胞苷代謝拮抗劑的聚合衍生物的製作方法

2023-06-22 06:04:46 3

專利名稱：：胞苷代謝拮抗劑的聚合衍生物的製作方法
技術領域：
：本發明涉及胞苷抗代謝劑的聚合衍生物、其應用及其生產方法。技術背景己經開發了用於治療惡性腫瘤或病毒性疾病的各種胞苷抗代謝劑；如阿糖胞苷、吉西他濱等在臨床上用作抗腫瘤劑(抗癌劑)，扎西他濱、拉米夫定等用作抗病毒劑。然而，許多這些胞苷抗代謝劑需要以高劑量給藥，才能充分發揮其效力，因為儘管它們在體外有很高的活性，但它們在體內易被代謝和排洩掉。例如，吉西他濱在體外具有強烈抑制細胞生長的活性，與抗癌劑如紫杉醇和多柔比星相當，但在臨床上每次給藥需要1,000mg/n^體表面積的高劑量。認為這是由於鹼基4位氨基被胞苷脫氨酶分解代謝而失活，這種酶是2'-脫氧胞苷的分解代謝酶，能降低其體內利用度(參見非專利文獻1)。使藥物結合於聚合物有時可改善其體內藥代動力學，以增強治療效果。非專利文獻2描述了阿糖胞苷結合於平均分子量約為30,000的聚穀氨酸的聚合衍生物。然而，藥物的聚合衍生物有時會誘導超敏反應(因免疫反應引起)，在這種情況下，就不能作為藥物反覆給藥。專利文獻1描述了胞苷衍生物結合於聚乙二醇的聚合衍生物，非專利文獻3描述了阿糖胞苷結合於兩端具有取代的天冬氨酸的支鏈形式聚乙二醇的天冬氨酸聚合衍生物。然而，這也可能有一個問題，即這些聚合衍生物在臨床上的療效可能受患者間個體差異的顯著影響，因為藥物從此種衍生物釋放很大程度上取決於體內酶的水解作用。專利文獻2描述了使藥物結合於聚乙二醇與聚天冬氨酸縮合形成膠束所獲得的嵌段型聚合物而產生的分子，來提供藥品。此外，專利文獻3描述了使抗癌物質結合於聚乙二醇與聚穀氨酸縮合獲得的嵌段型聚合物的穀氨酸側鏈羧基所形成的聚合物。然而，這些專利文獻沒有提及胞苷抗代謝劑類結合藥物。非專禾U文獻1:CancerScience,JapaneseCancerAssociation,第95巻，第105-111頁(2004)非專利文獻2:CancerResearch,AmericanAssociationforCancerResearch,第44巻，第25-30頁(1984)非專利文獻3:JournalofControlledRelease(Elsevier,England),第79巻第55-70頁(2002)專利文獻1:日本專利申請特表(KOHYO)No.2003-524028專利文獻2:日本專利號2694923專利文獻3:日本專利申請特開(KOKAI)No.05-000955
發明內容本發明解決的問題本發明的目的是提供低劑量具有較高效力的用作新型抗癌劑或抗病毒劑的胞苷抗代謝劑。解決問題的方式深入研究解決上述問題的方式後，本發明者發現了一種胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，特別是結構為胞苷抗代謝劑4位氨基與由聚乙二醇部分和側鏈含羧基的聚合物部分組成的高分子化合物的羧基形成醯胺鍵連接的衍生物，從而獲得本發明。具體說，本發明涉及以下(1)-(13):(1)一種胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其結構為胞苷抗代謝劑的氨基與由聚乙二醇部分和側鏈含羧基的聚合物部分組成的高分子化合物側鏈中的羧基形成醯胺鍵連接。(2)如上述第(1)項所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其中側鏈含羧基的聚合物部分包含聚穀氨酸鏈。(3)如上述第(1)或(2)項所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其中所述衍生物是通式(l)代表的化合物[式l]式中，R代表氫原子或C1-C6烷基；A代表氫原子、C1-C6醯基或C1-C6垸氧基羰基；m作為平均值是3-200;n作為平均值是5-2,000;X代表胞苷抗代謝劑殘基、羥基或疏水性取代基；3-100%的111中，X代表胞苷抗代謝劑殘基，0-95y。的m中，X代表羥基，0-80。/。的m中，X代表疏水性取代基。(4)如上述第(3)項所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其中，R代表Cl-C3垸基;A代表C2-C4醯基；m作為平均值是5-100;n作為平均值是50-1,000;胞苷抗代謝劑殘基是式(2)代表的基團[式2]^^"0(CH2CH20)nR(1)式中，Z代表氫原子或氟原子；-&!"代表選自式(3)取代基的基團:[式3](5)如上述第(3)項所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其中，R代表甲基；A代表乙醯基；m作為平均值是10-60;n作為平均值是100-300;X代表胞苷抗代謝劑殘基或羥基；胞苷抗代謝劑的代表是阿糖胞苷、吉西他濱或5'-脫氧-5-氟胞苷。(6)如上述第(3)或(4)項所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其中，疏水性取代基的代表是式(4)的a-胺基酸衍生物[式4]式中，Q代表天然胺基酸側鏈；W代表C1-C6烷基或苄基。(7)如上述第(6)項所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其中，Q代表異丙基或苄基；W代表苄基。(8)如上述第(3)或(4)項所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其中所述疏水性取代基的代表是式(5)所示的基團[式5〗O-T(5)式中，T代表用苯基任選取代的C1-C6烷基。(9)如上述第(8)項所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其中T代表苄基、3-苯基丙基、4-苯基丁基或5-苯基戊基。(10)如上述第(8)項所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其中，R代表甲基；A代表乙醯基；m作為平均值是10-60;n作為平均值是100-300;所述胞苷抗代謝劑的代表是阿糖胞苷、吉西他濱或5'-脫氧-5-氟胞苷；所述疏水性取代基的代表是節氧基、4-苯基丁氧基、(l-苄氧基羰基-2-甲基)丙基氨基或(l-苄氧基羰基-2-苯基)乙基氨基。(11)一種抗癌劑，其含有第(1)-(10)項中任一項所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物作為藥用成分。(12)—種抗病毒劑，其含有第(1)-(10)項中任一項所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物作為藥用成分。(13)—種生產第(1)-(10)項中任一項所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物的方法，所述方法包括在有機溶劑中用脫水縮合劑使胞苷抗代謝劑的氨基與由聚乙二醇部分和側鏈含羧基的聚合物部分組成的高分子化合物側鏈中的羧基形成醯胺連接。技術效果本發明的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物的結構為胞苷抗代謝劑4位氨基與由聚乙二醇部分和側鏈含羧基的聚合物部分組成的高分子化合物的羧基形成醯胺鍵連接。該衍生物在體內緩慢釋放胞苷抗代謝劑，可用作低劑量具有出色療效的抗癌劑或抗病毒劑。此外，酶非依賴性緩釋藥物的這種特性使該衍生物成為療效受患者個體差異影響較小的藥物。能形成膠束的聚合衍生物在患病部位選擇性累積，成為副作用少、效力較高的藥物。附圖簡要說明圖l是顯示沒有酶時藥物釋放時程的圖；和圖2是顯示小鼠血漿中藥物釋放時程的圖。本發明的最佳實施方式本發明的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物的結構為胞苷抗代謝劑氨基與由聚乙二醇部分和側鏈含羧基的聚合物部分組成的高分子化合物側鏈中的羧基形成醯胺鍵連接。出於本發明目的，"胞苷抗代謝劑"不受特別限制，只要它是4-氨基嘧啶-2-酮衍生物，而是具有抗腫瘤或抗病毒活性的化合物，"胞苷抗代謝劑"指式(2)所示化合物，其中核酸的鹼基部分是胞嘧啶(其中Z是氫原子)或5-氟胞嘧啶(其中Z是氟原子)；與其結合的基團(Rf)是選自上述式(3)取代基的基團。