Slim-1在心力衰竭評估中的用途的製作方法

2023-06-04 17:21:31 4

專利名稱：：Slim-1在心力衰竭評估中的用途的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種評估個體心力衰竭的方法，包括步驟a)測量從個體獲得的樣品中標識物SLIM-1的濃度，b)任選地測量樣品中一種或更多種其他的心力衰竭標識物的濃度，並通過比較步驟(a)中確定的濃度以及任選地在步驟(b)中確定的濃度與對照樣品中確立的該標識物或這些標識物的濃度，來評估心力衰竭。此外還公開SUM-1作為標識物蛋白在評估心力衰竭中的用途，包括SLIM-1的標識物組合，以及用於測量SLIM-1的試劑盒。
背景技術：
：心力衰竭(HF)是一種主要的並日趨嚴重的公共衛生問題。例如，在美國，大約5百萬患者患有HF並且每年超過550000患者被首次診斷為HF(引自美國心臟協會，心臟病和中風統計:更新至2005年，達拉斯、德克薩斯;美國心臟協會(2005))。類似的美國統計表明對於每年1200萬至1500萬個診所就診和650萬個住院病例，HF是主要原因。從1990至1999年，每年以HF作為主要診斷結論住院治療的患者數量從大約81萬增長至超過100萬，以HF作為主要或第二診斷結論的人數從240萬增至360萬。在2001年，接近53000名患者死於HF作為主因的疾病。心力衰竭主要是老年人的狀況，因此普遍認為"人群的老齡化"也促使HF發生率增加。在年齡大於65歲的人群中HF的發生率每IOOO人近IO人。僅僅在美國，2005年由HF引起的直接和間接損失總共估計約$279億，並且每年在治療HF的藥物上花費大約$29億(參照上述引用的AHA-統計數據)。心力衰竭心力衰竭的特徵是心臟泵出身體所需血液的量的能力的喪失。衰竭不是意味心臟停止泵送，而是指不能如其應該的那樣有效地泵出血。NYHA[紐約心臟協會]和ACC/AHA[美國心臟病學協會/美國心臟協會]都建立了HF的功能分類以判斷該疾病的進程。NYHA分類方案有四類疾病狀態類別1為在任何程度的行為下無症狀，類別2為在重體力行為下有症狀，類別III和IV分別在輕度行為和無行為下有症狀。在四階段的ACC/AHA方案中，階段A為無症狀但有發展HF的危險。階段B有心臟功能紊亂的證據而無症狀。在階段C中，有心臟功能紊亂的證據並伴有症狀。在階段D中，受試者儘管受到最大程度的治療但仍有症狀。HF的病原學在醫學上，必須將心力衰竭(HF)理解為一種複合病。它可能由觸發事件的出現所引起，比如心肌梗死(心臟病發作)，或者是其他病因的後續，比如高血壓、糖尿病或心臟畸形例如心瓣病。心肌梗死或其他的HF病因導致心臟泵送能力的初始減退，例如通過損壞心肌引起。由於一種或更多種代償機制的活化，這種泵送能力的減退可能不會立刻被注意。但是，已經發現HF的進展與患者的血液動力狀態無關。因此，由疾病所引起損害性變化已經出現並發展，而患者甚至仍無症狀。事實上，在HF早期過程中維持正常心血管功能的代償機制可能實際上最終促進了疾病的進展，例如對心臟和它的容量施加有害作用以維持循環中充足的血流水平。一些發生在HF期間的更重要的病理生理變化有(i)下丘腦-垂體-腎上腺軸的活化，(ii)全身性內皮功能紊亂和(iii)心肌重塑。(i)專門針對拮抗下丘腦-垂體-腎上腺軸活化的治療包括P-腎上腺素能阻滯劑(B阻滯劑)、血管緊張素轉變酶(ACE)抑制劑、某些鈣通道阻滯劑、硝酸鹽和內皮素-1阻滯劑。鈣通道阻滯劑和硝酸鹽雖然產生臨床改善，卻沒有明確顯示出能延長生存期，而作為醛甾酮拮抗藥，B阻滯劑和ACE抑制劑已經表現出了明顯的延長壽命的作用。使用內皮素-1阻滯劑的實驗研究也已展示出有用的效果。(ii)全身性內皮功能紊亂是HF的一種公知特徵，在左心室功能紊亂體徵出現時會明顯表現。內皮功能紊亂對於心肌微循環與心臟肌細胞的密切關係十分重要。該跡象暗示微血管功能紊亂對於肌細胞功能紊亂以及導致進行性心肌衰竭的形態學變化有明顯作用。依據潛在的病理生理學，有跡象暗示內皮功能紊亂可能由NO的相對缺乏所引起，而NO的相對缺乏可以歸結為依賴NADH氧化酶引起的血管02生成增加和隨後的NO過度清除。潛在的提高02生成的作用因子包括升高的交感緊張性、新腎上腺素、血管緊張素II、內皮素-l和TNF-a。此外，相對於TNF-a的水平，一種關4建的抗炎性細胞因子IL-10的水平顯示不相稱的低。現在人們認為TNF-a與相關的促炎性細胞因子包括IL-6和可溶性TNF-a受體的水平升高，通過降低心肌收縮性、雙心室膨大、血壓過低而在HF的發展中發揮重要作用，並且可能涉及內皮細胞活化和功能紊亂。同時對於至今仍不可解釋的在嚴重HF患者中肌肉消痩現象，人們認為TNF-a也可能在其中發揮作用。在對少數患者使用可溶性TNF受體進行治療的初步研究中，通過對生活質量指數的測量，表明有助於改善NYHA功能分類和患者健康。(iii)心肌重塑是一個複雜過程,伴隨著從無症狀向有症狀的心力衰竭轉變，並可被描述成心肌層內的一系列適應性改變，像心室形狀、質量和體積的改變(Piano，M.R.等，J.Cardiovasc.Nurs.l4(2000)l-23,quizl19-120;Molkentin,J.D.,Ann.Rev.Physiol.63(2001)391-426)。心肌重塑的主要內容是肌細胞生物學的改變，如肌細胞肥大，因為壞死或細胞程序性死亡而引起的肌細胞損失，細胞外基質的改變和左心室腔的幾何學改變。現在還不清楚心肌重塑是否只是暴露於長時間神經激素刺激產生的毒性效應數年之後發生的終末器官效應，或者是否心肌重塑獨立地促使心力衰竭的進展。迄今證據暗示適當的治療可以減緩或停止心肌重塑的進展。標識物和疾病狀態如上所述，肌細胞肥大可能代表發展至HF的最初步驟之一。肌細胞肥大的特徵為某些編碼收縮蛋白的基因，如p-肌球蛋白重鏈和肌4丐蛋白T(TnT),和一些非收縮蛋白，如A型和B型利尿鈉肽的表達升高，同時還有細胞體積增加和細胞骨架變化(Piano，M.R.等，J.Cardiovasc.Nurs.14(2000)1-23,quiz119-120;Molkentin，J.D.，Ann.Rev.Physiol.63(2001)391-426)。對於人類和動物模型心力衰竭的研究表明心力衰竭的後期階段肌細胞功能降低。現已暗示肌細胞功能紊亂的機制涉及鈣處理網絡、肌孩i絲和細月包支架的？文變(deTombe,P.P.，Cardiovasc.Res.37(1998)367-380)。例如，在心力衰竭的人類和動物模型中，肌漿網鈣-三磷酸腺普酶的酶活性降低，而肌膜Na+/Ca2+交換器的mRNA和蛋白水平都增加。而且，在心力衰竭的人類和動物模型中都具有TnT的同種型轉換、肌鈣蛋白I(TnI)磷酸化減少、肌纖維肌動球蛋白三磷酸腺苷酶活性降低和微管形成增加。最開始，導致心肌重塑的心臟改變意味著補償心肌層病變部分以維持身體對氧和營養物的需要。但是，心力衰竭的代償期是有限的，於是在最後，衰竭的心臟不能維持足夠滿足身體需求的心輸出量。於是有從代償期向代償失調期的轉變。在代償失調期內，心臟中的變化級聯效應會持續但不再有利，使患者進入心力衰竭進程直到慢性狀態並最終死亡。根據"ACC/AHA2005成年人慢性心力衰竭的診斷和管理的更新指南"(S.Hunt等，www.acc.org=ACC/AHA實踐指南)，在心力衰竭範圍內該疾病現在被分為四個階段，如上所述。在階段A和B，會發現個體處於心力衰竭發展的危險中，而階段C和D表示這些患者組顯示了心力衰竭的體徵和症狀。A至D不同階段的詳細定義如上述參考資料所示，此處通過援引包括入。心力衰竭的診斷方法評價HF患者唯一最有效的診斷試驗是全面的2維超聲心電圖聯同都卜勒流量研究，以確定是否心肌層、心臟瓣膜或心包出現異常，涉及哪些腔室。必須考慮三個基本問題:1)LVEF是維持還是減少，2)LV結構是正常還是異常，3)是否還有其他可以解釋臨床表現的結構異常，如瓣膜、心包或右心室的異常？該信息應該由EF的數值預期、心室尺度和/或體積的測量、壁厚度的測量和腔室的幾何結構以及局部室壁活動的評價來量化。應該評估右心室的大小以及收縮性能。此外還應該半定量地確定心房的大小並測量左心房的尺度和/或體積。對於EF保持或減少的患者來說，在進行超聲波心動描記術時獲得的非侵襲性血液動力學數據是重要的附加關聯。綜合二尖瓣輸入模型、肺靜脈輸入模型和二尖瓣環流速的組合定量提供了關於LV充盈和左房壓特徵的數據。三尖瓣回流梯度的評定聯同測量下腔靜脈的尺度和它在呼吸過程的反應可提供對收縮肺動脈壓和中心靜脈壓的估算。心4粵量可以4關合尺度測量和LV流出道的脈衝都卜勒加以確定。但是，在沒有HF時這些參數的任何一項都可能出現異常。所有的參數都不是與HF有必然的特異關聯；然而總體正常的充盈模型可排除臨床HF。一種臨床觀點認為，該疾病在代償和早期的代償失調期無臨床症狀(階段A完全無症狀，階段B有結構上的心臟病變但沒有HF的體徵和症狀，參考ACC/AHA實踐指南)。直到徹底進入代償失調期(即依照ACC/AHA指南的階段C和D)疾病的外部體徵(如氣促)才會出現。現行的診斷方式基於階段C和D的患者的外部症狀。一般地,使用能影響心力衰竭特異機制的藥物對心力衰竭患者進行標準治療。沒有診斷性試驗可以可靠地反映那些特異機制並幫助醫師為適當的患者選擇適當的藥物(和劑量)(例如，ACE抑制劑、ATII、J3阻滯劑等等)。用標識物預診斷HF僅由生化標識物對具有心力衰竭風險的患者進行早期評估是可能的，因為有發展心力衰竭風險的個體在那個階段是仍然沒有HF臨床症狀的。現在尚無確定的生化標識物能在該疾病症狀發生前進4亍可靠鑑定。現在到診斷出HF的時候，這個疾病已經有了深度發展。近年來利尿鈉肽家族，尤其是心房利尿鈉肽家族和腦利尿鈉肽家族被證明在評估HF中有重要價值。HF的預後和需求至少部分因為滯後的診斷，50%的HF患者在診斷後兩年之內死亡。5年生存率小於30%。急切需要一種輔助心力衰竭早期診斷的新生化標識物。在心力衰竭風險個體，即，無心力衰竭臨床症狀的個體的早期評估中的改進是^皮證明是正確的(warranted)。最近幾年確立了以B型利尿鈉肽標識物作為一種很好的手段來監測HF患者的疾病進程並評估他們心臟血管併發症，如心臟病發作的風險。然而，對於其他很多方面的診斷單一的標識物是不夠的。