帶電荷營養性蛋白質和方法

2023-06-08 04:15:56

帶電荷營養性蛋白質和方法
【專利摘要】本發明提供帶電荷營養性蛋白質。在一些實施方案中，所述營養性蛋白質在pH7下具有水溶解度為至少12.5g/L。在一些實施方案中，所述營養性蛋白質在pH7下具有水溶解度為至少50g/L。在一些實施方案中，所述營養性蛋白質在pH7下具有水溶解度為至少100g/L。在一些實施方案中，所述營養性蛋白質包含一定水平的以下至少一者：a)所述營養性蛋白質中存在的支鏈胺基酸殘基與總胺基酸殘基的比率等於或大於基準蛋白質中存在的支鏈胺基酸殘基與總胺基酸殘基的比率；b)所述營養性蛋白質中存在的亮氨酸殘基與總胺基酸殘基的比率等於或大於基準蛋白質中存在的亮氨酸殘基與總胺基酸殘基的比率；和c)所述營養性蛋白質中存在的必需胺基酸殘基與總胺基酸殘基的比率等於或大於基準蛋白質中存在的必需胺基酸殘基與總胺基酸殘基的比率。也尤其提供編碼所述蛋白質的核酸、製備所述蛋白質的重組微生物、使用重組微生物製備所述蛋白質的方法、包含所述蛋白質的組合物和使用所述蛋白質的方法。
【專利說明】帶電荷營養性蛋白質和方法
[0001] 相關申請的引用：
[0002] 本申請要求2012年3月26日提交的美國臨時專利申請號61/615, 816的優先權， 所述專利申請據此以引用的方式整體併入本文。
[0003] 序列表：
[0004] 本申請含有已通過EFS-Web以ASCII格式提交且據此以引用的方式整體併入本文 的序列表。2013年3月12日創建的所述ASCII拷貝名為1005. 004-PCT_SL. txt且大小為 1，194, 666 字節。
[0005] 引言：
[0006] 膳食蛋白質是為人類健康和生長所必需之營養物。世界衛生組織推薦當處於能量 平衡和重量穩定時，膳食蛋白質應佔能量攝取量的約10至15%。各個國家的平均每日蛋白 質攝取量指示這些推薦與全世界消耗的蛋白質的量一致。當以能量平衡消耗時，平均20至 30 %的能量來自蛋白質的餐食代表高蛋白質膳食。
[0007] 身體不能合成為健康和生長所必需的某些胺基酸，且代之以必須自食物獲得它 們。稱為"必需胺基酸"的這些胺基酸是組氨酸（H)、異亮氨酸（I)、亮氨酸（L)、賴氨酸（K)、 甲硫氨酸（M)、苯丙氨酸（F)、蘇氨酸（T)、色氨酸（W)和纈氨酸（V)。提供所有必需胺基酸 的膳食蛋白質稱為"高品質"蛋白質。如肉、魚、家禽、蛋和乳製品的動物性食物通常被認為 是提供必需胺基酸的良好平衡的高品質蛋白質來源。酪蛋白（一種通常見於哺乳動物奶 中，佔牛奶中的蛋白質的80%的蛋白質）和乳清（在奶已凝固和應變之後剩餘的呈液體狀 態的蛋白質）是高品質膳食蛋白質的主要來源。不提供必需胺基酸的良好平衡的食物稱為 "低品質"蛋白質。大多數水果和蔬菜是蛋白質的不良來源。包括菜豆、豌豆、小扁豆、堅果 和穀粒（如小麥）的一些植物性食物是蛋白質的較好來源。大豆，作為一種由黃豆製得的 植物性蛋白質，被一些人視為商品質蛋白質。
[0008] 對消耗大量蛋白質在人中的急性效應的研究已顯示在膳食中包括以及在一些情 況下增加蛋白質含量可具有有益作用。舉例來說，研究已顯示攝取蛋白質可在人受試者中 誘導餐後飽腹感（包括通過抑制飢餓感），誘導產熱以及降低血糖反應。
[0009] 對1?蛋白質勝食有關重量減輕的研究已顯不蛋白質正面影響能量消耗和瘦體重。 進一步研究已顯示就含有的能量的至少5%來自蛋白質的膳食而言，過度進食會產生顯著 較小重量增加，且高蛋白質膳食降低能量攝取。
[0010] 臨床研究提供證據表明蛋白質阻止歸因於衰老或臥床休息的肌肉損失。具體來 說，研究已顯示補充蛋白質增加長期臥床休息期間的肌肉分數合成率（FSR)，維持長期臥床 休息期間的腿部質量和強度，增加瘦體重，改進步態和平衡的功能性量度，且可充當用於由 於不活動或長期臥床休息而處於肌肉減少症的風險下的個體的可行性介入手段。
[0011] 在運動員中進行的關於增加肌肉蛋白質合成代謝的研究已顯示在運動之後提供 的蛋白質促進肌肉肥大的程度大於由單獨運動達成的肌肉肥大。也已顯示在運動之後提供 的蛋白質支持蛋白質合成而不使蛋白質分解有任何增加，從而導致淨正性蛋白質平衡和肌 肉質量增大。儘管肌肉蛋白質合成似乎以劑量-反應方式對補充必需胺基酸起反應，但並 非所有蛋白質在構建肌肉方面都等同。舉例來說，在用阻力訓練支持肌肉質量增大方面，奶 蛋白似乎優於大豆，而兩者均優於單獨碳水化合物。胺基酸亮氨酸是刺激肌肉蛋白質合成 的重要因素。
[0012] 通常見於食物中的全部蛋白質未必以高效方式提供滿足如人的哺乳動物的氨基 酸需求的胺基酸組成。結果是為達到各必需胺基酸的最小需求，在膳食中消耗的總蛋白質 的量必須大於如果膳食蛋白質的品質較高所將需要的量。通過增加膳食中的蛋白質品質， 有可能相較於包括品質較低的蛋白質的膳食，降低必須消耗的蛋白質總量。
[0013] 一般來說，在哺乳動物膳食中，具有較高蛋白質品質的蛋白質被視為比不具有較 高蛋白質品質的其它蛋白質更有益。所述蛋白質例如適用作哺乳動物膳食的組分。在某些 情況下，所述蛋白質尤其促進維持肌肉質量、健康身體質量指數和血糖平衡。因此，對具有 商蛋白質品質的蛋白質的來源存在需要。
[0014] 在傳統上，胺基酸的合乎需要混合物（如包含必需胺基酸的混合物）已通過水解 必需胺基酸的水平相對較高的蛋白質（如乳清蛋白質）和/或通過在任選也包括如乳清的 水解蛋白質的混合物中組合游離胺基酸來提供。這個類型的混合物可具有苦味且可被視為 不適合某些用途或不合乎某些用途需要。因此，所述混合物有時包括調味劑來掩蔽游離氨 基酸和/或水解蛋白質的味道。在一些情況下，發現其中一定比例的胺基酸內含物是由多 肽或蛋白質提供的組合物具有的味道好於較高比例的總胺基酸是以游離胺基酸和/或某 些水解蛋白質形式提供的組合物。然而，所述組合物的可用性已受到限制，因為營養性製劑 在傳統上已由自天然食物產品分離的蛋白質（如自奶分離的乳清或自大豆分離的大豆蛋 白質）製得。那些蛋白質的胺基酸分布未必滿足哺乳動物的胺基酸需求。此外，商品蛋白 質通常由蛋白質和/或蛋白質水解物的混合物組成，所述混合物在它們的蛋白質組成方面 可變化，由此導致關於它們的營養價值的不可預測性。此外，所述高品質蛋白質的來源的數 目有限已意味著僅某些胺基酸組合可以蛋白質形式以大規模用於攝取。
[0015] 為供應如釀蛋白和乳清、蛋及肉的商品質動物蛋白質來源、以及如大?的植物蛋 白質所需的農業方法也需要大量能量輸入且具有潛在有害環境影響。因此，將在某些情況 下適用的是具有供應供哺乳動物消耗的蛋白質的替代性來源和方法。
[0016] 在理論上，可在實驗室環境下設計和產生包含所需胺基酸混合物的合成多肽序 列。然而，這個方法可產生各種顧慮，且因此並非始終適用。首先，熟練技術人員了解的是 獲得所述合成序列的高產生水平可極具挑戰性。其次，即使所述合成蛋白質被合成，它用於 營養性產品中的適合性也將是不確定的。舉例來說，所述非天然存在的多肽可為過敏原或 毒素。因此，在一些實施方案中，本公開提供天然蛋白質或多肽序列或其變體。
[0017] 可增強營養性蛋白質的效用的一個特徵是它的溶解度。溶解度較高的營養性蛋白 質可展現合乎需要的特徵，如增加的穩定性、抗聚集性和合乎需要的味道分布。舉例來說， 展現溶解度增強的營養性蛋白質可被配製成呈相對較低體積的溶液形式的包括高濃度營 養性蛋白質的飲料或液體製劑，由此遞送每單位體積較大劑量的蛋白質營養物。可溶性營 養性蛋白質可適用於其中使用者（例如，運動員）想要在身體活動之前、期間或之後攝取營 養性蛋白質的運動飲料或恢復飲料中。展現溶解度增強的營養性蛋白質也可特別適用於其 中受試者（例如，患者或年長人士）需要蛋白質營養物，但不能消耗固體食物或大體積的液 體的臨床環境中。
[0018] 本公開提供主要由不僅僅依賴於傳統農業來產生的胺基酸的適用組合組成的蛋 白質。舉例來說，
【發明者】已發現且本公開提供主要由胺基酸的組合組成的天然存在的多肽 序列，其含有適用水平的以下至少一者：支鏈胺基酸與總胺基酸的比率、胺基酸亮氨酸與總 胺基酸的比率、和必需胺基酸與總胺基酸的比率。本公開也提供包含多肽序列的營養性蛋 白質。在一些實施方案中，營養性蛋白質包含以下至少一者：支鏈胺基酸殘基與總胺基酸殘 基的比率為至少24% ;Leu殘基與總胺基酸殘基的比率為至少11% ;和必需胺基酸殘基與 總胺基酸殘基的比率為至少49%。
[0019] 本公開也尤其提供編碼蛋白質的核酸、製備蛋白質的重組微生物、使用重組微生 物製備蛋白質的方法、包含蛋白質的組合物和使用蛋白質的方法。
[0020] 概述：
[0021] 在第一方面，本公開提供包含第一多肽序列的分離的營養性蛋白質，其中所述第 一多肽序列在PH 7下具有水溶解度為至少12. 5g/L。在一些實施方案中，第一多肽序列在 pH 7下具有水溶解度為至少50g/L。在一些實施方案中，第一多肽序列在pH 7下具有水 溶解度為至少l〇〇g/L。在一些實施方案中，第一多肽序列包含：a.支鏈胺基酸殘基與總氨 基酸殘基的比率為至少8% ;b. Leu殘基與總胺基酸殘基的比率為至少4% ;和c.必需氨 基酸殘基與總胺基酸殘基的比率為至少19%。在一些實施方案中，第一多肽序列進一步包 含各必需胺基酸的至少一者。在一些實施方案中，第一多肽序列包含以下至少一者：a.支 鏈胺基酸殘基與總胺基酸殘基的比率為至少24% ;b. Leu殘基與總胺基酸殘基的比率為至 少11%;和c.必需胺基酸殘基與總胺基酸殘基的比率為至少49%。在一些實施方案中， 第一多肽序列包含與天然存在的營養性蛋白質的至少50個胺基酸的至少70%同源性。在 一些實施方案中，第一多肽序列包含與天然存在的營養性蛋白質的至少50個胺基酸的至 少95%同源性。在一些實施方案中，第一多肽序列包含與天然存在的營養性蛋白質的至 少70%同源性。在一些實施方案中，第一多肽序列包含與天然存在的營養性蛋白質的至少 95%同源性。
[0022] 在一些實施方案中，第一多肽序列由天然存在的營養性蛋白質組成。在一些實施 方案中，第一多肽序列不是天然存在的營養性蛋白質。
[0023] 在一些實施方案中，第一多肽序列不是過敏原。在一些實施方案中，第一多肽序列 與已知過敏原具有小於50%整體同源性。
[0024] 在一些實施方案中，第一多肽序列不是毒素。在一些實施方案中，第一多肽序列與 已知毒素具有小於50%整體同源性。
[0025] 在一些實施方案中，第一多肽序列具有模擬胃消化半衰期為小於60分鐘。在一些 實施方案中，第一多肽序列具有模擬胃消化半衰期為小於30分鐘。在一些實施方案中，第 一多肽序列具有模擬胃消化半衰期為小於10分鐘。在一些實施方案中，第一多肽序列在模 擬胃液中完全消化。在一些實施方案中，第一多肽序列包含至少一個選自胃蛋白酶識別位 點、胰蛋白酶識別位點和胰凝乳蛋白酶識別位點的蛋白酶識別位點。在一些實施方案中，第 一多肽序列不包含半胱氨酸殘基。在一些實施方案中，第一多肽序列不包含二硫鍵。在一 些實施方案中，第一多肽序列不包含N連接的糖基化。在一些實施方案中，第一多肽序列不 包含〇連接的糖基化。
[0026] 在一些實施方案中，第一多肽序列對聚集具有抗性。在一些實施方案中，第一多 肽序列在pH 7下是陰離子型的。在一些實施方案中，第一多肽序列具有計算溶合計分 (calculated solvation score)為-20或更低。在一些實施方案中，第一多肽序列具有計 算溶合計分為-30或更低。在一些實施方案中，第一多肽序列具有計算聚集計分為0. 75或 更低。在一些實施方案中，第一多肽序列具有計算聚集計分0.5或更低。在一些實施方案 中，第一多肽序列具有計算聚集計分0. 3或更低。在一些實施方案中，第一多肽序列包含 選自以下的胺基酸序列：i.選自SEQ ID NO: 1至SEQ ID N0:490的胺基酸序列；ii.選自 SEQ ID NO: 1至SEQ ID N0:490的胺基酸序列的修飾的衍生物；和iii.選自SEQ ID NO: 1 至SEQ ID N0:490的胺基酸序列的突變蛋白。在一些實施方案中，第一多肽序列由選自以 下的胺基酸序列組成：i.選自SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO:490的胺基酸序列，ii.選自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的胺基酸序列的修飾的衍生物，和iii.選自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的胺基酸序列的突變蛋白。在一些實施方案中，第一多肽序列與至少一個選自 SEQ ID N0:1 至 SEQ ID N0:490 的參照胺基酸序列至少 40%、45%、50%、55%、60%、65%、 70 %,75 %,80 %,85 %,86 %,87 %,88 %,89 %,90 %,91 %,92 %,93 %,94 %,95 %,96 %, 97%、98%、99%或 99. 5% 同源。
[0027] 在另一方面，本公開提供包含第一多肽序列的分離的營養性蛋白質，其中所述分 離的營養性蛋白質在PH 7下具有水溶解度為至少12. 5g/L。在一些實施方案中，分離的營 養性蛋白質在pH 7下具有水溶解度為至少50g/L。在一些實施方案中，分離的營養性蛋白 質在pH 7下具有水溶解度為至少100g/L。在一些實施方案中，分離的營養性蛋白質包含： a. 支鏈胺基酸殘基與總胺基酸殘基的比率為至少8% ;b. Leu殘基與總胺基酸殘基的比率 為至少4%;和c.必需胺基酸殘基與總胺基酸殘基的比率為至少19%。在一些實施方案 中，分離的營養性蛋白質進一步包含各必需胺基酸的至少一者。在一些實施方案中，分離的 營養性蛋白質包含以下至少一者：a.支鏈胺基酸殘基與總胺基酸殘基的比率為至少24% ; b. Leu殘基與總氣基酸殘基的比率為至少11 %;和c.必需氣基酸殘基與總氣基酸殘基的比 率為至少49%。在一些實施方案中，分離的營養性蛋白質包含與天然存在的營養性蛋白質 的至少50個胺基酸的至少70%同源性。在一些實施方案中，分離的營養性蛋白質包含與天 然存在的營養性蛋白質的至少50個胺基酸的至少95%同源性。在一些實施方案中，分離的 營養性蛋白質包含與天然存在的營養性蛋白質的至少70%同源性。在一些實施方案中，分 離的營養性蛋白質包含與天然存在的營養性蛋白質的至少95%同源性。
