多分析物免疫分析的製作方法

2023-06-01 01:38:01

專利名稱：多分析物免疫分析的製作方法
多分析物免疫分析相關申請本申請要求於2006年12月12日提交的美國臨時申請No. 60/874315的優先權。上述申請的全部教導在此引入作為參考。
背景技術：
流體樣品、尤其是體內流體樣品中細胞和分析物的定量分析通 常可以為醫生和病人提供重要的診斷和治療信息。定量免疫分析利 用抗原(Ag)-抗體(Ab)反應的特異性來檢測和定量樣品中Ag 或Ab的量。在固相免疫分析中， 一種試劑(例如Ag或Ab)附著 在固體表面上，以便將已結合的試劑或分析物從游離的試劑或分析 物中分離出來。固相暴露於含有分析物的樣品中，該分析物與其Ag 或Ab相結合；通過測定該結合的程度來測定樣品中分析物的濃度。 但是，將結合事件轉換為可測量的信號受到多種限制因素的影響， 包括在固相上微粒運動的約束，這影響了定量免疫分析的特異性與 適用性。此外，相關的目標分析物還可能在分析中互相竟爭，使得 難以正確地評估多於一種的目標分析物的存在。發明內容本發明涉及通過使用固相分析(例如夾心免疫分析或抑制免疫 分析)來測定流體樣品中兩種或更多種目標分析物的量的方法，其 中目標分析物和捕獲試劑分別被作為特異性結合對的一方使用；本 發明還涉及該方法中所使用的試劑盒。在本發明的方法中，檢測到 的一種目標分析物的量的比值與每種目標分析物的比值正相關或負 相關。在某些實施方式中，在確定該比值之前，從檢測到的每種目 標分析物的量和對照的量中減去檢測到的背景的量。18本發明的方法使用固相裝置，例如側向流動固相裝置或毛細流 動裝置。在本發明的代表性方法中，固相裝置包括一個施加位點、 兩個或更多個樣品捕獲區(每個樣品捕荻區與每種目標分析物相對應)和一個對照捕獲區；樣品捕獲區和對照捕獲區可以順序地(相 對於在毛細作用下液體的流動)位於固相裝置上；或者，樣品捕獲 區和對照捕獲區與施加位點之間的距離大約是等距的。樣品捕獲試 劑(例如與目標分析物相結合的試劑，例如目標分析物的抗體)吸 附在每個樣品捕獲區內， 一種樣品捕獲試劑對應一種目標分析物。 對照捕獲試劑(例如與分析物結合微粒相結合的試劑，例如抗免疫 球蛋白抗體)吸附在對照捕獲區內。本發明還提供了樣品收集裝置，該裝置包含以穩定形式被儲存 的微粒群，例如脂質體、膠體金或有機聚合物乳膠微粒。在本發明 的夾心免疫分析中，微粒是由對應於目標分析物的結合試劑(例如 抗體)塗覆的、或由對應於多種目標分析物的結合試劑塗覆的分析 物結合微粒；或者，使用不同的分析物結合微粒群，每群由對應於 一種目標分析物的結合試劑塗覆。在竟爭或抑制分析中，微粒為由 目標分析物塗覆或者由多種目標分析物塗覆的"分析物塗覆的"微 粒；或者使用不同的分析物塗覆的微粒群，每群由一種目標分析物 塗覆。在任一種類型的分析中，都可以使用比色、螢光、發光、化 學發光或其它適合的標記物對微粒進行標記，以便於檢測。在這些方法的一個實施方式中，向樣品收集裝置中引入用於評 估兩種或更多種目標分析物的流體樣品，隨後將緩衝液引入混合的 流體樣品中。在這些方法的另一個實施方式中，向樣品收集裝置中 引入緩衝液，隨後再引入用於評估目標分析物的流體樣品。在這些 方法的第三個實施方式中，流體樣品是通過將固體引入緩衝液中而 形成的，隨後將該流體樣品引入樣品收集裝置中。在這些實施方式 的任一實施方式中，產生了包含微粒的緩沖的、混合的流體樣品。在夾心分析中，樣品中存在的目標分析物與分析物結合微粒相 互作用，結果造成在混合的流體樣品中形成了接觸的分析物結合微1粒。將緩衝的、混合的流體樣品施加到固相裝置的施加位點上。然 後將該固相裝置維持在一定條件下，該條件足以允許流體的毛細作 用將微粒轉運到和穿過樣品捕獲區，以及將微粒轉運到和穿過對照 捕獲區。樣品捕獲試劑與接觸的分析物結合微粒相互作用，結果造 成微粒在樣品捕獲區被捕獲。流體的毛細作用還可以使接觸的分析 物結合微粒流動起來，不僅使其到達和穿過樣品捕獲區，還可以使 其到達和穿過對照捕獲區，在該區內微粒與對照捕獲試劑相結合。 然後確定每個樣品捕獲區和對照捕獲區內捕獲的分析物結合微粒的 量。然後再確定流體樣品中目標分析物的量。例如，流體樣品中目 標分析物的量可以被確定為1 )在對應於目標分析物的樣品捕獲區內被捕獲的分析物結合微粒的量與2)在所有的樣品捕獲區內和對照捕 獲區內的分析物結合微粒的總量之間的比值。在另 一 個實施方式中， 若需要，在確定比值之前，在每個樣品捕獲區和對照捕獲區內檢測 到的微粒的量中分別減去檢測到的背景的量。在竟爭或抑制型分析中，將緩衝的、混合的流體樣品施加在固 相裝置的施加位點上。然後將固相裝置維持在一定條件下，該條件 足以允許流體的毛細作用將分析物塗覆的微粒轉運到和穿過樣品捕 獲區，以及將分析物塗覆的微粒轉運到或者穿過對照捕獲區，在該 區內分析物塗覆的微粒與對照捕獲試劑相結合。樣品捕獲試劑與分 析物塗覆的微粒相互作用；樣品捕獲試劑與分析物塗覆的微粒的相 互作用導致了分析物塗覆的微粒在樣品捕獲區內被捕獲。由於在樣 品捕獲區內存在分析物塗覆的微粒和樣品中分析物(如果存在的話) 之間對於樣品捕獲試劑中結合位點的竟爭，在樣品捕獲區內被捕荻 的分析物塗覆的微粒的量與樣品中分析物的量成反比。然後確定在 樣品捕獲區和對照捕獲區內被捕獲的分析物塗覆的微粒的量。然後再確定在流體樣品中的目標分析物的量。例如，在流體樣 品中的目標分析物的量與1 )在與目標分析物相對應的樣品捕獲區內 被捕獲的分析物塗覆的微粒的量和2 )在所有的樣品捕獲區和對照捕獲區內的分析物塗覆的微粒的總量之間的比值負相關。在另 一 實施 方式中，若需要，在確定比值之前，在每個樣品捕獲區和對照捕獲 區內檢測到的微粒的量分別減去檢測到的背景的量。
具體實施方式
本發明的示例實施方式描述如下。本文引用的所有專利、公開 申請和參考文獻的教導在此完整引入作為參考。本發明涉及通過使用固相分析來定量測定兩種或更多種目標分 析物的量的方法，以及所使用的試劑盒。本發明的固相分析是側向 流動固相分析或毛細流動固相分一斤。此處所使用的分析是指用於確定分析物的存在、缺失或量的樣 品分析的體外過程。本發明的分析使用至少兩種目標分析物以及與 其相對應的分析物結合試劑。每種目標分析物及其分析物結合試劑 是特異性結合對的成員，其中，結合對的第一個成員(例如分析物) 特異性地與第二個成員(例如結合試劑)反應。結合對中的一個或 兩個成員可以是抗體。例如，結合對的第一個成員(例如目標分析 物)可以是抗體，結合對的第二個成員(例如結合試劑)可以是抗免疫球蛋白抗體；或者，結合對的第一個成員(例如分析物)可以 是抗原，結合對的第二個成員(例如結合試劑)可以是抗體。在一個實施方式中，該分析是使用抗體作為其程序組分的免疫 分析。在一個優選的實施方式中，免疫分析是測試分析物的夾心分 析，其中，待評估其分析物的存在、缺失或量的流體樣品與塗覆有 分析物結合試劑(例如分析物的抗體)的微粒相接觸，將所得到的 混合物施加到固相上，隨後在毛細作用下穿過固相移動。在固相捕 獲區內檢測到分析物和分析物結合試劑塗覆的微粒之間的相互作用 顯示為陽性結果，在捕獲區內分析物結合試劑塗覆的微粒的量與流 體樣品中分析物的量相關。在另一個優選實施方式中，免疫分析是 測試分析物的抑制或竟爭分析，其中，待評估其分析物的存在、缺 失或量的流體測試樣品與塗覆有分析物的微粒相接觸，將所得到的，隨後在毛細作用下穿過固相移動。在固相捕 獲區內檢測到分析物結合試劑和分析物塗覆的微粒之間的相互作用 顯示為陽性結果，在捕獲區內分析物塗覆的微粒的量與流體樣品中 分析物的量負相關。在本發明的分析的其它實施方式中，特異性結合對中的分析物和結合試劑都不是抗體例如，結合對的第一個成員可以是配體， 結合對的第二個成員可以是受體；或者，結合對的第一個成員可以 是凝集素，結合對的第二個成員可以是糖。在另一個實施方式中， 結合對的第一個成員可以是核酸(例如DNA、 RNA)，結合對的第 二個成員可以是與結合對的第一個成員特異性雜交的核酸。此處所 使用的特異性雜交是指第一個核酸與第二個核酸雜交的能力，並且 雜交的方式為第一個核酸除了與第二個核酸雜交之外不與其它任何 核酸雜交(例如，當與進行雜交的樣品中的其它任何核酸相比，第 一個核酸與第二個核酸具有更高的相似度時)。雜交的"嚴格性條件" 是一個技術術語，指的是允許特定的核酸與第二個核酸雜交的溫育 和洗滌條件，例如溫度和緩衝液濃度條件；第一個核酸與第二個核 酸可以是完全(即100% )互補的，或者第一個核酸和第二個核酸可 以共有一定程度的、低於完全互補的互補性(例如70% 、 75%、 80 %、 85%、 90%、 95%)。例如，可以使用某些高嚴格性條件來區 別完全互補的核酸和那些低互補性的核酸。用於核酸雜交的"高嚴格 性條件"、"中等嚴格性條件"和"低嚴格性條件"在Cw/re^PraMco/s Z" Mo/ecw/ar Wo/ogy ( Ausubel, F. M.等人,CWrewZ /VofocoAy Mo/ecw/『5/o/ogy， John Wiley & Sons, (1998)，其全部教導在此引 入作為參考)的2.10.1~2.10.16頁和6.3.1~6.3.6頁中已做解釋。決定 雜交嚴格性的確切條件不僅取決於離子強度(例如0.2xSSC、 O.lxSSC)、溫度(例如室溫、42°C、 68。C)，以及去穩定試劑(例 如甲醯胺)或變性試劑(例如SDS)的濃度，還取決於例如核酸序 列的長度、鹼基組成、雜交序列間的錯配百分比和在其它不同序列 中出現該序列子集的頻率這些因素。因此，在保持兩個核酸分子的22相同性或相似性的程度相似的同時，可以通過改變一個或多個這些參數來確定等效條件。無論分析物及其結合試劑的組成如何，這兩種成分形成了特異性的結合對，其中，第一個成員特異性地與第二個成員反應。結合對成員之間的特異性相互作用是指結合對的第一個成員優先與結合 對的第二個成員相結合或者以其它方式相互作用，優選地，不與分析中的其它化合物相結合。此處所使用的術語分析物或目標分析物是指上述結合對中的第 一個成員。分析物是其量待測的分子或化合物。分析物的形式可以是例如乾物質(例如粉末、顆粒；孢子；或其它微粒)的固體，或 者也可以是流體形式(例如上述固體溶於或懸浮於流體中，或者其 它液體樣品)。分析物的例子包括細菌、孢子、例如激素或酶的蛋 白質、糖蛋白、肽、小分子、多糖、抗體、核酸、藥物、毒素(例 如環境毒素)、病毒或病毒微粒、細胞壁的部分和其它化合物。在 優選實施方式中，每種分析物為"免疫原性的，，，表示可以對該分析 物或與載體結合的該分析物(例如，半抗原-載體偶聯物，可以產 生針對半抗原的抗體)產生抗體(如下所述)。在一些代表性的實 施方式中，第一個目標分析物可以是曱型流感病毒，第二個目標分 析物可以是乙型流感病毒。目標分析物可以在液體樣品中；或者， 目標分析物可以在幹(非流體)樣品(例如固體，例如顆粒樣品、 粉末樣品，或土壤樣品)中。每種目標分析物是上述結合對中的第 一個成員，即每種目標分析物特異性地與結合對中的第二個成員反 應。在本發明的方法中，評估流體樣品中兩種或更多種目標分析物 的存在、缺失或量。