其片段是嵌合的MN-14抗 體或其片段。31.實施方案28的方法，其中所述MN-14單克隆抗體或其片段是完整的人MN-14 抗體或其片段。32.實施方案29的方法，其中所述人源化MN-14抗體或其片段的輕鏈和重鏈可變 區的框架區(FRs)包含至少一個來自鼠MN-14單克隆抗體的相應FR s的取代的胺基酸。33.實施方案32的方法，其中所述人源化MN-14抗體或其片段包含至少一個來自 所述鼠MN-14抗體的所述相應FR的胺基酸，所述胺基酸選自圖14A-C標明為KLHuVhAIGA 或圖22B(hMN-14)或圖23B的鼠重鏈可變區的胺基酸殘基24、28、30、48、49、74和94。34.實施方案32的方法，其中所述人源化MN-14抗體或其片段包含至少一個來自 所述鼠MN-14輕鏈可變區的所述相應FR的胺基酸。35.實施方案32的方法，其中所述人源化MN-14抗體或其片段包含如圖13A或圖 22A(hMN-14)或圖23A中所示的輕鏈可變區，以及圖14A-C中所示標明為KLHuVhAIGA的或 圖22B(hMN-14)或圖23B中所示的重鏈可變區。36.實施方案23-35任一項的方法，其中所述片段選自F(ab)2、F(ab' )2、Fab'、 Fab、Fv 禾口 scFv037.實施方案23-36任一項的方法，其中所述治療劑選自人源化的、嵌合的、人的 或鼠的單克隆抗體或其片段，所述抗體或其片段選自II類抗CEA單克隆抗體、III類抗CEA 單克隆抗體及其組合，並且以治療上有效的量同時地或按順序地進行給藥。38.實施方案37的方法，其中所述抗體或其片段是裸的或被偶聯到另一種治療劑上。39.實施方案23-36任一項的方法，其中所述治療劑選自裸抗體、細胞毒性劑、藥 物、放射性核素、免疫調節劑、光敏治療劑、反義寡核苷酸、CEA或非CEA抗體的免疫偶聯物、 激素或其組合，任選地在一種可藥用的載體中進行配製。40.實施方案39的方法，其中所述治療劑選自與EGP-1、EGP_2(例如，17-1A)、 IL-6、MUC-1、MUC-2、MUC-3、MUC-4、PAM-4、KC4、TAG-72、EGFR、HER2/neu、BrE3、Le_Y、A3、A33、 Ep-CAM、AFP、Tn、Thomson-Friedenreich抗原、腫瘤壞死抗原、VEGF、P1GF或其它腫瘤血管 發生抗原、Ga 733、IL-6、胰島素樣生長因子-1及其組合反應的選自人源化的、嵌合的、人 的或鼠的單克隆抗體或其片段，並且以治療上有效的量同時地或按順序地對所述受試者進 行給藥。41.實施方案40的方法，其中所述抗體或其片段是裸的或被偶聯到另一種治療劑上。42.實施方案23-36任一項的方法，其中所述治療劑不是DTIC。43.實施方案39的方法，其中所述細胞毒性劑是一種藥物或毒素。44.實施方案43的方法，其中所述藥物具有選自抗有絲分裂的、烷基化的、抗代謝 物的、抗血管緊張素的、凋亡的、生物鹼、C0X-2和抗生素藥劑及其組合的藥學特性。45.實施方案43的方法，其中所述藥物選自氮芥、氮丙啶衍生物、烷基磺酸酯、亞 硝基脲、三氮烯、葉酸類似物、蒽環黴素、紫杉烷、C0X-2抑制劑、嘧啶類似物、嘌呤類似物、抗 代謝物、抗生素、酶、表鬼白毒素、鉬配位化合物、長春花生物鹼、取代脲、甲胼衍生物、腎上 腺皮質抑制劑、拮抗劑、內皮他丁、紫杉醇、喜樹鹼、阿黴素和它們的類似物，及其組合。46.實施方案43的方法，其中所述毒素為微生物的、植物的或動物的毒素，選自蓖 麻毒蛋白、相思豆毒蛋白、a毒素、皂草毒蛋白、核糖核酸酶(RNA酶)、DNA酶I、金葡菌腸毒 素A、商陸抗病毒蛋白、白樹毒蛋白、白喉毒素、假單胞菌外毒素和假單胞菌內毒素。47.實施方案39的方法，其中所述免疫調節劑選自細胞因子、幹細胞生長因子、淋 巴毒素、造血因子、集落刺激因子(CSF)、幹擾素(IFN)、幹細胞生長因子、紅細胞生成素、血 小板生成素及其組合。48.實施方案47的方法，其中所述淋巴毒素為腫瘤壞死因子(TNF)，所述造血因 子為白介素(IL)，所述集落刺激因子為粒細胞集落刺激因子(G-CSF)或粒細胞-巨噬細胞 集落刺激因子(GM-CSF)，所述的幹擾素為幹擾素a、0或Y，所述幹細胞生長因子被指定 為"S1因子"。49.實施方案47的方法，其中所述免疫調節劑包括11^-1、11^-2、11^-3、11^-6、11^-10、 IL-12、IL-18、IL-21、y 幹擾素、TNF-a 或其組合。50.實施方案39的方法，其中所述放射性核素具有介於20和10，OOOkeV之間的能量。51.實施方案50的方法，其中所述放射性核素選自1251、1311、9°Y、88Y、225Ac、mLu、 188Re、186Re及其組合。52.實施方案39的方法，其中所述光敏治療劑為一種色素原或染料。53.實施方案44的方法，其中所述烷基化劑為達卡巴嗪。54.實施方案53的方法，其中100-600毫克蛋白質/劑/注射的劑量給藥所述 MN-14抗體或其片段。55.實施方案54的方法，其中300-400毫克蛋白質/劑/注射的劑量給藥所述 MN-14抗體或其片段。56. 一種治療甲狀腺髓樣癌的方法，包括向受試者同時或按順序地給藥治療有效 量的抗CEA抗體或其片段和至少一種治療劑，優選在一種可藥用的載體中進行配製。57.實施方案56的方法，其中所述抗CEA MAb或其片段是人源化的，其中所述人源 化的MAb基本上保留了鼠抗CEA MAb的抗CEA結合特異性。58.實施方案56的方法，其中所述抗CEA MAb或其片段是嵌合的MAb，其中所述嵌 合的MAb基本上保留了鼠抗CEA MAb的抗CEA結合特異性。59.實施方案56的方法，其中所述抗CEA單克隆抗體或其片段是MN-14抗體或其 片段。
60.實施方案59的方法，其中所述MN-14單克隆抗體或其片段包含鼠MN-14單克 隆抗體的互補決定區(CDRs)，其中所述MN-14抗體的輕鏈可變區的CDRs包含含有胺基酸 序列KASQDVGTSVA的CDR1 ；含有胺基酸序列WTSTRHT的CDR2 ；和含有胺基酸序列QQYSLYRS 的⑶R3 ；所述III類抗CEA抗體的重鏈可變區的⑶Rs包含含有TYWMS的⑶R1 ；含有 EIHPDSSTINYAPSLKD 的 CDR2 ；和含有 LYFGFPWFAY 的 CDR3。61.實施方案60的方法，其中所述抗CEA單克隆抗體與CEA反應並且與正常的交 叉反應性抗原(NCA)和胎糞抗原(MA)不反應。62.實施方案61的方法，其中所述MN-14單克隆抗體或其片段是人源化的MN-14 抗體或其片段。63.實施方案61的方法，其中所述MN-14單克隆抗體或其片段是嵌合的MN-14抗 體或其片段。64.實施方案61的方法，其中所述MN-14單克隆抗體或其片段是完整的人MN-14 抗體或其片段。65.實施方案62的方法，其中所述人源化MN-14抗體或其片段的輕鏈和重鏈可變 區的框架區(FRs)包含至少一個來自鼠MN-14單克隆抗體的相應FRs的取代的胺基酸。66.實施方案65的方法，其中所述人源化MN-14抗體或其片段包含至少一個來自 所述鼠MN-14抗體的所述相應FR的胺基酸，所述胺基酸選自圖14A-C或22B的鼠重鏈可變 區的胺基酸殘基24、28、30、48、49、74和94。