用於治療與masp-2依賴性補體活化相關的狀況的方法

2023-06-26 19:39:01 2

用於治療與masp-2依賴性補體活化相關的狀況的方法
【專利摘要】在一個方面，本發明提供了在有生命受試者中抑制MASP-2依賴性補體活化的影響的方法。本發明包括將有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑施用於需要其的受試者的步驟。在一些實施方案中，MASP-2抑制劑抑制與MASP-2介導的替代補體途徑活化相關的細胞損傷，而使免疫系統的經典(C1q依賴性)途徑組分保持完整。在另一個方面，本發明提供了用於抑制凝集素依賴性補體活化的影響的組合物，所述組合物包含治療有效量的MASP-2抑制劑和藥學可接受的載體。
【專利說明】用於治療與MASP-2依賴性補體活化相關的狀況的方法
[0001]相關申請的交叉引用
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[0002]關於序列表的聲明
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[0003]發明背景
補體系統為在人和其他脊椎動物中啟動、增強和協調對微生物感染和其他急性損傷的免疫應答提供了早期的作用機制(M.K.Liszewski和J.P.Atkinson, 1993，inFundamental Immunology,第三版，W.E.Paul 編輯，Raven Press, Ltd., New York)。儘管補體活化提供了重要的針對潛在病原體的第一線防禦，但是促進保護性免疫應答的補體活性也可以表現出對宿主的潛在威脅(K.R.Kalli,等人，Springer Semin.1mmunopathol./5":417_431， 1994; B.P.Morgan, Eur.J.Clinical Invest!g.匆:219-228, 1994)。例如，C3和C5蛋白水解產物募集並活化嗜中性粒細胞。儘管對宿主防禦不可缺少，但是活化的中性粒細胞不加選擇地釋放破壞性酶，可能造成器官損傷。此外，補體活化可能導致溶胞的補體組分沉積在附近的宿主細胞以及微生物靶上，導致宿主細胞裂解。
[0004]補體系統也已經被牽連進許多急性和慢性疾病狀況的發病機制，所述疾病包括:心肌梗死、中風、ARDS、再灌注損傷、敗血症性休克、熱燒傷之後的毛細血管滲漏、心肺分流術後炎症、移植排斥、類風溼性關節炎、多發性硬化、重症肌無力和阿爾茨海默氏病。在幾乎所有的這些疾病中，補體都不是病因，而是發病機制所涉及的若干因素之一。儘管如此，補體活化可能是重要的病理機制，並在許多這類疾病狀況的臨床控制中表現出有效之處。對各種疾病狀況中補體介導的組織損傷的重要性的增加的認識增強了對有效補體抑制藥物的需求。迄今為止，依庫麗單抗(Solaris?),針對C5的抗體,是已被批准用於人使用的唯一補體-靶向藥物。然而，C5是位於補體系統「下遊」的幾個效應分子之一，並且C5的阻斷不抑制補體系統的活化。因此，補體激活的起始步驟的抑制劑相對於「下遊」補體抑制劑具有顯著優勢 。
[0005]目前，普遍認為補體系統可通過三種不同的途徑被活化:經典途徑、凝集素途徑和替代途徑。經典途徑通常是由宿主抗體與外源顆粒(即抗原)相結合構成的複合物觸發的，因此需要預先暴露於該抗原來產生特異性抗體應答。因為經典途徑的活化取決於宿主的先前的適應性免疫應答，所以經典途徑是獲得性免疫系統的一部分。相反，凝集素途徑和替代途徑兩者不依賴於適應性免疫(adaptive immunity),是先天性免疫系統的一部分。
[0006]補體系統的活化導致了絲氨酸蛋白酶酶原的序貫活化。經典途徑活化的第一步是特異性識別分子Clq與結合了抗原的IgG和IgM分子結合。Clq與Clr和Cls絲氨酸蛋白酶酶原結合成稱為Cl的複合物。當Clq與免疫複合物結合之後，Clr的Arg-1le位點進行自我蛋白水解裂解，接著是Clr介導的裂解和Cls的活化，從而獲得裂解C4和C2的能力。C4裂解成兩個片段，稱為C4a和C4b，且類似地，C2裂解成C2a和C2b。C4b片段能夠與鄰近的羥基或氨基形成共價鍵，且通過與活化C2的C2a片段進行非共價相互作用而產生C3轉化酶(C4b2a)。C3轉化酶(C4b2a)通過蛋白水解裂解成C3a和C3b亞組分而活化C3，導致生成C5轉化酶(C4b2a3b)，所述C5轉化酶(C4b2a3b)通過裂解C5而導致形成膜攻擊複合物(C5b與C6、C7、C8和C-9組合，也稱為「MAC」)，所述膜攻擊複合物可以破壞細胞膜，導致細胞裂解。C3和C4的活化形式(C3b和C4b)共價沉積在外源靶表面上，其被多種吞噬細胞上的補體受體所識別。
[0007]獨立地，補體系統通過凝集素途徑活化的第一步也是特異性識別分子的結合，接著是所結合的絲氨酸蛋白酶酶原的活化。然而，凝集素途徑中的識別分子包含一組碳水化合物結合蛋白(甘露聚糖結合凝集素(MBL)、H-纖維膠凝蛋白(H-ficolin)、M-纖維膠凝蛋白、L-纖維膠凝蛋白和C型凝集素CL-1 I)(統稱為凝集素)，而不是通過Clq來結合免疫複合物。參見 J.等}Biochim.Biophys.Acta 757J?:387-400，(2002) ; Holmskov等人，Annu.Rev.1mmunol.21:547-578 (2003) ; Teh 等人，Immunology 101:225-232(2000))。還參見 J.Luet等人，Biochim Biophys Acta 1572:387-400 (2002) ; Holmskov等人，Annu Rev Immunol 21:547-578 (2003) ; Teh 等人，Immunology 101:225-232(2000); Hansen 等人，J.1mmunol 185(10):6096-6104 (2010)。
[0008]Ikeda等人首先證明，與Clq類似，MBL在與酵母甘露聚糖包被的紅細胞結合之後能夠以C4依賴的方式使補體系統活化(Ikeda等人，J.Biol.Chem.^:7451-7454,(1987))。MBL是膠原凝集素蛋白家族的成員，是鈣依賴性凝集素，與具有定位於吡喃糖環赤道面上的3-羥基和4-羥基的碳水化合物結合。因此MBL的重要配體是D-甘露糖和N-乙醯-D-葡糖胺，而不符合這種空間要求的碳水化合物則對MBL沒有可檢出的親和力(Weis等人，Nature 360:127-134, (1992))。MBL和單價糖之間的相互作用是極弱的，解離常數通常在單位數毫摩爾(single-digit millimolar)的範圍內。MBL通過親合力(即通過同時與彼此緊密鄰近定位的多個單糖殘基相互作用)實現了與聚糖配體的緊密特異性結合(Lee 等人，Archiv.Biochem.Biophys.299:129-136，(1992))。MBL 識別通常修飾微生物諸如細菌、酵母、寄生蟲和某些病毒的碳水化合物模式。相反，MBL不識別D-半乳糖和唾液酸，即倒數第二位的糖和倒數第一位的糖，它們一般修飾哺乳動物血漿和細胞表面糖蛋白上存在的「成熟」複雜糖綴合物。認為這種結合特異性促進「外源」表面的識別且有助於保護免於「自身活化」。然而，MBL確實以高親和力結合高甘露糖「前體」聚糖簇，這些簇位於被隔離在哺乳動物細胞內質網和高爾基體內的N-連接的糖蛋白和糖脂上(Maynard等人，7； Biol.Chem.257:3788-3794，1982)。因此，受損細胞是通過MBL結合的凝集素途徑活化的潛在目標。