其具體例子包括阿糖胞苷、吉西他濱、2'-脫氧-2'-亞甲基胞苷(DMDC)、替扎他濱、扎西他濱、拉米夫定、5'-脫氧-5-氟胞苷(5'-DFCR)、曲沙他濱、2'-C-氰基-2'-脫氧"-(5-D-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶(CNDAC)、3'-乙炔基胞苷和(-)-)3-L-二氧戊環胞苷。在本發明中，"由聚乙二醇部分和側鏈含羧基的聚合物部分組成的高分子化合物"中側鏈含羧基的聚合物部分，包括羧酸鏈為聚合物主鏈分枝的接枝型聚合物，或縮合了聚羧酸聚合物的嵌段型聚合物。例如，側鏈含羧基的聚合物部分是接枝型聚合物的高分子化合物的例子包括例如通過聚乙二醇和丙烯酸的縮合物與丙烯酸、順丁烯二酸酐等發生共聚反應，然後發生任選的水解反應(如日本專利申請特開(KOKAI)No.11-279083所述)獲得的聚合物。側鏈含羧基的聚合物部分是嵌段型聚合物的高分子化合物的例子包括含有末端官能團的聚乙二醇結合於末端含有官能團的聚羧酸形成的化合物，或用末端含氨基的聚乙二醇開始聚合的胺基酸活化化合物的聚合反應獲得的化合物(如專利文獻3所述)。側鏈含羧基的聚合物的例子包括聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、聚蘋果酸和聚穀氨酸；優選的是聚穀氨酸。出於本發明目的，"聚乙二醇"可以是聚乙二醇衍生物，其兩端或一端被修飾，修飾兩端的基團可以相同或不同。末端修飾基團的例子包括任選地具有取代基的Cl-C6烷基；優選任選地具有取代基的C1-C4垸基。任選地具有取代基的Cl-C6烷基中Cl-C6烷基的例子包括直鏈、支鏈或環狀Cl-C6垸基。其具體例子包括甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、戊基、異戊基、2-甲基丁基、新戊基、l-乙基丙基、己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、l-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、環丙基、環戊基和環己基。優選的是C1-C4垸基；其具體例子包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基和叔丁基。特別優選的是甲基、乙基、正丙基或異丙基。任選地具有取代基的C1-C6垸基中的取代基不受特別限制；因而，其例子包括氨基、甲基氨基、二甲基氨基、乙基氨基和二乙基氨基。優選的是氨基。在本發明中，優選兩端被修飾的聚乙二醇衍生物。其具體例子包括一端含有Cl-C6垸基、另一端含有氨基-Cl-C6垸基的聚乙二醇衍生物。優選的是一端含有Cl-C3烷基、另一端含有氨基-Cl-C4烷基的聚乙二醇衍生物。特別優選的是一端含有甲基、另一端含有氨基丙基的聚乙二醇衍生物。在本發明中，"聚乙二醇"的重均分子量約為200-500,000，優選約為500-100,000，更優選約為2,000-50,000。在本發明中，"由聚乙二醇部分和側鏈含羧基的聚合物部分組成的高分子化合物"優選為嵌段型聚合物，更優選為聚乙二醇與側鏈含羧基的聚合物形成的嵌段共聚物。聚乙二醇與側鏈含羧基的聚合物形成的嵌段共聚物的例子包括垸氧基聚乙二醇-聚丙烯酸、烷氧基聚乙二醇-聚甲基丙烯酸和垸氧基聚乙二醇-聚穀氨酸；優選為甲氧基聚乙二醇-聚穀氨酸。在本發明中，"由聚乙二醇部分和側鏈含羧基的聚合物部分組成的高分子化合"每個分子中平均羧基數量約為3-200，優選約為5-100，更優選約為10-60。在本發明中，"由聚乙二醇部分和側鏈含羧基的聚合物部分組成的高分子化合物"的重均分子量約為500-500,000，優選約為2,000-100,000，更優選約為3,000-50，000。在本發明中，與由聚乙二醇部分和側鏈含羧基的聚合物部分組成的高分子化合物醯胺鍵連接的胞苷抗代謝劑的量不受特別限制，只要它在一個至各高分子化合物的羧基總數的範圍內，可以是該化合物體內給藥時足以發揮藥效的任一數目。優選為聚合物羧基總數的3-100%，更優選5-70%。可通過本發明化合物的紫外吸收光譜的強度測定上述鍵合數目。也可對本發明的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物進行鹼水解，(例如)用高效液相色譜確定胞苷抗代謝劑釋放量，從而確定該數目。可作為本發明胞苷抗代謝劑的聚合衍生物的典型化合物是上述通式(l)的化合物，式中，R代表氫原子或C1-C6烷基；A代表氫原子、Cl-C6醯基或Cl-C6烷氧基羰基；m作為平均值是3-200;n作為平均值是5-2,000;X代表胞苷抗代謝劑殘基、羥基或疏水性取代基；3-100。/。的m中，X代表胞苷抗代謝劑殘基，0-95。/。的m中，X代表羥基，0-80。/。的m中，X代表疏水性取代基。在式(1)中，R代表的C1-C6烷基與上述烷基含義相同；優選基團也與上述基團相同。就式(1)的A而言，Cl-C6醯基的例子包括甲醯基、乙醯基、丙醯基、丁醯基、異丁醯基、戊醯基、異戊醯基、新戊醯基和己醯基。優選的是C2-C4醯基，例如乙醯基或丙醯基；更優選的是乙醯基。就式(1)的A而言，Cl-C6垸氧基羰基的例子包括甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、異丙氧基羰基、正丁氧基羰基、叔丁氧基羰基、戊氧基羰基、己氧基羰基、環丙氧基羰基、環戊氧基羰基和環己氧基羰基。優選的是甲氧基羰基、乙氧基羰基、丙氧基羰基、異丙氧基羰基、丁氧基羰基或叔丁氧基羰基；更優選的是乙氧基羰基或叔丁氧基羰基。在式(1)中，m作為平均值是3-200，優選5-100，更優選10-60。在式(1)中，n作為平均值是5-2，000，優選50-1，000，更優選100-300。在本發明胞苷抗代謝劑的聚合衍生物的通式(l)中，其中X是胞苷抗代謝劑殘基、羥基或疏水性取代基的穀氨酸衍生物可以隨機結合或通過形成嵌段結合。在式(1)中，X代表的胞苷抗代謝劑殘基指上述胞苷抗代謝劑的殘基；胞苷抗代謝劑的特別優選的例子包括阿糖胞苷、吉西他濱和5'-脫氧-5-氟胞苷。在式(1)中，X代表的疏水性取代基的例子包括各種取代基；所述取代基不受特別限制，只要它不損害胞苷抗代謝劑的聚合衍生物藥效的發揮。然而，其優選例子包括上述式(4)所示的a-胺基酸衍生物以及上述式(5)所示基團，式(4)中Q代表中性胺基酸的側鏈，W代表Cl-C6烷基或苄基；式(5)中T代表用苯基任選取代的Cl-C6院基。式(4)中Q代表的中性胺基酸的側鏈的例子包括天然胺基酸殘基的側鏈，如氫原子、甲基、異丙基、異丁基、仲丁基、苄基、羥甲基、l-羥乙基、氨甲醯基甲基和2-氨甲醯基乙基，以及胺基酸殘基衍生物的側鏈，如叔丁氧基甲基、苄氧基甲基、苄氧基羰基甲基和2-節氧基羰基乙基。其優選例子包括異丙基、異丁基、仲丁基、苄基、苄氧基甲基、苄氧基羰基甲基和2-苄氧基羰基乙基；更優選的是異丙基、苄基、苄氧基甲基或2-苄氧基羰基乙基；尤其優選的是異丙基或苄基。式(4)中W代表的Cl-C6垸基的例子包括與上述烷基相同的基團；優選基團與上述基團相同。式(5)中T代表的C1-C6垸基與上述烷基含義相同；優選基團也與上述基團相同。式(5)所示基團的例子包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、正己氧基、環丙氧基、環戊氧基、環己氧基、環己基甲氧基、苄氧基、2-苯乙基氧基、3-苯基丙氧基、4-苯基丁氧基、5-苯基戊氧基和二苯基甲氧基。疏水性取代基的例子也包括氨基如甲基氨基、乙基氨基、正丙基氨基、異丙基氨基、正丁基氨基、異丁基氨基、正戊基氨基、正己基氨基、環丙基氨基、環戊基氨基、環己基氨基、環己基甲基氨基、二環己基甲基氨基、苯胺基、苄基氨基、2-苯乙基氨基、3-苯基丙基氨基、4-苯基丁基氨基和二苯基甲基氨基。式(1)中X代表的疏水性取代基特別優選苄氧基、3-苯基丙氧基、4-苯基丁氧基、5-苯基戊氧基、(l-節氧基羰基-2-甲基)丙基氨基或(l-苄氧基羰基-2-苯基)乙基氨基，更特別優選為苄氧基、4-苯基丁氧基、(l-苄氧基羰基-2-甲基)丙基氨基或(l-苄氧基羰基-2隱苯基)乙基氨基。在式(1)中，根據該聚合物的羧基總數(m)計，X是胞苷抗代謝劑殘基的比例為3-100%，優選5-70%;以m計，X是羥基的比例是0-95%,優選5-70%;以m計，X是疏水性取代基的比例為0-80%，優選20-70%。在本發明胞苷抗代謝劑的聚合衍生物中，當存在胞苷抗代謝劑未結合的側鏈羧基時，該羧基可以是其游離形式或者是其鹼性鹽形式。獲得其游離形式時，可用其已知的方法或基於其的方法將該羧基轉變為所需的鹽形式。