測量凝血酶受體拮抗劑對血小板聚集的抑制的方法

2023-06-06 14:58:51 2

專利名稱：：測量凝血酶受體拮抗劑對血小板聚集的抑制的方法
技術領域：
：本發明涉及診斷測定法(diagnosticassay)領域，具體而言涉及測定血液樣品中血小板功能活性以研究抗血小板組合物的效果，以及更具體而言涉及血小板激活劑(例如凝血酶受體激活肽(TRAP))用於測量靈敏度提高的凝血酶受體抑制齊'J(包括E5555(Eisai)和SCH530348(Schering-Plough))的血小板功能的用途。
背景技術：
：血小板在哺乳動物生理學中起的作用非常多樣化，但是其主要作用是促進止血。在許多情況下，希望評價血液凝固的能力，其是常常由血小板粘附和/或聚集的能力控制的參數。因此，令人感興趣的是對血小板粘附功能的評估。例如，令人感興趣的問題包括施用藥物是否能阻斷或促進血塊形成，或者是否在手術操作前檢測血小板功能的不足。令人感興趣的還有評估作為正在測試的新藥或者被批准正在患者中用於臨床治療的血小板抑制劑的功效。已知血小板在多種條件下和多種不同的反應物存在下聚集。血小板聚集是用來描述血小板彼此結合的術語。體外的血小板凝集依賴於血小板在受到聚集誘導劑(如凝血酶、二磷酸腺苷(ADP)或膠原)激活後將纖維蛋白原結合到血小板表面的能力。血小板在維持正常止血中起著關鍵的作用。當暴露於損傷的血管時，血小板將粘附在暴露的內皮下基質上。最初的粘附之後，在損傷的部位釋放或產生的各種因子(如凝血酶、ADP或膠原)激活血小板。一旦血小板被激活，血小板糖蛋白GPIIb/IIIa受體發生構象改變，使得其結合纖維蛋白原和/或馮維勒布蘭德因子(vonWillebrandfactor)。正是這種在鄰近的血小板上通過GPIIb/IIIa受體結合多價纖維蛋白原和/或馮維勒布蘭德因子分子導致額外的血小板補充到損傷部位並聚集形成止血栓子或血栓。體外的血小板聚集儀法(plateletaggregometry)是用來評估體內血小板形成導致初級止血栓子的聚集的能力的方法。在這種技術中，將聚集劑(例如ADP或膠原)加入到全血或富含血小板的血漿中，並監測血小板的聚集。血小板聚集儀法是可以幫助患者診斷和選擇療法的診斷手段。目前測量血小板聚集的測定法昂貴、耗時、繁瑣，並且一般不適合臨床環境。已經開發出快速的測定血小板功能測定法並在美國專利第5,763,199號(Coller)中進行了描述，其在此全部引入作為參考。該測定法測定全血中的糖蛋白GPIIb/IIIa受體阻滯(receptorblockade)。當用GPIIb/IIIa配體例如纖維蛋白原包覆的小聚合物珠(smallpolymericbeads)與含有具有未被阻滯的、激活的GPIIb/IIIa受體的血小板接觸時導致所述小聚合物珠的凝集。沒有凝集說明GPIIb/IIIa受體沒有激活和/或者GPIIb/IIIa受體^皮阻滯。在優選的實施方式中，凝血酶受體激活劑的加入導致產生足以在床邊進行的快速和方便的測定法，並且如果所述GPIIb/IIIa受體未受阻滯，那麼所述測定法致使小聚合物珠在方便的、已知的時間段內凝集。所述測定法包括將要測試的血液在不打開收集容器的情況下從收集容器轉移至測定裝置(assaydevice)的能力。這種血小板聚集測定法可以與激活凝血時間(ACT)同時進行，測量ACT是用來評估肝素化的充分程度。血小板聚集在血栓形成和急性冠狀動脈疾病中起關鍵作用。一種用於治療血栓形成的方法涉及抑制凝血酶的酶活性，且用於這種目的的化合物包括了肝素、低分子量肝素、水蛭素、阿加曲班、水蛭肽等。所有的這些化合物抑制凝血酶的酶活性，並且通過在不特異性抑制凝血酶對細胞作用的情況下抑制纖維蛋白血塊的形成而發揮作用。因而，流血傾向是臨床上遇到的常見的副作用。血栓形成中的凝血酶的作用並不限於血液凝固活性。除了其在止血和傷口癒合中的主要作用外，凝血酶通過結合到兩種細胞表面G蛋白酶偶聯的蛋白酶激活受體PAR-1和PAR-4(也稱作凝血酶受體)來激活人的血小板。(參見Kahn,等，A^we1998,394:690—694;Kahn等.，C//"./"veW,1999,103:879-887)。凝血酶對PAR-1的親和力高於對PAR-4的親和力，因此認為通過低劑量的凝血酶激活血小板主要是由PAR-1介導(mediated)的。已經有人提出PAR-4通過高劑量的凝血酶維持延長的血小板激活。(參見Covic,等，腸c/2醒'勿2000,39:5458—5467;Covic，等，7Tz薩6.版ma^,2002,87:722-727)。PAR-1和PAR-4受體的激活引起細胞內的鈣釋放，其激活PKC,從而調節糖蛋白IIMIIa,並使得整聯蛋白配體結合位點促進血小板聚集。凝血酶誘導的細胞內4丐釋放也激活了磷脂酶A2，釋放花生四烯酸，即前列腺素和血栓素生物合成的第一步。PAR-1和PAR-4都已經被克隆，(參見Vu等，CW/1991,64:1057-1068;Xu等人，屍rac.Ato/.5W.1998,95:6642—6646;Maryanoff等，Cwr.MedC7zem.Orafcvwc.i/emato/.^ge"As2003,1(1):13-36)，這開啟了通向開發輩巴向細胞凝血酶受體的物質的重要之門。這些凝血酶受體的胺基酸序列的精確檢查已經顯示PAR-1和PAR-4都在細胞外結構域中的特定位置由凝血酶切割以暴露與受體主體結合的新的N-末端序列，並引起跨膜信號傳導。(參見Vu,等，胸,1991,353:674-677;Coughlin,S.R,，iVoc.淑/.^cadS.A1999,96:11023-11027)。用來複製激活的凝血酶受體的新N-末端序列的特異性肽(通常稱作"凝血酶受體激活肽"或"TRAP")是未水解PAR-1和PAR-4的有效和選擇性的激活劑，並且已經顯示出觸發由凝血酶引起的所有的血小板應答。