Hsp70作為酶促活性調節物的應用的製作方法

2023-09-21 00:11:30 2

專利名稱：Hsp70作為酶促活性調節物的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及通過利用分子伴侶Hsp70和溶酶體的磷脂二(單醯基甘油)磷酸酯 (BMP，還被稱為LBPA)之間的相互作用來調節酶活性的領域。Hsp70-BMP相互作用調節了溶 酶體區室中與BMP相互作用的酶的活性，因此本發明提供了用於逆轉溶酶體貯積病理的方 式(means) 0
背景技術：
分子伴侶見於發生蛋白構象重排的細胞的所有區室中，雖然蛋白合成是細胞內不 摺疊肽的主要來源，但當面臨高溫或可能使蛋白結構易變並由此易於不摺疊和集聚的其它 刺激物的衝擊時，細胞利用包括產生保護蛋白在內的特定細胞反應進行應對。這種反應是 可以在從原核生物至真核生物的各種細胞類型中觀察到的現象，被稱為熱休克反應或熱應 激反應。由這種反應誘導的蛋白被稱為熱休克蛋白(HSP)，其具有幾個家族。伴侶分子家族的主要實例是Hsp70蛋白。除了作為伴侶分子外，最近還發現該家 族參與細胞穩態的其它方面一一最明顯地通過其抗凋亡性質，其在免疫中的功能以及癌細 胞對Hsp70上調的明顯依賴性。此外，Hsp70還可以在保護溶酶體完整性方面發揮作用。然 而其分子機制仍不清楚。溶酶體貯積病是一類罕見疾病，特徵是物質在溶酶體區室中集聚並引起溶酶體區 室不穩定，由此對受影響的個體具有破壞性作用。由於物質代謝中涉及的酶缺陷而使該物 質在溶酶體區室中集聚。迄今為止，對於多數溶酶體貯積病還沒有可用的治療方法。這類疾病的根本原因 是特定溶酶體酶不能夠高效地代謝諸如脂質的特定溶酶體物質。因此，已經針對這些疾病 中包括戈謝病(Gaucher disease)和法布裡病(Fabry disease)的亞組採用通過向患者提 供重組酶的酶替代療法(ERT)。然而，ERT是一種費用非常昂貴的治療形式，這可能限制了 其在某些領域的應用，並且ERT還僅對已經產生重組酶的特定類型的疾病有效。本發明旨 在提供用於治療溶酶體貯積症的新方法。發明概述在本發明中，通過提供對Hsp70和細胞膜(尤其是質膜和溶酶體膜)結合的分子 基礎的理解，公開了 Hsp70促進溶酶體膜穩定性的分子基礎。由文獻已知Hsp70可以在保護溶酶體完整性中發揮作用，然而其分子機制仍不清 楚。此外，對於是否這種作用是主要的應激可誘導的Hsp70(HspAlA/AlB，在本研究中稱為 Hsp70)所特有的或者是否其它Hsp70家族成員也可能具有相同性質的問題，仍未得到解答。
這些未解答的問題促成了本發明的主要目的之一，即研究Hsp70的溶酶體保護作 用的分子基礎。為此，建立了產生重組Hsp70及其突變體的方法，即基於碘克沙醇梯度超 離心的亞細胞分級(subcellular fractionation)方案。在光致氧化誘導的溶酶體通透 化的基礎上建立了直接評價溶酶體膜完整性的實驗，該實驗使得可進行實時顯微法評價 Hsp70和其它成分敏化或保護溶酶體膜的能力的作用。在包括脂質體90°光散射測定、色 氨酸螢光移位和表面等離子共振(BIAcore)的多種體外系統中都對重組Hsp70和突變體與 多種脂質之間的相互作用進行了研究。Hsp70的計算機(in silico)靜電錶面模建有助於 Hsp70-BMP相互作用的概念性模型的建立。為了證明在體外系統中證實的脂質相互作用的 體內相關性，著眼於關於BMP和Hsp70兩個組分的BMP-Hsp70相互作用。為了進一步證明 利用這種機制的可行性，對施用順鉬誘導的細胞死亡模型進行了表徵，並在癌細胞系和未 轉化細胞系兩種細胞系中的所述細胞死亡系統中靶向溶酶體Hsp70。為了解決Hsp70對溶酶體膜穩定性的作用的分子基礎，本發明人試圖建立可消 除胞質的Hsp70的影響的系統，即需要使Hsp70直接靶向溶酶體。