反之，獲得其鹽形式時，可用其已知的方法或基於其的方法將羧基轉變為游離形式或另一種所需的鹽形式。鹼性鹽的例子包括鋰、鈉、鉀、鎂、銨和三乙胺的鹽。在本發明胞苷抗代謝劑的聚合衍生物中，存在光學異構體時，組成側鏈含羧基的聚合物部分的結構單元可以是光學活性物質、其外消旋體或其任何比例二者的混合物。例如，側鏈含羧基的聚合物部分是聚穀氨酸衍生物時，該衍生物可以是聚-L-穀氨酸、聚-D-穀氨酸和側鏈-取代的L-穀氨酸或側鏈-取代的D-穀氨酸以任何順序、任何比例結合形成的聚合物。本發明胞苷抗代謝劑的聚合衍生物的特別優選的例子包括下表1所示的化合物。在表1中，Bzl指苄基；Val，纈氨酸；Phe，苯丙氨酸；C4H8Ph，4-苯基丁基。在X中，取代百分數為近似值；表中所示殘基和基團以外的其它基團是羥基。作為X的胞苷抗代謝劑，阿糖胞苷、吉西他濱、5'-脫氧-5-氟胞苷、2'-脫氧-2'-亞甲基胞苷(DMDC)、3'-乙炔基胞苷、2'-C-氰基-2'-脫氧-l-p-D-阿拉伯呋喃糖基胞嘧啶(CNDAC)和(_)_(3丄_二氧戊環胞苷是以下化合物。[式6]阿糖胞苷吉西他濱5'-脫氧-5-氟胞苷2'-脫氧-2'-亞甲基胞苷3'-乙炔基胞苷2'-C-氰基-2'-脫氧-1-b-D-阿拉伯呋喃糖基胞嘧徒(-)-b-L-二氧戊環胞苷[表1]tableseeoriginaldocumentpage15tableseeoriginaldocumentpage16採用具體的非限制性實施例方法，在有機溶劑中用脫水縮合劑使胞苷抗代謝劑與按照專利文獻3所述方法製備的甲氧基聚乙二醇-聚穀氨酸嵌段共聚物縮合，從而產生本發明胞苷抗代謝劑的聚合衍生物。用於上述反應的溶劑不受特別限制，只要它能使反應進行；因而，其例子包括芳族烴如甲苯和二甲苯，滷代烴如二氯甲烷、氯仿和l，2-二氯乙垸，醚如四氫呋喃、二噁烷、二甲氧基乙垸和二乙二醇二甲基醚，腈如乙腈和丙腈，醯胺如二甲基甲醯胺、二甲基乙醯胺和N-甲基吡咯垸酮，脲如1,3-二甲基咪唑烷酮(l，3-dimethylimidazolidinone)，以及它們的混合溶劑。優選醯胺和脲；更優選二甲基甲醯胺或l,3-二甲基咪唑烷酮。用於上述反應的脫水縮合劑不受特別限制，只要它能使胞苷抗代謝劑4位氨基與羧基發生縮合反應；因而，其優選例子包括DMT-MM(4-(4,6-二甲氧基-l,3,5-三嗪_2_基)_4-甲基嗎啉鑥氯)和2-乙氧基-l-乙氧基羰基-l,2-二氫喹啉。上述反應的反應溫度一般為4-60。C，優選15-50°C。上述反應之後，可適當地應用其已知的分離方法，例如，真空濃縮、溶劑萃取、結晶、透析和層析(如果需要)，以分離和純化所需的化合物。用上述方法，可獲得其中X由單獨的胞苷抗代謝劑殘基組成或由胞苷抗代謝劑殘基和羥基組成的聚合衍生物。當本發明胞苷抗代謝劑的聚合衍生物含有疏水性取代基時，可在有機溶劑中用脫水縮合劑使胞苷抗代謝劑的氨基，與按照(例如)專利文獻3所述方法製備的在甲氧基聚乙二醇-聚穀氨酸嵌段共聚物的一部分羧基中引入了疏水性取代基而獲得的聚乙二醇部分和側鏈含羧基的聚合物部分組成的高分子化合物的側鏈中未取代的羧基縮合，從而產生此衍生物。可用以下方式引入此種疏水性取代基。例如，所述疏水性取代基為烷氧基時，引入如下進行在溶劑中用脫水縮合劑使相應醇與羧基縮合(酯化)，或在溶劑中、鹼存在下使相應的垸基滷等和羧基發生親核取代反應。例如，所述疏水性取代基是取代氨基時，可在溶劑中用脫水縮合劑使相應胺與羧基縮合(醯胺化)產生含有該取代基的衍生物。用於上述脫水縮合(酯化)的溶劑不受特別限制，只要它能使反應得以進行。因而，可採用的溶劑與上述甲氧基聚乙二醇-聚穀氨酸嵌段共聚物與胞苷抗代謝劑脫水縮合中所用的溶劑相同；優選的溶劑與上述溶劑相同。所述脫水縮合劑不受特別限制，只要它能使醇與羧基的脫水縮合得以進行；因而，優選的是二環己基碳二亞胺、二異丙基碳二亞胺、l-二甲基氨基丙基-3-乙基碳二亞胺、羰基二咪唑、氯甲酸異丁酯或特戊酸氯。脫水縮合反應中可釆用反應助劑；其例子包括N-羥基琥珀醯亞胺、1-羥基苯並三唑、4-二甲基氨基吡啶和2,6-二-叔丁基-4-甲基吡啶。脫水縮合反應的反應溫度一般為4-60°C，優選15-50°C。反應時間是2小時至數天，優選4-48小時。上述親核取代反應所用的溶劑不受特別限制，只要它能使該反應得以進行。因而，可採用的溶劑與上述甲氧基聚乙二醇-聚穀氨酸嵌段共聚物與胞苷抗代謝劑脫水縮合中所用的溶劑相同；優選的溶劑也與上述溶劑相同。鹼的例子包括鹼金屬碳酸鹽如碳酸鋰、碳酸鈉和碳酸鉀；鹼金屬氫化物如氫化鋰、氫化鈉和氫化鉀；鹼金屬氫氧化物如氫氧化鋰、氫氧化鈉和氫氧化鉀；鹼金屬醇鹽如甲醇鋰、甲醇鈉、乙醇鈉和叔丁醇鉀；以及有機胺如三乙胺、三丁胺、N,N-二異丙基乙胺、N-甲基嗎啉、吡啶、4-(N,N-二甲基氨基)吡啶、N,N-二甲基苯胺、N,N-二乙基苯胺、1,5-二氮雜雙環[4.3.0]壬-5-烯、1,4-二氮雜雙環[2.2.2]辛垸(0八8(:0)和1,8-二氮雜雙環[5.4.0]-7-i^—碳烯(DBU);優選的是有機胺。上述親核取代反應的反應溫度一般是4-6(TC，優選室溫-50'C。反應時間為l小時至數天，優選4-48小時。上述脫水縮合反應(醯胺化反應)所用的溶劑不受特別限制，只要它能使該反應得以進行。因而，可採用的溶劑與上述甲氧基聚乙二醇-聚穀氨酸嵌段共聚物與胞苷抗代謝劑脫水縮合中所用的溶劑相同；優選的溶劑與上述溶劑相同。所述脫水縮合劑不受特別限制，只要它能使得胺與羧基的反應得以進行；因而，優選的是二環己基碳二亞胺，二異丙基碳二亞胺，l-二甲基氨基丙基-3-乙基碳二亞胺，羰基二咪唑，氯甲酸異丁酯，特戊酸氯，DMT-MM(4-(4，6-二甲氧基-l,3,5-三嗪-2-基)-4-甲基嗎啉鏃氯)，TFFH(四甲基氟代脲六氟磷酸酯)或BOP(六氟磷酸苯並三唑-l-基氧三(二甲基氨基)轔)。所述脫水縮合反應中可採用反應助劑；其例子包括N-羥基琥珀醯亞胺、1-羥基苯並三唑、4-二甲基氨基卩比啶和2,6-二-叔丁基-4-甲基吡啶。所述脫水縮合反應的反應溫度一般為4-6(TC，優選室溫-5(TC。反應時間為l小時至數天，優選4-48小時。由於疏水性取代基和胞苷抗代謝劑結合於高分子化合物的反應順序無關緊要，可將它們混合進行反應。然而，優選在混合胞苷抗代謝劑之前將疏水性取代基引入聚合物載體，以避免抗代謝劑作為具有多官能基團的活性本體發生反應和分解。本發明胞苷抗代謝劑的聚合衍生物可在水中形成含有聚乙二醇部分外殼的膠束。可通過(例如)凝膠過濾色譜(GPC)或動態光散射鑑定此膠束的形成。在本發明中，未結合於胞苷抗代謝劑的羧基與疏水性取代基的結合有助於此膠束形成。本發明包括含有上述胞苷抗代謝劑的聚合衍生物作為藥用成分的抗腫瘤劑或抗病毒劑。胞苷抗代謝劑的聚合衍生物可以其原型或藥物組合物的形式給藥，在藥物組合物中它與藥學上可接受的物質混合。此藥物組合物的劑型可以是任何劑型，如注射劑、粉末劑、粒劑、片劑和栓劑。這些製劑也可含有各種藥用輔助物質，即載體和其它助劑，包括添加劑如穩定劑、防腐劑、鎮靜劑和乳化劑。在製劑中，胞苷抗代謝劑的聚合衍生物的含量因製劑不同而有很大變化；然而，一般為0.1-100重量％，優選1-98重量％。含有胞苷抗代謝劑的聚合衍生物作為藥用成分的本發明抗癌劑的適應症不受特別限制；因而，該藥物可用於癌症，例如非小細胞性肺癌、胰腺癌、胃癌、結腸癌、直腸癌、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌和AIDS-相關性卡波濟氏肉瘤。含有胞苷抗代謝劑的聚合衍生物作為藥用成分的本發明抗病毒劑的適應症不受特別限制；因而，該藥物可用於(例如)獲得性免疫缺陷綜合症(AIDS)、帶狀皰疹、單純皰疹病毒感染性疾病等，還可用於預防感染。本發明胞苷抗代謝劑的聚合衍生物可通過任何方法給藥，包括口服給藥、注射、直腸內給藥、門靜脈內給藥、混入器官灌注液和局部給予患病器官。然而，優選的是胃腸道外給藥；更優選通過注射靜脈內或動脈內給藥或者局部給予患病器官。本發明胞苷抗代謝劑的聚合衍生物的劑量取決於疾病狀態、給藥方法、患者的疾病、年齡和體重等；然而，劑量一般為每r^體表面積1mg-5,000mg，優選10mg-2,000mg，可以每天一次或分多次給藥。可每天給藥，間隔數天至數月重複給藥。如果需要，也可採用除上述以外的給藥方法、劑量和給藥方案。本發明的聚合衍生物也包括所結合的前藥。在本文中，前藥是有生物活性的母體化合物的化學衍生物，給予這種化合物時，能在體內釋放母體化合物。實施例以下參照實施例、參比實施例和測試實施例進一步詳細描述本發明。然而，本發明的範圍不應受它們的限制。