67.實施方案65的方法，其中所述人源化MN-14抗體或其片段包含至少一個來自 所述鼠MN-14輕鏈可變區的所述相應FR的胺基酸。68.實施方案65的方法，其中所述人源化MN-14抗體或其片段包含如圖13A或 22A(hMN-14)或圖23A中所示的輕鏈可變區，以及圖14A-C或22B (hMN_14)或23B中所示的 重鏈可變區。69.實施方案56-68任一項的方法，其中所述片段選自F(ab)2、F(ab' )2、Fab'、 Fab、Fv 禾口 sFv。70.實施方案56-68任一項的方法，其中所述治療劑選自人源化的、嵌合的、人的 或鼠的單克隆抗體或其片段，所述抗體或其片段選自II類抗CEA單克隆抗體、III類抗CEA 單克隆抗體及其組合，並且以治療上有效的量同時地或按順序地進行給藥。71.實施方案70的方法，其中所述抗體或其片段是裸的或被偶聯到另一種治療劑上。72.實施方案56-68任一項的方法，其中所述的治療劑選自裸抗體、細胞毒性劑、 藥物、放射性核素、免疫調節劑、反義寡核苷酸、光敏治療劑、CEA或非CEA抗體的免疫偶聯 物、激素或其組合，任選地在一種可藥用的載體中進行配製。73.實施方案72的方法，其中所述治療劑選自與EGP-1、EGP_2(例如，17-1A)、 MUC-1、MUC-2、MUC-3、MUC-4、PAM-4、KC4、TAG-72、EGFR、HER2/neu、BrE3、Le_Y、A3、A33、 Ep-CAM、AFP、Tn、Thomson-Friedenreich抗原、腫瘤壞死抗原、VEGF、P1GF或其它腫瘤血管 發生抗原、Ga 733、IL-6、胰島素樣生長因子-1及其組合反應的選自人源化的、嵌合的、人 的或鼠的單克隆抗體或其片段，並且以治療上有效的量同時地或按順序地對所述受試者進 行給藥。
74.實施方案73的方法，其中所述抗體或其片段是裸的或被偶聯到另一種治療劑上。75.實施方案56-68任一項的方法，其中所述治療劑不是DTIC。76.實施方案72的方法，其中所述細胞毒性劑是一種藥物或毒素。77.實施方案72的方法，其中所述藥物具有選自抗有絲分裂的、烷基化的、抗代謝 物的、抗血管緊張素的、凋亡的、生物鹼、C0X-2和抗生素藥劑及其組合的藥學特性。78.實施方案76的方法，其中所述藥物選自氮芥、氮丙啶衍生物、烷基硫酸、亞硝 基脲、三氮烯、葉酸類似物、蒽環黴素、紫杉烷、C0X-2抑制劑、嘧啶類似物、嘌呤類似物、抗代 謝物、抗生素、酶、表鬼白毒素、鉬配位化合物、長春花生物鹼、取代脲、甲胼衍生物、腎上腺 皮質抑制劑、拮抗劑、內皮他丁、紫杉醇、喜樹鹼、阿黴素和它們的類似物，及其組合。79.實施方案76的方法，其中所述毒素為微生物的、植物的或動物的毒素，選自蓖 麻毒蛋白、相思豆毒蛋白、a毒素、皂草毒蛋白、核糖核酸酶(RNA酶)、DNA酶I、金葡菌腸毒 素A、商陸抗病毒蛋白、白樹毒蛋白、白喉毒素、假單胞菌外毒素和假單胞菌內毒素。80.實施方案72的方法，其中所述免疫調節劑選自細胞因子、幹細胞生長因子、淋 巴毒素、造血因子、集落刺激因子(CSF)、幹擾素(IFN)、幹細胞生長因子、紅細胞生成素、血 小板生成素及其組合。81.實施方案80的方法，其中所述淋巴毒素為腫瘤壞死因子(TNF)，所述造血因子 為白介素(IL)，所述集落刺激因子為粒細胞集落刺激因子(G-CSF)或粒-巨噬細胞集落刺 激因子(GM-CSF)，所素幹擾素為幹擾素a、0或Y，所述幹細胞生長因子指定為"S1因 子〃。82.實施方案72的方法，其中所述免疫調節劑包括11^-1、11^-2、11^-3、11^-6、11^-10、 IL-12、IL-18、IL-21、y 幹擾素、TNF-a 或其組合。83.實施方案72的方法，其中所述放射性核素具有介於20和10，OOOkeV之間的能量。84.實施方案83的方法，其中所述放射性核素選自1251、1311、9°Y、88Y、225Ac、mLu、 188Re、186Re及其組合。85.實施方案72的方法，其中所述光敏治療劑為一種色素原或染料。86.實施方案77的方法，其中所述烷基化劑為達卡巴嗪。87.實施方案86的方法，其中以100-600毫克蛋白質/劑/注射的劑量給藥所述 MN-14抗體或其片段。88.實施方案87的方法，其中以300-400毫克蛋白質/劑/注射的劑量給藥所述 MN-14抗體或其片段。89. 一種治療癌症的方法，包括向受試者同時或按順序地給藥治療有效量的抗 CEA抗體或其片段和至少一種治療劑，任選地在一種可藥用的載體中進行配製。90.實施方案89的方法，其中治療劑為CPT-11。91.實施方案90的方法，其中在給藥CPT-11之前給藥抗CEA抗體或其片段。92.實施方案91的方法，其中在給藥CPT-11之前3天左右給藥抗CEA抗體或其片 段。93.實施方案89的方法，其中治療劑為DTIC。
94.實施方案89的方法，其中治療劑為奧沙利鉬。95.實施方案89的方法，其中治療劑為氟尿嘧啶/左亞葉酸。96.在一種以非抗體治療劑治療癌症的方法中，改進包括用一種抗CEA抗體或其 片段在給藥非抗體治療劑之前預處理患癌症的受試者。97.實施方案96的方法，其中抗CEA抗體是hMN_14。98.實施方案96的方法，其中治療劑為CPT-11。99. 一種用抗體治療癌症的方法，包括在給藥抗體之前向患癌症的受試者給藥一 種激活粒細胞和/或NK細胞從而增強抗體的效應子功能的藥劑。100.實施方案99的方法，其中藥劑為GM-CSF。101.實施方案99的方法，其中抗體為抗CEA抗體。102.實施方案101的方法，其中抗體為hMN-14。103. 一種用抗CEA抗體或片段治療癌症的方法，包括在給藥抗CEA抗體或片段之 前向患癌症的受試者給藥在腫瘤細胞中能有效上調CEA表達的幹擾素的量。104.實施方案103的方法，其中抗CEA抗體為hMN_14。105. 一種抗體融合蛋白，它包含至少一個CEA結合位點和至少另一個針對相同或 不同抗原的結合位點。106.根據實施方案105的抗體融合蛋白，其中CEA結合位點與MN-14結合相同的 位點。107.根據實施方案105的抗體融合蛋白，它是雙價的或三價的。108.根據實施方案105的抗體融合蛋白，其中融合蛋白的一條臂是靶向⑶66e的 III類抗CEA mAb,並且融合蛋白的另一條臂來自另一個靶向⑶66a-d的CEA交叉反應性抗 體。109.根據實施方案105的抗體融合蛋白，其中結合臂是s cFv或Fab區。110. 一種根據實施方案105的抗體融合蛋白，它是雙特異性的三價蛋白質，包含 一條與⑶66a-d反應的臂和兩條僅與CEA (⑶66e)反應的臂。111. 一種根據實施方案105的抗體融合蛋白，它是一種包含兩條結合NCA50/90的 臂的雙特異性蛋白質。112. 一種根據實施方案105的抗體融合蛋白，它是一種包含一條結合NCA50/90的 臂和一條結合II類CEA表位的第二臂的雙抗體。113. 一種根據實施方案112的抗體融合蛋白，其中NCA50/90臂獲自hMN-3抗體而 結合III類CEA表位的第二臂獲自hMN-14。114. 一種根據實施方案113的抗體融合蛋白，其中融合蛋白缺乏阻止細胞因子從 粒細胞釋放的激活的Fc區，或者它具有一個已經進行過修飾以阻止補體固定和ADCC的Fc區。115. 一種根據實施方案114的抗體融合蛋白，它是一種包含一條hMN-3臂和兩 條hMN-14臂的三抗體。115a. —種根據實施方案104的抗體融合蛋白，它是一種包含一條 hMN-15臂和兩條hMN-14臂的三抗體。116. 一種根據實施方案104的抗體融合蛋白，包含至少一條hMN-14臂和至少一條 NP-3 臂。
