丹參酚酸b磷脂複合物及其製備方法
2023-06-04 01:18:41 2
專利名稱：：丹參酚酸b磷脂複合物及其製備方法
技術領域：
：本發明涉及醫藥
技術領域：
，確切地說涉及一種丹參酚酸B的磷脂複合物及其製備方法。
背景技術：
：丹參為唇形科植物SalviamiltiorrhizaBge.的乾燥才艮及根莖，具有祛淤止痛、活血通經、清心除煩之功效(NationalPharmacopoeiaCommittee(國家藥典委員會)ChinesePharmacopoeia(中國藥典)，VolI.Beijing:ChemicalIndustryPress，2005:52-53.)。丹參主要含兩類有效成分；一為脂溶性的二薛類化合物，二為水溶性的多聚酚酸類成分。實驗研究證明，丹參水溶性成分具有多方面的藥理活性，特別是表現出很強的抗氧化活性，這些藥理作用吸引著研究人員開發出一批具有較高水平的藥物應用於臨床(DuGH，ZhangJT.DevelopmentofthewatersolubleingredientsinSalviamiltiorrhiza-Salvianolicacids.BasMediSci&Cli(基礎醫學與臨床)，2000，20:394-398.)。丹酚酸B為丹參中重要的水溶性有效成分之一，由三分子丹參素與一分子咖啡酸縮合而成，在2005版中國藥典中，已將丹酚酸B作為丹參片的指標成分。據報導，丹酚酸B有強烈的抗氧化和清除氧自由基的活性，其抗脂質過氧化作用約為維生素E的1000倍,對腎功能不全和肝損傷均有一定保護作用(PengSX，ZhaoSX,LiaoQJ，etalTheDevelopmentofMedicalChemistry(藥物化學進展).Beijing:ChineseMedicalScienceandTechnologyPress，2000:201-215.)。儘管丹參酚酸B有上述的藥理作用，但具報導，其口服後在動物體內的絕對生物利用度只有2.3%(Yu-TseWu,Yen-FeiChen，Yen-JuHsieh，IneJaw，Ming-ShiShiao，Tung-HuTsai.BioavailabilityofsalvianolicacidBinconsciousandfreelymovingrats.Int.J.Pharm.326(2006)25-31.)近年來許多國外文獻報導，將天然活性成分與磷脂在一定條件下進行複合，得到天然活性成分的磷脂複合物(phytosomes)，其理化性質和生物特性與原化合物相比均有不同程度的變化，具有較強的親脂性，通過與磷脂複合而形成載體系統，能改善一些藥物在胃腸道中或經皮的吸收，可有效的提高天然活性成分的體內吸收，可獲得較高的血藥濃度且體內消除較慢，能顯著的提高生物利用度。關於天然活性成分磷脂複合物生物利用度的研究，有水溶性及脂溶性均不好的水飛薊素、多萜醇、積雪草苷、黃茶苷磷脂複合物等(吳建梅等，天然活性成分磷脂複合物藥學研究概述，中國藥學雜誌，1998，33(1):9-11)。與上述藥物的磷脂複合物不同，本發明創造性的將水溶性很好的丹參酚酸B與磷脂形成複合物並通過微粒給藥途徑以提高其生物利用度。經文獻檢索，目前尚未見有關通過製備丹參酚酸B的磷脂複合物以提高丹參酚酸B生物利用度的報導。
