抗分泌蛋白的進一步醫療應用的製作方法

2023-05-28 08:35:36

專利名稱：抗分泌蛋白的進一步醫療應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及抗分泌蛋白，其具有等同功能活性的衍生物、同系物和/或 片段，和/或其藥物學活性鹽，對於製造用於治療和/或防止細胞膜中的脂筏 和/或細胞膜穴樣內陷、以及與脂筏和細胞膜穴樣內陷相關的結合蛋白、受
體、神經傳導物質、離子通道、水通道、細胞骨架和G-蛋白體系的結構異常 和機能障礙(包括攝入和釋放化合物)的藥物合成物的應用。本文使用該藥 物合成物調節和/或有益地影響細胞膜中脂筏、受體和/或細胞膜穴樣內陷的 結構、分布和多重機能。這些有益影響的例子能對抗機能異常，例如機能減 退或機能亢進，從而在結構和機能上使脂筏、受體和/或細胞膜穴樣內陷恢 復和/或正常化，以促進疾病、傷害、修復過程和其他機能障礙的生存和/或 恢復。另外，本發明涉及所述藥物合成物對於調節細胞產物的胞內運輸和釋 放、以及對於使組織成分的分布正常化的應用。
背景技術：
脂筏是細胞膜內形成專門區域的動態、異質微區，富含膽固醇和糖脂， 主要是鞘脂例如GMJ oss & Pawlina， 2006; Pollard & Earnshaw, 2002)。 它們在體外的一種定義是，用去塘劑Triton X-100萃取後以稀釋和冷態使 用時保持不溶狀態。這種去垢劑耐受性膜部分作為通過浮選梯度分離的低密 度帶回收。隨著細胞膜中膽固醇的消耗和分解，脂筏的普遍性降低。脂筏與 細胞骨架有關並且關係密切，脂筏也參與了細胞極化。它們構成專門的微區， 普遍存在於所有年齡段的細胞和組織的膜中，例如存在於胚胎、胎兒、以及 年輕、成年和老年個體中。
脂筏中富含對粘附和信號傳導至關重要的蛋白，例如受體、細胞粘附蛋白、離子轉運蛋白、離子通道絡合物包括例如水孔蛋白、以及趨化因子受體、 神經遞質受體、激素受體和生長因子受體。這些蛋白和蛋白質絡合物與胞內
G蛋白體系互相作用，所述胞內G蛋白體系將例如受體接受的信息傳遞給細 胞的細胞質和核(Dermine等，2001; Ross & Pawlina， 2006; Pollard & Earnshaw， 2002; Helms & Zurzolo， 2004; Chini & Parenti， 2004; Head 等，2006; Mahmutefendic等，2007)。己經證明，調節細胞活性的關鍵離子 (Ca2+)的分布和濃度與脂筏和細胞膜穴樣內陷密切相關。其他蛋白(例如 連接蛋白、CD38、 CD19、 Thy-1和CD59)通常經由糖基磷脂醯肌醇(GP1) 錨定蛋白和受體錨定至脂筏，使它們能夠與細胞機能相互作用。脂筏中富含 鞘脂並且由鞘脂表徵，鞘脂可以用神經節苷脂表示，其為霍亂毒素的目標。 另外，神經遞質受體、和突觸與神經元突起的成分、以及生長因子受體也包 括在脂筏中普遍存在的多種蛋白的範圍內，所述脂筏例如存在於高度專門化 的細胞如神經元中。對調節細胞機能和相互作用至關重要的鈣離子通道和傳 遞物質在很大程度上限制在脂筏內(A Spat， 2007)。觀察到脂筏的破壞會 限制或甚至阻礙細胞傳播通過細胞中Ca2+波的能力，就可以說明這一點。另 外，鈣離子脈衝對正常細胞和發生病理變化的細胞中的關鍵機能產生突然而 顯著的影響，例如細胞分裂、細胞存活和細胞死亡。
另外，人們認為脂筏在胞內蛋白運輸、受體和脂類動力學方面起到關鍵 作用。通過所有這些接受和傳輸蛋白的信息和作用都經由G-結合蛋白體系、 經由酶體系、或在細胞骨架的幫助下傳遞至細胞內部(Triantafilou & Triantafilou, 2004)。例如，已知脂筏的物理狀態是能夠通過傳導從而集 中並約束多種蛋白的活動性，從而幫助有能力的信號傳導絡合物進行動態組 裝。
而且，人們認為脂筏能夠調節細胞骨架的活化作用、信號傳導和重排， 從而使它們對控制細胞運動(包括定向遷移)的機制、以及保持細胞與相關 傳遞物質的形狀和尺寸而言至關重要。細胞骨架對細胞組成的胞內運輸以及 感知細胞的動態和靜態負荷也很重要。
因此，脂筏是動態結構，直徑通常為5-50納米左右，其變化範圍很大。 有許多方式可以證明脂筏的存在，例如，通過免疫組織化學和免疫化學手段 證明GMi，其對霍亂菌毒素具有很高的親合性。證明脂筏存在及其位置的另
5一種方式是，破壞細胞之後分離細胞膜，然後在指定溫度分離出去垢劑耐受
性部分，如常見生物學教科書中所述。可以使用筏蛋白、內陷蛋白和reggie 對脂筏進行免疫組織化學鑑別。在這些蛋白中，筏蛋白可以進一步與脂類小 滴結合。通過原子力顯微鏡以及在此基礎上增加的相關方法可以觀察到脂 筏。細胞與環糊精及其變體的接觸會使來自細胞膜的膽固醇耗盡，這是證明 脂筏普遍性的另一種方法。
細胞膜穴樣內陷是一種專門類型的脂筏，作為動態結構，其特徵是，膜 中富含膽固醇和鞘脂、作為環境和細胞內部之間以及連接細胞骨架的傳導信 號。與其他脂筏不同，細胞膜穴樣內陷較大，並且通常作為細胞膜中的瓶形 凹坑或內陷形式以及作為囊泡形式出現(Kurzchalia & Parton， 1999)。它 們的尺寸通常為0. 1微米左右，但是變化範圍很大。例如在心臟和平滑肌細 胞、內皮細胞、巨嗜細胞和脂肪細胞中普遍存在細胞膜穴樣內陷，即，幾乎 所有哺乳動物細胞中都存在，但是出現頻率的變化很大。
已知脂筏和細胞膜穴樣內陷能夠固定和影響NO (氮氧化物)產生體系。 除了將信號傳導至和傳導出細胞之外，細胞膜穴樣內陷還參與將流體和各種 化合物運輸至和運輸出細胞、細胞內吞作用、以及細胞及其環境中脂肪酸和 膽固醇的調節、運輸、排出和保持(Pohl等，2004; Rajendran等，2007)。 細胞膜穴樣內陷成分和脂筏進一步參與P澱粉質前體蛋白(PAPP)和澱粉 質P (AP)、優先與老年痴呆症(Alzheimer's disease)但也與其他神經退 化病症和神經外傷相關的蛋白的處理過程(Graham & Lantos， 2002)。
已知腫瘤細胞具有脂筏和細胞膜穴樣內陷。因此，例如可以通過破壞或 在可變程度上分解這些結構，從而抑制腫瘤細胞的生長和遷移(Marquez, D C等，2006; Freeman等，2007)。
脂筏和細胞膜穴樣內陷的重要性已經進一步在基因改良的動物中得到 說明。在產生內陷方面有缺陷的擊昏小鼠發生擴張性心肌病和肺高壓 (Mathew等，2004)。另外，脂筏和細胞膜穴樣內陷與胰島素刺激的遞質體 系(例如類固醇激素運輸體系)相關。
得出以下結論由高度動態的結構構成的脂筏和細胞膜穴樣內陷密切相 關，但是在某些方面也有分歧，脂筏和細胞膜穴樣內陷普遍存在於哺乳動物 細胞內，並且產生多種重要功能。現有方法能夠破壞或耗盡脂筏和細胞膜穴樣內陷，但是目前尚不知使脂筏、脂筏中組織的信號傳導與質量傳遞蛋白的 結構、分布、頻率和/或功能恢復和/或正常化的方法。
抗分泌蛋白是41kDa蛋白，最初描述為能防止腹瀉和腸炎(綜述參見 Lange和Lonnroth， 2001)。已知抗分泌蛋白的序列，並且克隆了其cDNA。 等同活性似乎主要由位於抗分泌蛋白序列上位置35和50之間的肽行使。免 疫化學和免疫組織化學研究顯示，抗分泌蛋白由體內大部分組織和器官表 達，並且也可以由它們合成。已經表徵了包含抗腹瀉序列的合成肽(WO 97/08202; WO 05/030246)。己經揭示抗分泌因子能夠使病態的體液傳輸和/ 或炎性反應正常化，例如用霍亂菌毒素激發之後在腸管和中樞神經系統的脈 絡叢中的情況(WO 97/08202)。因此，在WO 97/08202中建議可以在食物和 飼料中應用天然抗分泌因子來治療水腫、腹瀉、脫水和炎症。WO 98/21978 揭示具有酶活性的產物用於製造誘導抗分泌蛋白形成的食物的應用。TO 00/038535進一步揭示富含這種抗分泌蛋白的食品。
還顯示，在治療細胞損失和/或增益相關病症時，抗分泌蛋白及其片斷 能夠改善神經組織的修復以及幹細胞和祖細胞及其衍生細胞的增殖、凋亡、 分化和/或遷移(WO 05/030246)。
抗分泌因子(AF)(如WO 97/08202中詳細描述的特定蛋白質和肽)能 有效解除腸管中的高分泌性病症和疾病(如腹瀉)。涉及AF對高分泌性病症 的效果的其他例子有，例如炎性腸病、腦水腫、青光眼、顱內壓升高、Meniere 病(Morbus Meniere)和乳房炎。人們還認為AF能夠治療青光眼(WO 97/08202)。