Nylandsted et al.的 電子顯微照片顯示Hsp70可存在於溶酶體內，因此本發明人決定建立用於產生重組人 Hsp70(rHsp70)的方法，並期望利用細胞內吞機器作為直接向溶酶體遞送rHsp70的途徑。 本發明人在此繞開了向Hsp70添加可能破壞功能的溶酶體分選信號的需要，並避免了由於 過表達而可能引起的併發症。內吞方法還可以滴定rHsp70的量，並且從更長遠的觀點出發 開啟了研究細胞外Hsp70的攝取機制的可能性。為了驗證Hsp70的內吞，在建立Hsp70產生方法後，用螢光團Alexa Fluor 488 對其進行標記(Hsp70-AF488)。共聚焦成像顯示，確實可以這種方式使rHsp70靶向至溶 酶體。為了評價對溶酶體膜穩定性的影響，本發明人接著建立了在單個溶酶體的水平上 定量溶酶體膜通透化的方法，並利用該方法評價了細胞內吞的rHsp70的作用。這些方法 形成了實施例1和2的基礎，在實施例1和2中，本發明人證明，Hsp70通過與內溶酶體 (endo-lysosomal)陰離子磷脂二(單醯基-甘油)磷酸酯(BMP)的pH依賴性高親和結合 而對溶酶體進行穩定，從而增強了細胞的存活。Hsp70帶正電荷的AIPase結構域負責結合， 但還需要底物結合功能域以有效穩定溶酶體。有趣的是，這種相互作用以及其產生的保護 作用取決於位於AIPase結構域的帶正電荷的楔形內的色氨酸90。重要的是，所述細胞保護 作用可以通過rHsp70的細胞內吞遞送而獲得，並且尤其是通過BMP抗體或Hsp70抑制劑的 細胞外施用而逆轉。此外，本發明人還試圖將Hsp70的溶酶體膜保護機制與腫瘤產生和程序性細胞 死亡相關聯。因此，本發明人表徵了通過施用常規化療劑順鉬啟動的細胞死亡程序，並發 現其與caspases無關，但特徵在於蛋白酶的溶酶體釋放。轉基因Hsp70以及細胞內吞的 Hsp70能夠通過穩定溶酶體膜而增強細胞在面臨順鉬攻擊時的存活。有趣的是，本發明人 證明，靶向溶酶體Hsp70本身或者其在溶酶體中的相互作用物二(單醯基-甘油)磷酸酯 (BMP)使轉化的前列腺細胞系對順鉬變得敏感(未轉化的細胞沒有這種變化)，從而為利用 BMP-Hsp70相互作用作為癌症治療的藥理學靶標提供了實驗證據。有趣的是，雖然Hsp70_2與Hsp70具有86%的胺基酸同源性，但Hsp70_2不能直接 保護溶酶體膜。然而，缺失Hsp70-2也導致溶酶體膜通透化，並促進細胞的程序性死亡。這 種作用不依賴於Hsp70-2與溶酶體區室之間的直接相互作用，而是通過晶狀體上皮源性生長因子(LEDGF)的下調(響應Hsp70-2的缺失)關聯起來。本研究的方法和結果將在實施例部分進行更詳細的闡述。在本發明中闡明了 Hsp70通過與溶酶體BMP的相互作用增強溶酶體穩定性的細胞 保護作用的分子基礎，這些發現為治療性靶向溶酶體貯積病提供了基礎。本發明現在已經證明，令人驚奇地，向細胞提供重組Hsp70有效逆轉溶酶體貯 積病(如本發明證明的尼曼-皮克病(Niemann-Pick disease)和法伯氏病(Farber disease))的病理。此外，向細胞提供Hsp70誘導劑苯甲醇有效逆轉溶酶體貯積病(如本發 明證明的尼曼-皮克病)的病理。因此，本發明提供了通過提供Hsp70或其功能片段或變體，或者通過提供Hsp70誘 導物或輔誘導物(co-inducer)而直接或間接提高有此需要的個體中Hsp70的細胞內濃度 和/或活性來治療溶酶體貯積病的方法。一方面，本發明涉及能夠提高Hsp70的細胞內濃度和/或活性的生物活性劑，其用 作藥物或用於溶酶體貯積症的治療。在一個實施方式中，所述生物活性劑為Hsp70或其功能片段或變體。在另一個實施方式中，所述生物活性劑為Hsp70誘導物或輔誘導物。另一方面，本發明提供了治療溶酶體貯積病的方法，其包括向有此需要的個體施 用本發明的生物活性劑。在一個實施方式中，所述治療為預防、治癒或改善。