NT-proBNP的低值對於HF或LVD的排除具有很高的陰性預測值，在上述的和其他的研究(參考TriepelsR.H.,等Clin.Chem.49,Suppl.(2003)A37-38)中心力衰竭的陽性預測值已經發現在50-60%的範圍內。因此一種用於評估個體心力衰竭風險的標識物具有很高的臨床/實際重要性，它獨立地對於HF具有高的陽性預測值，或者協同NT-proBNP並且與單獨的NT-proBNP比較起來對於HF具有更好的陽性預測值。為了使這個重要並急需的臨床診斷領域取得更深遠的技術進步，一種輔助評估心力衰竭患者的標識物意義重大。發明概述現在人們發現並確定了標識物SLIM-1能輔助評估心力衰竭。在一個實施方式中它可以有助於評估個體是否具有發展心力衰竭的風險。在進一步的方面中，它可以輔助評估疾病的進展。在另一個實施方式中，它可以輔助預測心力衰竭的發作。在另一個實施方式中，它能輔助評估並選擇一種適當的治療方案以預防或治療心力衰竭。在此公開的是一種評估個體心力衰竭的方法，包括步驟測量從該個體獲得的樣品中標識物SLIM-1的濃度，4壬選地測量樣品中一種或更多種其他心力衰竭標識物的濃度，通過將SLIM-1的濃度和任選地一種或更多種其他標識物的濃度與對照樣品中確定的該標識物或這些標識物的濃度進行比較來評估心力衰竭。該發明也涉及蛋白SLIM-1作為標識物分子在心力衰竭評估中的用途。還公開了包括SLIM-1和一種或更多種其他心力衰竭標識物的標識物組合在評估心力衰竭中的用途。同時提供試劑盒，其用於進行體外評估心力衰竭的方法，該方法包括步驟測量樣品中標識物SLIM-1的濃度，任選地測量樣品中一種或更多種其他的心力衰竭標識物的濃度，通過將SLIM-1的濃度和任選地一種或更多種其他標識物的濃度與參考群體中確定的該標識物或這些標識物的濃度進行比較以評估心力衰竭，該試劑盒包括特異性測定SLIM-1需要的試劑和任選地特異性測定所述一種或更多種其他心力衰竭標識物的需要的試劑。'本發明其他方面和優點將通過隨後的描述而變得明顯。然而應該明白，當指本發明優選實施方式時，僅是以例示方式提供詳細描述和特定實施例，因為從該詳細描述中在本發明精神和範圍內的各種變化和修改對於本領域技術人員將是明顯的。發明詳述在第一個實施方式中，本發明涉及一種評估個體心力衰竭的方法，包括步驟a)測量從該個體獲得的樣品中標識物SLIM-1的濃度，b)任選地測量樣品中一種或更多種其他心力衰竭標識物的濃度，c)通過將步驟(a)中確定的濃度和任選地步驟(b)中確定的濃度與對照樣品中確定的該標識物或這些標識物的濃度比4交以評估心力衰竭。如在此使用的，下列每一個術語都具有與在本節中的它相關的意義。在此使用的冠詞"一"是指一或超過一(即至少一)的該冠詞的語法客體。例如，"一種抗體"表示一種抗體或一種以上的抗體。"一或更多"表示1至50個，優選1到20，也優選2、3、4、5、6、7、8、9、10、12或15。在此使用的術語"標識物"或"生化標識物"指一種分子，該分子作為用於分析患者的測試樣品的靶標。在一個實施方式中，這些分子靶標的實例是蛋白質或多肽。在本發明中用作標識物的蛋白或多肽預計包括所述蛋白天然存在的片段，特別是免疫學可檢測的片段。免疫學可檢測的片段優選包含所述標識物多肽的至少6、7、8、10、12、15或20個連續胺基酸。本領域技術人員將認識到細胞釋放的蛋白或細胞外基質中存在的蛋白會被損壞，比如在炎症階段，並且可被降解或者裂解成這樣的片段。某些標識物以非活性的形式合成，隨後可能通過蛋白水解被活化。本領域技術人員應理解，蛋白質或其片段也可以作為複合物的一部分存在。這些複合物也可能用作本發明意義上的標識物。此外，或可選的，標識物多肽可以帶有翻譯後修飾。翻譯後修飾的實例有糖基化、醯化和/或磷酸化等等。術語"評估心力衰竭"是指按照本發明的方法將輔助醫師評估個體是否具有發展心力衰竭的風險，或輔助醫師在HF診斷相關的一個或幾個其他的領域評估HF患者。評估HF個體優選的診斷相關領域為心力衰竭的分期、急性和慢性心力衰竭的鑑別診斷、判斷疾病進程的風險、指導選擇適當的藥物、治療反應的監視和隨訪HF患者。本發明意義上的"心力衰竭標識物"是〗壬何標識物，如果該標識物與標識物SLIM-1相結合能為研究中的診斷疑難增加HF評估的相關信息。對評估HF而言，將所述標識物納入一種已包含標識物SLIM-1的標識物組合，如果在給定特異性下的敏感性或如果在給定敏感性下的特異性可被分別提高，該信息被認為是相關的或具有附加價值。優選地，在敏感性或特異性方面的提高分別是統計學上顯著的，具有p=0.05、0.02、0.01或更小的顯著性水平。優選地，一種或更多種心力衰竭的其他標識物選自利尿鈉肽標識物、心臟肌鈣蛋白標識物和炎症標識物。在此使用的術語"樣品"指一種為了進行體外評價而獲取的生物樣品。在本發明方法中，樣品或患者樣品優選地可包含任何體液。優選的試驗樣品包括血液、血清、血漿、尿液、唾液和關節液。優選樣品是全血、血清、血漿或關節液，血漿或血清是最方便的樣品種類。技術人員將會知道，任何這樣的評估在體外進行。然後丟棄患者樣品。患者樣品僅僅用於本發明的體外方法並且患者樣品中的物質不會回輸給患者身體。一般地，樣品是液體樣品，例如，全血、血清或血漿。"將......濃度與對照樣品中確定的濃度進行比較"的表述僅用於進一步的舉例對於4支術人員來il顯而易見的內容。對照樣品可以是內部對照或外部對照樣品。在一個實施方式中，使用內部對照樣品，即在受試樣品中評估標識物水平，並在取自於同一個受試者的一個或更多個其他樣品中也評估該標識物水平以確定所述標識物水平是否有任何的變化。在另一個實施方式中，使用外部對照樣品。對於外部對照樣品，來自該個體的樣品中標識物的存在或數量將與另一個體中該標識物的存在或數量進行比較，後者個體已知正患有或已知具有某種給定狀況的風險，或者個體已知沒有給定狀況，即"正常個體"。例如，在患者樣品中的標識物水平可與HF中與特定病程有關的已知水平相比較。通常，樣品標識物水平直接或間接與診斷相關，並且例如該標識物水平用於確定個體是否具有HF的風險。可選擇地，例如，樣品的標識物水平可以與已知與在HF患者治療時的反應、急性和慢性心力衰竭鑑別診斷、選擇適當的藥物治療HF的指導、鑑別疾病進展風險或隨訪HF患者有關的標識物水平相比較。根據計劃的診斷用途，選擇適當的對照樣品並且確定其中標誌物的對照或參考值。技術人員將理解在一個實施方式中這些對照樣品是從參考群體獲得的，該群體年齡匹配並且沒有混雜的疾病。同時^支術人員明了，在對照樣品中確定的標識物絕對值將由所用的試驗方法決定。優選從來自於適當參考群體的100位明確表徵的個體的樣品被用於確定對照(參考)值。還優選的是，參考群體也可以被選擇由20、30、50、200、500或1000個個體組成。健康個體代表優選的參考群體以確定對照值。在一個實施方式中，對照樣品是內部對照樣品。該實施方案中的系列樣品來自接受研究的個體，並且比較標識物水平。從來自個體的樣品測定的SLIM-1的提高的值是心力衰竭的指示。對照組或對照群體中測得的SLIM-1值用於例如確定截止值或參考範圍。高於該截止值或超出參考範圍和高端點的數值被認為是升高了。在一個實施方式中，固定的截止值被確定。選定該截止值以符合感興趣的診斷問題。在一個實施方式中，從對照組或對照群體中測量的SLIM-1值用於確定參考範圍。在優選的實施方式中，如果測量值高於參考範圍的90%，SLIM-1濃度^皮認為升高。在進一步優選的實施方式中如果測量值高於參考範圍的95%、96%、97%或97.5%,SLIM-1濃度被認為升高。在一個實施方式中，對照樣品為內部對照樣品。在該實施方式中，從研究的個體中獲得系列樣品並比較標識物水平。這樣可能對於比如評價治療效果是有用的。按照本發明的方法基於從個體獲得的液體樣品，並基於這些樣品中的SLIM-1測量。在此使用的"個體"指單個人類或非人類生物體。因此在此描述的方法和組合物可應用到人類和動物疾病。優選的個體是人。SLIM蛋白，特別是SUM-1SLIM-1、SLIM-2、SLIM-3的蛋白序列各自包括4個完整的LIM結構i或和第五個LIM結構i或的後半部分(FHL，四個半LIM蛋白)。SLIM-1分子量為36kD，由280個胺基酸組成(參見SEQIDNO:l)。最初，LIM蛋白家族的命名源於首次發現LIM序列的三個經鑑定的轉錄因子的首字母lin-l1(Freyd,G.等.，Nature344(1990)876-879)、isle(Karlsson,O.等，Nature344(1990)879-882)和mec-3(Way,J.C.和Chalfie,M.,Cell54(1988)5-16)。LIM蛋白涉及大量的細胞功能，例如轉錄、癌轉化、信號轉導和細胞粘附。由於LIM結構域包含鋅指結構，這可以通過蛋白-蛋白相互作用來實現。LIM結構域可以與其他LIM結構域締合，從而形成同二聚體和異二聚體(Feuerstein,R.等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA91(1994)10655-10659)。據報導SLIM-1/FHL-1的定位是在骨骼成肌細胞的l佔著斑，它促進依賴整聯蛋白的細胞擴展和遷移(Robinson等，Am.J.Physiol.284(2003)C681)。近來人骨骼肌文庫的酵母雙雜交篩選鑑定出肌球蛋白結合蛋白C(MyBP-C)是FHL-1結合伴侶，並推測FHL-l的功能是MyBP-C活性和肌節裝配的調節因子(McGmth,M丄等，J.Biol.Chem.281(2006)7666-7683)。FHL-1的表達才莫式暗示FHL-1在胚胎發育過程中(Chu,P.H.等，Mech.Dev.95(200)259-265)和出生後骨骼肌生長過程中在心臟中發揮重要作用。已發現在拉伸引發的骨骼肌肥大過程中FHL-1mRNA水平升高(Morgan,M丄等,Biochem.Biophys.Res.Commun.212(1995)840-846)。去神經支配引發的萎縮過程中FHL-1mRNA水平下降(Loughna，P.T.等，Mol.CellBiol.Res.Commun.3(2000)136-140)。不一致的研究報導了，人衰竭心臟中的SLIM-1mRNA分別的上調或下調。