(參見Kahn,等，JC7/"./"ve比1999,103:879—887;Hung等，J！歷o/.CTzem.1992，267:20831-20834)。特異性激活PAR-1的PAR-1凝血酶受體激活肽(TRAP-1)為具有如下的胺基酸序列的七肽SFLLRNP(NHrSer-Phe-Leu-Leu-Arg-Asn-Pro-COOH)。相反地，特異性激活PAR-4的PAR-4凝血酶受體激活肽(TRAP-4)為六肽GYPGQV(NH2-Gly-Tyr-Pro-Gly-Gln-Val-COOH)。值得注意的是，TRAP畫4的更有效的變體(在文獻中或者稱作TRAP-4或TRAP-4A)被報導具有胺基酸序列AYPGKF(NH2-Ala-Tyr-Pro-Gly-Lys-Phe-COOH)。(參見，例如，Soslau,等，J編.Oz亂2001，276(24):21173-21183)。對TRAP-1的結構活性關係的研究顯示截短的TRAP-1五肽Phe-Leu-Leu-Arg-Asn對於由凝血酶或TRAP-1激活的血小板凝血酶受體均為弱拮抗劑。(參見Vassallo等人,/1992,267:6081-6085)。迄今為止已經探索了凝血酶受體拮抗作用的不同途徑。其中一種途徑是製備針對凝血酶受體的凝血酶結合域的抗體。這類抗體特異性且有效地抑制凝血酶激活血小板，而因此起到凝血酶受體拮抗劑的作用。(參見Hung等，J/"ve"1992，89:1350-1353)。另一種途徑是開發TRAP的肽衍生物。(參見Bernatowicz等，MedC7zem.1996，39:4879-4887;Hoekstra等，S/oorg.MedC/zem.丄e".1998,8:1649-1654;McComsey等，5z.owg.MedCTzem.丄e".1999，9:255-260)。又一種途徑是使用多種高通量的篩選試驗尋找小分子凝血酶受體拮抗劑。(參見Ahn，等，Aoorg.MedOzew.丄機1999,9:2073-2078)。在美國專利第6,063,847號、第6,326,380號、第6,645,987號、第6,894,065號和第7,037,920號中已經披露了取代的三環凝血酶受體拮抗劑。因為凝血酶是人血d、板的最有效的激活劑，凝血酶受體拮抗劑很有可能在富含血小板的動脈血栓形成中發揮有效的抗血栓形成作用。因為凝血酶受體拮抗劑不會抑制凝血酶產生纖維蛋白的能力，所以這種作用劑引起的出血很可能比常規抗凝血劑少。預期對凝血酶受體具有拮抗作用的化合物對與凝血酶有關的疾病展現優異的治療或預防效果，因此為有效治療和預防，例如，血栓形成、血管再狹窄、深靜脈血栓形成、肺栓塞、腦梗塞、心臟病、彌散性血管內凝血、高血壓、炎性疾病、風溼病、哮喘、腎小球腎炎、骨質疏鬆症、神經障礙和惡性腫瘤提供了廣闊的前景。E5555(Eisai有限公司(EisaiCo.,Ltd.),參見美國專利第7,244,730號和第7,304，083號)為通過拮抗蛋白酶激活的PAR-1凝血酶受體抑制血小板聚集的2-亞氨基吡咯烷衍生物。E5555在豚鼠血栓形成模型中已經顯示了具有抗凝血效果，並且顯示了在大鼠球嚢損傷模型中對新內膜增生的抑制效果和在兔蛛網膜下出血模型中對凝血酶誘導的收縮反應的抑制效果。(參見Kogushi等，TTzramZ).//aemoW.2007,5(Supp.l):P-M-059;Kay等，2007,38(12):3259-65)。在人細胞中，E5555已經顯示了對凝血酶誘導的炎性標誌物(如IL-6、CD40配體和P-選擇蛋白)的釋放和表達具有抑制作用，已經將這種抑制作用與急性冠狀動脈症候群(ACS)患者中的高危事件相關聯。(參見Kogushi等)。E5555目前正在美國進行用於冠狀動脈疾病和急性冠狀動脈症候群的臨床試驗。SCH530348(Schering-Plough公司，參見美國專利第6,063,847號、第6,326,380號、第6,645,987號、第6,894,065號和第7,037,920號)，取代的喜巴辛(himbacine)(源於澳大利亞木蘭樹皮的天然化合物)的三環類似物，是另一種新型的正在研究的抗血小板劑，其已經證明為PAR-1凝血酶受體的有效抑制劑。II期的臨床研究表明用SCH530348處理的患者的出血時間沒有增加，凝血時間也沒有延長。(參見，例如O，Donnell等，"AntiplateletTherapyforSecondaryPreventionofNoncardioembolicIschemicStroke—ACriticalReview,"5VraA:e,publishedonlinebeforeprintMarch27,2008)。相關的藥物代謝動力學和藥效學分析表明SCH530348在來自經歷非緊急經皮冠狀動脈介入(PCI)的患者的血液樣品中顯示出持續的、劑量依賴性的、由特異性激動劑誘導的對血小板聚集的抑制。該化合物目前正在進行用於急性冠狀動脈症候群和預防動脈血栓形成局部缺血性事件(atherothromboticischemicevents)的III期臨床試驗。由於凝血酶受體拮抗劑(例如E5555和SCH530348)預期應用於大量患有心血管和其它疾病的患者，用於檢測對凝血酶受體拮抗劑的抗性和評估凝血酶受體拮抗劑處理的效果的方法將是有益的。因此，需要開發將會提供給定患者中有關凝血酶受體拮抗劑敏感性信息和處理效果的測定法。