在一個實施方式中，所述溶酶體貯積病選自尼曼-皮克病、法伯氏病、克拉伯病 (Krabbe disease)、法布裡病、戈謝病、唾液酸貯積病(Sialidosis)、異染性腦白質營養不 良和鞘脂激活蛋白(saposin)缺乏病。在另一個實施方式中，所述溶酶體貯積病的特徵在於具有所述疾病病理涉及的缺 陷酶的殘留酶促活性。本發明還涉及治療溶酶體貯積病的方法，其包括施用本發明的生物活性劑和至少 一種其它治療形式(modality)的組合。本發明再一方面提供了調節酶的酶促活性的方法，其中，所述酶與BMP(二(單醯 基甘油)磷酸酯)相互作用，所述方法包括以下步驟i)施用本發明的生物活性劑，ii)使BMP和Hsp70之間相互作用，禾口iii)調節與BMP相互作用的酶的酶促活性。另一方面，本發明涉及Hsp70或其功能片段或變體，其用作藥物。一方面，本發明涉及調節酶的酶促活性的方法，其中，所述酶與BMP相互作用，所 述方法包括施用Hsp70或其功能片段或變體並由此調節與BMP相互作用的酶的酶促活性的 步驟，其中所述Hsp70或其功能片段或變體是適合使BMP和Hsp70或所述功能片段或變體 之間相互作用的形式。優選地，Hsp70或所述其功能片段或變體與BMP形成共價或非共價 複合物。優選地，BMP與鞘脂激活蛋白相互作用。優選地，所述鞘脂激活蛋白(Saposin)選自鞘脂激活蛋白A、鞘脂激活蛋白B、鞘脂 激活蛋白C和鞘脂激活蛋白D。
優選地，所述酶選自鞘磷脂酶、酸性鞘磷脂酶、唾液酸酶、α -半乳糖苷酶、β -半 乳糖苷酶、β -半乳糖苷神經醯胺酶、葡糖神經醯胺酶和酸性神經醯胺酶。優選地，所述酶促活性的調節是上調所述酶的酶促活性。另一方面，本發明涉及Hsp70或其功能片段或變體，其用作藥物。優選地，所述 Hsp70或其功能片段或變體可用於治療、減緩或預防溶酶體貯積症，例如尼曼-皮克病、戈 謝病、法伯氏病、克拉伯病、法布裡病和唾液酸貯積病。另一方面，本發明涉及提高化合物的攝取的方法，所述方法包括施用所述化合物 和Hsp70或其功能片段或變體的步驟。在一個實施方式中，所述Hsp70或其功能片段或變 體與所述化合物共價結合。在另一個實施方式中，所述Hsp70或其功能片段或變體與所述 化合物非共價結合。本發明的實施方式涉及上調與溶酶體貯積症(例如尼曼-皮克病、戈謝病、法伯氏 病、克拉伯病、法布裡病和唾液酸貯積病)相關的酶的酶促活性的方法。優選地，所述溶酶 體貯積症為尼曼-皮克病。由於所述溶酶體貯積症由酶促活性不足引起，因此本發明的目的是提高所述酶促 活性，從而減輕或治癒所述病症。已經證明，Hsp70與BMP相互作用。由於BMP作為其它多種蛋白的輔因子，Hsp70和 BMP之間的相互作用可以調節所述其它多種蛋白的功能。例如，BiflMtSaSMase的輔因子。 因此，Hsp70和BMP之間的相互作用可以提高aSMase的活性。由於尼曼-皮克病與aSMase 活性的降低有關，因此Hsp70可以通過提高aSMase的活性來減輕或治癒尼曼-皮克病。類 似地，BMP作為鞘脂激活蛋白A、鞘脂激活蛋白B、鞘脂激活蛋白C和鞘脂激活蛋白D的輔因 子發揮作用。這些鞘脂激活蛋白在其它溶菌酶貯積症中均有涉及，因此Hsp70可以通過提 高鞘脂激活蛋白或與所述鞘脂激活蛋白相關的酶的活性來減輕或治癒其它溶酶體貯積症。在本發明的一個實施方式中，在溶酶體貯積症的治療中同時施用Hsp70和酶替代 療法。在這種方式中，由於Hsp70的酶激活作用，因此可以顯著降低所必需的酶量。在另一個實施方式中，使用Hsp70促進酶替代療法中酶的攝取，由此提高被相關 細胞攝取的酶量。定義和簡稱aSMase/ASMADD70 AIF AO Apaf-I Bag-I Bcl-2 Bid BMP CARD Caspase CHIP
酸性鞘磷脂酶
用於 Hsp70 的源自 AIF 的誘館(AIF-derived decoy for Hsp70)