發明內容針對丹參酚酸B生物利用度低，本發明要解決的問^1A提供一種丹參盼酸B的磷脂複合物及其製備方法，以提高丹參酚酸B的生物利用度。本發明的丹參酚酸B磷脂複合物，由丹參酚酸B與磷脂在一定條件下複合而成，其中，丹參酚酸B與磷脂的質量比為1:1-1:4。其中，所述丹參酚酸B與磷脂的質量比優選為1:2。其中，所述磷脂是平均分子量為700-800的磷脂，包括包括大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂或合成磷脂，優選平均分子量為750的大豆卵磷脂。本發明的丹參酚酸B磷脂複合物的製備方法，包括下述順序的步驟(1)取丹參酚酸B以及相當於丹參酚酸Bl-4倍重量的磷脂，加入適量溶劑中；(2)於一定溫度下磁力攪拌，得澄明溶液；(3)將溶液減壓濃縮至幹；(4)再加入適量復溶劑充分溶解後抽濾；(5)將濾液減壓濃縮至幹或將不溶物真空乾燥即得丹參酚酸B磷脂複合物。其中，步驟(1)所述溶劑包括乙酸乙酯、丙酮、氯仿、二氯曱烷、四氫呋喃、正己烷、乙醇、曱醇及其含有上述溶劑的各種比例的混合溶劑，優選乙酸乙酯。其中，步驟(1)所述溶劑的用量應使丹參酚酸B的反應濃度為5-50mg/ml。其中，步驟(2)所述溫度為20-401C,攪拌時間為lh-4h,其中，步驟(3)所述減壓濃縮溫度為30-40*C。其中，步驟(4)所述復溶劑包括水、丙酮、氯仿、二氯曱烷、四氫呋喃、正己烷及其含有上述溶劑的各種比例的混合溶劑。其中，步驟(5)所述減壓濃縮或真空乾燥溫度為20-501C。本發明所得複合物在HPLC上顯示與丹參酚酸B相同的保留時間，說明形成的是複合物，而不是新生成的化合物，該複合物與丹參酚酸B和磷脂的物理混合物在差熱分析(DSC)、紅外光譜(IR)、紫外光謙(UV)與X射線衍射譜中存在明顯差別DSC中混合物在吸熱峰851C左右後一直處於放熱狀態，且放熱速度快慢不一，120X:左右時放熱明顯變慢，說明此溫度時有吸熱現象，抵消了部分放熱，而複合物在110t:左右以後200n前並沒有明顯的吸放熱現象；IR中丹參酚酸B本身的酚-OH的吸收峰在3385.93cm、峰形較鈍，與磷脂物理混合物後移至3383.93cnf1，峰形基本未變，而形成複合物後移至3388.99cnf、峰形被很大程度鈍化，說明丹參酚酸B的酚-OH可能與磷脂的某些基團發生了相互作用，磷脂本身的P=0的吸收峰在1236.18cm—1,與丹參酚酸B物理混合後峰位基本未變，但峰形,被鈍化，而形成複合物後峰位移至1180.90cm_1，且明顯被鈍化，說明可能是丹參酚酸B的酚-OH與磷脂的P=0發生了一定程度的締合作用；UV掃描中，大豆卵磷脂在250-400nm波長範圍內無吸收，丹參酚酸B及其磷脂複合物和物理混合物的紫外掃描圖譜在254nm和288nm處均有吸收峰，且形狀幾乎相同，由此表明複合物中丹參酚酸B原有的發色團結構並未發生改變，也說明了丹參酚酸B磷脂複合物並不是一種新的化合物；X射線^f射圖譜中，磷脂有明顯的晶體衍射峰出現，與丹參酚酸B物理混合後，磷脂的特徵晶體衍射峰仍然存在，而形成複合物後晶體衍射峰完全消失，亦沒有新的晶體衍射峰出現，說明磷脂與丹參酚酸B發生了相互作用。形成了複合物，而不是新的化合物。以上四種圖i普說明了所製備的丹參酚酸B磷脂複合物不是新生成的化合物，但也不同於其二者的簡單物理混合物，而是以一種複合物的形式存在。試驗證明形成的複合物改善了丹參酚酸B的生物利用度。取維性SD大鼠10隻，隨機分為兩組，每組5隻，禁食12小時後分別灌胃給予丹參酚酸B和丹參酚酸B磷脂複合物，給藥劑量分別為相當於丹參酚酸B500mg/kg和450mg/kg。於各藥灌胃前及灌胃後15、30、45、60、75、90、120、180、240min由尾靜脈取血0.25ml，置經肝素處理的離心管中，離心分離血漿，血漿樣品處理後，以對羥基苯曱酸為內標，釆用HPLC法分析丹參酚酸B及其磷脂複合物的血藥濃度-時間數據，釆用DAS軟體來計算藥代動力學參數。