[0009]纖維膠凝蛋白(ficolin)具有類型不同於MBL的凝集素結構域，稱為血纖蛋白原樣結構域。纖維膠凝蛋白以不依賴Ca++的方式來結合糖殘基。在人體中，已經鑑定出纖維膠凝蛋白的三種類型(L-纖維膠凝蛋白、M-纖維膠凝蛋白和H-纖維膠凝蛋白)。L-纖維膠凝蛋白和H-纖維膠凝蛋白這兩種血清纖維膠凝蛋白共同對N-乙醯-D-葡糖胺具有特異性；然而，H-纖維膠凝蛋白還結合N-乙醯-D-半乳糖胺。L-纖維膠凝蛋白、H-纖維膠凝蛋白、CL-1l和MBL的糖特異性的差異意味著不同的凝集素可能是互補的，儘管有重疊，但是可能靶向不同的糖綴合物。這個觀點得到了最新報導的支持，即在凝集素途徑的已知凝集素中，只有L-纖維膠凝蛋白與脂磷壁酸特異性結合，脂磷壁酸是一種存在於所有革蘭氏陽性菌上的細胞壁糖綴合物(Lynch等人，J Immunol.77J?: 1198-1202, (2004))。膠原凝集素(即MBL)和纖維膠凝蛋白在胺基酸序列上沒有顯著的相似性。然而，兩組蛋白質具有類似的結構域組構，與Clq類似，裝配成寡聚結構，這樣就使得多位點結合的可能性最大化。
[0010]MBL的血清濃度在健康人群中是高度可變的，這在遺傳上是由MBL基因的啟動子和編碼區二者的多態性/突變所控制的。作為急性期蛋白，MBL的表達在炎症期間進一步上調。L-纖維膠凝蛋白在血清中存在的濃度與MBL的濃度類似。因此，凝集素途徑的L-纖維膠凝蛋白分支在力量上可能與MBL臂相當。MBL和纖維膠凝蛋白也可能作為調理素起作用，這允許吞曬細胞祀向至MBL和纖維膠凝蛋白裝飾的表面(參見Jack等人，J LeukocBiol., 77 (3):328-36 (2004), Matsushita和Fujita, Immunobiology, 205 (4-5):490-7(2002), Aoyagi 等人，J Immunol，174 (I): 418-25 (2005)。這種調理素作用需要這些蛋白質與吞卩遼細胞受體相互作用(Kuhlman等人，J.Exp.Med.169\ 1733, (1989);Matsushita 等人，J.Biol.Chem.271:2448-54, (1996))，其身份還未得到確定。
[0011]人MBL通過其膠原樣結構域與獨特的Clr/Cls樣絲氨酸蛋白酶(稱為MBL相關的絲氨酸蛋白酶(MBL-associated serine proteases, MASP))形成特異性、高親和力的相互作用。迄今為止已經描述了三種MASP。首先，鑑定出單一的酶「MASP」，其特徵是負責啟動補體級聯(即裂解 C2 和 C4)的酶(Matsushita 等人，J Exp Med 176(6): 1497-1502(1992) ; Ji 等人，J.1mmunol.7^:571-578, (1993))。隨後確定 MASP 活性，實際上是兩種蛋白酶 MASP-1 和 MASP-2 的混合物(Thiel 等人，Nature J浙:506-510, (1997))。然而，有研究表明僅MBL-MASP-2複合物就足以使補體活化(Vorup-Jensen等人，7；Immunol.165\ 2093-2100, (2000))。此外，只有 MASP-2 快速裂解 C2 和 C4 (Ambrus 等人，J.1mmunol.7沿:1374-1382，(2003))。因此，MASP-2 是負責激活 C4 和 C2 以產生 C3 轉化酶C4b2a的蛋白酶。這是不同於經典途徑的Cl複合物的顯著差異，Cl複合物中兩種特異性絲氨酸蛋白酶(Clr和Cls)協同作用導致了補體系統的活化。此外，已經分離出第三種新的蛋白酶 MASP-3 (Dahl, Μ.R.，等人，Immunity 152001)。MASP-1 和 MASP-3是同一基因的可變剪接產物。
[0012]MASP與Cl複合物的酶成分Clr和Cls的那些共享相同的結構域組構(Sim等人，Biochem.Soc.Trans.28:545，2000)。這些結構域包括 N 末端 Clr/Cls/ 海膽 VEGF/ 骨形成蛋白(CUB)結構域、表皮生長因子樣結構域、第二 CUB結構域、補體調控蛋白結構域的串聯和絲氨酸蛋白酶結構域。與在Cl蛋白酶中一樣，MASP-2的活化通過絲氨酸蛋白酶結構域附近的Arg-1le鍵裂解而產生，這將酶分成二硫鍵連接的A鏈和B鏈，後者由絲氨酸蛋白酶結構域構成。
[0013]MBL還可以與MASP-2的可變切片形式(被稱作19 kDa的MBL相關蛋白(MApl9)或小MBL相關蛋白(sMAP),其缺乏MASP2的催化活性)結合。(Stover, J.1mmunol.7似:3481-90, (1999) ; Takahashi 等人，Int.1mmunol.77:859-863，(1999))。MApl9包括MASP-2的前兩個結構域，其後接著是4個獨特胺基酸的額外序列。Mapl9的功能不明確(Degn 等人，J Immunol.Methods, 2011)。MASP-1 和 MASP-2 基因分別位於人 3 號染色體和 I 號染色體上(Schwaeble 等人，Immunobiology 455-466, (2002))。
[0014]若干證據表明存在不同的MBL-MASP複合物，且血清中MASP的大部分不與MBL複合(Thiel,等人，J Immunol.165:878-887, (2000))。H-纖維膠凝蛋白和L-纖維膠凝蛋白都與所有的MASP結合,並且激活凝集素補體途徑，同MBL —樣(Dahl等人，Immunity75-: 127-35, (2001) ; Matsushita 等人，7； Immunol.7你:3502-3506，(2002))。凝集素途徑和經典途徑都形成共同的C3轉化酶(C4b2a)，這兩條途徑在這一步會合。
[0015]普遍認為在天然宿主中，凝集素途徑在宿主抵抗感染的防禦中具有重要作用。MBL參與宿主防禦的強有力證據來自於對功能性MBL血清水平降低的患者的分析(Kilpatrick, Biochim.Biophys.Actal572\AQ\-Al?>, (2002))。這些患者表現出復發性細菌和真菌感染的易感性。這些症狀通常在生命早期在易損表觀窗期間是明顯的，因為從母體獲得的抗體效價降低，但處於全部抗體應答發展之前。這種症狀經常是由於MBL膠原部分的數個位點突變引起的，其幹擾了 MBL寡聚體的正確形成。然而，由於MBL可以作為不依賴於補體的調理素起作用，所以還不知道對感染的易感性增加在多大程度上是由於受損的補體活化所致。