117. 一種根據實施方案116的抗體融合蛋白，它包含一個Fc區以便能夠進行補體 固定和ADCC的激活。118. 一種根據實施方案104的抗體融合蛋白，進一步包含一種治療劑。119. 一種根據實施方案118的抗體融合蛋白，其中治療劑為細胞因子。120. 一種根據實施方案119的抗體融合蛋白，其中細胞因子為幹擾素、集落刺激 因子或白介素。121. 一種根據實施方案120的抗體融合蛋白，其中集落刺激因子為GM-CSF或 G-CSF。通過下列實施例對本發明作進一步說明，儘管不以任何方式對發明進行限制。實施例1 材料和方法單克隆抗體和細胞系從美國典型培養物中心購買了一種人甲狀腺髓樣細胞系TT。該細胞單層生長於 DMEM(Life Technologies, Gaithersburg, MD)中，所述 DMEM 添加了 10%的胎牛血清、青黴 素(100U/ml)、鏈黴素(100pg/ml)和L-穀氨醯胺(2mM)。在以胰蛋白酶、0. 2% EDTA分離 後對細胞進行常規傳代。MN-14是一種III類抗CEA MAb,與CEA反應並且與正常的交叉反應抗原NCA和胎 糞抗原不反應(Hansen等，Cancer, 71 :3478 (1993))。這裡用作陰性對照的MN-14和LL2， 抗⑶22MAb的人源化形式的構建和特徵描述之前曾進行過介紹。(Sharkey等，CancerRes.， 55 :5935s (1995) ；Leung 等，Mol. Immunol. ,32 1416 (1995))。P3x63Ag8 (M0PC-21)是從美 國典型培養物中心(RockVille，MD)獲得的一種不相關的小鼠骨髓瘤IgGl。通過蛋白A層 析法純化抗體。體內研究通過皮下注射2X108個洗滌的TT細胞在雌性nu/nu小鼠(Taconic Farms, Germantown,NY)中增殖腫瘤，所述腫瘤已在組織培養中進行過增殖。將抗體經由側尾靜脈 靜脈注射進患腫瘤的動物內。注射的抗體量和給藥時間的細節在每個研究的結果部分指 出。結果作為個別動物的腫瘤體積以及平均值士SE給出。通過每周利用測徑器測量腫瘤的 長度、寬度和深度來監測腫瘤大小。將腫瘤體積計算為三種測量值的乘積。利用Student' s T檢驗進行統計學比較以比較腫瘤的體積和生長曲線下的面積。實施例2.在注射TT (人甲狀腺髓樣)腫瘤細胞後2天遞送裸hMN_14和DTIC的 組合治療在前面的研究中，在腫瘤移植2天之後，利用100 ii g和25 ii g劑量的DTIC (第2、3 和4天)和在第2天以及之後每周給予的250 u g劑量的hMN-14，與TT組合給藥裸hMN_14 和達卡巴嗪。100 ii g的DTIC劑量結合以hMN-14比兩種單獨的治療都更加有效(圖1A)。 但是，100 u gDTIC的劑量產生太強的反應，而25 y g的劑量則無效。令人驚奇的是，單獨的 MN-14和單獨的DTIC的效果並不是加合性的。換句話說，給定單獨用250 u g hMN-14和單 獨用100 u gDTIC治療的結果，並不會預測250 u g hMN-14和100 u gDTIC的組合會具有這 樣一種顯著的效果。見圖1A。在本研究中，如以往研究中的一樣，治療開始於TT細胞注射2天之後。在第2，3， 4,5,7,8,9,10，11，15和22天以100 u g/劑給藥hMN-14,隨後每7天給藥一次直到動物死亡、腫瘤達到2. 0cm3或研究由於人道原因而終止。DTIC的劑量為50和75 u g/每劑，它介 於以往的研究中給予的劑量之間。在60隻裸鼠中皮下注射TT細胞。注射日為星期一，第 0天。參見圖1B。結果顯示腫瘤生長的顯著延遲是由單獨的MAb治療或單獨的化療引起的(圖1B)。 75 u g劑量的DTIC結合以這種hMN-14抗體的方案比兩種單獨的治療都顯著地更為有效 (p<0.02)。出乎意料的是，組合的DTIC和MAb治療不是加合性的。在第7周，與在只有 75 u gDTIC組中的1/10隻小鼠和在未處理的和MAb組中的0/10隻小鼠相比，在75 y g DTIC 和Mb組中的8/10隻小鼠沒有明顯的腫瘤。在第7周平均腫瘤體積為0. 018 士0. 039cm3(75ii g DTIC力卩麗-14)、
0.284 + 0. 197cm3(75 u g DTI Conly)、0. 899 士 0. 545cm3 (僅有 hMN-14)禾口
1.578士0. 959cm3(未處理的)。裸抗CEA抗體和DTIC的組合治療增強了單獨用抗體或化 療的抗腫瘤效果，而無增長的毒性。組合型治療的優勢是令人吃驚的。服藥概沭(1)在第2天到11天，除了星期六，以lOOyg/劑/小鼠每天給藥 hMN-14。抗體治療與DTIC治療在同一天開始。在第2、3和4天以50和70iig/劑給藥 DTIC，所述劑量相應於5%和7. 5%的MTD。只給一個療程的DTIC。組6組小鼠，每組包含10隻小鼠。組1 未處理。組2.在第2、3和4天以50iig/劑給藥DTIC(星期三、星期四和星期五)。組3.在第2、3和4天以75 ii g/劑給藥DTIC.組4.在第 2、3 和 4 天 50iig/劑給藥 DTIC，加上第 2、3、4、5、7、8、9、10、11、15 和 22天的hMN-14 (100 P g/劑)，隨後每7天給藥一次直到動物死亡，腫瘤達到2. 0cm3的體積， 或研究終止。組5.在第 2、3 和 4 天以 25 ii g/劑給藥 DTIC，加上第 2、3、4、5、7、8、9、10、11、15 和 22天的hMN-14 (100 P g/劑)，隨後每7天給藥一次直到動物死亡，腫瘤達到2. 0cm3的體積， 或研究終止。組6.在第 2、3、4、5、7、8、9、10、11、15 和 22 天給藥 hMN-14 (確定 100 ii g/劑)，隨