結果表明形成複合物後的血藥濃度明顯高於單獨的丹參酚酸B，相對生物利用度>300°乂，說明丹參酴酸B的磷脂複合物的確能促進丹參酚酸B在大鼠體內的吸收，本發明通過選擇一磷脂為載體的方法製備了丹參酚酸B磷脂複合物，試驗證明該複合物提高了丹參酚酸B的生物利用度，HPLC、DSC、IR、UV、X射線衍射分析均表明是形成了複合物，而不是單純的物理混合物或新生成的化合物，通過對複合物在大鼠體內的藥代動力學特點進行分析，發現丹參酚酸B製成磷脂複合物後其在體內的吸收極大的提高。這將有效解決丹參酚酸B在人體及動物體內生物利用度不高的問題，非常有利於這一具有多種生物活性的天然產物作為藥物進一步走向臨床。圖1丹參酚酸B磷脂複合物與混合物的HPLC分析結果比較(a，丹參酚酸B;b,磷脂；c,複合物；d物理混合物，；採用的流動相條件為乙腈曱醇0.1%磷酸=25:10:65)圖2丹參酚酸B磷脂複合物與混合物的DSC分析結果比較(a，丹參酚酸B;b，磷脂；c，複合物；d物理混合物)圖3丹參酚酸B磷脂複合物與混合物的IR分析結果比較(a，丹參酚酸B;b，磷脂；c,複合物；d物理混合物)圖4丹參酚酸B磷脂複合物與混合物的UV分析結果比較(a，丹參酚酸B;b，磷脂；c，複合物；d物理混合物)圖5丹參酚酸B磷脂複合物與混合物的X衍射分析結果比較(a，丹參酚酸B;b，磷脂；c，複合物；d物理混合物)具體實施方式實施例1取丹參酚酸B30.2g，加入大豆卵磷脂60.4g，共同溶於1000ml乙酸乙酯，30°C攪拌2小時，得澄清棕色溶液40X:減壓除去乙酸乙酯後，加入500ml二氯曱烷復溶，過濾除去沉澱後再減壓蒸發除去二氯甲烷得棕黃色乾燥物約90g，即為丹參酚酸B磷脂複合物。採用流動相條件為乙腈曱醇0.1%磷酸=25:10:65對丹參酚酸B,磷脂，丹參酚酸B磷脂複合物及混合物進行HPLC分析，其結果如附圖l所示。結果表明，丹參酚酸B及其磷脂複合物在此條件下的色i普行為一致，保留時間為9.262min和9.113min，這說明丹參酚酸B與磷脂形成的是一種複合物，而不是新的化合物。以AL203為參比物，升溫速率10匸/min，掃描範圍0-300X:，氮氣流速為0.2ml/min,分別取丹參酚酸B，大豆卵磷脂，複合物及物理混合物1-10mg進行分析，結果見附圖2。從DSC圖譜可以看出，丹參酚酸B無明顯的吸熱峰，只在1201C左右有較弱的吸熱以及在1701C左右有微弱的吸熱。大豆卵磷脂有兩個明顯的吸熱峰出現，139"左右有一個鈍峰，而在238*€左右出現一銳峰。與丹參酚酸B和磷脂相比，複合物及混合物的圖譜發生了明顯的變化，磷脂原來的吸熱峰消失，複合物中吸熱峰出現在72.2x:，且此後再無吸熱現象，混合物中吸熱峰出現在86.21C，並在120"左右有吸熱現象，這與丹參酚酸B的吸熱位相似。複合物的相變溫度明顯較磷脂降低，說明在丹參酚酸B和磷脂之間必然發生了相互作用，比如兩者之間形成了氫鍵或存在範德華力，而混合物的相變溫度也明顯降低，但高於複合物，可能是由於混合物中部分的形成了複合物，但其均勻程度較複合物低。對丹參酚酸B，磷脂，丹參酚酸B磷脂複合物及混合物進行紅外掃描，結果見附圖3。從圖譜及數據可以看出，丹參酚酸B本身的盼-OH的吸收峰在3385.93cm-l，峰形較鈍，與磷脂物理混合物後，峰形峰位基本未變，而形成複合物後峰形被很大程度鈍化，形成一個範圍很廣的寬峰，說明丹參酚酸B的酚-OH可能與磷脂的某些基團發生了相互作用；磷脂本身的P=0的吸收峰在1236.18cm-l，與丹參酚酸B物理混合後峰位基本未變，但峰形m被鈍化，而形成複合物後峰位移至1180.90cm-l，且明顯被鈍化，說明可能是丹參酚酸B的酚-OH與磷脂的P=0發生了一定程度的締合作用；丹參酚酸B本身羧基的C=0吸收峰由於分子間相互聚合的原因出現在1718.74cm-l，形成複合物後移至1734cm-l左右，說明複合物的形成降低了丹參酴酸B分子間的相互聚合作用；而磷脂中C=0吸收峰位於1734.34cm-l,與混合物和複合物中C=0吸收峰位幾乎沒有變化，說明磷脂中的羰基並沒有參與丹參盼酸B磷脂複合物的形成。