[0028] 在一些實施方案中，分離的營養性蛋白質由天然存在的營養性蛋白質組成。在一 些實施方案中，分離的營養性蛋白質不是天然存在的營養性蛋白質。
[0029] 在一些實施方案中，分離的營養性蛋白質不是過敏原。在一些實施方案中，分離的 營養性蛋白質與已知過敏原具有小於50%整體同源性。
[0030] 在一些實施方案中，分離的營養性蛋白質不是毒素。在一些實施方案中，分離的營 養性蛋白質與已知毒素具有小於50%整體同源性。
[0031] 在一些實施方案中，營養性蛋白質具有模擬胃消化半衰期為小於60分鐘。在一些 實施方案中，營養性蛋白質具有模擬胃消化半衰期為小於30分鐘。在一些實施方案中，分 離的營養性蛋白質具有模擬胃消化半衰期為小於10分鐘。在一些實施方案中，分離的營養 性蛋白質在模擬胃液中完全消化。在一些實施方案中，分離的營養性蛋白質包含至少一個 選自胃蛋白酶識別位點、胰蛋白酶識別位點和胰凝乳蛋白酶識別位點的蛋白酶識別位點。 在一些實施方案中，分離的營養性蛋白質不包含半胱氨酸殘基。在一些實施方案中，分離的 營養性蛋白質不包含二硫鍵。在一些實施方案中，分離的營養性蛋白質不包含N連接的糖 基化。在一些實施方案中，分離的營養性蛋白質不包含O連接的糖基化。
[0032] 在一些實施方案中，分離的營養性蛋白質對聚集具有抗性。在一些實施方案中，分 離的營養性蛋白質在PH 7下是陰離子型的。在一些實施方案中，分離的營養性蛋白質具有 計算溶合計分為-20或更低。在一些實施方案中，分離的營養性蛋白質具有計算溶合計分 為-30或更低。在一些實施方案中，分離的營養性蛋白質具有計算聚集計分為0. 75或更低。 在一些實施方案中，分離的營養性蛋白質具有計算聚集計分為〇. 5或更低。在一些實施方 案中，分離的營養性蛋白質具有計算聚集計分為〇. 3或更低。
[0033] 在一些實施方案中，分離的營養性蛋白質包含選自以下的胺基酸序列：i.選自 SEQ ID NO: 1 至SEQ ID NO:490 的胺基酸序列；ii.選自 SEQ ID NO: 1 至SEQ ID NO:490 的氨 基酸序列的修飾的衍生物；和iii.選自SEQ ID NO: 1至SEQ ID N0:490的胺基酸序列的突 變蛋白。在一些實施方案中，分離的營養性蛋白質由選自以下的胺基酸序列組成：i.選自 SEQ ID NO: 1 至 SEQ ID NO:490 的胺基酸序列，ii.選自 SEQ ID NO: 1 至 SEQ ID NO:490 的 胺基酸序列的修飾的衍生物，和iii.選自SEQ ID NO: 1至SEQ ID N0:490的胺基酸序列的 突變蛋白。在一些實施方案中，分離的營養性蛋白質與至少一個選自SEQ ID NO: 1至SEQ ID N0:490 的參照胺基酸序列至少 40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、 86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 99. 5% 同源。
[0034] 在一些實施方案中，本公開的分離的營養性蛋白質進一步包含用於親和純化的多 肽標籤。在一些實施方案中，用於親和純化的標籤是聚組氨酸標籤。
[0035] 在另一方面，本公開提供包含編碼本公開的營養性蛋白質的核酸序列的分離的核 酸。在一些實施方案中，分離的核酸選自基因組DNA、cDNA、正義RNA和反義RNA。在一些實 施方案中，分離的核酸是基因組DNA。在一些實施方案中，分離的核酸是cDNA。在一些實施 方案中，分離的核酸進一步包含可操作地連接於編碼營養性蛋白質的核酸序列的表達控制 序列。在一些實施方案中，提供載體
[0036] 在另一方面，本公開提供一種包含編碼本公開的營養性蛋白質的核酸序列的載 體。在一些實施方案中，載體進一步包含可操作地連接於編碼營養性蛋白質的核酸序列的 表達控制序列。
[0037] 在另一方面，本公開提供包含本公開的核酸和本公開的載體的至少一者的重組微 生物。在一些實施方案中，重組微生物是原核生物。在一些實施方案中，原核生物是異養性 的。在一些實施方案中，原核生物是自養性的。在一些實施方案中，原核生物是細菌。
[0038] 在另一方面，本公開提供製備本公開的營養性蛋白質的方法，所述方法包括在足 以由重組微生物產生所述營養性蛋白質的條件下培養本公開的重組微生物。在一些實施方 案中，方法進一步包括自培養物分離營養性蛋白質。
[0039] 在另一方面，本公開提供包含本公開的分離的營養性蛋白質和至少一種第二組分 的營養性組合物。在一些實施方案中，至少一種第二組分選自蛋白質、多肽、肽、游離氨基 酸、碳水化合物、脂質、礦物質或礦物質來源、維生素、補充劑、生物體、醫藥和賦形劑。在一 些實施方案中，至少一種第二組分是蛋白質。在一些實施方案中，至少一種第二組分是營養 性蛋白質。在一些實施方案中，至少一種第二組分是選自必需胺基酸、非必需胺基酸、支鏈 胺基酸、非標準胺基酸和修飾的胺基酸的游離胺基酸。在一些實施方案中，至少一種第二組 分是選自必需胺基酸的游離胺基酸。在一些實施方案中，至少一種第二組分是選自支鏈氨 基酸的游離胺基酸。在一些實施方案中，至少一種第二組分是Leu。在一些實施方案中，至 少一種第二組分是脂質。在一些實施方案中，脂質選自脂肪、油、甘油三酯、膽固醇、磷脂和 脂肪酸。在一些實施方案中，至少一種第二組分選自礦物質和維生素。在一些實施方案中， 至少一種第二組分是補充劑。在一些實施方案中，至少一種第二組分是生物體。在一些實 施方案中，至少一種第二組分是醫藥。在一些實施方案中，至少一種第二組分是賦形劑。在 一些實施方案中，至少一種賦形劑選自緩衝劑、防腐劑、穩定劑、粘合劑、壓實劑、潤滑劑、分 散增強劑、崩解劑、調味劑、甜味劑、著色劑。在一些實施方案中，將營養性組合物配製成液 體溶液、漿液、混懸液、凝膠劑、糊劑、粉末或固體。
[0040] 在另一方面，本公開提供製備本公開的營養性組合物的方法，其包括提供本公開 的營養性蛋白質以及組合所述營養性蛋白質與至少一種第二組分。
[0041] 在另一方面，本公開提供維持或增加受試者的肌肉質量、肌肉強度和功能性表現 的至少一者的方法，所述方法包括向所述受試者提供足量的本公開的營養性蛋白質、本公 開的營養性組合物或通過本公開的方法製備的營養性組合物。在一些實施方案中，受試者 處於以下至少一種狀態下：年長、患有醫學上危急疾病、以及罹患蛋白質-能量營養不良 症。在一些實施方案中，本公開的營養性蛋白質、本公開的營養性組合物或通過本公開的方 法製備的營養性組合物是由受試者與進行運動配合加以消耗。在一些實施方案中，受試者 是肥胖的。在一些實施方案中，本公開的營養性蛋白質、本公開的營養性組合物或通過本公 開的方法製備的營養性組合物是由受試者通過經口、腸或胃腸外途徑加以消耗。
[0042] 在另一方面，本公開提供維持或達成受試者的合乎需要的身體質量指數的方法， 所述方法包括向所述受試者提供足量的本公開的營養性蛋白質、本公開的營養性組合物或 通過本公開的方法製備的營養性組合物。在一些實施方案中，受試者處於以下至少一種狀 態下：年長、患有醫學上危急疾病、以及罹患蛋白質-能量營養不良症。在一些實施方案中， 本公開的營養性蛋白質、本公開的營養性組合物或通過本公開的方法製備的營養性組合物 是由受試者與進行運動配合加以消耗。在一些實施方案中，受試者是肥胖的。在一些實施 方案中，本公開的營養性蛋白質、本公開的營養性組合物或通過本公開的方法製備的營養 性組合物是由受試者通過經口、腸或胃腸外途徑加以消耗。
[0043] 在另一方面，本公開提供向患有蛋白質-能量營養不良症的受試者提供蛋白質的 方法，所述方法包括向所述受試者提供足量的本公開的營養性蛋白質、本公開的營養性組 合物或通過本公開的方法製備的營養性組合物。在一些實施方案中，本公開的營養性蛋白 質、本公開的營養性組合物或通過本公開的方法製備的營養性組合物是由受試者與進行運 動配合加以消耗。在一些實施方案中，受試者是肥胖的。在一些實施方案中，本公開的營養 性蛋白質、本公開的營養性組合物或通過本公開的方法製備的營養性組合物是由受試者通 過經口、腸或胃腸外途徑加以消耗。
[0044] 在另一方面，本公開提供增加受試者的產熱的方法，所述方法包括向所述受試者 提供足量的本公開的營養性蛋白質、本公開的營養性組合物或通過本公開的方法製備的營 養性組合物。在一些實施方案中，受試者是肥胖的。在一些實施方案中，本公開的營養性蛋 白質、本公開的營養性組合物或通過本公開的方法製備的營養性組合物是由受試者與進行 運動配合加以消耗。在一些實施方案中，受試者是肥胖的。在一些實施方案中，本公開的營 養性蛋白質、本公開的營養性組合物或通過本公開的方法製備的營養性組合物是由受試者 通過經口、腸或胃腸外途徑加以消耗。
[0045] 在另一方面，本公開提供誘導受試者的飽足反應和飽腹感反應的至少一者的方 法，所述方法包括向所述受試者提供足量的本公開的營養性蛋白質、本公開的營養性組合 物或通過本公開的方法製備的營養性組合物。在一些實施方案中，受試者是肥胖的。在一 些實施方案中，本公開的營養性蛋白質、本公開的營養性組合物或通過本公開的方法製備 的營養性組合物是由受試者與進行運動配合加以消耗。在一些實施方案中，受試者是肥胖 的。在一些實施方案中，本公開的營養性蛋白質、本公開的營養性組合物或通過本公開的方 法製備的營養性組合物是由受試者通過經口、腸或胃腸外途徑加以消耗。
[0046] 在另一方面，本公開提供治療受試者的惡病質、肌肉減少症和虛弱的至少一者的 方法，所述方法包括向所述受試者提供足量的本公開的營養性蛋白質、本公開的營養性組 合物或通過本公開的方法製備的營養性組合物。在一些實施方案中，受試者是肥胖的。在 一些實施方案中，本公開的營養性蛋白質、本公開的營養性組合物或通過本公開的方法制 備的營養性組合物是由受試者通過經口、腸或胃腸外途徑加以消耗。
[0047] 附圖簡述：
[0048] 圖1顯示二維直方圖，其指示隨溶合計分（y軸）和聚集計分（X軸）而變的蛋白 質在大腸桿菌表達篩選中表達的相對可能性（在對數尺度上）。
[0049] 圖2顯示二維直方圖，其指示隨溶合計分（y軸）和聚集計分（X軸）而變的蛋白 質在大腸桿菌表達篩選中可溶性表達的相對可能性（在對數尺度上）。
[0050] 詳述：
[0051] 除非本文另外定義，否則與本公開關聯使用的科學和技術術語將具有由本領域普 通技術人員通常所理解的含義。此外，除非另外為上下文所需，否則單數術語將包括複數且 複數術語將包括單數。通常，與本文所述的生物化學、酶學、分子和細胞生物學、微生物學、 遺傳學、及蛋白質和核酸化學、以及雜交關聯使用的命名法以及本文所述的生物化學、酶 學、分子和細胞生物學、微生物學、遺傳學、及蛋白質和核酸化學、以及雜交的技術是本領域 中熟知且通常使用的命名法以及技術。本文引用的某些參考文獻和其它文件以引用的方式 明確併入本文。另外，本文引用的所有UniProt/SwissProt記錄都據此以引用的方式併入 本文。在起衝突的情況下，以包括定義的本說明書為準。材料、方法和實施例僅具有說明性 而非意圖具有限制性。
[0052] 除非另外指示，否則本公開的方法和技術通常是根據本領域中熟知及如本說明 書整篇引用和論述的各種一般性和更特定參考文獻中所述的常規方法來執行。參見例如 Sambrook 等，Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第 3 版，Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (2001) ；Ausubel 等,Current Protocols in Molecular Biology，Greene Publishing Associates (1992 及截至 2002 的補編）； Taylor 和 Drickamer, Introduction to Glycobiology, Oxford Univ.Press (2003)； Worthington Enzyme Manual,Worthington Biochemical Corp., Freehold, N. J.； Handbook of Biochemistry: Section A Proteins,第 I 卷,CRC Press (1976)； Handbook of Biochemistry: Section A Proteins,第 II 卷,CRC Press (1976)； Essentials of Glycobiology, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1999)。可適 用於藍細菌的許多分子生物學和遺傳技術描述於Heidorn等，"Synthetic Biology in Cyanobacteria:Engineering and Analyzing Novel Functions, "Methods in Enzymology,第497卷，第24章（2011)中，其據此以引用的方式併入本文。
[0053] 本公開涉及在網際網路上公開的針對某些蛋白質和基因序列的序列資料庫條目 (例如，UniProt/SwissProt記錄）以及網際網路上的其它信息。熟練技術人員了解的是因特 網上的信息（包括序列資料庫條目）時時更新，且例如用於指代特定序列的參考編號可變 化。當提及序列信息的公開資料庫或網際網路上的其它信息時，應了解的是可發生所述變化 且網際網路上的信息的特定實施方案可時有時無。因為熟練技術人員可通過在網際網路上搜索 來得到等效信息，所以提及網際網路網頁地址或序列資料庫條目證實所論述信息的可用性和 公開傳播性。
[0054] 在公開和描述本發明蛋白質、組合物、方法和其它實施方案之前，應了解的是本文 使用的術語是僅出於描述特定實施方案的目的且不意圖具有限制性。必須注意的是，除非 上下文另外明確規定，否則如說明書和隨附權利要求中所用，單數形式"一"和"所述"包括 複數個指示物。