流體可以是將固相材料溼潤的流體；其支持每 種目標分析物與其分析物結合試劑之間的反應，例如抗體/抗原反應 (即不幹擾抗體/抗原相互作用)；其具有足以允許流體通過毛細作 用而移動的低粘性。在一個優選實施方式中，流體是水溶液(例如 體液)。流體樣品可以是含有相對少的成分的流體，例如含有目標分析物的水溶液；或者，流體樣品可以是含有多種成分的流體，例 如複合環境樣品(例如汙水、廢水、地下水，或其它水樣品)，或 者是複合生物流體(例如全血、血漿、血清、尿液、腦脊髓液、唾 液、精液、玻璃狀液、滑液，或其它生物流體)。在一個流體是生 物流體的優選實施方式中，流體是全血、血漿或血清。在另一個流 體是生物流體的實施方式中，流體是黏膜液。若需要，可以將流體 樣品稀釋；例如，如果複合生物流體被作為流體樣品使用，則該流 體可以使用溶液(例如水溶液)進行稀釋。如果一種目標分析物不在溶液中(例如目標分析物在上述的幹 或固體樣品中)，可以先將其提取、懸浮或溶解到流體樣品中。例 如，如果目標分析物是核酸，可以將其從目標細胞中提取到溶液(例 如水溶液，例如下述的緩沖液)中；在另一個例子中，如果目標分 析物是粉末或顆粒物質(例如粉末、顆粒、土壤樣品或孢子)，可 以將其懸浮或溶解到溶液(例如水溶液，例如下述的緩沖液)中， 例如可以先得到乾物質樣品(例如使用藥籤或其它工具)，然後再 把乾物質樣品置於溶液中。因此，流體樣品不僅指用於評估目標分 析物的液體樣品，還包括被提取、懸浮或溶解固體物質(用於評估 目標分析物)的流體樣品。此處所使用的分析物結合試劑是指上述結合對中的第二個成 員。每種分析物結合試劑都是特異性地與目標分析物(結合對中的 第一個成員)相結合的化合物，例如抗體、半抗原或藥物偶聯物、 受體，或另一個結合配偶體。在優選實施方式中，分析物結合試劑 是針對其目標分析物的抗體。夾心分析本發明的夾心分析可以使用固相裝置。在一個實施方式中，固 相裝置是側向流動固相裝置。在另一個實施方式中，固相裝置是毛 細流動固相裝置。側向流動固相裝置可以是被i殳計用於側向流動分析的任何固相裝置，例如RAMpTM裝置(Response Biomedical,伯納比，不列顛哥 倫比亞省，加拿大；例如請見美國專利6509196、 7175992中描述的 裝置)。通常，側向流動固相裝置包含一個測試樣品將會流過的膜。 該膜可以由具有下述特性的物質製成足以允許流體的毛細作用沿 著膜表面和穿過膜內部作用的多孔性；允許塗覆的微粒(例如下述 分析物結合微粒)或微粒和目標分析物的複合物(例如下述接觸的 分析物結合微粒)通過毛細作用移動的能力(即不能阻斷微粒或微 粒和目標分析物的複合物)；以及可被包含分析物的流體溼潤的能 力(例如對於水流體的親水性、對於有機溶液的疏水性)。通過某 些方法可以改變膜的疏水性，以使膜具有親水性而用於水流體，這 些方法例如是在美國專利No. 4340428或美國專利No. 4618533中描 述的那些方法，其中描述了將疏水表面轉變為親水表面。膜物質的 例子包括纖維素、硝酸纖維素、醋酸纖維素、玻璃纖維、尼龍、 聚合電解質離子交換膜、丙烯酸共聚物/尼龍和聚醚碸。在優選實施 方式中，膜是由硝酸纖維素製成的(例如由Mylar做襯背(backing) 的硝酸纖維素膜)。側向流動固相裝置還可以任選地包括其它部件， 包括樣品墊、芯吸墊、內部標準組分、對照組分或其它部件。毛細流動固相裝置可以是被設計用於毛細流動分析的任何固相 裝置，例如8^3^6丁1^§6@免疫分析產品(BioSiteInc.,聖地牙哥， 加州)。通常，毛細流動固相裝置包含一個測試樣品將會流過的毛 糹田通道。無論使用側向流動固相裝置還是毛細流動固相裝置，固相裝置 都包括一個施加位點，兩個或更多個樣品捕獲區和一個對照捕獲區。 施加位點(或施加區域)是膜上或毛細通道內可以施加流體的位置。 還可以任選地使用施加墊；施加墊設置於固相上，緊挨著或者覆蓋 著施加位點。施加墊可以由吸收性物質製成，當向施力口墊施力口流體 樣品時，施加墊可以將流體樣品傳遞到月莫上或毛細通道內的施加位 點上。代表性的物質包括纖維素、硝酸纖維素、醋酸纖維素、尼龍、 聚合電解質離子交換膜、丙烯酸共聚物/尼龍、聚醚碸或玻璃纖維。在一個實施方式中，施加墊是玻璃纖維墊。如果存在芯吸墊的話， 芯吸墊同樣可以由這些吸收性物質製成。樣品捕獲區是指在膜上或毛細通道中吸附樣品捕獲試劑的位點 (例如塗覆在膜上和/或透過膜，或者塗覆在毛細通道的表面上)。 此處所使用的術語"吸附"是指通過非共價相互作用，試劑被固定或 者被粘附，與共價連接相反(共價連接是採用化學手段產生兩個相 連分子之間共用電子的不可逆的化學鍵)。還可能發生吸附在膜上或者毛糹田通道內的i式劑的增量運動(incremental movement)(例i口 解吸附作用)，但是對於本發明的分析所產生的影響可以忽略不計。樣品捕獲試劑是用於特定目標分析物的分析物結合試劑，例如 上述那些試劑。樣品捕獲試劑不需要是與所述微粒上的分析物結合 試劑相同的分析物結合試劑；但是，每種樣品捕獲試劑同樣與其目 標分析物形成結合對，因為它特異性地和優先地與其目標分析物相 結合。在優選實施方式中，樣品捕獲試劑是針對其目標分析物的抗 體；它可以針對那些同與用作塗覆在微粒上的分析物結合試劑的抗 體相結合的表位相同的分析物表位，或者針對不同的分析物表位。 由於存在多於一種的目標分析物，因此也會存在多於 一個的樣品捕 獲區——每個樣品捕獲區與各自的目標分析物相對應。每個樣品捕 獲區上吸附有至少一種樣品捕獲試劑，其中，樣品捕獲試劑是用於 特定的(相對應的)目標分析物的分析物結合試劑。若需要，每個 樣品捕獲區可以存在多於 一 種的樣品捕獲試劑，條件是在特定樣品 捕獲區內的所有樣品捕獲試劑都以相同的目標分析物為目標(儘管 不一定是該目標分析物的相同的表位)。若需要，可以在每個樣品 捕獲區使用多於一種的樣品捕獲試劑。該裝置還包括被吸附在對照捕獲區的對照捕獲試劑。對照捕獲 試劑是與分析物結合微粒反應、但是不與任何待測分析物相互作用 的試劑例如，對照捕獲試劑可以與分析物結合試劑塗覆的微粒上 的分析物結合試劑反應；可以與微粒上的另一種物質反應；或者與 微粒本身反應。例如，如果分析物結合試劑是抗體的話，對照捕獲試劑可以是抗免疫球蛋白抗體。在優選實施方式中，每種分析物結 合試劑是一種抗體，對照捕獲試劑是抗免疫球蛋白抗體。在對照捕 獲區內，對照捕獲試劑吸附於固相裝置(塗覆在膜上和/或滲入膜內， 或者塗覆在毛細通道內)上。在某些實施方式中，樣品捕獲區在固相裝置上按照液體通過毛 細作用流動的方向順序排列，並且接近施加位點。在另外一些實施 方式中，不同的樣品捕獲區與施加位點之間的距離大約是等距的(例 如彼此平行、放射狀分布，或者以其它方式設置使得相對於液體的 流動，樣品捕獲區接近施加位點)。若需要，與靠近施加位點相比， 樣品捕獲區可以相對更靠近固相裝置的遠端。在進一步的實施方式中，樣品捕獲區互相交疊或者佔用相同的區域；在這樣的實施方式 中，區別地標記所使用的微粒(如下所述的)(即採用如此方式進 行標記，以使得微粒可以分別被確定，例如通過不同的光密度、不 同的化學發光標誌，和/或不同的螢光標誌)。在樣品捕獲區不互相交疊或者不佔用相同區域的實施方式中， 在樣品捕獲區的順序排列中，每個區之間的距離是不同的；所要求 的就是其距離足以確保這些區不互相交疊。在優選實施方式中，正 如下面所詳細描述的，順序區之間留有一定距離，使得不同區之間 的背景水平也可以被確定。每個樣品捕獲區與相鄰的樣品捕獲區之 間的距離大約是等距的。在一個具體實施方式
中，"大約等距"是指 使用標準生產儀器測到的儘可能接近的距離例如如果生產儀器分 辨率是毫米，大約等距是指在1 mm以內。或者，在另一個具體實施 方式中，大約等距的解析度可以與從第 一 樣品捕獲區的中心到第二 捕獲區的中心的距離相關例如，從第一樣品捕獲區的中心到第二 樣品捕獲區的中心的距離與從第二樣品捕獲區的中心到第三樣品捕 獲區的中心的距離的差距是在從施加位點的中心到樣品捕獲區的中 心的距離長度(路徑長度)的10 %以內，優選7 %以內，優選5 %以 內，更優選4 %以內，更優選3 %以內，再更優選2 %以內，再更優 選1 %以內。樣品捕獲區和對照捕獲區與施加位點分開一定的距離，該距離 長到足以將毛細前沿的速度延緩到 一 定的速度，該速度慢到當毛細 前沿到達第一樣品捕獲區時足以捕獲微粒。此外，該距離還必須足 夠長，以使得總的遷移(毛細前沿穿過整個固相裝置的移動)時間 長到足夠允許流體樣品中游離的分析物與分析物結合微粒相結合。 固相裝置上的部分間的最佳距離可以使用常規實驗來進行確定和調 節。定量分析還使用樣品收集裝置。此處所使用的樣品收集裝置是 指可以用於收集流體樣品、或者存放或儲藏所收集的流體樣品的裝 置。樣品收集裝置可以是下述包含分析物結合微粒的任何裝置，可 以是可以向其添加測量過體積的流體樣品的任何裝置。代表性的樣 品收集裝置包括樣品管、試管、小瓶、吸液管或吸液管端頭，或注 射器。在優選實施方式中，樣品收集裝置是吸液管或吸液管端頭。在一個實施方式中，樣品收集裝置包括由用於每種目標分析物的分析物結合試劑塗覆的分析物結合微粒群例如，對應第一目標 分析物的第一分析物結合試劑、對應第二目標分析物的第二分析物 結合試劑等等，這樣存在對應於每種目標分析物的分析物結合試劑。 或者，樣品收集裝置可以包括對應每種分析物結合試劑的分析物結 合微粒群，即，對應第一目標分析物的分析物結合微粒群、對應第 二目標分析物的分析物結合微粒群等等，這樣存在對應於每種目標 分析物的分析物結合微粒群。若需要，也可以使用不同類型的分析 物結合微粒群的組合。取決於微粒的大小和組成、固相裝置的組成和分析的靈敏度水 平，微粒群也隨之變化。典型的群大小的範圍為大約Ixl03~lxl09 個，但是根據需要也可以使用更少或者更多的微粒。在優選實施方 式中，該群包括大約2xlS個微粒。若需要，還可以相應地增加該群 的量(例如如果評估三種目標分析物的話，可以使用三倍量的微粒)。分析物結合微粒是可以由對應於每種目標分析物的分析物結合 試劑(結合對的第二個成員)塗覆的微粒。在優選實施方式中，分析物結合微粒是脂質體、膠體金、有機聚合物乳膠微粒、無機螢光 微粒或磷光微粒。在特別優選的實施方式中，微粒是聚苯乙烯乳膠珠子，例如不含表面活性劑的超活性均 一 乙醛/硫酸鹽乳膠(Superactive Uniform Aldehyde/Sulfate Latexes ) ( Interfacial Dynamics Corp.,波特蘭，OR))。微粒的大小與膜的多孔性或毛細通道的尺寸相關，還與目標分 析物的大小相關(例如對於顆粒分析物)微粒必須小到足以在流 體的毛細作用下沿著膜或者穿過毛細通道進行轉運，對於下述接觸 的分析物結合微粒的複合物來說，微粒還必須小到足以在毛細作用 下沿著膜或者穿過毛細通道進行轉運(對於固體，例如顆粒分析物)。 微粒可以被標記以便於檢測。標記微粒的方式應該不會顯著地影響 微粒的物理性質，例如將微粒內部標記(即，標記包含在微粒內部， 例如在脂質體或聚苯乙烯乳膠珠子內)。代表性的標記包括發光標 記、化學發光標記、磷光標記、酶聯標記、化學標記(例如電活性 試劑(例如亞鐵氰化物))和比色標記(例如染料或螢光標記)。 在一個實施方式中，使用螢光標記。在另一個實施方式中，使用磷 光微粒，特別是"上轉(up-converting )"磷光微粒，例如那些在美國 專利No. 5043265中所述的樣i粒。例如，如果樣品捕獲區是分開的，相同類型的標記就可以被用於每種分析物結合微粒群(例如，用於 第一目標分析物的微粒群和用於第二目標分析物的微粒群)。或者，還可以-使用不同類型的標記(區別性的標記)，例如，如果樣品捕 獲區互相疊加或者佔用相同的區域時。微粒由分析物結合試劑塗覆，該分析物結合試劑是對應每種目 標分析物的結合對的第二個成員(例如由多於一種類型的分析物結 合試劑塗覆的微粒；或者不同的微粒群，每個群由對應其分析物的 一種類型的分析物結合試劑塗覆)。如上所述，分析物結合試劑(結 合對的第二個成員)特異性地和優先與其目標分析物(結合對的第 一個成員)相結合。代表性的分析物結合試劑包括抗體(或其片段)、29半抗原、藥物偶聯物、受體或其它結合配偶體。在一個優選實施方 式中，分析物結合試劑是目標分析物的抗體。抗體可以是單克隆抗 體或多克隆抗體。此處所使用的術語"抗體"還指足以與目標分析物 相結合的抗體片段。或者，在另一個實施方式中，還可以使用與目 標分析物特異性結合的分子，例如包含分析物結合位點的改造的