以上說明，丹參酚酸B磷脂複合物的紅外光譜不同與其物理混合物，著說明所製備的丹參酚酸B磷脂複合物的確不同與二者的筒單混合，而是以一種複合物的形式存在的。對丹參酚酸B，磷脂，丹參酚酸B磷脂複合物及混合物進行紫外掃描，結果見附圖4。由紫外掃描結果可以看出，大豆卵磷脂在250-400nm波長範圍內無吸收；丹參酚酸B及其磷脂複合物和物理混合物的紫外掃描圖譜形狀幾乎相同，在254nm和288nm處均有吸收峰。由此表明丹參酚酸B與磷脂形成複合物後，其原有的發色團結構並未發生改變，也說明了丹參酚酸B磷脂複合物並不是一種新的化合物。對丹參酚酸B，磷脂，丹參酚酸B磷脂複合物及混合物進行X-射線衍射分析，結果見附圖5。從圖譜可以看出，丹參酚酸B及其磷脂複合物均為無定型特徵，物理混合物中有部分磷脂的晶體衍射峰，而形成複合物後磷脂的晶體衍射峰消失，由此可以看出複合物與簡單的物理混合物有著明顯的區別，同時這也表明發生複合反應時可能由於丹參酚酸B與磷脂極性端發生一定的相互作用，即定向結合，而使丹參酚酸B和磷脂實際上處於一種高度^t的狀態，其自身的晶體特徵被抑制。實施例2取丹參酚酸B5.5g，加入大豆卵磷脂5.5g，共同溶於1000ml丙酮中，30X:攪拌1小時，得澄清棕色溶液30X:減壓除去丙酮後，加入500ml二氯甲烷復溶，過濾除去沉澱後再減壓蒸發除去二氯曱烷得棕黃色乾燥物約llg，即為丹參酚酸B磷脂複合物。實施例3取丹參酚酸B30g，加入大豆卵磷脂120g，共同溶於600ml氯仿中，30*C攪拌4小時，得澄清棕色溶液351C減壓除去氯仿後，加入500ml二氯甲烷復溶，過濾除去沉澱後再減壓蒸發除去二氯甲烷得棕黃色乾燥物約150g，即為丹參酚酸B磷脂複合物，實施例4丹參酚酸B磷脂複合物納米粒的製備取丹參酚酸B磷脂複合物30g，溶解於250邁1無水乙醇中，加入30ml大豆油，充分^IL^迅速注入室溫攪拌下1100ml含表面活性劑F68的水液中，形成乳狀液，45X:減壓除去乙醇後經高壓乳勻得納米粒。取少量上述納米粒復分散後並稀釋至一定濃度，室溫乾燥後用掃描電子顯微鏡觀察，其結果見附圖6.從掃描電鏡結果可以看出，丹參酚酸B磷脂複合物的納米粒製備成功，其外觀為類球形，粒徑在200nm左右。實施例5丹參酚酸B磷脂複合物藥代動力學及生物利用度研究實驗動物雄性SD大鼠10隻，體重200-300g。給藥方案實驗鼠被隨機分為兩組，緊食12小時後兩組分別灌胃給予丹參酚酸B和丹參酚酸B磷脂複合物，給藥劑量分別相當於丹參酚酸B500mg/kg和450mg/kg。樣品採集於各藥給藥前及服藥後15、30、45、60、75、90、120、180、240、300、360、420min由尾靜脈取血O.25ml，置經肝素處理的離心管中，離心分離血漿，於-20n冰箱中保存直至分析。血漿樣品處理事先向乾淨離心管中加入30jil內標溶液(20Hg/ml的對羥基苯甲酸曱醇溶液)，30X:避光空氣流吹乾曱醇，加入100pl血漿樣品和一滴lmol/LHCL,旋渦混勻後超聲5min再混勻，加入350^1乙酸乙酯旋渦萃取lmin，離心(10000rpm/min)lmin，取上層有機相於另一乾淨離心管中，重複萃取過程一次，合併有W目，於3ox:避光空氣流吹乾，殘留物加60p1純淨水旋渦震蕩lmin，離心(10000rpm/min)lmin後取20[i1進HPLC。