[0055] 如本文所用的術語"包含"與"包括"或"含有"同義，且是包括性的或開放的，且不 排除其它未敘述成員、要素或方法步驟。
[0056] 本公開提及胺基酸。胺基酸的全稱可與各自的標準三字母和單字母縮寫互換使 用。為避免疑問，這些胺基酸是：丙氨酸（Ala、A)、精氨酸（Arg、R)、天冬醯胺（Asn、N)、天冬 氨酸仏鄧、0)、半胱氨酸化5^、〇、穀氨酸（6111、幻、穀氨醯胺（6111、0)、甘氨酸（61 7、6)、組 氨酸（His、H)、異亮氨酸（lie、I)、亮氨酸（Leu、L)、賴氨酸（Lys、K)、甲硫氨酸（Met、M)、苯 丙氨酸（Phe、F)、脯氨酸（Pro、P)、絲氨酸（Ser、S)、蘇氨酸（Thr、T)、色氨酸（Trp、W)、酪氨 酸（Tyr、Y)、糹顏氨酸（Val、V)。
[0057] 如本文所用，術語"體外"是指事件發生在人工環境中，例如在試管或反應容器中、 在細胞培養物中、在皮氏培養皿（Petri dish)中等，而非在生物體（例如，動物、植物或微 生物）內。
[0058] 如本文所用，術語"體內"是指事件發生在生物體（例如，動物、植物或微生物）內。
[0059] 如本文所用，術語"分離的"是指物質或實體已（1)與它在最初產生時（無論在自 然界中或在實驗環境中）與之相伴的至少一些組分分離，和/或（2)通過人手產生、製備和 /或製造。分離的物質和/或實體可與至少約10%、約20%、約30%、約40%、約50%、約 60%、約70%、約80%、約90%、或更多它們最初與之相伴的其它組分分離。在一些實施方 案中，分離的試劑的純度大於約80 %、約85 %、約90 %、約91 %、約92 %、約93 %、約94%、 約95 %、約96 %、約97 %、約98 %、約99 %或大於約99 %。如本文所用，如果物質大致上不 含其它組分，那麼它是"純的"。
[0060] 如本文所用，"支鏈胺基酸"是選自亮氨酸、異亮氨酸和纈氨酸的胺基酸。
[0061] 如本文所用，"必需胺基酸"是選自組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、 苯丙氨酸、蘇氨酸、色氨酸和纈氨酸的胺基酸。
[0062] 如本文所用的術語"肽"是指短多肽，例如通常含有小於約50個胺基酸且更通常 小於約30個胺基酸的多肽。如本文所用的所述術語涵蓋模擬結構功能以及因此生物功能 的類似物和模擬物。
[0063] 術語"多肽"涵蓋天然存在的蛋白質與非天然存在的蛋白質兩者及其片段、突變 體、衍生物和類似物。多肽可為單體或聚合物。此外，多肽可包含各自具有一種或多種不同 活性的許多不同結構域。為避免疑問，"多肽"可具有大於兩個胺基酸的任何長度。
[0064] 術語"分離的蛋白質"或"分離的多肽"是就它的起源或來源而言，（1)不與在它的 天然狀態下伴隨它的天然相伴組分相伴，（2)以不見於自然界中的純度存在，其中純度可關 於其它細胞物質的存在加以斷定（例如，不含來自相同物種的其它蛋白質），（3)由來自不 同物種的細胞表達，或（4)不存在於自然界中（例如，它是見於自然界中的多肽的片段或它 包括不見於自然界中的胺基酸類似物或衍生物或除標準肽鍵以外的鍵聯）的蛋白質或多 肽。因此，化學合成或在不同於它所天然源於的細胞的細胞系統中合成的多肽將與它的天 然相伴組分"分離"。也可通過使用本領域中熟知的蛋白質純化技術進行分離來致使多肽或 蛋白質大致上不含天然相伴組分。如因此所定義，"分離"未必需要如此描述的蛋白質、多 肽、肽或寡肽已自於其中合成它的細胞物理移除。
[0065] 如本文所用的術語"多肽片段"是指相較於全長多肽（如天然存在的蛋白質），具 有缺失（例如氨基末端和/或羧基末端缺失）的多肽。在一實施方案中，多肽片段是連續 序列，其中所述片段的胺基酸序列與天然存在的序列中的相應位置一致。片段的長度通常 是至少5、6、7、8、9或10個胺基酸、或至少12、14、16或18個胺基酸、或至少20個胺基酸、 或至少25、30、35、40或45個胺基酸、或至少50或60個胺基酸、或至少70個胺基酸、或至 少100個胺基酸。
[0066] 術語"融合蛋白"是指包含偶聯於異源胺基酸序列的多肽或片段的多肽。融合蛋白 是適用的，因為它們可被構建來含有兩個或更多個可來自兩種或更多種不同蛋白質的所需 功能性元件。融合蛋白包含至少10個來自目標多肽的連續胺基酸、或至少20或30個氨基 酸、或至少40、50或60個胺基酸、或至少75、100或125個胺基酸。融合蛋白內包括的異源 多肽的長度通常是至少6個胺基酸、或至少8個胺基酸、或至少15、20或25個胺基酸。包 括較大多肽（如IgG Fc區域）以及甚至整個蛋白質（如含有綠色螢光蛋白（"GFP"）發色 團的蛋白質）的融合物具有特定效用。融合蛋白可通過與編碼不同蛋白質或肽的核酸序列 同框構建編碼多肽或其片段的核酸序列，且接著表達融合蛋白來重組產生。或者，可通過使 多肽或其片段交聯於另一蛋白質來化學產生融合蛋白。
[0067] 如本文所用，如果編碼蛋白質的核酸序列與編碼第二蛋白質的核酸序列具有類似 序列，那麼所述蛋白質與所述第二蛋白質具有"同源性"或與所述第二蛋白質"同源"。或者， 如果兩個蛋白質具有類似胺基酸序列，那麼某一蛋白質與第二蛋白質具有同源性。（因此， 術語"同源蛋白質"被定義來指兩個蛋白質具有類似胺基酸序列。）如本文所用，胺基酸序 列的兩個區域之間的同源性（尤其關於預測的結構類似性）解釋為暗示在功能方面的類似 性。
[0068] 當"同源"關於蛋白質或肽使用時，應認識到不相同的殘基位置常因保守性胺基酸 取代而不同。"保守性胺基酸取代"是其中某一胺基酸殘基被具有類似化學性質（例如，電 荷或疏水性）側鏈（R基團）的另一胺基酸殘基取代的取代。一般來說，保守性胺基酸取代 將不實質上改變蛋白質的功能性質。在兩個或更多個胺基酸序列因保守性取代而不同於 彼此的情況下，序列同一性百分比或同源性程度可向上調整以校正取代的保守性性質。用 於進行這個調整的手段為本領域技術人員所熟知。參見例如Pearson, 1994, Methods Mol. Biol. 24:307-31 和 25:365-89。
[0069] 以下六組各自含有是彼此的保守性取代的胺基酸：1)絲氨酸、蘇氨酸；2)天冬氨 酸、穀氨酸；3)天冬醯胺、穀氨醯胺；4)精氨酸、賴氨酸；5)異亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、丙 氨酸、纈氨酸；和6)苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸。
[0070] 也稱為序列同一性百分比的多肽的序列同源性通常是使用序列分析軟體測 量。參見例如威斯康星大學生物技術中心的遺傳學計算機組（GCG)的序列分析軟體包 (910University Avenue, Madison, Wis. 53705)。蛋白質分析軟體使用對各種取代、缺失和 其它修飾（包括保守性胺基酸取代）指定的同源性量度匹配類似序列。舉例來說，GCG含 有可以預設參數用於確定密切相關多肽（如來自生物體的不同物種的同源多肽）之間或野 生型蛋白質與其突變蛋白之間的序列同源性或序列同一性的程序，如"Gap"和"Bestfit"。 參見例如GCG6. 1版。
[0071] 當將特定多肽序列與含有來自不同生物體的許多序列的資料庫比較時，一示 例性算法是電腦程式 BLAST(Altschul 等，J. Mol. Biol. 215:403-410(1990) ;Gish 和 States, Nature Genet. 3:266-272 (1993) ;Madden 等，Meth. Enzymol. 266:131-141 (1996); Altschul 等，Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 (1997) ;Zhang 和 Madden, Genome Res.7:649-656 (1997)),尤其 blastp 或 tblastn(Altschul 等，Nucleic Acids Res.25:3389-3402(1997))。
[0072] 用於BLASTp的示例性參數是：期望值：10(預設值）；過濾：seg(預設值）；打開 缺口的代價：11 (預設值）；延伸缺口的代價：1 (預設值）；最大比對：100 (預設值）；字長： 11(預設值）；描述數目：100(預設值）；罰分矩陣：BL0WSUM62。針對同源性比較的多肽序 列的長度將通常是至少約16個胺基酸殘基、或至少約20個殘基、或至少約24個殘基、或 至少約28個殘基、或大於約35個殘基。當搜索含有來自許多不同生物體的序列的資料庫 時，可適用的是比較胺基酸序列。使用胺基酸序列進行的資料庫搜索可通過本領域中已知 的除blastp以外的算法來測量。舉例來說，可使用GCG 6. 1版中的程序FASTA比較多肽序 列。FASTA提供在查詢序列與搜索序列之間最佳重疊的區域的比對和序列同一性百分比。 Pearson, Methods Enzymol. 183:63-98(1990)。舉例來說，如以引用的方式併入本文的GCG 6. 1版中所提供，可使用FASTA以它的預設參數（字長2和PAM250計分矩陣）確定胺基酸 序列之間的序列同一性百分比。
[0073] 在一些實施方案中，如果聚合分子（例如多肽序列或核酸序列）的序列至少25%、 至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、 至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一，那麼它 們被視為彼此"同源"。在一些實施方案中，如果聚合分子的序列至少25%、至少30%、至 少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少70%、至少 75 %、至少80 %、至少85 %、至少90 %、至少95 %或至少99 %類似，那麼它們被視為彼此"同 源"。術語"同源"必須是指至少兩個序列（核苷酸序列或胺基酸序列）之間的比較。在一 些實施方案中，如果兩個核苷酸序列編碼的多肽就至少一個具有至少約20個胺基酸的鏈 段而言是至少約50%同一、至少約60%同一、至少約70%同一、至少約80%同一或至少約 90%同一，那麼所述兩個核苷酸序列被視為同源。在一些實施方案中，同源核苷酸序列的特 徵在於能夠編碼具有至少4-5個獨特指定的胺基酸的鏈段。這些胺基酸相對於彼此的同一 性與大致間隔兩者均必須為將核苷酸序列考慮為同源時所考慮。在長度小於60個核苷酸 的核苷酸序列的一些實施方案中，同源性通過能夠編碼具有至少4-5個獨特指定的胺基酸 的鏈段來確定。在一些實施方案中，如果蛋白質就至少一個具有至少約20個胺基酸的鏈 段而言是至少約50%同一、至少約60%同一、至少約70%同一、至少約80%同一或至少約 90%同一，那麼兩個蛋白質序列被視為同源。
[0074] 如本文所用，"修飾的衍生物"是指在一級結構序列方面與參照多肽序列大致上 同源，但包括例如體內或體外化學和生物化學修飾或並有不見於參照多肽中的胺基酸的 多肽或其片段。所述修飾包括例如乙醯化、羧化、磷酸化、糖基化、泛素化、標記（例如用 放射性核素標記）和各種酶修飾，如將易於為本領域技術人員所了解。多種用於標記多 肽的方法和適用於所述目的的取代基或標記在本領域中是熟知的，且包括放射性同位素 (如 125I、32P、35S和3H)、結合標記的抗配體（例如，抗體）的配體、螢光團、化學發光劑、酶 和可充當標記的配體的特異性結合對成員的抗配體。對標記的選擇取決於所需靈敏性、與 引物綴合的簡易性、穩定性要求和可用儀器。用於標記多肽的方法在本領域中是熟知的。 參見例如 Ausubel 等，Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992 及截至 2002 的補編）。
[0075] 如本文所用，"多肽突變體"或"突變蛋白"是指相較於參照蛋白質或多肽（如天然 或野生型蛋白質）的胺基酸序列，序列含有一個或多個胺基酸的插入、重複、缺失、重排或 取代的多肽。突變蛋白可具有一個或多個胺基酸點取代，其中在某一位置處的單一胺基酸 已變為另一胺基酸；一個或多個插入和/或缺失，其中一個或多個胺基酸分別被插入在參 照蛋白質的序列中或在參照蛋白質的序列中缺失；和/或胺基酸序列在氨基或羧基末端的 任一者或兩者處的截短。突變蛋白相較於參照蛋白質可具有相同或不同生物活性。
[0076] 在一些實施方案中，突變蛋白與它的對應參照蛋白質具有例如至少85%總體序列 同源性。在一些實施方案中，突變蛋白與野生型蛋白質具有至少90%總體序列同源性。在 其它實施方案中，突變蛋白展現至少95 %序列同一性、或98 %或99 %或99. 5 %或99. 9 %總 體序列同一性。
[0077] 如本文所用，"用於親和純化的多肽標籤"是具有可用於分離或純化融合於第一 "標籤"多肽的目標第二蛋白質或多肽序列的結合配偶體的任何多肽。若干實例在本領域中 是熟知的且包括His-6標籤、FLAG表位、c-myc表位、Str印-TAGII、生物素標籤、穀胱甘肽 5_轉移酶（GST)、幾丁質結合蛋白（CBP)、麥芽糖結合蛋白（MBP)或金屬親和標籤。
[0078] 如本文所用，"重組"是指例如基因或蛋白質的生物分子（1)已自它的天然存在的 環境移除，（2)不與在自然界中發現所述基因所處的多核苷酸的全部或一部分相伴，（3)可 操作地連接於它在自然界中不與之連接的多核苷酸，或（4)不存在於自然界中。術語"重 組"可關於克隆的DNA分離物、化學合成的多核苷酸類似物或由異源系統生物合成的多核苷 酸類似物、以及由所述核酸編碼的蛋白質和/或mRNA加以使用。因此，舉例來說，例如如果 由微生物合成的蛋白質是自由細胞中存在的重組基因合成的mRNA合成，那麼它是重組的。