後每7天給藥一次直到動物死亡，腫瘤達到2. 0cm3的體積，或研究終止。監測動物的存活。每周測量腫瘤和體重。方法在第二天，將2，200mg/小玻璃瓶的DTIC用19. 7ml滅菌水進行重構用於注 射。得到的溶液包含10mg/ml的達卡巴嗪，pH範圍為3. 0-4.0。根據需要利用該溶液進行 下面所述的稀釋並且將剩餘物以1ml的小份進行冷凍作隨後的使用。組2和4 製備5ml 0. 5mg/ml的溶液。靜脈注射100 yl的0. 5mg/ml/小鼠溶液。組3和5 製備5ml 0. 75mg/ml的溶液。靜脈注射100 yl的0. 75mg/ml/小鼠溶 液。估計hMN-14的量。將100 u 1的lmg/ml hMN-14腹膜內注射於組4、5和6中的小鼠中。實施例3.在人MTC異種移植模型中的放射性免疫療法研究 申請人:發展了 一種利用生產CEA和降鈣素的命名為TT的人MTC細胞系的人MTC異 體移植體，使用放射性標記的抗CEA MAbs進行MTC的實驗放射性免疫療法的模型([Stein，1999&num ；82]，見附錄)。通過皮下接種2X 108個細胞在裸鼠中建立MTC腫瘤並且讓它在 注射MAb s之前生長2-5周。隨後以MN-14進行生物分布和RAIT研究，其為流式細胞計 數法顯示與TT細胞反應。在這些研究中都利用Ag 8和Mu-9作為陰性對照MAbs。利用 0. 08g的較小腫瘤的初步研究顯示注射131I-MN-147天之後，與只有12. 6% ID/g的共注射 125I_Ag 8對照相比，注射劑量/克腫瘤的百分比(％ ID/g)是68.9%。使用更大的腫瘤(在 裸鼠中生長五個星期；平均腫瘤重量=0. 404g)，在注射125I-MN-147天之後觀察到的腫瘤 的 10/^%是 12. 4%。但是，共注射的 88Y-MN-14 的 10/^%是50. 5%，或比 125I_MN_14 高 4. 1 倍。用88Y-MN-14的腫瘤與血液、肺、肝、脾和腎的比率也比用125I-MN-14的更高，而用這兩 種藥劑的腫瘤與骨的比率相等。當利用125I-MN-14和88Y-MN-14生物分布數據來分別預測 用131I-MN-14和9°Y-MN-14的腫瘤放射劑量時，在9°Y-MN-14的MTD上遞送的放射吸收劑量 (150 u Ci)是在131I-MN-14的MTD上遞送的放射吸收劑量(275 u Ci)的1. 75倍高(4900cGy 對 2800cGy)。在該模型中的治療研究確定9°Y-MN_14是比131I-MN_14更好的治療劑。在5周大的 腫瘤中，與用131I-MN-14僅有腫瘤生長延遲相比在9°Y-MN-14的MTD上見到了 5周的腫瘤生 長完全抑制(圖2)。而且，當治療較小的2周大的腫瘤時，在9°Y-MN-14的MTD上見到了平 均60%的腫瘤體積減小，伴隨著一些完全的腫瘤消退。與在未治療動物或那些以對照MAbs 治療的MTD中的相對快速的腫瘤生長相比，這些抗腫瘤效應是非常顯著的。因而，我們的臨 床前研究顯示這種動物模式是非常適於以抗CEA MAbs進行的實驗性RAIT的。與1311相比9°Y較長的路徑長度和較高能量，加上9°Y被靶細胞保持較長時間的事 實導致了遞送給腫瘤提高的放射劑量並且因而導致了在等毒性下更加有效的療效。如果我 們的用殘餘131I(refs)的結果可以推廣到MTC中的MN-14，那麼我們可以預期殘餘1311在 這裡研究的大小的腫瘤中與9°Y至少同樣有效，並且很可能在處置微轉移疾病中或作為手 術後的輔助治療具有優勢。實施例4 化療對四種藥物，阿黴素、DTIC (達卡巴嗪)、環磷醯胺和長春新鹼，單獨地或組合地評 估它們在裸鼠中TT MTC異種移植體生長的效應。基於每種藥物在臨床上以mg/m2為基礎 對人給藥的劑量來選擇劑量。監測動物的存活，每周測量腫瘤的體積和體重。圖3顯示本 研究中動物的腫瘤生長曲線。通過個別地給藥，阿黴素、DTIC和環磷醯胺產生了顯著的生 長抑制，但長春新鹼沒有產生顯著的生長抑制，儘管由DTIC引起的生長延遲比其它藥物的 顯著更長。對於每組加倍的大致平均時間為未處理的，1周；阿黴素，2. 5周；DTIC，7. 5周； 環磷醯胺，3周；和長春新鹼，1. 5周。阿黴素和DTIC的組合與單獨的兩種藥物相比提高了 效力，將加倍的平均時間增至10周。但是，與單獨的DTIC相比，阿黴素和DTIC組合的提高 的效力沒有達到95%的可信度。AUC比較的P值如下阿黴素+DTIC對阿黴素，P < 0. 01， 而阿黴素+DTIC對DTIC，P < 0. 1。4種藥物的療法將加倍的平均時間延長至12周；對於阿 黴素和DTIC 二者的比較P < 0.01。個別藥物對未處理組的存活數據的時序分析僅對DTIC和環磷醯胺顯示了顯著的 差異。分別與DTIC和環磷醯胺治療組的11周和8周相比，未處理對照組的平均存活時間 為4周，並且藥物組合大於12周。如通過體重損失所測量的毒性對於所有研究組都在可接受的範圍之內。在以所有4種藥物處理的小鼠中的治療1周之後，觀察最大重量損失，體重 損失在3-12%範圍之間。實施例5.結合放射免疫治療和化療進行MTC的治療RAIT加4種藥物組合.通過將在未處理小鼠中的TT生長與上述使用4種藥物 (阿黴素、DTIC、環磷醯胺和長春新鹼)療法治療的小鼠相比較，來評估把用9°Y抗CEA Mb MN-14進行的RAIT和4種藥物組合結合起來的效果，RAIT的100%最大耐受劑量(MTD) (105 uCi)、RAIT的50% MTD,以及RAIT的50% MTD結合以4種藥物處理的那些。圖4顯 示在給予各種治療方案的小鼠中TT腫瘤的生長曲線。與未治療的動物相比，所有四個治 療組都在效力上產生了顯著的提高。鑑於未治療動物中大致的平均加倍時間為1. 5周，以 4種藥物進行的化療將平均加倍時間延長至10周而單獨的RAIT分別於50%和100% MTD 時得出了 4周和8周的加倍時間。如所預期的，100% RAIT組和4種藥物治療方案組二者 都比50% RAIT組顯著地更好。最重要的是，與兩種療法相比，將50% RAIT和4種藥物方 案組合起來改善了結果，進一步將平均加倍時間延長至12. 5周。對於組合治療與4種藥物 方案的比較來說，P < 0. 02，對於與100% RAIT的比較來說，P < 0. 01。治療後1周的平均重量損失(nadir)對於100% RAIT和4種藥物方案來說是9%， 但是對於組合的50% RAIT加上4種藥物方案來說是15%。此外，在組合療法組，一隻動物 死於治療3周之後而第二隻動物有大於20%的重量損失。因而，該治療超出了哺乳類耐受 劑量。RAIT加2種藥物方案的化療還在這種MTC異種移植體模型中，評估把用9°Y抗CEA MAb MN-14進行的RAIT和 2種藥物組合結合起來的效果，所述2種藥物組合由阿黴素和DTIC組成。各組的大致加倍 時間為未處理的，1.5周；阿黴素加DTIC，8周；RAIT的MTD，10周；結合以25-75%的2種 藥物方案的RAIT的MTD，大於12周。因而，單獨的RAIT比2種藥物方案更加有效，並且最 為顯著地，將RAIT和2種藥物方案結合起來與任一種單獨的療法相比產生了改善的結果。 對於結合治療與2種藥物方案的比較來說，P < 0. 005，對於與單獨的RAIT的比較來說，P < 0. 02。對於各組來說治療後(nadir) 1-2周的平均重量損失為2_8%，除了 100% RAIT加 75%的2種藥物化療組在第2周時觀察到13%的重量損失以外。此外，在該組合治療組， 兩隻動物死於治療後3-4周並且一隻經歷了大於20%的重量損失。因而，向100% RAIT的 治療中加入75%劑量水平的阿黴素和DTIC超出了 MTD，而該2種藥物組合的50%與100% RAIT組合則可以被耐受。RAIT加阿黴素由於以往的出版物已經報導過在該模型中RAIT與阿黴素的結合(Stein等，Clin CancerRes.，5 :3199s (1999) ；Behr 等，Cancer Res. 57 :5309 (1997))，可以對RAIT加阿黴素 方案作直接的比較。