殼核納米材料構建的腫瘤標誌物免疫傳感器的製備及應用的製作方法
2023-06-18 21:02:26 2
專利名稱：殼核納米材料構建的腫瘤標誌物免疫傳感器的製備及應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及殼核納米材料構建的腫瘤標誌物免疫傳感器的製備及應用。具體是基於納米多孔金膜和Au@Pd@Pt殼核納米材料，構建的檢測多種腫瘤標誌物的夾心型電化學免疫傳感器的製備方法及應用，用於檢測血清中的腫瘤標誌物。屬於新型納米功能材料與生物傳感技術領域。
背景技術：
腫瘤標誌物在癌症的早期診斷中具有重要的實用價值。腫瘤標誌物是ー種在腫瘤細胞的發生和增殖過程中，由腫瘤細胞本身所產生、或者由機體對腫瘤細胞的反應而產生的，反應腫瘤存在和生長的ー類物質。包括蛋白質、激素、酶、多胺及癌基因產物等。腫瘤標誌物在臨床中應用廣泛，在正常人群中的癌症篩查、有症狀者的癌症輔助 診斷、癌症的臨床階段的分期、癌症疾病進程的預後評估治療方案、判斷癌症是否復發中起著極其重要的作用。目前已有的腫瘤標誌物的臨床檢測方法很多，有放射免疫測定法，酶聯免疫測定法，化學發光免疫測定法等。但這些檢測方法存在如下不足。(I)放射免疫測定法放射免疫分析自問世以來，在生物醫學各個領域已經得到廣泛的應用。其具有操作簡便、成本低等優點。但該法放射性汙染嚴重，且靈敏度低，檢測限高，因此限制了它的應用。(2)酶免疫分析測定法酶免疫分析法因標記物製備簡單，有效期長，對環境無汙染等特點，得到了迅速的普及和發展。但酶免疫分析測定法中的酶容易失活，導致其信號時間短，降低了方法的靈敏度和重現性。(3)化學發光免疫分析測定法這ー方法具有靈敏、快速、穩定、選擇性強、重現性好、易於操作，方法靈活多樣的優點。但是影響化學發光分析的檢測結果的因素較多，因此其穩定性較差，而且在發生化學反應之後，樣品的發光無法再現。由以上分析可以看出，發明ー種檢測限低、靈敏度高、特異性強、重現性好的腫瘤標誌物傳感器迫在眉睫。納米材料修飾的電化學免疫傳感器由於其簡單易行、成本低廉、特異性強、靈敏快速的優點，近幾年備受人們關注，研究了一系列基於納米材料構建的電化學免疫傳感器參見(a) Lai G. S. ; Yan F. ; Wu J. ; Leng C. ; Ju H. X. Anal. Chem. , 2011，83，2726-2732. (b) Du D. ; Wang L. M. ; Shao Y. Y. ; Wang J. ; Engelhard M. H. ; Lin Y. H.Anal. Chem. , 2011, 83, 746-752.。本發明將殼核納米材料用於電化學免疫傳感器的構建中，賦予電化學免疫傳感器更為突出的特色。首先採用納米多孔金膜固定一杭，由於納米多孔金膜具有三維連續開孔結構和大的比表面積，有利於固定更多的一杭，而且納米多孔金膜良好的生物相容性，可以與ー抗直接結合，避免了交聯劑的使用；然後採用Au@Pd@Pt殼核納米材料標記ニ抗，AuiPdiPt既保留了 Au、Pd、Pt三種貴金屬納米材料的優勢，又體現出優異的協同增敏效果，從而提高了其電極表面的電子傳遞效率，降低了檢測限、増加了傳感器的檢測靈敏度。