據報導，人月巴大心臟中的FHL-1mRNA表達增加(Hwang,D.M.等，Circulation96(1997)4146-4203;Hwang,D.M.等，Genomics66(2000)1畫14;Lim，D,S.等,J.Am.Coll.Cardiol.38(2001)1175-1180)。相反，Loughna,P.T.等，Mol.Cell.Biol.Res.Commun.3(2000)136-140和Zimme謹nn,R.等，Circulation100，Suppl.1(1999)565報導FHL-1表達下降。Yang,J等(Circulation102(2000)3046-3052)報導源自人衰竭心臟的組織中，SLIM-1的mRNA和蛋白水平均減少。US2006/0094038描述了在個體對心力衰竭易感性的診斷中，眾多基因的差別基因表達，包括FHL-1(上調)和FHL-2(下調)。此外，描述了FHL-1mRNA差別表達在皮膚、神經、造血和胚胎幹細胞群中的微陣列研究，暗示FHL-1在多種幹細胞和祖細胞群中更廣泛的作用(Ramalho-SantosM.等，Science298(2002)597-600;Tumbar，T.等，Science303(2004)359-363)。另夕卜，一些專利申請通過分析FHL-1的差別表達，進行腫瘤診斷。US2005/0037389公開了眾多基因，其中之一是FHL-1，可用於診斷子宮漿液性乳頭狀癌和卵巢漿液性乳頭瘤。US2005/0048535公開了包括FHL-1的候選基因列表，它們與原發卵巢漿液性乳頭瘤有關。US2004/0029151描述了前列腺癌的基因概況分析(geneticprofiling),在其他許多差別表達的基因中提到了SLIM-l。WO2006/112867涉及通過基因概況分析的乳頭狀腎細胞癌侵襲性診斷，在其他許多差別表達的基因中提到了SLIM-l。WO2004/092410描述了分別在類風溼性關節炎或骨關節炎中SLIM-l的差別表達。還報導了另一種疾病多發性硬化症與FHL-1基因表達相關(上調)(US2004/0018522和US2004/0156826)。因此似乎現有4支術通過分析相應的mRNA水平已廣泛研究了SLIM-l的基因表達。這些研究並不清楚因為相反的數據也被報導。另外迄今也沒有顯示SLIM-l蛋白水平與循環中心力衰竭之間關係的數據。優選地，標識物SLIM-l是通過使用特異結合試劑從液體樣品中特異性測定的。特異結合試劑是例如SLIM-l受體，結合SLIM-l的凝集素或SLIM-l的抗體。特異結合試劑對其相應的靶分子具有至少1071/mol的親合力。特異結合試劑優選對靶分子具有1081/mol或更優選109l/mol的親合力。技術人員應理解術語"特定"用於表示存在於樣品中的其他生物分子不能與SLIM-l特異結合試劑有明顯的結合。優選靶分子的親合力的10%或更小，更優選地僅5%或更小。優選的特異結合試劑應具有上述親合力以及特異性的最低的標準。特異結合試劑優選是與SLIM-l反應的抗體。術語"抗體"指多克隆抗體、單克隆抗體、這些抗體的抗原結合片段、單鏈抗體以及包括抗體結合結構域的遺傳構建物。任何保留上述特異結合試劑標準的抗體片段都能被使用。抗體可通過目前工藝水平步驟所生產，例如，如Tijssen描述(Tijssen,P.，酶4關免疫分衝斤的實踐和理i侖(Practiceandtheoryofenzymeimmunoassays)，ElsevierSciencePublishersB.V.,阿姆斯特丹(1990)，全書，特別是43-78頁)。此外，技術人員非常了解基於可用於抗體特異性分離的免疫吸附劑的方法。通過這些方法，多克隆抗體的質量以及由此它們在免疫測定中的性能可被增強(Tijssen，P.，上文，108-115頁)。對於在該本發明中公開的成果，可以使用從兔子獲得的多克隆抗體。然而，很清楚，從不同的物種，例如大鼠、山羊或豚鼠中獲得的多克隆抗體以及單克隆抗體也可以使用。因為單克隆抗體能以恆定性能按需要的數量生產，它們是臨床常規的分析的開發中的理想工具。在根據本發明的方法中，產生和使用SLIM-1的單克隆抗體分別代表其他的優選實施方式。現在技術人員應理解，SLIM-1已經鑑定為在評估HF中有用的標識物，可用替代方法獲得與本發明成果相當的結果。例如，可使用產生抗體的替代策略。這些策略包括使用合成或重組肽等等，這些肽代表SLIM-1的臨床相關的表位以用於免疫。可選地，可以使用DNA免疫，又稱i故DNA疫苗4矣種。對於測量，將從個體中獲得的液體樣品和SLIM-1的特異結合試劑在適合形成結合試劑SLIM-l-複合物的條件下孵育。這些情況無須特別指定，因為即便沒有任何創造性勞動技術人員也可以很容易地鑑定這些適當的孵育條件。測定結合試劑SLIM-l-複合物的數量並用於HF的評估。技術人員應理解，有許多的方法可測定特異結合試劑SLIM-l-複合物的數量，這些方法在相關的教科書中有詳細地描述(參見,例^口,TijssenP.，上文，或Diamandis,E.P.andChristopoulos,T.K.(eds.),Immunoassay,AcademicPress,Boston(1996))。優選地，使用三明治檢驗形式檢測SLIM-1。在這種檢驗中，用第一特異結合試劑從一側捕獲SLIM-1,並使用帶有能直接或間接檢測標記的第二特異結合試劑作用於另一側。優選地，在定性(有或無SLIM-1)或定量(確定SLIM-1的量)的免疫測定中，使用抗SLIM-1的抗體。如在實施例部分詳細描述的，兩種小鼠模型已經用於鑑定通過先進的蛋白組方法在實驗動物心臟組織中發現的多肽。然而這些模型得到了至少部分矛盾的數據，當然多肽的組織數據並不能代表這些多肽在循環中的有或無。在一種模型中被發現差異表達的標識物可能不能在第二種模型中差異表達，或者甚,至在進一步的模型中顯示出矛盾的數據。即使蛋白可以在組織中差異表達，但如果從體液中測定，大多數情況下這種蛋白沒有任何診斷性關聯，因為它可能不被釋放至循環中，可能變成片段或者被修飾，例如從細胞或者組織釋放時，可能在循環系統中不穩定，可能在循環系統中不能被檢測，可能對於特定的疾病不特異，等等。令人驚訝地，本發明的發明人能在體液樣品中檢測蛋白SLIM-1。更意外地是，他們能證明在這種獲自個體的液體樣品中SLIM-1的存在可以與HF相關。4吏用標識物SLIM-1評估HF無需組織和活4企樣品。測量蛋白SLIM-1的水平在HF領域被認為是十分優越的。在一個優選實施方式中，依據本發明的方法是以血清作為液體樣品材料進行的。在一個更優選的實施方式中，按照本發明的方法是以血漿作為液體樣品材料進行的。在另一個優選的實施方式中，按照本發明的方法是以全血作為液體樣品材料進行的。在進一步優選的實施方式中，本發明涉及蛋白SLIM-1作為標識物分子從獲自個體的液體樣品來評價心力衰竭的用途。用於診斷的理想情況應是其中單一事件或者過程導致相應疾病的情況，例如傳染病。在其他所有的病例中正確的診斷是^f艮難的，尤其是該疾病的病原學沒有像HF病那樣被充分認識。技術人員應理解，在HF領域，針對某一診斷問題，沒有生化標識物在診斷上有100%特異性並同時具有100%敏感性。生化標識物更合適用以某種可能性或者預測值來評估潛在的診斷問題。技術人員十分熟悉對於評價診斷問題時用來計算相對危險性或者可能性的常規數學/統計方法。在常規臨床實踐中，在醫師診斷、治療和處置潛在疾病時通常會同時考察各種的臨"^症狀和生物標誌物。優選地，在本發明的進一步優選的實施方式中，用於評估HF的方法是通過測量SLIM-1和一種或更多種其他的標識物的濃度並通過在HF的評估中利用SLIM-1和一種或更多種其他的標識物的濃度來實現的。在評估HF中，標識物SLIM-1將會以下面的一個或更多個方面輔助醫師:評估個體患心力衰竭的風險或者評估患有心力衰竭的患者，例如鑑定心力衰竭的階段；區分急性和慢性心力衰竭；判斷疾病進程的風險；對選擇適當治療提供指導；監測患者對治療的反應；監測病程，即隨訪HF患者。篩選(評估個體是否有發展心力衰竭的風險)在一個優選的實施方式中，本發明涉及一種評估個體是否有發展心力衰竭風險的體外方法，包括步驟測量樣品中標識物SLIM-1的濃度，任選地測量樣品中一種或更多種心力衰竭的其他標識物的濃度，通過將該SLIM-1濃度和任選地對所述任選的一種或更多種其他標識物觀'J量的濃度與該標識物或這些標識物濃度的參考值比較來評價所述個體發展為心力衰竭的風險。本發明意義上的篩選涉及關於個體發展心力衰竭的風險的無偏見的評估。而這種篩選在理論上可以對任何樣品進行，在臨床實踐中這種篩選通常會給予具有以某種方式發展心力衰竭風險的個體。按以上討論的，這種個體可以無臨床症狀，即他們沒有HF的體徵或者症狀。在一個優選實施方式中，將對具有發展心力衰竭風險的個體進行HF篩選，例如屬於按ACC/AHA實踐指南定義的階段A或者B。如上述，心力衰竭是發達國家中流行性最高、花費最多和對生命威脅最嚴重的疾病之一。因為它的高流行性和無症狀期長，為了幹預並如果可能的話阻斷該病程，對於個體發展HF風險的鑑定將變得極其重要。只有進行足夠早期的風險評估，才可能阻止HF病程從無症狀期進入有症狀期。心力衰竭風險的評估是通過數學/統計方法進行的，技術人員對該方法有充分地認識和理解。優選地，個體患心力衰竭的風險是以相對值表示的並按所謂的相對風險性(RR)來給出。為了計算這種心力衰竭的RR，將SLIM-1的個體數值與在參考群體中確定的數值進行對比，優選不發生心力衰竭的健康個體。此外優選對這種心力衰竭RR的評估基於在研究期內，優選一年或者也可優選兩年之內發展心力衰竭的個體群和在相同研究期內未發展心力衰竭的個體群。在另一個優選實施方式中，本發明涉及標識物SLIM-1來篩選心力衰竭的用途。如技術人員熟知，術語"用作標識物"表示標識物分子的濃度可以通過適當手段進行量化而且測出的這種標識物的值將用於指示，即標示，疾病或者臨床狀況的有或無。用於定量的適當手段例如是特異結合試劑，如抗體。優選地，HF篩選將實施於懷疑在未來出現心力衰竭風險的個體上。在該意義上，具有未來心力衰竭風險的患者是已診斷有高血壓、動脈粥樣硬化疾病、糖尿病、肥胖和代謝綜合4正的患者。優選地，對患有高血壓、動脈粥樣硬化疾病、糖尿病和/或代謝症候群的個體進行未來心力衰竭的風險評估。