凋亡誘導因子
吖啶橙
凋亡蛋白酶激活因子-1
Bcl-2 ^ijliiIitSi=I (Bcl-2 associated athanogene-1)
B細胞淋巴瘤/白雪病2
BH3相互作用結構域凋亡激動蛋白
二(單醯基甘油)磷脂
Caspase
半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶 Hsp70-結合蛋白的羧基末端
CytC 細胞色素C
DD 死亡結構域
DED 死亡效應域
dsRNA 雙鏈RNA
eHsp70 細胞外Hsp70
ER 內質網
ERT酶替代療法
FADD 包含Fas相關死亡結構域的蛋白
HIP Hsp70相互作用蛋白
HRP 辣根過氧化物酶
HS 熱休克/熱應激
HSE 熱休克元件
HSF 熱休克因子
Hsp 熱休克蛋白
HspBPl 熱休克蛋白結合蛋白1
IAP 凋亡蛋白抑制蛋白
iMEF永生化的鼠胚胎成纖維細胞
JNK c-Jun氨基末端激酶
LAMP-I/-2 溶酶體相關膜蛋白-1/-2
LBPA 溶血二磷脂酸(lysobisphospha1
LEDGF 晶狀體上皮源性生長因子
LMP 溶酶體膜通透化
MIC-I 巨噬細胞抑制細胞因子1
MOMP 線粒體外膜通透化
MPR甘露糖6-磷酸受體
MTT 3- (4，5- 二甲基-2-噻唑基)-2，
NPD尼曼-皮克病
NPDAA型尼曼-皮克病
NPDBB型尼曼-皮克病
NPDCC型尼曼-皮克病
NPDDD型尼曼-皮克病
PCD 程序性細胞死亡
PKC 蛋白激酶C
POPC 棕櫚醯-油醯-磷脂醯膽鹼
POPS 棕櫚醯-油醯-磷脂醯絲氨酸
RNAi RNA幹擾
ROS 活性氧
SD 標準偏差
siRNA 小幹擾RNA
Smac/Diablo 第二個線粒體來源的caspase激活因子tBid 截短 BidTNF 腫瘤壞死因子TNFR TNF-受體TRADD TNFR相關死亡結構域蛋白TRAF TNFR 相關因子溶酶體貯積症(LSD)所使用的術語「溶酶體貯積症」和「溶酶體貯積病」同義。Hsp70的功能片段術語「Hsp70的功能片段」解釋為表示Hsp70的具有預期功能 的任何片段。與酶促活性的調節有關時，功能片段是能夠調節所述酶促活性的片段。與提 高物質的攝取有關時，Hsp70的功能片段是能夠提高所述物質的攝取的片段。應該理解，所 述功能片段的精確量化作用可能與全長分子的作用不同。在一些情況下，所述功能片段可 能確實比全長分子更有效。此外，從片段的較小尺寸考慮，使用片段代替全長分子可能是有 利的。Hsp70的功能變體術語「Hsp70的功能變體」解釋為表示Hsp70的具有預期功能 的任何變體。與酶促活性的調節有關時，功能變體是能夠調節所述酶促活性的變體。與提 高物質的攝取有關時，Hsp70的功能變體是能夠提高所述物質的攝取的片段。應該理解，所 述功能變體的精確量化作用可能與全長分子的作用不同。在一些情況下，所述功能變體可 能確實比全長分子更有效。「生物活性劑」(即在生物學上具有活性的物質/試劑)是提供可以通過體內或體 外證明的某些藥理學作用(通常為有益作用)的任何試劑、藥物、化合物、物質組分或組合 物。在本文中使用的該術語進一步包括在個體中產生局部或全身作用的任何生理學或藥理 學活性物質。生物活性劑的另外實例包括，但不限於包含寡糖或由寡糖組成的試劑，包含 多糖或由多糖組成的試劑，包含任選糖基化的肽或由任選糖基化的肽組成的試劑，包含任 選糖基化的多肽或由任選糖基化的多肽組成的試劑，包含核酸或由核酸組成的試劑，包含 寡核苷酸或由寡核苷酸組成的試劑，包含多核苷酸或由多核苷酸組成的試劑，包含脂質或 由脂質組成的試劑，包含脂肪酸或由脂肪酸組成的試劑，包含脂肪酸酯或由脂肪酸酯組成 的試劑，以及包含次級代謝物或由次級代謝物組成的試劑。在個體(例如人和其它任何動 物)的治療中，生物活性劑可以用於預防疾病、治療疾病。