曲普瑞林注射液和製法的製作方法

2023-05-27 22:26:26 2

專利名稱：曲普瑞林注射液和製法的製作方法
技術領域：
本發明涉及曲普瑞林的製劑，尤其是涉及曲普瑞林注射液。
背景技術：
:曲普瑞林，已以其醋酸鹽或者巴莫酸鹽的形式應用於臨床，臨床適應症包括前列腺癌、性早熟、輔助生殖技術(ART)例如體外受精術(IVF)、子宮內膜異位症和子宮肌瘤等，已上市產品例如有達菲林靡。曲普瑞林英文名為=Triptorelin,別名有:垂普託雷林、色氨瑞林、Decap印tyl 等，其 CAS 登記號為 57773-63-4，分子式，C64H82N18013，分子量 1311.45。曲普瑞林的妝序為:Pyr_Hi S-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH20曲普瑞林系合成的促性腺激素釋放激素(GnRH)的類似物。其結構的改良是將天然分子結構中的第六個左旋胺基酸(甘氨酸)，以右旋色氨酸取代以使其促效作用更為顯著。曲普瑞林作用與GnRH相同，但其血漿半衰期延長且對GnRH受體的親和力更強，因此曲普瑞林成為GnRH受體的強力激動劑。曲普瑞林注射後,最初會刺激垂體分泌促性腺激素(Gn)，即黃體生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)。當垂體經過長期的刺激後會進入不應期，促性腺激素的釋放會減少，因而使性類固醇(睪丸酮或雌激素)降低至去勢水平。上述作用是可逆轉的。1974年日本武天化工的Fujino Masahiko等人首先發明促黃體急速釋放激素的十肽醯胺類似物的合成工藝。並在日本，德國，美國等國家申請專利，專利號分別為:JP19740027442、DE2446005、US4008209 (液相法)。目前市售曲普瑞林製劑有水針劑(通常藥物濃度為lml:0.1mg;例如國藥準字H20044922，醋酸曲普瑞林注射液，長`春金賽藥業)、凍乾粉針劑(通常藥物濃度為0.1mg ;例如註冊證號H20040237，輝凌製藥有限公司)，然而這些製劑通常需要在2_8°C避光條件下低溫貯藏，可見該產品的穩定性問題是需要特別關注的。因此，提供一種方法以製備具有良好藥學性能例如穩定性能的曲普瑞林製劑例如水溶液注射劑，仍然是本領域技術人員極其期待的。

發明內容
本發明的目的在於提供一種方法以製備具有良好藥學性能例如穩定性能的曲普瑞林製劑例如水溶液注射劑，期待該方法可以得到高性能例如較高穩定性的曲普瑞林制齊U。本發明人令人驚奇地發現，使用特定配方製成的曲普瑞林具有良好的品質。本發明因此而得以完成。為此，本發明第一方面提供了一種液體藥物組合物，其中包括:曲普瑞林或其藥學可接受的鹽、乙酸鈉、和水。根據本發明第一方面任一項的液體藥物組合物，其每Iml中包含曲普瑞林或其藥學可接受的鹽的量以曲普瑞林(C64H82N18013)計為0.01 lmg，例如0.05 0.5mg，例如約 0.05mg、約 0.lmg、約 0.25mg、約 0.5mg。
根據本發明第一方面任一項的液體藥物組合物，其每Iml中包含乙酸鈉的量為I IOmg,例如2 8mg,例如3 7mg。根據本發明第一方面任一項的液體藥物組合物，其中所述曲普瑞林的藥學可接受的鹽選自:醋酸鹽或者巴莫酸(亦稱雙羥萘酸)鹽。在一個實施方案中，所述曲普瑞林的藥學可接受的鹽是醋酸曲普瑞林。在一個實施方案中，所述曲普瑞林的藥學可接受的鹽是巴莫酸曲普瑞林。根據本發明第一方面任一項的液體藥物組合物，該溶液的pH值在4.0 7.0之間，優選該溶液的PH值在4.5 6.5之間，優選該溶液的pH值在5.0 6.0之間。根據本發明第一方面任一項的液體藥物組合物，其中還包含藥學可接受的酸鹼調節劑。在一個實施方案中，所述酸鹼調節劑選自鹽酸、氫氧化鈉、磷酸、硝酸、硫酸、醋酸、或者它們的水溶液。該酸鹼調節劑的用量以足以使項目I所述配方的藥液的PH值達到規定值即可，而通常不必作特別的限制。通常藥液的酸鹼調節操作是本領域技術人員具有的一般技能，並且通常是根據藥液的已有PH值和目標pH值，再用適量酸鹼調節劑例如IN鹽酸溶液或IN氫氧化鈉或者此二者組合來調節。在本發明液體藥物組合物中，其中包含的主要物質是水，其作為該組合物的載體或溶媒。作為載體或溶媒的水的量是不必作特別限定的，本領域技術人員在配製液體藥物組合物時通常是向藥液中加入適量的水以使整個溶液體積達到規定的量；例如，在配製時加入適量的水，使最終溶液達到每Iml中包含曲普瑞林(C64H82N18013)的量為0.1mg的濃度，即水的量通常是以「定容量 、」 「平衡量」等方式加入。