一種治療癌性疼痛中藥組合物的質量控制方法及應用的製作方法

2023-06-01 13:04:21 4

專利名稱：一種治療癌性疼痛中藥組合物的質量控制方法及應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥組合物的質量控制方法及其應用，特別涉及一種用於治療癌性疼痛的中藥組合物的質量控制方法及其應用。
背景技術：
疼痛是癌症患者最常見、最難忍受的症狀之一，它常比癌症引起死亡更令人畏懼。根據統計資料，我國目前有癌症病人超過700萬，其中51-62％的病人伴隨不同程度的疼痛，其中40％為輕度疼痛，30％為中度疼痛，30％為重度疼痛。國內最新資料指出我國腫瘤疼痛的病人中僅有41％得到有效緩解，而晚期癌痛僅有25％得到有效緩解。癌痛不同於一般的炎性疼痛，通常由以下原因引起腫瘤直接壓迫、刺激神經；腫瘤骨骼轉移；腫瘤對痛覺敏感組織(血管、淋巴管等)的刺激；腫瘤分泌因子致痛、伴隨炎症因素致痛；手術後、放射治療後、化療後和其他治療後疼痛；目前臨床治療癌症疼痛的方法主要包括採用WHO三階梯癌痛治療方案等的化學藥物治療以及中醫中藥、理療、心理療法和外科治療等。經過數年臨床實踐，WHO三階梯癌痛治療方案已經成為一個被國際上廣泛接受的止痛方法，能使90％患者的癌症疼痛得到有效緩解。第一階梯採用非阿片類藥物如阿司匹林、芬必得等，第二階梯採用弱阿片類如可待因、強痛定、鹽酸曲馬多，第三階梯採用強阿片類如鹽酸哌替啶(杜冷丁)、嗎啡等。由於阿片類藥物均會引起噁心、嘔吐等不良反應，甚或有戒斷症狀和成癮性，我國對於阿片類藥物的控制非常嚴格，加之醫生和患者對癌症疼痛的專業教育不足，以致WHO三階梯癌痛治療方案在國內的推行工作並不理想，較多癌症患者的疼痛不能得到緩解，嚴重影響了他們的生活質量。在這種情況下，由於中藥公認的低成癮性、低耐受性、低毒副作用，從中尋找有效的癌症疼痛治療藥物已逐漸成為一個重要的新藥研發方向。但是，到目前為止，此類研究較多的停留在中醫理論或臨床處方上，尚未出現能達到與阿片類藥物同等止痛效果的中藥品種。

發明內容
本發明的一個目的在於公開一種治療癌性疼痛的中藥組合物的質量控制方法。
本發明所涉及的藥物組合物的原料藥組成及配比如下青風藤4-200重量份 白屈菜5-230重量份漢桃葉10-250重量份上述原料藥的優選配比如下青風藤750-850重量份 白屈菜650-750重量份漢桃葉950-1050重量份上述原料優選配比還可以為青風藤800重量份白屈菜700重量份 漢桃葉1000重量份按藥劑學方法，可以將上述原料藥製備成各種臨床可接受的劑型，包括但不限於如下劑型當中的一種如片劑、丸劑、膠囊劑、顆粒劑、滴丸劑、軟膠囊劑及栓劑等固體製劑，混懸劑、口服液、灌腸劑、注射劑或凍乾粉針等製劑。
本藥物組合物注射液的製備方法白屈菜、青風藤加調pH至1.5-2.5，冷藏，濾過，濾液用15-25％氫氧化鈉溶液調pH至6.5～7.0，再加乙醇使含醇量達80-90％，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度60℃時為1.35～1.40，真空乾燥，得漢桃葉幹膏。7-9倍量70-90％乙醇浸泡20-40分鐘，加熱回流1-3次，每次1.5-2.5小時，合併醇提液，減壓回收乙醇並濃縮至1∶1.5，用0.5-1.5mol/L磷酸調pH2～3，靜置10-15小時，濾過，濾液用30-50％氫氧化鈉溶液調pH10～11，用等量氯仿提取4-6次，合併氯仿液，回收氯仿，殘留物真空乾燥，得總生物鹼。漢桃葉加水煎煮1-3次，每次1-2小時，合併煎煮液，濾過，濾液減壓濃縮，用乙醇沉澱處理2次，第一次溶液含醇量達50-70％，第二次達80-90％，每次均濾過，回收乙醇，然後加水稀釋，用5-7mol/L鹽酸取上述總生物鹼，漢桃葉幹膏，加900-1000體積份加注射用水，用0.5-1.5mol/L磷酸調pH至4～5，攪拌使溶解，冷藏，濾過，加8-12體積份吐溫-80、加8-12體積份苯甲醇、混勻，用0.45/μm微孔薄膜濾過，灌封於安瓿中，於100℃流通蒸汽滅菌20-40分鐘，即得。
上述方案中重量份/體積份與g/ml相對應。
本組合物製成藥劑的質量控制方法包括指紋圖譜檢測、鑑別或含量測定。
指紋圖譜檢測方法如下供試品溶液的製備取注射液1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，微孔濾膜0.45μm濾過，取濾液作為供試品溶液。
對照品溶液的製備精密稱取青藤鹼對照品適量，加甲醇製成每1ml含0.1mg的溶液，搖勻，即得。
色譜條件和系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以乙腈-0.02M磷酸二氫鉀線性梯度洗脫為流動相；檢測波長為230nm；理論板數按青藤鹼峰計算應不低於3000。其中乙腈-0.02M磷酸二氫鉀線性梯度洗脫作為流動相的配比變化關係為線性梯度洗脫流動相配比變化程序

測定方法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，記錄50分鐘的色譜圖。
指紋圖譜在供試品的50分鐘色譜圖中，以供試品溶液中青藤鹼的色譜峰，即S峰為1計算相對保留時間，以供試品溶液中青藤鹼的色譜峰，即S峰的峰面積為1計算峰面積的比值；應有8個共有指紋峰在相同的相對保留時間處出現。
共有指紋峰的標定共有峰的相對保留時間(峰號)應為0.69±20％(1)；1.00(S)；1.25±20％(2)；1.65±20％(3)；2.10±20％(4)；2.32±20％(5)；2.49±20％(6)；2.58±20％(7)。
共有指紋峰面積的比值峰面積過5％共有指紋峰的峰面積比值(峰號)應為1.00(S)0.08±30％(3)。供試品色譜圖中，非共有峰面積總和不得大於總峰面積的5.0％。
其中供試品溶液的指紋圖譜見附

圖1。