參比實施例1:合成分子量約12,000的單甲氧基聚乙二醇與聚合數約為26的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物將一端含有甲氧基、另一端含有3-氨基丙基的聚乙二醇(SUNBRIGHTMEPA-12T，購自NOFCorporation,平均分子量12,000，16g)溶解於二甲亞碸(320mL)中，然後向其中加入Y-苄基-L-穀氨酸N-羧酸酐(BLG-NCA，9.48g;27當量，基於聚乙二醇)，然後於3(TC攪拌過夜。將該反應溶液逐滴加入攪拌的異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:1，6.4L)中，然後再攪拌3小時。過濾收集沉澱的沉積物，用異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:1，400mL)洗滌。將得到的產物(22.78g)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(370mL)中，加入乙酸酐(6.83mL)，然後於2(TC攪拌過夜。將得到的溶液逐滴加入攪拌的異丙基醚-乙酸乙酯混合溶劑(4:l，3.7L)中，然後再攪拌3小時。過濾收集沉澱的沉積物，用異丙基醚-乙酸乙酯混合溶劑(4:l，300mL)洗滌。將得到的產物(22.92g)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(370mL)，加入5%碳載鈀(含有55%水，2.50g)，接著於3CTC、氫氣氣氛下攪拌4小時，然後室溫過夜。濾除碳載鈀後，將濾出液逐滴加入攪拌的異丙基醚-乙酸乙酯混合溶劑(4:l，5L)，然後再攪拌l小時。過濾收集沉澱的沉積物，用異丙基醚-乙酸乙酯混合溶劑(4:l，300mL)洗滌。將得到的產物(16g)溶解於蒸餾水(800mL)中，加入1M氫氧化鈉水溶液，以將該溶液的pH調節為11。向其中加入蒸餾水，使溶液終體積為1,600mL，然後加入氯化鈉(80g)。使該溶液通過吸附樹脂柱HP-20ss(購自MitsubishiChemicalCorporation,500mL);用5%氯化鈉水溶液(2,000mL)和蒸餾水(20,000mL)洗滌該柱，然後用50%乙腈水溶液(2，500mL)洗脫。使含有所需化合物的洗脫組分通過陽離子交換樹脂柱Dowex50W(購自TheDowChemicalCompany,質子型，100mL);用50%乙腈水溶液(150mL)洗脫。減壓濃縮含有所需化合物的洗脫組分，直到溶液體積達到約300mL，然後凍幹，以提供標題化合物(15.84g)。根據用氫氧化鈉水溶液獲得的滴定值，該化合物一個分子中聚合的穀氨酸平均數(羧酸數)為26.22個。參比實施例2:合成分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇與聚合數約為41的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物按照參比實施例l所述方法，以聚乙二醇計，採用45當量BLG-NCA，以提供標題化合物。根據用氫氧化鈉水溶液獲得的滴定值，此化合物的一個分子中聚合的穀氨酸平均數(羧酸數)為41.45個。參比實施例3:合成分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇與聚合數約為24的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物按照參比實施例l所述方法，以聚乙二醇計，採用25當量BLG-NCA，以提供標題化合物。根據用氫氧化鈉水溶液獲得的滴定值，此化合物的一個分子中聚合的穀氨酸平均數(羧酸數)為23.70個。參比實施例4:合成分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇與聚合數約為32的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物按照參比實施例1所述方法，以聚乙二醇計，採用35當量BLG-NCA，以提供標題化合物。根據用氫氧化鈉水溶液獲得的滴定值，此化合物的一個分子中聚合的穀氨酸平均數(羧酸數)為31.71個。參比實施例5:合成分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇與聚合數約為36的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物按照參比實施例1所述方法，以聚乙二醇計，採用40當量BLG-NCA，以提供標題化合物。根據用氫氧化鈉水溶液獲得的滴定值，此化合物的一個分子中聚合的穀氨酸平均數(羧酸數)為35.90個。參比實施例6:合成分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇與聚合數約為21的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物按照參比實施例1所述方法，以聚乙二醇計，採用23當量BLG-NCA，以提供標題化合物。根據用氫氧化鈉水溶液獲得的滴定值，此化合物的一個分子中聚合的穀氨酸平均數(羧酸數)為21.38個。參比實施例7:合成分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇與聚合數約為26的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物按照參比實施例1所述方法，以聚乙二醇計，採用30當量BLG-NCA，以提供標題化合物。根據用氫氧化鈉水溶液獲得的滴定值，此化合物的一個分子中聚合的穀氨酸平均數(羧酸數)為26.48個。參比實施例8:合成L-苯丙氨酸苄酯與分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇和聚合數約為24的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物的醯胺偶聯物將參比實施例3所述的分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇與聚合數約為24的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物(1.533g)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(32mL)，然後加入L-苯丙氨酸苄酯4-甲苯磺酸鹽(0.464g)、TFFH(0.286g)、N,N-二異丙基乙胺(0.672mL)和2,6-二-叔丁基-4-甲基吡啶(0.495g)，接著於37。C攪拌該混合物20小時。將該反應溶液冷卻至室溫，然後用乙醇(64mL)稀釋，接著在攪拌下逐滴加入二異丙基醚(256mL)。攪拌30分鐘後，過濾收集沉澱的沉積物，用二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:1)洗滌。將得到的產物溶解於30。/。乙腈水溶液(45mL)，用透析膜(分子量截取值為12，000-14,000)以蒸餾水(2Lx3)進行透析。將乙腈(15mL)加入透析過的溶液中，使該混合物通過陽離子交換樹脂Dowex50W(質子型)，用50%乙腈水溶液洗脫。將含有所需化合物的洗脫組分減壓濃縮至1/2體積，凍幹得到標題化合物(1.689g)。水解該化合物後，用高效液相色譜(HPLC)定量釋放的苯甲醇，以測定此化合物中Phe-Obzl基團的醯胺鍵合率。結果是，以聚穀氨酸的羧基計，鍵合率為32.8%。水解方法將標題化合物(34.48mg)溶解於甲醇(lmL)，然後加入0.5M氫氧化鈉水溶液(lmL)，40。C攪拌l小時。用乙酸中和該溶液，蒸餾水稀釋，準確製備5mL溶液。HPLC的分析條件(分析苄醇)柱InertsilODS-3(粒度5^m)，4.6(|)x150mm;柱溫40°C;洗脫液溶液A:1%磷酸水溶液，溶液B:乙腈；梯度。/。