還優選的是，標識物SLIM-1對處於按照ACC/AHA實踐指南定義的階段B中的個體，即呈現心臟結構改變但沒有顯示心力衰竭症狀的個體評估未來心力衰竭風險的用途。在一個更優選的實施方式中，本發明涉及SLIM-1作為HF標識物組合的一種標識物用於HF篩選目的的用途。在篩選設置中，SLIM-1的水平升高是個體發展心力衰竭的風險升高的陽性指示。患者的分級在一個優選的實施方式中，本發明涉及一種輔助對心力衰竭患者分級的體外方法，包括步驟a)測量樣品中標識物SLIM-1的濃度，b)任選地測量樣品中一種或更多種心力衰竭的其他標識物的濃度，並通過將在步驟(a)中確定的濃度和任選地步驟(b)中確定的濃度與該標識物或這些標識物濃度的參考值進行比較來對心力衰竭進行分級。優選地標識物SLIM-1的水平用作在分級中輔助將受試個體分入個體組，這些組為臨床"正常"(即，按照ACA/ACC分類在階段A的個體)，具有結構心臟病但無症狀的患者(按照ACA/ACC分類的階段B)和心力衰竭患者組(即，按照ACA/ACC分類處於階段C或階段D的患者)。區別急性心臟事件和慢性心臟病在一個優選的實施方式中，本發明涉及輔助鑑別診斷急性心臟事件和慢性心臟病的體外方法，包括步驟測量樣品中標識物SLIM-1的濃度，任選地測量樣品中一種或更多種心力衰竭的其他標識物的濃度，並通過將步驟(a)確定的濃度和任選地步驟(b)中確定的濃度與這個標識物或這些標識物濃度的參考值進行比較以確立對急性心臟事件和慢性心臟病的鑑別診斷。所屬領域的技術人員熟悉"急性心臟事件"和"慢性心臟病"的意優選地，"急性心臟事件"涉及心臟的急性狀況、疾病或機能紊亂，特別指急性心力衰竭，例如，心肌梗死(MI)或心律失常。根據MI的程度，可能後續LVD和CHF。優選地，"慢性心臟病"是心臟功能的減弱，例如，由於心臟缺血、冠狀動脈病或前期的特別小型的心肌梗死(也許後續發生進行性LVD)造成。也可能由於炎性疾病、心臟瓣膜缺陷(例如二尖瓣缺陷)、擴張型心肌病(dilatativecardiomyopathy)、月巴厚型心肌病、心臟節奏缺陷(心律失常)和慢性阻塞性肺病造成。因此，慢性心臟病顯然也可以包括患有過急性冠狀症候群，例如MI的患者，但他們當前沒有患有急性心臟事件。區分急性心臟事件和慢性心臟病十分重要，因為急性心臟事件和慢性心臟病可能要求相當不同的治療方案。例如對於存在急性心肌梗死的患者早期再灌注治療可能極度重要。而對慢性心力衰竭的患者進行再灌注治療最多是對這個患者無害或僅僅是幾乎無害。按照本發明的一個更優選的實施方式，標識物SLIM-1用於鑑別診斷急性和慢性心力衰竭。評估疾病進展的風險在一個優選的實施方式中，本發明涉及一種評估HF患者疾病進展風險的體外方法，包括步驟在樣品中測量標識物SLIM-1的濃度，任選地測量樣品中一種或更多種心力衰竭的其他標識物的濃度，通過將該SLIM-1濃度和任選地對所述任選的一種或更多種其他的標識物確定的濃度與該標識物或這些標識物的濃度的參考值比較來確定所述個體疾病進展的風險。目前很難評估或甚至預言一種合理的可能性，即診斷有HF的患者是否具有一種或多或少的穩定狀態，或是否疾病將會發展，以及患者的健康狀態是否最終可能惡化。心力衰竭的嚴重性和進展在臨床上通常通過評估臨床症狀或使用成像技術，如超聲波心動描記術鑑定有害變化而確定的。在一個具體實施方式中，心力衰竭的惡化是通過監測左側心室射血分數(LVEF)來確定。LVEF的5%或更多的惡化被認為是疾病進展。在進一步優選的實施方式中，本發明因此涉及標識物SLIM-1來評估患有HF患者的疾病進展風險的用途。在患有HF的患者的疾病進展評估中，SLIM-1水平的升高指示在HF早期階段疾病進展的風險升高，而SLIM-1水平的降低指示末期心力衰竭。指導選擇適當的HF治療方法在一個優選的實施方式中，本發明涉及輔助選擇適當的HF療法的體外方法，包括步驟在樣品中測量標識物SLIM-1的濃度，任選地測量樣品中一種或更多種心力衰竭的其他標識物的濃度，並通過將該SLIM-1濃度和4壬選地對所述^f壬選的一種或更多種其4也的標識物測定的濃度與該標識物或這些標識物的濃度的參考值比較來選擇適當的療法。人們期望標識物SLIM-1能輔助醫師從心力衰竭領域中手邊各種治療方案中選擇最適當的治療方案。因此一個更優選的實施方式涉及了標識物SLIM-1在選擇治療患HF患者的方案中的用途。監測患者對治療方法的反應在一個優選的實施方式中，本發明涉及一種監測患者對HF治療方法的反應的體外方法，包括步驟a)在樣品中測量標識物SLIM-1的濃度，b)任選地測量樣品中一種或更多種心力衰竭的其他標識物的濃度，並通過將步驟(a)中確定的SLIM-1濃度和任選地步驟(b)中確定的濃度與該標識物或這些標識物的濃度的參考值比較來監測患者對HF治療方法的反應。可選擇地，上述用於監測患者對療法反應的方法可以通過確定治療前後SLIM-1和任選所述一種或更多種其他標識物的標識物水平並對治療前後的標識物水平加以比較來實施。心力衰竭的診斷是臨床確定的。根據本發明，如果患者到達按ACC/AHA實踐指南定義的階段C或D的標準，HF被認為是臨床確定的。依據該指南，階段C指患者具有結構性心臟病並有心力衰竭的較早或當前症狀。階段D的患者是具有難治性心力衰竭的患者，需要專門的幹預。進一步如上所示，測定的NT-proBNP值與心力衰竭的嚴重性高度相關。然而，BNP和NT-proBNP在監測患者對治療方法的反應上並不理想,參考如Beck-da-Silva，L.等，Congest.HeartFail.11(2005)248-253,quiz254-255。標識物SLIM-1看起來適合於監測患者對治療方法的反應。本發明因此也涉及SLIM-1監測患者對治療方法的反應的用途。在該診斷領域，標識物SLIM-1還可以用於確定在治療之前的基線值並測定在治療之後的一個或幾個時間點的SLIM-1。在隨訪的HF患者中SLIM-1的水平升高是HF的治療有效的陽性指示。標識物組合各生化標識物可以被單獨測定，或者在本發明的一個優選的實施方式中，也可以用基於晶片或基於珠的陣列技術同時測定。然後用每個標識物的單獨截止獨立解釋該生物標識物的濃度或將它們組合起來解釋，即它們形成標識物組合。技術人員將理解將標識物水平關聯於某種可能性或風險的步驟可以用不同的方法進行並完成。優選地，標識物SLIM-1和一種或更多種其他的標識物的測定值用數學的方法進行組合併且該組合值與潛在診斷問題關聯。標識物的值可以用任何本領域適當的數學法與SLIM-1的測量數據組合起來。優選地，應用於標識物組合的數學算法是邏輯函數。應用這種數學算法或這種邏輯函數的結果優選是單一值。依賴於潛在診斷問題上，該值可以很容易地與如個體患心力衰竭的風險或在評估HF患者中有益的其他計劃診斷應用相互關聯。在一個優選的方式中該邏輯函數按以下步驟獲得a)將個體分成組，例如正常、具有心力衰竭風險的個體、具有急性或慢性心力衰竭患者等組，b)用單變量分析法鑑定這些組之間有顯著相異的標識物，c)邏輯回歸分析以評估在評估這些不同各組中有用的標識物獨立差異值，d)構建邏輯函數來組合獨立差異值。在這類分析中標識物不再是獨立的而代表標識物組合。在一個優選的實施方式中，用於組合SLIM-1值和另外至少一個標識物值的邏輯函數通過以下方法獲得a)將個體分別地分入正常組和心力衰竭風險個體組，b)確定SLIM-1的值和另外至少一個標識物的值，c)進行邏輯回歸分析，和d)構建邏輯函數來組合SLIM-1的值和另外至少一個標識物的4直。用於將標識物組合與疾病關聯的邏輯函數優選使用算法，這種算法通過統計方法的應用而開發得到。適當統計方法例如判別分析(DA)(即線性、二次方程、正規化(regularized)-DA),核方法(即SVM),非參數法(即k-最近-相鄰分級法)，PLS(偏最小二乘法)，基於樹狀法(即邏輯回歸，CART,隨才幾森林法，Boosting/Bagging法)，廣義線性模型(即，邏輯回歸)，基於主分量的方法(即，SIMCA),廣義加性模型，基於模糊邏輯的方法，基於神經網絡和遺傳算法的方法。技術人員選擇適當的統計方法來評價本發明的標識物組合併藉此獲得適當的數學算法應沒有什麼問題。優選地，應用統計方法來獲得用於評估心力衰竭的數學算法，該統計方法選自於DA(即線性-，二次方程-，正規化的判別分析)，核方法(即SVM),非參數法(即，k-最近-相鄰分級法),PLS(偏最小二乘法)，基於樹狀法(即邏輯回歸，CART,隨機森林法，Boosting方法)，或廣義線性模型(即邏輯回歸)。涉及這些統計方法的細節可在以下的參考資料中找到Ruczinski,I.等，J.ofComputationalandGraphicalStatistics12(2003)475-511;Friedman,J.H.，J.oftheAmericanStatisticalAssociation84(1989)165-175;Hastie，T.等，TheElementsofStatisticalLearning,SpringerVerlag(2001);Breiman,L.等,Classificationandregressiontrees,WadsworthInternationalGroup,California(1984);Breiman,L.,MachineLearning45(2001)5-32;Pepe,M.S.,theStatisticalEvaluationofMedicalTestsforClassificationandPrediction,OxfordStatisticalScienceSeries,28，OxfordUniversityPress(2003);和Duda,R.O.等，PatternClassification,JohnWiley&Sons，Inc,Inc.,2nded.(2001)。發明的一個優選的實施方式是將優化多變量截止用於生物標誌物的潛在組合併區分狀態A和狀態B，例如，分別區分正常和具有心力衰竭風險的個體，對治療有反應的HF患者和治療失敗，患有急性心力衰竭的患者和患有慢性心力衰竭的HF患者，顯示出疾病進展的HF患者和未顯示疾病進展的HF患者。在受試者工作曲線(receiveroperatorcurve)以下的面積(=AUC)能指示診斷程序的有效性或正確性。