根據本發明第一方面任一項的液體藥物組合物，其每Iml中包含:曲普瑞林或其藥學可接受的鹽，其量為以曲普瑞林(C64H82N18013)計為0.01 lmg,例如 0.05 0.5mg,例如約 0.05mg、約 0.lmg、約 0.25mg、約 0.5mg ；乙酸鈉，其量為I IOmg,例如2 8mg,例如3 7mg ；任選的酸鹼調節劑，其量為使該溶液的pH值調節在4.0 7.0之間，優選使該溶液的PH值調節在4.5 6.5之間，優選使該溶液的pH值調節在5.0 6.0之間；和水。根據本發明第一方面任一項的液體藥物組合物，其中所述的水是注射用水。根據本發明第一方面任一項的液體藥物組合物，其為注射用製劑。根據本發明第一方面任一項的液體藥物組合物，其為無菌產品和/或無熱源的注射液。根據本發明第一方面任一項的液體藥物組合物，其為過濾除菌的無菌產品的注射液。根據本發明第一方面任一項的液體藥物組合物，其是單位劑量包裝的製劑。例如，其是玻璃瓶包裝的單位劑量製劑，每瓶裝量可以是0.1 IOml,例如每瓶標示裝量為0.5ml、Iml、2ml、5ml。根據本發明第一方面任一項的液體藥物組合物，其中還包含選自下列的輔料:甘露醇、山梨醇、乳糖、甘氨酸、右旋糖苷、麥芽糖醇、氯化鈉及其組合。根據本發明第一方面任一項的液體藥物組合物，其每Iml中包含上述輔料的量為2 20mg，例如5 10mg。進一步地，本發明第二方面提供了製備液體藥物組合物例如本發明第一方面任一項的液體藥物組合物的方法，其包括以下步驟:
步驟1:將曲普瑞林或其藥學可接受的鹽和乙酸鈉溶解於適量注射用水中；步驟2:測定步驟I所得藥液的pH值，必要時用IN的氫氧化鈉或IN的鹽酸溶液調節pH值至4.0 7.0之間，例如調節至4.5 6.5，例如調節至5.0 6.0 ;步驟3:測定步驟2所得藥液中的活性成分的濃度，加適量注射用水使活性成分的濃度達到所述液體藥物組合物中規定的濃度；再次測定藥液的pH值，必要時用IN的氫氧化鈉或IN的鹽酸溶液調節pH值至4.0 7.0之間，例如調節至4.5 6.5，例如調節至5.0
6.0 ；步驟4:將步驟3所得藥液經過0.22 μ m微孔濾膜除菌過濾，灌裝到無菌玻璃瓶中，即得液體藥物組合物。根據本發明第二方面任一項的方法，其中所述液體藥物組合物每Iml中包含曲普瑞林或其藥學可接受的鹽的量以曲普瑞林(C64H82N18013)計為0.01 lmg，例如0.05 0.5mg,例如約 0.05mg、約 0.lmg、約 0.25mg、約 0.5mg。根據本發明第二方面任一項的方法，其中所述液體藥物組合物每Iml中包含乙酸鈉的量為I IOmg,例如2 8mg，例如3 7mg。根據本發明第二方面任一項的方法，其中所述曲普瑞林的藥學可接受的鹽選自:醋酸鹽或者巴莫酸(亦稱雙羥萘酸)鹽。在一個實施方案中，所述曲普瑞林的藥學可接受的鹽是醋酸曲普瑞林。在一個實施方案中，所述曲普瑞林的藥學可接受的鹽是巴莫酸曲普瑞林。根據本發明第二方面任一項的方法，其中所述液體藥物組合物的pH值在4.0
7.0之間，優選該溶液的pH值在4.5 6.5之間，優選該溶液的pH值在5.0 6.0之間。

根據本發明第二方面任一項的方法，其中所述液體藥物組合物中還包含藥學可接受的酸鹼調節劑。在一個實施方案中，所述酸鹼調節劑選自鹽酸、氫氧化鈉、磷酸、硝酸、硫酸、醋酸、或者它們的水溶液。該酸鹼調節劑的用量以足以使項目I所述配方的藥液的pH值達到規定值即可，而通常不必作特別的限制。通常藥液的酸鹼調節操作是本領域技術人員具有的一般技能，並且通常是根據藥液的已有PH值和目標pH值，再用適量酸鹼調節劑例如IN鹽酸溶液或IN氫氧化鈉或者此二者組合來調節。根據本發明第二方面任一項的方法，其中所述液體藥物組合物每Iml中包含:曲普瑞林或其藥學可接受的鹽，其量為以曲普瑞林(C64H82N18013)計為0.01 lmg,例如 0.05 0.5mg,例如約 0.05mg、約 0.lmg、約 0.25mg、約 0.5mg ；乙酸鈉，其量為I IOmg,例如2 8mg,例如3 7mg ；任選的酸鹼調節劑，其量為使該溶液的pH值調節在4.0 7.0之間，優選使該溶液的PH值調節在4.5 6.5之間，優選使該溶液的pH值調節在5.0 6.0之間；和水。根據本發明第二方面任一項的方法，其中所述液體藥物組合物為注射用製劑。根據本發明第二方面任一項的方法，其中所述液體藥物組合物為無菌產品和/或無熱源的注射液。