溶液B(時間分鐘)30(0)，80(10);流速lmL/分鐘；檢測器(檢測波長)UV(260nm)參比實施例9:合成L-苯丙氨酸苄酯與分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇和聚合數約為41的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物的醯胺偶聯物將參比實施例2所述的分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇與聚合數約為41的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物(176.5mg)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(5.3mL)，然後加入L-苯丙氨酸苄酯4-甲苯磺酸鹽(63.0mg)、TFFH(38.9mg)、N,N-二異丙基乙胺(117.3pL)和2，6-二-叔丁基-4-甲基吡啶(87.0mg)，接著於37。C攪拌該混合物22小時。將該反應溶液冷卻至室溫，然後用乙醇(10.6mL)稀釋，接著在攪拌下向其中逐滴加入二異丙基醚(42.4mL)。攪拌30分鐘後，過濾收集沉澱的沉積物，用二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:l)洗滌。將得到的產物溶解於20。/。乙腈水溶液(16mL)，用透析膜(分子量截取值為12,000-14,000)以蒸餾水(2Lx3)進行透析。使透析過的溶液通過陽離子交換樹脂Dowex50W(質子型，9mL)，用50%乙腈水溶液洗脫。將含有所需化合物的洗脫組分凍幹，以得到標題化合物(194.0mg)。以參比實施例8所述的方法水解該化合物後，在與參比實施例8所述相同的條件下，用高效液相色譜(HPLC)定量釋放的苯甲醇，以測定該化合物中Phe-Obzl基團的醯胺鍵合率。結果是，以聚穀氨酸的羧基計，鍵合率為32.6%。參比實施例10:合成L-苯丙氨酸苄酯與分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇和聚合數約為32的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物的醯胺偶聯物將參比實施例4所述的分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇與聚合數約為32的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物(668mg)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(13mL)，加入L-苯丙氨酸苄酯4-甲苯磺酸鹽(282mg)、TFFH(175mg)和N,N-二異丙基乙胺(345pL)，然後於4(TC攪拌該混合物20小時。將該反應溶液冷卻至室溫，然後用乙醇(26mL)稀釋，接著在攪拌下逐滴加入二異丙基醚(104mL)。過濾收集沉澱的沉積物，用二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:l)洗滌。將得到的產物溶解於50。/。乙腈水溶液(16mL)，用透析膜(分子量截取值為12,000-14，000)以蒸餾水(2Lx3)透析。使透析過的溶液通過陽離子交換樹脂Dowex50W(質子型，10mL)，然後用50%乙腈水溶液洗脫。將含有所需化合物的洗脫組分凍幹，以得到標題化合物(762mg)。以參比實施例8所述的方法水解該化合物後，在與參比實施例8所述相同的條件下，用高效液相色譜(HPLC)定量釋放的苯甲醇，以測定該化合物中Phe-Obzl基團的醯胺鍵合率。結果是，以聚穀氨酸的羧基計，鍵合率為41.8%。參比實施例ll:合成L-纈氨酸苄酯與分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇和聚合數約為36的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物的醯胺偶聯物將參比實施例5所述的分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇與聚合數約為36的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物(531mg)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(10.6mL)中，加入L-纈氨酸苄酯4-甲苯磺酸(195mg)、TFFH(135mg)和N,N-二異丙基乙胺(288pL)，然後於40。C攪拌該混合物30小時。將該反應溶液冷卻至室溫，然後用乙醇(20mL)稀釋，接著在攪拌下逐滴加入二異丙基醚(80mL)。攪拌30分鐘後，過濾收集沉澱的沉積物，用二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:l)洗滌。將得到的產物溶解於30%乙腈水溶液(25mL)，用透析膜(分子量截取值為12,000-14，000)以蒸餾水(2Lx3)透析。將陽離子交換樹脂Dowex50W(質子型，3mL)加入透析過的溶液中，攪拌30分鐘，隨後濾除樹脂。將含有所需化合物的濾出液凍幹，以得到標題化合物(559mg)。以參比實施例8所述的方法水解該化合物後，在與參比實施例8所述相同的條件下，用高效液相色譜(HPLC)定量釋放的苯甲醇，以測定該化合物中Val-OBzl基團的醯胺鍵合率。結果是，以聚穀氨酸的羧基計，鍵合率為41.3%。參比實施例12:合成L-苯丙氨酸苄酯與分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇和聚合數約為26的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物的醯胺偶聯物將參比實施例1所述的分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇與聚合數約為26的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物(6.00g)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(150mL)，加入L-苯丙氨酸苄酯鹽酸鹽(2.08g)、DMT-MM(2.37g)和N,N-二異丙基乙胺(1.24mL)，然後於4(TC攪拌該混合物過夜。將該反應溶液冷卻至室溫，接著逐滴加入二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:l，1,500mL)。攪拌30分鐘後，過濾收集沉澱的沉積物，用二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:l)洗滌。將得到的產物溶解於97重量％的DMF水溶液(150mL)中，加入陽離子交換樹脂Dowex50W(質子型，15mL)，室溫攪拌2小時，然後濾除樹脂，用DMF(75mL)洗滌該樹脂。將得到的濾出液逐滴加入二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:1)(2,400mL)中，攪拌30分鐘，隨後過濾收集沉澱的沉積物，以得到標題化合物(6.88g)。以參比實施例8所述的方法水解該化合物後，在與參比實施例8所述相同的條件下，用高效液相色譜(HPLC)定量釋放的苯甲醇，以測定該化合物中Phe-Obzl基團的醯胺鍵合率。結果是，以聚穀氨酸的羧基計，鍵合率為62.4%。參比實施例13:合成節基溴與分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇和聚合數約為26的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物的酯偶聯物將參比實施例1所述的分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇與聚合數約為26的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物(342mg)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(6.8mL)，加入苄基溴(29.0pL)和N,N-二異丙基乙胺(53.1^L)，隨後於37。C攪拌該混合物過夜。將該反應溶液冷卻至室溫，用乙醇(13.6mL)稀釋，在攪拌下向其中逐滴加入二異丙基醚(54.4mL)。攪拌1小時後，過濾收集沉澱的沉積物，用二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:1)洗滌。