[0016]與經典途徑和凝集素途徑相反，沒有發現替代途徑中完成識別功能的起始因子(initiator)，而在其他兩種途徑中是Clq和凝集素來完成識別功能的。目前普遍接受的是，替代途逕自發經歷低水平轉換活化(turnover activation),其可以在缺乏使自發補體活化保持受檢查的正確分子元件的外來表面或其他異常表面(細菌、酵母、病毒感染細胞或者受損組織)上容易地擴增。有四種血漿蛋白直接參與了替代途徑的活化:C3、因子B和因子D以及備解素。
[0017]儘管大量證據表明 在非感染性人類疾病的發病機制中，經典補體途徑和替代補體途徑兩者都存在，但是對凝集素途徑作用的評價才剛剛開始。最新研究提供的證據表明，凝集素途徑的活化可能是造成缺血/再灌注損傷中補體活化和相關炎症的原因。Collard等人(2000)報告受到氧化應激的培養的內皮細胞結合MBL，且在暴露於人血清之後顯示出C3沉積(Collard 等人，Am.J.Pathol.7紐:1549-1556，(2000))。此外，用阻斷性抗 MBL單克隆抗體處理人血清抑制了 MBL結合和補體活化。將這些發現擴展到心肌缺血-再灌注大鼠模型上，其中比起用對照抗體處理的大鼠，用針對大鼠MBL的阻斷性抗體處理的大鼠在冠狀動脈閉塞之後顯示心肌損傷顯著較輕(Jordan等人，Circulation 104\ 1413-1418,
(2001))。尚不清楚氧化應激後MBL與血管內皮結合的分子機制；最近的研究表明，氧化應激後凝集素途徑的活化可能是由MBL與血管內皮細胞角蛋白結合而介導的，而不是與糖綴合物結合結合而介導的(Collard等人，Am.J.Pathol.7砂:1045-1054，(2001))。其他研究已顯示出缺血/再灌注損傷發病機制中的經典途徑和替代途徑以及凝集素途徑在這種疾病中的作用仍然存在爭議(Riedermann, N.C.，等人，Am.J.Pathol.162\363-367,
2003)。
[0018]一項新近的研究已經顯示，MASP-1 (可能還有MASP-3)對於將替代途徑活化酶因子D從其酶原形式轉換為其酶促活性形式是需要的(參見Takahashi M.等人，J Exp Med207(1):29-37 (2010))。該過程的生理重要性通過在MASP-1/3-缺陷小鼠的血漿中不存在替代途徑功能活性而得到強調。對於替代途徑發揮作用，需要由天然C3蛋白水解形成C3b。由於替代途徑C3轉化酶(C3bBb)含有C3b作為必需亞基，關於通過替代途徑的第一個C3b來源的問題代表了令人困擾的問題，且促使了相當多的研究工作。
[0019]C3屬於含有極少的被稱為硫酯鍵的翻譯後修飾的蛋白質家族(還有C4和α -2巨球蛋白)。硫酯基團由形成共價硫脂連接的穀氨醯胺的末端羰基與三個胺基酸距離的半胱氨酸的巰基所形成。該鍵是不穩定的，並且親電穀氨醯基-硫酯可以與親核部分諸如羥基或氨基反應，從而與其他分子形成共價鍵。當被隔離在完整C3的疏水口袋內部時，硫酯鍵是相當穩定的。然而，C3被蛋白水解裂解成C3a和C3b，導致C3b上高反應性的硫酯鍵暴露出來，並且，在包含羥基或氨基的鄰近部分的親核攻擊後，C3b變得與目標共價連接。除了有大量文件證明C3b與補體靶共價結合的作用外，還有研究認為C3硫酯具有觸發替代途徑的關鍵作用。根據普遍接受的「慢轉理論(tick-over theory)」，替代途徑是由液相轉化酶iC3Bb的形成所啟動的，iC3Bb是由C3與水解硫酯(iC3; C3 (H2O))和因子B形成的(Lachmann, P.J.,等人，Springer Semin.1mmunopa thol.7:143-162, (1984))。C3b樣C3由天然C3經蛋白質中內部硫酯的緩慢自發水解而產生(Pangburn, M.K.,等人，J.Exp.Med.7^:856-867, 1981)。通過C3 (H2O) Bb轉化酶的活性，C3b分子沉積在靶表面，從而啟動替代途徑。
[0020]對替代途徑活化的起始因子的了解甚少。認為激活因子包括酵母細胞壁(酵母聚糖)、許多純的多糖、兔紅細胞、某些免疫球蛋白、病毒、真菌、細菌、動物腫瘤細胞、寄生蟲和受損細胞。這些激活因子所共有的唯一特徵是碳水化合物的存在，但是碳水化合物結構的複雜性和多樣性使得難以確定共享的分子決定子，這是公認的。已被廣泛接受的是，替代途徑活化通過該途徑的抑制調節組分諸如因子H、因子1、DAF和CRl和備解素(這是替代途徑唯一陽性調節物)之間精細平衡而得到控制(參見Schwaeble ff.J.和Reid K.B.,Immunol Today 20(1):17-21 (1999))。
[0021]除了上述明顯失調的活化機制之外，對於凝集素/經典途徑C3轉化酶(C4b2a)，替代途徑也可以提供強大的放大環路(amplification loop)，因為所產生的任何C3b都能與因子B —起參與形成額外的替代途徑C3轉化酶(C3bBb)。替代途徑C3轉化酶通過備解素的結合而穩定。備解素延長了替代途徑C3轉化酶的半衰期6-10倍。向替代途徑C3轉化酶中添加C3b導致替代途徑C5轉化酶的形成。
[0022]認為所有三種途徑(即經典、凝集素和替代途徑)會合於C5，它被裂解形成具有多種促炎作用的產物。會合後的途徑被稱為末端補體途徑。C5a是最有效的過敏毒素，引起平滑肌和血管緊張度以及血管通透性的改變。它也是嗜中性粒細胞和單核細胞兩者的強有力的趨化因子和激活因子。C5a介導的細胞活化能夠通過誘導釋放多種另外的炎症介質來顯著放大炎症反應，另外的炎症介質包括細胞因子、水解酶、花生四烯酸代謝物和活性氧類另O。C5裂解導致了 C5b-9的形成，它也被稱為膜攻擊複合物(MAC)。目前強有力的證據表明，亞裂解的MAC沉積除了起裂解成孔複合物的作用外，還可能還在炎症中發揮重要作用。
[0023]除了在免疫防禦 中的基本作用外，補體系統是造成許多臨床疾病的組織損傷的原因。因此，迫切需要開發治療上有效的補體抑制劑以抑制這些副作用。
[0024]發明概述
提供本概述，從而以簡化形式引入概念的選擇，其在以下發明詳述中進一步描述。本概述既不欲鑑定請求保護的主題的關鍵特徵，也不欲用於協助確定請求保護的主題的範圍。[0025]在一個方面，本發明提供抑制有生命的受試者中MASP-2依賴性補體活化的副作用的方法。該方法包括將有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑施用於需要其的受試者的步驟。在本發明的另一個方面，MASP-2抑制劑抑制通過凝集素依賴性MASP-2系統的補體活化，但基本上不抑制通過經典或Clq依賴性系統的補體活化，從而Clq依賴性系統仍然具有功能。
[0026]在本發明這些方面的一些實施方案中，MASP-2抑制劑是抗MASP-2抗體或其片段。在其他實施方案中，抗MASP-2抗體具有降低的效應子功能。在一些實施方案中，MASP-2抑制劑是MASP-2抑制肽或非肽MASP-2抑制劑。