目前已經認識到，在某些特定蛋白和相關化合物的幫助下，可以對因為 異常細胞機能、過度或異常負荷、感染、或者毒性化合物或藥物而發生改變 的脂筏的結構、普遍性、分布和功能進行調節、甚至使之正常化。
足以令人驚異的是，本發明的發明人已經能夠證明，抗分泌因子(AF) 蛋白及其衍生的肽(例如AF-16和AF-8)能夠影響因為細胞、組織和/或器 官中的異常細胞機能、過度或異常負荷、感染、或者毒性化合物和/或藥物 而發生改變的脂筏、受體和/或細胞膜穴樣內陷的結構、普遍性、分布和/或 功能，從而首次能夠對限於或關於脂筏和細胞膜穴樣內陷的機能進行調節、 控制、和/或甚至使其正常化。

發明內容
本發明涉及包含抗分泌蛋白，其具有抗分泌和/或等同功能和/或類似活 性的同系物、衍生物和/或片斷，和/或其藥物學活性鹽的藥物合成物，對於 製造用於治療和/或防止細胞膜中脂筏、受體和/或細胞膜穴樣內陷機能障礙 (例如機能異常、機能不足、機能減退和/或機能亢進)的藥物合成物的應 用。
本發明還涉及包含抗分泌蛋白，其具有等同和/或類似活性的同系物、 衍生物和/或片斷，或其藥物學活性鹽的藥物合成物，對於製造用於治療和/ 或防止各種與脂筏、受體和/或細胞膜穴樣內陷機能障礙相關的病症的藥物 合成物的應用，所述各種病症例如選自血管機能障礙、心血管機能障礙、肺 機能障礙、細胞和組織增生和/或肥大、心血管機能障礙、心肌病和肺高壓、 瘢痕組織形成、組織的過度反應性形成、和糖尿病(例如I型和/或II型糖 尿病)。
另外，本發明涉及包含抗分泌蛋白，其具有等同活性的同系物、衍生物 和/或片斷，或其藥物學活性鹽的藥物合成物，對於製造用於治療和/或防止 各種與脂筏和/或細胞膜穴樣內陷機能障礙相關的病症的藥物合成物的應 用，所述藥物合成物能有益地影響例如組分透過細胞障礙物的傳遞、組織和 器官的修復、組織的過度反應性形成、和/或上皮細胞覆蓋的修復和/再生。
另一方面，本發明涉及包含抗分泌蛋白，其具有等同功能活性的同系物、 衍生物和/或片斷，或其藥物學活性鹽，對於製造用於治療和/或防止各種與 脂筏和/或細胞膜穴樣內陷機能障礙相關的病症的藥物合成物的應用，所述 各種病症選自老年痴呆症、任何其他神經退化病症和神經外傷。
在一個優選實施方式中，所述抗分泌蛋白由根據下式的序列組成
X1-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5
其中XI是I、 SEQ ID NO 6的胺基酸1-35、或預設，X2是H、 R或K， X3是S或L， X4是T或A， X5是SEQ ID NO 6的胺基酸43-46、 43-51、 43-80 或43-163、或預設。
另外，本發明涉及治療和/或防止與脂筏、受體和/或細胞膜穴樣內陷機 能障礙相關的醫學病症(如上所述)的方法，所述方法包括給予需要的哺乳 動物治療有效量的藥物合成物，該合成物包含抗分泌蛋白、其具有等同活性的衍生物、同系物和/或片斷、和/或其藥物學活性鹽。
本發明還涉及適合於預期治療目的以及病人年齡、性別、病情等的各種 給藥劑量和途徑。
另外，所述藥物合成物當然可以包含兩種或更多種抗分泌蛋白，以及進 一步包含藥物學可接受賦形劑。本文所述的藥物合成物針對眼內、鼻內、口 服、局部、皮下和/或全身性給藥的目的配製，能夠例如針對作為噴霧、氣 溶膠通過吸入器或噴霧器給藥的目的配製。針對全身性給藥至血液的目的配
制時，所述合成物的配製劑量優選為每次每千克體重每天0. 1微克至10毫 克，例如劑量為每次每千克體重每天0. 1微克至1毫克，優選為每次每千克 體重每天1-500微克，例如每次每千克體重每天1-50微克。這種給藥方式 可以作為單劑量進行或者每天多次給藥。
一般來說，本發明涉及抗分泌蛋白，其具有等同活性的同系物、衍生物 和/或片斷，或其藥物學活性鹽，對於製造用於治療和/或防止各種與脂筏和 /或細胞膜穴樣內陷機能障礙有關的病症的藥物合成物的應用。在一個優選 實施方式中，可以使用所述合成物對細胞膜穴樣內陷和脂筏(即專門化的微 區)的結構、分布和功能進行調節和使其正常化，例如恢復它們的結構和功 能，從而促進疾病、傷害、修復過程和其他機能失調的恢復。另外，本發明 能夠調節胞內運輸和細胞產物的釋放，在發生各種疾病時使組織成分的分布 正常化，和/或調節反應性細胞和組織的形成，以及減少瘢痕組織(包括異 常組織和器官粘連)的形成。另外，還能使用所述合成物治療有毒性物質產 生的作用並調節它們的長期效果。在一個優選實施方式中，這種病症選自外 傷、醉酒、感染、畸形、哺乳動物體內細胞、組織和器官的退化和其他機能 失調或疾病。
不希望將本發明的範圍限制於特定理論，假定包含抗分泌蛋白、其具有 等同活性的衍生物、同系物和/或片斷、和/或其藥物學活性鹽的本發明組合 合成物能夠通過其有益影響作用於細胞膜中細胞膜穴樣內陷和/或脂筏的結 構、分布和/或功能。
附圖簡要說明


圖1:顯示具有缺陷GABA受體的細胞的細胞膜上的電勢差。添加了組胺或AF-16，這些化合物的效果以細胞膜上測得的電勢(I/Io)表示。
定義和縮寫 縮寫
BP:血壓；CSF:腦脊液；CNS:中樞神經系統，即大腦和脊髓；IFP: 間隙液壓；PH:肺高壓；PBS:磷酸鹽緩衝鹽水；AF:抗分泌因子；AF-16: 由胺基酸VCHSKTRSNPENNVGL構成的肽；八肽IVCHSKTR;七肽VCHSKTR;六 肽CHSKTR;五肽HSKTR。
定義
蛋白(質)是由胺基酸殘基通過肽鍵連接在一起構成的生物大分子。蛋 白(質)(作為胺基酸的線形聚合物)也稱為多肽。蛋白(質)通常具有50-800 個胺基酸殘基，因此分子量約為6000至幾十萬道爾頓或以上。小型的蛋白 (質)稱為肽或寡肽。在本申請文本中，術語"蛋白(質)"和"肽"可以 交換使用。
在本申請文本中，"藥物合成物"指包含治療活性量的抗分泌蛋白、任 選組合有藥物學活性賦形劑(例如載劑或載體)的合成物。所述藥物合成物 為適當的給藥途徑配製，給藥途徑根據病人情況以及其他因素(如年齡或優 選選項)變化。包含抗分泌蛋白的藥物合成物作為藥物遞送系統發揮作用。 給予的藥物合成物為病人或動物體提供活性物質。所述藥物合成物可以為例 如片劑、丸劑、錠劑、膠囊、栓劑、凝膠、溶液等，但是並不限於此。
術語"藥物學活性鹽"指抗分泌蛋白的鹽，其可以為基於所謂Hofmeiser 系列的、由抗分泌蛋白衍生的任何鹽。"藥物學活性鹽"的其他例子包括三 氟乙酸鹽、乙酸鹽和賴氨酸鹽酸(lysine chlirde)鹽，但是本發明並不限於 此。
在本申請文本中，術語"抗分泌"指抑制或減少分泌，特別是腸道分泌。 因此，術語"抗分泌蛋白"指能夠抑制或減少體內分泌的蛋白質。
在本申請文本中，"醫療食品"指使用含有抗分泌蛋白的合成物製造的 食物。所述食物可以為流體或固體形式的任何合適的食物，例如是液體或粉 末，或任何其他合適的食物。這些物質的例子參見WO 0038535。所述組成還 可以引起抗分泌蛋白的攝入、形成和釋放。在本申請文本中，"抗分泌蛋白"或其同系物、衍生物和/或片段可以與
術語"抗分泌因子"或專利WO 97/08202中定義的"抗分泌因子蛋白"交換 使用，是指抗分泌蛋白或肽或其具有抗分泌和/或等同功能和/或類似活性的 同系物、衍生物和/或片段。因此可以理解，本申請文本中的"抗分泌因子"、 "抗分泌因子蛋白"、"抗分泌肽"、"抗分泌片段"或"抗分泌蛋白"也可以 指其衍生物、同系物和/或片段。這些術語都可以在本發明的申請文本中交 換使用。而且，在本申請文本中，術語"抗分泌因子"可以縮寫成"AF"。 在本申請文本中，"抗分泌蛋白"還指如W0 97/08202和W0 00/38535中定 義的、具有抗分泌性質的蛋白質。在例如W0 05/030246中也揭示了抗分泌 因子。術語"抗分泌因子"還意指富含SE 900028-2和W0 00/38535中所揭 示的抗分泌因子的蛋黃，下文將進一步描述。
在本申請文本中，"噴霧器"指以氣霧形式將液體藥劑遞送至氣道的醫 療裝置。"噴霧器"的壓縮器迫使空氣通過管道進入充滿液體藥劑的藥劑杯 中。空氣的作用力使液體分散成細小氣霧樣顆粒，能夠深深吸入氣道中。
在本申請文本中，術語"氣溶膠"指細小固體或液體顆粒的氣相分散體。
發明詳細說明
在針對與脂筏和/或細胞膜穴樣內陷機能障礙相關的醫學病症的病理學 治療方面需要新的藥物，因為目前沒有充分的療法。抗分泌蛋白具有有益效 果，以下文本中將進行例證。