鑑別方法包括如下方法中的一種或幾種A.物組合物注射劑8-12ml，用8-12％氫氧化鈉溶液調節pH值至9～10，加氯仿提取1-3次，每次8-12ml，合併氯仿液，蒸乾，殘渣加甲醇1-3ml使溶解，作為供試品溶液；另取青風藤對照藥材1.5-2.5g，白屈菜對照藥材4-6g，分別加0.5-1.5％鹽酸溶液25-35ml與45-55ml，超聲處理30-50分鐘，濾過，濾液加8-12％氫氧化鈉溶液調節pH值至9～10，加氯仿同法製成對照藥材溶液；再取青藤鹼與白屈菜鹼對照品，分別加甲醇製成每1ml含1.5-2.5mg與0.5-1.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述五種溶液各5-7μl，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以甲苯——乙腈——三乙胺6-8∶1.5-2.5∶1為展開劑，展開，取出，晾乾，在254nm紫外光燈下檢識；供試品色譜中，分別在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的暗斑點；噴以稀碘化鉍鉀試液後，置碘蒸汽中燻後，日光下檢識；供試品色譜中，分別在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；B.藥物組合物注射劑4-6ml，加稀鹽酸溶液調節pH值至1～2，加醋酸乙酯提取1-3次，每次8-12ml，合併醋酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取漢桃葉對照藥材4-6g，加水45-55ml，加熱回流0.5-1.5小時，濾過，濾液同法製成對照藥材溶液；再取富馬酸對照品，加甲醇製成每1ml含0.5-1.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5-7μl，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，60～90℃下以石汕醚—醅酸乙酯—冰醋酸7-9∶1-2∶0.5為展開劑，展開，取出，晾乾，置254nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的暗斑點；含量測定方法包括如下方法中的一種或幾種A.青藤鹼含量測定色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以1-2∶8-9的乙腈--0.02M磷酸二氫鉀為流動相檢測波長260-270nm；理論板數按青藤鹼峰計算應不低於2000；對照品溶液的製備精密稱取青藤鹼對照品適量，加甲醇製成每1ml含0.4-0.6mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的製備精密量取本藥物組合物注射劑1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45μm的微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各8-12μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；B.白屈菜鹼含量測定色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以2-3∶7-8的乙腈--0.02M磷酸二氫鉀為流動相；檢測波長為285-295nm；理論板數按白屈菜鹼峰計算不得低於2000；對照品溶液製備精密稱取白屈菜鹼對照品適量，加甲醇製成每1ml含0.04-0.06mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的製備精密量取本藥物組合物注射劑1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45μm的微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各8-12μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；其中在上述含量測定方法中，注射劑中青藤鹼的含量測定每1ml含青風藤以青藤鹼C19H23NO4計，不得少於4.4mg；其中在上述含量測定方法中，注射劑中白屈菜的含量測定每1ml含白屈菜以白屈菜鹼C20H19NO5計，不得少於0.30mg；在青藤鹼含量測定試驗中檢測波長的選定選定265nm為青藤喊的檢測波長；從空白試驗及色譜圖可知青藤鹼的陰性對照無幹擾；標準曲線的繪製，青藤鹼對照品在進樣量2.57μg～15.42μg範圍內呈良好的線性關係；精密度試驗，測定供試品中青藤鹼的峰面積值，結果表明精密度良好；穩定性試驗表明痛安注射液供試品溶液在製備後22小時內穩定；重現性試驗測定痛安注射液中青藤鹼的重現性良好；回收率測定其青藤鹼的含量，結果表明回收率良好；樣品中青藤鹼的含量測定，根據樣品含量測定結果，每1ml含青風藤以青藤鹼(C19H23NO4)計，不得少於4.4mg。
在白屈菜鹼含量測定試驗中檢測波長的選定290nm為白屈菜鹼的檢測波長；從空白試驗及色譜圖可知白屈菜鹼的陰性對照無幹擾；標準曲線的繪製，測定結果表明，白屈菜鹼對照品在進樣量0.261μ～1.566μg範圍內呈良好的線性關係；精密度試驗，測定供試品中白屈菜鹼的峰面積值，結果表明精密度良好；穩定性試驗，表明痛安注射液供試品溶液在製備後22小時內穩定；重現性試驗，測定痛安注射液中白屈菜鹼的重現性良好；按樣品含量測定方法測定其白屈菜鹼的含量，計算白屈菜鹼的回收率，表明回收率良好；根據十批樣品含量測定結果，每1ml含白屈菜以白屈菜鹼(C20H19NO5)計，不得少於0.30mg。
本發明的藥物組合物治療癌症疼痛具有低成癮性、低耐受性、低毒副作用，有深厚的中醫理論基礎，在臨床應用上具有突出的療效，不僅能預防疼痛發作，止痛效果明顯，而且具有協同止痛作用。