[0027]另一個方面，本發明提供用於抑制MASP-2依賴性補體活化的副作用的組合物，該組合物包含治療有效量的MASP-2抑制劑和藥學可接受的載體。本發明還提供製備用於抑制需要其的有生命的受試者中MASP-2依賴性補體活化的副作用的藥物的方法，其包括藥物載體中的治療有效量的MASP-2抑制劑。本發明還提供製備用於抑制MASP-2依賴性補體活化以治療下文所述病症、疾病和障礙中每一種的藥物的方法。
[0028]本發明的方法、組合物和藥物用於在患有如本文將進一步描述的急性或慢性病理病症或損傷的哺乳動物受試者、包括人中體內抑制MASP-2依賴性補體活化的副作用。
[0029]在本發明的另一個方面，提供用於抑制患有陣發性睡眠性血紅蛋白尿症(paroxysmal nocturnal hemoglobinuria)的受試者中MASP-2依賴性補體活化的方法,其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。
[0030]在另一個方面，本發明提供用於抑制患有非因子H依賴性非典型溶血性尿毒症候群(non-Factor H-dependen t atypical hemolytic uremic syndrome (aHUS))或處於發生非因子H依賴性非典型溶血性尿毒症候群的風險中的受試者中MASP-2依賴性補體活化的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。
[0031]在另一個方面，本發明提供用於降低處於發生非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)的風險中的受試者將患有與aHUS相關的臨床症狀的可能性的方法，其包括:(a)確定受試者中已知與aHUS相關的基因標誌物的存在；(b)定期監測受試者，以確定選自貧血、血小板減少、腎功能不全和肌酸酐上升的至少一種症狀的存在或不存在；和(C)在確定貧血、血小板減少、腎功能不全或肌酸酐上升的至少一種的存在之後，將有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者，其中施用所述組合物的量有效且時間期間足以改善所述一種或多種症狀。
[0032]在另一個方面，本發明提供抑制患有繼發於感染的非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)或處於發生繼發於感染的非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)的風險中的受試者中MASP-2依賴性補體活化的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。
[0033]在另一個方面，本發明提供治療患有非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)的受試者的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者，其中所述MASP-2抑制劑的施用通過靜脈內導管或其他導管遞送方法而施用。[0034]在另一個方面，本發明提供用於降低處於發生溶血性尿毒症候群(HUS)的風險中的受試者中發生腎功能受損的可能性的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。
[0035]在另一個方面，本發明提供治療患有溶血性尿毒症候群(HUS)的受試者的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者，其中所述MASP-2抑制劑的施用通過靜脈內導管或其他導管遞送方法而施用於所述受試者。
[0036]在另一個方面，本發明提供治療患有血栓性血小板減少性紫癜(TTP)或表現出與TTP的診斷一致的症狀的受試者的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者，其中所述MASP-2抑制劑的施用通過靜脈內導管或其他導管遞送方法而施用於所述受試者。
[0037]在另一個方面，本發明提供治療患有難治性血栓性血小板減少性紫癜(TTP)的受試者的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。
[0038]在本發明的另一個方面，提供用於抑制患有冷球蛋白血症的受試者中MASP-2依賴性補體活化的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。
[0039]在本發明的另一個方面，提供用於抑制患有冷凝集素病的受試者中MASP-2依賴性補體活化的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。
[0040]在本發明的另一個方面，提供用於抑制患有青光眼的受試者中MASP-2依賴性補體活化的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。
[0041]在本發明的另一個方面，提供用於抑制處於發生急性放射症候群的風險中或患有急性放射症候群的受試者中MASP-2依賴性補體活化的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。在一些實施方案中，抗MASP-2抑制劑是抗-MASP-2抗體。在一些實施方案中，在輻射暴露(諸如用輻射治療之前或預期暴露於輻射之前)將MASP-2抑制劑預防性施用於受試者。在一些實施方案中，在暴露於輻射之後24至48小時內施用MASP-2抑制劑。在一些實施方案中，在暴露於輻射之前和/或之後以足以減輕與急性放射症候群相關的一種或多種症狀的量施用MASP-2抑制劑。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0042]通過參考下面的詳細描述連同附圖，本發明前述的方面以及許多附帶的優點將更容易領會，同樣也更好理解，其中: 圖1是說明人MASP-2基因組結構的圖；
圖2A是說明人MASP-2蛋白的結構域結構的示意圖；
圖2B是說明人MApl9蛋白的結構域結構的示意圖；
圖3是說明鼠MASP-2敲除策略的圖；圖4是說明人MASP-2微基因構建體的圖；
圖5A提供了證明MASP-2缺陷導致凝集素途徑介導的C4活化喪失的結果，如通過甘露聚糖上C4b沉積缺陷所測定的，如實施例2所述；
圖5B提供了證明MASP-2缺陷導致凝集素途徑介導的C4活化喪失的結果，如通過酵母聚糖上C4b沉積缺陷所測定的，如實施例2所述；
圖5C提供了證明獲自MASP-2 +/-、MASP-2 _/_和野生型品系的血清樣品的相對C4活化水平的結果，如通過甘露聚糖和酵母聚糖上的C4b沉積所測定的，如實施例2所述；