將得到的產物溶解於50Q/。乙腈水溶液(20mL)中，使該溶液通過陽離子交換樹脂Dowex50W(質子型，4mL)，然後用50%乙腈水溶液洗脫。將含有所需化合物的洗脫組分減壓濃縮至1/2體積，凍幹，以得到標題化合物(352mg)。以參比實施例8所述的方法水解該化合物後，在與參比實施例8所述相同的條件下，用高效液相色譜(HPLC)定量釋放的苯甲醇，以測定該化合物中Obzl基團的醯胺鍵合率。結果是，以聚穀氨酸的羧基計，鍵合率為25.0%。參比實施例14:合成4-苯基丁基溴與分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇和聚合數約為26的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物的酯偶聯物將參比實施例7所述的分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇與聚合數約為26的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物(2.33g)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(50mL)，加入4-苯基丁基溴(682mg)和1,8-二氮雜雙環[5.4.0]-7-H碳烯(DBU，598^L)，隨後於3rC攪拌該混合物過夜。將該反應溶液冷卻至室溫，然後逐滴加入二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:1，500mL)。攪拌1小時後，過濾收集沉澱的沉積物，用二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:l)洗滌。將得到的產物溶解於50%乙腈水溶液中，加入陽離子交換樹脂Dowex50W(質子型，5mL)，接著攪拌該混合物2小時，隨後濾除樹脂，凍幹該濾出液，以得到標題化合物(2.54g)。以參比實施例8所述的方法水解該化合物後，在與參比實施例8所述相同的條件下，用高效液相色譜(HPLC)定量釋放的苯甲醇，以測定該化合物中4-苯基丁氧基的醯胺鍵合率。結果是，以聚穀氨酸的羧基計，鍵合率為65.7%。實施例1:式(l)胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其中R是甲基；A是乙醯基；n的平均值是272;m的平均值是21;X是吉西他濱或羥基將N，N-二甲基甲醯胺(15mL)和N,N-二異丙基乙胺(192^L)加入參比實施例6所述的分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇與聚合數約為21的聚穀氨酸的N-乙醯化的嵌段共聚物(759mg)和鹽酸吉西他濱(330mg)中，於37。C攪拌。溶解後，加入2-乙氧基-l-乙氧基羰基-l，2-二氫喹啉(EEDQ，300mg)，於37"攪拌20小時。將該反應溶液冷卻至室溫，然後用乙醇(30mL)稀釋，在攪拌下逐滴加入二異丙基醚(120mL)。攪拌1小時後，過濾收集沉澱的沉積物，用二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:l)洗滌。將得到的產物溶解於25%乙腈水溶液(40mL)中，用透析膜(分子量截取值為12,000-14,000)以蒸餾水(2Lx3)透析。將透析過的溶液凍幹，以得到標題化合物(1,078mg)。水解該化合物後，用高效液相色譜(HPLC)定量釋放的吉西他濱，以二氮該化合物的吉西他濱含量。結果是，鹽酸吉西他濱含量為20.8y。(w/w)(以聚羧酸的羧基計為58.0%)。此外，對本發明化合物進行HPLC分析時，游離吉西他濱的含量為0.3%或更低。水解方法將標題化合物(3.60mg)溶解於甲醇(0.5mL)，加入濃氨水(0.5mL)，然後密封，37。C攪拌l小時。用乙酸中和該溶液，用蒸餾水稀釋，準確製備10mL溶液。HPLC的分析條件(分析吉西他濱)柱Inertsil0DS-3(粒度5,)，4.6<))x150mm;柱溫40°C;洗脫液950/。磷酸鹽緩衝液(10mM，pH6.9)-5。/。乙腈；流速lmL/分鐘；檢測器(檢測波長)UV(275nm)實施例2:式(l)胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其中R是甲基；A是乙醯基；tl的平均值是272;m的平均值是24;X是吉西他濱、羥基或L-苯丙氨酸節酯殘基將N,N-二甲基甲醯胺(26mL)和N,N-二異丙基乙胺(0.213mL)加入參比實施例8所述的化合物(1.298g)和鹽酸吉西他濱(0.366g)中，37"C攪拌。溶解後，加入2-乙氧基-l-乙氧基羰基-l，2-二氫喹啉(EEDQ,0.362g)，37。C攪拌過夜。將該反應溶液冷卻至室溫，然後用乙醇(52mL)稀釋，在攪拌下逐滴加入二異丙基醚(208mL)。攪拌1小時後，過濾收集沉澱的沉積物，用二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:l)洗滌。將得到的產物溶解於25%乙腈水溶液(40mL)中，用透析膜(分子量截取值為12,000-14,000)以蒸餾水(2Lx3)透析。將透析過的溶液凍幹，以得到標題化合物(1.330g)。以實施例1所述方法水解該化合物後，在與參比實施例1所述相同的條件下，用高效液相色譜(HPLC)定量釋放的吉西他濱，以測定該化合物的吉西他濱含量。結果是，鹽酸吉西他濱含量為10,7。/。(w/w)(以聚羧酸的羧基計為28.1%)。此外，對本發明化合物進行HPLC分析時，游離吉西他濱的含量為0.3%或更低。實施例3:式(l)胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其中R是甲基；A是乙醯基；n的平均值是272;m的平均值是41;X是吉西他濱、羥基或L-苯丙氨酸苄酯殘基將N，N-二甲基甲醯胺(3.3mL)和N,N-二異丙基乙胺(39.2pL)加入參比實施例9所述的化合物(165mg)和鹽酸吉西他濱(67.4mg)中，37。C攪拌。溶解後，加入2-乙氧基-l-乙氧基羰基-l,2-二氫喹啉(EEDQ，56.0mg)，37'C攪拌23小時。將該反應溶液冷卻至室溫，然後用乙醇(6.6mL)稀釋，在攪拌下逐滴加入二異丙基醚(26.4mL)。攪拌30分鐘後，過濾收集沉澱的沉積物，用二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:l)洗滌。將得到的產物溶解於10。/。乙腈水溶液(16mL)中，用透析膜(分子量截取值為12,000-14，000)以蒸餾水(2Lx3)透析。將透析過的溶液凍幹，以得到標題化合物(183mg)。以實施例1所述方法水解該化合物後，在與參比實施例1所述相同的條件下，用高效液相色譜(HPLC)定量釋放的吉西他濱，以測定該化合物的吉西他濱含量。結果是，鹽酸吉西他濱含量為21.2y。(w/w)(以聚羧酸的羧基計為42.6。/cO。此外，對本發明化合物進行HPLC分析時，游離吉西他濱的含量為0.3%或更低。實施例4:式(l)胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其中R是甲基；A是乙醯基；n的平均值是272;m的平均值是26;X是吉西他濱、羥基或節氧基將N，N-二甲基甲醯胺(6mL)和N,N-二異丙基乙胺(63.1^L)加入參比實施例13所述的化合物(295mg)和鹽酸吉西他濱(108.5mg)中，37匸攪拌。溶解後，加入2-乙氧基-l-乙氧基羰基-l,2-二氫喹啉(EEDQ,98.2mg)，37。C攪拌23小時。將該反應溶液冷卻至室溫，然後用乙醇乙醇(12mL)稀釋，在攪拌下逐滴加入二異丙基醚(48mL)。攪拌30分鐘後，過濾收集沉澱的沉積物，用二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:l)洗滌。將得到的產物溶解於10%乙腈水溶液(16mL)中，用透析膜(分子量截取值為12,000-14,000)以蒸餾水(2Lx3)透析。將透析過的溶液凍幹，以得到標題化合物(334mg)。以實施例1所述方法水解該化合物後，在與參比實施例1所述相同的條件下，用高效液相色譜(HPLC)定量釋放的吉西他濱，以測定該化合物的吉西他濱含量。結果是，鹽酸吉西他濱含量為20.5n/。