發明內容因此，本發明的目的是提供測定已經受凝血酶受體拮抗劑影響的(affected)血液樣品的方法和試劑盒，其中通過使用凝血酶受體激活劑(例如凝血酶、PAR-1凝血酶受體激活肽(TRAP-1)或PAR-4凝血酶受體激活(TRAP-4》作為血小板激活劑進行測量。本發明的此項目的和其他目的在通過凝血酶受體拮抗劑測量對血小板聚集的抑制的方法中實現。首先，從用凝血酶受體拮抗劑處理的個體中得到包含血小板的血液樣品。接著，在適合於在所述含有血小板的血液樣品中激活血小板聚集的條件下使該血液樣品與凝血酶受體激活劑接觸。最後，評估在含有血小板的血液樣品中由血小板介導的凝集以測定在個體中凝血酶受體拮抗劑對血小板聚集的抑制是否存在和/或抑制的程度。血小板沒有聚集或血小板聚集的減少表明個體形成血小板血栓的能力響應於凝血酶受體拮抗劑處理而降低。在本發明的另一實施方式中，提供了測量凝血酶受體拮抗劑對血小板聚集的抑制的可選方法。首先，從用凝血酶受體拮抗劑處理的個體中得到包含血小板的血液樣品。接著，在適合在所述含有血小板的血液樣品中激活血小板聚集的條件下使該血液樣品與凝血酶受體激活劑和包含固定在其上的GPIIa/IIIa受體配體的顆粒接觸。最後，在含有血小板的血液樣品中評估血小板介導的凝集以測定在個體中凝血酶受體拮抗劑對血小板聚集的抑制是否存在和/或抑制的程度。血小板沒有聚集或血小板聚集的減少表明個體形成血小板血栓的能力響應於凝血酶受體拮抗劑處理而降低。在本發明的又一實施方式中，提供了測量凝血酶受體拮抗劑對血小板聚集的抑制的試劑盒，其包括凝血酶受體激活劑和固定在顆粒上的GPIIb/IIIa受體配體。在優選的實施方式中，還提供了抗凝血劑和使抗凝血的pH和鹽濃度保持在適合血小板聚集的範圍內的緩沖劑。圖1為顯示來自四個不同供體的含有血小板的血液樣品對四種不同濃度的E5555的劑量依賴性響應。具體實施例方式除非另有說明，在這裡使用的全部技術和科學術語具有與本發明所屬的
技術領域：
一個普通技術人員通常所理解的意義相同。這裡所參考的所有專利、專利申請(公開或未公開的)和其他出版物在此整體引入作為參考。如果在這節提出的定義與在此引入作為參考的專利、專利申請、公開的專利申請和其它出版物中提出的定義相反或不一致，則以在此節提出的定義^7準，而不以在此引入作為參考的定義為準。引用出版物或文件並非意欲承認任何這些出版物或文件為相關的現有技術，也不構成承認任何這些出版物或文件的內容或日期的承認。如在此使用，"一種(個)"指的是"至少一種(個)"或"一種(個)或多種(個)"。如在此使用，術語"個體"並不限於特定的物種或樣品類型。例如，術語"個體，，可以指的是患者，並且常常為人類患者。然而，該術語並不限於人，因此也包括許多種哺乳動物物種。如在此使用，"治療"指的是其中使狀況(condition)、病症或疾病的症狀改善或者產生有益變化的任何方式。治療也包括在此所述的組合物的任何藥物用途。如在此使用，"疾病或病症"指的是由例如感染或遺傳缺陷引起的並且由可識別的症狀表徵的生物體中的病理狀態。如在此使用，術語"凝血酶"指的是將可溶的纖維蛋白原轉化為不可溶的血纖蛋白鏈，並催化多個其它凝固相關的反應的絲氨酸蛋白酶。除非另有指明，該術語不是物種特異性的(notspecies-specific)。所述術語包括a-凝血酶禾口y-;疑血酶，a-凝血酶為)疑血酶的天然形式(nativeform),y-凝血酶是從a-凝血酶產生的非凝固衍生物，其保留了大部分的血小板激活能力。由於Y-凝血酶對於纖維蛋白原無酶活性，其濃度通常不是以a-凝血酶的單位/ml(U/ml)表達的。然而，在文獻中報導10-20nmi凝血酶等同於0.05-0.1U/mla-凝血酶。(參見,例如Soslau等，/5zo/.CTzem.2001,276(24):21173-21183)。如在此使用，術語"凝血酶受體，，指的是凝血酶激活的G蛋白偶聯受體的蛋白酶激活受體(PAR)家族成員中的任何成員。除非另有指明，該術語不是物種特異性的。迄今為止，已經表徵出PAR家族的四個成員PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4。(參見MacFarlane等，"ProteinaseActivatedReceptors,"屍/zarmaco/.2001,53:245-282的綜述)。在這四個受體中，PAR-1、PAR-3和PAR-4被凝血酶激活，而PAR-2^皮胰蛋白酶激活。因此，在此使用的術語"凝血酶受體，，泛指PAR-1、PAR-3和PAR-4。然而，由於在人血小板中已經檢測到沒有PAR-3表達，所以目前已知的蛋白酶激活受體中，僅有PAR-1和PAR-4與本發明相關。如在此所使用，術語"凝血酶受體激活劑，，指的是能夠激活胞內信號傳導事件的任意分子，所述事件包括由PAR-1和/或PAR-4凝血酶受體介導的胞內4丐釋放。一些凝血酶受體激活劑，例如凝血酶，可以通過蛋白水解性裂解激活PAR-1和/或PAR-4;其它的，例如TRAP-1和TRAP-4可以分別激活未水解的PAR-1和PAR-4。因此，應該理解的是在此使用的術語"凝血酶受體激活劑"並不限於凝血酶受體激活作用的特定模式。如在此使用，術語"TRAP-l"指的是特異性激活PAR-1的七肽SFLLRNP(NH2-Ser-Phe-Leu-Leu-Arg-Asn-Pro-COOH),以及模擬肽(peptidomimetics)和其功能性的衍生物。在此使用的術語"TRAP-4，，指的是天然的六肽GYPGQV(NH2-Gly-Tyr-Pro-Gly-Gln-Val-COOH)和優化的六肽AYPGKF(NH2-Ala-Tyr-Pro-Gly-Lys-Phe-COOH,有時稱作TRAP-4A),以及模擬肽和其功能性的衍生物，其中天然的六肽和優化的六肽都特異性地激活PAR-4。在本發明的多個實施方式中，在血液樣品中，在測量凝血酶受體拮抗劑(例如E5555和SCH530348)對血小板聚集的抑制時使用凝血酶、PAR-1凝血酶受體激活肽(TRAP-1)或PAR-4凝血酶受體激活肽(TRAP-4)作為凝血酶受體激活劑。因此，例如，為了測定涉及用2-亞氨基吡咯烷衍生物(例如E5555)或取代的三環喜巴辛衍生物(例如SCH530348)對患者進行治療的抗血小板療法的效果，可以使用前述的組合物。上述組合物可以與用GPIIb/IIIa受體配體包覆的顆粒和進行凝血酶受體拮抗劑的效果測定所必須的任何其它反應物一起使用。