實驗例1青風藤白屈菜的鑑別試驗取十批痛安注射液(三味藥物組合物的注射劑)樣品進行試驗觀察。取10ml，用10％氫氧化鈉溶液調節pH值至9～10，加氯仿提取2次，每次10ml，合併氯仿液，蒸乾，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液。另取青風藤對照藥材2g，白屈菜對照藥材5g，分別加1％鹽酸溶液30ml與50ml，超聲處理40分鐘，濾過，濾液加10％氫氧化鈉溶液調節pH值至9～10，加氯仿同法製成對照藥材溶液。再取青藤鹼與白屈菜鹼對照品，分別加甲醇製成每1ml含2mg與1mg的溶液，作為對照品溶液。另分別取缺白屈菜或缺青風藤的陰性模擬製劑10ml，同法製成缺白屈菜或缺青風藤的陰性對照溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述七種溶液各6μl，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以甲苯——乙腈——三乙胺(7∶2∶1)為展開劑，展開，取出，晾乾，在紫外光燈(254nm)下檢識。供試品色譜中，分別在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的暗斑點。噴以稀碘化鉍鉀試液後，置碘蒸汽中燻後，日光下檢識。供試品色譜中，分別在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照無幹擾，故用同一色譜條件可以將白屈菜與青風藤同時進行TLC鑑別。
實驗例2漢桃葉的鑑別試驗取痛安注射液5ml，加稀鹽酸，溶液調節pH值至1～2，加醋酸乙酯提取2次，每次10ml，合併醋酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取漢桃葉對照藥材5g，加水50ml，加熱回流1小時，濾過，濾液同法製成對照藥材溶液。再取富馬酸對照品，加甲醇製成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。再取漢桃葉陰性模擬製劑5ml，同法製成陰性對照溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述四種溶液各6μl分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以石油醚(60-90℃)——醋酸乙酯——冰醋酸(8∶1.5∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈(254nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的暗斑點。陰性對照未見幹擾。本研究增加了以富馬酸為對照的TLC鑑別，由於富馬酸為漢桃葉藥材中的指標成份之一，標準中增加了以富馬酸為對照，目的是進一步增加質量標準的可控性。
實驗例3青藤鹼含量測定試驗對照品溶液的製備精密稱取青藤鹼對照品12.35mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，即得每1ml相當於0.514mg的對照品溶液。
供試品溶液的製備精密量取痛安注射液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過，濾液作為供試品溶液。
陰性對照溶液的製備精密量取缺青風藤的陰性模擬製劑1ml，置10ml量瓶中，同法製備陰性對照溶液。
測定法分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各8-12μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；注射劑中青藤鹼的含量測定每1ml含青風藤以青藤鹼C19H23NO4計，不得少於4.4mg；4白屈菜鹼含量測定試驗對照品溶液的製備精密稱取白屈菜鹼對照品13.05mg，置25ml量瓶中，加甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，精密吸取1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1ml相當於0.0522mg的對照品溶液。
供試品溶液的製備精密量取痛安注射液1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，微孔濾膜(0.45μm)濾過，濾液作為供試品溶液。
陰性對照溶液的製備精密量取缺白屈菜的陰性模擬製劑1ml，置10ml量瓶中，同法製備陰性對照品溶液。
測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各8-12μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；其中在上述含量測定方法中，注射劑中白屈菜的含量測定每1ml含白屈菜以白屈菜鹼C20H19NO5計，不得少於0.30mg；實驗例5痛安注射液的臨床試驗研究採用隨機雙盲對照試驗方法進行臨床試驗，以觀察痛安注射液(2ml)治療血瘀證肺癌、肝癌疼痛的臨床療效與安全性，對照藥為鹽酸曲馬多注射液(2ml)。合格病例共40例，治療組(痛安注射液2ml)20例(其中肺癌8例，肝癌12例)對照組(鹽酸曲馬多2ml)兩組治療前可比性分析表明，兩組年齡、性別、病種、病程、中醫證候總分等影響療效的主要因素均衡，中醫證候中性情急躁、面色、舌質、脈象、胸脅脹悶、脘腹脹滿、痞塊兩組治療前基線亦均衡，僅治療組疼痛強度症狀略重於對照組，差異有統計學意義。
臨床療效結果分析顯示，治療組鎮痛的臨床控制率為20％，顯效率45％，有效率30％，總有效率為95％，對照組臨床控制率為15％，顯效率40％，有效率25％，總有效率為80％。兩組治療後總的鎮痛效果比較，差異無統計學意義。