還對RAIT加4種藥物方案作直接的比較。與未處理的動物相比，所有 的治療都產生了顯著的效力。RAIT加阿黴素的平均加倍時間為12周。在本研究中，將RAIT 的全MTD與50%的阿黴素和DTIC或4種藥物方案結合起來將平均加倍時間延長至15周， 在這兩組之間沒有統計學上的顯著性差異。在這些研究中觀察了對象反應的基本數目。在 以RAIT加阿黴素治療後有3次完全反應，2次部分反應，並且在全部10隻小鼠中，5隻動物病情穩定至少4周。RAIT加2種藥物方案將對象反應增至12隻動物的10次完全反應和2 次部分反應，而RAIT加4種藥物治療方案導致9隻小鼠的7次完全反應和2次部分反應。RAIT 加 DTIC由於DTIC是在單獨給藥時最有效的化療劑，所以通過與RAIT加阿黴素和DTIC的 效力來評估RAIT加DTIC的效力。將阿黴素從治療方案中刪去對於臨床應用來說將是重 要的，以便避免該藥的額外毒性，特別是已知的心臟毒性。如圖5中所示的，兩個接受化療 結合RAIT的研究組，阿黴素和DTIC或只有DTIC，彼此大致上等同，二者都比單獨形式的治 療更有效。AUC比較的P值如下對於RAIT+DTIC對DTIC來說P < 0. 01，對於RAIT+DTIC 對RAIT來說P < 0. 05。分別與單獨的DTIC和RAIT 7. 5周和9周相比，RAIT加DTIC以及 RAIT加阿黴素和DTIC組的平均加倍時間分別為15. 5周和14周。因而，RAIT加DTIC的結 合形式的治療將平均加倍時間在DTIC化療之上延長了 100%。通過AUC或時序分析在RAIT 加DTIC以及RAIT加阿黴素和DTIC組之間沒有觀察到顯著的差異。實施例6 用裸抗CEA單獨進行的研究用裸hMN-I 4進行的治療為了研究未標記的hMN-I 4對於在裸鼠中TT腫瘤生長的影響，在腫瘤細胞注射的 一天或十一天之後，通過靜脈內給藥hMN-I 4的單一注射。圖6顯示與未處理的對照相比， 用0. 5mg hMN-14/小鼠處理的動物的腫瘤生長曲線。未處理組包含16隻動物；兩個處理組 每組包含10隻動物。在未處理組和腫瘤注射1天後的處理組之間觀察到顯著的生長延遲。 從第32天到93天觀察到平均腫瘤大小的顯著性差異(p < 0. 05)。與未處理動物相比，在 MN-14處理組中於第32天和60天之間有腫瘤大小的64-70%的抑制。在第11天組和未 處理組的平均腫瘤大小之間沒有顯著的差異。通過在生長曲線下的t檢驗分析還見到腫瘤 生長的顯著延遲。對於與腫瘤注射後1天處理的組相比較的未處理組來說，P < 0. 05，但是 對於腫瘤注射後11天處理的組來說並非如此。治療的特異性圖7總結了對於抗腫瘤反應的特異性研究的結果。將裸鼠中未標記的hMN-14對於 TT腫瘤生長的效果與陰性對照人源化MAb、hLL2(抗⑶22)和鼠MN-14的效果相比較。在 TT細胞之後的一天給藥(靜脈內地)MAbs (0. 5mg/小鼠)，隨後給予三次每周一次的0. 5mg/ 小鼠的劑量。研究15隻動物的組。在第一個研究中觀察到的緣於以0. 5mghMN-14治療的 生長抑制在本研究中得到確認。從第23天開始，觀察到在hMN-14和未處理組之間平均腫 瘤大小的顯著性差異(P < 0. 05)。在第37天用hMN-14處理的組中的平均腫瘤體積是未處 理的對照動物的42. 7%。以鼠MN-14進行的處理產生與hMN-14相似的結果。以hLL2進行 的處理沒有放慢腫瘤生長；相反在生長速率上有小的(不顯著的)增長。例如，與未處理的 40%和hLL2處理組的29%相比，在第37天87%的用hMN-14處理的腫瘤小於0. 5cm3。對 在生長曲線以下面積的T檢驗分析顯示在未處理組和用hMN-14或鼠MN-14處理組之間的 顯著性差異(P < 0. 05)，但是與hLL2處理的組卻沒有顯著性差異。此外，hMN-14組顯著不 同於hLL2組，但是與鼠MN-14處理的動物卻沒有顯著的不同。劑量的效果為了研究未標記的hMN-14的劑量對於裸鼠中TT腫瘤生長的影響，對逐漸增加的 hMN-14劑量進行了評估。在TT細胞1天後給予多個抗體劑量，隨後每周一次直到研究終止。在六隻小鼠的組中每周的劑量在0. 125mg到2.0mg hMN_14/小鼠的範圍內。在未處理 組和所有處理組之間觀察到平均腫瘤大小和生長曲線以下面積的顯著性差異(圖8)。例 如，在第21天和第49天之間兩個最低hMN-14處理組中的平均腫瘤體積是未處理動物中腫 瘤大小的27-40%。用較低劑量0. 125mg和0. 25mg進行的處理好像比用較高劑量進行的處 理更有效，儘管差異沒有達到統計學上的顯著性。時間測定通過變化MAb的給藥日期來評估介於TT注射和hMN_14的起始劑量之間的時間對 於裸鼠中TT腫瘤生長的影響。在TT細胞之後於第1、3或7天給藥hMN-14(0. 25mg)，隨後 每周一次直到研究結束。研究7-8隻動物的組。結果總結於圖9中。在未處理組和所有三 個處理組之間觀察到平均腫瘤大小的顯著性差異(p<0.05)。但是，在未處理的小鼠和第 7天處理組之間平均腫瘤大小的差異僅僅在一個時間點，第28天是顯著的。第1天處理的 小鼠在第21-77天產生顯著的差異，而第3天處理的小鼠在第21-70天產生顯著的差異。對 生長曲線以下的面積的T檢驗分析顯示，對於在TT細胞給藥1天或3天之後用hMN-14處 理的組的顯著的生長抑制，所述抑制是與未處理組相比的。該分析對於在未處理組和在第 7天處理的組之間的差異沒有達到95%的可信度限度(在第五周p = 0. 057)。實施例7 組合的裸抗CEA加DTIC對MTC的治療為了研究裸hMN-14是否能夠增強DTIC的效力，給予生有TT細胞的裸小鼠以 DTIC(75 y g/劑)，結合以一段未標記的Mb的療程。在皮下注射TT細胞的開始2天，連續 3天以75 ii g/劑給藥DTIC作為一個療程。hMN-14MAb治療與第一劑DTIC開始於同一天，在 首先的兩周以100 y g/劑/天持續5天，隨後每周兩次。這些MAb療法或單獨的化療引起腫 瘤生長的顯著延遲(圖10)。75 yg劑量的DTIC結合以本方案的hMN-14比兩種單獨的治 療顯著地更加有效(P < 0. 02)。7周後，與在僅有75 u gDTIC組中的1/10隻和在未處理組 和只有MAb組中的0/10隻相比，在75 u g DTIC+MAb組中的8/10隻小鼠沒有明顯的腫瘤。 第 7 周時的平均腫瘤體積為 0. 018+0. 039cm3 (75 u g DTIC+hMN-14)、0. 284+0. 197cm3 (75 u g DTIC)、0. 899+0. 545cm3 (hMN-14) and I. 578+0. 959cm3 (未處理的)。抗CEA MAb MN_14已顯示了出乎意料的在MTC中的抗腫瘤效力，而不必偶聯到一 種細胞毒性劑上。在3周開始並且至少持續2個月，在hMN-14處理的和未處理的組之間觀 察到平均腫瘤大小的差異。用同型匹配的陰性對照MAbs進行的處理並不放慢腫瘤的生長。 這是用「裸」抗CEA MAb抑制腫瘤的第一個證據。但是，裸抗CEA MAb與DTIC的組合治療 增強了單獨的抗體或化療的抗腫瘤效果。組合形式治療的優勢支持將CEA-MAb療法併入 化療方案中以進行MTC控制。實施例8圖15顯示裸hMN-14CEA Mab和DTIC治療在甲狀腺髓樣癌模型中的效果。治療起 始於腫瘤移植2天之後。在第2、3和4天以MTD的7.5%向小鼠給藥75118的011(。在第 2-5、7-10、11、15、22天以100 iig/天給藥hMN-14，隨後每周一次。結果顯示在所有組曲線 之下的面積之間的統計學上顯著的差異(P < 0. 05)。裸hMN-14CEA Mab治療顯示對於抑制 腫瘤生長的顯著效果。相對於兩種單獨的治療，當結合以DTIC時出現了令人驚奇地提高的 腫瘤生長抑制水平。實施例9 在結腸癌細胞中裸抗CEA抗體治療加CPT-11或5_FU