(engineered )蛋白質(Holliger, P.和H. R. Hoogenbloom， 7Vew^s zw &c/mo/og7 13:7 9 (1995); Chamow, S. M.和A. Ashkenazi， 7Ve油 Ao&c/mo/og;; 14:52 60:1996)。在另一個實施方式中，如果目標 分析物是藥物的話，半抗原或其它藥物偶聯物可以作為分析物結合 試劑使用。或者，在進一步的實施方式中，可以使用與分析物相結 合的受體(例如，如果目標分析物是配體的話)。如果分析物是具 有已知特異性的抗體的話，微粒可以由分析物抗體所針對的抗原塗 覆，或者可以由針對分析物-抗體的抗體塗覆。此外，正如此處所 描述的，由於分析物和分析物結合試劑可以形成結合對，被描述為
些被描述為代表性分析物結合試劑的化合物和分子也同樣可以作為 分析物使用。
樣品收集裝置內所包含的分析物結合微粒以 一 種穩定的形式被 儲存在樣品收集裝置內。此處所使用的術語"穩定的形式"是指在儲 存過程中，微粒的化學組成或物理形態不發生顯著改變的形式。穩 定的形式可以是液體、凝膠或固體形式。在優選實施方式中，樣品 收集裝置內所包含的分析物結合微粒是被蒸發乾燥的、冷凍乾燥的 和/或真空乾燥的。
在特別優選的實施方式中，樣品收集裝置是含真空乾燥的分析 物結合微粒的吸液管端頭。
為了進行分析，可以使用上述用於評估目標分析物的存在的流 體樣品。在一個實施方式中，流體樣品-陂引入(吸入、倒入或者以 其它方式放入)樣品收集裝置內。例如，在一個實施方式中，流體 樣品被吸至帶有吸液管端頭的樣品收集裝置內。將流體樣品引入樣品收集裝置內會使流體樣品與分析物結合微粒相混合，形成"混合的 流體樣品"。如果分析物結合微粒是被蒸發、冷凍，或真空千燥的， 將流體樣品？ 1入樣品收集裝置內會使分析物結合微粒再水合和懸浮 於流體樣品中。緩衝液(例如用於稀釋的)也被引入到混合的流體 樣品中，形成"緩沖的、混合的流體樣品"。緩沖的、混合的流體樣 品可以通過將混合的流體樣品分配至含緩沖液的"緩沖液容器"(例 如試管)，或者通過在引入流體樣品之前將緩衝液引入到樣品收集 裝置內而形成。或者，如果目標分析物是固體(例如上述粉末、顆
粒；孢子；或其它微粒)的話，上述流體樣品可以通過將固體引入 到緩衝液容器中而製備；在這個實施方式中，緩沖的、混合的流體 樣品是通過將流體樣品(包含緩沖液)引入到樣品收集裝置內而形 成的。在另一個實施方式中，將緩沖液引入到樣品收集裝置中，然 後再將流體樣品引入到樣品收集裝置中。
緩沖液可以是用於支持目標分析物和分析物結合試劑之間的反 應的水性流體(例如不幹擾抗原/抗體相互作用)；其粘性低到足以 允許流體在毛細作用下移動。在一個實施方式中，緩衝液包含一種 或多種下述組分緩衝試劑(例如磷酸鹽)、鹽(例如NaCl)、蛋 白質穩定劑(例如BSA、酪蛋白、血清)、和/或例如非離子去汙劑 的去汙劑或表面活性劑(例如一種或多種通常可以在表面活性劑工 具試劑盒中獲得的下述試劑NINATE411、 ZonylFSN100、氣溶膠 OT 100 % 、 GEROPON T 77、 BIO TERGE AS 40、 STANDAPOL ES 1 、 Tetronic 1307、 Surfnyol 465、 Surfnyol 485、 Surfynol 104PG 50、 IGEPALCA210、 TRITON X 45、 TRITON X 100、 TRITON X305、 SIL WET L7600、 RHODASURF ON 870、 Cremophor EL、 TWEEN 20、 TWEEN80、 BRIJ35、 CHEMALLA9、 Pluronic L64、 SURFACTANT 10G、 SPAN 60、 CREL)。任選地，若需要，緩沖液可以包含增稠 劑。緩沖液的這些組分可以商購獲得。代表性的緩衝液包括，例如 鹽水或50mMTrisHCl， pH 7.2。或者，可以使用水來代替緩沖溶液； 此處所使用的術語"緩衝液"是指緩衝溶液或者水。在另 一 實施方式中，緩衝液的組分被凍幹，並且包含在樣品收集裝置中；在該實施 方式中，本發明的方法使用水來代替緩沖溶液。
為了將分析物結合微粒進一步分散到流體樣品中，若需要，可 以攪動(例如旋震、搖動、吸上吸下等等)已引入流體樣品和緩衝 液的樣品收集裝置，或者已引入混合的流體樣品的緩衝液容器。
在優選實施方式中，樣品收集裝置包括其端頭內含有真空乾燥 的分析物結合微粒的吸液管端頭；流體樣品被吸入到吸液管中，從 而將乾燥的分析物結合微粒再水合，形成了混合的流體樣品。在特 別優選的實施方式中，混合的流體樣品被引入到緩沖液容器中，形 成了緩沖的、混合的流體樣品；使用樣品收集裝置將緩衝液容器中 緩衝的、混合的流體樣品吸上吸下，從而進一步分散分析物結合微粒。
如果緩衝的、混合的流體樣品中存在目標分析物，該分析物與 其分析物結合微粒之間會發生結合。分析物與分析物結合微粒的"結 合，，指示塗覆於微粒上的分析物結合試劑與其目標分析物相互作用 (例如結合)。被維持在(溫育在)足以使流體中的分析物(如果 存在的話)與吸附在接觸區中的分析物結合微粒相結合的條件下的 分析物結合微粒在此被稱為"接觸的分析物結合微粒"。接觸的分析 物結合微粒可以帶有或者不帶有與分析物結合試劑相結合的分析 物，這取決於每種目標分析物是否存在於流體樣品中，以及分析物 是否已經與分析物結合微粒上的分析物結合試劑相結合。由於分析 物結合微粒上有許多分析物結合位點，因此與分析物結合微粒相結 合的分析物的存在狀態和濃度是不同的；與分析物結合微粒相結合 的分析物的濃度隨著流體樣品中存在的分析物的量成比例增加，在 相應的樣品捕獲區中捕獲分析物結合微粒的可能性(如下所述)也 同樣隨著與分析物結合微粒相結合的分析物的量的增加而增加。因 此，接觸的分析物結合微粒群可以包括含有不同量的與分析物結合 試劑相結合的分析物的微粒，也可以包括不含與分析物結合試劑相 結合的分析物的微粒(正如最初的那些不含與分析物結合試劑相結合的分析物的分析物結合微粒)。此外，結合的程度隨著條件中時
間因素的增加而增加雖然大部分的結合發生在一分鐘之內(例如 60秒，優選小於60秒(例如45秒、30秒或更短))，但是額外的 溫育(例如多於1分鐘(2分鐘、5分鐘、IO分鐘、15分鐘)會導 致額外的結合。如果分析物結合微粒多於一群(例如，用於不同目 標分析物的單獨的群)，被維持在(溫育在)足以使流體中的分析 物(如果存在的話)與分析物結合微粒相結合的條件下的分析物結 合微粒在此被稱為對於每種目標分析物的"接觸的第 一 分析物結合 微粒"、"接觸的第二分析物結合微粒"等，並且這些分析物結合微粒 通稱為接觸的分析物結合微粒。
將緩衝的、混合的流體樣品施加在固相裝置的施加位點上，或 者如果有施加墊的話，也可以施加在施加墊上。當固相裝置與緩衝 的、混合的流體樣品相接觸後，將固相裝置維持在允許流體通過毛 細作用移動到和穿過該裝置的條件下。接觸的分析物結合微粒由於 流體的毛細作用而從緩衝的、混合的流體樣品中移動出來。將固相 裝置維持在一定條件下(例如足夠長的時間和足夠大的流體體積)， 該條件允許接觸的分析物結合微粒在毛細作用下移動到和穿過樣品 捕獲區，以及移動到和穿過對照捕獲區，任選地，還允許隨後移動 到捕獲區之外(例如進入芯吸墊)，由此可以從捕獲區中除去任何 未結合的微粒。
通過接觸的分析物結合微粒與對應每種目標分析物的樣品捕獲 區內的樣品捕獲試劑相結合，以及通過部分接觸的分析物結合微粒 與對照捕獲區內的對照捕獲試劑相結合，捕獲部分接觸的分析物結 合微粒的移動。在一個優選實施方式中，分析物結合試劑是目標抗 原的抗體，對照捕獲試劑可以是針對一些物種的免疫球蛋白的抗體 (該分析物結合試劑來源於該物種)。在這個實施方式中，免疫球 蛋白的抗體與樣品中的其它組分應該是非交叉反應的例如，如果 ;f全測人體樣品，可以4吏用不與人免疫球蛋白反應的抗體作為對照捕 獲試劑。通過與在接觸的分析物結合微粒上的分析物結合試劑相結合的 目標分析物結合，樣品捕獲試劑與接觸的分析物結合微粒相結合。 此處所使用的術語"樣品-試劑微粒複合物"是指樣品捕獲試劑和 接觸的分析物結合微粒的複合物。由於通過分析物與樣品捕獲區內 的樣品捕獲試劑相互作用而實現的接觸的分析物結合微粒的捕獲， 接觸的分析物結合微粒在樣品捕獲區被捕獲，形成樣品-試劑_微 粒複合物。每個樣品捕獲區中可以捕獲到樣品-試劑-微粒複合物， 這取決於具體每個目標分析物是否存在於樣品中，以及是否已經與 接觸的分析物結合微粒上的其分析物結合試劑相結合。
通過與接觸的分析物結合微粒上的分析物結合試劑相結合，對 照捕獲試劑與接觸的分析物結合微粒相結合。此處所使用的術語"對 照_試劑-微粒複合物"是指對照捕獲試劑和接觸的分析物結合微 粒的複合物。由於通過分析物結合微粒與對照捕獲區中的對照捕獲 試劑相互作用而實現的接觸的分析物結合微粒的捕獲，接觸的分析 物結合微粒在對照捕獲區中被捕獲，形成對照-試劑-微粒複合物。 正如上面所提到的那樣，對照捕獲試劑與分析物結合微粒相互作用 (例如，與分析物結合試劑塗覆的微粒上的分析物結合試劑，或者 微粒上的另外一種物質，或者與微粒本身相互作用)，但是不與測 試中所使用的任何分析物(存在針對這些分析物的樣品捕獲區)本 身相互作用。
通常，毛細作用隨後可以將任何沒有在樣品捕獲區或對照捕獲 區中被捕獲的接觸的分析物結合微粒移動到這些區之外，從而除去 任何沒有被捕獲的微粒。在優選實施方式中，流體將任何沒有被捕 獲的接觸的分析物結合微粒移動到在捕獲區之後的芯吸墊上。