圖6提供了證明加入鼠重組MASP-2到MASP-2 _/_血清樣品中以蛋白濃度依賴的方式恢復了凝集素途徑介導的C4活化的結果，如通過甘露聚糖上的C4b沉積所測定的，如實施例2所述；
圖7提供了證明MASP-2 -/-品系中經典途徑有功能的結果，如實施例8所述；
圖8A提供了證明抗MASP-2 Fab2抗體#11抑制C3轉化酶形成的結果，如實施例10所
述；
圖8B提供了證明抗MASP-2 Fab2抗體#11與天然大鼠MASP-2結合的結果，如實施例10所述；
圖8C提供了證明抗MASP-2 Fab2抗體#41抑制C4裂解的結果，如實施例10所述；
圖9提供了證明經測試抑制C3轉化酶形成的所有抗MASP-2 Fab2抗體還被發現抑制C4裂解的結果，如實施例10所述；
圖10是說明從用於抗MASP-2阻斷性Fab2抗體表位作圖的大鼠MASP-2衍生的重組多肽的示意圖，如實施例11所述；
圖11提供了證明抗MASP-2 Fab2 #40和#60與大鼠MASP-2多肽結合的結果，如實施例11所述；
圖12提供了證明腎缺血/再灌注損傷模型中再灌注後24小時和48小時野生型(+/+)和MASP-2 (-/-)小鼠的血尿素氮清除率的結果，如實施例12所述；
圖13A提供了顯示從野生型(+/+)和MASP-2 (-/-)小鼠中分離的RPE-脈絡膜複合體中的基線VEGF蛋白水平的結果，如實施例13所述；
圖13B提供了顯示黃斑變性模型中雷射誘發的損傷之後第三天野生型(+/+)和MASP-2(-/-)小鼠的RPE-脈絡膜複合體中VEGF蛋白水平的結果，如實施例13所述；
圖14提供了顯示野生型(+/+)和MASP-2 (-/-)小鼠中雷射誘發損傷後第七天平均脈絡膜新血管形成(CNV)體積的結果，如實施例13所述；
圖15A和圖15B提供了在正常大鼠血清中施用MASP-2 Fab2抗體之後C4b沉積的抑制(圖15A)和凝血酶活化的抑制(圖15B)的劑量響應曲線，如實施例14中所述；
圖16A和圖16B提供了在彌散性血管內凝血的局部Schwartzman反應模型中，與未處理的野生型小鼠和其中補體途徑被放血劑眼鏡蛇毒因子(cobra venom factor, CVF)和末端途徑抑制劑(C5aR拮抗劑)抑制的野生型小鼠中的血小板凝集(圖16A)相比，MASP-2 (-/-)小鼠中測定的血小板凝集(表示為凝集面積)(圖16B)，如實施例15中所述；圖17圖示說明在WT(+/+)供體腎的WT(+/+) (B6)或MASP-2(-/_)移植受體小鼠中測定的血尿素氮(BUN)水平，如實施例16中所述；
圖18將WT(+/+)和MASP-2(-/_)小鼠的百分比存活圖示為盲腸結紮和穿刺(CLP)模型中微生物感染後的天數的函數,如實施例17中所述；
圖19圖示說明盲腸結紮和穿刺(CLP)模型中微生物感染後在WT(+/+)和MASP-2 (-/-)中測定的細菌數，如實施例17中所述；
圖20為說明在用綠膿假單胞菌的鼻內施用攻擊後6天WT(+/+)、MASP-2(-/_)和C3 (-/-)小鼠的百分比存活的Kaplan-Mayer圖，如實施例18中所述；
圖21圖示說明在WT小鼠內小鼠抗MASP-2單克隆抗體的0.3 mg/kg或1.0 mg/kg皮下給藥之後，在不同時間點取樣的樣品中C4b沉積的水平，測定為對照的％，如實施例19中所述；
圖22圖示說明在WT小鼠內小鼠抗MASP-2單克隆抗體的0.6 mg/kg腹膜內給藥之後，在不同時間點取樣的樣品中C4b沉積的水平，測定為對照的％，如實施例19中所述；
圖23圖示說明在用0.3 mg/kg或1.0 mg/kg小鼠抗MASP-2單克隆抗體的單次腹膜內注射預處理的WT(+/+)小鼠中雷射誘發損傷後第7天的平均脈絡膜新生血管形成(CNV)體積，如實施例20中所述；
圖24A圖示說明在用5X 108/100 μ I cfu腦膜炎奈瑟氏菌0? meningitidis)感後MASP-2(-/_)和WT(+/+)小鼠的百分比存活，如實施例21中所述；
圖24B圖示採自用5X108 cfu/100 μ I腦膜炎奈瑟氏菌感染的MASP-2 ΚΟ(-/_)和WT(+/+)小鼠的血樣中在不同時間點回收的腦膜炎奈瑟氏菌的log cfu/ml，如實施例21中所述；
圖25A圖示在用2X108 cfu/100 μ I腦膜炎奈瑟氏菌感染後MASP-2 Κ0(-/_)和WT(+/+)小鼠的百分比存活，如實施例21中所述；
圖25B圖示說明採自用2X108 cfu/100 μ I腦膜炎奈瑟氏菌感染的WT(+/+)小鼠的血樣中在不同時間點回收的腦膜炎奈瑟氏菌的log cfu/ml,如實施例21中所述；
圖25C圖示說明採自用2X108 cfu/100 μ I腦膜炎奈瑟氏菌感染的MASP-2 (-/-)小鼠的血樣中在不同時間點回收的腦膜炎奈瑟氏菌的log cfu / ml，如實施例21中所述。
圖26A圖示說明證明MASP-2 (-/-)小鼠保留功能性經典途徑的C3b沉積測定的結果，如實施例22中所述；
圖26B圖示說明證明MASP-2 (-/-)小鼠保留功能性經典途徑的在酵母多糖包被的板上的C3b沉積測定的結果，如實施例22中所述；
圖27A圖示說明在C4 (-/-)小鼠(n=6)和匹配的WT同窩小鼠對照(n=7)中冠狀動脈的左前降支(LAD)結紮和再灌注之後的心肌缺血/再灌注損傷(MIRI)誘導的組織損失，其顯示處於風險中的區域(AAR)和梗死面積(INF)，如實施例22中所述；
圖27B圖示說明在如圖42A中所述處理的C4 (-/-)和WT小鼠中作為風險中的區域(AAR)的函數的梗死面積(INF)，其證明，C4 (-/-)小鼠和WT對照(虛線)一樣易受MIRI的影響，如實施例22中所述；
圖28A圖示說明使用來自WT小鼠的血清、來自C4 (-/-)小鼠的血清和與甘露聚糖與預孵育的來自C4 (-/-)小鼠的血清的C3b沉積測定的結果，如實施例22中所述；
圖28B圖示說明對於來自WT的血清和與各種濃度的抗鼠MASP-2 mAb (mAbMll)混合的MASP-2 (-/-)小鼠的血清的C3b沉積測定的結果，如實施例22中所述；
圖28C圖示說明對來自WT(C4充足)的人血清和C4缺陷血清和與甘露聚糖與預孵育的來自C4缺陷受試者的血清的C3b沉積測定的結果，如實施例22中所述；
圖28D圖示說明對來自WT(C4充足)的人血清和與抗人MASP-2 mAb (mAbH3)混合的來自C4缺陷受試者的人血清的C3b沉積測定的結果，如實施例22中所述；
圖29A圖示說明在凝集素活化途徑特異性測定條件下或在經典活化途徑特異性測定條件下測試的來自各種補體缺陷小鼠品系的血漿中C3轉化酶活性的比較分析，如實施例22中所述；
圖29B圖示說明在凝集素活化途徑特異性條件測試的來自各種補體缺陷小鼠品系的血漿中C3轉化酶活性的時間分辨的動力學，如實施例22中所述；
圖30說明如a』鏈的存在顯示的凝血酶底物FXIa和FXa對人C3的活化的Western印跡分析的結果，如實施例23中所述；