本實驗公開了單獨的以及結合以化療的人源化的、裸抗CEAhMN-14抗體(hMN_14) 對於結腸癌生長的體外和體內效果。方法和材料抗體生產通過蛋白A和離子交換層析(Q-Sepharose ；Pharmacia, Piscataway, NJ)來純化CDR移植的(人源化的)MN-14(hMN-14)抗癌胚抗原(CEA) (Sharkey, R. M.等， Cancer Res，55 :5935_5945，1995)連同鼠 MN-14 和其它靶向不同 CEA 表位(NP1，NP3，MN3， MN15 ； (Sharkey, R. M.，等，Cancer Res, 50 =2823-2831,1990))的抗體。通過免疫電泳、利用 還原和非還原條件的聚丙烯醯胺凝膠電泳以及大小排阻高壓液相色譜來檢測純度。體內療法研究利用一種CEA陽性的GW-39肺內微轉移模型進行存活療法研究 (Sharkey, R. M.，等，JNatl Cancerlnst. ,83 :627_632，1991 ；Blumenthal, R. D.，等，Cancer Res, 52 :6036-6044，1992)。使用商業購買的皮下GW-39人結腸直腸腫瘤製備10%或5% 的細胞懸浮液。將細胞(30 yl)靜脈內注射至尾靜脈中。在細胞移植的0或3天之後開 始給藥HuMN-14 IgG，並且每天給藥，持續14天，隨後在研究期間以100 u g/劑每周給藥兩 次。在細胞移植的0或3天之後開始以160iig的劑量每天腹膜內注射給藥CPT-11，持續5 天(MTD的20% )。對於一些研究來說，商業購買的GW-39腫瘤來自每天兩次接受100，000U 的IFNy，持續4天以上調CEA的表達的小鼠(Greiner，J. ff.等，16 :2129_2133，1996)，它 通過以往所述的免疫組織學進行確認(Blumenthal, R. D.等，Int. J Cancer, 51 =935-941, 1992)。每周監測體重並記錄動物的存活。以Kaplan-Meir檢驗對結果進行分析並且測定 中位存活時間。抗體誘導的癌細胞的化學致敏作用的體內效應hMN14_誘導的化學致敏作用的效應在體內和體外是顯而易見的。如上所述的患有 GW-39肺內微轉移的，以及未處理的或單獨以hMN-14(100 y g/天X 14天，並且在研究期間 每周兩次)、單獨以CPT-11的10% MTD(80ug/天X5天)或二種形式一起進行處理的小 鼠的存活曲線。治療開始於細胞移植的當天(30iU的10%GW-39細胞懸浮液)。每個處 理組以10隻小鼠開始並且重複研究兩次。結果顯示向患有GW-39肺微轉移的裸鼠共給藥 hMN-14和CPT-11提高了存活，超出兩種單獨形式的效果。給藥CPT-11的10%MTD導致了 中位存活由56天到63天的1周的增長(p < 0. 05)。在0天給藥hMN-14和CPT-11的動物 的存活期另外增長了 2周，到了 77天(與未處理小鼠相比p< 0.005)。由於最大抗體增長 出現於注射後3天，在CPT-11之前三天開始hMN-14治療，以測定這種給藥方式是否會通過 高抗體攝取以及體內化學致敏而進一步提高組合形式方法的療效。與具有70天中位存活 的在第3天以CPT-11單獨進行處理相比，結果顯示以hMN-14進行的3天預處理將中位存 活增至105天(p < 0. 001)，在所述預處理之後進行CPT-11處理。在本研究中，hMN-14和 CPT-11的共處理是有優勢的，正如70天的中位存活對具有63天中位存活的在0天單獨以 CPT-11進行處理，或具有35天中位存活的未處理小鼠所證明的。這些結果對於一種進一步 的實驗來說是相似的，所述實驗使用5%的GW-39細胞懸浮液而非10%的GW-39細胞懸浮 液。實施例10 在以hMN-14和CPT-11處理之前用一種免疫調節劑進行預處理對於腫 瘤細胞化學靈敏度的體內作用一個另外的實驗評估了 hMN-14和CPT-11的組合治療作為用Y幹擾素(IFN y )預處理GW-39商業購買的腫瘤(10%GW-39細胞懸浮液)的結果，所述組合治療是在具有表達 較高CEA水平的GW-39腫瘤的小鼠中一起開始的。如下進行涉及、幹擾素提高裸CEA抗 體(hMN-14)的抗腫瘤作用的實驗。 首先，將GW-39人結腸癌皮下生長於小鼠中，所述小鼠每天兩次接受100，000單位 的IFNy持續4天。具有GW-39腫瘤的對照鼠不給予IFN。對實驗鼠靜脈內注射來自兩種 鼠(即，有或無IFN處理的)任一種的5%的GW-39懸浮液(w/v)，注射入每組8隻的兩組 中。每組的4隻接受來自IFN處理的小鼠的腫瘤，4隻接受來自未處理小鼠的腫瘤。一組 8隻小鼠隨後接受hMN-14 (100 y g/天X 14天，並且之後每周兩次直到實驗結束)，另一組 160iig/天X5天接受CPT-11( = 20%的MTD)，第三組接受相同劑量的抗體+藥物組合， 而第四組完全不進行處理。每周測量動物重量以及存活率。對後來進行移植的在小鼠中以 IFN處理的商業腫瘤樣品也進行免疫組織學處理以測試腫瘤中CEA表達的增長，所述腫瘤 來自用IFN- y處理的小鼠，並且這還通過以不相關的IgG，如不顯示CEA染色的Ag8進行的 免疫組織學處理懸浮液來進行控制。實施例11對在動物模型中裸hMN_14CEA Mab對於低或高(如前所述，IFN- y誘導的)的表 達CEA的腫瘤細胞的作用進行比較。結果顯示在腫瘤細胞上增強的CEA抗原表達與抗CEA 抗體的提高的效力相關聯。比較研究的結果顯示於圖21中。因而，IFN-y預處理對於提 高抗CEA抗體療法在癌症治療中的效力是有用的。實施例12-用CEA抗體和GM-CSF進行的西格瑪狀結腸癌療法JR是一位62歲的男子，他接受用5-氟尿嘧啶和左亞葉酸進行的化療以減少向肝 的轉移，所述轉移被發現於他的西格瑪狀結腸癌發覺與摘除之時。當時他的癌胚抗原(CEA) 血漿效價為34ng/mL，而計算的肝的斷層攝影顯示在右葉有幾處小的病變，測量直徑介於2 和4cm之間；其它的放射研究好像是正常的。每周一次持續4周開始了用人源化抗CEAIgG、 hMN-14單克隆抗體進行的免疫治療，以300mg/m2的靜脈內劑量輸液超過2小時。