兩組治療後總鎮痛療效比較

秩和檢驗，Z＝0.915，P＝0.360治療組肺癌疼痛的臨床控制率為12.5％，顯效率25.0％，有效率62.5％，總有效率為100％，對照組肺癌疼痛的臨床控制率為0％，顯效率45.5％，有效率27.3％，總有效率為72.7％。兩組對肺癌疼痛的鎮痛效果比較，差異無統計學意義。
肺癌疼痛療效比較

秩和檢驗，Z＝0.574，P＝0.566治療組肝癌疼痛的臨床控制率為25.0％，顯效率58.3％，有效率8.3％，總有效率為91.7％，對照組肝癌疼痛的臨床控制率為33.3％，顯效率33.3％，有效率22.2％，總有效率為88.9％。兩組對肝癌疼痛的鎮痛效果比較，差異無統計學意義。
肝癌疼痛療效比較

秩和檢驗，Z＝0.190，P＝0.849兩組治療後起效時間與鎮痛維持時間比較，差異均無統計學意義。
對中醫證候的療效分析表明治療組中醫證候療效臨床控制與顯效率均為0％，有效85％，總有效率為85％對照組中醫證候療效臨床控制與顯效率均為0％，有效65％，總有效率為65％兩組中醫證候的療效，差異無統計學意義。
痛安注射液治療組治療血瘀證疼痛(刺痛不移)、胸脅脹悶、脘腹脹滿、性情急躁、面色、舌質、脈象、痞塊療效與對照組相當，差異無統計學意義。
經採用卡方檢驗對兩組實驗室檢查指標治療前後正常和異常情況(例數)進行統計學處理，各指標均無顯著性差異。其中治療組和對照組均無血紅蛋白、紅細胞計數、白細胞計數、血小板計數、尿常規、大便常規、谷丙轉氨酶治療前正常而治療後異常的病例。治療組和對照組亦無上述七個指標治療前異常而治療後異常有加重的病例。治療組和對照組均血清穀草轉氨酶治療後異常有加重的病例。
說明書附圖附圖1供試品溶液的指紋圖譜具體實施方式
如下實施例1組合物注射液的製備取青風藤800g、白屈菜700g和漢桃葉1000g三味，白屈菜、青風藤加8倍量80％乙醇浸泡30分鐘，加熱回流二次，每次2小時，合併醇提液，減壓回收乙醇並濃縮至1∶1，用1mol/L磷酸調pH2～3，靜置12小時，濾過，濾液用40％氫氧化鈉溶液調pH10～11，用等量氯仿提取5次，合併氯仿液，回收氯仿，殘留物真空乾燥，得總生物鹼。漢桃葉加水煎煮二次，每次1.5小時，合併煎煮液，濾過，濾液減壓濃縮，用乙醇沉澱處理二次，第一次溶液含醇量達60％，第二次達85％，每次均濾過，回收乙醇，然後加水稀釋，用6mol/L鹽酸調pH至2.0，冷藏，濾過，濾液用20％氫氧化鈉溶液調pH至6.5～7.0，再加乙醇使含醇量達85％，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.35～1.40(60℃)，真空乾燥，得漢桃葉幹膏。取上述總生物鹼，漢桃葉幹膏，加950ml注射用水，用1mol/L磷酸調pH至4～5，攪拌使溶解，冷藏，濾過，加10ml吐溫-80、10ml苯甲醇、混勻，用0.45/μm微孔薄膜濾過，灌封於2ml安瓿中，於100℃流通蒸汽滅菌30分鐘，即得。
實施例2注射劑的鑑別A.取本藥物組合物注射劑10ml，用10％氫氧化鈉溶液調節pH值至9～10，加氯仿提取2次，每次10ml，合併氯仿液，蒸乾，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取青風藤對照藥材2g，白屈菜對照藥材5g，分別加1％鹽酸溶液30ml與50ml，超聲處理40分鐘，濾過，濾液加10％氫氧化鈉溶液調節pH值至9～10，加氯仿同法製成對照藥材溶液；再取青藤鹼與白屈菜鹼對照品，分別加甲醇製成每1ml含2mg與1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述四種溶液各6μl，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以甲苯——乙腈——三乙胺7∶2∶1為展開劑，展開，取出，晾乾，在254nm紫外光燈下檢識；供試品色譜中，分別在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的暗斑點；噴以稀碘化鉍鉀試液後，置碘蒸汽中燻後，日光下檢識；供試品色譜中，分別在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；B.取本藥物組合物注射劑5ml，加稀鹽酸溶液調節pH值至1～2，加醋酸乙酯提取2次，每次10ml，合併醋酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取漢桃葉對照藥材5g，加水50ml，加熱回流1小時，濾過，濾液同法製成對照藥材溶液；再取富馬酸對照品，加甲醇製成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各6μl，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，60～90℃下以石油醚—醅酸乙酯—冰醋酸8∶1.5∶0.5為展開劑，展開，取出，晾乾，置254nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的暗斑點；實施例3注射劑的含量測定A.青藤鹼含量測定色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以15∶85的乙腈--0.02M磷酸二氫鉀為流動相檢測波長265nm；理論板數按青藤鹼峰計算應不低於2000；對照品溶液的製備精密稱取青藤鹼對照品適量，加甲醇製成每1ml含0.5mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的製備精密量取本藥物組合物注射劑1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45μm的微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；本藥物組合物注射劑每1ml含青風藤以青藤鹼C19H23NO4計，不得少於4.4mg；B.