[0079] 術語"多核苷酸"、"核酸分子"、"核酸"或"核酸序列"是指長度是至少10個鹼基 的聚合形式的核苷酸。所述術語包括DNA分子（例如，cDNA或基因組或合成DNA)和RNA 分子（例如，mRNA或合成RNA)、以及DNA或RNA的含有非天然核苷酸類似物、非天然核苷 間鍵或兩者的類似物。核酸可呈任何拓撲構象。舉例來說，核酸可為單鏈、雙鏈、三鏈、四鏈 體、部分雙鏈、分支式、髮夾式、環狀或呈掛鎖（padlocked)構象。核酸（也稱為多核苷酸） 可包括RNA、cDNA、基因組DNA以及以上各者的合成形式和混合聚合物的正義鏈與反義鏈兩 者。它們可被化學或生物化學修飾或可含有非天然或衍生核苷酸鹼基，如將易於為本領域 技術人員所了解。所述修飾包括例如標記、甲基化、用類似物取代一個或多個天然存在的核 苷酸、核苷酸間修飾（如不帶電荷鍵聯（例如甲基膦酸酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸 酯等）、帶電荷鍵聯（例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等））、懸垂部分（例如，多肽）、嵌入劑 (例如，吖啶、補骨脂素（psoralen)等）、螯合劑、烷基化劑和修飾的鍵聯（例如，α端基異 構核酸等）。也包括在合成分子能夠通過氫鍵結和其它化學相互作用結合指定序列方面模 擬多核苷酸的所述合成分子。所述分子在本領域中是已知的且包括例如在分子骨架中，肽 鍵被替代成磷酸酯鍵聯的分子。其它修飾可包括例如核糖環含有橋接部分或其它結構（如 見於"鎖定"核酸中的修飾）的類似物。
[0080] "合成" RNA、DNA或混合聚合物是在細胞外部產生的RNA、DNA或混合聚合物，例如 化學合成的RNA、DNA或混合聚合物。
[0081] 如本文所用的術語"核酸片段"是指相較於全長參照核苷酸序列，具有缺失（例如 5'末端或3'末端缺失）的核酸序列。在一實施方案中，核酸片段是連續序列，其中所述片 段的核苷酸序列與天然存在的序列中的相應位置一致。在一些實施方案中，片段的長度是 至少 10、15、20 或 25 個核苷酸、或至少 20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140 或150個核苷酸。在一些實施方案中，核酸序列的片段是開放閱讀框序列的片段。在一些 實施方案中，所述片段編碼由開放閱讀框核苷酸序列編碼的蛋白質的多肽片段（如本文所 定義）。
[0082] 如本文所用，如果鄰近於生物體的基因組中的內源性核酸序列（或那個序列編碼 的蛋白質產物）放置異源序列，以使這個內源性核酸序列的表達被改變，那麼所述內源性 核酸序列在本文中被視為"重組的"。在這個情形下，異源序列是不天然鄰近於內源性核酸 序列的序列，無論所述異源序列是否本身是內源性的（源於相同宿主細胞或其子代）或外 源性的（源於不同宿主細胞或其子代）。舉例來說，啟動子序列可取代（例如，通過同源重 組）宿主細胞的基因組中的基因的天然啟動子，以使這個基因具有改變的表達樣式。這個 基因現將變為"重組的"，因為它與天然側接它的至少一些序列分離。
[0083] 如果核酸含有不天然存在於基因組中的相應核酸中的任何修飾，那麼它也被視為 "重組的"。舉例來說，如果內源性編碼序列含有例如通過人為幹預來人工引入的插入、缺失 或點突變，那麼它被視為"重組的"。"重組核酸"也包括在異源位點處整合至宿主細胞染色 體中的核酸和以游離體形式存在的核酸構建體。
[0084] 如本文所用，短語參照核酸序列的"簡併變體"涵蓋可根據標準遺傳密碼翻譯以提 供與自所述參照核酸序列翻譯的胺基酸序列一致的胺基酸序列的核酸序列。術語"簡併寡 核苷酸"或"簡併引物"用於表示能夠與在序列方面未必一致，但在一個或多個特定區段內 彼此同源的靶標核酸序列雜交的寡核苷酸。
[0085] 術語"序列同一性百分比"或"同一"在核酸序列的情形下是指當比對以達成最 大對應時，兩個序列中的殘基是相同的。序列同一性比較的長度可為歷經至少約9個核苷 酸、通常至少約20個核苷酸、更通常至少約24個核苷酸、通常至少約28個核苷酸、更通常 至少約32個、且甚至更通常至少約36個或更多個核苷酸的鏈段。存在本領域中已知的 可用於測量核苷酸序列同一性的許多不同算法。舉例來說，可使用威斯康星程序包10.0 版（Genetics Computer Group (GCG) ,Madison, Wis)中的程序 FASTA、Gap 或 Bestfit 比 較多核苷酸序列。FASTA提供在查詢序列與搜索序列之間最佳重疊的區域的比對和序列 同一性百分比。Pearson, Methods Enzymol. 183:63-98 (1990)。舉例來說，如以引用的方 式併入本文的GCG 6. 1版中所提供，可使用FASTA以它的預設參數（字長6和用於計分矩 陣的NOPAM因子）或使用Gap以它的預設參數確定核酸序列之間的序列同一性百分比。 或者，可使用電腦程式 BLAST (Altschul 等，J. Mol. Biol. 215:403-410(1990) ;Gish 和 States, Nature Genet. 3:266-272 (1993) ;Madden 等，Meth. Enzymol. 266:131-141 (1996); Altschul 等，Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 (1997) ;Zhang 和 Madden, Genome Res.7:649-656 (1997)),尤其 blastp 或 tblastn(Altschul 等，Nucleic Acids Res. 25:3389-3402 (1997))比較序列。
[0086] 術語"實質性同源性"或"實質性類似性"在關於核酸或其片段時指示當在適當核 苷酸插入或缺失下與另一核酸（或它的互補鏈）最優比對時，在至少約76%、80%、85%、或 至少約90 %、或至少約95 %、96 %、97 %、98 %或99 %的核苷酸鹼基中存在核苷酸序列同一 性，如通過序列同一性的任何熟知算法，如如上所論述的FASTA、BLAST或Gap所測量。
[0087] 或者，當核酸或其片段與另一核酸、另一核酸的一條鏈、或其互補鏈在嚴格雜交條 件下雜交時，存在實質性同源性或類似性。"嚴格雜交條件"和"嚴格洗滌條件"在核酸雜交 實驗的情形下取決於許多不同物理參數。核酸雜交將受如以下的條件影響：鹽濃度、溫度、 溶劑、雜交物質的鹼基組成、互補區域的長度和雜交核酸之間的核苷酸鹼基錯配數目，如將 易於為本領域技術人員所了解。本領域普通技術人員了解如何改變這些參數來達成特定雜 交嚴格性。
[0088] 一般來說，特定DNA雜交物的"嚴格雜交"是在約25°C下在低於熱熔點（Tm)下在 一組特定條件下進行。特定DNA雜交物的"嚴格洗滌"是在溫度約5°C下在低於Tm下在一 組特定條件下進行。Tm是50%靶標序列與完全匹配探針雜交所處的溫度。參見Sambrook 等，Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第2版，Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)，第9. 51頁。出於本文目的，溶液相雜交的"嚴格 條件"被定義為在65°C下在6xSSC(其中20xSSC含有3. OM NaCl和0. 3M檸檬酸鈉）、1 % SDS中進行水性雜交（即不含甲醯胺）8-12小時，隨後在65°C下在0. 2xSSC、0. 1%SDS中進 行2次20分鐘洗滌。熟練工作者應了解的是在65°C下雜交將取決於許多因素而在不同速 率下發生，所述因素包括雜交的序列的長度和同一性百分比。
[0089] 如本文所用，"表達控制序列"是指為實現它們所可操作地連接的編碼序列的表達 所必需的多核苷酸序列。表達控制序列是控制核酸序列的轉錄、轉錄後事件和翻譯的序列。 表達控制序列包括適當轉錄啟始、終止、啟動子和增強子序列；高效RNA加工信號，如剪接 和聚腺苷酸化信號；使細胞質mRNA穩定的序列；增強翻譯效率的序列（例如，核糖體結合 位點）；增強蛋白質穩定性的序列；和當需要時，增強蛋白質分泌的序列。所述控制序列的 性質視宿主生物體而不同；在原核生物中，所述控制序列通常包括啟動子、核糖體結合位點 和轉錄終止序列。術語"控制序列"意圖至少涵蓋其存在為表達所必需的任何組分，且也可 涵蓋其存在是有利的其它組分，例如前導序列和融合配偶體序列。
[0090] 如本文所用，"可操作地連接的"表達控制序列是指以下連接：表達控制序列與目 標基因鄰接以控制所述目標基因，以及表達控制序列反式作用或在一定距離下控制所述目 標基因的作用。
[0091] 如本文所用，"載體"意圖指代能夠轉運它已連接的另一核酸的核酸分子。一種載 體類型是"質粒"，其通常是指可向其中連接其它DNA區段的環狀雙鏈DNA環，但也包括線性 雙鏈分子，如通過聚合酶鏈式反應（PCR)由擴增或由用限制酶處理環狀質粒產生的線性雙 鏈分子。其它載體包括粘粒、細菌人工染色體（BAC)和酵母人工染色體（YAC)。另一載體類 型是病毒載體，其中可將其它DNA區段連接至病毒基因組中（以下更詳細論述）。某些載體 能夠在它們所引入的宿主細胞中自主複製（例如，具有在宿主細胞中起作用的複製起點的 載體）。其它載體可在引入宿主細胞中後整合至所述宿主細胞的基因組中，且由此與宿主基 因組一起複製。此外，某些載體能夠指導它們所可操作地連接的基因的表達。所述載體在 本文中稱為"重組表達載體"（或簡稱為"表達載體"）。
[0092] 如本文所用的術語"重組宿主細胞"（或簡稱為"重組細胞"或"宿主細胞"）意圖 指代已引入有如重組載體的重組核酸的細胞。在一些情況下，用詞"細胞"由指定細胞類型 的名稱替代。舉例來說，"重組微生物"是為微生物宿主細胞的重組宿主細胞。應了解的是 所述術語意圖不僅指代特定受試細胞，而且指代所述細胞的子代。因為某些修飾可由於突 變或環境影響而發生在繼代中，所以所述子代可能實際上不與親本細胞一致，但仍然包括 在如本文所用的術語"重組宿主細胞"、"重組細胞"和"宿主細胞"的範圍內。重組宿主細 胞可為生長在培養物中的分離的細胞或細胞系或可為存在於活組織或生物體中的細胞。 [0093] 如本文所用，術語"異養性"是指生物體不能固定碳且使用有機碳來生長。
[0094] 如本文所用，術語"自養性"是指生物體使用來自光（通過光合作用）或無機化學 反應（化學合成）的能量自簡單無機分子產生複雜有機化合物（如碳水化合物、脂肪和蛋 白質）。
[0095] 如本文所用，"肌肉質量"是指受試者的身體中的肌肉重量。肌肉質量包括骨骼肌、 平滑肌（如心臟和消化道肌肉）和這些肌肉中含有的水。特定肌肉的肌肉質量可使用雙能 X射線吸光測定法（DEXA) (Padden-Jones等，2004)來測定。總瘦體重（減去脂肪）、總身 體質量和骨礦物質含量也可通過DEXA來測量。在一些實施方案中，受試者的特定肌肉的肌 肉質量的變化是例如通過DEXA來測定，且所述變化用作所述受試者的肌肉質量的總變化 的代表。因此，舉例來說，如果受試者消耗如本文公開的營養性蛋白質且歷經一段時期經歷 特定肌肉或肌肉群中的肌肉質量增加，那麼可推斷所述受試者已經歷肌肉質量增加。
[0096] 如本文所用，"肌肉強度"是指在單次最大出力下，肌肉可產生的力的量。存在兩種 類型的肌肉強度，即靜態強度和動態強度。靜態強度是指肌肉的等長收縮，其中肌肉產生力 量，而肌肉長度保持恆定和/或此時不存在關節運動。實例包括固持或攜帶物件或相對於 牆壁推進。動態強度是指肌肉產生導致運動的力量。動態強度可為等張收縮，其中肌肉在 恆定負荷或等動力收縮下縮短，其中肌肉在恆定速度下收縮且縮短。動態強度也可包括等 慣性強度。
[0097] 除非指定，否則"肌肉強度"是指最大動態肌肉強度。最大強度稱為"最大重複一 次"（IRM)。這是可在不失敗或損傷下完全移動（提升、推進或牽拉）最大負荷（以千克 計）一次的測量結果。這個值可直接測量，但這樣做需要增加重量直至受試者未能將活動 進行完畢。或者，IRM是通過使用小於受試者可移動的最大量的負荷，對受試者可達成的最 大運動重複次數進行計數來估計。常在臨床試驗中測量腿部伸展和腿部彎曲（Borsheim 等，"Effect of amino acid supplementation on muscle mass, strength and physical function in elderly，" Clin Nutr 2008;27:189-195 ;Paddon_Jones，等，"Essential amino acid and carbohydrate supplementation ameliorates muscle protein loss in humans during 28days bed rest，"J Clin Endocrinol Metab 2004;89:4351-4358)。
[0098] 如本文所用，"功能性表現"是指模擬每日活動的功能性測試。"功能性表現"是 通過任何適合接受測試來測量，所述測試包括定時舉步測試（自4英寸臺階儘可能快地 上下舉步5次）、定時平臺傳送測試（在平臺上儘可能快地自立位變為仰臥位且此後再次 向上變為立位，重複一次）、和身體表現連串測試（靜態平衡測試、坐椅測試和行走測試） (Borsheim等，"Effect of amino acid supplementation on muscle mass, strength and physical function in elderly， "Clin Nutr 2008;27:189-195)。
[0099] 如本文所用，"身體質量指數"或"BMI"或"克託萊指數（Quetelet index)"是以 千克計的受試者的重量除以以米計的受試者的身高的平方（kg/m2)。
[0100] 對於成人，常使用BMI來評估個體的體重偏離具有他的或她的身高的人士的正常 或合乎需要體重的程度。重量過度或不足可部分地用身體脂肪來解釋，但如肌肉發達性的 其它因素也顯著影響BMI。世界衛生組織將BMI小於18. 5視為重量不足且可指示營養不良、 飲食病症或其它健康問題，而BMI大於25被視為超重且高於30被視為肥胖。（世界衛生組 織。BMI 分類。2012 年 3 月 19 日訪問 http://apps.who. int/bmi/index.jsp ? introPage =intro_3.html.)如本文所用，"合乎需要的身體質量指數"是身體質量指數自約18.5至 約25。因此，如果受試者的BMI低於約18. 5,那麼所述受試者的BMI增加是所述受試者的 BMI的合乎需要增加。如果相反，受試者的BMI高於約25,那麼所述受試者的BMI降低是所 述受試者的BMI的合乎需要增加。