根據本發明第二方面任一項的方法，其中所述液體藥物組合物為過濾除菌的無菌產品的注射液。根據本發明第二方面任一項的方法，其中所述液體藥物組合物是單位劑量包裝的制齊U。例如，其是玻璃瓶包裝的單位劑量製劑，每瓶裝量可以是0.1 IOml,例如每瓶標示裝量為 0.5ml、lml、2ml、5ml。根據本發明第二方面任一項的方法，其中所述液體藥物組合物中還包含選自下列的輔料:甘露醇、山梨醇、乳糖、甘氨酸、右旋糖苷、麥芽糖醇、氯化鈉及其組合。根據本發明第一方面任一項的液體藥物組合物，其每Iml中包含上述輔料的量為2 20mg，例如5 IOmg0本發明引述的文獻資料，其全部內容通過引用併入本文。在本發明的任一方面，其任一實施方案的任意一個或多個技術特徵可以組合到該方面的任一其它實施方案中，也可以組合到另一方面的任一實施方案中，只要這種組合不會出現矛盾。本發明使用的各種術語具有本領域技術人員常規理解的一般含義，在與該一般含義不一致時，以本發明為準。本發明總體上提供的是一種液體組合物，其中的主要載體是水，而溶質包括活性成分以及乙酸鈉等。因此，為方便起見，在本發明中，在表示濃度百分數的情況下使用到「 ％」時，如未另外說明，是指重量/體積百分數。本發明使用的pH調節劑包括但不限於氫氧化鈉溶液、鹽酸溶液，例如IM氫氧化鈉溶液、IM鹽酸溶液。在本發明中，提及本發明組合物或者用於對照的組合物的pH值時，該pH值是組合物的最終pH值，而不是其中間物料的pH值。在本發明中，曲普瑞林或其藥學可接受的鹽作為本發明藥物組合物的活性成分，其可以通過市售購得，例如可得自成都天台山製藥有限公司的醋酸曲普瑞林(藥品批准文號H20052269)，亦可參考文獻方法製得，例如參考中國專利申請號2013100137122中記載的方法獲得醋酸曲普瑞林，還可參考文獻該專利文獻中記載的方法獲得曲普瑞林，還可參考文獻該專 利文獻中記載的方法通過與巴莫酸形成鹽而獲得巴莫酸曲普瑞林；它們通常應當符合藥用原料藥的要求。在本發明中，乙酸鈉，亦可稱為醋酸鈉，其在本領域通常認為具有緩衝作用，特別是具有使藥液的PH值穩定的作用，也就是其可以具有緩衝劑的功能。然而本發明出人意料地發現，使用乙酸鈉具有使活性成分化學穩定性改善的效果，而當使用其它具有緩衝功能的藥用輔料例如磷酸鹽、枸櫞酸鹽等時，雖然它們可以使藥液的穩定性保持穩定，但是它們並不能使活性成分保持穩定，這種現象是現有技術尚無法解釋的。本發明的組合物是一種可以直接靜脈注射的藥液，其符合注射液的一般質量要求。在一個實施方案中，本發明曲普瑞林經胺基酸光學純檢測，除了 Try以外，其它7個胺基酸的D-型對映體比例相對於其相應胺基酸酸而言均小於0.2%。在一個實施方案中，本發明曲普瑞林經胺基酸光學純檢測，除了 Try以外，其它7個胺基酸的D-型對映體比例相對於其相應胺基酸酸而言均小於0.15%。在一個實施方案中，本發明曲普瑞林經胺基酸光學純檢測，其中D-Arg相對於全部精氨酸而言均小於0.2%，優選小於0.15。在本發明的一個實施方案中，本發明提供了一種曲普瑞林，其中乙腈含量低於0.03%。本發明組合物在製備過程中加入了乙酸鈉；在該組合物例如製劑成品中，乙酸鈉的量可以通過本領域已知的方法測定，例如可通過離子色譜法(中國藥典2010年版二部附錄VJ)試驗，用合適的陰離子交換柱，以含lmmol/L碳酸氫鈉和3.2mmol/L碳酸鈉的混合液為淋洗液,流速為每分鐘lml，以電導檢測器進行測定其中乙酸鈉的含量。
曲普瑞林(Triptorelin)是一合成的十肽,是天然GnRH(促性腺激素釋放激素)的類似物。動物研究和人體研究表明，初始刺激後，長期使用曲普瑞林可抑制促性腺激素的分泌，從而抑制睪丸和卵巢的功能。動物研究和人體研究表明，初始刺激後，長期使用曲普瑞林可抑制促性腺激素的分泌，從而抑制睪丸和卵巢的功能。對動物進行的進一步研究提示另一作用機制:通過降低外周GnRH受體的敏感性產生直接性腺抑制作用。曲普瑞林在臨床上有廣泛用途，例如，前列腺癌:注射曲普瑞林，早期血LH和FSH水平升高，進而血睪酮水平升高；繼續用藥2 3周，血LH和FSH水平降低，進而血睪酮降至去勢水平；同時，治療初期酸性磷酸酶一過性增高；治療可使症狀有所改善。性早熟:在兩性，曲普瑞林均可抑制垂體促性腺激素的分泌亢進，表現為雌二醇或睪酮的分泌的抑制、LH峰值降低以及身高年齡/骨齡比例的提高；最初的性腺刺激有可能引起陰道的少量出血，需要使用醋酸甲羥孕酮或環丙孕酮醋酸酯治療。子宮內膜異位症:曲普瑞林持續用藥可抑制雌二醇的分泌，從而使異位的子宮內膜組織處於休息狀態。不孕症:曲普瑞林可抑制促性腺激素(FSH和LH)的分泌；這一治療確保抑制LH峰值，從而提高卵泡生成的質量，增加卵泡數量。子宮肌瘤:研究表明某些子宮肌瘤的體積明顯縮小，在治療第3個月時最明顯。大多數患者在治療第I個月後出現閉經，需糾正因月經過多或子宮出血造成的貧血。