(w/w)(以聚羧酸的羧基計為49.9。/。)。此外，對本發明化合物進行HPLC分析時，游離吉西他濱的含量為5.1%。實施例5:式(l)胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其中R是甲基；A是乙醯基；n的平均值是272;m的平均值是36;X是吉西他濱、羥基或L-纈氨酸苄酯殘基將N,N-二甲基甲醯胺(10.3mL)和N,N-二異丙基乙胺(77.9pL)加入參比實施例11所述的化合物(515mg)和鹽酸吉西他濱(134mg)中，40'C攪拌。溶解後，加入2-乙氧基-l-乙氧基羰基-l,2-二氫喹啉(EEDQ,166mg)，40。C攪拌20小時。將該反應溶液冷卻至室溫，然後用乙醇(20.6mL)稀釋，在攪拌下逐滴加入二異丙基醚(82.4mL)。過濾收集沉澱的沉積物，用二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:l)洗滌。將得到的產物溶解於30%乙腈水溶液(20mL)中，用透析膜(分子量截取值為12,000-14,000)以蒸餾水(2Lx3)透析。將透析過的溶液凍幹，以得到標題化合物(574mg)。以實施例1所述方法水解該化合物後，在與參比實施例1所述相同的條件下，用高效液相色譜(HPLC)定量釋放的吉西他濱，以測定本發明化合物中的吉西他濱含量。結果是，鹽酸吉西他濱含量為14.1%(/)(以聚羧酸的羧基計為28.8%)。此外，對本發明化合物進行HPLC分析時，游離吉西他濱的含量為0.2%或更低。實施例6:式(l)胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其中R是甲基；A是乙醯基；n的平均值是272;m的平均值是26;X是吉西他濱、羥基或L-苯丙氨酸苄酯殘基將N，N-二甲基甲醯胺(75mL)和N,N-二異丙基乙胺(286pL)加入參比實施例12所述的化合物(3.0g)和鹽酸吉西他濱(492mg)中，40。C攪拌。溶解後，加入2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氫喹啉(￡￡0(^，508mg)，4(TC攪拌24小時。將該反應溶液冷卻至室溫，然後逐滴加入二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:l)(750mL)。攪拌30分鐘後，過濾收集沉澱的沉積物，用二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:l)洗滌。將得到的產物溶解於50%乙腈水溶液(50mL)中，用透析膜(分子量截取值為12,000-14,000)以蒸餾水(3Lx3)透析。將透析過的溶液凍幹，以得到標題化合物(2.94g)。以實施例1所述方法水解該化合物後，在與參比實施例1所述相同的條件下，用高效液相色譜(HPLC)定量釋放的吉西他濱，以測定該化合物的吉西他濱含量。結果是，鹽酸吉西他濱含量為4.67。/。(w/w)(以聚羧酸的羧基計為11.9%)。此外，對本發明化合物進行HPLC分析時，游離吉西他濱的含量為0.2%或更少。實施例7:式(l)胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其中R是甲基；A是乙醯基；n的平均值是272;m的平均值是26;X是吉西他濱、羥基或4-苯基丁醇殘基將N,N-二甲基甲醯胺(50mL)和N,N-二異丙基乙胺(218^L)加入參比實施例14所述的化合物(2.07g)和鹽酸吉西他濱(375mg)中，40。C攪拌。溶解後，'加入2-乙氧基-l-乙氧基羰基-l，2-二氫喹啉(EEDQ，386mg),4(TC攪拌24小時。將該反應溶液冷卻至室溫，然後逐滴加入二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:l，750mL)。攪拌1小時後，過濾收集沉澱的沉積物，用二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:l)洗滌。將得到的產物溶解於50%乙腈水溶液(25mL)中，用透析膜(分子量截取值為12,000-14,000)以蒸餾水(3Lx3)透析。將透析過的溶液凍幹，以得到標題化合物(2.05g)。以實施例1所述方法水解該化合物後，在與參比實施例1所述相同的條件下，用高效液相色譜(HPLC)定量釋放的吉西他濱，以測定本發明化合物中的吉西他濱含量。結果是，鹽酸吉西他濱含量為7.35y。(w/w)(以聚羧酸的羧基計為17.5%)。此外，對本發明化合物進行HPLC分析時，游離吉西他濱的含量為0.2%或更低。實施例8:式(l)胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其中R是甲基；A是乙醯基；n的平均值是272;m的平均值是32;X是阿糖胞苷或羥基將參比實施例4所述的分子量約為12,000的單甲氧基聚乙二醇與聚合數約為32的聚穀氨酸(130mg)的N-乙醯化的嵌段共聚物和阿糖胞苷(50.0mg)溶解於N，N-二甲基甲醯胺(2.6mL)，加入2-乙氧基-l-乙氧基羰基-l,2-二氫喹啉(EEDQ，63.6mg)，40°C攪拌24小時。將該反應溶液冷卻至室溫，然後用乙醇(5.2mL)稀釋，接著在攪拌下逐滴加入二異丙基醚(20.8mL)。攪拌30分鐘後，過濾收集沉澱的沉積物，用二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:l)洗滌。將得到的產物溶解於20%乙腈水溶液，用透析膜(分子量截取值為12,000-14,000)以蒸餾水(2Lx3)透析。將透析過的溶液凍幹，以得到標題化合物(143mg)。水解該化合物後，用高效液相色譜(HPLC)定量釋放的阿糖胞苷，以測定該化合物的阿糖胞苷含量。結果是，阿糖胞苷含量為22.5y。(w/w)(以聚羧酸的羧基計為59.2%)。水解方法將標題化合物(3.20mg)溶解於甲醇(0.5mL)，加入濃氨水(0.5mL)，然後密封，37'C攪拌1小時。用乙酸中和該溶液，接著用蒸餾水稀釋，準確製備10mL溶液。HPLC的分析條件(分析阿糖胞苷)柱SUPELCODiscoveryHSF5(粒度:5(im)，4.6(|)x250mm;柱溫40°C;洗脫液磷酸鹽緩衝液(10mM，pH6.9);流速1mL/分鐘；檢測器(檢測波長)UV(275nm)實施例9:式(l)胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其中R是甲基；A是乙醯基；n的平均值是272;m的平均值是32;X是阿糖胞苷、羥基或L-苯丙氨酸苄酯殘基將參比實施例10所述的化合物(267mg)和阿糖胞苷(50.0mg)溶解於N,N-二甲基甲醯胺(5.3mL)，加入2-乙氧基-l-乙氧基羰基-l,2-二氫喹啉(EEDQ，63.6mg)，40°C攪拌21小時。將該反應溶液冷卻至室溫，然後用乙醇(10.6mL)稀釋，在攪拌下逐滴加入二異丙基醚(42.4mL)。攪拌30分鐘後，過濾收集沉澱的沉積物，用二異丙基醚-乙醇混合溶劑(4:1)洗滌。將得到的產物溶解於30%乙腈水溶液中，用透析膜(分子量截取值為12，000-14,000)以蒸餾水(2Lx3)透析。將透析過的溶液凍幹，以得到標題化合物(290mg)。按照實施例8所述方法水解該化合物後，在與實施例8所述相同的條件下，用高效液相色譜(HPLC)定量釋放的阿糖胞苷，以測定該化合物的阿糖胞苷含量。結果是，阿糖胞苷的含量為11.3%(w/w)(以聚羧酸的羧基計為31.5%)。測試實施例1:沒有酶的藥物釋放測試將實施例1化合物(圖1中的化合物1)、實施例2化合物(圖1中的化合物2)或實施例7化合物(圖1中的化合物7)溶解於磷酸鹽緩衝鹽水(pH7.4)中，濃度為1.0mg/mL，然後37'C恆溫靜置。用HPLC隨時間推移測定吉西他濱釋放量，以測定吉西他濱釋放量佔所用化合物中吉西他濱總量的百分數。結果見圖1。結果是，本發明化合物以不依賴酶的方式緩慢釋放吉西他濱。測試實施例2:小鼠血漿中的藥物釋放測試將實施例1化合物(2.3mg;圖2中的化合物l)或實施例2化合物(3.7mg;圖2中的化合物2)溶解於磷酸鹽緩衝鹽水(0.1mL，pH7.4)中，加入4倍量(Wv)的從小鼠收集和製備的血漿(0.4mL)，讓該混合物37'C恆溫靜置。隨時間推移每次取50微升等份，用50。/。甲醇水溶液(450pL)稀釋。