[0101] 如本文所用，"年長"哺乳動物是經歷身體質量指數和肌肉質量的至少一者的年齡 相關變化（例如，年齡相關肌肉減少症）的哺乳動物。在一些實施方案中，"年長"人是至少 50歲、至少60歲、至少65歲、至少70歲、至少75歲、至少80歲、至少85歲、至少90歲、至 少95歲或至少100歲。在一些實施方案中，年長動物、哺乳動物或人是已經歷肌肉質量自 峰值壽命肌肉質量損失至少5 %、至少10 %、至少15 %、至少20 %、至少25 %、至少30 %、至 少35 %、至少40 %、至少45 %、至少50 %、至少55 %或至少60 %的人。因為已知身體質量 指數和肌肉質量的至少一者的年齡相關變化與年齡增加相關，所以在一些實施方案中，僅 基於年齡鑑定或確定年長哺乳動物。因此，在一些實施方案中，"年長"人是通過他們的年 齡是至少60歲、至少65歲、至少70歲、至少75歲、至少80歲、至少85歲、至少90歲、至少 95歲或至少100歲的事實，而不依靠身體質量指數和肌肉質量的至少一者的測量結果來簡 單地鑑定或確定。
[0102] 如本文所用，如果患者由於醫學疾病而經歷身體質量指數和肌肉質量的至少一者 的變化（例如，肌肉減少症），那麼所述患者患有"醫學上危急疾病"。在一些實施方案中，患 者持續他們醒來時間的至少25%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、 至少95%或100%被限制臥床。在一些實施方案中，患者是無意識的。在一些實施方案中， 患者已如這個段落中所述被限制臥床至少1天、2天、3天、4天、5天、10天、2周、3周、4周、 5周、10周或更長。
[0103] 如本文所用，"蛋白質-能量營養不良症"是指一種形式的營養不良，其中存在蛋白 質攝取不充分。類型包括誇休可爾症（Kwashiorkor)(突出性蛋白質營養不良）、消瘦（缺 乏卡路裡與蛋白質營養物兩者）和消瘦性誇休可爾症（存在顯著蛋白質缺乏和顯著卡路裡 不足徵象，有時稱為最重度形式的營養不良）。
[0104] 如本文所用，"惡病質"是指導致損耗和重量減輕的多層面臨床症候群。它是一種 複雜病狀，其中蛋白質分解代謝超過蛋白質合成代謝，此使得肌肉損耗成為所述病狀的主 要特徵。除蛋白質代謝的代謝紊亂之外，它的特徵也在於厭食和發炎。這些紊亂加上蛋白 質代謝受損在不同程度上對營養物療法起反應。
[0105] 如本文所用，"產熱"是哺乳動物中的熱產生過程。產熱伴隨有能量消耗增加。產 熱具體來說是在食物組分（如蛋白質）代謝之後燃燒能量。這也可稱為食物的熱效應。由 個體消耗的總能量等於靜息能量消耗（在空腹狀態下在靜息時消耗來支撐基礎代謝的能 量）、食物的熱效應和與身體活動相關的能量消耗的總和。靜息能量消耗佔人中總能量消 耗的約65-75%。肌肉質量的量和活性是靜息能量消耗的一種影響因素。足以支撐肌肉的 蛋白質消耗也影響靜息能量消耗。蛋白質的攝取傾向於增加餐後能量消耗；這是食物的熱 效應。食物的熱效應佔人中總能量消耗的約10%。儘管這是總能量消耗的較小比例，但這 個值的較小增加可影響體重。蛋白質具有的熱效應高於脂肪或碳水化合物；這個效應連同 蛋白質的其它代謝影響一起使得蛋白質成為適用於重量控制、糖尿病管理和其它情況的基 質。
[0106] 如本文所用，"飽足"是當進食時變飽或對進食的需求降低的行為。這會停止或減 少進食。
[0107] 如本文所用，"飽腹感"是餐後保持飽滿的行為，其表示為餐後不進食的時期。
[0108] 如本文所用，最廣泛而言，"運動"是增強或維持身體康健以及總體健康和安康的 任何身體活動。運動是出於各種原因來進行，包括強化肌肉和心血管系統、磨練運動技能、 減輕或維持重量以及出於享樂的目的。
[0109] 如本文所用，"足量"是本文公開的蛋白質或多肽足以產生所需作用的量。舉例來 說，如果需要肌肉質量增加，那麼足量是歷經一段時期導致肌肉質量增加的量。足量蛋白質 或多肽片段可直接（即通過向受試者施用所述蛋白質或多肽片段）提供，或它可作為包含 所述蛋白質或多肽片段的組合物的一部分提供。在本文中其它地方論述施用模式。
[0110] 如本文所用，術語"哺乳動物"是指分類類別哺乳綱的任何成員，包括胎盤哺乳動 物和有袋哺乳動物。因此，"哺乳動物"包括人、靈長類動物、家畜和實驗室哺乳動物。示例 性哺乳動物包括齧齒動物、小鼠、大鼠、兔、狗、貓、綿羊、馬、山羊、美洲駝、牛、靈長類動物、 豬和任何其它哺乳動物。在一些實施方案中，哺乳動物是轉基因哺乳動物、遺傳工程化哺乳 動物和克隆哺乳動物中的至少一者。
[0111] A.營養性蛋白質
[0112] 出於本公開的目的，"營養性蛋白質"是含有合乎需要量的必需胺基酸的蛋白質。 在一些實施方案中，以重量計，營養性蛋白質包含至少30%必需胺基酸。在一些實施方案 中，以重量計，營養性蛋白質包含至少40%必需胺基酸。在一些實施方案中，以重量計，營養 性蛋白質包含至少50%必需胺基酸。在一些實施方案中，營養性蛋白質包含以下或由以下 組成：天然存在於可食用物質中的蛋白質或蛋白質的片段。"可食用物質"以它的最廣泛意 義涵蓋已知由至少一種類型的哺乳動物進食而無有害作用的任何物質。有害作用包括有毒 作用和毒性作用。在一些實施方案中，可食用物質是已知由人進食而無有害作用的物質。一 些可食用物質是處於有限地理位置的僅一小組某一類型的哺乳動物的膳食的不常見但已 知的組分，而其它可食用物質是遍及世界上大部分區域的膳食主要成分。在其它實施方案 中，可食用物質是不知先前由任何哺乳動物進食，但在測試後被證明可食用的物質。可食用 物質包括但不限於特倫納棉（Gossypium turneri)、白黃側耳（Pleurotus cornucopiae)、 大豆（Glycine max)、水稻（Oryza sativa)、大眼金槍魚（Thunnus obesus)、荀片冷杉 (Abies bracteata)、紅腹刺鼠 （Acomys ignitus)、葉軸香豌豆（Lathyrus aphaca)、印度野 牛（Bos gaurus)、黑耳巖玲（Raphicerus melanotis)、格陵蘭海豹（Phoca groenlandica)、中華舞（Acipenser sinensis)、馬來靈貓（Viverra tangalunga)、漏鬥狀 側耳（Pleurotus sajor-caju)、苦養麥（Fagopyrum tataricum)、美國五針松（Pinus strobus)、大花牽牛（Ipomoea nil)、東北紅豆杉（Taxus cuspidata)、械葉小牽牛 (Ipomoea wrightii)、砂海螂（Mya arenaria)、美味稱猴桃（Actinidia deliciosa)、戈氏 瞪玲（Gazella granti)、歐洲山楊（Populus tremula)、西洋李（Prunus domestica)、銀區鳥 (Larus argentatus)、毛野豌豆（Vicia villosa)、乳斑棘鱗魚（Sargocentron punctatissimum)、叉枝妮子草（Silene Iatifolia)、霍氏海豚（Lagenodelphis hosei)、大 西洋浪始（Spisula solidissima)、暗長毛朦（Crossarchus obscurus)、赤豆（Phaseolus angularis) Λ Lathyrus vestitus、細鱗大麻哈魚（Oncorhynchus gorbuscha)、密西西t匕短 吻鱷（Alligator mississippiensis)、哈列朋松（Pinus halepensis)、海區鳥（Larus canus)、憲菁甘藍（Brassica napus)、麥瓶草（Silene cucubalus)、帶紋海豹（Phoca fasciata)、印度瞪玲（Gazella bennettii)、火炬松（Pinus taeda)、加拿大紅豆杉（Taxus canadensis)、鱗批澤米（Zamia furfuracea)、雲南松（Pinus yunnanensis)、喬松（Pinus wallichiana)、石習桕（Asparagus officinalis)、風鈴辣椒（Capsicum baccatum)、大盆地 刺果松（Pinus longaeva)、菜果紫杉（Taxus baccata)、西伯利亞紅松（Pinus sibirica)、 甜禮（Citrus sinensis)、條紋金鱗魚（Sargocentron xantherythrum)、美洲野牛（Bison bison)、湯姆森瞪玲（Gazella thomsonii)、救荒野豌豆（Vicia sativa)、加拿大黑雁 (Branta canadensis)、序菜(Apium graveolens)、檢皮械(Acer campestre)、完宴 (Coriandrum sativum)、圓維麥瓶草（Silene conica)、萵苣（Lactuca sativa)、黃燈籠辣 椒（Capsicum chinense)、白檜（Abies veitchii)、家山羊（Capra hircus)、斯氏瞪玲 (Gazella spekei)、大麻哈魚（Oncorhynchus keta)、小心葉薯（Ipomoea obscura)、菜瓜 (Cucumis melo var.conomon)、環斑海豹（Phoca hispida)、火狐（Vulpes vulpes)、羽葉鳥 蘿（Ipomoea quamoclit)、多毛番煎（Solanum habrochaites)、楊屬的種（Populus sp·)、 剛松（Pinus rigida)、提琴葉櫟（Quercus lyrata)、多花菜豆（Phaseolus coccineus)、紅 嘴區鳥（Larus ridibundus)、尖吻棘鱗魚（Sargocentron spiniferum)、金槍魚（Thunnus thynnus)、北極狐（Vulpes lagopus)、大額印度野牛（Bos gaurus frontalis)、義大利槭 (Acer opalus)、雞爪械（Acer palmatum)、石櫟（Quercus ilex)、中歐山松（Pinus mugo)、 赤頸鶴（Grus antigone)、山地松（Pinus uncinata)、烏梅（Prunus mume)、大鱗大馬哈魚 (Oncorhynchus tschawytscha)、鵝喉玲（Gazella subgutturosa)、耳廓狐（Vulpes zerda)、大果松（Pinus coulteri)、海島棉（Gossypium barbadense)、歐亞械（Acer pseudoplatanus)、紅大麻哈魚（Oncorhynchus nerka)、須野豬（Sus barbatus)、養麥袓先 亞種（Fagopyrum esculentum subsp.Ancestrale)、朿丨描菜薊（Cynara cardunculus)、綠豆 (Phaseolus aureus)、黑楊（Populus nigra)、施溫迪茫棉（Gossypium schwendimanii)、野 生馬鈴薯（Solanum chacoense)、赤櫟（Quercus rubra)、黃瓜（Cucumis sativus)、普通斑 馬（Equus burchelli)、銀士麻哈魚（Oncorhynchus kisutch)、福射松（Pinus radiata)、 港海豹（Phoca vitulina richardsi)、黑頸鶴（Grus nigricollis)、大冷杉（Abies grandis)、孟蘇大麻哈魚（Oncorhynchus masou)、菠菜（Spinacia oleracea)、智利番煎 (Solanum chilense)、旋角玲（Addax nasomaculatus)、甘薯（Ipomoea batatas)、格列威斑 馬（Equus grevyi)、庫頁冷杉（Abies sachalinensis)、義大利石松（Pinus pinea)、康氏 蹄幅（Hipposideros commersoni)、走莖番紅花（Crocus nudiflorus)、柚（Citrus maxima)、美洲舞（Acipenser transmontanus)、擬似棉（Gossypium gossypioides)、廣香貓 (Viverra zibetha)、西裡櫟（Quercus cerris)、斑頭雁（Anser indicus)、狐尾松（Pinus balfouriana)、黃雪輪（Silene otites)、大麻哈魚屬的種（Oncorhynchus sp.)