可以使用包含上述激活劑組合物和顆粒的凍幹試劑組合物。在一種途徑中，將定容的(meteredvolume)待測量樣品(例如全血)與凍幹試劑機械地混合。監測透光率的變化並計算得到血小板的活性指數(indexofplateletactivity)。在一個方面，在小杯(cuvette)或整體式藥筒(unitizedcartridge)中將全血樣品與前述的凍幹試劑混合。可以使用儀器來進行該測定。該儀器包括用來接收樣品的孔，其中所述孔包含凍幹試劑和用於進行測定的其它試劑。其它試劑可以為多種緩沖劑和/或凍幹穩定劑。在本發明的一個實施方式中，提供測量凝血酶受體拮抗劑對血小板聚集的抑制的方法。首先，從用凝血酶受體拮抗劑處理的個體得到含有血小板的血液樣品。接著，使該血液樣品在適合於在所述含有血小板的血液樣品中激活血小板聚集的條件下與凝血酶受體激活劑接觸。最後，評估在所述含有血小板的血液樣品中血小板介導的凝集以測定所述個體中凝血酶受體拮抗劑對血小板聚集的抑制是否存在和/或抑制的程度。沒有血小板的聚集或血小板的聚集的減少說明所述個體形成血小板血栓的能力響應於凝血酶受體拮抗劑處理而降低。在本發明的另一實施方式中，提供了測量凝血酶受體拮抗劑對血小板聚集的抑制的可選方法。首先，從用凝血酶受體拮抗劑處理的個體得到含有血小板的血液樣品。接著，使血液樣品在適合於在所述含有血小板的血液樣品中激活血小板聚集的條件下與凝血酶受體激活劑和包含固定在其上的GPIIa/IIIa受體配體的顆粒接觸。最後，評估在所述含有血小板的血液樣品中血小板介導的凝集以測定在所述個體中凝血酶受體拮抗劑對血小板聚集的抑制是否存在和/或者抑制的程度。沒有血小板聚集或血小板聚集的減少說明所述個體形成血小板血栓的能力響應凝血酶受體拮抗劑處理而降低。在一個方面，評估的凝血酶受體為PAR-1或PAR-4。因此，在另一方面，所述凝血酶受體激活劑可以包含選自下組的物質凝血酶、PAR-1凝血酶受體激活肽(TRAP-1)和PAR-4凝血酶受體激活肽(TRAP-4)。凝血酶的終濃度通常為大約0.01單位/ml(U/ml)至大約0.5U/ml,優選地，大約0.05U/ml至大約0.1U/ml。TRAP-1的終濃度通常為大約0.5pM至大約10/aM,優選地，大約1pM至大約5nM。TRAP-4的終濃度通常為大約50pM至大約lmM,優選地，大約O.lmM至大約0.5mM。重要的是，已知TRAP-4A變體(AYPGKF)比野生型(wildtype)TRAP-4(GYPGQV)更有效，由此例如使用0.5mMTRAP-4和0.1mMTRAP-4A可以得到相似水平的血小板聚集。在一個方面，本發明設計對全血樣品進行血小板功能活性測定的方法。在另一方面，對血漿樣品可以進行血小板功能活性測定。在又一方面，對富含血小板的血漿(PRP)樣品可以進行血小板功能活性的測定。在一個實施方式中，所述樣品是已經受凝血酶受體拮抗劑影響的樣品。例如，所述樣品可以來自使用凝血酶受體拮抗劑(例如PAR-1或PAR-4拮抗劑)進行處理的患者。在一個方面，所述凝血酶受體拮抗劑包括針對凝血酶受體的凝血酶結合域的抗體。在另一方面，所述凝血酶受體拮抗劑包括TRAP肽(包括TRAP-1或TRAP-4)的肽衍生物或模擬肽。在另一實施方式中，所述凝血酶受體拮抗劑包括2-亞氨基吡咯烷衍生物，例如，E5555(Eisai公司，參見美國專利第7,244,730號和第7,304,083號)或取代的三環喜巴辛衍生物，例如SCH530348(Schering-Plough公司，參見美國專利第6,063,847號、第6,326,380號、第6,645,987號、第6,894,065號和第7，037，920號)。同樣在本發明的方法中也使用這樣的試劑，其包含用能導致血小板特異性凝集的化合物包覆的顆粒，即通過血小板上的受體與顆粒上的化合物之間的特異性相互作用導致的血小板凝集。這樣的化合物包括血小板受體和GPnb/IIIa受體配體的抗體(其可以為小有機分子)、多肽、蛋白質、單克隆抗體或者核酸，它們與血小板表面的GPIIb/nia受體結合、絡合或者相互作用(這些僅用來說明而非限制)。當血小板表面的GPIIb/IIIa受體與顆粒上的GPIIb/IIIa受體配體結合、絡合或者相互作用時產生血小板介導的顆粒聚集。GPIIb/IIIa配體通常包含纖維蛋白原、單克隆抗體10E5(Coller等,JC〃",/"ve"1983,72:325)、單克隆抗體c7E3(TheEPICInvestigators,JMed1994,330:956)、馮維勒布蘭德因子、纖連蛋白、玻連蛋白和具有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列的其他配體或模擬這種序列的其它肽或者模擬肽(Cook，等，Dragso/Ae1994,19:135)。其它值得關注的化合物包括低分子量肝素等。附著所述化合物的顆粒至少為大約0.1微米，並且不大於大約20微米。在一個實施方式中，所述顆粒為大約0.1微米至大約IO微米。在另一實施方式中，所述顆粒為至少大約l微米，並且小於大約8微米。所述顆粒可以實際上為任何形狀，但是通常為具有均一直徑的球狀。所述顆粒可以具有任意的密度，但是優選為接近於水的密度，一般為大約0.7至大約1.5g/ml。所述顆粒在表面上可以帶電或者不帶電，或者帶正電或者帶負電，優選為帶負電。所述顆粒是經官能化的或者是可官能化的，從而在它們的表面直接或間接地被動結合或附著這些成分(member)。所述顆粒可以為固體(例如，由有機和無機聚合物或膠乳組成)、油滴(例如，烴、氟碳化合物、矽油)或小嚢泡(例如，合成的(如磷脂)或天然的(細胞核細胞器))。所述固體顆粒一般為聚合物，或者是加聚物或者是縮聚物，其可以容易地分散到液體介質中。可懸浮的顆粒的實例為聚合物材料，例如膠乳、脂雙層、油滴、細胞和水凝膠。