本發明涉及對細胞膜中普遍存在的脂筏和相關結構細胞膜穴樣內陷的 結構和功能進行調節。脂筏定義為膜微區，富含膽固醇，其中限制了對例如 離子傳輸、細胞粘附、生長、信號傳導和粘附至細胞骨架很重要的蛋白(例 如鞘脂，GMO。細胞膜穴樣內陷是泡形或瓶形結構，富含於例如心肺和血管 系統的細胞中，包括內皮細胞、平滑肌細胞、上皮細胞、纖維原細胞和心肌 細胞(Chan和Ye， 2007; Petersen等，2007)，由脂筏成分的一種或多種簇 形成。其他以單獨或組合方式相關的蛋白有筏蛋白、內陷蛋白和reggie;各 自存在若干變體。
細胞膜穴樣內陷普遍存在於例如心肌和平滑肌細胞、內皮細胞、巨嗜細 胞和脂肪細胞中，它們是一種專門類型的脂筏，作為動態結構，其特徵是， 膜中富含膽固醇和鞘脂、作為環境和細胞內部之間以及連接細胞骨架的傳導
ii信號。與其他脂筏不同，細胞膜穴樣內陷較大，並且通常作為細胞膜中的瓶
形凹坑或內陷形式以及作為囊泡形式出現。它們的尺寸通常為0. 1微米左右,
但是變化範圍很大。另外，糖基磷脂醯肌醇連接蛋白及其變體組成與所述結 構連接和相互作用的錨定蛋白。還已經揭示酶調節血管功能位於所述結構
中。這些動態膜成分經由G-蛋白體系與細胞內部連接，並經由細胞骨架與酶 體系連接，從而使得這些結構能夠影響和調節細胞機能。因此，已經揭示脂 筏和細胞膜穴樣內陷對於細胞結構和機能至關重要。目前沒有已知方法能夠 能夠調節這種膜結構(包括信號傳導和質量傳遞蛋白)的穩定化和正常化。 本發明涉及包含抗分泌蛋白，其具有等同活性的同系物、衍生物和/或 片斷，或其藥物學活性鹽，對於製造用於治療和/或防止細胞膜中脂筏和細 胞膜穴樣內陷機能障礙的藥物合成物和/或醫療食品的應用。本發明還涉及 治療和/或防止各種與脂筏和細胞膜穴樣內陷機能障礙相關的病症，例如成 分透過細胞障礙的傳遞、組織和器官的修復、細胞和組織的增生和/或肥大、 心血管機能、疤痕組織的形成、組織的過度反應性形成、上皮細胞的修復和 再生。
另外，本發明涉及用於治療脂筏和細胞膜穴樣內陷機能障礙和/或使其 正常化的方法，如上所述，所述方法包括給予需要的哺乳動物治療有效量的 藥物合成物和/或醫療食品，所述合成物和/或食品包含抗分泌蛋白、其具有 等同活性的衍生物、同系物、片斷、或其藥物學活性鹽。
本發明還涉及適合於預期治療目的以及病人年齡、性別、病情等的各種 給藥劑量和途徑。
根據本發明的治療可能最適合具有產生脂筏和細胞膜穴樣內陷機能障 礙的風險、已患有這種機能障礙、具有攝入或釋放致病物質的風險、或者已 經攝入或釋放致病物質的病況。另外，這種治療還有益於以細胞和胞外基質 組成異常周轉為特徵的其他病症。
目前的發現證明，抗分泌蛋白和肽可能對細胞膜中的脂筏產生作用，這 著實令本領域技術人員驚異。有大量平均尺寸小於1微米、稱作脂筏的微區， 它們的特徵是高濃度的膽固醇和鞘磷脂。脂筏包含多種參與質量傳遞和信號 傳導的內在膜蛋白和外周膜蛋白。這種信號傳導平臺浮在膜中，具有作為受 體、偶聯因子、效應酶和化合物、以及基質發揮適當功能的必需要素，從而能夠接受和傳遞特定離子、分子和信號。這些微區進一步與例如細胞骨架相 互作用，並且影響間隙液的組成和周轉量以及其壓力。另外，脂筏與細胞膜 穴樣內陷的周轉量、以及例如病毒的釋放和內在化相關。在細胞膜中存在生 長因子受體、炎性信號受體、離子通道、脂筏遞質的簇，發生著與每時每刻 的主要機能相關的動態變化。
抗分泌蛋白和肽(AF)的應用並不限於這些實施例中所述的組織、器官 和解剖結構，還包括也以脂筏和/或細胞膜穴樣內陷的機能障礙、機能異常、 機能減退或機能亢進為特徵的其他綜合症和病症。
抗分泌蛋白、肽、衍生物和類似物能夠調節參與質量傳遞和信號傳導的 脂筏和蛋白的機能，甚至使它們的機能正常化。所用寬泛的有效劑量範圍表 明，發生副作用以及未預料的併發症的風險非常低。因此，所用調節和控制 脂筏與細胞膜穴樣內陷相關結構和機能的方法能夠對細胞和組織上的過度 負荷進行治療，並且能夠通過適合個體響應、病情和/或不適的嚴重性的寬 泛劑量對病人進行治療。
在一方面，根據本發明的藥物合成物可以通過局部、局部原位、口服、 鼻內、皮下和/或經由血管或經由呼吸道全身性施用的方式給予。
抗分泌因子是體內自然產生的一類蛋白質。人抗分泌因子蛋白是41kDa 蛋白，從腦垂體分離時包含382個胺基酸。根據本發明的對脂筏正常化和/ 或細胞膜穴樣內陷監控具有有益效果的活性位點可以位於接近蛋白質N端的 區域中，定位於SEQ ID NO 6的胺基酸1-163，或者定位於該區域片段。
本發明的發明人已經指出，抗分泌因子在某種程度上類似於蛋白S5a, 也稱為Rpn 10,其構成所有細胞中佔主要成分的亞單位，26 S蛋白酶體， 更具體地說是位於19 S/PA 700 cap中。在本發明中，抗分泌蛋白定義為一 類具有相同功能性質的類似蛋白。蛋白酶體具有多種與剩餘蛋白以及短壽蛋 白、無用蛋白、變性蛋白、錯誤摺疊蛋白和異常蛋白的降解相關的功能。而 且，抗分泌因子/S5a/RpnlO參與細胞成分(最明顯的是指蛋白質)的分布和 傳輸。
根據本發明的抗分泌蛋白的類似物、衍生物和片段和/或肽都具有類似 的生物活性，能夠用於製造用於治療和/或防止脂筏和/或細胞膜穴樣內陷機 能障礙的藥劑，以及用於治療與脂筏和/或細胞膜穴樣內陷機能障礙相關的
13病症的方法中。在本申請文本中，類似物、衍生物和片段包含天然產生的抗
分泌蛋白的至少4個胺基酸，通過改變一個或多個胺基酸可以進一步改性， 從而在治療和/或防止與本發明相關的病症時，優化抗分泌因子的生物活性。 抗分泌蛋白的片段一般包含肽/胺基酸序列或其製得的片段，製得的蛋 白質中超過90% (例如95%、 96%、 97%、 98%或99%)是本發明的蛋白、肽和/ 或其片段。
而且，對於與根據本發明的抗分泌蛋白、肽、類似物、衍生物和/或片 段的胺基酸序列有至少70% (如至少72%、 75%、 77%、 80%、 82%、 85%、 87%、 90%、 91%、 92%、 93%、 94%、 95%、 96%、 97%、 98%或99%)相同的任何胺基酸 序列，也認為落在本發明範圍之內。在本申請文本中，術語"類似"和"相 同"可以交換使用，即，與另一種胺基酸序列具有指定程度相同性的胺基酸 序列相對於指定的胺基酸序列具有相同程度的類似性。
本申請文本中的"衍生物"意指這樣一種蛋白，其具有與本文所定義的 抗分泌因子相同的活性和/或功能相同的活性，直接或通過改性或部分取代 衍生自另一種物質，其中一種或多種胺基酸被另一種胺基酸取代，所述另一 種胺基酸可以是改性的胺基酸或非天然的胺基酸。例如，根據本發明的抗分 泌因子衍生物可以包含N端和/或C端保護基團。N端保護基團的一個例子包 括乙醯基。C端保護基團的一個例子包括醯胺。
"相對於參比胺基酸序列具有至少例如95%相同性的胺基酸序列的蛋 白、類似物、衍生物、肽和/或其片段"意指例如這種肽的胺基酸序列與參 比序列類似，區別在於，該胺基酸序列在參比胺基酸序列的每100個胺基酸 中可以包括最多5個點突變。換言之，要獲得相對於參比胺基酸序列具有至 少95%相同性的胺基酸序列的多肽，可以刪除參比序列中最多5%的胺基酸或 者用另 一種胺基酸取代，或者可以在參比序列中插入佔參比序列中胺基酸總 數最多5%的胺基酸。這些參比序列的突變可以在參比胺基酸序列的氨基或羧 基端位置或者這些端位之間的任何位置發生，獨立地插入參比序列中的氨基 酸之間或者作為一個或多個鄰接的基團插入參比序列中。
在本發明中，最適宜使用一種局部算法程序來確定類似性。局部算法程 序(例如Smith-Waterman)對一個序列中的子序列與另一個序列中的子序列 進行比較，找出子序列的組合以及那些子序列的隊列，產生最高整體類似性評分。允許時對內部空隙進行罰分。局部算法在比較具有共同的單個域或僅 只一個結合位點的兩個多域蛋白時能很好地工作。
確定相同性和類似性的方法編碼成公開可用的程序。確定兩個序列之間
的相同性和類似性的優選電腦程式方法包括但並不限於GCG程序包 (Devereux， J等(1994)) BLASTP， BLASTN和FASTA (Altschul， S.F.等 (1990))。 BLASTX程序由NCBI和其他來源公開(BLAST Manual, Altschul，
S.F.等，Altschul, S.F.等(1990))。各序列分析程序具有默認的評分矩陣
和默認的空隙罰分。 一般來說，分子學生物學家期望使用所選軟體程序建立
的默認設置。