在無酶情況下，直接採用Au@Pd@Pt殼核納米材料作為ニ抗標記物，簡化了操作步驟，增強了傳感器的穩定性，製備了ー種適用於檢測多種腫瘤標誌物的夾心型電化學免疫傳感器。經對現有腫瘤標誌物檢測專利技術的檢索發現，目前CN200910212772. 0公開了ー種用於檢測甲胎蛋白的電化學發光免疫傳感器，該傳感器的檢測限達到0. 035 ng.mr1,線性範圍為0.01 20 ng.mじ1。CN201110199112.0公開了ー種檢測磷化蛋白的電化學免疫傳感器，其檢測限為0. 01 ng mじ1,線性範圍為0. 02 20 ng mLベ。CN03113053. 4公開了ー種檢測CA-125無試劑安培免疫傳感器。
本發明分別採用納米多孔金膜和Au@Pd@Pt殼核納米材料作為電極修飾和ニ抗標記材料，降低了傳感器的檢出限，對多種腫瘤標記物的檢出限在0.91 I. 5 pg*mじ1之間。由此可以看出，其方法的靈敏度得到顯著提高，靈敏度均優於以上三種方法，可以準確定量檢測多種腫瘤標誌物。本發明利用免疫反應的高特異性，結合納米多孔金膜和Au@Pd@Pt殼核納米材料製備了ー種夾心型電化學免疫傳感器並用來檢測多種腫瘤標誌物。本發明具有靈敏度高、特異性好、檢測成本低、能快速檢測多種腫瘤標誌物等優勢，且本發明製備過程簡單，操作過程簡便，有效克服了目前腫瘤標誌物檢測方法的不足。
發明內容
本發明的目的之ー在於避免傳統檢測方法的儀器設備複雜、操作過程繁瑣、檢測人員要求高等缺點，提供了一種靈敏度高、特異性強、重現性好、操作簡便的快速檢測多種腫瘤標記物的電化學免疫傳感器的製備方法。本發明的目的之ニ是將該腫瘤標誌物電化學免疫傳感器應用於多種腫瘤標誌物的檢測。 為了實現上述目的，本發明是通過以下措施來實現的。I.殼核納米材料構建的腫瘤標誌物免疫傳感器的製備及應用，其特徵在幹，包括以下步驟
(1)納米多孔金膜的製備；
(2)Au@Pd@Pt殼核納米材料一腫瘤標記物ニ抗複合物的製備；
(3)電化學免疫傳感器的構建。(I)中所述的納米多孔金膜的製備，具體包括以下步驟
1)將銀金合金薄膜漂浮在14 16mol じ1硝酸液面上0.5 5 min，將銀腐蝕掉，製成納米多孔金膜；
2)將納米多孔金膜用超純水洗滌至其pH=7.O。(2)中所述的Au@Pd@Pt殼核納米材料一腫瘤標記物ニ抗複合物的製備，具體包括以下步驟
I)將Au@Pd@Pt殼核納米材料和腫瘤標記物ニ抗混合加入到pH = 7. 4的磷酸鹽緩衝溶液中，使Au@Pd@Pt殼核納米材料與腫瘤標記物ニ抗的質量濃度比例為500 1000:1，配製成混合液A ；
2)將上述混合液A室溫下震蕩孵化12 24 h, 10000^12000 rpm下離心，用pH = 7.4磷酸鹽緩衝溶液清洗，然後重新分散於pH = 7. 4的磷酸鹽緩衝溶液中，配製成混合液B並儲存在4 °(下備用。(3)中所述的電化學免疫傳感器的構建，具體包括以下步驟