具體實施例方式以下實施例進一步說明本發明，而不是限制本發明。在下面的例子中，當使用到pH調節劑對物料進行調節時，如無另外說明，是用IM氫氧化鈉溶液或者IM鹽酸溶液進行調節，其用量是使物料特別是溶液的PH值調節至規定值(例如在標明值的±0.1範圍內)或範圍，例如在當前物料溶液的pH值為6.5而目標pH值為5.5時，先用IM鹽酸溶液調節至5.0±0.1，如果調節過量，可用IM氫氧化鈉溶液回調，這些操作是本領域技術人員具備的一般技能。下文製備步驟為了舉例的目的，並基於各舉例的可比較性而作了某些具體描述，本領域技術人員根據已有知識完全可以從中概括得到本發明製備藥物組合物的方法。在下面配製藥液時，以每Iml藥液及其中的組分和量羅列配方，但是具體投料時，每批次投量量為1000ml。此外，在下文羅列配方時，可能以曲普瑞林或者曲普瑞林藥學可接受的鹽投料，但在表述它們的量時，均折算成曲普瑞林(C64H82N18013)的量計算。製備例1:製備曲普瑞林及其藥學可接受的鹽.
步驟1:Fmoc-Gly-木對月旨的吿1|備(1)原輔料配比10g 的 Rink Amid MBHA 樹脂(0.84mmo1 /g), 9.51g 的 Fmoc-Gly-OH ；胺基酸(在本步驟中為Fmoc-Gly-ΟΗ):肽偶聯劑HBTU:醯胺鍵形成促進劑(HOA T和HOBT以摩爾比1:2混合使用):有機鹼DIEA=I:1:1:4(摩爾比)。溶劑用量根據經驗和具體操作掌握，例如IOg樹脂中清洗、脫帽反應、偶聯反應中溶劑用量為50 150ml，特別是在清洗時每次儘量用儘量少的溶劑，後面的步驟亦可參考本步驟I的溶劑用量進行。(2)操作:準確稱取IOg Rink Amid MBHA樹脂(0.84mmol/g)於反應器中，然後加入二氯甲烷100ml，振蕩並浸泡60分鐘，用二氯甲烷、甲醇、二甲基甲醯胺分別交替清洗兩次，抽濾以除去溶劑。加入20%六氫吡啶/ 二甲基甲醯胺溶液(IOOml)室溫下振蕩進行脫帽反應60分鐘，去掉氮端Fmoc保護基。抽濾除去溶劑後，再分別用二甲基甲醯胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，並抽濾除去溶劑。取少量樹脂(I 3mg)利用茚三酮反應檢測，顯藍色；若不顯藍色，則需重新進行此步。稱取9.51g的Fmoc-Gly-ΟΗ、HBTU, Η0ΒΤ，加入二甲基甲醯胺待其溶解後再加入DIEA，攪拌混勻後，倒入反應器中，室溫振蕩反應I小時。抽濾除去反應液，再分別用二甲基甲醯胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，抽濾除去溶劑。KT檢測(即茚三酮檢測法)，顯黃色。若不是黃色，則需延長反應時間。本步驟I所得Fmoc-Gly-樹脂，經檢測，偶聯率達0.89。該Fmoc-Gly-樹脂用於後續的反應步驟。步驟2:Fmoc-Pro-Gly-樹脂的製備(I)原輔料配比在本實施例的本步驟2以及後續的各步驟中，上一步驟所得樹脂全部投料到下一步驟；並且使用的肽偶聯劑為HBTU，醯胺鍵形成促進劑為HOBT:有機鹼為DIEA。本步驟中，胺基酸(Fmoc-Pro-OH):HBTU:H0BT:DIEA=1:1:1:4(摩爾比)。(2)操作:加入20%六氫吡啶/ 二甲基甲醯胺室溫下振蕩反應60分鐘，去掉氮端Fm Oc保護基。抽濾除去溶劑後，再分別用二甲基甲醯胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，並抽濾除去溶劑。取少量樹脂利用茚三酮反應檢測(在本發明中亦稱為KT檢測)，顯藍色。若不顯藍色，則需重新進行此步。稱取10.8g的Fmoc-Pro-OH、HBTU、HO BT，加入二甲基甲醯胺待其溶解後再加入DIEA，攪拌混勻後，倒入反應器中，室溫振蕩反應2小時。抽濾除去反應液，再分別用二甲基甲醯胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，抽濾除去溶劑。KT檢測，顯黃色。若不是黃色，則 需延長反應時間。步驟 3:Fmoc_Arg (Pbf)-Pro-Gly-木對月旨的吿l|備(I)原輔料配比本步驟中，胺基酸(Fmoc-Arg(Pbf) -OH):HBTU:H0BT:DIEA=1:1:1:4(摩爾比)。