本文定義的抗分泌蛋白、肽、或其具有等同活性的類似物、衍生物和/ 或片段可以具有4個或更多個胺基酸，例如具有5-16個胺基酸，例如5、 6、 7、 8、 9、 10、 11、 12、 13、 14、 15、 16、 17、 18、 19或20個胺基酸或更多。 在其他優選實施方式中，抗分泌因子由42、 43、 45、 46、 51、 80、 128、 129 或163個胺基酸組成。在優選實施方式中，抗分泌因子由5、 6、 7、 8或16 個胺基酸組成。
在另一個優選實施方式中，根據本發明的抗分泌蛋白、肽或其具有等同 活性的類似物、衍生物或片段由根據下式的序列組成 XI-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5
其中XI是I、 SEQ ID NO 6的胺基酸1-35、或預設，X2是H、 R或K， X3是S或L, X4是T或A， X5是SEQ ID NO 6的胺基酸43-46、 43-51、 43-80 或43-163、或預設。
根據本發明的抗分泌因子可以體內產生或體外產生，例如通過重組產 生、化學合成、和/或從抗分泌因子的天然產生來源(如豬腦垂體或鳥卵) 分離。形成之後，可以對抗分泌因子作進一步處理，例如通過化學或酶解成 較小的抗分泌活性片斷、或通過胺基酸改性作進一步處理。目前無法通過純 化獲得純淨形式的抗分泌因子。不過可以如W0 97/08202和W0 05/030246 中所述通過重組產生或合成生物活性的抗分泌因子蛋白。W0 97/08202還揭 示了這種蛋白的7-80個胺基酸的生物活性片斷的產生。
根據本發明的抗分泌因子可以進一步包含N端和/或C端保護基團。N 端保護基團的一個例子包括乙醯基。C端保護基團的一個例子包括醯胺。
15在本發明的一個優選實施方式中，抗分泌因子選自SEQ ID NO 6或是根 據SEQ ID NO 6的抗分泌蛋白的胺基酸序列，即VCHSKTRSNPE麗GL (SEQ ID NO 1,在本申請文本中也稱為AF-16)、 IVCHSKTR (SEQ ID NO 2)、 VCHSKTR (SEQ ID NO 3)、 CHSKTR (SEQ ID NO 4)、 HSKTR (SEQ ID NO 5)，這些序 列中使用共同的單字母縮寫表示胺基酸。在例如WO 05/030246中已經揭示 了 SEQ ID NO 1、 2和3。如所附序列表中指出的，可以用其他胺基酸代替以 上列出的序列中的一些胺基酸。在本段落的以下部分中，對特定胺基酸序列 中的特定胺基酸的位置進行計算，從左開始，將該特定序列中最靠近N端的 胺基酸表示為位置1。對於該序列中的任何其他胺基酸取代都可以獨立地進 行如下所示的任何胺基酸取代。在SEQ ID NO 1中，位置2的C可以被S取 代，位置3的H可以被R或K取代，位置4的S可以被L取代，並且/或者 位置6的T可以被A取代。在SEQ ID NO 2中，位置3的C可以被S取代， 位置4的H可以被R或K取代，位置5的S可以被L取代，並且/或者位置7 的T可以被A取代。在SEQ ID NO 3中，位置2的C可以被S取代，位置3 的H可以被R或K取代，位置4的S可以被L取代，並且/或者位置6的T 可以被A取代。在SEQ ID NO 4中，位置l的C可以被S取代，位置2的H 可以被R或K取代，位置3的S可以被L取代，並且/或者位置5的T可以 被A取代。在SEQ ID NO 5中，位置1的H可以被R或K取代，位置2的S 可以被L取代，並且/或者位置4的T可以被A取代。
本發明還預期了根據SEQ ID NO 1-6的任何片段中的兩種或更多種的組合。
在本發明的一個實施方式中，根據本發明的藥物合成物進一步包含藥物 學可接受賦形劑。本領域技術人員通過試驗可以輕易地確定藥物學可接受賦 形劑的選擇及其根據本發明使用的最佳濃度。根據本發明使用的藥物學可接 受賦形劑包括溶劑、緩衝劑、防腐劑、螯合劑、抗氧化劑、穩定劑、乳化劑、 懸浮劑和/或稀釋劑。本發明的藥物合成物可以根據傳統製藥實踐進行配製， 例如根據"Remingtom The science and practice of pharmacy",第21 版，ISBN 0-7817-4673-6或"Encyclopedia of pharmaceutical technology", 第2版，Swarbrick J.編，ISBN: 0-8247-2152-7。藥物學可接受賦形劑是 對給予該合成物的個體基本無害的物質。這種賦形劑通常滿足國家藥品管理署的要求。官方藥典如英國藥典、美國藥典和歐洲藥典為藥物學可接受賦形 劑制定了標準。
以下是根據本發明使用的相關藥物合成物的回顧。回顧的內容以特定給 藥途徑為基準。但是，應當理解，對於其中的藥物學可接受賦形劑以不同劑 型使用或用於不同合成物的情況中，特定藥物學可接受賦形劑的應用並不限 於特定劑型，也不限於特定的賦形劑功能。需要重點指出的是，本發明並不 限於下文提到的合成物的應用。
腸外合成物
對於全身性應用，根據本發明的合成物可以包含傳統的非毒性藥物學可 接受載體和賦形劑，包括微球體和脂質體。
根據本發明使用的合成物可以包括所有種類的固體、半固體和流體合成物。
藥物學可接受賦形劑可以包括溶劑、緩衝劑、防腐劑、螯合劑、抗氧化 劑、穩定劑、乳化劑、懸浮劑和/或稀釋劑。以下給出具體試劑的例子。 各種試劑的例子
溶劑的例子包括但並不限於水、醇類、血液、血漿、脊髓液、腹水和淋 巴液。
緩衝劑的例子包括但並不限於擰檬酸、乙酸、酒石酸、乳酸、磷酸氫鹽
(hydrogen phosphoric acid)、碳酸氫鹽、磷酸鹽、二乙胺等。 螯合劑的例子包括但並不限於EDTA鈉和檸檬酸。
抗氧化劑的例子包括但並不限於丁基化的羥基苯甲醚(BHA)、抗壞血酸 及其衍生物、維生素E及其衍生物、半胱氨酸、以及它們的混合物。
稀釋劑和崩解劑的例子包括但並不限於乳糖、蔗糖、EMDEX聚合糖、磷 酸鈣、碳酸鈣、硫酸鈣、甘露醇、澱粉和微晶纖維素。
粘結劑的例子包括但並不限於蔗糖、多糖、山梨糖醇、金合歡膠、藻酸 鈉、明膠、澱粉、纖維素、殼聚糖、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基 纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮和聚乙二醇。
在一方面，根據本發明的藥物合成物可以局部施用或經由靜脈內末梢注 射或經由肌肉內或皮下注射給藥至病人體內，或者經由口腔、肺部、鼻、皮 膚或口服途徑。而且，還可以通過外科插入病人腦室中的吻合分流給予藥物合成物。
在一個實施方式中，根據本發明使用的藥物合成物是為眼內、局部、鼻 內、口服、皮下和/或全身性給藥而配製的。在一個優選實施方式中，本發 明的合成物作為懸浮體、或甚至更優選作為噴霧吸入粉末、氣溶膠、通過鼻 腔吸入器或噴霧器通過呼吸道給予。
包含抗分泌因子的粉末形式藥物合成物在穩定性和劑型方面具有額外 優勢。根據本發明的藥物合成物還可以局部施用於眼內、鼻內、口服、皮下 和/或經由血管全身性施用。在一個優選實施方式中，針對靜脈內、肌肉內、 局部、口服或鼻施用的目的配製藥物合成物。通常，將本發明合成物局部施
用於眼時，每天的施用濃度為每次l微克至l毫克，優選每天50-250微克， 每天施用單劑量或重複多次施用(多劑量)，但並不限於此。
對血液進行全身性給藥時，其劑量通常為每次每千克體重0. 1微克至10 毫克，例如每次每千克體重0. 1微克至1毫克，優選每千克體重1-500微克， 優選每千克體重1-50微克，每天施用單劑量或重複多次施用。根據本發明 使用富含抗分泌因子的蛋黃時，優選口服給藥。
因此，本發明涉及抗分泌蛋白、或其具有等同活性的衍生物、類似物、 和/或片段、和/或其藥物學可接受鹽，對於製造用於治療和/或防止脂筏和/ 或細胞膜穴樣內陷機能障礙的藥物合成物和/或醫療食品的應用。在一個實 施方式中，所述抗分泌蛋白由根據下式的序列組成
XI-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5
其中XI是I、 SEQ ID NO 6的胺基酸1-35、或預設，X2是H、 R或K， X3是S或L， X4是T或A， X5是SEQ ID NO 6的胺基酸43-46、 43-51、 43-80 或43-163、或預設。在另一個實施方式中，本發明涉及包含如SEQ ID NO 1 中所示胺基酸序列的抗分泌蛋白的應用。在另一個實施方式中，本發明涉及 包含如SEQ ID NO 2中所示胺基酸序列的抗分泌蛋白的應用。在另一個實施 方式中，本發明涉及包含如SEQ ID NO 3中所示胺基酸序列的抗分泌蛋白的 應用。在另一個實施方式中，本發明涉及包含如SEQ IDN0 4中所示胺基酸 序列的抗分泌蛋白的應用。在另一個實施方式中，本發明涉及包含如SEQ ID NO 5中所示胺基酸序列的抗分泌蛋白的應用。