1)將直徑4mm的玻碳電極依次用I. 0,0. 3和O. 05 mm的三氧化二鋁拋光粉拋光處理，乙醇超聲清洗，再用超純水衝洗乾淨，然後將電極置於5 mmol · Γ1鐵氰化鉀溶液中，在一O. 2 O. 6 V電位下掃描，使峰電位差小於110 mV ；
2)將納米多孔金膜修飾於玻碳電極表面，室溫乾燥；
3)將腫瘤標誌物一抗滴塗到步驟2)納米多孔金膜修飾的電極表面，置於4°C溼潤條件下晾乾；
4)將濃度為100μ g · ι Γ1牛血清白蛋白滴塗到步驟3)腫瘤標誌物一抗修飾的電極表面，4°C下溼潤條件下晾乾；
5)將腫瘤標誌物抗原滴塗在步驟4)牛血清白蛋白修飾的電極表面，4°C下溼潤條件下晾乾；
6)將溶液B滴塗在步驟5)腫瘤標誌物抗原修飾的電極表面，4°C下溼潤條件下晾乾，電化學免疫傳感器製備完成。2.本發明所述的製備的殼核納米材料構建的腫瘤標誌物免疫傳感器，其特徵在於，用於腫瘤標誌物的檢測，步驟如下
(1)工作曲線的繪製；
(2)腫瘤標誌物的檢測。(I)中所述的工作曲線的繪製，步驟如下
1)將參比電極一飽和甘汞電極、對電極一鉬絲電極和工作電極正確連接在電化學工作站上；
2)在pH=7 8磷酸緩衝液中，通過計時電流法檢測修飾好的工作電極對過氧化氫的響
應；
3)根據所得電流響應與腫瘤標誌物抗原標準溶液濃度的關係，繪製工作曲線。3.本發明所述的殼核納米材料構建的腫瘤標誌物免疫傳感器，其特徵在於，所述的腫瘤標記物，選自下列目前發病率高的腫瘤標誌物之一癌胚抗原(CEA)，甲胎蛋白(AFP)，α-L-巖藻糖苷酶(AFU)，前列腺特異性抗原(PSA)，CA-125，CA-199，CA-724，CA-242，人絨毛膜促性腺激素(HCG)。本發明的有益成果
(I)腫瘤標誌物電化學免疫傳感器的製備方法，將納米多孔金膜引入到腫瘤標誌物電化學免疫傳感器的製備當中，利用納米多孔金膜良好的電子傳遞能力以及其優異的生物相容性，顯著改善了電極的性能。(2)將Au@Pd@Pt殼核納米材料與腫瘤標誌物二抗直接孵化，利用貴金屬優異的生物相容性和高的催化性能，在二抗的標記物中不必使用酶，避免了因酶的失活和洩漏造成的檢測誤差，簡化了二抗標記物的製作步驟，顯著提高了電化學免疫傳感器的重現性和穩定性。、
(3)使用完全相同的納米材料和修飾方法，利用抗原與抗體的特異性結合，只需改變腫瘤標誌物種類即可實現多種腫瘤標誌物的高靈敏、特異性檢測，此方法簡單、經濟，有利於腫瘤標誌物傳感器的商品化。(4)本發明所製備的電化學免疫傳感器，操作簡單，檢測速度快，30 s即可完成樣品測定，可在短時間內實現批量樣品的測定。(5)本發明檢測腫瘤標誌物的方法，檢測結果均有儀器自動完成和記錄，避免了主觀因素的影響，並有很好的重現性，便於現場檢測。
下面結合
和具體實施例對本發明作進一步詳細描述。圖I為Au@Pd@Pt殼核納米材料的透射電鏡圖。
圖2為一種殼核納米材料構建的腫瘤標誌物電化學免疫傳感器的構建過程。
具體實施例方式實施例I