其它顆粒組合物包括聚合物，例如硝基纖維素、乙酸纖維素、聚(氯乙烯)、聚丙烯醯胺、聚丙烯酸酯、聚乙烯、聚丙烯、聚(4-曱基丁烯)、聚苯乙烯、聚曱基丙烯酸酯、聚(對苯二甲酸乙二醇酯)、尼龍、聚(正丁酸乙烯酯)(poly(vinylbutyrate))、多糖例如葡聚糖和改性的葡聚糖等；或者單獨使用或者與其它材料組合使用。所述固體顆粒可以由聚苯乙烯、聚丙烯醯胺、丙烯酸酯和曱基丙烯酸酯的衍生物的均聚物和共聚物，特別是酯和醯胺、有機矽(silicone)等組成。如上所述，將所述化合物包覆在顆粒上。一般而言，所述化合物是被動地結合到顆粒上。可以通過通常可以在文獻中找到的已知的技術實現這種被動附著。(參見，i"列嗦口"ImmobilizedEnzymes,"IchiroChibata,HalstedPress,NewYork(1978);Cuatrecasas,/編.C7z亂1970，245:3059)。筒而言之，如上所述，所述顆粒的表面可以是多官能的或者能夠被多官能化。有多種官能團可用或者可以結合多種官能團。官能團包括羧酸基、醛基、氨基、氰基、乙烯基、羥基、巰基等。將多種化合物連接到表面的方式是已知的，並且在文獻中有詳細的說明(參見上述)。可以通過鍵直接地或者通過中間的連接基團間接地附著側端成分(sidemember)。連接基團的長度根據顆粒和側端成分的性質可以廣泛地變^i。在化合物分子附著到顆粒的過程中，控制化合物的分子與顆粒的比率。在一種方法中，顆粒表面上官能化位點的數目可以通過調節引入到顆粒表面的這些位點的數目來控制。可供選擇地，或者結合上述方法，通過調節在用上述教導(teaching),還可以由本領域的技術人員提出其它方法。在本發明中使用的顆粒試劑可以用足夠量的材料處理以阻斷顆粒上的吸附區域。這樣的材料將不影響顆粒發揮功能用於它們在本發明中的預期目的。阻斷材料包括蛋白質，例如牛血清白蛋白、牛血清丙種球蛋白等；多糖，例如葡聚糖等。在另一可以與上述結合使用的方法中，使用了其中用於附著的官能化位點數使顆粒表面的吸附面積大大減少的顆粒。所述顆粒通常包含附著在其上或者包含在其中的標記(label)。所述標記可以為可用於檢測目的的任意部分。所述標記通常是信號產生系統的成員。所述標記能夠被直接或間接檢測到。所述標記可以為同位素或非同位素，通常是非同位素，並且可以為染料、螢光分子、化學發光分子、催化劑(例如酶)、編碼催化劑的多核苷酸、啟動子、輔酶、酶底物、放射基團(radioactivegroup)、小有機分子、可擴增的多核苷酸序列等。在本發明的一個具體的實施方式中，所述顆粒包含一種或多種在紅外進行吸收的染料。這樣的染料包括菌綠素(bacteriochlorin)、bacteriochlorophytin、部聚曱炔染料(meropolymethinedyes)、苯並輪蜂(benzoannulenes)、插烯H、啉(vinylogousporphyrins)、菁染料(cyanine)和份菁染料(merocyanines)。感興趣的特別的染料為銅(II)-四-叔丁基-四(二曱基氨基)-29H-31H-酞菁(copper(II)-tetra-tert-butyl-tetrakis(dimethylamino)-29H-31H-phthalocyanine)和氧釩基-四-叔丁基-四(二曱基氨基)_29H-31H-酞菁(vanadyl-tetra-tert-butyl-tetrakis(dimethylamincO-29H-31H-phthalocyanine)。選擇的特定染料具有便利性、可用性、穩定性、與顆粒的相容性等。這些染料可以通過聚合或被動吸附直接併入顆粒本身。可以將所述染料單獨加入(即，依次加入)或組合加入(即，同時加入)。或者，所述染料可以與連接組件組合連接到珠上，使得它們不會從表面濾出。不管使用何種加入方法，所述條件為顆粒表面不受在適當條件下的凝集能力的影響。所述染料吸收約750nm至約900nm的紅外範圍中的光，特別是在大約750850nm的範圍中。對具有高水平紅細胞的樣品而言，所述光在大約800±10nm,其是氧合血紅蛋白和還原血紅蛋白的等吸光點。顆粒使用染料的量根據在目標的光範圍內染料的消光係數、所需的測定敏感度、顆粒的尺寸、染料與顆粒的結合方式、染料與顆粒基質的相容性等變化。一4i而言，摻入的染料的量在大約120重量％,更通常為515重量％的範圍內。在本發明中發現的特殊用途的染料為酞菁。不含金屬的酞菁吸收在大約700nm(e二162,000)的光。金屬絡合物的吸收偏移至更短或者更長的波長處，大部分金屬使吸收偏移至更短波長，但是一些，例如鉛的吸收波長比不含金屬的酞菁長很多。過渡金屬與酞菁之間形成的絡合物(金屬酞菁和金屬萘酞菁)對光和熱的化學穩定性非常好。它們是在適當的金屬存在下通過與鄰苯二腈(opthalodinitrile)縮合形成的。在金屬酞菁形成中使用的一些金屬除了銅(Cu)和釩(V)之外，還有鎂(Mg)、鋅(Zn)和鈷(Co)。在本發明的一個特定實施方式中，採用了具有平坦的最大吸收(flatabsorptionmaximum)的羧化微粒。這些微粒是通過摻入多種具有接近805nm的顯著的最大吸收的染料來製備的。這導致跨越780~820nm的較寬範圍的平坦的最大吸收光譜。所述樣品可以為需要分析的任意合成的或天然的溶液，其中所述樣品已經受到凝血酶受體拮抗劑，特別是E5555或SCH530348的作用。術語樣品包括生物組織，其包括宿主的體液等。通常，可以對樣品直接進行檢測或可以進行預處理。本發明具有對含有血小板的樣品的特殊應用，這些樣品包括體液，例如，全血、富含血小板的血液組分如血漿等。在一個實施方式中本發明對全血樣品具有特殊應用。樣品的量取決於樣品的性質。對於液體樣品，例如抗凝全血(wholeanticoagulatedblood)，樣品的量通常為大約30|il~5ml,優選地，大約100300|_il。術語"樣品"包括直接來自患者的未處理的樣品或已經在任何合適的液體介質(通常為水性介質(例如檸檬酸鈉))中經預處理並製備的樣品。