本文使用的生物活性劑是能夠提 高Hsp70的細胞內濃度和/或活性的物質。本文使用的術語「藥」或「藥物」包括作用於人或動物體局部或全身的在生物學上、 生理學上或藥學上具有活性的物質。本文使用的術語「治療」和「療法」等同地表示治癒性治療、預防性治療和改善性 治療或減輕性治療。該術語包括用於獲得可以在臨床上建立的有益的或期望的生理學結果 的方法。出於本發明的目的，有益的或預期的臨床效果包括，但不限於緩解症狀，減小疾病 的程度，穩定(即不惡化)病況，延遲或減慢病況/症狀的發展或惡化，改善或減輕病況或 症狀，以及不論可測與否的緩和(部分或完全)。本文使用的術語「減輕」及其變式表示，與 不施用本發明組合物相比，生理病況或症狀的程度和/或有害表現減少和/或發展時間減 慢或延長。如果根據構成術語「治療」和「療法」的定義的標準測定，所治療的病況有變化，則「治療效果」或「療效」是明顯的。如果有至少5%的改善，優選10%的改善，更優選至少 25%，甚至更優選至少50%，如至少75%，最優選至少100%的改善，則所治療的病況有「變 化」。所述變化可基於所治療個體病況的嚴重程度的改善，或者基於利用生物活性劑或生物 活性劑和本發明的藥物組合物治療和不治療的個體群病況改善頻率的差異。「生物活性劑」的「藥理學上的有效量」、「藥學上的有效量」或「生理學上的有效量」 是在使用本發明所述藥物組合物時，為在所治療的個體血流中或作用部位(即肺、胃系統、 結腸系統、前列腺等)提供預期水平的活性劑以產生預期的生理反應所需要的此組合物中 存在的活性劑的量。準確的量將取決於多種因素，例如活性劑、組合物的活性、所採用的遞 送裝置、組合物的物理特徵、計劃的患者用法(即每天施用的劑量數)和患者因素等，並且 可以由本領域技術人員根據本文提供的信息而容易地確定。可以在一次給藥中，或者通過 多次施用總和為有效量的量(優選在M小時的時間內)而施用「有效量」的生物活性劑。 可以通過用於測定合適量和給藥時間的標準臨床方法確定有效量。應該理解，「有效量」可 以是由醫療專家和/或個人確定的經驗性和/或個性化(根據個案)結果。本文使用的術語「增強」和「提高」有益效果及其變式是指，與安慰劑相比生物活 性劑的治療效果，或者本發明的藥物治療的治療效果高於通常利用不含本發明生物活性劑 的藥物組合物所獲得的治療效果的提高。作為施用生物活性劑的結果，當治療效果的強度 和/或程度得到促進和/或提高時，「治療效果的提高」是明顯的。「治療效果的提高」還包 括治療益處的時間得到延長。它還可以表現為，與施用不含生物活性劑的較高量的藥物組 合物相比，當共同施用所述藥物組合物和本發明提供的生物活性劑時獲得相同益處和/或 效果所需要的所述藥物組合物的量較低。優選但不必需地，所述效果的增強引起對所述藥 物組合物單獨不能有效治療或者治療效果較小的急性症狀的治療。與單獨施用藥物組合物 相比，當本發明的生物活性劑與藥物組合物共同施用時治療效果具有至少5%的提高，例如 治療效果具有至少10%的提高，則實現了增強(提高)。優選地，所述提高為至少25%，更 優選至少50 %，甚至更優選至少75 %，最優選至少100 %。本文使用的「共同施用」、「同時施用」或「一起施用」生物活性劑或者生物活性劑 和現有藥物是指，在一定時間內施用本發明的一種或多種生物活性劑，或者施用本發明的 一種或多種生物活性劑和現有藥物組合物。所述時間優選小於72小時，例如48小時，例如 小於M小時，例如小於12小時，例如小於6小時，如小於3小時。然而，所述術語還表示可 以同時施用所述生物活性劑和治療性組合物。術語「個體」指脊椎動物，尤其是哺乳動物中的一種，優選包括人在內的靈長類。在 優選的實施方式中，本文使用的個體為任意年齡的人，男性或女性。「有此需要的個體」是指可以從本發明受益的個體。在一個實施方式中，所述有此 需要的個體為患病個體，其中所述疾病為溶酶體貯積病。