一種殼核納米材料構建的腫瘤標誌物免疫傳感器的製備，包括以下步驟。(I)將銀金合金薄膜漂浮在15 mo I · L—1硝酸液面上O. 5 min,利用濃硝酸將銀腐蝕掉，製成納米多孔金膜。將納米多孔金膜用超純水洗滌至其PH=7. O。(2)在燒瓶內加入20 mmol · L4氯金酸2. 5 mL ；20 mmol · L4四氯鈕!酸鈉4.0mL ；20 mmol · L—1四氯鉬酸鉀4. O mL ;嵌段式聚醚F-127 O. I g，混合均勻後立即加入O. 4mo I · L—1抗壞血酸I. O mL。室溫下攪拌I h。離心水洗3次,乾燥後即製成AuOPdOPt殼核納米材料，其納米材料的形貌見圖1，由圖I透射電鏡圖可以看出，Au@Pd@Pt為殼核結構，其粒徑為20 nm，材料分散性好、顆粒均勻，適合作為電化學免疫傳感器的製作材料。(3)將Au@Pd@Pt殼核納米材料和腫瘤標記物二抗混合加入到pH = 7. 4磷酸鹽緩衝溶液中製成混合液，使Au@Pd@Pt殼核納米材料與腫瘤標記物二抗的質量濃度比例為5001，將上述混合液室溫下震蕩孵化12 h。10000 rpm下離心，用pH = 7. 4磷酸鹽緩衝溶液清洗，然後重新分散於pH = 7. 4磷酸鹽緩衝溶液中，獲得Au@Pd@Pt殼核納米材料一腫瘤標記物二抗複合物溶液。(4)將直徑4 mm的玻碳電極依次用I. 0,0. 3和0. 05 mm的三氧化二鋁拋光粉拋光處理，乙醇超聲清洗，再用超純水衝洗乾淨，然後將電極置於5 mmol · Γ1鐵氰化鉀溶液中，在一0.2 0.6 V電位下掃描，使峰電位差小於110 mV。(5)根據圖2 —種殼核納米材料構建的腫瘤標誌物電化學免疫傳感器的構建過程進行製備。將納米多孔金膜修飾於玻碳電極表面，室溫乾燥。將10 μ g -mL-1腫瘤標誌物一抗6 μ L滴塗到納米多孔金膜修飾的電極表面，置於4 °C溼潤條件下晾乾。將濃度為100μ g ι Γ1牛血清白蛋白3 μ L滴塗到腫瘤標誌物一抗修飾的電極表面，4 ° C下溼潤條件下晾乾。將腫瘤標誌物抗原6 μ L滴塗在牛血清白蛋白修飾的電極表面，4 °C下溼潤條件下晾乾。將步驟(2)製備的Au@Pd@Pt殼核納米材料一腫瘤標記物二抗複合物溶液6 μ L滴塗於腫瘤標誌物抗原修飾的電極表面，4 °C下溼潤條件下晾乾。實施例2一種殼核納米材料構建的腫瘤標誌物免疫傳感器的製備，包括以下步驟。(I)將銀金合金薄膜漂浮在15 mo I · Γ1硝酸液面上3 min，利用濃硝酸將銀腐蝕掉，製成納米多孔金膜。將納米多孔金膜用超純水洗滌至其PH=7. O。(2)在燒瓶內加入20 mmol · L4氯金酸2. 5 mL ；20 mmol · L4四氯鈕!酸鈉4.0mL ；20 mmol · L—1四氯鉬酸鉀4.0 mL ;嵌段式聚醚F-127 O. lg，混合均勻後立即加入O. 4mo I · L—1抗壞血酸I. O mL。室溫下攪拌I h。離心水洗3次,乾燥後即製成AuOPdOPt殼核納米材料，其透射電鏡形貌見圖I。(3)將Au@Pd@Pt殼核納米材料和腫瘤標記物二抗混合加入到pH = 7. 4磷酸鹽緩衝溶液中製成混合液，使Au@Pd@Pt殼核納米材料與腫瘤標記物二抗的質量濃度比例為7501，將上述混合液室溫下震蕩孵化12 h。10000 rpm下離心，用pH = 7. 4磷酸鹽緩衝溶液清洗，然後重新分散於PH = 7. 4磷酸鹽緩衝溶液中。