優選地，根據本發明用於進行測定的介質為水性介質。在介質中也可以使用其它極性的共溶劑，通常為含有16個，更普遍為14個碳原子的含氧有機溶劑(oxygenatedorganicsolvent),包括醇、醚等。一般而言，存在的這樣的共溶劑低於大約70重量％，更普遍地，低於30重量％。此外，在根據本發明的方法中常常採用多種輔助材料。例如，在測定介質中通常存在緩沖劑，還有用於測定介質和測定組分的穩定劑；表面活性劑，特別是非離子表面活性劑；結合增強子(bindingenhancer),例如聚亞烷基二醇(polyalkyleneglycol);等。介質的pH通常在大約2至大約11,優選地，在大約4至大約9的範圍內。可以使用多種緩沖劑以實現期望的pH並在所述方法的過程中保持該pH。示例性的緩衝劑包括HEPES、硼酸鹽、磷酸鹽、碳酸鹽、Tris、巴比妥(barbital)等。所使用的具體的緩衝劑對所述方法不是至關重要，但是在某種情況下一種緩沖劑可以比其它的更優選。在一些情況下，優選HEPES，並且以大約0.001M至大約0.05M的濃度，通常為大約0.01M的濃度存在。測定介質的體積為大約25pl至大約500|Lil，通常為大約75ial至大約250|il。所述測定可以在任何合適的容器中進行。考慮到便利性，容器為與進行測定和測量測定結果的儀器一起使用的小杯或藥筒。反應容器通常包含乾燥凍幹形式的根據本發明的激活引發劑和其它試劑，例如，顆粒試劑等，穩定劑等。在使顆粒凝集的條件下溫育樣品與顆粒試劑的組合。通常在合適的(moderate)溫度下實施所述方法。溫度可以恆定不變或者可以變化。通常，在反應步驟中採用恆定的溫度。通常採用的溫度為大約IO至大約80°C,更通常為大約15至大約45。C，優選地，所述溫度應該為至少25°C,更優選在大約30至大約4(TC的範圍內，通常為大約37t:。測定顆粒凝集的程度，並且其與樣品中的凝血酶受體拮抗劑的存在和/或量有關。凝集的存在可以通過觀察顆粒的聚集進行視覺測定，其將表明凝集。優選地，如上所述，可以將顆粒染色以幫助視覺觀察凝集或基體的凝聚。凝集的程度可以通過觀察介質的光密度的變化速率等以分光光度法、濁度法、比濁測量法等測量。在本發明的一個具體實施方式中，對全血樣品進行血小板功能活性的測定，所述全血樣品來自正在經歷E5555或SCH530348處理的患者。將該樣品在合適的容器(例如，反應杯)中與用纖維蛋白原包覆的顆粒、和凝血酶受體激活劑(例如凝血酶、PAR-1凝血酶受體激活肽(TRAP-1)或PAR-4凝血酶受體激活肽(TRAP-4))組合以形成測定介質。顆粒試劑的顆粒具有摻入其中的一種或多種紅外染料。對所述組合施以凝集條件。接著，用紅外區的光照射介質。測定來自測定混合物的紅外光的透光率，其中透光率的水平與血小板功能活性相關。選擇吸收峰位於大約800nm處的凝集介質。在800nm處的凝集介質吸光係數與全血吸光係數之間的比率應該優選大於大約4:1。具體測定的吸收率同時為凝集介質的吸光係數和測定樣品中凝集介質的濃度的函數。在樣品與試劑組合後，理想地，將其加熱至室溫以上，但是低於幹擾測定的溫度，從而確保可以控制溫度使其不會不利地影響測定結果。合意地，溫度應該為至少25°。，優選在3040"C的範圍內，更有選在大約37i:。在合併試劑與樣品的過程中和在反應的過程中經常輕輕地攪拌反應介質。充分攪拌使測定樣品實現並保持均質。從零時間點(混合時刻)起的總讀取時間可以為大約10秒至10分鐘，更普遍為大約30秒至8分鐘，並且優選地大約30秒至3分鐘。可以通過任何合適的方法分析數據，具體而言使用能夠相對於校準物和/或控制器來處理數據的算法。凝集的水平為測試樣品的血小板功能活性的指示。可以將凝集的程度與具有已知血小板功能活性的標準品比較。通常將結果與校準物比較，校準物可以同時進行或者先前已經進行，或者可以作為標準曲線提供。本發明的方法可以與測定血小板數量的方法(例如在1998年IO月23日提交的美國專利申請序列號第09/177,884號和在1999年10月20日提交的國際專利申請第PCT/US1999/24670號(公開號WO/2000/025140)中所描述)一起使用，相關的公開在此引入作為參考。上述的測定優選在裝置中進行，所述裝置允許本發明的反應發生並測量反應結果。該儀器應該是基於激活的血小板與纖維蛋白原結合的能力來評估血小板功能的。隨著激活的血小板結合併凝集用纖維蛋白原包覆的顆粒，透光率增加。一般而言，測量測定結果的儀器為能夠測量凝集的儀器。優選地，該儀器測量由於凝集引起的光信號的變化。合適的儀器包括(僅用於說明而非限制)動力學分光光度計，VERIFYNOWTM系統儀器(可從Accumetrics,Inc.,SanDiego,Calif以商業方法獲得，並且用於對正常樣品進行快速血小板功能活性測量)等。VERIFYNOW系統儀器是基於濁度分析法的光學檢測系統,其將血小板誘導的聚集作為透光率的增加來測量。該系統包括一個分析器，可棄式藥筒(disposableCartridge)和控制器。該藥筒包括基於微粒凝集技術的試劑。所述質量控制系統包括電子控制器、兩個水平的測定的"溼"控制器("wet"controls)(WQC)、藥筒內的溼度壽文感器、內部(in-packaging)溫度指示器和同時進行兩個測定通路的測試器(test)。分析器控制測定次序、建立測定溫度、控制試劑樣品混合所需要的持續時間、測定血小板功能的程度、顯示結果和進行自我診斷。為了在本方法中使用，系統的測試藥筒包含含有顆粒、凝血酶受體激活劑和緩沖劑的凍幹製劑，所述顆粒具有被動結合的GPIIb/IIIa受體配體。患者樣品通常是檸檬酸鹽化的全血，其將由分析器自動從血液收集管分配到藥筒中，而不需要使用者處理血液。通過顆粒的紅外吸收特徵檢測相互作用。隨著顆粒與血小板的相互作用，通過VERIFYNOWTM儀器的光系統測量顆粒的凝集。