(2)操作:加入20%六氫吡啶/ 二甲基甲醯胺室溫下振蕩反應60分鐘，去掉氮端Fm Oc保護基。抽濾除去溶劑後，再分別用二甲基甲醯胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，並抽濾除去溶劑。取少量樹脂利用茚三酮反應檢測，顯藍色。若不顯藍色，則需重新進行此步。稱取 20.76g 的 Fmoc-Arg(Pbf)-0H、乳酸(相當於 Fmoc-Arg(Pbf)-OH 摩爾量的 0.2倍)、HBTU、Η0ΒΤ，加入二甲基甲醯胺待其溶解後再加入DIEA，攪拌混勻後，倒入反應器中，室溫振蕩反應2小時。抽濾除去反應液，再分別用二甲基甲醯胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，抽濾除去溶劑。KT檢測，顯黃色。若不是黃色，則需延長反應時間。本操作步驟獲得的Fmoc-Arg (Pbf)-Pro-Gly-樹脂繼續用於後續的步驟。本實施例1最終所得精製曲普瑞林經胺基酸光學純檢測，精製曲普瑞林經胺基酸光學純檢測，除了 Try以外,其它7個胺基酸的D-型對映體比例相對於其相應胺基酸酸而言均小於0.15%，特別是結果顯示D-Arg相對於全部精氨酸的量而言的含量為0.07%。步驟 4:Fmoc_Leu—Arg (Pbf) _Pro_Gly_ 木對H旨的吿l|備(I)原輔料配比本步驟中，胺基酸(Fmoc-Leu-OH):HBTU:H0BT:DIEA=1:1:1:4(摩爾比)。(2)操作:加入20%六氫吡啶/二甲基甲醯胺室溫下振蕩反應60分鐘，去掉氮端Fmoc保護基。抽濾除去溶劑後，再分別用二甲基甲醯胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，並抽濾除去溶劑。取少量樹脂利用茚三酮反應檢測，顯藍色。若不顯藍色，則需重新進行此步。稱取11.31g的Fm0c-Leu-OH、HBTU、HOBT，加入二甲基甲醯胺待其溶解後再加入DIEA，攪拌混勻後，倒入反應器中，室溫振蕩反應2.5小時。抽濾除去反應液，再分別用二甲基甲醯胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，抽濾除去溶劑。KT檢測，顯黃色。若不是黃色，則需延長反應時間。步驟 5:Fmoc-D-Trp (Boc)-Leu—Arg (Pbf)-Pro-Gly-木對H旨的吿 1|備(I)原輔料配比本步驟中，胺基酸(Fmoc-D-Trp(Boc)-OH):HBTU:H0BT:DIEA=1:1:1:4(摩爾比)。(2)操作:加入20%六氫吡啶/ 二甲基甲醯胺室溫下振蕩反應60分鐘，去掉氮端Fm oc保護基。抽濾除去溶劑後，再分別用二甲基甲醯胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，並抽濾除去溶劑。取少量樹脂利用茚三酮反應檢測，顯藍色。若不顯藍色，則需重新進行此步。稱取16.85g的Fmoc-D-Trp (Boc)-OH、HBTU, H0BT，加入二甲基甲醯胺待其溶解後再加入DIEA，攪拌混勻後，倒入反應器中，室溫振蕩反應3小時。抽濾除去反應液，再分別用二甲基甲醯胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，抽濾除去溶劑。KT檢測，顯黃色。若不是黃色，則需延長反應時間。步驟 6:Fmoc_Tyr (tBu) -D~Trp (Boc) ~Leu~Arg (Pbf) -Pro-Gly-木對H旨的吿l|備(I)原輔料配比·本步驟中，胺基酸(Fmoc-Tyr (tBu) -OH):HBTU:H0BT:DIEA=1:1:1:4(摩爾比)。(2)操作:加入20%六氫吡啶/ 二甲基甲醯胺室溫下振蕩反應60分鐘，去掉氮端Fm oc保護基。抽濾除去溶劑後，再分別用二甲基甲醯胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，並抽濾除去溶劑。取少量樹脂利用茚三酮反應檢測，顯藍色。若不顯藍色，則需重新進行此步。稱取17.4g的Fmoc-Tyr (tBu)_0H、HBTU、H0BT，加入二甲基甲醯胺待其溶解後再加入DIEA，攪拌混勻後，倒入反應器中，室溫振蕩反應3小時。抽濾除去反應液，再分別用二甲基甲醯胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，抽濾除去溶劑。