另外，在另一個實施方式中，本發明涉及包含如SEQ IDN0 6中所示胺基酸序列的抗分泌蛋白、或其包含SEQ ID NO 6的胺基酸38-42的類似物、 衍生物和/或片段的應用。
在另一個實施方式中，本發明涉及本文所述藥物合成物的應用，所述合 成物包含選自以下的兩種或更多種的抗分泌蛋白SEQ ID NO 1-6，其包含 SEQ ID NO 6的胺基酸38-42的類似物、衍生物和/或片段，或本文所示通式 揭示的序列。所述序列都同等優選地用於本發明中。
在一個本發明實施方式中，所述藥物合成物進一步包含藥物學可接受賦 形劑。這種賦形劑可以是適合特定目的的任何優選賦形劑。本文揭示了賦形 劑的例子。
在另一個本發明實施方式中，所述藥物合成物針對眼內、鼻內、口服、 局部、皮下和/或全身性給藥的目的配製。選擇的給藥途徑根據待治療病人 的情況以及病人的年齡和性別等因素變化。
在另一個實施方式中，藥物合成物針對作為噴霧、氣溶膠或通過噴霧器 或吸入器給藥的目的配製。在另一個實施方式中，本發明涉及針對向血液全 身性給藥的目的配製的藥物合成物和/或醫療食品，給藥劑量為每次每千克 體重每天0. 1微克至10毫克，例如每次每千克體重每天0. 1微克至1毫克， 優選每千克體重每天1-500微克，更優選每次每千克體重每天1-50微克。 在另一個實施方式中，所述劑量為每次每千克體重每天1-1000微克，例如 每次每千克體重每天1-100微克。向需要的病人提供的藥物組合物的量當然 需要根據病人的情況變化，由本領域技術人員例如醫師決定。所述給予可以 每天單劑量或多次進行。
在過去幾年中，越來越明顯的是，脂筏、細胞膜穴樣內陷和內陷蛋白參 與多種人類疾病狀態，例如但並不限於肌營養不良(例如肢帶型肌營養不 良)、細胞膽固醇不均衡(例如C型Niemann-Pick病)、和/或由澱粉樣前體 蛋白(APP)產生澱粉樣肽的機能障礙(例如老年痴呆症)。因此，本發明在 一個實施方式中還提供了本文所述的藥物合成物對於防止和/或治療肌營養 不良、細胞膽固醇不均衡、和/或由澱粉樣前體蛋白產生澱粉樣肽的機能障 礙。
脂筏代表這樣一類細胞微區，其中特定化學性質的脂類可以彼此動態結 合，用以形成對質量傳遞和信號傳導絡合物的膜蛋白分選和結構非常重要的
19平臺。
已知幾種細胞受體存在於細胞膜的脂筏和/或細胞膜穴樣內陷中，例如，
已經證明脂筏對於GPCR在其生命周期的所有階段的調節很重要，即在胞排 途徑中、在質膜中、以及在胞吞途徑中。發現脂筏和/或細胞膜穴樣內陷參 與了受體穩定性的調節、信號傳導調節、以及任何特定GPCR的傳輸。可以 進一步調節受體、離子通道和水通道蛋白、以及其他信號遞質的快速周轉。 因此在一個實施方式中，本發明涉及根據本發明的藥物合成物對於調節受體 穩定性、調節信號傳導、和/或存在於細胞膜中的一種或多種受體的傳輸的 應用。
許多受體的平均壽命不超過3-5小時。因此，新受體蛋白的恆定產生要 求所產生的受體蛋白穩固且適當地導向，並且固定在細胞膜中的適當位置 上。本發明揭示了根據本發明的藥物合成物對於提高和/或促進例如受體定 位於細胞膜中的潛在應用。
另外，目前的發現指出，傳統的類固醇激素受體存在於細胞膜中的脂筏 和/或細胞膜穴樣內陷中，因此可以在這些結構中並且在這些結構的幫助下 發揮作用。這些受體的例子包括但並不限於受體酪氨酸激酶(即EGFR)和雄 激素受體傳導途徑，Aktl, IL-6， STAT3，雌激素受體(ER)。因此，本發明 還提供了根據本發明的藥物合成物的應用，或者治療和/或防止與類固醇激 素受體機能障礙相關的病症的應用。
胰島素抵抗定義為細胞或組織響應胰島素生理學水平的能力降低，人們 認為胰島素抵抗是II型糖尿病的主要病理生理學缺陷。已知TNF a在這種抵 抗中起到主要作用，與其他細胞因子和淋巴因子可能發揮的作用相同。目前 已經清楚，激素的獨特作用與細胞膜中脂筏的信號傳導分子的區域化密切相 關。因此已經顯示，脂筏的恰當功能對於胰島素信號傳導的適當區域化很關 鍵，例如在脂肪細胞(apidocyte)中。導致胰島素代謝信號傳遞受到抑制和/ 或破壞的脂筏組織結構和/或功能的破壞，可能至少部分起因於鞘糖脂的異 常表達。在一個目前的優選實施方式中，本發明因此涉及包含抗分泌蛋白、 或其具有等同活性的衍生物、類似物和/或片斷、和/或其藥物學活性鹽的藥
物合成物對於使胰島素代謝信號傳導正常化的應用。因此，本發明在所述實 施方式中還涉及治療和/或防止糖尿病，例如II型糖尿病。脂筏和細胞膜穴樣內陷作為組織起來的信號傳導中心發揮作用。胰島素
受體和IC10都位於脂筏中。TC10對非脂筏微區的錯誤靶定阻礙了其被胰島 素激活並且妨礙了胰島素作用。許多研究已經證明，脂筏作為組織起來的胰 島素信號傳導中心在脂肪細胞(即idocyte)中發揮作用。激活的胰島素受體 專一地催化脂筏中某些蛋白的酪氨酸磷酸化作用，包括內陷蛋白和Cbl。胰 島素信號傳導的成分位於脂筏中，包括一些或全部的胰島素受體、筏蛋白、 和TCIO。
胰島素通過受到調節的囊泡循環剌激脂肪和肌肉細胞中的葡萄糖傳輸， 其中，將易化葡萄糖轉運蛋白Glut4從胞內位置移位至質膜。在未受刺激的 細胞中，Glut4經過細胞內吞作用進入內體，隨後分選至專一的儲存囊泡中， 在胰島素受體活化之後輸送至質膜。然後囊泡在膜上特定位置停靠並融合， 導致轉運蛋白發生胞外接觸。由胰島素受體連續產生的信號傳導包括一些胞 內物質的酪氨酸磷酸化作用、PI3-激酶途徑的活化、G-蛋白的活化，其隨後 與許多效應器結合，包括泡外蛋白Exo70。
而且，泡外複合物(包括Exo70、 Sec6和Sec8)參與了含有Glut4的囊 泡在細胞膜的脂筏微區中的區域化，例如在脂肪細胞中。部分泡外複合物在 被胰島素活化之後得到G-蛋白的補充，對於細胞中胰島素刺激的葡萄糖攝入 很重要。而且之後已經顯示，要在質膜中進行葡萄糖攝入和Glut4停靠，就 要求這些泡外複合物耙定脂筏。好奇的是，這些複合物還要求PDZ微區蛋白， 其在移位至脂筏後立刻與該複合物結合。脂筏的泡外組建為Glut4囊泡構建 目標位置，Glut4囊泡在用胰島素刺激細胞之後立刻與這些微區發生瞬間結合。
在本申請的實驗部分已經證明，本發明的發明人現在已經能夠顯示，抗 分泌因子對化學誘導糖尿病的症狀發展產生有益效果。具體地說，研究了用
AF-16進行治療是否能對通過用鏈脲黴素處理引起的試驗性誘導糖尿病產生 有益效果。在目前的一個優選實施方式中，本發明因此涉及包含抗分泌蛋白、 或其具有等同活性的衍生物、類似物和/或片斷、和/或其藥物學活性鹽的藥 物合成物對於治療和/或防止糖尿病和/或其相關併發症(例如I型和II型 糖尿病)病人的醫學病症的應用。
在本發明的進一步優選實施方式中，根據本發明的藥物合成物用於使肌肉細胞、內皮細胞、脂肪細胞和/或紅細胞中的脂筏形成和/或功能正常化，
用於治療和/或防止所述細胞中Glut4和/或泡外組件的機能障礙。因此，本 文中所述藥物合成物用於治療和/或防止糖尿病和/或其相關併發症，例如I 型和II型糖尿病。
細胞膜穴樣內陷是存在於質膜中的微區結構，其形成的細胞質載體參與 溶液的受體介導攝入進細胞中，還參與透過細胞的細胞轉移。雖然多種細胞 中都能找到細胞膜穴樣內陷，但是它們在脂肪細胞中特別豐富，在脂肪細胞 中，細胞膜穴樣內陷聚集成環形結構(細胞膜穴樣內陷玫瑰花結)，這種結 構經常與肌動蛋白微絲結合。細胞膜穴樣內陷參與細胞的脂肪酸攝入、脂肪 酸運輸和/或脂肪酸結合。而且，細胞膜穴樣內陷和內陷蛋白-1的特徵是， 它們參與向細胞表面的膽固醇運輸，可以通過細胞中的膽固醇水平對它們進 行調節。因此，本發明在進一步的實施方式中還涉及包含抗分泌蛋白、或其 具有等同活性的衍生物、類似物和/或片斷、和/或其藥物學活性鹽的藥物合 成物對於治療和/或防止與脂肪酸攝入、脂肪酸運輸、脂肪酸結合和/或膽固 醇水平機能障礙相關的醫學病症的應用。
細胞膜穴樣內陷機能障礙與幾種人類疾病相關。例如，零內陷蛋白-1 (CAV1)細胞顯示增殖加強，並且沒有CAV加速腫瘤發生的作用。在一些乳 癌中，CAV1下調，已經在人乳癌樣本中檢測到CAV1中的一些自然突變，專 一性地與雌激素受體ci陽性狀態關聯。CAV3 (肌肉專一性內陷蛋白同種型) 也與疾病密切相關。CAV3中的許多突變與一些人類肌肉病相關。