圖 31 顯示在從 WT、MASP-2 (-/-)、F1 1 (-/-)、F11 (_/_)/C4 (-/-)和 C4 (_/_)獲得的血清樣品上的C3沉積測定的結果，如實施例23中所述；
圖32A是顯示在對照小鼠和在用抗鼠MASP-2抗體(mAbMl I)或抗人MASP-2抗體(mAbH6)處理的小鼠中在暴露於7.0 Gy輻射之後隨時間的百分比存活的Kaplain-Meier存活圖，如實施例29中所述；
圖32B是顯示在對照小鼠和在用抗鼠MASP-2抗體(mAbMl I)或抗人MASP-2抗體(mAbH6)處理的小鼠中在暴露於6.5 Gy輻射之後隨時間的百分比存活的Kaplain-Meier存活圖，如實施例29中所述；
圖33是圖示說明在施用2.6 X IO7 cfu的腦膜炎奈瑟氏菌血清群A Z2491的感染劑量之後MASP-2 KO和WT小鼠的百分比存活的Kaplan-Meyer圖，其證明，MASP-2缺陷小鼠被保護免於腦膜炎奈瑟氏菌誘導的死亡，如實施例30中所述；
圖34是圖示說明在施用6 X IO6 cfu的腦膜炎奈瑟氏菌血清群B菌株MC58的感染劑量之後MASP-2 KO和WT小鼠的百分比存活的Kaplan-Meyer圖，其證明，MASP-2缺陷小鼠被保護免於腦膜炎奈瑟氏菌血清群B菌株MC58誘導的死亡，如實施例30中所述；
圖35圖示說明在用6xl06 cfu的腦膜炎奈瑟氏菌血清組B菌株MC58 1.p.感染後取自MASP-2 KO和WT小鼠的血液樣品中在不同時間點回收的腦膜炎奈瑟氏菌血清群B菌株MC58的log cfu/ml (在兩組小鼠中不同時間點n=3，結果表示為平均值土SEM)，其證明，儘管MASP-2 KO小鼠被與WT小鼠相同劑量的腦膜炎奈瑟氏菌血清群B菌株MC58所感染，但是MASP-2 KO小鼠與WT相比具有增強的菌血症的清除，如實施例30中所述；
圖36圖示說明在6xl06 cfu/100 μ l的腦膜炎奈瑟氏菌血清群B菌株MC58的感染後3、6、12和24小時MASP-2和WT小鼠的平均疾病評分，其證明，MASP-2缺陷小鼠顯示出對感染的高抗性，在感染後6小時具有低得多的疾病評分，如實施例30中所述；
圖37是圖示說明在施用4 X 106/100 μl cfu腦膜炎奈瑟氏菌血清群B菌株MC58的感染劑量和隨後在感染後3小時施用抑制性抗MASP-2抗體(I mg/kg)或對照同型抗體之後小鼠的百分比存活的Kaplan-Meyer圖，其證明，抗MASP-2抗體對於治療和改善被腦膜炎奈瑟氏菌感染的受試者的存活是有效的，如實施例31中所述；
圖38圖示說明在與㈧正常人血清(NHS)加人抗MASP-2抗體；⑶正常人血清(NHS)加同種型對照抗體；(C) MBL-/-人血清；(D)正常人血清(NHS)和(E)熱失活的正常人血清(NHS)存在的情況下孵育後0、30、60和90分鐘在用6.5xl06 cfu/100 μ I腦膜炎奈瑟氏菌血清群B菌株MC58 1.p.感染後在20%人血清濃度中在不同時間點回收的腦膜炎奈瑟氏菌血清群B-MC58的活計數的log cfu/ml,其顯示,人血清中腦膜炎奈瑟氏菌的補體依賴性殺傷被添加人抗MASP-2抑制性抗體所顯著增強，如實施例32中所述；
圖39圖示說明在小鼠血清樣品中在不同時間點回收的腦膜炎奈瑟氏菌血清群B-MC58的活計數的log cfu/ml，其證明，與WT小鼠血清相比，MASP-2 _/_小鼠血清對腦膜炎奈瑟氏菌具有更高水平的殺菌活性，如實施例32中所述；
圖40圖示說明了一定範圍的血清濃度的人血清對甘露聚糖包被的鼠紅細胞的溶血(如通過光度法測量的裂解的小鼠紅細胞(Cryy/C3-/-)至上清液的血紅蛋白釋放所測量的)。測試的血清包括熱失活(HI) NHS、MBL-/-、NHS +抗-MASP-2抗體和NHS對照，如實施例33中所述；
圖41圖示說明了一定範圍的血清濃度的人血清對未包被的鼠紅細胞的溶血(如通過光度法測量的裂解的WT小鼠紅細胞至上清液的血紅蛋白釋放所測量的)。測試的血清包括熱失活(HI) NHS、MBL-/-、NHS +抗-MASP-2抗體和NHS對照，其證明，抑制MASP-2抑制未敏化的WT小鼠紅細胞的補體介導的裂解，如實施例33中所述；
圖42圖示說明了一定範圍的血清濃度的人血清對未包被的鼠紅細胞的溶血(如通過光度法測量的裂解的小鼠紅細胞(CD55/59 -/-)至上清液的血紅蛋白釋放所測量的)。測試的血清包括熱失活(HI) NHS、MBL-/-> NHS +抗-MASP-2抗體和NHS對照，如實施例33中所述；
圖43圖示說明在對照小鼠和在用抗人MASP-2抗體(mAbH6)處理的小鼠中在暴露於8.0 Gy輻射之後隨時間的百 分比存活，如實施例34中所述；
圖44圖示說明在MASP-2-/-和WT小鼠中LPS注射後至發生微血管閉塞的時間，顯示經60分鐘測量的具有血栓形成的小鼠的百分比，這證明，在WT小鼠中在15分鐘後檢測到血栓形成，其中多達80%的WT小鼠在60分鐘時表現出血栓形成；相比之下，MASP-2 -/-中無一在60分鐘期間過程中顯示任何血栓形成(對數秩:p=0.0005)，如實施例35中所述；和圖45圖示說明了在STX/LPS誘導的HUS模型中鹽水處理的對照小鼠(n=5)和抗MASP-2抗體處理的小鼠(n=5)隨時間(小時)的百分比存活，其證明所有對照小鼠到42小時死亡，然而，與之相比，100 %的抗MASP-2抗體處理的小鼠在整個實驗的時間進程過程中存活，如實施例36中所述。
[0043]序列表描述
SEQ ID NO:1 人 MAp 19 cDNA
SEQ ID NO: 2人MAp 19蛋白(具有前導序列)
SEQ ID NO: 3 人 MApl9 蛋白(成熟)
SEQ ID NO:4 人 MASP-2 cDNA
SEQ ID NO: 5人MASP-2蛋白(具有前導序列)
SEQ ID NO:6 人 MASP-2 蛋白(成熟)
SEQ ID NO: 7 人 MASP-2 gDNA (外顯子 1-6)
抗原:(關於MASP-2成熟蛋白)
SEQ ID NO:8 CUBI 序列(胺基酸 1-121)
SEQ ID NO:9 CUBEGF 序列(胺基酸 1-166)SEQ ID NO: 10 C臓GFCUBII (胺基酸 1_293)
SEQ ID NO: 11 EGF 區(胺基酸 122-166)
SEQ ID NO: 12絲氨酸蛋白酶結構域(胺基酸429 - 671)
SEQ ID NO: 13失活的絲氨酸蛋白酶結構域(胺基酸610-625，具有Ser618至Ala的突
變)
SEQ ID NO:14
TW.GPIiWPHPV』FGR1.fp1.W 肽)
SEQ ID NO:15


ILChYDFVIC1.SSCjAKVI^ATI i:CjQ (CtiBi IlA:i
SEQ ID NO: 16 I HiSDVSN?,Vfik核心 I
SEQ ID NO: 17 1:YSI1JSSLD!1'FR.SDY.SN 1-；KPF1 fMB1.結合k '!