KT檢測，顯黃色。若不是黃色，則需延長反應時間。步驟 7:Fmoc~Ser (tBu) -Tyr (tBu) -D-Trp (Boc) -Leu-Arg (Pbf) -Pro-Gly- M H旨的製備(I)原輔料配比本步驟中，胺基酸(Fmoc-Ser(tBu) -OH):HBTU:H0BT:DIEA=1:1:1:4(摩爾比)。(2)操作:加入20%六氫吡啶/ 二甲基甲醯胺室溫下振蕩反應60分鐘，去掉氮端Fm oc保護基。抽濾除去溶劑後，再分別用二甲基甲醯胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，並抽濾除去溶劑。取少量樹脂利用茚三酮反應檢測，顯藍色。若不顯藍色，則需重新進行此步。稱取12.27g的Fmoc-Ser (tBu)-OH、HBTU, Η0ΒΤ，加入二甲基甲醯胺待其溶解後再加入DIEA，攪拌混勻後，倒入反應器中，室溫振蕩反應4小時。抽濾除去反應液，再分別用二甲基甲醯胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，抽濾除去溶劑。KT檢測，顯黃色。若不是黃色，則需延長反應時間。步驟 8:Fmoc~Trp (Boc) -Ser (tBu) -Tyr (tBu) -D-Trp (Boc) -Leu-Arg (Pbf) -Pro-Gly-樹脂的製備(I)原輔料配比
本步驟中，胺基酸(Fmoc-Trp(Boc) -OH):HBTU:H0BT:DIEA=1:1:1:4(摩爾比)。(2)操作:加入20%六氫吡啶/ 二甲基甲醯胺室溫下振蕩反應60分鐘，去掉氮端Fm oc保護基。抽濾除去溶劑後，再分別用二甲基甲醯胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，並抽濾除去溶劑。取少量樹脂利用茚三酮反應檢測，顯藍色。若不顯藍色，則需重新進行此步。稱取16.85g的Fmoc-Trp (Boc)-OH、HBTU, Η0ΒΤ，加入二甲基甲醯胺待其溶解後再加入DIEA，攪拌混勻後，倒入反應器中，室溫振蕩反應5小時。抽濾除去反應液，再分別用二甲基甲醯胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，抽濾除去溶劑。KT檢測，顯黃色。若不是黃色，則需延長反應時間。步驟 9:Fmoc_His (Trt) -Trp (Boc) -Ser (tBu) -Tyr (tBu) -D-Trp (Boc) -Leu-Arg (Pbf) -Pro-Gly-樹月旨的製備(I)原輔料配比本步驟中，胺基酸(Fmoc-His(Trt)-OH):HBTU:H0BT:DIEA=1:1:1:4(摩爾比)。(2)操作:加入20%六氫吡啶/ 二甲基甲醯胺室溫下振蕩反應60分鐘，去掉氮端Fm oc保護基。抽濾除去溶劑後，再分別用二甲基甲醯胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，並抽濾除去溶劑。取少量樹脂利用茚三酮反應檢測，顯藍色。若不顯藍色，則需重新進行此步。稱取19.83g的Fmoc-His (Trt)-OH、HBTU, Η0ΒΤ，加入二甲基甲醯胺待其溶解後再加入DIEA，攪拌混勻後，倒入反應器中，室溫振蕩反應5小時。抽濾除去反應液，再分別用二甲基甲醯胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，抽濾除去溶劑。KT檢測，顯黃色。若不是黃色，則需延長反應時間。步驟 10:H-Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-Arg (Pbf)-Pr O-Gly-樹脂的製備

(I)原輔料配比本步驟中，胺基酸(H-Pyr-OH):HBTU:H0BT =DIEA=1:1:1:4(摩爾比)。(2)操作:加入20%六氫吡啶/ 二甲基甲醯胺室溫下振蕩反應60分鐘，去掉氮端Fm oc保護基。抽濾除去溶劑後，再分別用二甲基甲醯胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，並抽濾除去溶劑。取少量樹脂利用茚三酮反應檢測，顯藍色。若不顯藍色，則需重新進行此步。稱取4.14g的H-Pyr-0H、HBTU、H0BT，加入二甲基甲醯胺待其溶解後再加入DIEA，攪拌混勻後，倒入反應器中，室溫振蕩反應6小時。抽濾除去反應液，再分別用二甲基甲醯胺、甲醇、二氯甲烷交替清洗樹脂兩次，抽濾除去溶劑。