診斷方法的正確性最好是由它的受試者工作特徵(receiver-operatingcharacteristics)(ROC)來進行描述(特別見Zweig，M.H.，和Campbell,G.,Clin.Chem.39(1993)561-577)。ROC圖是從連續改變所有觀測數據的判定閾中全部敏感性/特異性配對結果的繪圖。實驗室試驗的臨床效果取決於它診斷的準確性，或正確將受試者分級入臨床相關亞群的能力。診斷準確性衡量該測定正確區別研究的受試者兩種不同狀況的能力。這些狀況例如健康和疾病或疾病進展對沒有疾病進展。在每個病例中，ROC曲線圖通過在判定閾全範圍中繪製敏感性對1-特異性的曲線來描述了兩種分布之間的重疊。y軸是敏感性，或真陽性分數[按(真陽性測定結果數量)/(真陽性測定結果數量+假陰性測定結果數量)確定]。這也表示為疾病或狀況存在的陽性。它僅是通過受影響亞群計算得到。X軸是假陽性分數，或l-特異性[按(假陽性結果數量)/(真陰性結果數量+假陽性結果數量)確定]。它是特異性的指標，完全由未受影響亞群計算得到。因為真假陽性分數完全分開計算，通過使用來自兩種不同亞群的試驗結果，ROC曲線圖與樣品中的疾病流行性無關。在ROC曲線圖中的每個點表示敏感性/l-特異性配對，其對應於一個特定的判斷閾。辨別力很好的測定(在兩種結果分布上沒有重疊)具有的ROC曲線圖穿過左上角，真陽性分數為1.0或100%(非常好的敏感性)，假陽性分數是O(非常好的特異性)。對於一個無辨別力的測定(對兩組的結果分布相同)來說理論曲線圖是一條從左下角到右上角的45。對角線。大多數曲線在這兩種極端之間。(如果ROC曲線圖完全落在45。對角線下，這種情況很容易補救，即通過顛倒"陽性"標準，從"大於"到"小於"或反之亦然。)定性地，曲線圖越才妄近左上角，測定的總精度越高。量化實驗室試驗診斷準確性的一個方便的目標是通過單一數字來表示它的效果。最常用的總體量度是ROC曲線下的面積(AUC)。按照慣例，該面積總^).5(如果不是這樣，可以顛倒判定規則來使它如此)。數值介於l.O(兩組的測試值非常好地分開)和0.5(在測試值上兩組無明顯的分布差異)之間。該面積不僅僅依賴曲線圖的特定部分如最接近對角線的點或在90%特異性處的敏感性，而是整個曲線圖。這是一個定量的、描述性的表達式，表示ROC曲線圖接近完美(面積=1.0)的程度。總的檢驗敏感性依賴於特異性，該特異性對於實踐此處公開的方法是需要的。在某些優選的設定中，75%的特異性可能足夠並且統計方法和結果算法可以基於該特異性的需求。在一個優選的實施方式中，應用於評估個體心力衰竭風險的方法是基於80%、85%或優選90%或95%的特異性。正如以上討^論的，標識物SLIM-1有助於評估個體發展心力衰竭的風險以及進一步地在體外診斷評估患有心力衰竭患者。因此一個優選實施方式是SLIM-1作為評估心力衰竭的標識物分子的用途。4吏用包括SLIM-1和一種或更多種其他的HF標識物的標識物組合來評估HF患者或評估個體患HF風險代表了本發明的一種進一步優選的實施方式。在這種標識物組合中，一種或更多種其他的標識物優選地選自利尿鈉肽標識物、心臟肌鉤蛋白標識物和炎症標識物。可與SLIM-1測量組合的一種或更多種優選的其他HF標識物優選選自利尿鈉肽標識物、心臟肌4丐蛋白標識物和炎症標識物。這些優選的其他標識物的測量優選地與SLIM-1的測量組合或者形成包括-SLIM-1在內的HF標識物組合的一部分，它們在以下內容中分別會有更詳細地討論。利尿鈉肽標識物.在本發明意義上，利尿鈉肽標識物可以是從心房利尿鈉肽(ANP)家族中挑選出來的標識物，也可以是從腦利尿鈉肽(BNP)家族中挑選出來的標識物。無論是在心房利尿鈉肽家族還是在腦利尿鈉肽家族中的多肽標識物都是源自於相應活性激素的前形式原(preproforms)。按照本發明優選的利尿鈉肽標識物是NT-proANP、ANP、NT-proBNP、BNP和可用免疫法4企測的其生理片4殳。技術人員4艮容易理解，可用免疫法檢測的片段必須包括至少一個表位以允許特異性檢測這種生理片段。生理片段是天然存在於個體循環的片段。在兩種利尿鈉肽家族中的標識物代表相應激素原的片段，分別即proANP和proBNP。因為對於兩個家族的考慮是相似的，僅對BNP標識物家族作一些詳細描述。BNP家族的激素原，即proBNP,由108個胺基酸組成。proBNP被剪切成為32個C末端胺基酸(77-108),其代表有生物活性的激素BNP,和叫做N末端proBNP(或NT-proBNP)的N末端胺基酸1-76。BNP、N末端proBNP(l-76)以及進一步的分解產物(Hunt，P.J.,等，Biochem.BiophysRes.Com.214(1995)1175-1183)在血液中循環。完整的前體分子(proBNPl-108)是否也存在於血漿現在還不完全明確。不過可以闡述為proBNP(1-108)在血漿中的低釋放量是可檢測的，但由於在其N末端的迅速局部降解，一些胺基酸是缺失的(Hunt,P丄，等，Peptides18(1997)1475-1481)。現在普遍接受例如對於NT-proBNP,該分子殘存於胺基酸10至50之間的中心部分代表生理上更穩定的部分。包括NT-proBNP的這個中心部分的NT-proBNP分子能從體液中被可靠地測定。關於基於免疫法4企測該NT-proBNP分子中心部分的方法在WO00/45176中有詳細的z〉開，讀者可以參考該處了解細節。僅測定NT-proBNP的某一亞組份可能更為優越，對此提出了術語"天然NT-proBNP"。關於NT-proBNP亞組份的詳細公開可以在WO2004/099253中找到。技術人員將在那裡找到所有必需的指導。優選地，測定的NT-proBNP是或對應於使用來自德國RocheDiagnostics的ElecsysNT-proBNP測定劑測定的NT-proBNP。應用NT-proBNP進行預分析是有效的，這樣可使樣品轉移至中心實驗室變得容易(Muelle，T.，等，Clin.Chem.Lab.Med.42(2004)942-944)。血樣可以在室溫下存儲幾天或可郵寄或運輸而沒有回收率的損失。相反，將BNP儲存在室溫下或4。C48小時可能造成至少20%的濃度損失(Mueller,T.,等，上文;Wu，A.H.等，Clin.Chem.50(2004)867-873)。腦源的利尿鈉肽家族(尤其是BNP和NT-proBNP)已經在對某些群體進行HF篩選時進行了徹底的研究。這些標識物，尤其是NT-proBNP的發現是相當鼓舞人心的。NT-proBNP的值甚至在無症狀"患者"中升高，這種升高的值明確地表明了"心臟問題"(Gremmler，B.等，Exp.Clin.Cardiol.8(2003)91-94)。這些作者證明了升高的NT-proBNP顯示了"心-腎不適"的存在並應該迅速安排進一步檢查。與其他的組的研究人員相一致，Gremmler等也發現了NT-proBNP濃度異常對於排除群體中的HF和排除氣喘受試者中的左心室功能紊亂(-LVD)是準確的診斷性試驗。陰性BNP或NT-proBNP值在排除HF或LVD時的作用被其他組研究人員確證，參考如McDonagh,T.A.等，Eur.J.HeartFail.6(2004)269-273;以及Gustafsson,F.等，J.Card.Fail.11，Suppl.5(2005)S15畫20。BNP主要在心室中產生(雖然不是唯一)並在壁壓力升高時釋放。因此，BNP釋放的升高主要反映了心室功能紊亂或起源於心房但影響心室的功能紊亂，例如，通過流入量減少或血容量過載。與BNP相反，ANP主要從心房產生並釋放。因此ANP的水平可能主要反映心房的功能。ANP和BNP是活性激素，與他們的相應非活性對應物NT-proANP和NT-proBNP相比具有較短的半衰期。BNP在血液中被代謝，而NT-proBNP則作為完整的分子在血液中循環並通過腎臟除去。NT-proBNP的體內半衰期比BNP長120分鐘，BNP的體內半衰期為20分鐘(Smith,M.W.等，J.Endocrinol.167(2000)239-246)。因此取決於時間過程或感興趣的性質，活性的或非活性形式的利尿鈉肽的測量都可能是有益的。在個體心力衰竭風險的評估中，測定的SLIM-1值優選與NT-proANP和/或NT-proBNP的值相組合。優選地，NT-proBNP的值與SLIM-1的值相組合。類似的考慮應用於選擇適當的治療方法、鑑別疾病進展的風險並監測疾病的過程。在SLIM-1用於評估患者對治療方法的反應的情況下，優選地將其的測量與ANP或BNP的測量組合起來。在SLIM-1用來區分急性和慢性心力衰竭的情況下，優選的標識物組合包含SLIM-1、ANP或proANP和BNP或proBNP。心臟肌4丐蛋白標識物術語心臟肌鈣蛋白涉及心臟肌鈣蛋白I和肌鈣蛋白T的同種型。按上述說明，術語標識物也涉及標識物分子的生理變異體，如生理片段或複合體。對於心臟肌鈣蛋白標識物，它們的生理學存在的複合體已知是診斷相關的並因此明確包含在內。肌鉤蛋白T具有約37.000Da的分子量。發現於心臟組織的肌鈣蛋白T同種型(cTnT)與骨骼肌TnT有充分的區別，以至於可以生產抗體來判別這兩種TnT同種型。TnT被認為是急性心肌損傷的標識物；參見Katus，H.A.等J.Mol.Cell.Cardiol.21(1989)1349-1353;Hamm,C.W.等，N.Engl.J.Med.327(1992)146-150;Ohman，E.M.,等，N.Engl.J.Med.335(1996)1333-1341;Christenson,R.H.,等Clin.Chem.44(1998)494-501;和EP0394819。肌4丐蛋白I(TnI)是肌鈣蛋白複合物的抑制元件，為25kDa，發現於^L肉組織。Tnl在沒有Ca2+時結合肌動蛋白，抑制肌動球蛋白的三磷酸腺苷酶活性。發現於心臟組織的Tnl同種型(cTnl)與骨骼肌Tnl有40%的差異，可以用免疫法判別兩種同種型。cTnl的正常血漿濃度小於0.1ng/ml(4pM)。cTnl在心臟細胞死亡後釋放進入血流；因此在有急性心肌梗死的患者血漿中cTnl濃度升高(Benamer，H.等Am.J.Cardiol.82(1998)845-850)。