、大斑靈貓 (Viverra megaspila)、野耗牛（Bos mutus grunniens)、溼地松（Pinus elliottii)、土庫 曼野馬戶（Equus hemionus kulan)、羱羊（Capra ibex ibex)、大蒜（Allium sativum)、蘿蔔 (Raphanus sativus)、萌芽松（Pinus echinata)、野黑樓（Prunus serotina)、白紋觸 (Sargocentron diadema)、匙葉麥瓶草（Silene gallica)、甘藍（Brassica oleracea)、古月 蘿蔔（Daucus carota)、蟲工蹲（Oncorhynchus mykiss)、芥藍（Brassica oleracea var. alboglabra)、陸地棉（Gossypium hirsutum)、歐洲冷杉（Abies alba)、柑桔（Citrus reticulata)、菊苣（Cichorium intybus)、柬埔寨野牛（Bos sauveli)、馬馬它（Lama glama)、玉米（Zea mays)、石菖薄（Acorus gramineus)、赤狐（Vulpes macrotis)、盤羊蒙 古亞種（Ovis ammon darwini)、沙氏石玲（Raphicerus sharpei)、扭葉松（Pinus contorta)、瘤牛（Bos indicus)、西伯利亞北山羊（Capra sibirica)、西黃松（Pinus ponderosa)、苦杏仁（Prunus dulcis)、馬鈴薯（Solanum sogarandinum)、蕹菜（Ipomoea aquatica)、白 _ 斑紋海豚（Lagenorhynchus albirostris)、加拿大盤羊（Ovis canadensis)、歐洲甜樓桃（Prunus avium)、鹿瞪玲（Gazella dama)、長鰭金槍魚（Thunnus alalunga)、白花妮子草（Silene pratensis)、瑞士松（Pinus cembra)、番紅花（Crocus sativus)、西瓜（Citrullus lanatus)、紅額瞪玲（Gazella rufifrons)、亞洲芥（Brassica tournefortii)、擒角山羊（Capra falconeri)、民都洛水牛（Bubalus mindorensis)、長葉 松（Pinus palustris)、月桂樓（Prunus laurocerasus)、白枕鶴（Grus vipio)、牽牛花 (Ipomoea purpurea)、平滑葉松（Pinus leiophylla)、暗色斑紋海豚（Lagenorhynchus obscurus)、小巖玲(Raphicerus campestris)、大白菜(Brassica rapa subsp. Pekinensis)、Acmella radicans、三裂葉薯（Ipomoea triloba)、展葉松（Pinus patula)、 舌甘瓜（Cucumis melo)、矮松(Pinus virginiana)、番煎（Solanum lycopersicum)、赤松 (Pinus densiflora)、大葉松（Pinus engelmannii)、歐洲白櫟（Quercus robur)、刺毛月光 花（Ipomoea setosa)、紅平燕（Pleurotus djamor)、晃蹄幅（Hipposideros diadema)、綿 羊（Ovis aries)、長棘鱗魚（Sargocentron microstoma)、花莖甘藍（Brassica oleracea var.italica)、東高力卩索羱羊（Capra cylindricornis)、雜交白楊（Populus kitakamiensis)、編織蔥(Allium textile)、香豆(Vicia faba)、養麥(Fagopyrum esculentum)、草原野牛(Bison priscus)、栓皮櫟(Quercus suber)、Lagophylla ramosissima、馬達力口斯力口地結(Acrantophis madagascariensis)、西伯利亞魚尋（Acipenser baerii)、樓桃辣椒（Capsicum annuum)、小麥（Triticum aestivum)、爪蟾（Xenopus Iaevis)、西伯利亞海豹（Phoca sibirica)、納氏舞（Acipenser naccarii)、中華稱猴桃 (Actinidia chinensis)、白大角羊（Ovis dalli)、馬鈴薯（Solanum tuberosum)、菲律賓水 牛（Bubalus carabanensis)、粗梓樣（Citrus jambhiri)、歐洲野牛（Bison bonasus)、非 洲野驢（Equus asinus)、低地倭水牛（Bubalus depressicornis)、刺序側耳（Pleurotus eryngii)、矮煎（Solanum demissum)、赤羊（Ovis vignei)、野生玉米（Zea mays subsp. Parviglumis)、丹吉爾山黧豆（Lathyrus tingitanus)、百歲蘭（Welwitschia mirabilis)、 澳洲鶴（Grus rubicunda)、禮紅鳥蘿（Ipomoea coccinea)、洋蔥（Allium cepa)、索曼莫格 齊瞪玲（Gazella soe_erringii)、憲菁（Brassica rapa)、痩馬它（Lama vicugna)、秘魯番 煎（Solanum peruvianum)、北歐爪蟾（Xenopus borealis)、高加索山羊（Capra caucasica)、黃鰭鮪(Thunnus albacares)、山斑馬(Equus zebra)、原雞(Gallus gal Ius)、野生墨西哥土豆（Solanum bulbocastanum)、臺灣葉鼻幅（Hipposideros terasensis)、白腰斑紋海豚（Lagenorhynchus acutus)、河馬（Hippopotamus amphibius)、 紅松（Pinus koraiensis)、蒙皮利埃械（Acer monspessulanum)、三角葉楊（Populus deltoides)、毛果楊（Populus trichocarpa)、俄羅斯舞（Acipenser guldenstadti)、黑松 (Pinus thunbergii)、結球甘藍（Brassica oleracea var.capitata)、柯氏淵杜父魚 (Abyssocottus korotneffi)、居維葉瞪玲（Gazella cuvieri)、日光冷杉（Abies homolepis)、遼東冷杉（Abies holophylla)、山瞪玲（Gazella gazella)、五針松（Pinus parviflora)、習習衣甘藍（Brassica oleracea var. acephala)、西葫蘆（Cucurbita pepo)、 華山松（Pinus armandii)、大白葉冷杉（Abies mariesii)、太平洋黑鮪（Thunnus thynnus orientalis)、溫州蜜柑（Citrus unshiu)、契斯曼尼番煎（Solanum cheesmanii)、太平洋短 吻海豚（Lagenorhynchus obiiquidens)、挪威械（Acer platanoides)、梓樣（Citrus limon)、杜氏納（Acrantophis dumerili)、科民煎(Solanum commersonii)、木本棉 (Gossypium arboreum)、桃（Primus persica)、糖皮側耳（Pleurotus ostreatus)、日本冷 杉（Abies firma)、細角玲（Gazella Ieptoceros)、鹽湖鮭魚（Salmo salar)、美洲海螯蟲下 (Homarus americanus)、紫果冷杉（Abies magnifica)、爪卩圭野牛（Bos javanicus)、環斑海 豹（Phoca Iargha)、捲毛野豬（Sus cebifrons)、煎子（Solanum melongena)、海豹（Phoca vitulina)、歐洲赤松（Pinus sylvestris)、佛州澤米（Zamia floridana)、沙狐（Vulpes corsac)、MM· (Allium porrum)、裏海海豹（Phoca caspica)、南非狐（Vulpes chama)、中 國紅豆杉（Taxus chinensis)、花椰菜（Brassica oleracea var. botrytis)、灰雁（Anser anser anser)、金甲豆（Phaseolus Iunatus)、油菜（Brassica campestris)、糖械（Acer saccharum)、偃松（Pinus pumi la)、潘那利番煎（Solanum pennel Ii i)、可食松（Pinus edulis)、南方牽牛（Ipomoea cordatotriloba)、銀白楊（Populus alba)、克拉克大麻哈魚 (Oncorhynchus clarki)、無梗花櫟（Quercus petraea)、多撫野豬（Sus verrucosus)、野生 蒙古野馬（Equus caballus przewalskii)、胡楊（Populus euphratica)、熱帶爪蟾 (Xenopus tropicalis)、短葉紫杉（Taxus 13代￥丨：[>011&)、原5它（1^111& guanicoe)、北美短葉 松（Pinus banksiana)、龍葵（Solanum nigrum)、印尼野豬（Sus celebensis)、芥菜 (Brassica juncea)、大西洋斑紋海豚（Lagenorhynchus cruciger)、顫楊（Populus tremuloides)、刺針松（Pinus pungens)、西裡伯斯野水牛（Bubalus quarlesi)、Quercus gamelliflora、歐洲盤羊（Ovis orientalis musimon)、印度水牛（Bubalus bubalis)、琉球 松（Pinus Iuchuensis)、菲律賓野豬（Sus philippensis)、菜豆（Phaseolus vulgaris)、 海蹲（Salmo trutta)、波斯舞（Acipenser persicus)、野生種馬鈴薯（Solanum brevidens)、多脂松（Pinus resinosa)、黑馬玲（Hippotragus niger)、努比亞羱羊（Capra nubiana)、Asparagus scaber、方寵轉牽牛（Ipomoea platensis)、野豬（Sus scrofa)、野山羊 (Capra aegagrus)、山黧豆（Lathyrus sativus)、赤鰭棘鱗魚（Sargocentron tiere)、大西 洋庸蝶（Hippoglossus hippoglossus)、美國菖蒲(Acorus americanus)、馬(Equus caballus)、歐洲牛（Bos taurus)、山芥（Barbarea vulgaris)、小羊馬它（Lama guanicoe pacos)、海岸松（Pinus pinaster)、普通章魚（Octopus vulgaris)、星花煎（Solanum crispum)、褐馬玲（Hippotragus equinus)、普通斑馬達馬亞種（Equus burchellii antiquorum)、亞氏長毛朦（Crossarchus alexandri)、月光花（Ipomoea alba)、一粒小麥 (Triticum monococcum)、長葉楊(Populus jackii)、皮氏斑紋海豚（Lagenorhynchus australis)、多卡瞪玲（Gazella dorcas)、胭脂蟲櫟（Quercus coccifera)、雪雁（Anser caerulescens)、白菖蒲（Acorus calamus)、西藏長葉松（Pinus roxburghii)、油松（Pinus tabuliformis)、費切爾澤米（Zamia fischeri)、肉垂鶴（Grus carunculatus)、棘小鼠 (Acomys cahirinus)、網紋甜瓜（Cucumis melo var.reticulatus)、錫蘭野雞（Gallus lafayettei)、豌豆（Pisum sativum)、狹松（Pinus attenuata)、美國沙松（Pinus clausa)、沙特瞪玲（Gazella saudiya)、羱羊（Capra ibex)、三淺裂野牽牛（Ipomoea trifida)、繁茂大當草（Zea luxurians)、越南松（Pinus krempfii)、威氏刺毛鼠 （Acomys wilsoni)、繪葉石蛇床（Petroselinum crispum)、針櫟（Quercus palustris)、提莫菲維小 麥（Triticum timopheevi)、火雞（Meleagris gallopavo)、甘藍（Brassica oleracea)、甘 藍（Brassica oleracea)、舌甘菜（Beta vulgaris)、番煎（Solanum lycopersicum)、菜豆 (Phaseolus vulgaris)、劍魚（Xiphias gladius)、美洲條紋狼魚盧（Morone saxatilis)、大 口 黑魚盧（Micropterus salmoides)、巨扇貝（Placopecten magellanicus)、黍鯡（Sprattus sprattus)、大西洋鯡（Clupea harengus)、歐洲銳（Engraulis encrasicolus)、輿瓜 (Cucurbita maxima)、雙抱子蘑 ? (Agaricus bisporus)、香蕉(Musa acuminata x balbisiana)、蘋果（Malus domestica)、鷹嘴豆（Cicer arietinum)、綠頭鴨（Anas platyrhynchos)、大果酸果蔓（Vaccinium macrocarpum)、北美紅木莓（Rubus idaeus x strigosus)、矮叢藍莓（Vaccinium angustifolium)、草莓（Fragaria ananassa)、歐洲黑莓 (Rubus fruticosus)、舌甘瓜（Cucumis melo)、菠蘿（Ananas comosus)、西葫蘆（Cucurbita pepo)、南瓜(Cucurbita moschata)、家豬(Sus scrofa domesticus)、羅勒(Ocimum basilicum)、迷迭香（Rosmarinus officinalis)、茴香（Foeniculum vulgare)、波葉大黃 (Rheum rhabarbarum)、番木瓜（Carica papaya)、芒果（Mangifera indica)、美味稱猴桃 (Actinidia deliciosa)、杏（Prunus armeniaca)、歐洲甜樓桃（Prunus avium)、椰子 (Cocos nucifera)、油撤攬（Olea europaea)、西洋梨（Pyrus communis)、無花果（Ficus carica)、雞蛋果（Passiflora edulis)、水稻亞種粳稻（Oryza sativa subsp.Japonica)、 秈稻（Oryza sativa subsp. Indica)、鶴 _ (Coturnix coturnix)、釀酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae)0