(4)將直徑4 mm的玻碳電極依次用I. 0,0. 3和0. 05 mm的三氧化二鋁拋光粉拋光處理，乙醇超聲清洗，再用超純水衝洗乾淨，然後將電極置於5 mmol · Γ1鐵氰化鉀溶液中，在一0.2 0.6 V電位下掃描，使峰電位差小於110 mV。(5)根據圖2 —種殼核納米材料構建的腫瘤標誌物電化學免疫傳感器的構建過程進行製備。將納米多孔金膜修飾於玻碳電極表面，室溫乾燥。將10 Ug^mL-1腫瘤標誌物一抗6 μ L滴塗到納米多孔金膜修飾的電極表面，置於4 ° C溼潤條件下晾乾。將濃度為100μ g ι Γ1牛血清白蛋白3 μ L滴塗到腫瘤標誌物一抗修飾的電極表面，4 ° C下溼潤條件下晾乾。將腫瘤標誌物抗原6 μ L滴塗在牛血清白蛋白修飾的電極表面，4 °C下溼潤條件下晾乾。將步驟(2)製備的Au@Pd@Pt殼核納米材料一腫瘤標記物二抗複合物溶液6 μ L滴塗於腫瘤標誌物抗原修飾的電極表面，4 °C下溼潤條件下晾乾。實施例3
一種殼核納米材料構建的腫瘤標誌物免疫傳感器的製備，包括以下步驟。(I)將銀金合金薄膜漂浮在15 mo I · Γ1硝酸液面上5 min，利用濃硝酸將銀腐蝕掉，製成納米多孔金膜。將納米多孔金膜用超純水洗滌至其PH=7. O。(2)在燒瓶內加入20 mmol · L4氯金酸2. 5 mL ；20 mmol · L4四氯鈕!酸鈉4.0mL ；20 mmol · L—1四氯鉬酸鉀4. O mL ;嵌段式聚醚F-127 0. I g，混合均勻後立即加入0. 4mo I · L—1抗壞血酸I. O mL。室溫下攪拌I h。離心水洗3次,乾燥後即製成AuOPdOPt殼核納米材料，其透射電鏡形貌見圖I。(3)將Au@Pd@Pt殼核納米材料和腫瘤標記物二抗混合加入到pH = 7. 4磷酸鹽緩衝溶液中製成混合液，使Au@Pd@Pt殼核納米材料與腫瘤標記物二抗的質量濃度比例為1000 : 1，將上述混合液室溫下震蕩孵化12 h，10000 rpm下離心，用pH = 7. 4磷酸鹽緩衝溶液清洗，然後重新分散於PH = 7. 4磷酸鹽緩衝溶液中。(4)將直徑4 mm的玻碳電極依次用I. 0,0. 3和0. 05 mm的三氧化二鋁拋光粉拋光處理，乙醇超聲清洗，再用超純水衝洗乾淨，然後將電極置於5 mmol · Γ1鐵氰化鉀溶液中，在一0.2 0.6 V電位下掃描，使峰電位差小於110 mV。(5)根據圖2 —種殼核納米材料構建的腫瘤標誌物電化學免疫傳感器的構建過程進行製備。將納米多孔金膜修飾於玻碳電極表面，室溫乾燥。將10 μ g. mL—1腫瘤標誌物一抗6μ L滴塗到納米多孔金膜修飾的電極表面，置於4 °C溼潤條件下晾乾。將濃度為100μ g Π Γ1牛血清白蛋白3 μ L滴塗到腫瘤標誌物一抗修飾的電極表面，4 ° C下溼潤條件下晾乾。將腫瘤標誌物抗原6 μ L滴塗在牛血清白蛋白修飾的電極表面，4 °C下溼潤條件下晾乾。將步驟(2)製備的Au@Pd@Pt殼核納米材料一腫瘤標記物二抗複合物溶液6 μ L滴塗於腫瘤標誌物抗原修飾的電極表面，4 °C下溼潤條件下晾乾。實施例4
