與mhc-ⅰ類分子結合的鼠ⅲ型肝炎病毒多肽表位及應用的製作方法

2023-06-04 05:07:21

專利名稱：：與mhc-ⅰ類分子結合的鼠ⅲ型肝炎病毒多肽表位及應用的製作方法
技術領域：
：本發明涉及生物醫藥工程
技術領域：
，包括篩選獲得與主要組織相容性複合物I(MHC-I)類分子結合的鼠III型肝炎病毒多肽表位，以及編碼這些多肽的DM、RNA,由於這些多肽與MHC-1類分子的結合位點進行結合，可激活特異性的細胞毒性T淋巴細胞(CTL細胞)；因此，本發明還涉及所述與MHC-I類分子結合的鼠III型肝炎病毒多肽表位在藥學上的用途。
背景技術：
：目前的研究表明，CD8+T細胞所識別的靶抗原先經抗原提呈細胞處理，之後以"抗原肽-MHCI類分子，，複合物的形式呈現在抗原提呈細胞或靶細胞表面，相應的與MHC-1類分子結合的抗原肽即為CTL表位。小鼠肝炎是由小鼠肝炎病毒(MHV)所致的一種特有的傳染病，它廣泛分布於世界各國的實驗小鼠群中，鼠群中動物的感染率可為20%-100%，是實驗小鼠群中最常見和最重要的病毒之一，多呈潛伏性感染和慢性感染，發病小鼠主要表現為肝炎、腦炎和腸炎，嚴重影響實驗小鼠質量，幹擾各種動物實驗的進行，影響實驗結果的準確性和重複性，是對實驗小鼠危害最為嚴重的病毒病之一。目前尚沒有治療MHV感染的辦法，控制MHV感染也非常困難，被MHV感染的小鼠只有處死，以防止鼠間的大量傳播，使得實驗成本增高及實驗進度受到影響，可能導致一些珍貴實驗動物的瀕危。小鼠肝炎病毒(MHV)最早於1949年發現，此後研究者們先後從小鼠和新生鼠中分離到MHV。MHV是冠狀病毒科最大的病毒，是目前已知基因組最大的RNA病毒。MHV有三個主要結構蛋白，分別為核心蛋白、跨膜糖蛋白和表面蛋白。MHV個毒林間S蛋白的抗原性差異很大，S蛋白能夠形成三聚體結合敏感細胞受體，誘導病毒包膜和細胞膜之間的膜融合，刺激機體產生中和性抗體和介導細胞免疫應答，且目前普遍認為MHV組織親嗜性在很大程度上取決於S蛋白，所以對於病毒感染及防治具有重要意義。KouL等通過基因重組技術建立了一抹變異的小鼠肝炎病毒，這林小鼠肝炎病毒的S蛋白被貓腹膜炎病毒(一種以貓為宿主的冠狀病毒)的高交叉的S蛋白取代，它具有了感染貓細胞的能力，同時它喪失了感染鼠細胞的能力，這種通過取代外周S蛋白能跨越宿主細胞間種間屏障的現象，有力證明了冠狀病毒感染宿主細胞範圍最主要是由S蛋白與病毒受體的相互作用水平有關。不同的MHV病毒抹能夠表現出不同的組織親嗜性，主要分為嗜肝性和非嗜肝性兩類。MHV-A59及MHV-3為嗜肝性病毒，感染小鼠後多發展為急性或慢性肝炎。用Tl寡合氨酸圖解發現MHV-3和MHV-A59的基因組序列中僅有少數幾處差異，這種基因組序列上的差異構成了MHV-3較MHV-A59更具嗜肝性。綜上所述，MHV-3的S蛋白與小鼠肝炎的發生發展密切相關，若將MHV病毒的S蛋白作為抗原，採用生物信息學手段，研究其CTL表位，並將其作為免疫治療的一個新靶點，對小鼠的MHV感染起到免疫保護及免疫治療效果，從而預防鼠類MHV感染及治療小鼠肝炎。到目前為止，該方面研究未見有文獻報導。隨著對免疫應答分子機制研究的深入，人們已逐漸認識到機體的免疫細胞並不是對應於各種各樣的病原體或天然抗原的整體分子，而是針對各種各樣抗原分子的抗原表位。蛋白質抗原是通過其表位來體現其免疫特異性。
發明內容本發明的目的是提供能與MHC-I類分子的結合位點進行結合、可激發特異性細胞毒性T淋巴細胞的鼠III型肝炎病毒多肽表位。本發明的另一目的是提供所述多肽表位在製備用於鼠類肝炎病毒治療藥物和治療或檢測疫苗中的用途。本發明根據抗原肽與MHC-1分子相互作用的機理，從鼠III型肝炎病毒S蛋白全長基因序列中篩選出候選多肽表位，最終得到能有效與MHC-I類分子結合併能激發特異性T淋巴細胞的多肽表位，該多肽表位長度僅8個M酸序列，體外容易合成，方便臨床應用。