[0113] 在一些實施方案中，營養性蛋白質包含以下或由以下組成：天然存在於可食用物 質中的蛋白質或蛋白質的片段的衍生物或突變蛋白。所述營養性蛋白質可稱為"工程化營 養性蛋白質"。在所述實施方案中，天然蛋白質或其片段是"參照"蛋白質或多肽且工程化營 養性蛋白質或其第一多肽序列相對於所述參照蛋白質或多肽的胺基酸序列包含至少一個 序列修飾。舉例來說，在一些實施方案中，工程化營養性蛋白質或其第一多肽序列與至少一 個參照營養性蛋白質胺基酸序列至少40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、 85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 99. 5%同源。通常，工程化營養性蛋白質或其第一多肽序列中存在的支鏈胺基酸殘基與總 胺基酸殘基的比率、必需胺基酸殘基與總胺基酸殘基的比率、以及亮氨酸殘基與總胺基酸 殘基的比率的至少一者大於參照營養性蛋白質或多肽序列中存在的支鏈胺基酸殘基與總 胺基酸殘基的相應比率、必需胺基酸殘基與總胺基酸殘基的相應比率、以及亮氨酸殘基與 總胺基酸殘基的相應比率的至少一者。
[0114] 在一些實施方案中，營養性蛋白質是食物中的豐富蛋白質或其衍生物或突變蛋 白，或是食物中的豐富蛋白質或其衍生物或突變蛋白的片段。豐富蛋白質是相對於食物中 存在的其它蛋白質，以較高濃度存在於所述食物中的蛋白質。食物可為處於有限地理位置 的僅一小組某一類型的哺乳動物的膳食的已知組分，或為遍及世界上大部分區域的膳食主 要成分。在一些實施方案中，食物中的豐富蛋白質選自雞蛋蛋白質，如卵清蛋白、卵鐵傳遞 蛋白和卵類粘蛋白；肉蛋白質，如肌球蛋白、肌動蛋白、原肌凝蛋白、I父原蛋白和肌f丐蛋白； 穀類蛋白質，如酪蛋白、a 1酪蛋白、α 2酪蛋白、β酪蛋白、K酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳 白蛋白、大豆球蛋白、β -伴大豆球蛋白、谷蛋白、谷醇溶蛋白、麥醇溶蛋白、麥谷蛋白、白蛋 白、球蛋白；雞肌肉蛋白質，如白蛋白、烯醇酶、肌酸激酶、磷酸甘油酸變位酶、磷酸丙糖異 構酶、載脂蛋白、卵鐵傳遞蛋白、葡糖磷酸變位酶、磷酸甘油酸激酶、甘油-3-磷酸脫氫酶、 3_磷酸甘油醛脫氫酶、血紅素、絲切蛋白、糖原磷酸化酶、果糖-1，6-二磷酸酶、肌動蛋白、 肌球蛋白、原肌球蛋白a鏈、酪蛋白激酶、糖原磷酸化酶、果糖-1，6-二磷酸酶、醛縮酶、微 管蛋白、波形蛋白、內質蛋白（endoplasmin)、乳酸脫氫酶、肌動蛋白解聚因子（destrin)、 轉甲狀腺素蛋白、雙磷酸果糖醛縮酶、碳酸酐酶、醛脫氫酶、膜聯蛋白、腺苷高半胱氨酸酶 (adenosyl homocysteinase);豬肉肌肉蛋白質，如肌動蛋白、肌球蛋白、烯醇酶、肌聯蛋白 (titin)、絲切蛋白、磷酸甘油酸激酶、烯醇酶、丙酮酸脫氫酶、糖原磷酸化酶、磷酸丙糖異構 酶、肌激酶；和魚蛋白質，如小白蛋白、丙酮酸脫氫酶、肌間線蛋白（desmin)和磷酸丙糖異 構酶。
[0115] 通常被認為是高品質胺基酸的良好來源的三種蛋白質天然來源是乳清蛋白質、蛋 蛋白質和大豆蛋白質。各來源包含多種蛋白質。表1呈現各胺基酸在蛋白質來源中的表示 為百分比的重量比例表示（g AA/g蛋白質）。
[0116] 表 1
[0117]
【權利要求】
1. 一種包含第一多膚序列的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列在抑7下 具有水溶解度為至少12. 5g/L。
2. 如權利要求1所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列在抑7下具有水 溶解度為至少50g/L。
3. 如權利要求1所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列在抑7下具有水 溶解度為至少lOOg/L。
4. 如權利要求1至3中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列包 含： a. 支鏈胺基酸殘基與總胺基酸殘基的比率為至少8% ; b. Leu殘基與總胺基酸殘基的比率為至少4% ;和 C.必需胺基酸殘基與總胺基酸殘基的比率為至少19%。
5. 如權利要求4所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列進一步包含各必 需胺基酸的至少一者。
6. 如權利要求1至5中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列包 含W下至少一者： a. 支鏈胺基酸殘基與總胺基酸殘基的比率為至少24% ; b. Leu殘基與總胺基酸殘基的比率為至少11% ;和 C.必需胺基酸殘基與總胺基酸殘基的比率為至少49%。
7. 如權利要求1至6中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列包 含與天然存在的營養性蛋白質的至少50個胺基酸的至少70%同源性。
8. 如權利要求1至6中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列包 含與天然存在的營養性蛋白質的至少50個胺基酸的至少95%同源性。
9. 如權利要求1至6中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列包 含與天然存在的營養性蛋白質的至少70%同源性。
10. 如權利要求1至6中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列包 含與天然存在的營養性蛋白質的至少95%同源性。
11. 如權利要求1至10中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列 由天然存在的營養性蛋白質組成。
12. 如權利要求1至10中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列 不是天然存在的營養性蛋白質。
13. 如權利要求1至12中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列 不是過敏原。
14. 如權利要求13所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列與已知過敏原 具有小於50%整體同源性。
15. 如權利要求1至14中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列 不是毒素。
16. 如權利要求15所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列與已知毒素具 有小於50 %整體同源性。
17. 如權利要求1至16中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列 具有模擬胃消化半衰期為小於60分鐘。
18. 如權利要求17所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列具有模擬胃消 化半衰期為小於30分鐘。
19. 如權利要求18所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列具有模擬胃消 化半衰期為小於10分鐘。
20. 如權利要求1至19中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列 在模擬胃液中完全消化。
21. 如權利要求1至20中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列 包含至少一個選自胃蛋白酶識別位點、膜蛋白酶識別位點和膜凝乳蛋白酶識別位點的蛋白 酶識別位點。
22. 如權利要求1至21中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列 不包含半脫氨酸殘基。
23. 如權利要求1至22中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列 不包含二硫鍵。
24. 如權利要求1至23中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列 不包含N連接的糖基化。
25. 如權利要求1至24中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列 不包含0連接的糖基化。
26. 如權利要求1至25中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列 對聚集具有抗性。
27. 如權利要求1至26中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列 在抑7下是陰離子型的。
28. 如權利要求1至27中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列 具有計算溶合計分為-20或更低。
29. 如權利要求28所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列具有計算溶合 計分為-30或更低。
30. 如權利要求1至29中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列 具有計算聚集計分為0. 75或更低。
31. 如權利要求30所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列具有計算聚集 計分為0.5或更低。
32. 如權利要求31所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列具有計算聚集 計分為0.3或更低。
33. 如權利要求1至32中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列 包含選自W下的胺基酸序列： i. 選自SEQ ID NO:l至SEQ ID N0:490的胺基酸序列； ii. 選自SEQ ID NO:l至SEQ ID N0:490的胺基酸序列的修飾的衍生物；和 iii. 選自SEQ ID NO:l至SEQ ID N0:490的胺基酸序列的突變蛋白。
34. 如權利要求1至33中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列 由選自W下的胺基酸序列組成： i. 選自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的胺基酸序列， ii. 選自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的胺基酸序列的修飾的衍生物，和 iii. 選自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的胺基酸序列的突變蛋白。
35. 如權利要求1至34中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述第一多膚序列 與至少一個選自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的參照胺基酸序列至少40%、45%、50%、 55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%、99% 或 99. 5% 同源。
36. -種包含第一多膚序列的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性蛋白質在 pH 7下具有水溶解度為至少12. 5g/L。
37. 如權利要求36所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性蛋白質在抑7 下具有水溶解度為至少50g/L。
38. 如權利要求37所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性蛋白質在抑7 下具有水溶解度為至少lOOg/L。
39. 如權利要求36至38中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質包含： a. 支鏈胺基酸殘基與總胺基酸殘基的比率為至少8% ; b. Leu殘基與總胺基酸殘基的比率為至少4% ;和 C.必需胺基酸殘基與總胺基酸殘基的比率為至少19%。
40. 如權利要求39所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性蛋白質進一步 包含各必需胺基酸的至少一者。
41. 如權利要求36至40中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質包含W下至少一者： a. 支鏈胺基酸殘基與總胺基酸殘基的比率為至少24% ; b. Leu殘基與總胺基酸殘基的比率為至少11% ;和 C.必需胺基酸殘基與總胺基酸殘基的比率為至少49%。
42. 如權利要求36至41中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質包含與天然存在的營養性蛋白質的至少50個胺基酸的至少70%同源性。