在另外的同樣優選實施方式中，使用根據本發明的藥物合成物使細胞膜 穴樣內陷結構和/或功能正常化，從而對抗病人體內的高血壓和/或使血壓穩 定。如實驗部分所證明的，用根據本發明的藥物合成物治療哺乳動物能減少 因為其體內小循環系統和大循環系統的hyperotony產生的併發症。因此， 本發明可以用於治療和/或防止心臟病發作、高血壓、肺病、血管系統上形 成斑和/或外傷，例如心臟、肺、以及激素機能障礙和調節障礙。
在另一方面，本發明涉及治療和/或防止哺乳動物體內脂筏和/或細胞膜 穴樣內陷機能障礙的方法，所述方法包括給予有效量的藥物合成物，所述合 成物包含抗分泌蛋白、或其具有等同機能活性的衍生物、類似物和/或片斷、 和/或其藥物學活性鹽。在一個實施方式中，本發明涉及方法，其中所述抗
22分泌蛋白由根據下式的序列組成XI-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5
其中，XI是I、 SEQ ID NO 6的胺基酸1-35、或預設，X2是H、 R或K，X3是S或L， X4是T或A， X5是SEQ ID NO 6的胺基酸43-46、 43-51、 43-80或43-163、或預設。在另一個實施方式中，本發明涉及方法，其中所述抗分泌蛋白包含如SEQ ID NO 1中所示的胺基酸序列。在另一個實施方式中，本發明涉及方法，其中所述抗分泌蛋白包含如SEQ ID NO 2中所示的胺基酸序列。在另一個實施方式中，本發明涉及方法，其中所述抗分泌蛋白包含如SEQID NO 3中所示的胺基酸序列。另外，本發明涉及方法，其中所述抗分泌蛋白包含如SEQ IDN0 4中所示的胺基酸序列。在另一個實施方式中，本發明涉及方法，其中所述抗分泌蛋白包含如SEQ ID NO 5中所示的胺基酸序列。在另一個實施方式中，本發明涉及方法，其中所述抗分泌蛋白是具有如SEQIDN0 6中所示的胺基酸序列的蛋白，或是其包含SEQ IDN06的胺基酸38-42的類似物、衍生物和/或片斷。在一個實施方式中，本發明涉及方法，其中所述藥物合成物包含兩種或更多種選自以下的蛋白蛋白SEQ ID NO 1-6，其包含SEQ ID NO 6的胺基酸38-42的類似物、衍生物和/或片斷，或本文通式所述的序列。在一個實施方式中，所述藥物合成物針對眼內、鼻內、口服、局部、皮下和/或全身性給藥的目的配製。在另一個實施方式中，所述藥物合成物和/或醫療食品針對作為噴霧、氣溶膠或者通過噴霧器或吸入器給藥的目的配製。本發明的實施方式還包括方法，其中所述藥物合成物針對向血液全身性給藥的目的配製，給藥劑量為每次每千克體重每天0. 1微克至10毫克，例如每次每千克體重每天0.1微克至1毫克，優選每次每千克體重每天1-500微克，更優選每次每千克體重每天1-50微克。在所述方法的一個實施方式中，所述給藥作為單劑量進行或者每天多次給藥。本發明還涉及用於治療和/或防止哺乳動物體內脂筏和/或細胞膜穴樣內陷機能障礙的方法，所述方法包括給予有效量的藥物合成物，所述合成物包含抗分泌蛋白、或其具有等同機能活性的衍生物、類似物和/或片斷、和/或其藥物學活性鹽。
在一個優選實施方式中，本發明還涉及用於治療和/或防止哺乳動物體內脂筏和/或細胞膜穴樣內陷機能障礙的方法，所述方法包括給予有效量的藥物合成物，所述合成物包含抗分泌蛋白、或其具有等同活性的衍生物、類
23似物和/或片斷、和/或其藥物學活性鹽。
要需要理解和清楚的是，根據本發明的方法和/或藥物合成物的第二醫療應用涉及本文所述的與脂筏和/或細胞膜穴樣內陷機能障礙相關的所有病症，其中，所述方法包括給予哺乳動物有效量的藥物合成物，所述藥物合成物包含抗分泌蛋白、或其具有等同活性的衍生物、類似物和/或片斷、和/或其藥物學活性鹽。
賊雄方《
本發明優選實施方式實施例1
對年輕和成年大鼠(體重150-300克，性別不限)進行試驗處理，在肺部引起肺動脈高壓和反應性變化。肺動脈高壓(PH)定義為壓力超過正常肺動脈高壓(約20毫米汞柱)，通常為30-40毫米滎柱。這是一種人類和動物的高發病率和死亡率進行性疾病。通過試驗模型能夠研究引發機制。用野百合鹼簡單地處理大鼠是引起PH的既定手段(參見Mathew等，2004)。這種植物鹼在肝中活化成吡咯代謝物，半壽命僅幾秒，因此主要影響肺動脈內皮，使內皮細胞損壞而且肺部血管洩漏。在對肺動脈內皮細胞DNA合成和肥大進行顯著剌激之後的幾天內發生以上情況。人們認為這些內皮細胞分泌生長和運動促進性因子，有助於相鄰平滑肌細胞的遷移和反應性改變。在兩周內，右心室因為肺部血管系統中由野百合鹼引起的變化導致的負荷升高而發生肥大。
對白化(Sprague-Dawley)大鼠組進行單腹膜內注射野百合鹼(每千克體重60毫克，Sigma)。在該組中二選一在背部皮下植入Alzet滲透性微泵(2001
型；填充體積約235微升；泵速約1微升/小時；預啟動；填充溶液包含溶
解在PBS中、添加了 15%乙醇的20毫克/毫升AF-16)。微泵每小時遞送約20微克AF-16,持續至少10天。在一個試驗中，植入有Alzet 2001微泵的大鼠在植入處再接受單肌肉內注射2毫克AF-16。作為對比，注射了野百合鹼的其他大鼠植入填充有載劑PBS和15%乙醇的Alzet 2001微泵。另外一組體重匹配的大鼠植入填充有AF-16或載劑在微泵，但是沒有接受野百合鹼注射。18天之後，麻醉大鼠並測量體重。與未接受處理的正常對照組相比，接受了野百合鹼處理的大鼠在同年齡中顯得瘦小，不太活躍，毛色無光澤，
體重較輕。接受了野百合鹼處理並且藉助微泵注射了 AF的大鼠顯得健康，具有與對照組幾乎相同的體重和外觀。藉助通過右頸靜脈插入的光纖微型傳導系統(Samba System 3200 & Samba Preclin 420傳感器；Samba SensorsAB， V.Frolunda， Sweden)測量右心室壓力。經過載劑處理或AF-16處理的大鼠的平均肺動脈血壓約微20毫米汞柱。相反，經過野百合鹼處理(單皮下注射；每千克體重60毫克；野百合鹼溶解在PBS中)並且通過Alzet微泵遞送18天載劑的大鼠的肺動脈壓超過30毫米汞柱，而且右心室肥大(通過將這組大鼠的右心室淨重與左心室、以及未接受處理的正常大鼠的相應結構重量進行比較而確定)。用AF-16治療經過野百合鹼處理的大鼠，與正常未接受處理的大鼠相比，使右心室血壓和肺動脈血壓接近正常，並且右心室沒有明顯肥大。這些結果是可重現的，重複進行時始終獲得相同結果。已知野百合鹼衍生的化合物會造成例如內陷蛋白遭破壞，導致細胞膜穴樣內陷和脂筏解體，使得PH模型中的內皮細胞信號傳導出現變化(Mathew R.等，2004)。
我們得出以下結論野百合鹼處理之後用AF-16進行治療，消除了肺部血管系統的重建，由此消除肺部病態和右心室肥大的出現。通過用AF-16進行治療，減輕了對內皮和血管平滑肌細胞中脂筏和細胞膜穴樣內陷的傷害並隨之減輕反應性改變，不會導致預料中的血管異常，也不會導致右心室肥大。
實施例2
在第二個試驗中，研究了給予以上證明劑量的AF-16以消除肺動脈高壓的發展、影響受傷動脈的癒合過程的情況。
在麻醉成年大鼠的背部皮下植入滲透性微泵(Alzet 2001型；填充體
積約235微升；泵速約l微升/小時；預啟動；填充溶液包含溶解在PBS中、
添加有15呢乙醇的10毫克/毫升AF-16)。另外，在植入之後立刻肌肉內注射1毫克AF-16。然後，剃除右腹股溝皮膚上的體毛，切開，分離出右股動脈和髂總動脈。在動脈周圍夾上Pean止血鉗並封閉三次，每次15秒，然後移開。要特別小心，不要在血管或任何周圍結構中穿孔。檢查股動脈和髂動脈的柔韌性，保證適當的血循環。然後整理和縫合創傷邊緣。對其他大鼠進行平行試驗，也夾住它們的右股動脈和髂總動脈，但是注射載劑15%乙醇的PBS
25和而非活性物質。