若需要，還可以使用第二洗滌步驟。在緩衝的、混合的流體樣 品已經浸透膜、穿過毛細管或者(如果有施加墊的話)浸透施加墊 之後，緩沖液(例如上述緩衝液)可以糹皮施加在施加位點上。第二 洗滌步驟可以在之後的任何時候使用，只要該步驟不稀釋緩沖的、 混合的流體樣品即可。如下所述，當檢測分析物結合微粒的時候，第二洗滌步驟可以降低背景信號
獻,4+對公斬物處入矜趙Ji
檢測在每個樣品捕獲區中捕獲的分析物結合微粒(樣品-試劑-微 粒複合物)的量。在優選實施方式中，通過光學方法來檢測該量， 例如通過測定分析物結合微粒的標記的螢光量。
在特別優選的實施方式中，對從第 一 樣品捕獲區的上遊到對照 捕獲區之後的整個區域進行掃描，使得沿著液體流動的方向進行幾 百次的測定。通過這種方式，可以確定在每個區內、區之間、初始 區之前以及對照區之後的結合的量，其解析度足以測定這些區域中 的每一個區內的標記的量。如下所述，區之間的結合的量可以用於
校正背景信號。
或者，可以通過使用電導率或電介質(電容)來檢測樣品-試
劑-微粒複合物的量。或者，可以使用如Hayes等人(爿"a(y"ca/ C7^m. 66: 1860 - 1856 ( 1994 ))所述的^皮釋ii的電活性試劑如銦、鉍、 鎵或碲離子的電化學檢測，或者使用如Roberts和Durst (v4"a(y"ca/ C&m.67: 482 - 491 ( 1995 )所建議的亞鐵氰化物的電化學檢測。例 如，如果使用脂質體，可以通過在捕獲區加入一滴去汙劑而釋放包 封在脂質體中的亞鐵氰化物，釋放的亞鐵氰化物通過電化學法檢測 (Roberts和Durst，同上)。如果使用螯合劑-蛋白質偶聯物螯合金 屬離子，在捕獲區加入一滴酸可以釋放該離子，並且允許通過陽極 溶出伏安法進行定量(Hayes等人，同上)。同樣，在對照捕獲區(在 此也被稱作"對照，，)內捕獲的分析物結合微粒的量可以通過與檢測 樣品捕獲區中分析物結合微粒的量的相同的方式來進行檢測。
然後確定對於每種目標分析物的校正的分析物結合微粒的量。 校正的分析物結合微粒的量是基於在對應於目標分析物的樣品捕獲 區內、其它樣品捕獲區內以及對照捕獲區內被捕獲的分析物結合微 粒的量。例如，在一個實施方式中，對應第一種目標分析物的校正 的分析物結合微粒的量被確定為比值(R),該比值(R)為在第一 樣品捕獲區內存在的分析物結合微粒的量與在第 一 樣品捕獲區內存在的分析物結合微粒的量加上在其它每個樣品捕獲區和對照捕獲區 內存在的量的總和的比值。例如，在一個實施方式中，如果存在兩 種目標分析物，對應第一種目標分析物的校正的分析物結合微粒的
量是通過下述比值來確定的在第一樣品捕獲區內存在的分析物結 合微粒的量與總和(在第 一樣品捕獲區內存在的分析物結合微粒的 量，加上在第二樣品捕獲區內存在的分析物結合微粒的量，加上在 對照捕獲區內存在的分析物結合微粒的量)的比值。同樣，如果有 兩種目標分析物，對應第二種目標分析物的校正的分析物結合微粒 的量是通過下述比值來確定的在第二樣品捕獲區內存在的分析物 結合微粒的量與總和(在第 一樣品捕獲區內存在的分析物結合微粒 的量，加上在第二樣品捕獲區內存在的分析物結合微粒的量，加上 在對照捕獲區內存在的分析物結合微粒的量)的比值。
標分析物的存在與否就可以通過使用適當的對比、通過該分析物的 校正的分析物結合微粒的量來進行確定。在一個實施方式中，將每 種目標分析物的校正的分析物結合微粒的量與預先由標準曲線確定 的閾值進行比較，該標準曲線包含校正的結合微粒的量與已知的分 析物濃度之間的確立的關係；等於或者高於閾值的校正的分析物結 合微粒的量指示陰性結果(即指示測試樣品中存在該目標分析物)， 而低於閾值的校正的分析物結合微粒的量指示陰性結果(即指示測 試樣品中不存在該目標分析物)。
量，目標分析物的量就可以通過使用適當的計算、通過該分析物的 校正的分析物結合微粒的量來進行確定。例如，使用標準曲線，存 在的分析物的量可以與校正的分析物結合微粒的量(比值)正相關。 標準曲線是如下得到的通過製備一系列的、在待測其分析物的流 體(例如，如去除分析物的血清)中含有已知濃度的目標分析物的 對照樣品。然後對這一系列的對照樣品進行分析，測定每種對照樣 品的R值，然後將R值相對於對照樣品中包含的分析物的濃度作圖。通過測定測試樣品的R值來分析含未知量的分析物的樣品(測試樣
品)，通過參考標準曲線來確定測試樣品中分析物的濃度。如上所 述，可以製作一條標準曲線，並用於一批中所有的測試樣品(例如
用於使用測試試劑的特定製品的所有測試樣品)；並不需要對每種 測試樣品都重新製作標準曲線。或者，還可以使用其它的比值和/標 準曲線來確定樣品中分析物的量。
此外，若需要，在計算校正的分析物結合微粒的量過程中，以 及在計算比值(R)之前，可以從每個樣品捕獲區內存在的分析物結 合微粒的量以及從對照捕獲區內存在的分析物結合微粒的量中減去 背景中存在的標記的量。例如，在運行完分析之後(液體已移動穿 過和超過捕獲區)，可以對固相裝置的全部或者部分進行掃描來評 估在每個捕獲區之前、之中或者之後的區域中標記微粒的量。掃描 主要可以在包括捕獲區的區域附近進行，但是也可以在延伸到捕獲 區之外或/和之間的區域進行。在捕獲區之外的區域存在的微粒是"背 景"，即，在樣品的存在下非特異性地與固相裝置相結合的微粒以及 也存在於捕獲區的樣品基質中的其它組分。在捕獲區中存在的微粒 的量除那些由捕獲試劑捕獲的特異性微粒外還包括該非特異性背 景。檢測到的背景微粒的量(即在捕獲區之外的位置上檢測到的微 粒的量，例如捕獲區之前和/或之後)可以從每個捕獲區所確定的總 的微粒的量中減去。這就相對於背景的量進行了校正，能夠更加精 確地確定樣品中存在的分析物的量。例如，檢測到的背景的量可以 在緊挨著捕獲區的上遊的位置上被確定；或者在緊挨著捕獲區的下 遊的位置上被確定；或者在施加位點和第一樣品捕獲區之間被確定； 或者在捕獲區之外的另一個位置上被確定。或者，檢測到的背景的 量可以在多於一個的位置上被確定例如，檢測到的背景的量可以 在捕獲區的上遊的位置上被確定，也可以在相同捕獲區的下遊的位 置上被確定；檢測到的這兩種背景的量的平均值可以作為檢測到的 背景微粒的量使用，從分析物結合微粒的量中減去該量可以得到"背 景校正的分析物結合微粒的量"。此處所使用的背景校正的分析物結合微粒的量是指已經減去微粒的背景量的分析物結合微粒的量。
在優選實施方式中，檢測到的背景微粒的量在緊挨著每個捕獲
區的上遊被確定例如，在一個存在兩種目標分析物因而存在兩個 樣品捕獲區的實施方式中，在第一樣品捕獲區的上遊(用於第一樣 品捕獲區)、在第一樣品捕獲區的下遊和第二樣品捕獲區的上遊(用 於第二樣品捕獲區)、以及第二樣品捕獲區的下遊和對照捕獲區的
上遊(用於對照捕獲區)檢測背景的量。或者，被檢測到的相同的 背景量還可以用於每個樣品捕獲區和對照捕獲區。
在另 一個優選實施方式中，檢測到的背景微粒的量在緊挨著每 個捕獲區的上遊、緊挨著每個捕獲區的下遊被確定，這兩個量的平 均值用於確定背景校正的分析物結合微粒的量。例如，在一個存在 兩種目標分析物因而存在兩個樣品捕獲區的實施方式中，在第一樣 品捕獲區的上遊和第 一樣品捕獲區的下遊檢測背景的量，將這兩個 量平均，用作第一樣品捕獲區的背景量；第一樣品捕獲區下遊的背 景量還可以用作第二樣品捕獲區上遊的背景量，該數值與第二樣品 捕獲區下遊的背景量取平均值，所得到的平均值可以用作第二樣品 捕獲區的背景量，等等。若需要，也可以使用其它讀數的組合，並 且取其平均值來用作背景量。
在本發明的一個優選實施方式中，兩種目標分析物是曱型流感 和乙型流感。在該實施方式中，使用曱型流感的抗體作為第一分析 物結合試劑，使用乙型流感的抗體作為第二分析物結合試劑使用。
"竟爭"或"抑制"分析
與夾心分析 一 樣，本發明的竟爭或抑制分析使用上述的固相裝 置，該固相裝置包括一個施加位點、兩個或更多個樣品捕獲區和一 個對照捕獲區。該實施方式還使用上述的樣品收集裝置。用於竟爭 (抑制)分析的樣品收集裝置包括一群由所有目標分析物(代替如 夾心分析所描述的由分析物結合試劑塗覆)或所有目標分析物的類 似物塗覆的分析物塗覆的微粒；或者，樣品收集裝置包括多於一群的分析物塗覆的微粒(每種目標分析物對應一群)；每群由目標分 析物或目標分析物的類似物或它們的組合塗覆。此處所使用的分析 物的類似物是與分析物具有類似的結合特性的化合物，該化合物與 上述的分析物結合試劑形成結合對。分析物和/或分析物的類似物可 以直接塗覆到微粒上，或者也可以直接結合在微粒上。如下所用的 術語"分析物塗覆的微粒"是指由目標分析物和/或目標分析物的類 似物塗覆的微粒。正如上面所述的夾心分析那樣，微粒群根據微粒 的大小和組成、固相裝置的組成以及分析的靈敏度水平而不同。
如上所述，樣品捕獲區是固相裝置上吸附有樣品捕獲試劑的位 置。樣品捕獲試劑是分析物結合試劑，例如上述那些試劑。樣品捕 獲試劑並不需要是與上述相同的分析物結合試劑；但是，樣品捕獲 試劑同樣與目標分析物形成結合對，特異性地、優先地與目標分析 物相結合。由於存在多於一種的目標分析物，因此也會存在多於一 個的上述樣品捕獲區。如上所述，在優選實施方式中，樣品捕獲試 劑是針對分析物的抗體；它可以針對那些同與用作塗覆在微粒上的 分析物結合試劑的抗體相結合的表位相同的分析物表位，或者針對 不同的分析物表位。若需要，每個樣品捕獲區可以使用多於一種的 樣品捕獲試劑。
該裝置還包括如上所述的對照捕獲試劑，該對照捕獲試劑與分 析物塗覆的微粒反應，但是不與待測定的分析物相互作用例如， 對照捕獲試劑可以與微粒上的另 一 種物質(例如與微粒相結合的分 析物的載體；抗體)反應；或者與微粒本身反應。在優選實施方式 中，樣品捕獲試劑和對照捕獲試劑都是抗體。對照捕獲試劑吸附在 對照捕獲區中。竟爭分析的組件通過與上述夾心分析類似的方式進 行排列。
為了進行竟爭分析，使用上述用於評估目標分析物的存在的流 體樣品。在一個實施方式中，流體樣品;陂引入(吸入、倒入或者以
其它方式放入)樣品收集裝置中。例如，在一個實施方式中，樣品 被吸至一個包括吸液管端頭的樣品收集裝置中。向樣品收集裝置中虧1入流體樣品可以使流體樣品與分析物塗覆的微粒相混合，形成混 合的流體樣品。如果分析物塗覆的微粒是被蒸發、冷凍或真空乾燥 的，向樣品收集裝置中引入流體樣品可以使分析物結合微粒再水合 和懸浮於流體樣品中。也將緩沖液(例如上述的)引入到混合的流 體樣品中，形成緩衝的、混合的流體樣品。緩衝的、混合的流體樣 品可以通過將混合的流體樣品分配至含緩衝液的緩衝液容器(例如 試管)中，或者通過在引入流體樣品之前將緩沖液引入到樣品收集
裝置中來形成。在另一個實施方式中，將緩衝液引入到樣品收集裝 置中，然後再將流體樣品引入到樣品收集裝置中。或者，如果目標
分析物是固體(例如上述粉末、顆粒；孢子；或其它微粒)，上述 流體樣品可以通過將固體引入到緩衝液容器中進行製備；在這個實 施方式中，緩衝的、混合的流體樣品是通過將流體樣品(包含緩衝 液)引入到樣品收集裝置中而形成的。
為了將分析物塗覆的微粒進一 步分散到流體樣品中，若需要， 可以攪動(例如旋震、搖動、吸上吸下等等)已引入流體樣品和緩 沖液的樣品收集裝置，或者已引入混合的流體樣品的緩衝液容器。