將凝集作為穿過樣品的紅外線透光率的增加來檢測。在本發明的另一實施方式中為試劑盒，其在包裝的組合物中包括凍幹製備物，所述製備物包含具有被動結合的纖維蛋白原的顆粒、凝血酶受體激活劑(例如凝血酶、PAR-1凝血酶受體激活肽(TRAP-1)或PAR-4凝血酶受體激活肽(TRAP-4))和緩沖劑。所述凍幹製備物可以存在於反應容器(例如用於分析儀器中的藥筒)中。至於上述的VERIFYNOWTM系統，所述凍幹的製備物可以置於分析儀中使用的四孔藥筒中的外部孔中。所述試劑盒也可以包括樣品收集容器和/或用於實現本方法的裝置。可以大範圍地改變試劑的相對量以在溶液中提供使測定敏感度在實質上得到優化的試劑濃度。其中，恰當地，可以將所述試劑置於密封的包裝中從而保持任意試劑的活性。所述包裝可以為，例如由基本不透水的材料製成的包(bag)、袋(pouch)等。這些材料包括塑料、鋁箔等(僅用於說明，而非限制)。至於血液樣品，所述試劑盒也可以包括用於刺穿人皮膚的物品、消毒劑或滅菌墊(sterilizingpad)等。所述試劑盒還可以包括校準器(calibrator)和標準品。此外，試劑盒還可以包括一種或多種用於進行血小板數測定的試劑。所述試劑盒可以包括進行本發明的測定法所必需的試劑。在一個實施方式中，所述試劑盒包括儲血瓶、使要評估的血液樣品的pH和鹽濃度保持在適合血小板介導的固體表面凝集的範圍內的緩沖劑、和包覆有血小板GPIIb/IIIa受體配體的小聚合物珠。所述緩沖劑可以為溶液，或者可以僅僅由緩衝組合物和鹽組成，向其中加入已知量的鹽以得到所需的緩衝溶液。任選地，所述試劑盒也可以包括抗凝血劑。在一個實施方式中，所述緩衝劑為HEPES;所述抗凝血劑為祌檬酸鹽；GPIIb/IIIa受體配體為纖維蛋白原；小聚合物珠為聚丙烯腈或羧化的聚苯乙烯，其中，肽GPIIb/nia受體配體(例如纖維蛋白原)通過所述肽與珠表面的官能團之間的疏水鍵和/或氫鍵被動地結合到珠的表面。在又一實施方式中，所述試劑盒還包括凝血酶受體激活劑，例如凝血酶、PAR-1凝血酶受體激活肽(TRAP-1)或PAR-4凝血酶受體激活肽(TRAP-4)。下面的實施例和製備是用來說明本發明，而不是用來限制其範圍的。除非另有說明，份和百分數都是以重量計算的。實施例使用VERIFYNOWIlb/IIIaAssay(Accumetrics,Inc.,SanDiego,Calif.)並使用PAR-1凝血酶受體激活肽(TRAP-1)作為血小板激活劑進行了實驗以測定PAR-1拮抗劑E5555(Eisai有限公司)對血小板的劑量依賴性抑制。使用3.7nM的TRAP-1進行了劑量響應測試。使用終濃度為30ng/ml、10ng/ml、5.0ng/ml和1.0ng/ml的E5555。將20的各種原液(stocksolution)加入到2.0ml的全血中(l:100稀釋)，並小心地混合以避免溶血。混合之後，在血小板抑制試驗之前，將血液樣品在37。C條件下保溫(incubate)30分鐘。將來自四位人類供體的血液樣品在基線以及四種E5555濃度中的每種濃度下運行兩次。正如所料，在給定的E5555濃度下測量的血小板抑制水平在供體與供體之間存在的差異。基於在提供的各個E5555濃度下的預期的抑制水平，四個供體的實際結果平均稍微低於預期。將各供體相對於其基線值的血小板抑制率總結在圖1和下表1中。表1人類供體血液樣品中E5555對血小板的劑量依賴性抑制tableseeoriginaldocumentpage21如圖1和表1所示，上述試劑和系統成功地檢測了來自用不同劑量凝血酶受體(PAR-1)拮抗劑處理的血液樣品的血小板聚集程度。因此，從上述結果顯而易見的是本發明提供了簡單、快速的方法，用於測量因曝露於凝血酶受體拮抗劑而受到影響的血液樣品中的血小板聚集。包括上述實施例僅用於說明目的，並非用於限制本發明的範圍。可以對上文描述的實施例作出許多改變。因為對於本領域的技術人員而言，對上述的實施例作出修改和改變是顯而易見的，所以本方面僅受限於附加的權利要求的範圍。權利要求1.用於測量凝血酶受體拮抗劑對血小板聚集的抑制的方法，該方法包括如下步驟a)提供來自用凝血酶受體拮抗劑處理的個體的含有血小板的血液樣品；b)在適合在所述含有血小板的血液樣品中激活血小板聚集的條件下，使所述的含有血小板的血液樣品與凝血酶受體激活劑接觸；和c)評估所述含有血小板的血液樣品中的血小板聚集以測定在所述個體中凝血酶受體拮抗劑對血小板聚集的抑制是否存在和/或抑制的程度，其中，沒有所述的血小板聚集或血小板聚集的減少表明所述個體形成血小板聚集的能力響應所述凝血酶受體拮抗劑處理而降低。2.權利要求1的方法，其中所述凝血酶受體為PAR-1或PAR-4。3.權利要求1的方法，其中所述凝血酶受體激活劑包括選自下組的物質凝血酶、PAR-1凝血酶受體激活肽(TRAP-l)和PAR-4凝血酶受體激活肽(TRAP-4)。4.權利要求3的方法，其中所述凝血酶的終濃度為大約0.01U/ml至大約0.5U/ml。5.權利要求3的方法，其中所述TRAP-1的終濃度為大約0.5iiM至大約10|iM。6.權利要求3的方法，其中所述TRAP-4的終濃度為大約50)aM至大約1mM。7.權利要求l的方法，其中所述凝血酶受體激活劑包含TRAP-1。8.權利要求l的方法，其中所述含有血小板的血液樣品為全血樣品。9.權利要求l的方法，其中所述含有血小板的血液樣品為血漿樣品。10.權利要求9的方法，其中所述血漿樣品為富含血小板的血漿(PRP)樣品。11.權利要求1的方法，其中所述凝血酶受體拮抗劑包含選自下組的物質凝血酶受體的凝血酶結合域的抗體、TRAP-1的肽衍生物、TRAP-4的肽衍生物、TRAP-1衍生物的模擬肽、TRAP-4衍生物的模擬肽、E5555和SCH530348。12.權利要求ll的方法，其中所述凝血酶受體拮抗劑包含E5555。13.權利要求11的方法，其中所述凝血酶受體拮抗劑包含SCH530348。