白屈菜鹼含量測定色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以25∶75的乙腈--0.02M磷酸二氫鉀為流動相；檢測波長為290nm；理論板數按白屈菜鹼峰計算不得低於2000；對照品溶液製備精密稱取白屈菜鹼對照品適量，加甲醇製成每1ml含0.05mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的製備精密量取本藥物組合物注射劑1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45μm的微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；本藥物組合物注射劑每1ml含白屈菜以白屈菜鹼C20H19NO5計，不得少於0.30mg；實施例4注射劑的指紋圖譜檢測供試品溶液的製備取本品1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，微孔濾膜(0.45μm)濾過，取濾液作為供試品溶液。
對照品溶液的製備精密稱取青藤鹼對照品適量，加甲醇製成每1ml含0.1mg的溶液，搖勻，即得。
測定方法照高效液相色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄(VID)測定。
色譜條件和系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以乙腈-0.02M磷酸二氫鉀線性梯度洗脫為流動相；檢測波長為230nm。理論板數按青藤鹼峰計算應不低於3000。
線性梯度洗脫流動相配比變化程序

測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，記錄50分鐘的色譜圖，以供試品溶液中青藤鹼的色譜峰(S峰)為1計算相對保留時間，以供試品溶液中青藤鹼的色譜峰(S峰)的峰面積為1計算峰面積的比值。
指紋圖譜在供試品的50分鐘色譜圖中，應有8個共有指紋峰在相同的相對保留時間處出現。
共有峰的相對保留時間(峰號)應為0.69±20％(1)；1.00(S)；1.25±20％(2)；1.65±20％(3)；2.10±20％(4)；2.32±20％(5)；2.49±20％(6)；2.58±20％(7)。
共有指紋峰面積的比值峰面積過5％共有指紋峰的峰面積比值(峰號)為1.00(S)0.08±30％(3)。
(4)非共有峰面積供試品色譜圖中，非共有峰面積總和不得大於總峰面積的5.0％。
實施例5注射液的質量控制供試品溶液的製備取本品1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，微孔濾膜(0.45μm)濾過，取濾液作為供試品溶液。
對照品溶液的製備精密稱取青藤鹼對照品適量，加甲醇製成每1ml含0.1mg的溶液，搖勻，即得。
測定方法照高效液相色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄(VID)測定。
色譜條件和系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以乙腈-0.02M磷酸二氫鉀線性梯度洗脫為流動相；檢測波長為230nm。理論板數按青藤鹼峰計算應不低於3000。
線性梯度洗脫流動相配比變化程序

測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ1，注入液相色譜儀，測定，記錄50分鐘的色譜圖，以供試品溶液中青藤鹼的色譜峰(S峰)為1計算相對保留時間，以供試品溶液中青藤鹼的色譜峰(S峰)的峰面積為1計算峰面積的比值。
指紋圖譜在供試品的50分鐘色譜圖中，應有8個共有指紋峰在相同的相對保留時間處出現。
共有峰的相對保留時間(峰號)應為0.69±20％(1)；1.00(S)；1.25±20％(2)；1.65±20％(3)；2.10±20％(4)；2.32±20％(5)；2.49±20％(6)；2.58±20％(7)。
共有指紋峰面積的比值峰面積過5％共有指紋峰的峰面積比值(峰號)為1.00(S)0.08±30％(3)。
(4)非共有峰面積供試品色譜圖中，非共有峰面積總和不得大於總峰面積的5.0％。
A.青藤鹼含量測定色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以15∶85的乙腈--0.02M磷酸二氫鉀為流動相檢測波長265nm；理論板數按青藤鹼峰計算應不低於2000；對照品溶液的製備精密稱取青藤鹼對照品適量，加甲醇製成每1ml含0.5mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的製備精密量取本藥物組合物注射劑1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45μm的微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；本藥物組合物注射劑每1ml含青風藤以青藤鹼C19H23NO4計，不得少於4.4mg；B.白屈菜鹼含量測定色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以25∶75的乙腈--0.02M磷酸二氫鉀為流動相；檢測波長為290nm；理論板數按白屈菜鹼峰計算不得低於2000；對照品溶液製備精密稱取白屈菜鹼對照品適量，加甲醇製成每1ml含0.05mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的製備精密量取本藥物組合物注射劑1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45μm的微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；本藥物組合物注射劑每1ml含白屈菜以白屈菜鹼C20H19NO5計，不得少於0.30mg；實施例6注射液的質量控制供試品溶液的製備取本品1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，微孔濾膜(0.45μm)濾過，取濾液作為供試品溶液。