實施例I 3製備的腫瘤標誌物電化學免疫傳感器，分別用於腫瘤標誌物檢測，包括以下步驟。(I)工作曲線的繪製，步驟如下
1)將參比電極一飽和甘汞電極、對電極一鉬絲電極和工作電極正確連接在CHI760D電 化學工作站上；
2)在pH=7.4磷酸緩衝液中，通過計時電流法檢測修飾好的工作電極對過氧化氫的響
應；
3)根據所得電流響應與腫瘤標誌物抗原標準溶液的濃度關係，繪製工作曲線。(2)腫瘤標誌物的檢測。實施例5乳腺癌腫瘤標誌物CA_125、CEA或HCG
一種乳腺癌腫瘤標誌物免疫傳感器的製備及應用，包括以下步驟
(1)選擇乳腺癌腫瘤標誌物，按照實施例I所述的步驟構建電化學免疫傳感器；
(2)按照實施例4所述的步驟進行檢測，乳腺癌腫瘤標誌物的檢測技術指標見表I。表I 乳腺癌腫瘤標誌物的檢測技術指標_
腫瘤標誌物線性範圍，ng· ml·/1_檢測限，Pg · ml·/1
CA-125 ~0.004 ^20I. 3
CEA~0.004 ^301.2
HCG|θ· 005~20| · 5—
由表I檢測技術指標結果表明，該電化學免疫傳感器用於乳腺癌腫瘤標誌物的檢測，
其線性範圍寬，檢測限低，方法靈敏度高。實施例6肝癌腫瘤標誌物AFP或AFU
一種肝癌腫瘤標誌物免疫傳感器的製備及應用，包括以下步驟
(1)選擇肝癌腫瘤標誌物，按照實施例2所述的步驟構建電化學免疫傳感器；
(2)按照實施例4所述的步驟進行檢測，肝癌腫瘤標誌物的檢測技術指標見表2。表2 肝癌腫瘤標誌物的檢測技術指標 _
腫瘤標誌物線性範圍，ng· ml·/1_檢測限，Pg · ml·/1
AFP~0.003^ 201.3
AFU|θ· 003~20|θ· 91—
由表2檢測技術指標結果表明，該電化學免疫傳感器用於肝癌腫瘤標誌物的檢測，其
線性範圍寬，檢測限低，方法靈敏度高。實施例7胃癌腫瘤標誌物CA-724、CA_199或CA-242 一種胃癌腫瘤標誌物免疫傳感器的製備及應用，包括以下步驟
(1)選擇胃癌腫瘤標誌物，按照實施例3所述的步驟構建電化學免疫傳感器；
(2)按照實施例4所述的步驟進行檢測，胃癌腫瘤標誌物的檢測技術指標見表3。表3胃癌腫瘤標誌物的檢測技術指標
權利要求
1.殼核納米材料構建的腫瘤標誌物免疫傳感器的製備，其特徵在於，包括以下步驟 (1)納米多孔金膜的製備； (2)AuiPdiPt殼核納米材料一腫瘤標記物ニ抗複合物的製備； (3)電化學免疫傳感器的構建。
2.如權利要求I中所述的殼核納米材料構建的腫瘤標誌物免疫傳感器的製備，其特徵在於，所述的納米多孔金膜的製備，步驟如下 (1)將銀金合金薄膜漂浮在14 16mol じ1硝酸液面上0. 5 5 min，將銀腐蝕掉，製成納米多孔金膜； (2)將納米多孔金膜用超純水洗滌至其pH=7.O。
3.如權利要求I中所述的殼核納米材料構建的腫瘤標誌物免疫傳感器的製備，其特徵在於，所述的Au@Pd@Pt殼核納米材料一腫瘤標記物ニ抗複合物的製備，步驟如下 (1)將Au@Pd@Pt殼核納米材料和腫瘤標記物ニ抗混合加入到pH= 7. 4磷酸鹽緩衝溶液中，使Au@Pd@Pt殼核納米材料與腫瘤標記物ニ抗的質量濃度比例為500 1000:1，配製成混合液A ； (2)將上述混合液A室溫下震蕩孵化12 24h, 10000^12000 rpm下離心，用pH = 7.4磷酸鹽緩衝溶液清洗，然後重新分散於pH = 7. 4磷酸鹽緩衝溶液中配製成混合液B並儲存在4°C下備用。