在hMN-14 治療之前一周，該病人接受了 2次，200mcg/m2GM-CSF(sargamostim，Leukine :)的皮下注 射，在3天以後，在4周hMN-14的治療期間每周兩次持續給藥。在這四周之後，每隔兩星期 以相同劑量給藥hMN-14和GM-CSF 二者持續另外3個月，但是將GC-CSF的劑量增至250mcg/ m2。在每次給藥人源化的CEA抗體之前，給予病人口服50mg苯海拉明(Benadryl )，口服 500mg撲熱息痛(Tylenol )。在此時，用肝轉移以及多種身體其餘部分的放射性掃描構 成的CT測量為病人進行複查。還取血進行化驗並且測定他的血液CEA效價。沒有記錄肝 以外的疾病區，但是在肝中可測量的腫瘤直徑之和降低了 40%，並且病人的血液CEA效價 降至18ng/mL，因而顯示了治療的反應。用hMN-14和GM-CSF進行的免疫治療，對於hMN-14 來說以200mg/m2而對於GM-CSF來說以250mg/m2每兩周一次進行給藥，再給藥2個月，複查 顯示肝腫瘤直徑之和的進一步降低和CEA效價降至lOng/mL。由於腫瘤降低測量為大於在 治療前基線上的65%，認為治療已經提供了部分反應。此後，以較小的頻率給藥，在隨後的 六個月每月一次，所有的研究都顯示疾病沒有發生變化。病人隨後被跟蹤10個月，保持部 分緩解，沒有對治療的副反應，並且一般沒有任何疾病的症狀。實施例13-對轉移的結腸癌的組合免疫療法和化療ST是一位52歲的婦女，她在切除了原發腫瘤之後呈現結腸癌的肝和肺的轉移。對她實施在 Gramont 方案(A. de Gramont 等，J ClinOncol. 2000 ；18 :2938_1947)基礎上的組 合化療和免疫治療方案，但是增加了人源化的抗CEA單克隆抗體IgGl。在抗體輸注之前， 她口服接受了 50mg的苯海拉明(Benadryl)和500mg的撲熱息痛(Tylenol )。她接受 了 2小時的左亞葉酸輸注(200mg/m2/天)，隨後是5-氟尿嘧啶丸劑以及22小時的5-氟 尿嘧啶(600mg/m2/天)持續輸注，每2周連續2天，上述輸注是與以85mg/m22小時輸注與 250mL 5%葡萄糖中的奧沙利鉬一起進行的，同時在第1天(F0LF0X4方案)輸注左亞葉酸。 病人還接受了用5-羥基色胺-3-受體拮抗劑進行的抗催吐劑預防。在這種2周的化療周 期之前一周，以200mg/m2的劑量輸注hMN_14單克隆抗CEA抗體2小時以上，重複2周化療 周期的每一周，下個月其後的每周進行另一個化療周期。從第二個化療周期開始，每周一次 皮下給藥5mcg/kg/天的G-CSF (非格司亭，Neupogen&commat )，在用hMN-14抗體進行 免疫治療期間，於接下來的3個月繼續此劑量。用持續給藥hMN-14和非格司亭進行總共5 個周期的化療。其後，以相同劑量給予hMN-14和非格司亭治療，接下來的3個月每兩周一 次，沒有化療。2個月後，對病人進行檢查，與治療之前所作的測量相比，她的肝和肺轉移顯 示> 80%的縮小，這是通過計算的斷層攝影在肝和肺中測量而得出的結論。她的血液CEA 效價也從治療前的63ng/mL降至9ng/mL。在隨後的6個月對其進行跟蹤，她的病情看來穩 定了，沒有發現新的病灶而且殘留於肝和肺中的疾病也沒有增強。病人的主要毒性是周圍 感覺神經障礙，它由咽喉感覺遲鈍組成。病人在化療周期中還經歷了腹瀉、黏膜炎、噁心和 嘔吐，但是這些並不過度。當僅僅施用免疫治療時她沒有經歷任何副作用，並且能夠恢復全 日活動而沒有任何顯著的限制。實施例14圖16顯示踝hMN-14CEA Mab和CPT-11治療在早期人結腸癌模型中的效果。從 腫瘤移植後0天開始，在14天中以100 y g/天的劑量給予小鼠hMN-14並且隨後2次/周。 在5天中以60iig/天給予CPT-11。在這些條件下hMN-14自身的作用不是顯而易見的，只 觀察到CPT-11的適度作用(p < 0. 05)。但是，如通過比較CPT-1163天的中位存活與組合 治療77天的中位存活所見到的，hMN-14增強了 CPT-11的作用(p < 0. 005)。用hMN_14CEA Mab和CPT-11進行的組合治療顯著地延長了具有早期人結腸腫瘤轉移的動物的存活。實施例15圖17顯示f凍hMN-14CEA Mab和CPT-11治療在低腫瘤壓力的人結腸癌模型中 的效果。在一種利用5%腫瘤細胞懸浮液的減弱的腫瘤負擔模型中，比較單獨的CPT-11、 hMN-14和hMN-14+CPT-ll的組合治療。劑量如實施例14所示。在這些條件下單獨的hMN-14 沒有明顯的效果。單獨的CPT-11導致70天的中位存活。與之相比，組合治療產生了 91天 的中位存活(P < 0. 025)。hMN-14和CPT-11的組合顯著地延長了在人結腸癌轉移模型中 具有低腫瘤負擔動物的存活。實施例16圖18顯示在人結腸癌模型中在CPT-11治療之前三天給予的用裸hMN_14CEA Mab 預治療的效果。在一種利用5%腫瘤細胞懸浮液的減弱的腫瘤負擔模型中，比較單獨的 CPT-11、hMN-14和hMN-14+CPT-ll的組合治療，在所述的組合治療中hMN-14在CPT-11之 前3天進行給藥。劑量如實施例14所示。在這些條件下單獨的hMN-14將中位存活時間增 長21% (p<0.05)。單獨的CPT-11將存活率增長76% (p< 0.001)。與之相比，組合治療在單獨的CTP-11之上產生了另外58%的中位存活時間增長(與單獨的CPT-11相比，p < 0. 001)，在所述的組合治療中hMN-14在CPT-11之前3天進行給藥。用hMN_14預處理 顯著延長了在人結腸癌轉移模型中具有低腫瘤負擔動物的存活。實施例17圖19顯示在人結腸癌模型中裸hMN_14CEA Mab和CPT-11的各種給藥方案的比較。 在CPT-11之前3天給藥hMN-14CEA Mab是最有效的。劑量如實施例14所示。當順序相反 時(在hMN-14之前3天給藥CPT-11)或當二者同時給藥時，70天的中位存活時間相對於未 處理組(35天)是一個增長，但是仍然明顯小於在CPT-11之前3天用hMN-14進行預處理 的105天的中位存活時間。實施例18圖20顯示在人結腸癌模型中GM-CSF預處理對於裸hMN_14CEAMa b治療的效果。 在_4、-3、-2和-1天以1 ii g/小鼠/天的劑量給藥GM-CSF。在0天與hMN-14處理一起移 植腫瘤細胞。其它的劑量如實施例14所示。GM-CSF預處理導致了中位存活時間相對於單 獨的GM-CSF或單獨的hMN-14統計學上的顯著增長(p < 0. 002)。儘管前述提到了特定的實施方案，但是人們會理解本發明並非如此進行限定。對 於本領域普通技術人員來說，將可以對公開的實施方案作各種改進並且這種改進在本發明 的範圍之內。在此將本說明書中引用的所有的出版物和專利申請以及專利的全部內容併入作 為參考。
權利要求
一種組合物，包含至少一種裸的、人源化或嵌合的I類或I I類抗CEA單克隆抗體(MAb)或其抗原結合片段和至少一種治療劑，其中所述抗CEA MAb與粒細胞反應。
2.權利要求1的組合物，其中所述的抗CEAMAb或其片段是MAb的單價形式。