血漿樣品分析色i普條件色^普柱DiamonsilC18不鏽鋼柱(5ym，200咖x4.6mm);流動相乙腈曱醇0.1%磷酸=25:10:65;流速lml/min;柱溫35"C;進樣量20jil。方法評價以丹參酚酸B考察線性關係，丹參盼酸B線性範圍0.5一5pg/ml(r-O.994)。專屬性考察表明血漿中內源性物質並不幹擾測定結果，內標與標準品分離度良好。該方法丹參酚酸B高、中、低三種濃度的回收率分別為81.14%、86.07%、83.56%，日內、日間RSD分別為3.8%、3.1%、8.2%;2.8%、7.9%、5.9%。血藥濃度測定結果見表l:表1丹參酚酸B及其磷脂複合物大鼠經灌胃給藥在不同時間的血藥濃度(mean土s，n=5)tableseeoriginaldocumentpage12藥動學M計算丹參酚酸B及其磷脂複合物的血藥濃度-時間數據採用DAS軟體經計算機擬合併計算藥代動力學參數。大鼠經灌胃給予丹參酚酸B及其磷脂複合物的藥代動力學過程均符合二室模型，主要藥代動力學參數見表2:表2丹參酚酸B及其磷脂複合物大鼠經灌胃給藥的藥代動力學參數tableseeoriginaldocumentpage13將兩組主要藥代動力學參數進行t檢驗，結果顯示AUC(|ig/ml)*min、Cmax(ng/ml)均存在顯著性差異(P<0.05)，可認為丹參酚酸B磷脂複合物能夠明顯提高丹參酚酸B在大鼠體內的生物利用度，相對生物利用度為286.77%。權利要求1、一種丹參酚酸B磷脂複合物。2、如權利要求1所述磷脂複合物，其特徵在於的磷脂包括大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂或合成磷脂。3、如權利要求1或2所述磷脂複合物，其特徵在於所述磷脂的平均分子量為700-800。4、如權利要求l-3所述磷脂複合物，其特徵在於所述丹參酚酸B與磷脂的重量比為1:1-1:4。5、如權利要求1-4所述丹參酚酸B磷脂複合物的製備方法，包括下述順序的步驟(1)取丹參酚酸B以及相當於丹參酚酸Bl-4倍重量的磷脂，加入適量溶劑中；(2)於一定溫度下磁力攪拌，得澄明溶液；(3)將溶液減壓濃縮至幹；(4)再加入適量復溶劑充分溶解後抽濾；(5)將濾液減壓濃縮至幹或將不溶物真空乾燥即得丹參酚酸B磷脂複合物。6、如權利要求5所述的製備方法，其特徵在於，步驟(1)所迷溶劑包括乙酸乙酯、丙酮、氯仿、二氯甲烷、四氬呋喃、正己烷、乙醇、曱醇及其含有上述溶劑的各種比例的混合溶劑。7、如權利要求5所述的製備方法，其特徵在於，步驟(1)所述溶劑的用量應使丹參酚酸B的反應濃度為5-50mg/ml。8、如權利要求5所述的製備方法，其特徵在於，步驟(2)所述溫度為20-40X:,攪拌時間為lh-4h。9、如權利要求5所述的製備方法，其特徵在於，步驟(3)所述減壓濃縮溫度為30-10、如權利要求5所述的製備方法，其特徵在於，步驟(4)所述復溶劑包括水、丙酮、氯仿、二氯曱烷、四氫呋喃、正己烷及其含有上述溶劑的各種比例的混合溶劑。11、如權利要求5所述的製備方法，其特徵在於，步驟(5)所述減壓濃縮或真空乾燥溫度為20-50匸。12、如權利要求1~11所述製得的丹參酚酸B磷脂複合物的脂質體、納米粒及其製劑，包括片劑、膠嚢劑、混懸劑、粉針劑。全文摘要本發明公開一種丹參酚酸B磷脂複合物，由丹參酚酸B與磷脂複合而成，其中丹參酚酸B與磷脂的重量比為1∶1-4；本發明還公開了該丹參酚酸B磷脂複合物的製備方法，利用本發明的方法製備的丹參酚酸B磷脂複合物可有效提高丹參酚酸B的生物利用度。文檔編號A61P39/00GK101254184SQ200710051038公開日2008年9月3日申請日期2007年12月29日優先權日2007年12月29日發明者張志榮,強彭,濤龔申請人:四川大學