在優選實施方式中，樣品收集裝置包括其端頭內含有真空乾燥 的分析物塗覆的樣史粒的吸液管端頭；流體樣品:帔吸入到吸液管中， 從而將乾燥的分析物塗覆的微粒再水合，形成混合的流體樣品。在 特別優選的實施方式中，混合的流體樣品被引入到緩沖液容器中， 形成緩衝的、混合的流體樣品；使用樣品收集裝置將緩衝液容器中 的緩衝的、混合的流體樣品吸上吸下，從而進一步分散分析物塗覆 的微粒。
緩衝的、混合的流體樣品被施加在固相裝置的施加位點上，或 者(如果有施加墊)施加在施加墊上。當固相裝置與緩沖的、混合 的流體樣品相接觸後，將固相裝置維持在允許流體通過毛細作用移 動到和穿過固相裝置的條件下。分析物塗覆的微粒(和分析物，如 果樣品中存在的話)由於流體的毛細作用移動穿過裝置，從緩沖的、 混合的流體樣品移動到和穿過樣品捕獲區，以及移動到和穿過對照捕獲區。
通過分析物塗覆的微粒與樣品捕獲區內的樣品捕獲試劑相結 合，以及通過部分分析物塗覆的微粒與對照捕獲區內的對照捕獲試 劑相結合，捕獲部分分析物塗覆的微粒的移動。分析物塗覆的微粒 與樣品中的分析物(如果存在的話)竟爭結合樣品捕獲試劑。通過 與分析物塗覆的微粒上的分析物相結合，樣品捕獲試劑與分析物塗 覆的微粒相結合。此處所使用的術語"樣品-試劑-分析物塗覆的 微粒複合物"是指樣品捕獲試劑和分析物塗覆的微粒的複合物。分 析物塗覆的微粒在樣品捕獲區內被捕獲，由於通過微粒上的目標分 析物與樣品捕獲區內的樣品捕獲試劑的相互作用而發生的分析物塗 覆的微粒的捕獲，形成了樣品-試劑_分析物塗覆的微粒複合物。
通過與除了分析物自身之外的任一分析物塗覆的微粒組分的結 合，對照捕獲試劑與分析物塗覆的微粒相結合。上述所使用的術語 "對照-試劑_分析物塗覆的微粒複合物"是指對照捕獲試劑和分 析物塗覆的微粒的複合物。上述分析物塗覆的微粒在對照捕獲區被 捕獲，由於通過分析物結合微粒與對照捕獲區內的對照捕獲試劑的 相互作用而發生的分析物塗覆的微粒的捕獲，形成了對照-試劑_ 分析物塗覆的微粒複合物。
隨後，毛細作用可以將任何沒有在樣品捕獲區或對照捕獲區被 捕獲的分析物塗覆的微粒移動至捕獲區之外。
然後檢測在每個捕獲區內被捕獲的分析物塗覆的微粒。如以上 對於夾心分析中分析物結合微粒的量的檢測所述，使用用於分析物 塗覆的微粒上所使用的標記類型的適當手段來檢測分析物塗覆的微 粒。同樣地，通過與檢測樣品捕獲區內分析物塗覆的微粒量相同的 方式檢測在對照捕獲區中捕獲的分析物塗覆的微粒的量(在此也被 稱作"對照")。
然後確定每種目標分析物的校正的分析物塗覆的微粒的量。校 正的分析物塗覆的微粒的量是基於對應於目標分析物的樣品捕獲區 內被捕獲的分析物塗覆的微粒的量，以及在其它樣品捕獲區和對照捕獲區內被捕獲的分析物塗覆的微粒的量。例如，在一個實施方式
中，對應第 一 目標分析物的校正的分析物塗覆的微粒的量與比值(R) 負相關，比值(R)為在第一樣品捕獲區內存在的分析物塗覆的微粒
的量與在第一樣品捕獲區內存在的分析物塗覆的微粒的量加上在其 它每個樣品捕獲區、對照捕獲區內存在的量的總和的比值。例如，
在一個實施方式中，如果存在兩種目標分析物，對應第一種目標分 析物的校正的分析物塗覆的微粒的量與下述比值負相關在第 一樣 品捕獲區內存在的分析物塗覆的微粒的量與總和(在第 一 樣品捕獲 區內存在的分析物塗覆的微粒的量，加上在第二樣品捕獲區內存在 的分析物塗覆的微粒的量，加上在對照捕獲區內存在的分析物塗覆 的微粒的量)的比值。同樣，如果存在兩種目標分析物，對應第二 種目標分析物的校正的分析物塗覆的微粒的量與下述比值負相關 在第二樣品捕獲區內存在的分析物塗覆的微粒的量與總和(在第一 樣品捕獲區內存在的分析物塗覆的微粒的量，加上在第二樣品捕獲 區內存在的分析物塗覆的微粒的量，加上在對照捕獲區內存在的分 析物塗覆的微粒的量)的比值。
一旦確定了每種目標分析物的校正的分析物塗覆的微粒的量， 目標分析物的存在與否就可以通過使用適當的對比、通過該分析物 的校正的分析物塗覆的微粒的量來確定。在一個實施方式中，如以 上對於夾心分析所述，每種目標分析物的校正的分析物塗覆的微粒 的量與預先確定的閾值進行比較；等於或者高於閾值的校正的分析 物塗覆的微粒的量指示陰性結果(即，指示測試樣品中不存在目標 分析物)，而高於閾值的校正的分析物塗覆的微粒的量指示陽性結 果(即，指示著測試樣品中存在目標分析物)。
或者， 一旦確定了每種目標分析物的校正的分析物塗覆的微粒 的量，目標分析物的量就可以通過使用適當的計算、通過分析物的 校正的分析物塗覆的微粒的量來確定。例如，通過使用標準曲線， 存在的分析物的量可以通過校正的分析物塗覆的微粒的量(比值) 來確定。標準曲線是如下產生的通過準備一系列的、在待檢測分析物的流體(例如，如去除分析物的血清)中含有已知濃度的目標 分析物的對照樣品。然後對這一系列的對照樣品進行分析，測定每
種對照樣品的R值，然後R值相對於對照樣品中包含的分析物的濃 度作圖。通過測定測試樣品的R值來分析含未知量的分析物的樣品 ("測試樣品")，通過參考標準曲線來確定測試樣品中分析物的濃 度。如上所述，可以製作一條標準曲線，並用於批次中的所有的測 試樣品(例如用於所有使用測試試劑的特定製品的測試樣品)；並 不需要對每種測試樣品都重新製作標準曲線。
或者，如上所述，還可以使用其它的比值和/或標準曲線來確定 樣品中分析物的量。
此外，若需要，在計算校正的分析物塗覆的微粒的量的過程中， 以及在計算比值(R)之前，可以從每個樣品捕獲區內存在的分析物 塗覆的微粒的量以及對照捕獲區內存在的分析物塗覆的微粒的量中 減去背景中存在的標記的量。例如，檢測到的背景的量可以在緊挨 著捕獲區上遊的位置上被確定；或者在緊挨著捕獲區下遊的位置上 被確定；或者在施加位點和第一樣品捕獲區之間被確定；或者在捕 獲區之外的另一個位置上被確定。或者，檢測到的背景的量可以在 多於一個的位置上被確定例如，檢測到的背景的量可以在捕獲區 上遊的位置上^:確定，也可以在相同捕獲區下遊的位置上^^皮確定； 檢測到的這兩種背景的量的平均值可以用作從分析物塗覆的微粒的 量中減去的檢測到的背景微粒的量，以得到"背景校正的分析物塗覆 的微粒的量"。此處所使用的"背景校正的分析物塗覆的微粒的量" 是指已經減去背景微粒的量的分析物塗覆的微粒的量。
在優選實施方式中，檢測到的背景微粒的量在緊挨著每個捕獲 區的上遊^皮確定例如，在一個存在兩種目標分析物因而存在兩個 樣品捕獲區的實施方式中，在第一樣品捕獲區的上遊(用於第一樣 品捕獲區)、在第一樣品捕獲區的下遊和第二樣品捕獲區的上遊(用 於第二樣品捕獲區)、以及在第二樣品捕獲區的下遊和對照捕獲區 的上遊(用於對照捕獲區)檢測到背景的量。或者，檢測到的相同
43的背景的量還可以用於每個樣品捕獲區和對照捕獲區。在另 一個優 選實施方式中，檢測到的背景微粒的量在緊挨著每個捕獲區的上遊、 緊挨著每個捕獲區的下遊被確定，這兩個量的平均值用於確定背景 校正的分析物塗覆的微粒的量。例如，在一個存在兩種目標分析物 因而存在兩個樣品捕獲區的實施方式中，在第 一樣品捕獲區的上遊 和第 一樣品捕獲區的下遊檢測到背景的量，取這兩個量的平均值，
用作第一樣品捕獲區的背景的量；第一樣品捕獲區下遊的背景的量 還可以用作第二樣品捕獲區上遊的背景的量，該數值與第二樣品捕 獲區下遊的背景量取平均值，所得到的平均值可用作第二樣品捕獲 區的背景量，等等。若需要，也可以使用其它讀數的組合，並且取 其平均值來作為背景的量使用。
本發明的優點
與那些分析物結合微粒被嵌入固相裝置的膜內、或者被包含在 與固相裝置的膜相接觸的配合墊上、或者同樣被置於毛細流動固相 裝置內的分析相對比，本發明的方法提供了靈敏度提高的分析。對 於夾心分析，例如，由於在施加在固相裝置之前，用於分析目標分 析物的流體樣品與分析物結合微粒相混合，因此在固相上發生捕獲
此外，與固相裝置基質中可能會形成的目標分析物和分析物結合微 粒之間相同的相互作用相比，由於目標分析物與分析物結合微粒的 相互作用發生在流體相中，因此由於微粒的移動性更好，具有更有 效的結合。而且，對於夾心和竟爭分析，與可能嵌入固相裝置的量 相比，流體收集裝置可包括更多量的微粒；該更多的量進一步提高 了反應的靈敏度。此外，在向固相上施加緩沖的、混合的流體樣品 之前，由於分析物結合微粒(或者分析物塗覆的微粒)被分散在緩 衝的、混合的流體樣品中，所以微粒通過流體的毛細作用穿過捕獲 區是以一種連續的方式，而不是以在流體前沿峰頂的快波方式。因 此，較低濃度的微粒穿過捕獲區需要更長的時間因此，微粒被"捕獲"的時間也就有效地延長了 ，允許在捕獲區發生更高特異性的結 合，同時，穿過捕獲區的微粒的量也有效地減少了，從而避免了當 微粒通過流體前沿峰頂時發生的，其它物質對一些微粒的捕獲的非 特異性物理阻斷。
此外，使用一個內部對照就可以評估多種分析物，因此方便了 同時分析多種化合物。此外，使用比值可以提供基於內部校準器的 校正，還可以校正分析中微粒總量的變化值，因此可以彌補不同量 的標記以及分析靈敏度的差異。
過使用所需的組分作為分析物和分析物結合試劑進行上述相同的方 法，該分析同樣還可以使用上述其它結合對(例如核酸、受體-配 體、凝集素-糖)。
本發明的試劑盒
本發明還包括用於此處所描述的方法中的試劑盒。試劑盒組分
可包括特異性結合對的第一個和/或第二個成員、緩沖液和/或緩衝 液容器、流體收集工具、 一個或多個固相裝置(任選地包括施加墊 和/或芯吸墊)、至少一個樣品收集裝置、 一個或多個緩衝液容器、 用於產生標準曲線和/或其它標準曲線信息的對照樣品、分析物結合 微粒、分析物塗覆的微粒，和/或對照微粒、捕獲試劑、抗體、用於 評估目標分析物的樣品的輔助收集工具(例如藥籤)、 一次性裝置 (例如生物危險廢品袋)、和/或其它關於樣品收集裝置的信息或指 示(例如批次信息、有效期等)。例如，在一個實施方式中，試劑 盒包括至少一個其中含有分析物結合微粒的樣品收集裝置；在優選 實施方式中，試劑盒包括至少一個其中含有被蒸發乾燥的、真空幹 燥的或冷凍乾燥的分析物結合微粒的吸液管端頭。在另一個實施方 式中，試劑盒包括至少一個此處所描述的固相裝置和至少一個樣品 收集裝置。在另一個優選實施方式中，試劑盒包括至少一個吸液管、 至少一個或多個的其中含有被蒸發乾燥的、真空乾燥的或凍幹的分析物結合微粒的吸液管端頭，以及至少一個固相裝置。這個優選實施方式還可以任選地包括關於標準曲線、批次信息，和/或關於吸液管端頭內的分析物結合微粒的有效期的信息。在另 一個優選實施方式中，試劑盒包括至少一個樣品收集裝置、至少一個其中含有制幹的分析物結合微粒的吸液管端頭、至少一個固相裝置、以及至少一個緩衝液容器。這個優選實施方式還可以任選地包括在緩沖液容器中的緩衝液以及用於收集固體樣品的工具(例如藥籤)。
本發明通過下述實施例進行闡明，但並不局限於其中任一種方式。
實施例曱型和乙型流感樣品的分析A.材料
為了給免疫色鐠分析準備膜條，使用下述過程1.5 mg/ml, 1 ul/cm FluA抗體條帶分布在TL位置(第一樣品捕獲區)
1.5 mg/ml, 1 ul/cm FluB抗體條帶分布在UL位置(第二樣品捕獲區).