術語「天然核苷酸」或「核苷酸」是指在自然界中發現的任意四種脫氧核苷酸dA、 dG、dT和dC(DNA的組分)和四種核苷酸A、G、U和C (RNA的組分)。各種天然的核苷酸包括 糖部分(核糖或脫氧核糖)、磷酸部分和天然/標準的鹼基部分或基本由上述部分組成。天 然核苷酸根據熟知的鹼基配對原則(Watson和Crick)與互補核苷酸結合，其中腺嘌呤(A) 與胸腺嘧啶(T)或尿嘧啶(U)配對，鳥嘌呤(G)與胞嘧啶(C)配對，其中相應的鹼基對是互 補且反向平行的核苷酸鏈的一部分。鹼基配對引起預定的互補核苷酸之間的特異雜交。鹼基配對是酶能夠催化合成與模板寡核苷酸互補的寡核苷酸的基礎。在這種合成中，結構單 元(通常為A、T、U、C或G的核糖衍生物或脫氧核糖衍生物的三磷酸酯)在模板寡核苷酸的 指導下形成具有正確的互補序列的互補寡核苷酸。互補序列對其寡核苷酸序列的識別由形 成鹼基對的相應相互作用鹼基介導。實質上，導致鹼基配對的具體相互作用由鹼基的大小 以及鹼基的氫鍵供體和受體的模式控制。大的嘌呤鹼基(A或G)與小的嘧啶鹼基(T、U或C) 配對。此外，鹼基之間的鹼基配對識別還受鹼基之間形成的氫鍵的影響。在Watson-Crick 鹼基配對幾何中，利用連接兩個環原子的中間氫鍵和在任意一側結合附加於各所述環的官 能基團的氫鍵，利用與受體基團配對的供體基團，使六元環(天然寡核苷酸中的嘧啶)與由 稠合六元環和五元環(天然寡核苷酸中的嘌呤)構成的環系統並列。本文使用的「核酸」或「核酸分子」是指多核苷酸，例如脫氧核糖核酸(DNA)或 核糖核酸(RNA)，寡核苷酸，通過聚合酶鏈式反應(PCR)產生的片段和通過連接、剪切、 核酸內切酶作用和核酸外切酶作用中任何一種產生的片段。核酸分子可以由天然存在 的核苷酸(例如DNA和RNA)或天然存在的核苷酸的類似物(例如天然存在的核苷酸的 α-對映體形式)或二者的組合的單體構成。修飾核苷酸可以在糖部分和/或嘧啶或嘌 呤鹼基部分具有變化。糖修飾包括，例如利用滷素、烷基基團、胺和疊氮基團取代一個或 多個羥基基團，或者可以使糖官能化作醚或酯。此外，還可以用空間上和電子上相似的 結構，例如氮雜-糖和碳環糖類似物取代完整的糖部分。鹼基部分的修飾的實例包括烷 基化嘌呤和嘧啶，醯化嘌呤或嘧啶或者其它熟知的雜環取代物。核酸單體可以通過磷酸 二酯鍵或這些連接的類似物進行連接。磷酸二酯鍵連接的類似物包括硫代磷酸酯、二硫 代磷酸酯、硒代磷酸酯(phosphoroselenoate)、二硒代磷酸酯(phosphorodiselenoate)、 phosphoroanilothioate,phosphorani 1 idate和氨基磷酸酯等。術語「核酸分子」也包括， 例如包含連接至聚醯胺骨架上的天然存在的或修飾的核酸鹼基的所謂的「肽核酸」。核酸可 以為單鏈或雙鏈。術語「核酸分子的互補物」是指與參考核苷酸序列相比具有互補核苷酸序列並且 為反方向的核酸分子。例如，序列5' ATGCACGGG 3'與5' CCCGTGCAT 3'互補。「分離的核酸分子」是指沒有整合在生物體的基因組DNA中的核酸分子。例如，已 經從細胞的基因組DNA分離的編碼生長因子的DNA分子即為分離的DNA分子。分離的核酸 分子的另一個實例是沒有整合在生物體的基因組中的化學合成的核酸分子。已經從特定物 種分離的核酸分子小於該物種的染色體的完整DNA分子。「核酸分子構建體」是已經通過人為介入進行修飾從而包含以天然不存在的排列 結合或並列的核酸片段的單鏈或雙鏈核酸分子。「線性DNA」是指具有游離5』和3』末端的非環狀DNA分子。可以通過酶促降解或 物理斷裂由閉合的環狀DNA分子(例如質粒)製備線性DNA。「互補DNA(cDNA) 」是反轉錄酶由mRNA模板形成的單鏈DNA分子。通常，採用與部 分mRNA互補的引物起始反轉錄。本領域技術人員還使用術語「cDNA」表示由此類單鏈DNA 分子及其互補DNA鏈組成的雙鏈DNA分子。