為實現本發明第一目的而採用的技術方案是這樣的，既能與人MHC-1類分子的結合位點進行結合，可激發特異性的細胞毒性T淋巴細胞的多肽表位，篩選自序列號為SEQNO.l的鼠III型肝炎病毒S蛋白，為與SEQNO.1的鼠III型肝炎病毒具有同源性的下列胺基酸序列，包括SEQNO.2:TyrGluLeuSerGlyTyrThrVal;SEQNO.3:lieGluProTyrAsnGlyVallie;SEQNO.4:PheSerValTyrlieGlyAsplie;SEQNO.14:AsnAspGlyliePheAlaLysVal。本發明涉及的多肽表位，還可以為選自SEQNO.2、SEQNO.3、SEQNO.4、SEQW).14中的游離型多肽、融合型多肽和嵌合型多肽；以及以所述4條多肽之一為單體的各種形式的聚合體。本發明所涉及的多肽表位與功能或性質已知的蛋白質融合或嵌合，即這些蛋白質分子或嵌合分子包含了本發明所涉及的多肽M^列，具有這些多肽的相同或相似活性。本發明包括但不限於上述多肽表位，還包括編碼這些多肽表位的DM序列。實現發明第二目的是上述多肽表位在製備用於鼠類肝炎病毒治療藥物和治療或檢測疫苗中的用途。還包括所述的DM序列在製備用於鼠類肝炎病毒治療藥物和治療或檢測疫苗中的用途。與本發明有關的多肽序列，可通過任何已有的體外多肽合成設備和不同的技術原理人工合成。其獲得方法主要有以下步驟，包括多肽的合成，純化以及最後產品的收集，這樣技術已經成熟並程式化，在相關領域:陂廣泛應用。本發明的積極效果本發明使用計算機模擬技術與實驗相結合的方法，進一步提高了預測多肽表位的準確性，不單純考慮分子結合位點對多肽表位的預測影響，同時從空間構象上，預測了多肽表位，而且本發明的多肽物質，僅為8肽的短肽，體外容易合成，經靜脈給藥後容易被機體吸收，因此具有非常大的商業產業化價值。附困說明圖1為SEQNO.2多肽表位的空間結構;f莫擬圖；圖2為SEQNO.2多肽表位和MHC分子結合的空間結構才莫擬圖；圖3為SEQNO.3多肽表位的空間結構模擬圖；圖4為SEQNO.3多肽表位和MHC分子結合的空間結構模擬圖；圖5為SEQNO.4多肽表位的空間結構模擬圖；圖6為SEQNO.4多肽表位和MHC分子結合的空間結構模擬圖；圖7為SEQNO.14多肽表位的空間結構模擬圖；圖8為SEQNO.14多肽表位和MHC分子結合的空間結構模擬圖；圖9為SEQNO.2多肽表位的質譜分析圖；圖10為SEQNO.3多肽表位的質謙分析圖；圖11為SEQNO.4多肽表位的質謙分析圖；圖12為SEQNO.14多肽表位的質鐠分析圖。圖13為4個篩選出的多肽對靶細胞殺傷效果圖。具體實施方式實施例1多肽表位的篩選方法1、鼠III型肝炎病毒s蛋白M^列的獲得自國際開放共享基因庫NCBIGeneBank中查找出天然鼠III型肝炎病毒S蛋白的全長胺基酸序列(共330個胺基酸)表示為SEQNO.1。2、多肽表位預測的^序的獲得tt序是基於在同一白細胞抗原(HLA)家族，甚至是不同家族的HLA同種異型分子接納的抗原肽具有相同和相似的錨點殘基構成的肽基序。易與H-2KK結合的8肽序列，其錨定殘基主要位於肽鏈第二位(P2)胺基酸殘基及羧基末端第八位(P8)氬基酸殘基。當P2為穀氨酸(E)或天冬氨酸(D)，P8為異亮氨酸(I)或纈氨酸(V)時，與H-2KK分子有較高的親和力。這些胺基酸的特定序列是多肽分子與MHC分子結合的活性位點或關鍵性胺基酸，決定了與MHC-1類分子結合多肽的活性特徵。超基序預測CTL表位雖然克服了以往採用筒單繼續法易產生的假陰性結果，但由於此預測法與基序法具有相同的弱點，即在預測中僅僅考慮了錨點殘基的影響而忽略了其他位點殘基結合情況，易出現假陽性結果，故應聯合量化基序法及人工神經網絡提高CTL表位預測的準確性。應用(http://www.syfpeithi.de/Scripts/MHCServer.dll/EpitopePrediction.htm)提供的分析軟體對上述鼠III型肝炎病毒S蛋白序列進行分析，選擇得分較高的15個超基序SEQNO.2-SEQNO.16:TyrGluLeuSerGlyTyrThrVal(306-313),lieGluProTyrAsnGlyVallie(141—148),PheSerValTyrlieGlyAsplie(228—235),AsnThrAsnGlyAsnLysLeulie(168-175)，ThrPheLeuPheSerValTyrlie(225-232),SerGlulieLysCysLysThrGin(290-297),SerMetLeuProSerThrGlyVal(298-305),ThrValGinProValGlyValVal(312-319),TyrlieGlyAspPheArgCyslie(15-22),ThrGluThrValAspValSerGin(39-46),PheGlyTyrThrSerTyrThrVal(132—139),LysArgAsnPheThrLeuAsnVal(190-197)，AsnAspGlyliePheAlaLysVal(101—108),AsplieLeuThrGinTyrTyrVal(234-241),AsnPheAsnGinLysGlyVallie(271-278)。3、CTL表位預測的量化基序方案量化基序法是基於非依賴性側鏈結合(IBS)假設，即在抗原肽與MHC分子的結合中，抗原肽的側鏈效應(錨定、抑制或中性)主要依賴與相應的胺基酸殘基在肽中所處的位置受相鄰的胺基酸殘基影響較小。這在一定的範圍內可以假設在一個多肽序列中，每個胺基酸殘基相互獨立且影響整個肽與MHCI類分子的結合，而該抗原肽的結合能就是每個位置胺基酸殘基結合能的綜合。在此假設的基礎上根據實驗獲得的數據，對多肽分子在肽結合槽內特定位點某個胺基酸出現的頻率用統計學方法進行分析，得到反應該型MHC分子結合特性的統計學矩陣，並藉助數學和計算機學編製成可用於表位預測的程序。由於量化基序法在預測中充分考慮到每一種M酸在MHC結合槽特定位點出現的可能性，所以預測的精度高，是目前最為成熟的預測方案。應用(http:〃www-bimas.cit.nih.gov/cgi-bin/molbio/ken—parker—comboform)提供的分析軟體對*序預測出的CTL表位進一步採用量化基序法進行驗證，以尋求結合最好的表位。^序中得分較高的15個*序，同時在量化基序分析中得分也較高基序有4個，即包括以下多肽表位SEQNO.2:TyrGluLeuSerGlyTyrThrVal,該序列位於鼠III型肝炎病毒S蛋白序列中第306位與第313位之間。SEQNO.3:lieGluProTyrAsnGlyVallie,該序列位於鼠III型肝炎病毒S蛋白序列中第141位與第148位之間。SEQNO.4:PheSerValTyrlieGlyAsplie,該序列位於鼠III型肝炎病毒S蛋白序列中第228位與第235位之間。SEQNO.14:AsnAspGlyliePheAlaLysVal,該序列位於鼠III型肝炎病毒S蛋白序列中第101位與第108位之間。實施例2多肽表位與MHC-1結合的三維結構分析和分子動力學模擬分析對上述所得多肽表位用Silicongraphics工作站及InsightII軟體建立預測多肽與H-2K'結合的三維結構並進行分子動力學模擬，包括以下方法①分子模型構建，運用InsightII軟體包中的Discover3.0;f莫塊(採用CVFF力場)，對來自鼠III型肝炎病毒S蛋白的八肽與H-2KK分子的複合物進行分子動力學模擬。H-2KK的初始坐標來自於蛋白質結構資料庫(PDB編號1ZT1),各八肽運用Bioploymer模塊對1ZT1中的多肽分子進行胺基酸替換而得。模擬過程如下首先，將H-21(K與P2m固定，運用最陡下降法對八肽進行2000步優化計算，然後用共軛梯度法優化，直到能量RMS小於0.Ikal/mol.A;第二步，在複合物周圍加一層7.5A的水分子，並固定H-2r複合物對水分子進行2000步能量優化，以消除水分子之間以及水分子與蛋白質之間的不合理接觸；第三步，對溶液狀態下的複合物進行能量最小化計算，非鍵相互作用釆用9.5A的截斷值，先後運用最陡下降法和共軛梯度法優化，直到能量RMS小於0,1kal/mol.A;第四步，在298K的恆定溫度下進行20PS的分子動力學計算；最後，對動力學優化得到的最後構象進行分子力學優化5000步，得到H-2KK與八肽複合物的最終構象。