SEQ ID NO:18 I!—職 I
SEQ ID NO: 19 ΛΝMLCAO1.1::SCKjK1；)SCRGfJSCK；/\1.\?(絲氨酸蛋白酶結合核心)
詳述
肽抑制劑:
SEQ ID NO: 20 MBL 全長 cDNA
SEQ ID NO:21 MBL 全長蛋白
SEQ ID NO:22 OGK-X-GP (共有結合序列)
【權利要求】
1.抑制患有陣發性睡眠性血紅蛋白尿症(PNH)的受試者中MASP-2依賴性補體活化的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。
2.權利要求1的方法，其中所述MASP-2抑制劑是抗MASP-2抗體或其片段。
3.權利要求2的方法，其中所述MASP-2抑制劑是特異性結合SEQID N0:6的部分的抗MASP-2單克隆抗體或其片段。
4.權利要求1的方法，其中所述組合物增加紅細胞在所述受試者中的存活。
5.權利要求1的方法，其中所述受試者表現出選自以下的一種或多種症狀:(i)低於正常水平的血紅蛋白，(ii)低於正常水平的血小板；(iii)高於正常水平的網織紅細胞，和(iv)高於正常水平的膽紅素。
6.權利要求1的方法，其中所述受試者先前已經經歷或正在經歷用抑制補體蛋白C5的裂解的末端補體抑制劑的治療。
7.權利要求1的方法，其中所述方法進一步包括將抑制補體蛋白C5的裂解的末端補體抑制劑施用於所述受試者。
8.權利要求7的方法，其中所述末端補體抑制劑是人源化抗C5抗體或其抗原結合片段。
9.權利要求8的方法 ，其中所述末端補體抑制劑是依庫麗單抗。
10.權利要求2的方法，其中所述抗體或其片段選自:重組抗體、具有降低的效應子功能的抗體、嵌合抗體、人源化抗體和人抗體。
11.權利要求1的方法，其中所述組合物通過皮下、肌內、動脈內、靜脈內或作為吸入劑施用。
12.權利要求11的方法，其中所述組合物通過皮下施用。
13.抑制患有非因子H依賴性非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)或處於發生非因子H依賴性非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)的風險中的受試者中MASP-2依賴性補體活化的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。
14.權利要求13的方法，其中在施用所述組合物之前，確定所述受試者表現選自以下的一種或多種症狀:⑴貧血、(ii)血小板減少(iii)腎功能不全和(iv)肌酸酐上升，並且將所述組合物以有效量施用足夠長的時間期間，以改善所述一種或多種症狀。
15.權利要求13的方法，其中所述受試者患有與因子1、因子B或膜輔因子CD46相關的 aHUS。
16.權利要求13的方法，其中所述MASP-2抑制劑是抗MASP-2抗體或其片段。
17.權利要求13的方法，其中所述MASP-2抑制劑是特異性結合SEQID NO:6的部分的抗MASP-2單克隆抗體或其片段。
18.用於降低處於發生非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)的風險中的受試者將患有與aHUS相關的臨床症狀的可能性的方法，其包括: (a)確定所述受試者中已知與aHUS相關的基因標誌物的存在； (b)定期監測所述受試者，以確定選自貧血、血小板減少、腎功能不全和肌酸酐上升的至少一種症狀的存在或不存在；和(C)在確定貧血、血小板減少、腎功能不全或肌酸酐上升的至少一種的存在之後，將有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者，其中將所述組合物以有效量施用足夠長的時間期間，以改善所述一種或多種症狀。
19.權利要求18的方法，其中所述MASP-2抑制劑是抗MASP-2抗體或其片段。
20.權利要求19的方法，其中所述MASP-2抑制劑是特異性結合SEQID NO:6的部分的抗MASP-2單克隆抗體或其片段。
21.權利要求18的方法，其中步驟(a)包括對從所述受試者獲得的樣品上進行基因篩選測試並且在選自以下的基因中鑑定與aHUS相關的至少一種基因標誌物的存在:補體因子H(CFH)、因子I (CFI)、因子B (CFB)、膜輔因子CD46、C3、補體因子H-相關蛋白(CFHRl)、抗凝蛋白血栓調節蛋白(THBD)、補體因子H-相關蛋白3(CFHR3)和補體因子H-相關蛋白4(CFHR4)。
22.權利要求18的方法，其中所述方法進一步包括監測所述受試者的已知與觸發aHUS臨床症狀相關的事件的發生，並且在所述觸發事件之前、期間或之後將所述包含MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。
23.權利要求22的方法，其中所述與觸發aHUS臨床症狀相關的事件選自藥物暴露、感染、惡性腫瘤、損傷、器官或組織移植和懷孕。
24.權利要求23的方法，其中所述感染是細菌感染。
25.權利要求18的方法，其中所述組合物通過皮下施用。
26.抑制患有繼發於感染的非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)或處於發生繼發於感染的非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)的風險中的受試者中MASP-2依賴性補體活化的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。
27.權利要求26的方法，其中所述受試者患有肺炎鏈球菌感染相關的非腸道aHUS或處於發生與肺炎鏈球菌感染相關的非腸道aHUS的風險中。
28.權利要求26的方法，其中所述MASP-2抑制劑是抗MASP-2抗體或其片段。
29.權利要求28的方法，其中所述MASP-2抑制劑是特異性結合SEQID NO:6的部分的抗MASP-2單克隆抗體或其片段。
30.治療患有非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)的受試者的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者，其中所述MASP-2抑制劑的施用通過靜脈內導管或其他導管遞送方法而施用。
31.權利要求30的方法，其進一步包括用血漿置換治療所述患者。
32.權利要求30的方法，其中所述包含MASP-2抑制劑的組合物在血漿置換不存在的情況下進行施用。
33.權利要求32的方法，其中通過導管施用所述包含MASP-2抑制劑的組合物持續第一時間期間，進一步包括施用所述包含MASP-2抑制劑的組合物持續第二時間期間，其中所述組合物在所述第二時間期間過程中通過皮下施用。
34.權利要求33的方法，進一步包括定期確定至少一種補體因子的水平，其中確定與標準值或健康受試者相比所述至少一種補體因子的水平降低表明需要繼續用所述組合物治療。
35.權利要求30的方法，其中所述MASP-2抑制劑是抗MASP-2抗體或其片段。
36.權利要求35的方法，其中所述MASP-2抑制劑是特異性結合SEQID NO:6的部分的抗MASP-2單克隆抗體或其片段。
37.用於降低處於發生溶血性尿毒症候群(HUS)的風險中的受試者中發生腎功能受損的可能性的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。