術語「cDNA」還表示由RNA模板合成的cDNA分 子的克隆。「異源DNA」是指在給定宿主細胞中天然不存在的DNA分子或DNA分子群。異源於 具體宿主細胞的DNA分子可以包含源自所述宿主細胞的物種的DNA(內源DNA)，只要宿主DNA與非宿主DNA(即異源DNA)結合。例如，可以將包含非宿主DNA片段的DNA分子認為是 異源DNA分子，其中所述非宿主DNA片段編碼可操作地與包含轉錄啟動子的宿主DNA片段 連接的多肽。相反，異源DNA分子可以包含可操作地與外源啟動子相連的內源基因。作為 另一個示例，如果DNA分子被引入到缺乏野生型基因的突變細胞內，則也可以將包含源自 野生型細胞的所述基因的該DNA分子認為是異源DNA。「多肽」是天然產生的或合成的胺基酸殘基聚合物，優選其僅通過肽鍵相連。通過 非宿主DNA分子表達產生的多肽為「異源」肽或多肽。本文使用的術語「多肽」涵蓋了蛋白、 肽和多肽，其中所述蛋白、肽或多肽可以已經經過翻譯後修飾或可以不經過翻譯後修飾。翻 譯後修飾可以為，例如磷酸化、甲基化和糖基化。術語「表達」是指基因或基因產物的生物合成。「雜交」表示不同來源的核酸鏈的退火；S卩，在初始時沒有配對的兩條DNA鏈的互 補區之間形成鹼基對。根據 Sambrook et al. ,Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, Laboratory Press (1989)，1. 101-1. 104，對術語「在嚴格條件下的雜 交」進行定義。優選地，在嚴格條件下的雜交表示，利用IX SSC和0. 1% SDS在50°C、優選 在55 °C、更優選在62 °C且最優選在68°C洗滌1小時後，尤其是在0. 2 X SSC^PO. SDS中 在50°C、優選在55°C、更優選在62°C且最優選在68°C洗滌1小時後，觀察到陽性雜交信號。「完全同源」的延長(stretch)定義為配對核苷酸沿著相互作用的核苷酸的序列的 匹配；在天然存在的RNA中，A與U配對，G與C配對。「啟動子」為指導結構基因轉錄的核苷酸序列。通常，啟動子位於基因的5』非編碼 區，與結構基因的轉錄起始位點相鄰近。在轉錄起始中發揮作用的啟動子內的序列元件通 常以共有核苷酸序列為特徵。如果啟動子為誘導型啟動子，則在對誘導劑的應答中提高轉 錄速率。相反，如果啟動子為組成型啟動子，則誘導劑不能調節轉錄速率。還已知有阻遏型 啟動子。「調控元件」是調節啟動子活性的核苷酸序列。例如，調控元件可以包含與能夠排 他地或優先地在特定細胞、組織或器官中進行轉錄的細胞因子結合的核苷酸序列。這些類 型的調控元件通常與以「細胞特異性」、「組織特異性」或「器官特異性」的方式表達的基因
糹口口。「增強子」是一種類型的調控元件，其能夠提高轉錄效率，而不論增強子相對於轉 錄起始位點的距離或方向。「克隆載體」為具有能夠在宿主細胞中自主複製的能力的核酸分子，例如質粒、粘 粒或細菌噬菌體。克隆載體通常包含一個或少數幾個限制性內切酶識別位點，該位點允許 以可確定的方式插入核酸分子，而不使載體喪失主要的生物功能；和編碼標記基因的核苷 酸序列，該序列適合用於轉化有所述克隆載體的細胞的鑑別和篩選。標記基因通常包括提 供四環素或氨苄青黴素抗性的基因。「表達載體」是編碼在宿主細胞中表達的基因的核酸分子。通常，表達載體包含轉 錄啟動子、基因和轉錄終止子。基因表達常常處於啟動子的控制之下，將此類基因稱為「可 操作地連接至」所述啟動子上。類似地，如果調控元件調節核心啟動子的活性，則調控元件 和核心啟動子被可操作地連接。被稱作「轉錄載體」的較簡單載體僅能夠轉錄但不能翻譯 它們能夠在靶細胞中複製但不能表達，其與表達載體不同。轉錄載體用於擴增其插入物。