14.權利要求1的方法，其中所述凝血酶受體激活劑包含在吸收峰位於約800nm的測定介質中。15.權利要求1的方法，其是在30。C至4(TC的溫度範圍下進行的，並且從含有血小板的血液樣品與凝血酶受體激活劑接觸的時刻起總讀取時間為大約IO秒至大約IO分鐘。16.權利要求l的方法，其中在一次使用性測定裝置中使所述含有血小板的血液樣品與所述凝血酶受體激活劑接觸。17.用於測量凝血酶受體拮抗劑對血小板聚集的抑制的方法，其包括如下步驟-a)提供來自用凝血酶受體拮抗劑處理的個體的含有血小板的血液樣品；b)使所述的含有血小板的血液樣品與凝血酶受體激活劑和包含固定在其上的GPIIb/IIIa受體配體的顆粒在適合於所述顆粒通過所述血小板的介導在所述血液中凝集的條件下接觸；和c)評估所述凝集以測定在所述個體中所述凝血酶受體拮抗劑對血小板聚集的抑制的是否存在和/或抑制的程度，其中，沒有所述凝集或所述凝集的減少表明所述個體形成血小板聚集的能力響應所述凝血酶受體拮抗劑處理而降低。18.權利要求17的方法，其中所述凝血酶受體為PAR-1或PAR-4。19.權利要求17的方法，其中所述凝血酶受體激活劑包含選自下組的物質凝血酶、PAR-1凝血酶受體激活肽(TRAP-l)和PAR-4凝血酶受體激活肽(TRAP-4)。20.權利要求19的方法，其中所述凝血酶的終濃度為大約0.01U/ml至大約0.5U/ml。21.權利要求19的方法，其中所述TRAP-1的終濃度為大約0.5nM至大約10pM。22.權利要求19的方法，其中所述TRAP-4的終濃度為大約50juM至大約1mM。23.權利要求17的方法，其中所述凝血酶受體激活劑包含TRAP-1。24.權利要求17的方法，其中所述含有血小板的血液樣品為全血樣品。25.權利要求17的方法，其中所述含有血小板的血液樣品為血漿樣品。26.權利要求25的方法，其中所述血漿樣品為富含血小板的血漿(PRP)樣品。27.權利要求17的方法，其中所述凝血酶受體拮抗劑包含選自下組的物質凝血酶受體的凝血酶結合域的抗體、TRAP-1的肽衍生物、TRAP-4的肽衍生物、TRAP-1衍生物的模擬肽、TRAP-4衍生物的模擬肽、E5555和SCH530348。28.權利要求27的方法，其中所述凝血酶受體拮抗劑包含E5555。29.權利要求27的方法，其中所述凝血酶受體拮抗劑包含SCH530348。30.權利要求17的方法，其中所述顆粒包含聚苯乙烯或膠乳。31.權利要求17的方法，其中所述顆粒的直徑為大約1微米至大約8微米。32.權利要求17的方法，其中所述顆粒包含紅外染料，含有血小板的血液樣品與顆粒之間的接觸形成測定混合物，通過用紅外光譜中的光照射所述測定混合物並評估來自測定混合物的紅外光透光率來評估由血小板介導的顆粒的凝集。33.權利要求17的方法，其中所述GPIIb/IIIa受體配體包含選自下組的物質纖維蛋白原、單克隆抗體10E5、單克隆抗體c7E3、馮維勒布蘭德因子、纖連蛋白、玻連蛋白、具有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列的配體和模擬RGD序列的肽或模擬肽。34.權利要求17的方法，其中所述GPIIb/nia受體配體包含纖維蛋白原。35.權利要求17的方法，其中所述顆粒和凝血酶受體激活劑包含在吸收峰位於大約800nm處的測定介質中。36.權利要求17的方法，其是在3(TC至40。C的溫度下進行的，並且從含有血小板的血液樣品、包含附著的GPIIb/IIIa受體配體的顆粒和凝血酶受37.權利要求17的方法，其中在一次使用性測定裝置中使所述含有血小板的血液樣品與含有所述GPIIb/IIIa受體配體的所述顆粒和所迷凝血酶受體激活劑接觸。38.用於測量凝血酶受體拮抗劑抑制血小板聚集的試劑盒，其包含凝血酶受體激活劑和固定在顆粒上的GPIIb/IIIa受體配體。39.權利要求38的試劑盒，其還包含抗凝血劑和將抗凝血的pH和鹽濃度保持在適合於血小板聚集的範圍內的緩沖劑。40.權利要求38的試劑盒，其中所述GPIIb/IIIa受體配體包含選自下組的物質纖維蛋白原、單克隆抗體10E5、單克隆抗體c7E3、馮維勒布蘭德因子、纖連蛋白、玻連蛋白、具有精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列的配體和模擬RGD序列的肽或模擬肽。41.權利要求38的試劑盒，其中所述GPIIb/IIIa受體配體包含纖維蛋白原。42.權利要求38的試劑盒，其中所述凝血酶受體激活劑包含選自下組的物質凝血酶、PAR-1凝血酶受體激活肽(TRAP-l)和PAR-4凝血酶受體激活肽(TRAP-4)。43.權利要求38的試劑盒，其中所述凝血酶受體激活劑包含TRAP-1。44.權利要求38的試劑盒，其中所述顆粒包含聚苯乙烯或膠乳。45.權利要求38的試劑盒，其中所述顆粒的直徑為大約1微米至大約8微米。46.權利要求38的試劑盒，其中所述試劑盒包含一次使用性測定裝置。全文摘要本發明提供了用於測量凝血酶受體拮抗劑對血小板聚集的抑制的方法。首先，從用凝血酶受體拮抗劑處理的患者身上得到血液樣品。使該血液樣品與凝血酶受體激活劑和包含固定的GPIIb/IIIa受體配體的顆粒組合在一起混合。然後在適合於顆粒聚集的條件下溫育該組合，並在混合物中評估血小板介導的聚集。沒有聚集說明患者響應了凝血酶受體拮抗劑處理而具有降低的形成血小板血栓的能力。本發明也提供了一種用於測量凝血酶受體拮抗劑對血小板聚集的抑制的試劑盒，該試劑盒包含固定在顆粒上的GPIIb/IIIa受體配體、凝血酶受體激活劑、抗凝血劑和緩衝劑以在適合於血小板聚集的條件下保持抗凝血。文檔編號G01N33/86GK101675342SQ200880014577公開日2010年3月17日申請日期2008年5月2日優先權日2007年5月3日發明者丹尼斯·德賓申請人:阿庫米特裡克斯股份有限公司