10天之後，再次麻醉這些大鼠，注射每千克體重1毫升以下混合物29&Evans藍和39&白蛋白(牛血清白蛋白Sigma)，溶解在PBS中。15分鐘之後，固定這些大鼠，先用添加了肝素的PBS衝洗，然後穿心灌注緩衝的福馬林-鹽水溶液。小心地分離右髂和左髂以及股動脈，在它們的端部固定，浸入福馬林的PBS溶液中。l小時之後，用小剪刀縱向剪開血管，觀察動脈壁照亮面上藍色染跡的普遍性情況。保持原狀的動脈顯示其照亮面上沒有染跡。相反，右髂和股動脈受到外傷並且用載劑處理之後，顯示整個受傷血管壁上有連續、明顯、強烈的藍色染跡，具有相當分明的邊界。對於第三組大鼠，它們在受傷之後用AF-16進行了處理，它們的受過外傷的髂動脈和股動脈具有點狀、形狀不規則、不連續的藍色染跡，在受傷的血管區內被未染色區域分隔開。通過視覺判斷，在這些經過AF-16治療的大鼠中，受傷區內超過一半的面積未染色。這意味著AF-16促進了原來裸露的血管內壁的恢復，使細胞覆蓋在裸露內壁上。而且，與受傷後用載劑治療的大鼠相比，觀察到的凝塊較少。用光學顯微鏡觀察受傷區域後發現，對於經過AF-16治療的大鼠，與用載劑治療的大鼠相比，前者的受傷組織上和受傷組織內的白細胞、血小板、巨嗜細胞和泡沬細胞的數量較少。而且，表面上連接有較少的單核細胞。發現平滑肌細胞侵入近腔層，但是與用載劑進行治療的情況相比，用AF-16治療後的侵入程度較小。內皮細胞、成纖維細胞和平滑肌細胞處於正常情況中，其特徵是，質膜上和質膜中具有豐富的細胞膜穴樣內陷和囊泡。血管發生機械外傷時和之後，這些表面結構發生錯亂，並且以相當大的程度保持至少10天，g卩，本試驗研究的時間段。但是，對於經過AF-16治療的大鼠，與經過載劑治療的普遍性情況相比，前者發生了明顯的正常化傾向。已知上述種類細胞的信號傳導主要通過脂筏和細胞膜穴樣內陷介導。因此得出以下結論用AF-16進行治療減輕了受傷血管中的炎性和反應性改變，使這些區域中的細胞結構和機能發生相當大程度的正常化。AF-16通過影響脂筏和細胞膜穴樣內陷發揮了其有益作用。
實施例3
本試驗研究給予AF-16影響受傷皮膚和軟骨癒合過程的情況，以大鼠耳部凍傷為模型系統。在麻醉大鼠背部皮下植入滲透性微泵(Alzet 2001型；填充體積約235微升；泵速約l微升/小時；預啟動；填充溶液包含溶解在PBS中、添加有159&乙醇的20毫克/毫升AF-16)。在微泵植入之後，立刻另外肌肉內注射l毫克AF-16。然後以標準方式藉助Pean止血鉗壓住耳部，在液氮中冷卻，施以凍傷。為了進行對比，以相同方式用載劑PBS和159&乙醇(無肽)對其他大鼠進行平行試驗。另外，沒有發生任何凍傷的正常大鼠(植入了加有AF-16的微泵)作為對照。
凍傷之後，用AF-16治療大鼠2周，與受傷但用載劑治療的大鼠相比，前者的水腫和炎症較少。在受傷的耳中彈性軟骨邊緣各側形成了新的透明軟骨。用AF-16治療2周的大鼠，其殘餘彈性軟骨壞死較少，封閉的透明軟骨的顯著形成較少，水腫和炎性細胞滲透較少。與用載劑治療的大鼠相比，用AF-16治療的大鼠中的膠原蛋白量和炎性細胞密度小。用載劑或AF-16對未受傷大鼠進行治療不會改變耳中結構。
得出以下結論如果用AF-16治療大鼠，則更有益於受傷皮膚和下方軟骨的癒合過程，並且形成較少的瘢痕組織。與在用AF-16治療的大鼠中觀察到的情況相比，用載劑治療的受傷區域中，凍傷更為顯著地減少了細胞中的細胞膜穴樣內陷數量。
實施例4
研究成年兔在給予AF-16時影響受傷皮膚和骨膜癒合過程的情況。在麻醉成年紐西蘭白兔(雌性，體重2.5-2.8千克)外科暴露頭蓋骨上粘合玻璃纖維加強塑料製成的頭盔。在兔子的耳靜脈中靜脈內注射AF-16或載劑。AF-16劑量不超過每千克體重5毫克，每天兩次。 一周之後肉眼觀察顱頂皮膚傷和耳中注射位置。然後從這兩個區域中解剖出樣本，通過固定、嵌埋、切片和染色，進行光學顯微鏡檢査。經過AF-16治療的樣本在癒合皮膚中的水腫普遍性較小，炎症較輕，沒有象載劑治療兔樣本中的明顯、肥大的瘢痕組織。光學顯微鏡研究證明，與經過載劑治療的兔樣本相比，經過AF-16治療的兔樣本具有較少的炎性細胞和較少的膠原蛋白。而且，經過AF-16治療的兔樣本的血管更成熟。
得出以下結論AF-16促進深層皮膚傷的癒合，減輕炎症，降低水腫和過度瘢痕組織的普遍性。AF治療似乎能使細胞膜穴樣內陷頻率降低的情況變
27得比載劑治療中觀察到的更正常。
實施例5
研究成年大鼠的試驗性引發胃部傷口癒合受給予AF-16影響的情況。在麻醉大鼠的背部皮下植入滲透性微泵(Alzet 2001型；填充體積約
235微升；泵速約l微升/小時；預啟動；填充溶液包含溶解在PBS中的、添
加有15%乙醇的20毫克/毫升AF-16)。在植入微泵之後立刻再肌肉內注射2毫克AF-16。然後，剃除腹部體毛，露出腹面，注意不要使相鄰不同器官和結構乾燥或造成機械傷害。然後使胃的腺體(遠端)部分接觸80%乙酸(裝在玻璃管中)，保持60秒。然後迅速移開玻璃管，用大量PBS衝洗暴露的絨膜。縫合關閉腹腔。以相同方式對其他大鼠進行平行試驗，但是微泵中裝有載劑，並注射相同體積的載劑。 一周之後，再次麻醉大鼠，暴露出腹面並外科打開。研究粘連和腹水的普遍性，以及胃潰瘍的癒合。與用載劑治療的大鼠相比，用AF-16治療的大鼠腹腔中的液體較少。用AF-16治療的大鼠的大網膜和胃、腸、脾、肝以及腹壁傷口之間的粘連程度較小，發生粘連的程度較輕，範圍較小。光學顯微鏡觀察證明了肉眼觀察的結果，即胃壁水腫較輕。用AF-16治療之後，胃內表面上的上皮覆蓋更完整，範圍更廣，組織結構顯得更好。而且，用AF-16治療之後，胃壁中炎性細胞的滲透更少。得出以下結論AF-16促進了胃壁傷口的癒合。而且，出現腹水的普遍性降低，腹內粘連的程度和嚴重性也降低。實施例6
在另一個試驗中，研究了給予AF-16影響植入外來材料的體內生物整合的情況。
在麻醉成年大鼠背部皮下植入滲透性微泵(Alzet 2001型；填充體積約235微升；泵速約l微升/小時；預啟動；填充溶液包含溶解在PBS中的、
添加有15%乙醇的10或20毫克/毫升AF-16)。植入之後立刻再注射2毫克AF-16。植入物由薄膜(1X2釐米)、縫線和都由可降解聚氨酯(Artelon⑧，來自Artimplant， V. Frolunda， Sweden的禮物)製成的泡沫(0.2X0.5X1釐米；目的是擴大)組成。在其他大鼠的相同部位(背部肌膜下方)植入相同材料進行平行試驗。儘可能輕柔地進行植入過程，避免流血和過多組織破壞。然後如上所述，在用AF-16或載劑治療的大鼠中植入殼聚糖海綿和殼聚糖膜(Medicarb AB， Bromma， Sweden)。
10天之後對染色薄切片進行肉眼和光學顯微鏡檢查發現，用AF-16治療的大鼠中，植入物的生物整合優秀。對於用AF-16治療的大鼠，沿著植入物邊緣的炎性細胞和巨嗜細胞較少，成纖維細胞進入泡沫植入物。另外，與用載劑治療的情況相比，用AF-16治療的大鼠的皮膚傷口癒合顯得更成熟，反應性改變較少。已知導致反應性組織改變的信號傳導包括通過受傷組織中細胞的脂筏和細胞膜穴樣內陷進行信號傳遞。
實施例7
進行試驗研究給予AF-16影響體內器官中缺血反應的情況。在麻醉成年大鼠背部皮下植入滲透性微泵(Alzet 2001型；填充體積
約235微升；泵速約l微升/小時；預啟動；填充溶液包含溶解在PBS中的、
添加有15%乙醇的20毫克/毫升AF-16)。在植入微泵之後立刻再肌肉內注射2毫克AF-16。通過堵塞流過腎動脈的血流40分鐘，然後使血液再流通，在左腎單側引起缺血。在夾住動脈期間外科摘除右腎。然後關閉傷口，使大鼠接受鎮痛藥但是沒有其他治療。其他大鼠平行地在左腎發生缺血並摘除右腎，接受載劑但是不含肽。4或7天之後，再次麻醉這些大鼠。分離出腎，檢查、測量並稱重，固定在緩衝的福馬林溶液中，供進一步光學顯微鏡觀察。
該試驗揭示，在近端小管中發生最明顯的缺血和反應性改變。用AF-16治療的情況中，流血和壞死現象較少。實施例8
對贅生性腫瘤進行試驗，研究這些腫瘤生長受AF-16治療的影響的情況。
在麻醉成年大鼠背部皮下植入滲透性微泵(Alzet 2001型；填充體積
約235微升；泵速約l微升/小時；預啟動；填充溶液包含溶解在PBS中的、
添加有15%乙醇的20毫克/毫升AF-16)。在植入微泵之後立刻再肌肉內注射2毫克AF-16。 一周換一個新的微泵。研究化學誘導或移植的不同腫瘤受到給予AF-16的影響的情況，與用載劑治療的情況進行對比。
接受了致癌化學劑的大鼠在用AF-16治療之後發生乳房腫瘤的頻率低於用載劑治療的情況。反應性和炎性變化也不太明顯。還研究了其他試驗性腫瘤，與用載劑治療的情況相比，在用AF-16治療的大鼠中實現了有益效果。實施例9
通過用鏈脲黴素進行處理，在大鼠中試驗性地引發糖尿病，進行試驗研究AF-16治療影響的情況。
在麻醉的成年大鼠背部皮下植入滲透性微泵(Alzet 2001型；填充體
積約235微升；泵速約1微升/小時；預啟動；填充溶液包含溶解在PBS中