肌鈣蛋白I和T獨特的心臟同種型讓它們可以通過免疫法與其他的骨骼肌肌鈣蛋白加以區別。因此肌鈣蛋白I和T由損傷心肌釋》文進入血液可以特異性地與心臟組織損傷相關聯。現在技術人員也知道心臟肌鈣蛋白可能從循環中檢出，可能是游離態也可能是複合物的一部分(參考如US6,333,397,US6,376,206和US6,174,686)。在評估個體患心力衰竭的風險以及評估已患心力衰竭患者的時候，測定的SLIM-1值優選地與肌鈣蛋白T和/或月幾鈣蛋白I心臟同種型的值相組合。與標識物SLIM-1組合使用的優選的心臟肌鈣蛋白是心臟月幾釣蛋白T。炎症標識物技術人員對術語炎症標識物是熟悉的。優選的炎症標識物是白介素-6，C-反應蛋白、血清澱粉樣蛋白A和S100蛋白。白介素-6(IL-6)是一種21kDa的分泌性蛋白質，它具有多種生物活性，可分為參與紅細胞生成作用的活性和參與活化先天免疫反應的活性。IL-6是急性期反應物並刺激多種蛋白，包括粘著分子的合成。它的主要功能是介導急性期肝臟蛋白的生產，細胞因子IL-1和TNF-a誘導它的合成。IL-6通常是由巨噬細胞和T淋巴細胞產生。IL-6的正常血清濃度小於5pg/ml。C-反應蛋白(CRP)是一種同型五聚體(homopentameric)Ca2+-結合急性期蛋白，具有參與宿主防禦的21kDa亞基。CRP的合成可被IL-6誘導以及IL-1間接誘導，因為IL-1可以觸發肝血竇的庫柏法(kupffer)細胞的IL-6的合成。在90%的健康群體中CRP的正常血漿濃度小於3jng/ml(30nM)，在99%的健康個體中小於10jug/ml(100nM)。例如血漿的CRP濃度可以通過血清澱粉樣蛋白A(=SAA)來測定，血清澱粉樣蛋白A是一種11.7kDa的低分子量急性期蛋白。它主要是在肝響應於IL-1、IL-6或TNF-a刺激時合成，並參與調控T細力包依賴的免疫反應。在急性事件中，SAA的濃度增加最高達1000倍以到達1毫克/毫升。它可以用來監測在如嚢性纖維化、腎移植排斥、外傷或感染的疾病中的炎症。在類風溼性關節炎的某些病例中被用於替代CRP,但是SAA仍然沒有被廣泛認可。S100蛋白形成不斷擴大的Ca^-結合蛋白家族，該家族現在已有超過20個的成員。S100蛋白的生理性相關結構是一種同源二聚體，但有些也可以互相形成異源二聚體，例如，S100A8和S100A9。其細胞內功能包括蛋白質磷酸化、酶活性或涉及細胞增殖和分化的細胞骨架動力學的調控。因為某些S100蛋白也可以從細胞中釋放，其胞外功能現在也已有描述，例如，神經元存活、星形膠質細胞增殖、誘導細胞程序死亡以及炎性過程的調控。S100A8、S100A9、異源二聚體S100A8/A9以及S100A12已經在炎症中發現，S100A8對慢性炎症應答，而S100A9、S100A8/A9和S100A12在急性炎症中增多。S100A8、S100A9、S100A8/A9和S100A12已發現與有炎性成分的不同疾病有關聯，包括某些癌症、腎同種異體移植排異、結腸炎，最重要的是與RA有關聯(Burmeister，G.,和Gallacchi,G.，Inflammopharmacology3(1995)221-230;Foell，D.等，Rheumatology42(2003)1383-1389)。用於評估個體患HF風險或患有HF患者的最優選S100標識物，例如按照本發明使用的標識物組合，是S100A8、S100A9、S100A8/A9異源二聚體和S100A12。sE-選擇蛋白(可溶的內皮性白細胞粘著分子-1，ELAM-1)是一種115kDa的I型跨膜糖蛋白，只在內皮細胞上並僅受炎性細胞因子(IL-lfi,TNF-a)或內毒素活化後表達。細胞表面的E-選擇蛋白是一種白細胞轉動附著至內皮的媒介，該過程是白細胞在炎症位點外滲(extravasion)的必需步驟，由此該蛋白在局部炎性反應中具有重要的作用。在健康個體的血液中有發現可溶性E-選擇蛋白，這可能是由於表面表達的分子被蛋白酶剪切後生成的。已有報導在許多病理狀況下血清中sE-選擇蛋白的水平升高(Gearing,A.J.H和Hemingway,I.，Ann.N.Y.Acad.Sci.667(1992)324-331)。在一個優選實施方式中本發明涉及SLIM-1作為HF的標識物分子，與一種或更多種HF標識物分子組合用以從個體獲得的液體樣品中評估HF的用途。按以上說明，在按照本發明的優選方法中，SLIM-1的測定值至少與至少另一種標識物的值組合，這種標識物選自利尿鈉肽標識物、心臟月幾鈣蛋白標識物和炎症標識物。在一個優選實施方式中，本發明涉及SLIM-1和NT-proBNP的標識物組合來評估心力衰竭的用途。在一個優選實施方式中，本發明涉及SLIM-1和月幾鈣蛋白T的標識物組合來評估心力衰竭的用途。在一個優選實施方式中，本發明涉及SLIM-1和CRP的標識物組合來評估心力衰竭的用途。在一個更優選的實施方式中，本發明涉及包括標識物SLIM-1、fL鈣蛋白T、NT-proBNP和CRP的標識物組合。在一個更優選的實施方式中，本發明涉及用於在體外用生化標識物來評估HF的方法的標識物組，所述方法包^r測量在^^羊品中SLIM-1和一種或更多種其他的HF標識物的濃度，並使用確定的濃度來評估HF。根據本發明的標識物組，優選地用蛋白陣列技術來進行測定。陣列是可尋址的個體標識物集合。這些標識物可以在空間上被尋址，如包含於微量滴定板中或印在平面表面的陣列，其中每個標識物存在於不同的X和Y軸坐標。可選擇地，標識物也可才艮據標籤、珠、納米粒或物理性質來尋址。微陣列可按照普通技術人員已熟知的方法(參見如US5，807，522;Robinson,W.H.等，Nat.Med.8(2002)295-301;Robinson,W.H.等，ArthritisRheum.46(2002)885-893)製備。在此使用的陣列指任何具有多種可尋址標識物的免疫學測定。在一種實施方式中，可尋址標識物是抗原。在另一個實施方式中，可尋址元件是自身抗體。微陣列是小型化形式的陣列。在此使用的抗原指任何可以特異性結合於抗體的分子。術語自身抗體在該領域已有明確的定義。在一種優選實施方式中，本發明涉及蛋白陣列，其包括標識物SLIM-1和任選地包括一種或更多種HF的其他標識物。在一種優選實施方式中，本發明涉及蛋白陣列，其包括標識物SLIM-1和NT-proBNP。在一種優選實施方式中，本發明涉及蛋白陣列，其包括標識物SLIM-1和月幾4丐蛋白T。在一種優選實施方式中，本發明涉及蛋白陣列，其包括標識物SLIM-1和CRP。在一種進一步優選實施方式中，本發明涉及包括標識物SLIM-1、肌鉤蛋白T、NT-proBNP和CRP的蛋白陣列。在一種更優選的實施方式中，本發明涉及試劑盒，其包括特異性測定SLIM-1需要的試劑。優選的另一種試劑盒包括特異性測定SLIM-1需要的試劑和測定一種或更多種其他心力衰竭標識物需要的試劑，這些標識物在HF標識物組合中一起4吏用。以下提供的實施例、序列表和附圖用於輔助了解本發明，其真實範圍在附加的權利要求中闡述。需要理解，在未偏離本發明精神前提下所述的步驟可以被修改。圖1野生型和R9C小鼠的表型分析。(A)野生型小鼠(n-79)和R9C小鼠(11=44)在24周後的生存曲線。(B)用超聲波心動描記術進行的心臟縮短評估(=縮短分數)。早在8周齡R9C轉基因動物出現了明顯的功能損害。圖2野生型和AB小鼠的超聲心動圖和血液動力學參數。(A)術後2、4和8周最高壓強的變化(mmHg)。(B)術後2、4和8周左心室射血分數(LVEF)變化的百分數。(封閉圓表示來源於假手術小鼠的數據，開口圓表示來源於具主動脈綁紮(aorticbinding)(AB)的小鼠的數據)。圖3分別從R9C和對照小鼠心臟組織獲得的Western印跡數據。比起從健康的小鼠(=+/+)獲得的組織樣品，患有心力衰竭的實驗動物(R9C)的組織樣品中可觀察到SLIM-1的明顯過量表達。染色條帶下面的數字表示由質譜記錄數值確定的相對表達水平。圖4分別從10例HF和對照樣品中測得的SLIM-1。分別對標記的來源於心力衰竭患者(HF-菱形)的樣品和健康對照(正常人血清=NHS=正方形)給出在SLIM-1檢驗中的光密度(ODs)。圖5分別從10例HF和對照樣品中測得的SLIM-1。分別對標記的來源於心力衰竭患者(HF)的樣品和來自健康對照(正常人血清NHS)樣品測出的SLIM-1給出ODs。盒須圖(box-and-whisker-blots)顯示了較低和較高的四分位值(盒(boxes))以及最高和最低的值(須(whiskers))。實施例1心力衰竭的小鼠模型1.1R9C小鼠模型已報導一種遺傳的人類擴張型心肌病源於人受磷蛋白(PLN)基因(PLN-R9C)中的精氨酸9轉變為半胱氨酸(Schmitt,J.P.等，Science299(2003)1410-1413)。擴張型心肌病的發病一般開始於患病患者的青春期階段，隨後在心臟功能上漸進性惡化以導致危險和死亡。該突變的轉基因小鼠模型顯示出與患病患者類似的心臟表型，存在擴張型心月幾病、降低的心臟收縮力和早產兒死亡(Schmitt,2003,上文)。我們繪製了轉基因小鼠的存活曲線。PLN-R9C小鼠平均存活僅~20周，只有少於15%的能存活超過24周(圖1A)。在PLN-R9C系中，最早有記錄的死亡在12周齡被觀察到，而僅一隻野生型對照小鼠在24周內死亡。先於最早有記錄的死亡，八周^皮選作為疾病的'早期，階段的代表時間點，而16周被選為中點，介於8至24周之間(經典DCM)。一份詳細的分離的心臟的病理學分析顯示了PLN-R9C小鼠甚至在8周齡時心室和心房擴大的證據。分離心肌的交叉部分(獲自於野生型和PLN-R9C小鼠)在蘇木素和伊紅染色之後也顯示了左心室擴張或心室壁變薄的證據，在轉基因動物中8周開始，隨年齡增長擴張進程延續。對8、16和24周齡的力,性小鼠用超聲波心動描記術進行心臟功能測定(匯總於表1中)。前後壁厚度的超聲波心動描記術測定結果顯示R9C小鼠在8周時具有顯著的擴張，且在小鼠生存期內持續惡化。收縮性，用心臟縮短來評估(圖1B)，也是在8周時出現輕的但顯著的減低，而更顯著的減低在16周時變得明顯。雌性小鼠分析結果顯示與雄性相同的結果(數據未展示)。