1 mg/ml， 1 ul/cm山羊抗小鼠抗體條帶分布在ISL位置(對照捕獲區)
上述抗體按如下被條帶分布將抗體溶液以lul/cm的速度施加在硝酸纖維素膜上，然後使用1% PVA封閉該膜，使用10 mM PB溶液洗滌，然後乾燥。將該膜切成5mm寬的小條。
通過使用此處所描述的小條、樣品墊和芯吸墊來組裝測試柱(固相裝置)。
為了準備分析物結合微粒，使用下述兩個方式之一方式1:共偶聯
使0.25 mg FluA抗體和0.125 mg FluB抗體共價偶聯到4 ml的螢光染色的乳膠珠子上面。
將乳膠抗體偶聯物點到吸液管端頭(樣品收集裝置)內，並且使用真空泵乾燥來準備分析端頭，或者在凍幹的緩衝液中包括含樣品緩沖液的乳膠抗體偶聯物。
方式2:分開偶聯
使0.25 mg FIuA抗體共價偶聯到4 ml的螢光染色的乳膠珠子上面。
使0.125 mg FluB抗體共價偶聯到4 ml的螢光染色的乳膠珠子上面。
合併FluA抗體-乳膠偶聯物和FluB抗體-乳膠偶聯物，將合併的偶聯物點在吸液管端頭(樣品收集裝置)內，使用真空泵千燥來準備分析端頭，或者在凍幹的緩衝液中包括含樣品緩沖液的乳膠抗體偶聯物。
為了準備緩沖液，使用下述兩個方式之一
方式1:液體緩沖液方式樣品緩沖液組成138 mMPB， 138 mMNaCl， 3.6% BSA， 0.84%表面活性劑10 G, 0.6%酪蛋白，0.05%Polyox， 0.05% v/v ProClin 300, pH 7.2的樣品緩衝液。該方式使用上述分析端頭。
方式2:凍幹緩衝液方式冷凍乾燥在凍幹樣品緩沖液中含有或者不含乳膠抗體偶聯物的上述液體緩衝液。如果在凍幹緩沖液中包含乳膠，乳膠不需要在吸液管端頭中乾燥。
B.方法
將懷疑含有流感(flu)的測試樣品在上述緩衝液中進行製備(例如通過直接加入液體樣品緩沖液中來稀釋測試樣品，或者利用樣品重建凍千樣品緩衝液)。凍幹樣品緩衝液中包含乳膠-抗體偶聯物，或者通過使用分析端頭來混合樣品，將乳膠-抗體偶聯物加入到製備好的樣品中。然後將樣品加入到測試柱(RAMP柱，ResponseBiomedical,伯納比，加拿大)和插在RAMP螢光讀數器(ResponseBiomedical)中的柱中。
14分鐘之後，使用RAMP螢光讀數器對柱進行掃描。測量UL(第一樣品捕獲區)、TL(第二樣品捕獲區)、ISL(對照捕獲區)以及這些區每個相應的背景位置的螢光。通過減去相應的背景信號，校正UL、 TL和ISL信號。使用讀數器進行FluA和FluB分析的比值的計算，如下
FluA比值=dR10 = TL/ ( TL + UL + ISL )
FluB比值=dUR10 = UL/ ( TL + UL + ISL )
將dR10和dUR10比值與每個值預先限定的閾值水平進行比較。如果比值等於或者大於閾值水平，結果就是陽性。如果比值小於閾值水平，結果就是陰性。
或者，可以將計算的比值與預先確定的標準曲線進行比較，該值可以轉換為定量結果來確定樣品的濃度。
是本領域技術人員將會明白在形式上和細節上可以進行不同的變化，而不會偏離附加的權利要求所包含的本發明的範圍。
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權利要求
1.一種通過使用固相分析測定測試樣品中至少兩種目標分析物的量的方法，包括確定檢測到的一種目標分析物的量與檢測到的每種目標分析物的量加上檢測到的對照的量的總和的比值，其中每種目標分析物的量與每種目標分析物的比值正相關。
2. 根據權利要求1所述的方法，其中在確定檢測到的一種目標 分析物的量與檢測到的每種目標分析物的全部量加上檢測到的對照 的量的總和的比值之前，從檢測到的每種目標分析物的量和對照的 量中減去檢測到的背景的量。
3. —種測定測試樣品中至少兩種目標分析物的量的方法，包括a) 提供一個固相裝置，該固相裝置包括一個施加位點、至少兩 個樣品捕獲區和一個對照捕獲區；第一樣品捕獲區上吸附有第一樣 品捕獲試劑，第二樣品捕獲區上吸附有第二樣品捕獲試劑，對照捕 獲區上吸附有對照捕獲試劑；其中，施加位點、第一樣品捕獲區、 第二樣品捕獲區和對照捕獲區順序地位於該固相裝置上；b) 提供一個樣品收集裝置，該樣品收集裝置包含第一分析物結 合微粒群和第二分析物結合微粒群，其中，第一分析物結合微粒由 第 一 分析物結合試劑塗覆，第二分析物結合微粒由第二分析物結合 試劑塗覆；c) 以下任一i)向樣品收集裝置中引入流體樣品，產生混合的 流體樣品，隨後再向混合的流體樣品中引入緩沖液；ii)向樣品收集 裝置中引入緩沖液，隨後再引入流體樣品；或者iii)通過向緩衝液 中引入固體形成流體樣品，隨後將該流體樣品引入樣品收集裝置中， 由此產生了包含接觸的第 一分析物結合微粒和接觸的第二分析物結 合微粒的緩沖的、混合的流體樣品；d) 將緩沖的、混合的流體樣品施加到固相裝置的施加位點上；e) 將固相裝置維持在一定條件下，該條件允許流體通過毛細作 用轉運接觸的第 一分析物結合微粒和接觸的第二分析物結合微粒穿過固相裝置，到達和穿過每個樣品捕獲區，從而允許接觸的第一分析物結合微粒與第 一 樣品捕獲區中的第 一 樣品捕獲試劑相結合，並且允許接觸的第二分析物結合微粒與第二樣品捕獲區中的第二樣品捕獲試劑相結合；以及允許樣品中的流體通過毛細作用轉運接觸的第 一 分析物結合微粒和接觸的第二分析物結合微粒穿過固相裝置，到達和穿過對照捕獲區，從而允許接觸的第 一分析物結合微粒和接觸的第二分析物結合微粒與對照捕獲試劑相結合；f) 確定第一樣品捕獲區內接觸的第一分析物結合微粒的量、第二樣品捕獲區內接觸的第二分析物結合微粒的量、以及對照捕獲區內接觸的第 一 分析物結合微粒和接觸的第二分析物結合微粒的量；g) 確定第一校正分析物結合微粒量，該量為第一樣品捕獲區內接觸的第 一分析物結合微粒的量與第 一樣品捕獲區內接觸的第 一分析物結合微粒的量、第二樣品捕獲區內接觸的第二分析物結合微粒的量以及對照捕獲區內接觸的第一分析物結合微粒和接觸的第二分析物結合微粒的量的總和的比值；並且確定第二校正分析物結合微粒量，該量為第二樣品捕獲區內接觸的第二分析物結合微粒的量與第 一 樣品捕獲區內接觸的第 一 分析物結合微粒的量、第二樣品捕獲區內接觸的第二分析物結合微粒的量以及對照捕獲區內接觸的第一分析物結合微粒和接觸的第二分析物結合微粒的量的總和的比值，其中，流體樣品中的第一種目標分析物的量與第一校正分析物結合微粒量正相關，流體樣品中的第二種目標分析物的量與第二校正分析物結合微粒量正相關。
4.根據權利要求3所述的方法，進一步包括定量測定一種或多種另外的目標分析物的量，其中，所述固相裝置包含對應每種另外的目標分析物的另外的樣品捕獲區，每個另外的樣品捕獲區上吸附有一種樣品捕獲試劑；其中，樣品收集裝置進一步包含對應每種另外的目標分析物的另外的分析物結合微粒群；其中，所述固相裝置被維持在一定條件下，該條件允許流體通過毛細作用轉運接觸的另外的分析物結合微粒穿過固相裝置，到達和穿過每個樣品捕獲區，.品 捕獲區內的另外的樣品捕獲試劑相結合；其中，確定對應每種目標分析物的校正分析物結合微粒量，該量為每個相對應的另外的樣品捕獲區內接觸的另外的分析物結合微粒的量與所有樣品捕獲區和對照捕獲區內所有分析物結合微粒的量的比值，其中，流體樣品中每種目標分析物的量與相對應的校正分析物結合微粒量正相關。
5. —種測定測試樣品中至少兩種目標分析物的量的方法，包括a) 提供一個固相裝置，該固相裝置包括一個施加位點、至少兩個樣品捕獲區和一個對照捕獲區；第一樣品捕獲區上吸附有第一樣品捕獲試劑，第二樣品捕獲區上吸附有第二樣品捕獲試劑，對照捕獲區上吸附有對照捕獲試劑；其中，第一樣品捕獲區、第二樣品捕獲區和對照捕獲區與固相裝置上的施加位點之間的距離大約是等距的；b) 提供一個樣品收集裝置，該樣品收集裝置包含第一分析物結合微粒群和第二分析物結合微粒群，其中，第一分析物結合微粒由第 一 分析物結合試劑塗覆，第二分析物結合微粒由第二分析物結合試齊'J塗覆；c) 以下任一i)向樣品收集裝置中引入流體樣品，產生混合的流體樣品，隨後再向混合的流體樣品中引入緩沖液；ii)向樣品收集裝置中引入緩衝液，隨後再引入流體樣品；或者iii)通過向緩沖液中引入固體形成流體樣品，隨後將該流體樣品S1入樣品收集裝置中，從而產生了包含接觸的第 一分析物結合微粒和接觸的第二分析物結合微粒的緩衝的、混合的流體樣品；d) 將緩衝的、混合的流體樣品施加到固相裝置的施加位點上；e) 將所述固相裝置維持在一定條件下，該條件允許流體通過毛細作用轉運接觸的第 一 分析物結合微粒和接觸的第二分析物結合微粒穿過固相裝置，到達和穿過每個樣品捕獲區，從而允許接觸的第一分析物結合微粒與第一樣品捕獲區內的第一樣品捕獲試劑相結合，並且允許接觸的第二分析物結合微粒與第二樣品捕獲區內的第二樣品捕獲試劑相結合；以及允許樣品中的流體通過毛細作用轉運接觸的第 一 分析物結合微粒和接觸的第二分析物結合微粒穿過固相裝置，到達和穿過對照捕獲區，從而允許接觸的第一分析物結合微粒和接觸的第二分析物結合微粒與對照捕獲試劑相結合；f) 確定第一樣品捕獲區內接觸的第一分析物結合微粒的量、第二樣品捕獲區內接觸的第二分析物結合微粒的量、以及對照捕獲區內接觸的第 一 分析物結合微粒和接觸的第二分析物結合微粒的量；g) 確定第一校正分析物結合微粒量，該量為第一樣品捕獲區內接觸的第 一 分析物結合微粒的量與第 一 樣品捕獲區內接觸的第 一 分析物結合微粒的量、第二樣品捕獲區內接觸的第二分析物結合微粒的量以及對照捕獲區內接觸的第 一分析物結合微粒和接觸的第二分析物結合微粒的量的總和的比值；確定第二校正分析物結合微粒量，該量為第二樣品捕獲區內接觸的第二分析物結合微粒的量與第 一 樣品捕獲區內接觸的第 一分析物結合微粒的量、第二樣品捕獲區內接觸的第二分析物結合微粒的量以及對照捕獲區內接觸的第 一分析物結合微粒和接觸的第二分析物結合微粒的量的總和的比值，其中，流體樣品中的第 一種目標分析物的量與第 一校正分析物結合微粒量正相關，流體樣品中的第二種目標分析物的量與第二校正分析物結合微粒量正相關。
6.根據權利要求5所述的方法，進一步包括定量測定一種或多種另外的目標分析物的量，其中，所述固相裝置包含對應每種另外的目標分析物的另外的樣品捕獲區，每個另外的樣品捕獲區上吸附有一種樣品捕獲試劑；其中，樣品收集裝置進一步包含對應每種另外的目標分析物的另外的分析物結合微粒群；其中，所述固相裝置被維持在一定條件下，該條件允許流體通過毛細作用轉運接觸的另外的分析物結合微粒穿過固相裝置，到達和穿過每個樣品捕獲區，從而允許接觸的另外的分析物結合微粒與每個另外的樣品捕獲區內的另外的樣品捕獲試劑相結合；其中，確定對應每種目標分析物的校正分析物結合微粒量，該量為每個相對應的另外的樣品捕獲區內接觸的另外的分析物結合微粒的量與所有樣品捕獲區和對照捕獲區內所有的分析物結合微粒的量的比值，其中，流體樣品中每種目標分析物的量與相對應的校正分析物結合微粒量正相關。