通過分子動力學模擬，以已知的H-2K'限制性CTL表位八肽為基礎，分析出MHC-肽複合物的可能結構，構建並分析H-2KK限制性CTL表位多肽的三維模型，可發現大部分H-2KK限制性CTL表位多肽的兩個錨點殘基間的距離為15-19A,符合這些條件的多肽與H-2C分子間有較好的親和力。②結合特徵參數計算，藉助Homology模塊，計算MHV-3S蛋白的幾個多肽表位中各殘基的溶液可及性表面積、錨點間距及氫鍵個數等結合特徵參數。在對各殘基溶劑可及性表面積的計算中，我們選擇水分子作為探針分子，溶劑半徑選為0.14nm。分子的溶劑可及性表面積是指蛋白質分子暴露到溶劑中的面積，將其定義為溶劑球(又稱探針分子)中心在蛋白質分子表面滾過的面積。上述4條多肽的空間構象圖可參見圖1、3、5、7。而上述4條多肽與MHC-I類分子結合模擬圖可參見圖2、4、6、8。分子動力學結合特徵參數計算結果如下所peptidePositionDistance/AH-bondSASofanchorresidue/A2numberP2P8SEQNO.2306-31317.84115.992.895卿NO.3141-14818.32139.414.824SEQNO.4228-23518.89100.3868.639SEQNO.14101—10818.601307.023MHC-肽複合物模型中多肽各殘基的溶劑可及性表面積(SASofanchorResidue/A2)直觀反映了肽與MHC分子的嵌合情況，各殘基尤其是錨點的溶劑可及性表面積越小，說明兩者嵌合越緊密。抗原肽與MHC分子之間主要通過疏水作用、氫鍵(H-bondnumber)、鹽鍵等弱相互作用進行分子間的識別。這些非鍵作用越強，相應分子間的非鍵作用能就越低，結合則越緊密。從以上表格可以看出，上述4條多肽的錨點殘基距離均在15-19A之間，4條多肽均能與MHC-1類分子的很好的結合。實施例3本發明多肽表位的獲得(1)多肽的合成多肽採用標準的Fmoc方案，精氨酸採用兩次偶聯，按照多肽序列使肽鏈從羧基端向氨基端延伸。多肽合成後，選用相應的切割酶進行切割，同時去除多肽保護基團得到多肽粗品。(2)多肽表位的純化和分子量分析將上述獲得的多肽表位通過RP-HPLC純化和分析，RP-HPLC測定合成的4條多肽純度均在95%以上。質鐠分析結果顯示，各肽的相對分子質量測定值與理論值基本相符，可用於後繼試驗研究。多肽的合成、純化、分析及鑑定均由深圳瀚宇藥業有限公司完成。質譜圖見附圖9-圖12。(3)多肽產品的溶解合成的肽凍乾粉，按lmg/ml的濃度，根據其溶解特性分別溶於超純水或DMS0中，置於-20'C保存、備用。實施例4本發明多肽表位與MHC-I親和力檢測1、細胞林及單克隆抗體TAP缺陷的T2細胞購於ATCC,在T2細胞中轉染H-2KK分子獲得TAP缺陷H-2I(K陽性的T2KK細胞系，T2KK細胞培養於含10。/。胎牛血清的IMDM培養液中，培養條件為37。C、5°/。C02、飽和溼度，每隔2-3天傳代1次。FITC標記的大鼠抗小鼠H-2KK抗體，購於Biolegend公司，培養液及血清均購於Sigma公司。2、多肽表位與MHC-1分子結合力的檢測本實施例為利用T2KK細胞系特點，檢測多肽表位的親和力的實驗。T2KK細胞表面空載的H-2KK分子表達極不穩定，遞呈後很快降解。抗原肽與之結合後穩定了H-2K'的表達，抗原肽與H-2r的結合力越強，則T2KK細胞表面H-2KK分子的表達量就越高。因T2KK細胞的內源性抗原遞呈途徑中必須得抗原多肽轉運蛋白(TAP)缺陷，所以T2KK表面H-2KK分子表達量的增加直觀地反應了外來抗原肽與H-2K'的結合力，能夠進一步證明本發明的多肽的有效性。利用FITC標記的大鼠抗小鼠H-2KK的單克隆抗體，直接焚光檢測法檢測H-2KK的表達量，結果以平均螢光強度為檢測指標，以螢光係數(FI)為衡量指標。實施例中，採用流式細胞儀檢測T2KK細胞表面的H-2KK分子T2KK細胞經PBS洗滌2次後，以1x107孔接種於12孔培養板中，以100mg/ml的濃度加入各表位候選肽，並設置空白對照孔。T2KK細胞在37。C、5%C02、飽和溼度條件下培養18h後，收集細胞作流式細胞術檢測；孵育好的T2KK細胞用1000rpm離心5min後，PBS洗滌，同樣條件離心後，加入100U1PBS重懸，在細胞沉澱中加入0.5ia1FITC標記的大鼠抗小鼠H-2K'抗體溶液，4'C避光孵育lh，用PBS洗滌3次後，在流式細胞儀上檢測平均焚光強度，波長488nm。