il:野生型和R9C雄性小鼠在8、16和24周時的超聲心動圖和血液動力學參數tableseeoriginaldocumentpage31表1中的值是平均值士SEM。在表1中使用的符號:HR=心率；AW，PW=前壁和後壁的厚度(左心室)；LVEDD,LVESD分別表示左心室舒張和收縮末期尺寸；FS-縮短分數KLVEDD-LVESD)ZLVEDDx100%;ETC=對於HR校正的射血時間；VCFC:對HR校正的周期縮短速度二FS/ETC;PAVC-對HR校正的主動脈速度頂點；E-波早期-充盈傳播(transmitral)舒張期波；LVESP，LVEDP:左心室收縮和舒張末期壓；+(1/(111113乂=左心室壓的最大正一階導數；-(1/&1113乂=左心室壓的最大負一階導數；AVA-主動脈速度增速(PAVc/加速時間)；相對WT*P<0，05。1.2主動脈綁紮(AB)小鼠模型在小鼠模型中由主動脈綁紮(AB)造成壓力過載而誘導心臟肥大。通過外科手術在C57BL小鼠實施壓力過載。升主動脈縮窄(coarction)(稱為主動脈綁紮)誘導心臟肥大以及心肌生長，特別是在左心室，這些是作為主動脈縮窄的一種初級反應。在這種小鼠模型的後期階段中心臟會變得肥大並最終膨脹。該模型可以很好地表徵並已證明可以高度重現，根據經驗該模型有10-15%或更低的低死亡率。在縮窄之後，該動物模型可用於評價響應血液動力學應力的左心室肥大和心力衰竭的發展進程。簡言之，用氯胺酮(90mg/kg)和曱苯噻嗪(Rompun)(10mg/kg)混合麻醉C57BL小鼠並使用25號針結紮主動脈。假(sham)手術小鼠經歷相同的手術步驟，只是不用針紮緊。實驗時間點為了檢驗原發肥大反應和後期的擴張反應，綁紮的動物和假手術對照在幹預後一、二、四和八周處死。通過超聲心動圖分析以評估心臟功能和肥大發展，並通過組織學檢查處死後加以確認。表2展示了不同的時間點用超聲波心動描記術評價的心臟功能的總覽。技術人員熟知表2中給出的詳細超聲心動圖參數並能在例如Asahi,M.等Proc.Natl.Acad.Sci.USA101(2004)9199-9204以及Oudit，G.Y.等，Nat.Med.9(2003)1187-1194文獻中找到。除了功能參數以外，對取自於2、4和8周的AB小鼠和對照小鼠tableseeoriginaldocumentpage33心臟組織進行蘇木紫/伊紅(HE)染色的組織學分析。組織學證實了在AB小鼠中預期的壞死和重塑過程，而在假手術小鼠的心臟組織中未顯示任何顯著的變化。在手術之後二周，結紮小鼠的心室顯示出明顯的左心室肥大，四周後進一步發展，並在術後八周變得十分類似於擴張型心力幾病的終末期。實施例2樣品製備和質譜分析心臟勻漿以及細胞器分離分離心臟，除去心房，將心室用刀片小心切碎並用冰冷卻的PBS(磷酸鹽緩衝鹽水)徹底沖洗以除去剩餘血液。使用較松的手持玻璃勻漿器在10ml裂解緩衝液(250mM蔗糖，50mMTris-HC1,pH7.6,lmMMgC12，lmMDDT(二硫蘇糖醇)和lmMPMSF(苯曱基磺醯氟))中勻漿組織30秒。所有後續步驟都在4。C下操作。裂解液用臺式離心機在800xg下離心15分鐘；上清液作為胞質溶膠、線粒體和微粒體組分的來源。包含細胞核的沉澱塊用8ml裂解緩沖液稀釋並加到4ml0.9M蔗糖緩沖液(0.9M蔗糖，50mMTris-HC1pH7.6,lmMMgC12，lmMDDT和lmMPMSF)上層，4。C1000xg離心20min。得到的沉澱再懸浮於8ml2M蔗糖緩沖液(2M蔗糖，50mMTris-HC1pH7.4,5mMMgC12,lmMDTT和lmMPMSF)，加到4ml的2M蔗糖緩衝液上層並在150,000xg下超速離心lh(BeckmanSW40.1轉子)而沉澱。細胞核作為沉澱回收。在4。C7500xg下再離心20分鐘從上清液中分離線粒體；獲得的沉澱用裂解緩衝液洗滌兩次。將除去線粒體的細胞質用BeckmanSW41轉子在100，000xg超速離心lh沉澱微粒體。上清液為胞質溶膠部分(-cyto)。提取細胞器用低滲裂解緩沖液(10mMHEPES，pH7.9,lmMDTT，lmMPMSF)在冰上孵育線粒體30分鐘，抽提可溶的線粒體蛋白。使用超聲法短暫地處理懸浮物，在13，000xg離心30min除去碎片。上清液作為"mitol"組分。獲得的不溶的沉澱用膜去汙劑抽提緩衝液(20mMTris-HCl，pH7.8,0.4MNaCl，15%甘油，lmMDTT,lmMPMSF，1.50/oTriton-X-100)再懸浮並溫和振搖30分鐘後在13,000xg離心30分鐘；上清液作為"mito2"組分。通過將微粒體在膜去汙劑抽提緩衝液中再懸浮來抽提膜相關蛋白。溫和振動懸浮物孵育lh並在13,000xg離心30min除去不溶碎片。上清液作為"micro"組分。細胞器提取物的消化和MudPIT分析從每個組分中取大約含100|Lig總蛋白的整分試樣(通過Bradford測定法確定)用5倍體積的冰冷丙酮在大約20。C沉澱過液，然後在13,000xg離心15min。蛋白沉澱在小體積的8M脲、50mMTris-HCl、pH8.5、1mMDTT的溶液中37。C溶解lh，接著用5mM碘乙醯胺在37。C避光處理lh進行羧醯氨基曱基化。用相等體積的100mM、pH8.5的碳酸氫銨稀釋樣品至4M脲，並用1:150比例的內蛋白酶Lys畫C(RocheDiagnostics,Laval,奎北克，力口拿大)在37。C消4匕過夜。第二天，用相等體積的50mM、pH8.5的碳酸氫銨稀釋樣品至2M脲，補加CaC12至終濃度lmM,並用Poroszyme胰蛋白酶珠(應用生物系統(AppliedBiosystems),Streetsville，Ontario,力口拿大)在30。C專爭動孵育過夜。產生的肽混合物用SPEC-PlusPTC18管(AnsysDiagnostics,LakeForest,加拿大)按廠家說明進行固相抽提然後存儲於-80。C以備後期使用。如所述，設定了一個全自動、需時20hl2個步驟的多循環MudPIT程序(Mol.CellProteom.2(2003)96—106)。簡短而言，HPLC四元泵與LCQDECAXP離子阱質譜儀(ThermoFinnigan,SanJose，CA)連接。將一支100|uM內徑的熔融石英毛細管孩t型柱(PolymicroTechnologies,Phoenix,AZ)用P-2000雷射拉伸器(SutterInstruments,Novato,CA)拉成極細的尖頭並填入8cm的5pMZorbaxEclipseXDB畫C18杉於月旨(AgilentTechnologies,Mississauga,Ontario,加拿大)，再填入6cm的5)liMPartisphere強陽離子交換樹脂(Whatman,Clifton，NJ)。將單個樣品用高壓容器手動加在分離柱上。層析溶劑的條件嚴格按Kislinger，T.等，Mol.CellProteom.2(2003)96—106所述。蛋白質的鑑定和驗證用SEQUEST資料庫檢索算法將肽串聯質譜與在局部-維持最小冗餘FASTA格式的小鼠和人類蛋白序列(來自於Swiss-Prot/TrEMBL和IPI資料庫)資料庫中的肽序列匹配。為了統計學評估實驗性假髮現率以控制並且因此最小化假陽性鑑定，將全部光謙都對無論正常(正向的)和倒置(翻轉的)的胺基酸方向的蛋白序列進行搜索(Kislinger，T.等Mol.CellProteom.2(2003)96-106)。然後應用STATQUEST濾除算法至所有假定的搜索結果以獲得對於每個候選鑑定結果的統計可靠性測定(置信度得分)(截止p值S15,相當於85%或更大可能性的是正確匹配)。高置信度匹配被解析成為一種使用基於Perl腳本的內部SQL型資料庫。該資料庫被設計成可容納對與給定蛋白匹配的多種肽的資料庫搜索結果和光譜信息(掃描首(scanheaders))，以及關於樣品名、實驗編號、MudPIT步驟、細胞器源、胺基酸序列、分子量、等電點、帶電性和置信水平的信息。只有那些具有預計置信度95%或更高的p值以及至少二種光譜都一起檢出的蛋白才能保留以進行進一步分析。實施例3模型系統中獲得數據的統計學評價。3.1用於生成R9C小鼠模型差異表達p值的統計方法對於137個不同實驗過程的每一個，用實施例2所述的方法獲得的原始數據由每種都有光譜計數的6190個蛋白組成，所有光譜都與該蛋白相關。原始數據，6190個蛋白亞組，都進行了國際通用的規範化，首先將在每個過程中的數據根據他們的光諳計數分進數目相同的組中，對於我們的分析設置成100。然後對每組(1-IOO)進行LOESS(Cleveland,W.S.和Devlin,S丄,JournalofTheAmericanStatisticalAssociation83(1988)596-610)，對於具有類似光譜計數的一組基因調整在光譜計數中的差異。基於原始數據我們構建了兩個線性模型，第一個模型使用對照/疾病，時間(8周，16周，末期)以及位置(cyto、micro、mitol、mitoll)作為因子並使用下式描述過程計數=B0+JM時間+152時間2+位置+M對照(1)第二個模型僅使用時間(8周，16周，末期)和位置(cyto、micro、mitol、mitoll)作為因子並用下式描述過禾呈計悽t=130+131時間+152時間2+1334立置(2)其中130為截距，M、B2、J33和/34為可變時間、時間平方、位置和對照/疾病的斜率估計值。用Anova對這兩個模型比較，解消假設為兩模型之間無差異。而低的p值顯示無充足的證據說這兩個模型是相同的。額外的信息顯示狀態(即，對照/疾病)似乎是該模型的重要部分。為了提取在我們的對照和疾病模型之間相對蛋白豐度上有重大變化的蛋白，我們的6190個蛋白列表根據他們計算的p值進行分級。這樣產生了一組593個具有p值0.05的蛋白。為了從上述模型中解釋多重假設檢驗，p值用假髮現率(FDR)校正法進行校正，特別是Benjamini-HochbergFDR校正法(Benjamini,Y.和Hochberg，Y.,JournaloftheRoyalStatisticalSocietyB.57(1995)289-300)。