43. 如權利要求36至41中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質包含與天然存在的營養性蛋白質的至少50個胺基酸的至少95%同源性。
44. 如權利要求36至41中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質包含與天然存在的營養性蛋白質的至少70%同源性。
45. 如權利要求36至41中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質包含與天然存在的營養性蛋白質的至少95%同源性。
46. 如權利要求36至41中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質由天然存在的營養性蛋白質組成。
47. 如權利要求36至41中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質不是天然存在的營養性蛋白質。
48. 如權利要求36至47中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質不是過敏原。
49. 如權利要求48所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性蛋白質與已知 過敏原具有小於50%整體同源性。
50. 如權利要求36至49中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質不是毒素。
51. 如權利要求50所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性蛋白質與已知 毒素具有小於50%整體同源性。
52. 如權利要求36至51中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述營養性蛋白質 具有模擬胃消化半衰期為小於60分鐘。
53. 如權利要求52所述的分離的營養性蛋白質，其中所述營養性蛋白質具有模擬胃消 化半衰期為小於30分鐘。
54. 如權利要求53所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性蛋白質具有模 擬胃消化半衰期為小於10分鐘。
55. 如權利要求36至54中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質在模擬胃液中完全消化。
56. 如權利要求36至55中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質包含至少一個選自胃蛋白酶識別位點、膜蛋白酶識別位點和膜凝乳蛋白酶識別位點 的蛋白酶識別位點。
57. 如權利要求36至56中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質不包含半脫氨酸殘基。
58. 如權利要求36至57中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質不包含-硫鍵。
59. 如權利要求36至58中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質不包含N連接的糖基化。
60. 如權利要求36至59中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質不包含0連接的糖基化。
61. 如權利要求36至60中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質對聚集具有抗性。
62. 如權利要求36至61中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質在抑7下是陰離子型的。
63. 如權利要求36至62中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質具有計算溶合計分為-20或更低。
64. 如權利要求63所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性蛋白質具有計 算溶合計分為-30或更低。
65. 如權利要求36至64中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質具有計算聚集計分為0. 75或更低。
66. 如權利要求65所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性蛋白質具有計 算聚集計分為0.5或更低。
67. 如權利要求66所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性蛋白質具有計 算聚集計分為0.3或更低。
68. 如權利要求36至67中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質包含選自W下的胺基酸序列： i. 選自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的胺基酸序列； ii. 選自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的胺基酸序列的修飾的衍生物；和 iii. 選自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的胺基酸序列的突變蛋白。
69. 如權利要求36至68中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質由選自W下的胺基酸序列組成： i. 選自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的胺基酸序列， ii. 選自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的胺基酸序列的修飾的衍生物，和 iii. 選自SEQ ID NO: 1至SEQ ID NO:490的胺基酸序列的突變蛋白。
70. 如權利要求36至69中任一項所述的分離的營養性蛋白質，其中所述分離的營養性 蛋白質與至少一個選自SEQ ID N0:1至SEQ ID N0:490的參照胺基酸序列至少40%、45%、 50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、 93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或99.5%同源。
71. 如權利要求1至10、12至33、35至45、47至68和70中任一項所述的分離的營養 性蛋白質，其中所述分離的營養性蛋白質進一步包含用於親和純化的多膚標籤。
72. 如權利要求71所述的分離的營養性蛋白質，其中用於親和純化的所述標籤是聚組 氨酸標籤。
73. -種分離的核酸，其包含編碼如權利要求1至72中任一項所述的營養性蛋白質的 核酸序列。
74. 如權利要求73所述的分離的核酸，其中所述分離的核酸選自基因組DNA、cDNA、正 義RNA和反義RNA。
75. 如權利要求74所述的分離的核酸，其中所述分離的核酸是基因組DNA。
76. 如權利要求74所述的分離的核酸，其中所述分離的核酸是cDNA。
77. 如權利要求73至76中任一項所述的分離的核酸，其進一步包含可操作地連接於編 碼所述營養性蛋白質的所述核酸序列的表達控制序列。
78. -種載體，其包含編碼如權利要求1至72中任一項所述的營養性蛋白質的核酸序 列。
79. 如權利要求78所述的載體，其進一步包含可操作地連接於編碼所述營養性蛋白質 的所述核酸序列的表達控制序列。
80. -種重組微生物，其包含如權利要求73至77中任一項所述的核酸和如權利要求 78和79中任一項所述的載體的至少一者。
81. 如權利要求80所述的重組微生物，其中所述重組微生物是原核生物。
82. 如權利要求81所述的重組原核生物，其中所述原核生物是異養性的。
83. 如權利要求81所述的重組原核生物，其中所述原核生物是自養性的。
84. 如權利要求81所述的重組原核生物，其中所述原核生物是細菌。
85. -種製備如權利要求1至72中任一項所述的營養性蛋白質的方法，所述方法包括 在足W由如權利要求80至84中任一項所述的重組微生物產生所述營養性蛋白質的條件下 培養所述重組微生物。
86. 如權利要求85所述的方法，其進一步包括自所述培養物分離所述營養性蛋白質。
87. -種營養性組合物，其包含如權利要求1至72中任一項所述的分離的營養性蛋白 質和至少一種第二組分。
88. 如權利要求87所述的營養性組合物，其中所述至少一種第二組分選自蛋白質、多 膚、膚、游離胺基酸、碳水化合物、脂質、礦物質或礦物質來源、維生素、補充劑、生物體、醫藥 和賦形劑。
89. 如權利要求88所述的營養性組合物，其中所述至少一種第二組分是蛋白質。
90. 如權利要求89所述的營養性組合物，其中所述至少一種第二組分是營養性蛋白 質。
91. 如權利要求88所述的營養性組合物，其中所述至少一種第二組分是選自必需氨基 酸、非必需胺基酸、支鏈胺基酸、非標準胺基酸和修飾的胺基酸的游離胺基酸。
92. 如權利要求91所述的營養性組合物，其中所述至少一種第二組分是選自必需氨基 酸的游離胺基酸。
93. 如權利要求91所述的營養性組合物，其中所述至少一種第二組分是選自支鏈氨基 酸的游離胺基酸。
94. 如權利要求91所述的營養性組合物，其中所述至少一種第二組分是Leu。
95. 如權利要求88所述的營養性組合物，其中所述至少一種第二組分是脂質。
96. 如權利要求95所述的營養性組合物，其中所述脂質選自脂肪、油、甘油H醋、膽固 醇、磯脂和脂肪酸。
97. 如權利要求88所述的營養性組合物，其中所述至少一種第二組分選自礦物質和維 生素。
98. 如權利要求88所述的營養性組合物，其中所述至少一種第二組分是補充劑。
99. 如權利要求88所述的營養性組合物，其中所述至少一種第二組分是生物體。
100. 如權利要求88所述的營養性組合物，其中所述至少一種第二組分是醫藥。
101. 如權利要求88所述的營養性組合物，其中所述至少一種第二組分是賦形劑。
102. 如權利要求101所述的營養性組合物，其中所述至少一種賦形劑選自緩衝劑、防 腐劑、穩定劑、粘合劑、壓實劑、潤滑劑、分散增強劑、崩解劑、調味劑、甜味劑、著色劑。
103. 如權利要求87至102中任一項所述的營養性組合物，其中所述營養性組合物被配 製成液體溶液、漿液、混息液、凝膠劑、糊劑、粉末或固體。
104. -種製備如權利要求87至103中任一項所述的營養性組合物的方法，其包括提供 如權利要求1至72中任一項所述的營養性蛋白質W及組合所述營養性蛋白質與所述至少 一種第二組分。
105. -種維持或增加受試者的肌肉質量、肌肉強度和功能性表現的至少一者的方法， 所述方法包括向所述受試者提供足量的如權利要求1至72中任一項所述的營養性蛋白質、 如權利要求87至103中任一項所述的營養性組合物或通過如權利要求104所述的方法制 備的營養性組合物。
106. -種維持或達成受試者的合乎需要的身體質量指數的方法，所述方法包括向所述 受試者提供足量的如權利要求1至72中任一項所述的營養性蛋白質、如權利要求87至103 中任一項所述的營養性組合物或通過如權利要求104所述的方法製備的營養性組合物。
107. 如權利要求105或106所述的方法，其中所述受試者處於W下至少一種狀態下： 年長、患有醫學上危急疾病、W及罹患蛋白質-能量營養不良症。
108. -種向患有蛋白質-能量營養不良症的受試者提供蛋白質的方法，所述方法包括 向所述受試者提供足量的如權利要求1至72中任一項所述的營養性蛋白質、如權利要求87 至103中任一項所述的營養性組合物或通過如權利要求104所述的方法製備的營養性組合 物。
109. -種增加受試者的產熱的方法，所述方法包括向所述受試者提供足量的如權利要 求1至72中任一項所述的營養性蛋白質、如權利要求87至103中任一項所述的營養性組 合物或通過如權利要求104所述的方法製備的營養性組合物。
110. -種誘導受試者的飽足反應和飽腹感反應的至少一者的方法，所述方法包括向所 述受試者提供足量的如權利要求1至72中任一項所述的營養性蛋白質、如權利要求87至 103中任一項所述的營養性組合物或通過如權利要求104所述的方法製備的營養性組合 物。
111. 如權利要求109或110所述的方法，其中所述受試者是服胖的。
112. 如權利要求105至111中任一項所述的方法，其中如權利要求1至72中任一項所 述的營養性蛋白質、如權利要求87至103中任一項所述的營養性組合物或通過如權利要求 104所述的方法製備的營養性組合物是由所述受試者與進行運動配合加W消耗。
113. -種治療受試者的惡病質、肌肉減少症和虛弱的至少一者的方法，所述方法包括 向所述受試者提供足量的如權利要求1至72中任一項所述的營養性蛋白質、如權利要求87 至103中任一項所述的營養性組合物或通過如權利要求104所述的方法製備的營養性組合 物。
114. 如權利要求105至113中任一項所述的方法，其中如權利要求1至72中任一項所 述的營養性蛋白質、如權利要求87至103中任一項所述的營養性組合物或通過如權利要求 104所述的方法製備的營養性組合物是由所述受試者通過經口、腸或胃腸外途徑加W消耗。
【文檔編號】C07K14/435GK104470946SQ201380027476
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2013年3月15日 優先權日:2012年3月26日
【發明者】D·A·貝利, B·A·伯希吉安, N·W·希爾弗, G·馮馬爾特扎恩, R·奇拉庫魯, M·J·哈米爾 申請人:普羅努塔利亞公司