的、添加有159&乙醇的20毫克/毫升AF-16)。為了進行對比，其他大鼠用載劑(不含肽)進行治療。在大鼠中注射單劑量鏈脲黴素(Sigma),用商品試棒檢査尿中葡萄糖的出現，並觀察體積增多的尿的外觀。
根據我們的預測結果，用AF-16治療會減少尿中葡萄糖損失並減少尿量。用AF-16治療之後血糖植降低。
因此，AF-16對化學引發糖尿病的症狀發展產生有益效果。
實施例10
對患有n型糖尿病的人類對象給予AF，進行試驗。該研究對醫師和病人都是保密進行的。所有病人都患有II型糖尿病，都在瑞典倫德市的大學醫院(University Hospital, Lund, Sweden)對糖尿病之外的其他疾病進行了徹底的檢査。地區委員會批准了道德許可。 一組x個對象給予AF，第二組x個對象給予相同量的對照物質，用於進行對比。12周之後，採血樣並進行分析。
觀察到的結果是，與給予非活性溶液的情況相比，給予AF的對象的HbAlc水平顯著降低(p》0.05),降低2個單位。這意味著，與對比組(安慰劑)的情況相比，給予AF的對象的血糖值保持較低水平，並且得到較好的控制。因此，對於給予AF的對象，實現了對II型糖尿病的有益效果。
實施例11
鈣離子濃度的高低變化構成許多種細胞(例如神經元，以及大腦、脊髓和視網膜中普遍存在的星形膠質細胞)中信號傳導機制的關鍵部分。而且，已經揭示內分泌細胞(例如胰腺e細胞)具有脈動的胰島素分泌。還顯示內分泌胰腺細胞在例如攝入葡萄糖時具有相關的離子變化。人們認為星形細胞的鈣離子濃度高低變化略受幹擾就會擾亂例如細胞外穀氨酸的調節作用，其本質上會導致局部微神經膠質活化，產生促炎性反應的細胞因子、星形膠質細胞溶脹，並且由於這種溶脹，減小細胞外空間，最終導致腦損傷。在這些情況發生期間，穀氨酸釋放減少，神經元傳遞減少。大腦中這種傳遞減少和活動擾亂暫時性地與神經系統機能障礙、病理心理神經活動和表現相關。
進行試驗說明神經組織中星形膠質細胞的鈣離子濃度高低變化。通過刺
激引起高低變化，例如組胺和/或單胺能遞質，證明特定蛋白如AF能調節其活性。藉助鈣結合化合物確定鈣離子的局部濃度，鈣結合化合物的螢光隨著細胞內鈣離子的濃度發生定量和定性的變化。對主要體外培養的神經元的星形膠質細胞進行螢光顯微分析和共焦掃描顯微分析。進一步使用電生理學手段。在細胞中添加指定濃度的AF，從而確定其對細胞脂筏中離子遞質系統的影響。
另外，對不同種類的肌肉細胞和結締組織進行類似分析，以確定添加AF和相關化合物之前、之時與之後，這些細胞的細胞質中鈣離子濃度高低變化的普遍性、頻率和變化幅度。
由代表性的附圖1可以看出，細胞、組織和/或器官中鈣離子濃度高低變化的調節的確能調節這種信號傳遞機能障礙並促進正常化。從而能夠治療機能障礙和疾病。
實施例12
水孔蛋白是結合在膜中的一類蛋白，在所有活細胞和生物體內都有表達。水孔蛋白的主要功能是調節進出細胞的水流，即細胞的細胞質與細胞外環境之間。各種細胞、組織和器官都有其特定的水孔蛋白組，具有特徵性的分布。功能性水孔蛋白優勢性地聚集在脂筏和內陷囊中，而在這些膜成分外部可以驗證亞單位和解離的水孔蛋白複合物。
對大腦和脊髓進行的試驗揭示，在發生缺血或畸變和機械負荷時，水孔蛋白(主要是水孔蛋白l和水孔蛋白4)的表達和分布會發生變化。而且，發生大腦和脊髓感染(例如腦炎)時，這兩種水孔蛋白的分布和濃度會發生變化，這是免疫組織化學和免疫化學已經揭示的。例如神經元和支持膠質細胞與血管結構之間的相互作用似乎是錯綜複雜但又很重要的。
已經進行了各種試驗就腫瘤、感染和其他病症的情況進行了說明。給予AF蛋白、肽、衍生物和類似物，作為單劑量遞送、多次給藥或在治療對象剩餘壽命內長期給藥，進行局部和全身性治療。效果的特徵是定量和定性的，而且對體內不同種類的水孔蛋白的結構和功能都有重要效果。試驗證明，AF對調節水孔蛋白和離子通道複合物的普遍性、分布和活性具有很大影響並甚至能使這些普遍性、分布和活性正常化。從而建立起基於已獲得結果的、新的重要治療方法。1, Chini & Parenti. 20042> Oermine et a)., 200153. Freeman et al" 2007
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3權利要求
1. 抗分泌蛋白，其具有等同活性的衍生物、同系物和/或片段，和/或其藥物學活性鹽，對於製造用於治療和/或防止細胞膜中脂筏、受體和/或細胞膜穴樣內陷的機能障礙的藥物合成物的應用。
2. 如權利要求1所述的應用，其特徵在於，所述細胞膜中脂筏、受體 和/或細胞膜穴樣內陷的機能障礙選自機能異常、機能減退和機能亢進。
3. 如權利要求l-2中任一項所述的應用，其特徵在於，用於治療和/或 防止血管機能障礙。
4. 如權利要求1-2中任一項所述的應用，其特徵在於，用於治療和/或 防止心血管機能障礙。 ，
5. 如權利要求1-2中任一項所述的應用，其特徵在於，用於治療和/或 防止肺機能障礙。
6. 如權利要求1-2中任一項所述的應用，其特徵在於，用於治療和/或 防止糖尿病和糖尿病相關併發症。
7. 如權利要求1-2中任一項所述的應用，其特徵在於，用於治療和/或 防止瘢痕組織形成、組織和器官修復、組織的過度反應性形成、和/或上皮 細胞覆蓋的修復與再生。
8. 如權利要求1-2中任一項所述的應用，其特徵在於，用於促進植入 至哺乳動物體內的外來材料的生物整合的改良。
9. 如權利要求l-2中任一項所述的應用，其特徵在於，用於治療和/或 防止細胞和組織的增生和/或肥大。
10. 如權利要求1-2中任一項所述的應用，其特徵在於，用於治療和/ 或防止心肌病和肺病。
11. 如權利要求1-2中任一項所述的應用，其特徵在於，用於治療和/ 或防止腫瘤及其併發症。
12. 如權利要求1-2中任一項所述的應用，其特徵在於，用於治療和/ 或防止內分泌和外分泌腺體和組織的機能障礙和病症。
13. 如以上任一項權利要求所述的應用，其特徵在於，所述抗分泌蛋白 由根據下式的序列組成XI-V-C-X2-X3-K-X4-R-X5其中，XI是I、 SEQ ID NO 6的胺基酸1-35、或預設，X2是H、 R或K， X3是S或L， X4是T或A， X5是SEQ ID NO 6的胺基酸43-46、 43-51、 43-80 或43-163、或預設。
14. 如以上任一項權利要求所述的應用，其特徵在於，所述藥物合成物 包含兩種或更多種抗分泌蛋白。
15. 如以上任一項權利要求所述的應用，其特徵在於，所述藥物合成物 進一步包含藥物學可接受賦形劑。
16. 如以上任一項權利要求所述的應用，其特徵在於，所述藥物合成物 針對眼內、鼻內、口服、局部、皮下和/或全身性給藥的目的配製。
17. 如以上任一項權利要求所述的應用，其特徵在於，所述藥物合成物 針對作為噴霧、氣溶膠通過噴霧器或通過吸入器給藥的目的配製。
18. 如權利要求1-12中任一項所述的應用，其特徵在於，所述藥物合 成物和/或醫療食品全身性給藥至血液的劑量為每次每千克體重每天0. 1微 克至10毫克，優選為1-1000微克。
19. 如以上任一項權利要求所述的應用，其特徵在於，所述給藥作為單 劑量進行或每天多次給藥。
20. —種用於治療和/或預防性治療與脂筏和/或細胞膜穴樣內陷的機能 障礙相關的病症的方法，其中，將以下物質給予需要的哺乳動物抗分泌蛋 白，其具有等同活性的衍生物、同系物和/或片段，和/或其藥物學活性鹽， 或包含抗分泌蛋白、其具有等同活性的衍生物、同系物和/或片段、和/或其 藥物學活性鹽的藥物合成物。
21. 用於治療和/或防止哺乳動物的脂筏和/或細胞膜穴樣內陷機能障礙 的抗分泌蛋白，其具有等同活性的衍生物、同系物和/或片段，和/或其藥物 學活性鹽。
全文摘要
本發明涉及抗分泌蛋白，其具有等同活性的衍生物、同系物和/或片斷，和/或其藥物學活性鹽，對於製造用於治療和/或防止機能障礙(例如脂筏、受體和/或細胞膜穴樣內陷的機能異常、機能減退或機能亢進)的藥物合成物和/或醫療食品的應用。脂筏、受體和/或細胞膜穴樣內陷機能障礙可能由各種其他病症引起或可能是各種其他病症的原因，這些各種其他病症也包括在本發明範圍內，例如血管和肺機能障礙、和/或內分泌紊亂(諸如糖尿病和相關不適)。另外，本發明涉及治療和/或防止哺乳動物脂筏和/或細胞膜穴樣內陷機能障礙的方法。
文檔編號A61K38/17GK101460187SQ200780014997
公開日2009年6月17日 申請日期2007年4月27日 優先權日2006年4月27日
發明者斯特凡·朗厄, 漢斯阿內爾·漢松 申請人:蘭特門內阿斯-法克託爾公司