KT檢測，顯黃色。若不是黃色，則需延長反應時間，接肽反應結束後，放入真空乾燥器內乾燥過夜，稱重，得保護的十肽樹脂。步驟11:、肽鏈的裂解將上一步驟所得樹脂轉移到500ml圓底燒瓶中，加入IOOml預冷切割液(95%三氟乙酸/2%TIS/29ffiDT/l%水)，室溫攪拌反應3小時。抽濾以將樹脂與濾液分離，用20ml三氟乙酸洗滌樹脂2次，然後將濾液與洗滌液合併。然後加入冰凍乙醚1000ml，離心將沉澱與乙醚分離，將沉澱用5%醋酸溶解冷凍乾燥後得醋酸曲普瑞林粗品。步驟12:精製鈍化將上一步驟所得凍幹的醋酸曲普瑞林粗品溶於5%醋酸，用離子交換色譜系統(Sho dex IEC SP-420N,北京譜朋公司)，經5%HAc洗脫分離後，收集醋酸曲普瑞林主峰流分。然後將主峰流分通過反向色譜柱用等度洗脫。
反向色譜洗脫條件如下:色譜儀:島津-高效液相色譜儀；色譜柱:Lichrospher RP-18色譜柱；流動相:20%CH3CN/H20 ;流速:10ml/min ;紫外檢測波長:280nm。將收集所得主峰流動相濃縮後，用冷凍乾燥機凍幹，冷凍乾燥後得醋酸曲普瑞林精製品。以上12個步驟經計算總收率達27.6%(以步驟I中IOg樹脂投料量計)。本實施例獲得的醋酸曲普瑞林精製品，其經現行上市醋酸曲普瑞林原料藥的藥品標準測定，完全符合該標準的規定。例如其按無水、無醋酸物計，含C64H82N18013為99.92% ;按無水、無醋酸物計，比旋度為-69.2。;測定甘氨酸、組氨酸、精氨酸、酪氨酸、亮氨酸、脯氨酸、穀氨酸、絲氨酸八種胺基酸組成，以各胺基酸總摩爾數的八分之一作為1，計算各胺基酸的相對比值，甘氨酸、組氨酸、精氨酸、酪氨酸、亮氨酸、脯氨酸、穀氨酸均在
0.90 1.10之間，絲氨酸為1.02。製備例2:製備曲普瑞林及其藥學可接受的鹽.
參考上文製備例I的方法，不同的是在步驟11和步驟12中將其中使用的各種醋酸溶液替換為等濃度的巴莫酸溶液，得到巴莫酸曲普瑞林精製品，經測定其完全符合該原料藥的標準規定。例如其按無水、無醋酸物計，含C64H82N18013為99.87% ;按無水、無醋酸物計，比旋度為-69.5° ;測定甘氨酸、組氨酸、精氨酸、酪氨酸、亮氨酸、脯氨酸、穀氨酸、絲氨酸八種胺基酸組成，以各胺基酸總摩爾數的八分之一作為1，計算各胺基酸的相對比值，甘氨酸、組氨酸、精氨酸、酪氨酸、亮氨酸、脯氨酸、穀氨酸均在0.93 1.07之間，絲氨酸為
1.01。製備例3:製備 曲普瑞林及其藥學可接受的鹽.
參照CN101357936A(中國專利申請號200710044419.7，崔頎，等)說明書實施例1記載的方法製備得到醋酸曲普瑞林精製品，純度99.35%。測定法I:組合物或原料藥中活性成分的含暈測定照高效液相色譜法(中國藥典2010年版二部附錄VD)；色譜條件與系統適用性試驗:用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以0.05mol/L磷酸溶液(用三乙胺調節PH值至3.0)-乙腈(73:27)為流動相，流速為每分鐘1.0ml，檢測波長為 210nm ;取 Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-OH 對照品與醋酸曲普瑞林對照品適量,加水溶解並稀釋製成每Iml中分別含0.1mg的混合溶液，取20 μ I注入液相色譜儀，記錄色譜圖，理論板數按曲普瑞林峰計算不低於3000 ；Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-OH峰和醋酸曲普瑞林峰的分離度應符合要求；測定法:精密取供試品適量，加水溶解並稀釋至每Iml中含0.1mg的溶液(本發明液體組合物可以不加水溶解/稀釋處理)，精密量取20 μ I注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取醋酸曲普瑞林對照品適量，同法測定；按外標法以峰面積計算，即得供試品中曲普瑞林的含量。測定法2:組合物或原料藥中活性成分的有關物質測定取本品適量，加水溶解並稀釋製成每Iml中含0.1mg的溶液(本發明液體組合物可以不加水溶解/稀釋處理)，作為供試品溶液；精密量取1ml，置IOOml量瓶中，加水稀釋至刻度，作為對照溶液；照以上測定法I含量測定中的色譜條件，取對照溶液20 μ I注入液相色譜儀，調節儀器靈敏度，使主成份峰高約為滿量程的10% 20%，再精密量取供試品溶液20 μ I注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成份峰保留時間的2.5倍，計算有關物質的量。