對照品溶液的製備精密稱取青藤鹼對照品適量，加甲醇製成每1ml含0.1mg的溶液，搖勻，即得。
測定方法照高效液相色譜法(《中國藥典》2000年版一部附錄(VID)測定。
色譜條件和系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以乙腈-0.02M磷酸二氫鉀線性梯度洗脫為流動相；檢測波長為230nm。理論板數按青藤鹼峰計算應不低於3000。
線性梯度洗脫流動相配比變化程序

測定法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，記錄50分鐘的色譜圖，以供試品溶液中青藤鹼的色譜峰(S峰)為1計算相對保留時間，以供試品溶液中青藤鹼的色譜峰(S峰)的峰面積為1計算峰面積的比值。
指紋圖譜在供試品的50分鐘色譜圖中，應有8個共有指紋峰在相同的相對保留時間處出現。
共有峰的相對保留時間(峰號)應為0.69±20％(1)；1.00(S)；1.25±20％(2)；1.65±20％(3)；2.10±20％(4)；2.32±20％(5)；2.49±20％(6)；2.58±20％(7)。
共有指紋峰面積的比值峰面積過5％共有指紋峰的峰面積比值(峰號)為1.00(S)0.08±30％(3)。
(4)非共有峰面積供試品色譜圖中，非共有峰面積總和不得大於總峰面積的5.0％。
A.取本藥物組合物注射劑10ml，用10％氫氧化鈉溶液調節pH值至9～10，加氯仿提取2次，每次10ml，合併氯仿液，蒸乾，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取青風藤對照藥材2g，白屈菜對照藥材5g，分別加1％鹽酸溶液30ml與50ml，超聲處理40分鐘，濾過，濾液加10％氫氧化鈉溶液調節pH值至9～10，加氯仿同法製成對照藥材溶液；再取青藤鹼與白屈菜鹼對照品，分別加甲醇製成每1ml含2mg與1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述四種溶液各6μl，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以甲苯——乙腈——三乙胺7∶2∶1為展開劑，展開，取出，晾乾，在254nm紫外光燈下檢識；供試品色譜中，分別在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的暗斑點；噴以稀碘化鉍鉀試液後，置碘蒸汽中燻後，日光下檢識；供試品色譜中，分別在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；B.取本藥物組合物注射劑5ml，加稀鹽酸溶液調節pH值至1～2，加醋酸乙酯提取2次，每次10ml，合併醋酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取漢桃葉對照藥材5g，加水50ml，加熱回流1小時，濾過，濾液同法製成對照藥材溶液；再取富馬酸對照品，加甲醇製成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各6μl，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，60～90℃下以石油醚—醅酸乙酯—冰醋酸8∶1.5∶0.5為展開劑，展開，取出，晾乾，置254nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的暗斑點；實施例7注射液的應用青風藤750g、白屈菜750g、漢桃葉950g，製成注射液1000ml，肝癌疼痛患者，肌注，一次2ml，一日1～2次。
實施例8注射液的應用青風藤850g、白屈菜650g、漢桃葉1050g，製成注射液1000ml，肺癌疼痛患者，肌注，一次2ml，一日1～2次。
實施例9注射液的應用青風藤800g、白屈菜700g、漢桃葉1000g，製成注射液1000ml，癌性疼痛患者，肌注，一次2ml，一日1～2次。
實施例10片劑的應用青風藤800g、白屈菜700g、漢桃葉1000g，製成1000片，肝癌疼痛患者服用，每次2片，一日1～2次。
實施例11膠囊劑的應用青風藤800g、白屈菜700g、漢桃葉1000g，製成1000粒，肺癌疼痛患者服用，每次2粒，一日1～2次。
實施例12凍乾粉針劑的應用青風藤1600g 白屈菜1400g漢桃葉2000g，製成1000瓶，肺癌疼痛患者服用，每次一瓶，一日1～2次。
權利要求
1.一種由青風藤、白屈菜和漢桃葉三味藥按重量份數比4-200∶5-230∶10-250製成的藥物組合物的注射劑的質量控制方法，其特徵在於該方法中指紋圖譜的測定方法包括如下步驟供試品溶液的製備取注射液1ml，置10ml量瓶中，加50％甲醇稀釋至刻度，微孔濾膜0.45μm濾過，取濾液作為供試品溶液；對照品溶液的製備精密稱取青藤鹼對照品適量，加甲醇製成每1ml含0.1mg的溶液，搖勻，即得；色譜條件和系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；檢測波長為230nm；理論板數按青藤鹼峰計算應不低於3000；以乙腈-0.02M磷酸二氫鉀線性梯度洗脫為流動相，其配比變化關係為從0到10分鐘，按0.02M磷酸二氫鉀溶液由90％降為80％，乙腈由10％升到20％的比例關係進行洗脫；從10到50分鐘，按0.02M磷酸二氫鉀溶液由80％降為70％，乙腈由20％升到30％的比例關係進行洗脫；測定方法精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，記錄色譜圖；注射劑的供試品指紋圖譜的特徵峰為以供試品指紋圖譜中與對照品相應的峰為標準峰，即S峰，計算共有指紋峰的相對保留時間和相對峰面積比值，有8個共有指紋峰在相同的相對保留時間處出現。