7. —種定量測定流體樣品中至少兩種目標分析物的量的方法，包括a) 提供一個固相裝置，該固相裝置包括一個施加位點、至少兩個樣品捕獲區和一個對照捕獲區；第一樣品捕獲區上吸附有第一樣品捕獲試劑，第二樣品捕獲區上吸附有第二樣品捕獲試劑，對照捕獲區上吸附有對照捕獲試劑；其中，施加位點、第一樣品捕獲區、第二樣品捕獲區和對照捕獲區順序地位於固相裝置上；b) 提供一個樣品收集裝置，該樣品收集裝置包含分析物結合微粒群，其中，分析物結合微粒由第一分析物結合試劑和第二分析物結合試劑塗覆；c) 以下任一i)向樣品收集裝置中引入流體樣品，產生混合的流體樣品，隨後再向混合的流體樣品中引入緩沖液；ii)向樣品收集裝置中引入緩衝液，隨後再引入流體樣品；或者iii)通過向緩衝液中引入固體形成流體樣品，隨後將該流體樣品S1入樣品收集裝置中，由此產生了包含接觸的分析物結合微粒的緩衝的、混合的流體樣品；d) 將緩衝的、混合的流體樣品施加到固相裝置的施加位點上；e) 將所述固相裝置維持在一定條件下，該條件允許流體通過毛細作用轉運接觸的分析物結合微粒穿過固相裝置，到達和穿過每個樣品捕獲區，從而允許接觸的分析物結合微粒與第 一樣品捕獲區內的第 一 樣品捕獲試劑相結合，並且允許接觸的分析物結合微粒與第二樣品捕獲區內的第二樣品捕獲試劑相結合；以及允許樣品中的流穿過對照捕獲區，從而允許接觸的分析物結合微粒與對照捕獲試劑相結合；f) 確定第一樣品捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量、第二樣捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量、以及對照捕獲區內接觸的口a分析物結合微粒的量；g)確定第一校正分析物結合微粒量，該量為第一樣品捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量與第 一 樣品捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量、第二樣品捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量以及對照捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量的總和的比值；確定第二校正分析物結合微粒量，該量為第二樣品捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量與第 一樣品捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量、第二樣品捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量以及對照捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量的總和的比值，其中，流體樣品中的第 一種目標分析物的量與第 一校正分析物結合微粒量正相關，流體樣品中的第二種目標分析物的量與第二校正分析物結合微粒量正相關。
8. 根據權利要求7所述的方法，進一步包括定量測定一種或多種另外的目標分析物的量，其中，所述固相裝置包含對應每種另外的目標分析物的另外的樣品捕獲區，每個另外的樣品捕獲區上吸附有一種樣品捕獲試劑；其中，樣品收集裝置中的分析物結合微粒進一步包含對應每種另外的目標分析物的塗覆在分析物結合微粒上的另外的分析物結合試劑；其中，固相裝置被維持在一定條件下，該條件允許流體通過毛細作用轉運接觸的另外的分析物結合微粒穿過固相裝置，到達和穿過每個樣品捕獲區，從而允許接觸的另外的分析物結合微粒與每個另外的樣品捕獲區內的另外的樣品捕獲試劑相結合；其中，確定對應每種目標分析物的校正的分析物結合微粒量，該量為每個相對應的另外的樣品捕獲區內接觸的另外的分析物結合微粒的量與所有樣品捕獲區和對照捕獲區內所有的分析物結合微粒的量的比值，其中，流體樣品中每種目標分析物的量與相對應的校正的分析物結合微粒量正相關。
9. 一種定量測定流體樣品中至少兩種目標分析物的量的方法，包括a)提供一個固相裝置，該固相裝置包括一個施加位點、至少兩個樣品捕獲區和一個對照捕獲區；第一樣品捕獲區上吸附有第一樣品捕獲試劑，第二樣品捕獲區上吸附有第二樣品捕獲試劑，對照捕獲區上吸附有對照捕獲試劑；其中，每個樣品捕獲區和對照捕獲區與施加位點之間的距離大約是等距的；b) 提供一個樣品收集裝置，該樣品收集裝置包含分析物結合微粒群，其中，分析物結合微粒由第一分析物結合試劑和第二分析物結合試劑塗覆；c) 以下任一i)向樣品收集裝置中引入流體樣品，產生混合的流體樣品，隨後再向混合的流體樣品中引入緩沖液；ii)向樣品收集裝置中引入緩衝液，隨後再引入流體樣品；或者iii)通過向緩衝液中引入固體形成流體樣品，隨後將該流體樣品可I入樣品收集裝置中，從而產生了包含接觸的分析物結合微粒的緩衝的、混合的流體樣品；d) 將緩衝的、混合的流體樣品施加到固相裝置的施加位點上；e) 將固相裝置維持在一定條件下，該條件允許流體通過毛細作用轉運接觸的分析物結合微粒穿過固相裝置，到達和穿過每個樣品捕獲區，從而允許接觸的分析物結合微粒與第 一樣品捕獲區內的第一樣品捕獲試劑相結合，並且允許接觸的分析物結合微粒與第二樣品捕獲區內的第二樣品捕獲試劑相結合；以及允許樣品中的流體通過毛細作用轉運接觸的分析物結合微粒穿過固相裝置，到達和穿過對照捕獲區，從而允許接觸的分析物結合微粒與對照捕獲試劑相結合；f) 確定第一樣品捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量、第二樣品捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量、以及對照捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量；g) 確定第一校正分析物結合微粒量，該量為第一樣品捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量與第 一樣品捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量、第二樣品捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量以及對照捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量的總和的比值；確定第二校正分析物結合微粒量，該量為第二樣品捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量與第 一 樣品捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量、第二樣品捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量以及對照捕獲區內接觸的分析物結合微粒的量的總和的比值，其中，流體樣品中的第 一種目標分析物的量與第 一校正分析物結合微粒量正相關，流體樣品中的第二種目標分析物的量與第二校正分析物結合微粒量正相關。
10. 根據權利要求9所述的方法，進一步包括定量測定一種或多種另外的目標分析物的量，其中，所述固相裝置包含對應每種另外的目標分析物的另外的樣品捕獲區，每個另外的樣品捕獲區上吸附有一種樣品捕獲試劑；其中，樣品收集裝置中的分析物結合微粒進一步包含對應每種另外的目標分析物的塗覆在分析物結合微粒上的另外的分析物結合試劑；其中，固相裝置被維持在一定條件下，該條件允許流體通過毛細作用轉運接觸的另外的分析物結合微粒穿過固相裝置，到達和穿過每個樣品捕獲區，從而允許接觸的另外的分析物結合微粒與每個另外的樣品捕獲區內的另外的樣品捕獲試劑相結合；其中，確定對應每種目標分析物的校正的分析物結合微粒量，該量為每個相對應的另外的樣品捕獲區內接觸的另外的分析物結合微粒的量與所有樣品捕獲區和對照捕獲區內所有的分析物結合微粒的量的比值，其中，流體樣品中每種目標分析物的量與相對應的校正的分析物結合微粒量正相關。
11. 一種測定測試樣品中至少兩種目標分析物的量的方法，包括a) 提供一個固相裝置，該固相裝置包括一個施加位點、至少兩個樣品捕獲區和一個對照捕獲區；第一樣品捕獲區上吸附有第一樣品捕獲試劑，第二樣品捕獲區上吸附有第二樣品捕獲試劑，對照捕獲區上吸附有對照捕獲試劑；其中，施加位點、第一樣品捕獲區、第二樣品捕獲區和對照捕獲區順序地位於固相裝置上；b) 提供一個樣品收集裝置，該樣品收集裝置包含第一分析物塗覆的微粒群和第二分析物塗覆的微粒群，其中，第一分析物塗覆的微粒由第 一 分析物或第 一 分析物的類似物塗覆，第二分析物塗覆的微粒由第二分析物或第二分析物的類似物塗覆；c) 以下任一i)向樣品收集裝置中引入流體樣品，產生混合的流體樣品，隨後再向混合的流體樣品中引入緩衝液；ii)向樣品收集裝置中引入緩沖液，隨後再引入流體樣品；或者iii)通過向緩沖液中引入固體形成流體樣品，隨後將該流體樣品S1入樣品收集裝置中，由此產生包含接觸的第 一分析物塗覆的微粒和接觸的第二分析物塗覆的微粒的緩沖的、混合的流體樣品；d) 將緩沖的、混合的流體樣品施加到固相裝置的施加位點上；e) 將固相裝置維持在一定條件下，該條件允許流體通過毛細作用轉運接觸的第一分析物塗覆的微粒和接觸的第二分析物塗覆的微粒穿過固相裝置，到達和穿過每個樣品捕獲區，從而允許接觸的第一分析物塗覆的微粒與第 一 樣品捕獲區內的第 一 樣品捕獲試劑相結合，並允許接觸的第二分析物塗覆的微粒與第二樣品捕獲區內的第二樣品捕獲試劑相結合；以及允許樣品中的流體通過毛細作用轉運接觸的第 一 分析物塗覆的微粒和接觸的第二分析物塗覆的微粒穿過固相裝置，到達和穿過對照捕獲區，從而允許接觸的第一分析物塗覆的微粒和接觸的第二分析物塗覆的微粒與對照捕獲試劑相結合；f) 確定第 一樣品捕獲區內接觸的第 一分析物塗覆的微粒的量、第二樣品捕獲區內接觸的第二分析物塗覆的微粒的量、以及對照捕獲區內接觸的第 一分析物塗覆的微粒和接觸的第二分析物塗覆的微粒的量；g) 確定第一校正的分析物塗覆的微粒的量，該量為第一樣品捕獲區內接觸的第 一 分析物塗覆的微粒的量與第 一 樣品捕獲區內接觸的第 一分析物塗覆的微粒的量、第二樣品捕獲區內接觸的第二分析物塗覆的微粒的量以及對照捕獲區內接觸的第 一分析物塗覆的微粒和接觸的第二分析物塗覆的微粒的量的總和的比值；確定第二校正的分析物塗覆的微粒的量，該量為第二樣品捕獲區內接觸的第二分析物塗覆的微粒的量與第 一 樣品捕獲區內接 的第 一 分析物塗覆的微粒的量、第二樣品捕獲區內接觸的第二分析物塗覆的微粒的量以 及對照捕獲區內接觸的第 一 分析物塗覆的微粒和接觸的第二分析物 塗覆的微粒的量的總和的比值，其中，流體樣品中的第一種目標分析物的量與第一校正的分析 物塗覆的微粒的量負相關，流體樣品中的第二種目標分析物的量與 第二校正的分析物塗覆的微粒的量正相關。
12. 根據權利要求11所述的方法，進一步包括定量測定一種或 多種另外的目標分析物的量，其中，所述固相裝置包含對應每種另 外的目標分析物的另外的樣品捕獲區，每個另外的樣品捕獲區上吸 附有一種樣品捕獲試劑；其中，樣品收集裝置進一步包含對應每種 另外的目標分析物的另外的分析物塗覆的微粒群；其中，固相裝置 被維持在一定條件下，該條件允許流體通過毛細作用轉運接觸的另 外的分析物塗覆的微粒穿過固相裝置，到達和穿過每個樣品捕獲區， 從而允許接觸的另外的分析物塗覆的微粒與每個另外的樣品捕獲區 內的另外的樣品捕獲試劑相結合；其中，確定對應每種目標分析物 的校正的分析物塗覆的微粒的量，該量為每個相對應的另外的樣品 捕獲區內接觸的另外的分析物塗覆的微粒的量與所有樣品捕獲區和 對照捕獲區內所有的分析物塗覆的微粒的量的比值，其中，流體樣 品中每種目標分析物的量與相對應的校正的分析物塗覆的微粒的量 負相關。