這樣產生了一組40個具有對於R9C小鼠模型校正p^i<0.05的蛋白3.2用於產生主動脈綁紮小鼠模型差異表達p值的統計方法。如上所述應用於R9C小鼠模型的相同數據分析法被用於主動脈綁紮小鼠模型的數據集。實施例4用Western印跡法檢測標識物SLIM-1從R9C小鼠心臟組織樣品得到粗組織裂解液。簡言之，切碎心臟組織，在杜恩斯勻漿器中碾碎並於8000g離心30min以除去細胞核和細胞碎片。上清液用於Western印跡法。使用德國Karlsruhe的Invitrogen的試劑和設備進行SDS-PAGE和Western印跡。對於每個測試的組織樣品，10pg的胞質組分用還原性NuPAGE(Invitrogen)SDS樣品緩沖液稀釋並在95。C加熱lOmin。樣品在MES緩沖系統中用4-12%NuPAGE@凝膠(丁1^-甘氨酸)進行電泳。將凝膠分離的蛋白混合物用InvitrogenXCellII印跡模塊(Invitrogen))和NuPAGE⑧轉移緩衝系統印跡至硝酸纖維素膜上。將膜在PBS/0.05%Tween-20洗滌3次並用Roti-Block封閉緩衝液(A151.1;CarlRothGmbH，Karlsruhe,Germany)封閉2小時。將一抗，四個半LIM結構域的兔多克隆抗體(FHL-1)(IMG-3374;Imgenex/Cedarlane)用Roti-Block封閉緩沖液稀釋並與膜孵育1小時。將膜在PBS/0.05%Tween-20中洗滌6次。特異性結合的SLIM-1的第一抗體用POD綴合的的抗兔IgG多克隆抗體進行標記，用0.5xRoti-Block封閉緩衝液稀釋至10mU/ml。孵育lh後，將膜在PBS/0.05%Tween-20中洗滌6次。為了檢測已結合的POD綴合的抗兔抗體，將膜用Lumi-LightPLUSWestern印跡底物(貨號-2015196，RocheDiagnosticsGmbH，Mannheim，德國)孵育並對放射自顯影膜曝光。圖3展示了典型的實驗結果。對比在相應的時間點來源於健康小鼠的組織樣品，來源於患有心力衰竭的R9C實驗動物的組織樣品中可以看到SLIM-1的強過量表達。實施例5用ELISA檢測人血清和血漿樣品中的SLIM-1為了在人血清或血漿中^r測SLIM-1，開發了一種三明治式ELISA。為捕獲抗原，使用抗SLIM-1的多克隆抗體的等分試樣，它來自於用HEK細胞產生的SLIM-1對兔免疫。為檢測抗原，使用由胺基酸233-346組成的SLIM片段在山羊中產生的血清，它們分別與生物素和地高辛綴合。將覆蓋有抗生物素蛋白鏈菌素的96孔微量滴定板與lOOpl的10|ig/ml生物素醯化的抗-SLIM-l多克隆抗體的IxPBS溶液孵育60分鐘。之後用lxPBS+0.02%Tween-20洗滌平4反三次,用PBS+1%BSA(牛血清白蛋白)封閉，然後再用IxPBS+0.02%Tween-20洗滌三次。分別用連續稀釋的重組SLIM-1作為標準抗原或用來自於患者或對照個體的稀釋血清或血漿樣品(1:5)孵育孔1小時。結合SLIM-1之後，平板用lxPBS+0.02Tween-20洗滌三次。為了特異性檢測結合的SLIM-1，孔用lOOpl的0.5pg/ml的地高辛化抗SLIM-1多克隆抗體的IxPBS,P/oBSA溶液孵育45min。其後洗滌平一反三次以除去未結合的抗體。下一步，用75mU/ml抗地高辛-POD綴合物(RocheDiagnosticsGmbH,Mannheim,德國，貨號1633716)的IxPBS，1%BSA溶液孵育孔30分鐘。然後，平板用相同的緩衝液洗滌六次。為了檢測抗原-抗體複合體，用100^1ABTS溶液(RocheDiagnosticsGmbH,Mannheim，德國，貨號11685767)孵育孔並於30分鐘之後用ELISA讀數器在405和492nm處測定光密度(OD)。測定獲自於不同的患有心力衰竭患者的10份血清樣品(HF樣品)和從正常健康供者獲得10份血清(NHS)。之後按以上描述進行分析程序，以下結果(見表3)由這些樣品獲得表3:SLIM-1ELISA結果(檢測顯影樣品)tableseeoriginaldocumentpage39表3總結的數據也顯示在圖4和5中。從圖4和5中可以明顯看到，與從對照個體獲得的樣品相比，從患HF患者獲得的血清中SLIM-1的水平平均要高。實施例6評估心力衰竭的包括標識物SLIM-1的標識物組合實施例6.1NT-proBNP和SLIM-1的標識物組合評價NT-proBNP和SLIM-1標識物組合用於分別區分處於階段B和階段C及D的患者。通過分析從明確鑑定的個體組，即50個按照ACA/ACC的HF分類標準處於階段B的個體和50個患有HF並按照ACA/ACC的HF分類標準處於階段C的患者，獲得的個體液體樣品來評估診斷的準確性。在獲自於每個這些個體的血清樣品中，用一種已商品化的測定劑(RocheDiagnostics,NT-proBNP測定劑(對於Elecsys系統免疫測定分析劑貨號03121640160))測定的NT-proBNP，和如上所述測定的SLIM-1^皮量化。4要照Zweig,M.H.和Campbell,上文的方法進行ROC-分析。通過正規化的判別分析(Friedman,J.H.,J.ofTheAmericanStatisticalAssociation84(1989)165-175)來計算對於SLIM-1與已確立的標識物NT隱proBNP的組合區別階段C患者與階段B個體的判別能力。實施例6.2肌釣蛋白T和SLIM-1的標識物組合評價肌釣蛋白T和SLIM-1標識物組合用於區分患有急性心臟事件和患有慢性心臟病的患者。通過分析從明確鑑定的個體組，即50個診斷為患急性心臟事件的個體和50個診斷為患慢性心臟病的患者，獲得的個體液體樣品來評估診斷的準確性。在獲自於每個這些個體的血清樣品中，用一種已商品化的測定劑(RocheDiagnostics,肌鈣蛋白T測定劑(對於Elecsys系統免疫測定分析劑貨號2017644))測定的月幾釣蛋白T和如上所述測定的SLIM-1^皮量化。4安照Zweig，M.H.和Campbell，G.上文進行ROC-分析。通過正規化的判別分析(Friedman,J.H.，J.ofTheAmericanStatisticalAssociation84(1989)165-175)來計算對於SLIM-1與已確立的標識物NT-proBNP的組合區別階段C患者和階段B個體的判別能力。實施例6.3NT-proBNP和CRP的標識物組合評價C-反應蛋白和SLIM-1標識物組合用於區分診斷為患有心肌病的患者和未患任何混雜的心臟病的對照。通過分析從明確鑑定的個體組，即50個具有心肌病的個體和50個健康對照個體，獲得的個體液體樣品來評估診斷的準確性。在獲自於每個這些個體的血清中，用一種已商品化的測定劑(RocheDiagnostics，CRP-測定劑(Tina-quantC反應蛋白(latex)高敏感性的測定劑-Roche貨號11972855216)測定的CRP和如上所述測定的SLIM-1被量化。按照Zweig，M.H.和Campbell,G.上文的方法進行ROC-分析。通過正規化的判別分析(Friedman,J.H.，J.ofTheAmericanStatisticalAssociation84(1989)165-175)計算SLIM-1與已確立的標識物NT-proBNP的組合區別階段C患者和階段B個體的判別能力。雖然為了清楚和理解的目的上述發明已經進行了詳細描述，本領域技術人員將能夠通過閱讀公開內容，從形式和細節上進行多種改變，而不偏離本發明附加權利要求的真實範圍。所有出版物、專利和申請以與每篇所述參考文獻被特異地和單獨地指明全文通過援引併入本文相同的程度，全文通過援引併入本文。權利要求1.一種評估個體心力衰竭的方法，其包括步驟a)測量從所述個體獲得的樣品中標識物SLIM-1的濃度，b)任選地測量所述樣品中一種或更多種其他心力衰竭標識物的濃度，和c)通過將在步驟(a)中測定的濃度以及任選地步驟(b)中測定的濃度與對照樣品中確定的這種標識物或這些標識物的濃度比較來評估心力衰竭。2.根據權利要求1的方法，其進一步的特徵是所述樣品選自血清、血漿以及全血。3根據權利要求1和2的任一項的方法，其進一步的特徵是所述一種或更多種其他標識物選自利尿鈉肽標識物、心臟肌鈣蛋白標識物以及炎症標識物。4.根據權利要求3的方法，其進一步的特徵是所述一種或更多種其他標識物是NT-proBNP。5.根據權利要求3的方法，其進一步的特徵是所述一種或更多種其他標識物是肌4丐蛋白T。6.蛋白SLIM-1作為標識物分子在評估心力衰竭中的用途。7.標識物組合在評估心力衰竭中的用途，所述標識物組合包括SLIM-1和一種或更多種其他心力衰竭標識物。8.根據權利要求7的標識物組合的用途，其中所述一種或更多種其他標識物選自利尿鈉肽標識物、心臟"幾鈣蛋白標識物和炎症標識物。9.根據權利要求8的標識物組合的用途，其至少包括SLIM-1和NT-proBNP。10.—種用於進行根據權利要求1的方法的試劑盒，其包括特異性測定SLIM-1需要的試劑和任選地特異性測定所述一種或更多種其他心力衰竭標識物需要的試劑。11.根據權利要求1的方法，其中測量獲自有心力衰竭風險的個體的樣品中的標識物SLIM-1。全文摘要本發明涉及一種體外評估心力衰竭的方法，包括步驟測量在樣品中標識物SLIM-1的濃度，任選地測量樣品中一種或更多種其他心力衰竭標識物的濃度，並通過將測定的SLIM-1濃度和對於所述任選的一種或更多種其他標識物測定的濃度與參考群體中確定的這個標識物或這些標識物的濃度進行比較來評估心力衰竭。同時也公開了SLIM-1作為標識物蛋白用於評估心力衰竭的用途，包括SLIM-1的標識物組合和用於測量SLIM-1的試劑盒。文檔編號G01N33/50GK101627306SQ200880007195公開日2010年1月13日申請日期2008年3月7日優先權日2007年3月8日發明者A·厄米利,A·格拉莫利尼,D·布洛克,D·麥克倫南,G·赫斯,H·休迪格,H·馮德埃爾茨,P·劉,R·伊瑟林,T·基斯林傑,U·-H·韋恩休斯-塞倫,V·方申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司;多倫多大學董事局