2.如權利要求1所述的藥物組合物注射劑的質量控制方法，其特徵在於注射劑的供試品指紋圖譜的特徵峰中，共有指紋峰的相對保留時間應為1號峰0.69±20％；S峰1.00；2號峰1.25±20％；3號峰1.65±20％；4號峰2.10±20％；5號峰2.32±20％；6號峰2.49±20％；7號峰2.58±20％。
3.如權利要求1或2所述的藥物組合物注射劑的質量控制方法，其特徵在於注射劑的供試品指紋圖譜的特徵峰中，共有指紋峰面積的比值過5％為S峰1.00；3號峰0.08±30％；供試品色譜圖中，非共有峰面積總和不得大於總峰面積的5.0％。
4.一種由青風藤、白屈菜和漢桃葉三味藥按重量份數比4-200∶5-230∶10-250製成的藥物組合物的注射劑的質量控制方法，其特徵在於該方法中的鑑別方法包括如下鑑別中的一種和/或幾種A.取注射劑8-12ml，用8-12％氫氧化鈉溶液調節pH值至9～10，加氯仿提取1-3次，每次8-12ml，合併氯仿液，蒸乾，殘渣加甲醇1-3ml使溶解，作為供試品溶液；另取青風藤對照藥材1.5-2.5g，白屈菜對照藥材4-6g，分別加0.5-1.5％鹽酸溶液25-35ml與45-55ml，超聲處理30-50分鐘，濾過，濾液加8-12％氫氧化鈉溶液調節pH值至9～10，加氯仿同法製成對照藥材溶液；再取青藤鹼與白屈菜鹼對照品，分別加甲醇製成每1ml含1.5-2.5mg與0.5-1.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述四種溶液各5-7μl，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以甲苯--乙腈--三乙胺6-8∶1.5-2.5∶1為展開劑，展開，取出，晾乾，在254nm紫外光燈下檢識；供試品色譜中，分別在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的暗斑點；噴以稀碘化鉍鉀試液後，置碘蒸汽中燻後，日光下檢識；供試品色譜中，分別在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；B.取注射劑4-6ml，加稀鹽酸溶液調節pH值至1～2，加醋酸乙酯提取1-3次，每次8-12ml，合併醋酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇0.5-1.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取漢桃葉對照藥材4-6g，加水45-55ml，加熱回流0.5-1.5小時，濾過，濾液同法製成對照藥材溶液；再取富馬酸對照品，加甲醇製成每1ml含0.5-1.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5-7μl，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，60～90℃下以石油醚-醅酸乙酯-冰醋酸7-9∶1-2∶0.5為展開劑，展開，取出，晾乾，置254nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的暗斑點。
5.如權利要求4所述的藥物組合物注射劑的質量控制方法，其特徵在於該方法中的鑑別方法包括如下鑑別中的一種和/或幾種A.取注射劑10ml，用10％氫氧化鈉溶液調節pH值至9～10，加氯仿提取2次，每次10ml，合併氯仿液，蒸乾，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為供試品溶液；另取青風藤對照藥材2g，白屈菜對照藥材5g，分別加1％鹽酸溶液30ml與50ml，超聲處理40分鐘，濾過，濾液加10％氫氧化鈉溶液調節pH值至9～10，加氯仿同法製成對照藥材溶液；再取青藤鹼與白屈菜鹼對照品，分別加甲醇製成每1ml含2mg與1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述四種溶液各6μl，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，以甲苯--乙腈--三乙胺7∶2∶1為展開劑，展開，取出，晾乾，在254nm紫外光燈下檢識；供試品色譜中，分別在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的暗斑點；噴以稀碘化鉍鉀試液後，置碘蒸汽中燻後，日光下檢識；供試品色譜中，分別在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；B.取注射劑5ml，加稀鹽酸溶液調節pH值至1～2，加醋酸乙酯提取2次，每次10ml，合併醋酸乙酯液，蒸乾，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取漢桃葉對照藥材5g，加水50ml，加熱回流1小時，濾過，濾液同法製成對照藥材溶液；再取富馬酸對照品，加甲醇製成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各6μl，分別點於同一矽膠GF254薄層板上，60～90℃下以石油醚-醅酸乙酯-冰醋酸8∶1.5∶0.5為展開劑，展開，取出，晾乾，置254nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的暗斑點。