結果以FI作為衡量指標，計算公式為螢光係數(FI卜(樣本平均螢光強度-背景平均螢光強度)/背景平均螢光強度。判斷標準FI>1.5視為多肽與H-2KK分子結合力高，1.0<FIFI>0.5為低結合力。親和力實驗結果如下所示tableseeoriginaldocumentpage9實驗結果表明SEQNO.2與SEQNO.3多肽表位與MHC-I分子呈中等結合力結合，而SEQNO.4與SEQNO.14與MHC-I類分子的結合力差。實施例5多肽表位體內誘導鼠III型肝炎病毒特異性CTL的殺傷活性檢測採用乳酸脫氬酶(LDH)釋放法進行。1、效應細胞的製備將免疫(lOOjUg多肽+福式不完全佐劑，每周一次，共三次)後的小鼠脾臟淋巴細胞與100|ug/ml多肽，及20U/mlrmlL-2共培養與24孔板中，體外培養7d後作為效應細胞。福式不完全佐劑購於Sigma/>司，rmlL-2購於Biolegend/^司。2、把細胞的製備L929購於ATCC,培養於含10WBS的RPMI1640培養基中。10yg/ml表位肽室溫孵育lh，洗塗後作為靶細胞。3、LDH釋放實驗採用標準的LDH釋放試驗，將扭細胞濃度以2x104個/100yL加入96孔板，各靶細胞孔中加入不同稀釋度的效應細胞，每孔100ML，使相應的效/靶比分別為20:1、40:1和80:1，同時設自然釋放孔和最大釋放孔，每組設立3個復孔。於37^C、5%0)2孵育3h，分別加入LDH補充液及裂解液後，繼續孵育lh。以1000rpm離心10min,各取上清液50yL，加入LDH反應液及顯色液，室溫避光孵育30min後，加入LDH終止液，用酶標儀檢測吸光值(A)。其中LDH檢測試劑盒購於上海傑美基因醫藥科技有限公司。特異性殺傷率按一下公式計算特異性殺傷細胞率(=(實驗孔A值-自然釋放孔A值)/(最大釋》文孔A值-自然釋放孔A值)xlOO%。4條多肽對靶細胞的殺傷作用如下:殺傷比率SEQNO.2SEQNO.3SEQNO.4SENO.14陰性肽20:125.54%20.11%11.14%7.20%6.21%40:145.60%47.114.57%9.34%8.26%80:155.21%49.33%15.47%10.88%8.97%實驗結果表明SEQNO.2與SEQNO.3多肽表位對靶細胞的殺傷作用最強。比較結果參見附圖13。與本方面有關的序列表中國人民解放軍第三軍醫大學第二附屬醫院與MHC-1類分子結合的鼠III型肝炎病毒多肽表位及應用51330aminoacids鼠III型肝炎病毒S蛋白(spikeprotein[Murinehepatitisvirus3))mat—peptide1MetLeuPheValPhelieLeuPheLeuProSerCysLeuGlyTyrlieGlyAspPheArgCysHeGin15101520LeuValAsnSerAsnGlyAlaAsnValSerAlaProSerlieSerThrGluThrValAspValSerGinGly2530354045LeuGlyThrValTyrValLeuAspArgValTyrLeuAsnAlaThrLeuLeuLeuThrGlyTyrTyr50556065ProValAspGlySerLysPheArgAsnLeuAlaLeuThrGlyThrAsnSerValSerLeuSerTrpPhe7075808590GltiProProTyrI>euSerGinPheAsnAspGlyliePheAlaLysValGinAsnLeuLysThrSerThr95100105110115ProSerGlyAlaThrAlaTyrPheProThrlieVallieGlySerLeuPheGlyTyrThrSerTyrThrVal120125130135VallieGluProTyrAsnGlyVallieMetAlaSerValCysGinTyrThrlieCysGinLeuProTyrThr140145150