用濾膜(孔徑0.45pm)對該溶液進行脫蛋白處理，接著用HPLC測定吉西他濱的釋放量，以測定吉西他濱釋放量佔所用化合物中吉西他濱總量的百分數。結果見圖2。顯示本發明化合物在血漿中也緩慢釋放吉西他濱。測試實施例3:對荷瘤小鼠的抗腫瘤作用(l)通過連續皮下植入小鼠培養鼠結腸癌Colon26細胞。將Colon26腫瘤切成約2-mm見方的片段，用套管針將這些瘤塊皮下植入小鼠。植入腫瘤7天後，將實施例1化合物(表2的化合物1)、實施例2化合物(表2的化合物2)、實施例4化合物(表2的化合物4)和作為對照藥物的鹽酸吉西他濱分別溶解於5%葡萄糖注射液中，各化合物或對照藥物以表2所述劑量靜脈內給藥一次。在開始給藥那天和開始給藥後第7天測定腫瘤大小，用以下公式計算腫瘤體積。評估給藥7天後與開始給藥那天的相對腫瘤體積。結果見表2。[公式1]ba疏粉衡3、-[腫瘤的較大直徑(mm)]x[腫瘤的較小直徑(附m)]x[腫瘤的較小直徑]表2]藥物劑量(鹽酸吉西他濱)(mg/kg)相對腫瘤體積'未治療08.8±4.9化合物150250.4±0.21,5±0.5化合物212.56.250.5±0.32.4±1.1化合物4256.250.5±0.13.6±0.5對照藥物2001001.4±0.12.6±0.7將開始給藥那天的腫瘤體積設定為1.0時，開始給藥7天後的平均相對腫瘤體積(平均值土SD)。從這些結果可以明顯看出，與對照藥物鹽酸吉西他濱相比，本發明化合物在較低劑量下具有相同或更高的抗腫瘤作用。也證明，含疏水性取代基的本發明化合物(實施例2或4的化合物)降低劑量後的療效與沒有疏水性取代基的化合物(實施例1化合物)相當。測試實施例4:對荷瘤小鼠的抗腫瘤作用(2)通過小鼠連續皮下植入培養鼠結腸癌Colon26細胞。將Colon26腫瘤切成約2-mm見方的片段，用套管針將這些腫瘤塊皮下植入小鼠。植入腫瘤7天後，將實施例7化合物(表3的化合物7)和作為對照藥物的吉西他濱分別溶解於5%葡萄糖注射液中，各自以表3所述劑量靜脈內給藥一次。如測試實施例3所述，在開始給藥那天和開始給藥後第10天測定腫瘤體積。評估給藥10天後與開始給藥那天的相對腫瘤體積。結果見表3。表3]藥物劑量(鹽酸吉西他濱)(mg/kg)相對腫瘤體積'未治療010.5±5.0化合物72516.70.3±0.31.1±0.5對照藥物2001003.4±0.63.9±0.5將開始給藥那天的腫瘤體積設定為1.0時，開始給藥7天後的平均相對腫瘤體積(平均值士SD)。從這些結果可以明顯看出，與作為對照藥物的鹽酸吉西他濱相比，本發明化合物降低劑量時仍具有相同或更高的抗腫瘤作用。測試實施例5:對荷瘤小鼠的抗腫瘤作用(3)通過小鼠連續皮下植入培養鼠結腸癌Colon26細胞。將Colon26腫瘤切成約2-mm見方的片段，用套管針將這些腫瘤塊皮下植入小鼠。植入腫瘤7天後，將實施例8化合物(表4的化合物8)、實施例9化合物(表4的化合物9)和作為對照藥物的阿糖胞苷分別溶解於5%葡萄糖注射液中，各化合物或對照藥物以表4所述劑量靜脈內給藥一次。如測試實施例3所述，在開始給藥那天和開始給藥後第IO天計算腫瘤體積。評估給藥10天後與開始給藥那天的相對腫瘤體積。結果見表4。[表4]藥物劑量(阿糖胞苷)(mg/kg)相對腫瘤體積^未治療010.4±4.0化合物82001006.9±1.39.4±2.8化合物91501005.7±1.56.4±0.516008.4±2.9對照藥物80010.0±3.3100x59.0±2.0將開始給藥那天的腫瘤體積設定為1.0時，開始給藥10天後的平均相對腫瘤體積(平均值土SD)。'以100mg/kg連續給藥5天從這些結果可以明顯看出，與作為對照藥物的阿糖胞苷相比，本發明化合物在較低劑量下具有更高的抗腫瘤作用。也證明，含有疏水性取代基的化合物(實施例9化合物)降低劑量後的療效與沒有疏水性取代基的化合物(實施例8化合物)相當。權利要求1.一種胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其結構為胞苷抗代謝劑的氨基與由聚乙二醇部分和側鏈含羧基的聚合物部分組成的高分子化合物側鏈中的羧基形成醯胺鍵。2.如權利要求l所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其特徵在於，所述側鏈含羧基的聚合物部分包含聚穀氨酸鏈。3.如權利要求1或2所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其特徵在於，所述衍生物是通式(l)所示的化合物式中R代表氫原子或Cl-C6垸基；A代表氫原子、Cl-C6醯基或Cl-C6烷氧基羰基；m作為平均值是3-200;n作為平均值是5-2,000;X代表胞苷抗代謝劑殘基、羥基或疏水性取代基；3-100。/。的m中，X代表胞苷抗代謝劑殘基，0-95%的111中，X代表羥基，0-8(P/。的m中，X代表疏水性取代基。4.如權利要求3所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其特徵在於，R代表Cl-C3垸基；A代表C2-C4醯基；m作為平均值是5-100;n作為平均值是50-1,000;所述胞苷抗代謝劑殘基是式(2)代表的基團formulaseeoriginaldocumentpage2式中，Z代表氫原子或氟原子；-1^代表選自式(3)取代基的基團:[式9]formulaseeoriginaldocumentpage3(3)5.如權利要求3所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其特徵在於，R代表甲基；A代表乙醯基；m作為平均值是10-60;n作為平均值是100-300;X代表胞苷抗代謝劑殘基或羥基；所述胞苷抗代謝劑是阿糖胞苷、吉西他濱或5'-脫氧-5-氟胞苷。6.如權利要求3或4所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其特徵在於，所述疏水性取代基代表式(4)所示的oc-胺基酸衍生物[式10](4)式中，Q代表天然胺基酸側鏈；W代表C1-C6垸基或苄基。7.如權利要求6所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其特徵在於，Q代表異丙基或苄基；W代表苄基。8.如權利要求3或4所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其特徵在於，所述疏水性取代基代表式(5)所示的基團[式11]O畫T(5)式中，T代表被苯基任選取代的C1-C6垸基。9.如權利要求8所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其特徵在於，T代表苄基、3-苯基丙基、4-苯基丁基或5-苯基戊基。10.如權利要求3所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物，其特徵在於，R代表甲基；A代表乙醯基；m作為平均值是10-60;n作為平均值是100-300;所述胞苷抗代謝劑是阿糖胞苷、吉西他濱或5'-脫氧-5-氟胞苷；所述疏水性取代基是苄氧基、4-苯基丁氧基、(l-苄氧基羰基-2-甲基)丙基氨基或(l-苄氧基羰基-2-苯基)乙基氨基。11.一種抗癌劑，其含有權利要求1-10中任一項所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物作為藥用成分。12.—種抗病毒劑，其含有權利要求1-10中任一項所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物作為藥用成分。13.—種生產權利要求1-10中任一項所述的胞苷抗代謝劑的聚合衍生物的方法，所述方法包括在有機溶劑中用脫水縮合劑使胞苷抗代謝劑的氨基與由聚乙二醇部分和側鏈含羧基的聚合物部分組成的高分子化合物側鏈中的羧基形成醯胺連接。全文摘要[問題]提供一種低劑量即可發揮高療效的胞苷代謝拮抗劑的衍生物。[解決問題的方式]一種胞苷代謝拮抗劑的聚合衍生物，其包含高分子化合物和胞苷代謝拮抗劑，其中所述高分子化合物含有聚乙二醇部分和側鏈含羧基的聚合物部分，所述聚合衍生物的結構為所述高分子化合物側鏈中的羧基和所述胞苷代謝拮抗劑中的氨基結合在一起形成醯胺鍵。文檔編號C08G65/08GK101218280SQ20068001616公開日2008年7月9日申請日期2006年4月27日優先權日2005年5月11日發明者增田亮,山本啟一朗,恩田健,真柴洋子,高塩一俊申請人:日本化藥株式會社