38.權利要求37的方法，其中所述處於發生HUS的風險中的受試者表現出選自以下的至少一種或多種症狀:腹瀉、具有血管內紅細胞破壞的塗片證據的小於30%的血細胞比容水平、血小板減少和上升的肌酸酐水平。
39.權利要求37的方法，其中所述受試者被禁忌使用抗生素的腸源性大腸桿菌所感染。
40.權利要求37的方法，其中所述受試者被志賀氏菌或沙門氏菌所感染。
41.權利要求39的方法，其中在抗生素不存在的情況下在第一時間期間過程中將所述包含MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。
42.權利要求40的方法，其中在抗生素存在的情況下在第一時間期間過程中將所述包含MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。
43.權利要求 37、41或43中任一項的方法，其中在所述第一時間期間過程中通過靜脈內導管或其他導管遞送方法將所述MASP-2抑制劑施用於所述受試者。
44.權利要求41、權利要求42或權利要求43的方法，進一步包括施用所述包含MASP-2抑制劑的組合物持續第二時間期間，其中在所述第二時間期間過程中通過皮下施用所述組合物。
45.權利要求44的方法，進一步包括定期確定至少一種補體因子的水平，其中確定與標準值或健康受試者相比所述至少一種補體因子的水平降低表明需要繼續用所述組合物治療。
46.權利要求37的方法，其中所述MASP-2抑制劑是抗MASP-2抗體或其片段。
47.權利要求46的方法，其中所述MASP-2抑制劑是特異性結合SEQID NO:6的部分的抗MASP-2單克隆抗體或其片段。
48.治療患有溶血性尿毒症候群(HUS)的受試者的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者，其中所述MASP-2抑制劑的施用通過靜脈內導管或其他導管遞送方法而施用於所述受試者。
49.權利要求48的方法，其進一步包括用血漿置換治療所述受試者。
50.權利要求48的方法，其中所述包含MASP-2抑制劑的組合物在血漿置換不存在的情況下進行施用。
51.權利要求48的方法，其中通過導管施用所述包含MASP-2抑制劑的組合物持續第一時間期間，進一步包括施用所述包含MASP-2抑制劑的組合物持續第二時間期間，其中所述組合物在所述第二時間期間過程中通過皮下施用。
52.權利要求51的方法，進一步包括定期確定至少一種補體因子的水平，其中確定與標準值或健康受試者相比所述至少一種補體因子的水平降低表明需要繼續用所述組合物治療。
53.權利要求48的方法，其中所述MASP-2抑制劑是抗MASP-2抗體或其片段。
54.權利要求53的方法，其中所述MASP-2抑制劑是特異性結合SEQID N0:6的部分的抗MASP-2單克隆抗體或其片段。
55.治療患有血栓性血小板減少性紫癜(TTP)或表現出與TTP的診斷一致的症狀的受試者的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者，其中所述MASP-2抑制劑的施用通過靜脈內導管或其他導管遞送方法而施用於所述受試者。
56.權利要求55的方法,其中所述受試者表現出選自以下的一種或多種症狀:中樞神經系統損害、血小板減少、嚴重心臟損害、嚴重肺損害、胃腸梗死和壞疽。
57.權利要求55的方法，其中所述受試者對於ADAMTS13抑制劑的存在測試呈陽性，並且所述方法進一步包括將免疫抑制劑施用於所述受試者。
58.權利要求55的方法，其中在血漿置換不存在的情況下施用所述包含MASP-2抑制劑的組合物持續第一時間期間。
59.權利要求55的方法，其中所述受試者對於ADAMTS-13抑制劑的存在測試呈陽性，並且所述方法進一步包括施用ADAMTS-13。
60.權利要求55的方法，其進一步包括用血漿置換治療所述受試者。
61.權利要求55的方法，其中所述包含MASP-2抑制劑的組合物在血漿置換存在的情況下進行施用。
62.權利要求55的方法，`其中通過導管施用所述包含MASP-2抑制劑的組合物持續第一時間期間，進一步包括施用所述包含MASP-2抑制劑的組合物持續第二時間期間，其中所述組合物在所述第二時間期間過程中通過皮下施用。
63.權利要求62的方法，進一步包括定期確定至少一種補體因子的水平，其中確定與標準值或健康受試者相比所述至少一種補體因子的水平降低表明需要繼續用所述組合物治療。
64.權利要求55的方法，其中所述MASP-2抑制劑是抗MASP-2抗體或其片段。
65.權利要求54的方法，其中所述MASP-2抑制劑是特異性結合SEQID NO:6的部分的抗MASP-2單克隆抗體或其片段。
66.治療患有難治性血栓性血小板減少性紫癜(TTP)的受試者的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。
67.權利要求66的方法，其中所述組合物通過皮下施用。
68.權利要求66的方法，進一步包括定期確定至少一種補體因子的水平，其中確定與標準值或健康受試者相比所述至少一種補體因子的水平降低表明需要繼續用所述組合物治療。
69.權利要求66的方法，其中所述MASP-2抑制劑是抗MASP-2抗體或其片段。
70.權利要求69的方法，其中所述MASP-2抑制劑是特異性結合SEQID NO:6的部分的抗MASP-2單克隆抗體或其片段。
71.抑制患有冷球蛋白血症的受試者中MASP-2依賴性補體活化的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。
72.權利要求71的方法，其中所述MASP-2抑制劑是抗MASP-2抗體或其片段。
73.權利要求72的方法，其中所述MASP-2抑制劑是抗MASP-2單克隆抗體或其片段。
74.抑制患有冷凝集素病的受試者中MASP-2依賴性補體活化的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。
75.權利要求74的方法，其中所述MASP-2抑制劑是抗MASP-2抗體或其片段。
76.權利要求75的方法，其中所述MASP-2抑制劑是抗MASP-2單克隆抗體或其片段。
77.抑制患有青光眼的受試者中MASP-2依賴性補體活化的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。
78.權利要求77的方法，其中所述MASP-2抑制劑是抗MASP-2抗體或其片段。
79.權利要求78的方法，其中所述MASP-2抑制劑是抗MASP-2單克隆抗體或其片段。
80.抑制處於發生急性放射症候群的風險中或正患有急性放射症候群的受試者中MASP-2依賴性補體活化的方法，其包括將包含有效抑制MASP-2依賴性補體活化的量的MASP-2抑制劑的組合物施用於所述受試者。
81.權利要求80的方法，其中所述MASP-2抑制劑是抗MASP-2抗體或其片段。
82.權利要求81的方法，其中所述MASP-2抑制劑是抗MASP-2單克隆抗體或其片段。
83.權利要求81的方法，其中在輻射暴露之前將所述MASP-2抑制劑預防性施用於所述受試者。
84.權利要求81的方法，其中在輻射暴露之後24小時至48小時內將所述MASP-2抑制劑施用於所述受試者。`
85.權利要求81的方法，其中在輻射暴露之後將所述MASP-2抑制劑施用於所述受試者。
【文檔編號】C12N15/11GK103781492SQ201280028263
【公開日】2014年5月7日 申請日期:2012年4月6日 優先權日:2011年4月8日
【發明者】G.A.德莫普羅斯, T.達德勒, H-W.施維布爾 申請人:萊斯特大學, 奧默羅斯公司