155160AspCysLysProAsnThrAsnGlyAsnLysLeulieGlyPheTrpHisThrAspValLysProProlie165170175180185CysValLeuLysArgAsnPheTtirLeuAsnValAsnAlaAspAlaPheTyrPheJUsPheTyrGinHis190195200205GlyGlyThrPheTyrAlaTyrTyrAlaAspLysProSerAlaThrThrPheLeuPheSerValTyrlie210215220225230GlyAsplieLeuThrGinTyrTyrValLeuProPhelieCysAsnProThrAlaGlySerThrPheArg235240245250255ProArgTyrTrpValThrProI>euValLysArgGinTyrLeuPheAsnPheAsnGinLysGlyVallie26.0265270275ThrSerAlaValAspCysAlaSerSerTyrThrSerGlulieLysCysLysThrGinSerMetLeuPro280285290295300SerThrGlyValThrGluLeuSerGlyTyrThrValGinProValGlyValValTyrArgArgValAla305310315320AsnLeuProAlaCysAsn325330<210〉28aminoacids鼠III型肝炎病毒S蛋白(spikeprotein[Murinehepatitisvirus3])<400〉2TyrGluLeuSerGlyTyrThrVal15<210〉38afflinoacids鼠III型肝炎病毒S蛋白(spikeprotein[Murineh印atitisvirus3])3lieGluProTyrAsnGlyVallie1548arainoacids鼠III型肝炎病毒S蛋白(spikeprotein[Murinehepatitisvirus3])4PheSerValTyrlieGlyAsplie1558aminoacids鼠III型肝炎病毒S蛋白(spikeprotein[Murinehepatitisvirus3])5AsnAspGlyliePheAlaLysVal1權利要求1、能與MHC-I類分子的結合位點進行結合、可激活特異性的細胞毒性T淋巴細胞的多肽表位，為篩選自序列號為SEQNO.1的鼠III型肝炎病毒S蛋白，且與SEQNO.1的的鼠III型肝炎病毒S蛋白具有同源性的下列胺基酸序列SEQNO.2TyrGluLeuSerGlyTyrThrVal；SEQNO.3IleGluProTyrAsnGlyValIle；SEQNO.4PheSerValTyrIleGlyAspIle；SEQNO.14AsnAspGlyIlePheAlaLysVal。2、如權利要求1所述的多肽表位，其特徵是為選自SEQN0.2、SEQN0.3、SEQNO.4或SEQN0.14中的游離型多肽、融合型多肽和嵌合型多肽；以及以上所述4條多肽之一為單體的各種形式的聚合體。3、編碼權利要求所述多肽表位的DNA序列。4、權利要求l中的多肽表位，其特徵是所述的多肽表位通過原核細胞或真核細胞表達純化獲得，或人工合成。5、權利要求1或2所述的多肽表位在製備用於鼠類肝炎病毒治療藥物和治療或檢測疫苗中的用途。6、權利要求3所述的DNA序列在製備用於鼠類肝炎病毒治療藥物和治療或檢測疫苗中的用途。全文摘要本發明涉及與細胞膜表面主要組織相容性複合物I類分子結合的鼠III型肝炎病毒多肽表位，以及編碼這些多肽表位的DNA序列，這些多肽表位通過與MHC-I類分子結合，從而產生鼠III型肝炎病毒特異性細胞毒性T淋巴細胞，對小鼠的MHV感染起到免疫保護及免疫治療效果，從而預防鼠類MHV感染及治療小鼠肝炎，因此可作為多肽藥物疫苗來治療小鼠肝炎。文檔編號A61K48/00GK101580540SQ20091010413公開日2009年11月18日申請日期2009年6月19日優先權日2009年6月19日發明者波朱,林治華,陳正堂,龍海霞申請人:中國人民解放軍第三軍醫大學第二附屬醫院