6.一種由青風藤、白屈菜和漢桃葉三味藥按重量份數比4-200∶5-230∶10-250製成藥物組合物的注射劑的質量控制方法，其特徵在於該方法中的含量測定為包括如下測定方法中的一種和/或幾種A.青藤鹼含量測定色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以1-2∶8-9的乙腈--0.02M磷酸二氫鉀為流動相檢測波長260-270nm；理論板數按青藤鹼峰計算應不低於2000；對照品溶液的製備精密稱取青藤鹼對照品適量，加甲醇製成每1ml含0.4-0.6mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的製備精密量取本藥物組合物注射劑1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45μm的微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各8-12μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；B.白屈菜鹼含量測定色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以2-3∶7-8的乙腈--0.02M磷酸二氫鉀為流動相；檢測波長為285-295nm；理論板數按白屈菜鹼峰計算不得低於2000；對照品溶液製備精密稱取白屈菜鹼對照品適量，加甲醇製成每1ml含0.04-0.06mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的製備精密量取本藥物組合物注射劑1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45μm的微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各8-12μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得。
7.如權利要求6所述的藥物組合物的注射液的質量控制方法，其特徵在於該方法中的含量測定方法為包括如下測定方法中的一種和/或幾種A.青藤鹼含量測定色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以15∶85的乙腈--0.02M磷酸二氫鉀為流動相檢測波長265nm；理論板數按青藤鹼峰計算應不低於2000；對照品溶液的製備精密稱取青藤鹼對照品適量，加甲醇製成每1ml含0.5mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的製備精密量取本藥物組合物注射劑1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45μm的微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得；B.白屈菜鹼含量測定色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以25∶75的乙腈--0.02M磷酸二氫鉀為流動相；檢測波長為290nm；理論板數按白屈菜鹼峰計算不得低於2000；對照品溶液製備精密稱取白屈菜鹼對照品適量，加甲醇製成每1ml含0.05mg的溶液，搖勻，即得；供試品溶液的製備精密量取本藥物組合物注射劑1ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，0.45μm的微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液；測定法分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，計算，即得。
8.如權利要求6或7所述的藥物組合物的注射劑的質量控制方法其特徵在於其中青藤鹼含量測定中，組合物注射劑每1ml含青風藤以青藤鹼C19H23NO4計，不得少於4.4mg。
9.如權利要求6或7所述的藥物組合物的注射劑的質量控制方法其特徵在於其中白屈菜鹼含量測定中，組合物注射劑每1ml含白屈菜以白屈菜鹼C20H19NO5計，不得少於0.30mg。
10.一種由青風藤、白屈菜和漢桃葉三味藥按重量份數比4-200∶5-230∶10-250製成的藥物組合物在製備治療癌性疼痛的藥物中的應用。
11.一種由青風藤、白屈菜和漢桃葉三味藥按重量份數比4-200∶5-230∶10-250製成的藥物組合物在製備治療肺癌疼痛的藥物中的應用。
12.一種由青風藤、白屈菜和漢桃葉三味藥按重量份數比4-200∶5-230∶10-250製成的藥物組合物在製備治療肝癌疼痛的藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開一種治療癌性疼痛的中藥組合物的質量控制方法及其在製備治療癌性疼痛的藥物中應用。該藥物組合物由青風藤、白屈菜和漢桃葉三味藥按重量份數比4－200∶5－230∶10－250製成，其注射劑的質量控制方法包括指紋圖譜的測定方法、鑑別方法或含量測定方法。指紋圖譜的測定方法是應用照高效液相色譜法記錄色譜圖，計算共有指紋峰的相對保留時間和相對峰面積比值。鑑別方法包括青風藤或漢桃葉的鑑別。含量測定有青藤鹼含量測定或白屈菜鹼含量測定。本發明還公開該藥物組合物在製備治療癌性疼痛的藥物中的應用，尤其是在製備治療肺癌疼痛或肝癌疼痛的藥物中的應用。
文檔編號G01N30/50GK1790014SQ20041009719
公開日2006年6月21日 申請日期2004年12月13日 優先權日2004年12月13日
發明者肖偉, 戴翔翎, 凌婭, 王振中, 畢宇安, 劉濤 申請人:江蘇康緣藥業股份有限公司