4.如權利要求I中所述的殼核納米材料構建的腫瘤標誌物免疫傳感器的製備，其特徵在於，所述的電化學免疫傳感器的構建，步驟如下 (1)將直徑4mm的玻碳電極依次用1.0、0. 3和0.05 mm的三氧化ニ鋁拋光粉拋光處理，こ醇超聲清洗，再用超純水衝洗乾淨，然後將電極置於5 mmol じ1鐵氰化鉀溶液中，在一0. 2 0. 6 V電位下掃描，使峰電位差小於110 mV ； (2)將納米多孔金膜修飾於玻碳電極表面，室溫乾燥； (3)將腫瘤標誌物一抗滴塗到步驟(2)納米多孔金膜修飾的電極表面，置於4°C溼潤條件下晾乾； (4)將濃度為100u g 牛血清白蛋白滴塗到步驟(3)腫瘤標誌物一抗修飾的電極表面，4° C下溼潤條件下晾乾； (5)將腫瘤標誌物抗原滴塗在步驟(4)牛血清白蛋白修飾的電極表面，4°C下溼潤條件下晾乾； (6 )將溶液B滴塗在步驟(5 )腫瘤標誌物抗原修飾的電極表面，4° C下溼潤條件下晾乾，電化學免疫傳感器製備完成。
5.如權利要求廣4所述的製備的殼核納米材料構建的腫瘤標誌物免疫傳感器，其特徵在於，用於腫瘤標誌物的檢測，方法如下 (1)工作曲線的繪製； (2)腫瘤標誌物的檢測。
6.如權利要求5中所述的製備的殼核納米材料構建的腫瘤標誌物免疫傳感器，用於腫瘤標誌物的檢測，其特徵在於，所述的工作曲線的繪製，步驟如下 (I)將參比電極ー飽和甘汞電極、對電極ー鉬絲電極和工作電極正確連接在電化學エ作站上；(2)在pH=7 8的磷酸緩衝液中，通過計時電流法檢測修飾好的工作電極對過氧化氫的響應； (3)根據所得電流響應與腫瘤標誌物抗原標準溶液濃度的關係，繪製工作曲線。
7.如權利要求I 6所述的殼核納米材料構建的腫瘤標誌物免疫傳感器，其特徵在於，所述的腫瘤標記物，選自下列目前發病率高的腫瘤標誌物之一癌胚抗原(CEA)，甲胎蛋白(AFP)，a -L-巖藻糖苷酶(AFU)，前列腺特異性抗原(PSA)，CA-125，CA-199, CA-724，CA-242，人絨毛膜促性腺激素(HCG)。
全文摘要
本發明涉及一種殼核納米材料構建的腫瘤標誌物免疫傳感器的製備及應用，屬於新型納米功能材料與生物傳感器技術領域。其特徵在於(1)納米多孔金膜的製備；(2)Au@Pd@Pt殼核納米材料—腫瘤標記物二抗複合物的製備；(3)電化學免疫傳感器的構建。本發明的優點在於靈敏度高、特異性好、易於操作、檢測限低，能實現多種腫瘤標記物的高靈敏、特異性、快速準確檢測。
文檔編號G01N27/327GK102778561SQ20121026110
公開日2012年11月14日 申請日期2012年7月26日 優先權日2012年7月26日
發明者於海琴, 吳丹, 孫蒙, 張勇, 張瀟月, 曹偉, 朱寶存, 李燕, 李玉陽, 李賀, 杜斌, 羅川南, 閆良國, 馬洪敏, 魏琴 申請人:濟南大學