通常而言，對於醋酸曲普瑞林原料藥，規定其供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，單一雜質峰面積不得大於對照溶液主峰面積的0.5倍(即小於0.5%)，各雜質峰面積的總和不得大於對照溶液主峰面積的2倍(即小於2.0%)。本發明液體藥物組合物亦可作類似的規定。化學穩定性考察方法:本方法可以用於考察本發明各種產品模擬長期貯藏條件下的穩定性特別是化學穩定性。具體方法為:將製得的液體藥物組合物在30°C下放置6個月，測定試樣中曲普瑞林的含量[30°C6月，可稱為高溫平均含量，mg/ml，測定10瓶的平均值]相對於該試樣在5°C下處理相應時間時曲普瑞林的含量[5°C 6月，可稱為低溫平均含量，mg/ml，測定10瓶的平
均值]的百分數，可簡稱為殘餘含量(%)，計算式如下:
權利要求
1.一種液體藥物組合物，其中包括:曲普瑞林或其藥學可接受的鹽、乙酸鈉、和水。
2.根據權利要求1的液體藥物組合物，其每Iml中包含曲普瑞林或其藥學可接受的鹽的量以曲普瑞林(C64H82N18013)計為0.0l Img0
3.根據權利要求1至2的液體藥物組合物，其每Iml中包含乙酸鈉的量為I IOmg,例如2 8mg，例如3 7mg。
4.根據權利要求1至3的液體藥物組合物，其中所述曲普瑞林的藥學可接受的鹽選自:醋酸鹽或者巴莫酸鹽。
5.根據權利要求1至4的液體藥物組合物，該溶液的pH值在4.0 7.0之間。
6.根據權利要求1至5的液體藥物組合物，其中還包含藥學可接受的酸鹼調節劑；例如選自鹽酸、氫氧化鈉、磷酸、硝酸、硫酸、醋酸、或者它們的水溶液。
7.根據權利要求1至6的液體藥物組合物，其每Iml中包含:曲普瑞林或其藥學可接受的鹽，其量為以曲普瑞林(C64H82N18013)計為0.01 Img ;乙酸鈉，其量為I IOmg ;任選的酸鹼調節劑，其量為使該溶液的PH值調節在4.0 7.0之間；和水。
8.根據權利要求1至7的液體藥物組合物，其特徵在於: 其為注射用製劑； 其為無菌產品和/或無熱源的注射液； 其為過濾除菌的無菌產品的注射液；和/或 其是單位劑量包裝的製劑；例如，其是玻璃瓶包裝的單位劑量製劑，每瓶裝量可以是.0.1 IOml,例如每瓶標示裝量為0.5ml、lml、2ml、5ml。
9.根據權利要求1至8的液體藥物組合物，其中還包含選自下列的輔料:甘露醇、山梨醇、乳糖、甘氨酸、右旋糖苷、麥芽糖醇、氯化鈉及其組合；例如，其每Iml中包含上述輔料的量為2 20mg。
10.製備液體藥物組合物例如權利要求1-9任一項的液體藥物組合物的方法，其包括以下步驟: 步驟1:將曲普瑞林或其藥學可接受的鹽和乙酸鈉溶解於適量注射用水中； 步驟2:測定步驟I所得藥液的pH值，必要時用IN的氫氧化鈉或IN的鹽酸溶液調節pH值至4.0 7.0之間，例如調節至4.5 6.5，例如調節至5.0 6.0 ; 步驟3:測定步驟2所得藥液中的活性成分的濃度，加適量注射用水使活性成分的濃度達到所述液體藥物組合物中規定的濃度；再次測定藥液的PH值，必要時用IN的氫氧化鈉或IN的鹽酸溶液調節pH值至4.0 7.0之間，例如調節至4.5 6.5，例如調節至5.0 .6.0 ； 步驟4:將步驟3所得藥液經過0.22 μ m微孔濾膜除菌過濾，灌裝到無菌玻璃瓶中，即得液體藥物組合物。
全文摘要
本發明涉及一種曲普瑞林注射液和製法。具體地說，本發明液體藥物組合物曲普瑞林或其藥學可接受的鹽、乙酸鈉、和水。本發明方法包括以下步驟步驟1將曲普瑞林或其藥學可接受的鹽和乙酸鈉溶解於適量注射用水中；步驟2測定步驟1所得藥液的pH值，必要時用1N的氫氧化鈉或1N的鹽酸溶液調節pH值至4.0～7.0之間；步驟3測定步驟2所得藥液中的活性成分的濃度，加適量注射用水使活性成分的濃度達到所述液體藥物組合物中規定的濃度；再次測定藥液的pH值，必要時用1N的氫氧化鈉或1N的鹽酸溶液調節pH值至4.0～7.0之間；步驟4將步驟3所得藥液經過0.22μm微孔濾膜除菌過濾，灌裝到無菌玻璃瓶中，即得液體藥物組合物。本發明組合物具有良好的藥學性能。
文檔編號A61P15/00GK103239711SQ20131019653
公開日2013年8月14日 申請日期2013年5月24日 優先權日2013年5月24日
發明者趙東明, 賈紅軍, 谷娟, 潘旭, 何玉祥, 董國明 申請人:成都天台山製藥有限公司