3.權利要求1的組合物，其中所述的抗CEAMAb或其片段是人源化的，其中所述的人源 化的MAb基本上保留了鼠抗CEA MAb的抗CEA結合特異性。
4.權利要求1的組合物，其中所述的抗CEAMAb或其片段是一種嵌合的MAb，其中所述 嵌合的MAb基本上保留了鼠抗CEA MAb的抗CEA結合特異性。
5.權利要求1的組合物，其中所述片段選自Fab'、Fab、Fv和ScFv0
6.權利要求1的組合物，其中所述的治療劑選自裸抗體、細胞毒性劑、藥物、放射性核 素、免疫調節劑、光敏治療劑、免疫偶聯物、激素或其組合，任選地在一種可藥用的載體中進 行配製。
7.權利要求6的組合物，其中所述的組合包含長春新鹼、阿黴素、DTIC和環磷醯胺。
8.權利要求6的組合物，其中所述的治療劑是裸抗體或免疫偶聯物。
9.權利要求8的組合物，其中所述的裸抗體或所述的免疫偶聯物的抗體部分包含一 種人源化的、嵌合的、人的或鼠的單克隆抗體或其片段，所述的單克隆抗體或其片段與選自 EGP-1、EGP-2、MUC-1、MUC-2、MUC-3、MUC-4、MUC-5、KC4、TAG-72、EGFR、HER2/neu、BrE3、Le-Y、 A3、A33、Ep-CAM、AFP、Tn、Thoms on-Friedenreich 抗原、腫瘤壞死抗原、VEGF、細胞粘合素、 纖維結合素和Ga 733的抗原結合。
10.權利要求1的組合物，其中所述的治療劑不是DTIC。
11.一種抗體融合蛋白，所述融合蛋白包含的至少一條臂是條裸的、人源化或嵌合的I 類或II類抗CEA單克隆抗體(MAb)或其抗原結合片段並能與粒細胞反應。
12.權利要求11的抗體融合蛋白，所述融合蛋白進一步包含的至少一條另外的臂是結 合到CEA或結合到不同的抗原但不結合到粒細胞的MAb或其片段。
13.權利要求12的抗體融合蛋白，其中所述抗體片段是scFv或Fab抗體片段。
14.權利要求12的抗體融合蛋白，它是包含一條與NCA50/90反應的臂和兩條僅與 CEA反應的臂的雙特異性的、三價蛋白質。
15.權利要求12的抗體融合蛋白，它是一種包含結合NCA50/90的一條臂和結合III類 CEA表位的第二條臂的雙抗體。
16.權利要求15的抗體融合蛋白，其中NCA-50/90臂是hMN_3抗體或其片段而第二條 結合III類CEA表位的臂是hMN-14抗體或其片段。
17.權利要求16的抗體融合蛋白，其中融合蛋白缺乏阻止細胞因子的激活而從粒細胞 釋放的Fc結構域，或者它具有一個已經進行過修飾以阻止補體固定和ADCC的Fc結構域。
18.權利要求12的抗體融合蛋白，它是一種包含一條hMN-3臂和兩條hMN-14臂的三抗體。
19.權利要求12的抗體融合蛋白，它是一種包含一條hMN-15臂和兩條hMN-14臂的三 抗體。
20.權利要求12的抗體融合蛋白，它包含至少一條hMN-14臂和至少一條MN-6臂。
21.權利要求11的抗體融合蛋白，進一步包含一種與所述融合蛋白綴合的治療劑。
22.權利要求21的抗體融合蛋白，其中所述的治療劑選自細胞因子、幹擾素、集落刺激因子、白介素、GM-CSF或G-CSF。
23.一種裸的、人源化或嵌合的I類或II類抗CEA MAb或其抗原結合片段和至少一種 治療劑以及任選的藥學可接受載體在製備治療癌症的藥物中的用途，其中所述抗CEA MAb 能與粒細胞反應。
24.權利要求23的用途，其中所述癌症是甲狀腺髓樣癌。
25.權利要求23的用途，其中所述的抗CEAMAb或其片段是人源化的，其中所述人源化 的MAb基本上保留了鼠抗CEA MAb的抗CEA結合特異性。
26.權利要求23的用途，其中所述的抗CEAMAb或其片段是嵌合的MAb，其中所述嵌合 的MAb基本上保留了鼠抗CEA MAb的抗CEA結合特異性。
27.權利要求23的用途，其中所述的片段選自F(ab')2、Fab'、Fab、Fv和scFv。
28.權利要求23的用途，其中所述的治療劑選自裸的抗體、細胞毒性劑、藥物、毒素、放 射性核素、免疫調節劑、光敏治療劑、免疫偶聯物和激素。
29.權利要求23的用途，其中所述的治療劑選自與EGP-l、EGP-2、IL-6、MUC-l、MUC-2、 MUC-3、MUC-4、MUC-5、KC4、TAG-72、EGFR、HER2/neu、BrE3、Le-Y, A3、Α33、Ep-CAM、AFP、Τη、 Thomson-Friedenreich抗原、腫瘤壞死抗原、VEGF、細胞粘合素、纖維結合素和Ga 733反應 的人源化的、嵌合的、人的或鼠的單克隆抗體或其片段。
30.權利要求29的用途，其中所述的抗體或其片段是裸的或被偶聯到另一種治療劑上。
31.權利要求23的用途，其中所述的治療劑不是DTIC。
32.權利要求28的用途，其中所述的藥物具有選自抗有絲分裂的、烷化的、抗代謝物 的、抗血管緊張素的、凋亡劑、生物鹼的、C0X-2抑制劑和抗生素的藥學特性。
33.權利要求28的用途，其中所述的藥物選自氮芥、氮丙啶衍生物、烷基磺酸酯、亞硝 基脲、三氮烯、葉酸類似物、蒽環黴素、紫杉烷、C0X-2抑制劑、嘧啶類似物、嘌呤類似物、抗代 謝物、抗生素、酶、表鬼白毒素、鉬配位複合物、長春花生物鹼、取代的脲、甲胼衍生物、腎上 腺皮質抑制劑、拮抗劑、內皮他丁、紫杉醇、喜樹鹼和阿黴素。
34.權利要求28的用途，其中所述毒素選自微生物毒素、植物毒素、動物毒素、蓖麻毒 蛋白、相思豆毒蛋白、α毒素、皂草毒蛋白、核糖核酸酶RNA酶、DNA酶、葡萄球菌腸毒素A、 商陸抗病毒蛋白、白樹毒蛋白、白喉毒素、假單胞菌外毒素和假單胞菌內毒素。
35.權利要求28的用途，其中所述的免疫調節劑選自細胞因子、幹細胞生長因子、淋巴 毒素、造血因子、集落刺激因子(CSF)、幹擾素(IFN)、幹細胞生長因子、紅細胞生成素、血小 板生成素、腫瘤壞死因子(TNF)、白介素(IL)、G-CSF、GM-CSF、幹擾素α、幹擾素β、幹擾素 Y、Sl 因子、IL-U IL-2、IL-3、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18 和 TNF-α。
36.權利要求28的用途，其中所述的放射性核素選自125I、mI、9°Y、88Y、225Ac、mLU、188Re 和 186Re。
37.權利要求28的用途，其中所述藥物選自達卡巴嗪、CPT-11、奧沙利鉬和5-氟尿嘧啶/左亞葉酸。
38.權利要求37的用途，其中在給予藥物之前給予抗CEA抗體或其片段。
39.權利要求38的用途，其中所述抗CEA抗體或其片段使癌症對所述藥物敏化。
40.權利要求23的用途，其中所述治療劑是幹擾素且所述幹擾素提高腫瘤細胞中CEA3表達。
41.權利要求40的用途，其中所述幹擾素在抗CEA抗體或其片段之前給予。
全文摘要
本發明提供了一種包含裸的人源化的、嵌合的和人的抗CEA抗體以及一種治療劑的組合物，它對於治療表達CEA的癌症和其它疾病是有用的，以及提供了利用該組合物進行治療的方法。
文檔編號C07K16/00GK101972478SQ20101050068
公開日2011年2月16日 申請日期2003年10月8日 優先權日2002年10月8日
發明者D·M·高登伯, H·J·漢森 申請人:免疫醫療公司