13. —種測定測試樣品中至少兩種目標分析物的量的方法，包括a) 提供一個固相裝置，該固相裝置包括一個施加位點、至少兩 個樣品捕獲區和一個對照捕獲區；第一樣品捕獲區上吸附有第一樣 品捕獲試劑，第二樣品捕獲區上吸附有第二樣品捕獲試劑，對照捕 獲區上吸附有對照捕獲試劑；其中，第一樣品捕獲區、第二樣品捕 獲區和對照捕獲區與固相裝置上的施加位點之間的距離大約是等距 的；b) 提供一個樣品收集裝置，該樣品收集裝置包含第一分析物塗覆的微粒群和第二分析物塗覆的微粒群，其中，第一分析物塗覆的 微粒由第 一 分析物或第 一 分析物的類似物塗覆，第二分析物塗覆的微粒由第二種分析物或第二種分析物的類似物塗覆；c) 以下任一i)向樣品收集裝置中引入流體樣品，產生混合的 流體樣品，隨後再向混合的流體樣品中引入緩沖液；ii)向樣品收集 裝置中引入緩衝液，隨後再引入流體樣品；或者iii)通過向緩沖液 引入固體形成流體樣品，隨後將該流體樣品引入樣品收集裝置中， 由此產生包含接觸的第 一 分析物塗覆的微粒和接觸的第二分析物塗 覆的微粒的緩衝的、混合的流體樣品；d) 將緩衝的、混合的流體樣品施加到固相裝置的施加位點上；e) 將固相裝置維持在一定條件下，該條件允許流體通過毛細作 用轉運接觸的第 一 分析物塗覆的微粒和接觸的第二分析物塗覆的微 粒穿過固相裝置，到達和穿過每個樣品捕獲區，從而允許接觸的第一分析物塗覆的微粒與第一樣品捕獲區內的第一樣品捕獲試劑相結 合，並允許接觸的第二分析物塗覆的微粒與第二樣品捕獲區內的第 二樣品捕獲試劑相結合；以及允許樣品中的流體通過毛細作用轉運 接觸的第 一分析物塗覆的微粒和接觸的第二分析物塗覆的微粒穿過 固相裝置，到達和穿過對照捕獲區，從而允許接觸的第一分析物塗 覆的微粒和接觸的第二分析物塗覆的微粒與對照捕獲試劑相結合；f) 確定第 一 樣品捕獲區內接觸的第 一 分析物塗覆的微粒的量、 第二樣品捕獲區內接觸的第二分析物塗覆的微粒的量、以及對照捕獲區內接觸的第 一 分析物塗覆的微粒和接觸的第二分析物塗覆的微粒的量；g) 確定第一校正的分析物塗覆的微粒的量，該量為第一樣品捕 獲區內接觸的第 一分析物塗覆的微粒的量與第 一樣品捕獲區內接觸 的第 一 分析物塗覆的微粒的量、第二樣品捕獲區內接觸的第二分析 物塗覆的微粒的量以及對照捕獲區內接觸的第 一 分析物塗覆的微粒 和接觸的第二分析物塗覆的微粒的量的總和的比值；確定第二校正 的分析物塗覆的微粒的量，該量為第二樣品捕獲區內接觸的第二分析物塗覆的微粒的量與第 一 樣品捕獲區內接觸的第 一 分析物塗覆的 微粒的量、第二樣品捕獲區內接觸的第二分析物塗覆的微粒的量以 及對照捕獲區內接觸的第 一分析物塗覆的微粒和接觸的第二分析物 塗覆的微粒的量的總和的比值，其中，流體樣品中的第一種目標分析物的量與第一校正的分析 物塗覆的微粒的量負相關，流體樣品中的第二種目標分析物的量與 第二校正的分析物塗覆的微粒的量正相關。
14. 根據權利要求13所述的方法，進一步包括定量測定一種或 多種另外的目標分析物的量，其中，所述固相裝置包含對應每種另 外的目標分析物的另外的樣品捕獲區，每個另外的樣品捕獲區上吸 附有一種樣品捕獲試劑；其中，樣品收集裝置進一步包含對應每種 另外的目標分析物的另外的分析物塗覆的微粒群；其中，固相裝置 被維持在一定條件下，該條件允許流體通過毛細作用轉運接觸的另 外的分析物塗覆的微粒穿過固相裝置，到達和穿過每個樣品捕獲區， 從而允許接觸的另外的分析物塗覆的微粒與每個另外的樣品捕獲區 內的另外的樣品捕獲試劑相結合；其中，確定對應每種目標分析物 的校正的分析物塗覆的微粒的量，該量為每個相對應的另外的樣品 捕獲區內接觸的另外的分析物塗覆的微粒的量與所有樣品捕獲區和 對照捕獲區內所有的分析物塗覆的微粒的量的比值，其中，流體樣 品中每種目標分析物的量與相對應的校正的分析物塗覆的微粒的量負相關。
15. —種定量測定流體樣品中至少兩種目標分析物的量的方法， 包括a) 提供一個固相裝置，該固相裝置包括一個施加位點、至少兩 個樣品捕獲區和一個對照捕獲區；第一樣品捕獲區上吸附有第一樣 品捕獲試劑，第二樣品捕獲區上吸附有第二樣品捕獲試劑，對照捕 獲區上吸附有對照捕獲試劑；其中，施加位點、第一樣品捕獲區、 第二樣品捕獲區和對照捕獲區順序地位於固相裝置上；b) 提供一個樣品收集裝置，該樣品收集裝置包含分析物塗覆的微粒群，其中，分析物塗覆的微粒由第一分析物或第一分析物的類似物塗覆，以及由第二分析物或第二分析物的類似物塗覆；c) 以下任一i)向樣品收集裝置中引入流體樣品，產生混合的 流體樣品，隨後再向混合的流體樣品中引入緩衝液；ii)向樣品收集裝置中引入緩沖液，隨後再引入流體樣品；或者iii)通過向緩沖液 引入固體形成流體樣品，隨後將該流體樣品SI入樣品收集裝置中， 由此產生了包含接觸的分析物塗覆的微粒的緩衝的、混合的流體樣口P jd) 將緩衝的、混合的流體樣品施加到固相裝置的施加位點上；e) 將固相裝置維持在一定條件下，該條件允許流體通過毛細作 用轉運接觸的分析物塗覆的微粒穿過固相裝置，到達和穿過每個樣 品捕獲區，從而允許接觸的分析物塗覆的微粒與第 一樣品捕獲區內 的第 一 樣品捕獲試劑相結合，並允許接觸的分析物塗覆的微粒與第 二樣品捕獲區內的第二樣品捕獲試劑相結合；以及允許樣品中的流 體通過毛細作用轉運接觸的分析物塗覆的微粒穿過固相裝置，到達 和穿過對照捕獲區，從而允許接觸的分析物塗覆的微粒與對照捕獲 試劑相結合；f) 確定第一樣品捕獲區內接觸的分析物塗覆的微粒的量、第二 樣品捕獲區內接觸的分析物塗覆的微粒的量、以及對照捕獲區內接 觸的分析物塗覆的微粒的量；g) 確定第一校正的分析物塗覆的微粒的量，該量為第一樣品捕 獲區內接觸的分析物塗覆的微粒的量與第 一樣品捕獲區內接觸的分 析物塗覆的微粒的量、第二樣品捕獲區內接觸的分析物塗覆的微粒 的量以及對照捕獲區內接觸的分析物塗覆的微粒的量的總和的比 值；確定第二校正的分析物塗覆的微粒的量，該量為第二樣品捕獲 區內接觸的分析物塗覆的微粒的量與第 一 樣品捕獲區內接觸的分析 物塗覆的微粒的量、第二樣品捕獲區內接觸的分析物塗覆的微粒的 量以及對照捕獲區內接觸的分析物塗覆的微粒的量的總和的比值，其中，流體樣品中的第一種目標分析物的 與第一校正的分析物塗覆的微粒的量負相關，流體樣品中的第二種目標分析物的量與 第二校正的分析物塗覆的微粒的量負相關。
16. 根據權利要求15所述的方法，進一步包括定量測定一種或 多種另外的目標分析物的量，其中，所述固相裝置包含對應每種另 外的目標分析物的另外的樣品捕獲區，每個另外的樣品捕獲區上吸 附有一種樣品捕獲試劑；其中，樣品收集裝置中的分析物塗覆的微 粒進一步包含對應每種另外的目標分析物的塗覆在分析物塗覆的微 粒上的另外的分析物或分析物的類似物；其中，該固相裝置被維持 在一定條件下，該條件允許流體通過毛細作用轉運接觸的另外的分 析物塗覆的微粒穿過固相裝置，到達和穿過每個樣品捕獲區，從而 允許接觸的另外的分析物塗覆的微粒與每個另外的樣品捕獲區內的 另外的樣品捕獲試劑相結合；其中，確定對應每種目標分析物的校 正的分析物塗覆的微粒的量，該量為每個相對應的另外的樣品捕獲 區內接觸的另外的分析物塗覆的微粒的量與所有樣品捕獲區和對照 捕獲區內所有的分析物塗覆的微粒的量的比值，其中，流體樣品中 每種目標分析物的量與相對應的校正的分析物塗覆的微粒的量負相 關。
17. —種定量測定流體樣品中至少兩種目標分析物的量的方法， 包括a) 提供一個固相裝置，該固相裝置包括一個施加位點、至少兩 個樣品捕獲區和一個對照捕獲區；第一樣品捕獲區上吸附有第一樣 品捕獲試劑，第二樣品捕獲區上吸附有第二樣品捕獲試劑，對照捕 獲區上吸附有對照捕獲試劑；其中，每個樣品捕獲區和對照捕獲區 與施加位點之間的距離大約是等距的；b) 提供一個樣品收集裝置，該樣品收集裝置包含分析物塗覆的 微粒群，其中，分析物塗覆的微粒由第一分析物或第一分析物的類 似物塗覆，以及由第二分析物或第二分析物的類似物塗覆；c) 以下任一i)向樣品收集裝置中引入流體樣品，產生混合的 流體樣品，隨後再向混合的流體樣品中引入緩衝液；ii)向樣品收集裝置中引入緩衝液，隨後再引入流體樣品；或者iii)通過向緩衝液 中引入固體形成流體樣品，隨後將該流體樣品引入樣品收集裝置中， 由此產生包含接觸的分析物塗覆的微粒的緩衝的、混合的流體樣品；d) 將緩沖的、混合的流體樣品施加到固相裝置的施加位點上；e) 將固相裝置維持在一定條件下，該條件允許流體通過毛細作 用轉運接觸的分析物塗覆的微粒穿過固相裝置，到達和穿過每個樣 品捕獲區，從而允許接觸的分析物塗覆的微粒與第 一樣品捕獲區內 的第 一 樣品捕獲試劑相結合，並允許接觸的分析物塗覆的微粒與第 二樣品捕獲區內的第二樣品捕獲試劑相結合；以及允許樣品中的流 體通過毛細作用轉運接觸的分析物塗覆的微粒穿過固相裝置，到達 和穿過對照捕獲區，從而允許接觸的分析物塗覆的微粒與對照捕獲 試劑相結合；f) 確定第一樣品捕獲區內接觸的分析物塗覆的微粒的量、第二 樣品捕獲區內接觸的分析物塗覆的微粒的量、以及對照捕獲區內接 觸的分析物塗覆的微粒的量；g) 確定第一校正的分析物塗覆的微粒的量，該量為第一樣品捕 獲區內接觸的分析物塗覆的微粒的量與第 一樣品捕獲區內接觸的分 析物塗覆的微粒的量、第二樣品捕獲區內接觸的分析物塗覆的微粒 的量以及對照捕獲區內接觸的分析物塗覆的微粒的量的總和的比 值；確定第二校正的分析物塗覆的微粒的量，該量為第二樣品捕獲 區內接觸的分析物塗覆的微粒的量與第 一樣品捕獲區內接觸的分析 物塗覆的微粒的量、第二樣品捕獲區內接觸的分析物塗覆的微粒的 量以及對照捕獲區內接觸的分析物塗覆的微粒的量的總和的比值，其中，流體樣品中的第一種目標分析物的量與第一校正的分析 物塗覆的微粒的量負相關，流體樣品中的第二種目標分析物的量與 第二校正的分析物塗覆的微粒的量負相關。
18.根據權利要求17所述的方法，進一步包括定量測定一種或 多種另外的目標分析物的量，其中，所述固相裝置包含對應每種另 外的目標分析物的另外的樣品捕獲區，每個另外的樣品捕獲區上吸附有一種樣品捕獲試劑；其中，樣品收集裝置中的分析物塗覆的微 粒進一步包含對應每種另外的目標分析物的塗覆在分析物塗覆的微 粒上的另外的分析物或分析物的類似物；其中，該固相裝置被維持 在 一 定條件下，該條件允許流體通過毛細作用轉運接觸的另外的分 析物塗覆的微粒穿過固相裝置，到達和穿過每個樣品捕獲區，從而 允許接觸的另外的分析物塗覆的微粒與每個另外的樣品捕獲區內的 另外的樣品捕獲試劑相結合；其中，確定對應每種目標分析物的校 正的分析物塗覆的微粒的量，該量為每個相對應的另外的樣品捕獲 區內接觸的另外的分析物塗覆的微粒的量與所有樣品捕獲區和對照 捕獲區內所有的分析物塗覆的微粒的量的比值，其中，流體樣品中 每種目標分析物的量與相對應的校正的分析物塗覆的微粒的量負相 關。
19.根據權利要求3-18中任一項所述的方法，其中在確定所述 比值之前，從每個區內確定的微粒的量中減去檢測到的背景的量。
20..根據權利要求1 - 19中任一項所述的方法，其中所述固相裝 置是側向流動固相裝置。
21.根據權利要求1 - 19中任一項所述的方法，其中，所述固相 裝置是毛細流動固相裝置。
全文摘要
本申請公開了用於測定流體樣品中兩種或更多種目標分析物的量的方法，以及該方法中使用的試劑盒。該方法涉及確定檢測到的一種目標分析物的量與檢測到的每種目標分析物的量加上檢測到的對照的量的總和的比值，其中，每種目標分析物的量與每種目標分析物的比值正相關或負相關。
文檔編號G01N33/543GK101595388SQ200780049910
公開日2009年12月2日 申請日期2007年12月11日 優先權日2006年12月12日
發明者B·G·理查茲, P·C·哈裡斯, W·K·方 申請人:反應生物醫學公司