「重組宿主」是包含異源核酸分子，例如克隆載體或表達載體的細胞。轉染描述的是將外來物質引入真核細胞中。用於非病毒方法的術語「轉染」最常 用於指哺乳動物細胞，而術語「轉化」優選用於描述非病毒DNA轉移至細菌和非動物真核細 胞，例如真菌、藻類和植物。化學方法和物理方法均可以用於轉染細胞。「多肽」是天然產生的或合成的胺基酸殘基聚合物，其優選僅通過肽鍵連接。通過 非宿主DNA分子表達產生的多肽為「異源」肽或多肽。本文使用的術語「多肽」涵蓋了蛋白、 肽和多肽，其中所述蛋白、肽或多肽可以已經經過翻譯後修飾或可以不經過翻譯後修飾。翻 譯後修飾可以為，例如磷酸化、甲基化和糖基化。「胺基酸殘基」可以為肽鍵或不同於肽鍵的鍵連接的天然或非天然胺基酸殘基。氨 基酸殘基可以為D-構型或L-構型。胺基酸殘基包括被包含碳原子或碳原子鏈的中心部分 分開的氨基末端部分(NH2)和羧基末端部分(COOH)，它們的至少之一包括至少一個側鏈或 官能團。NH2是指存在於胺基酸或肽的氨基末端的氨基基團，COOH是指存在於胺基酸或肽 的羧基末端的羧基基團。常用術語胺基酸包括天然的或非天然的胺基酸。J. Biol. Chem.， 243 :3552-59 (1969) and adopted in 37 C. F. R. ,section 1.822(b) (2)中列出的標準命名 法的天然胺基酸屬於下表1中列出的胺基酸組。非天然胺基酸是未列在表1中的胺基酸。 非天然胺基酸的實例是，例如37 C. F. R. section 1.822(b) (4)中列出的胺基酸，其均通過 引用併入本文。此外，非天然胺基酸殘基包括，但不限於經修飾的胺基酸殘基、L-胺基酸殘 基和D-胺基酸殘基的立體異構體。
權利要求
1.能夠提高Hsp70的細胞內濃度和/或活性的生物活性劑，其作為藥物或用於溶酶體 貯積症的治療。
2.如權利要求1所述的生物活性劑，其中，所述生物活性劑為Hsp70或其功能片段或變體。
3.如權利要求2所述的生物活性劑，其中，所述Hsp70或其功能片段或變體與野生型 Hsp70蛋白具有100%的同源性。
4.如權利要求2所述的生物活性劑，其中，所述Hsp70或其功能片段或變體與野生型 Hsp70蛋白具有99. 9-95 %的同源性，例如95-90 %的同源性，如90-85 %的同源性，例如 85-80 %的同源性，如80-75 %的同源性，例如75-60 %的同源性。
5.如權利要求2所述的生物活性劑，其中，所述生物活性劑是Hsp70。
6.如權利要求2所述的生物活性劑，其中，所述Hsp70是全長Hsp70。
7.如權利要求2所述的生物活性劑，其中，所述生物活性劑為Hsp70的功能片段或變體。
8.如權利要求7所述的生物活性劑，其中，所述Hsp70的功能片段或變體的全長小於 641個胺基酸，如小於625個胺基酸，例如小於600個胺基酸，如小於575個胺基酸，例如小 於550個胺基酸，如小於525個胺基酸，例如小於500個胺基酸，如小於475個胺基酸，例如 小於450個胺基酸，如小於425個胺基酸，例如小於400個胺基酸，如小於375個胺基酸，例 如小於350個胺基酸，如小於325個胺基酸，例如小於300個胺基酸，如小於275個胺基酸， 例如小於250個胺基酸，如小於225個胺基酸，例如小於200個胺基酸，如小於175個氨基 酸，例如小於150個胺基酸，如小於125個胺基酸，例如小於100個胺基酸，如小於75個氨 基酸，例如小於50個胺基酸，如小於25個胺基酸。
9.如權利要求7所述的生物活性劑，其中，所述Hsp70的功能片段或變體的全長大於 10個胺基酸，如大於25個胺基酸，例如大於50個胺基酸，如大於75個胺基酸，例如大於100 個胺基酸，如大於125個胺基酸，例如大於150個胺基酸，如大於175個胺基酸，例如大於 200個胺基酸，如大於225個胺基酸，例如大於250個胺基酸，如大於275個胺基酸，例如大 於300個胺基酸，如大於325個胺基酸，例如大於350個胺基酸，如大於375個胺基酸，例如 大於400個胺基酸，如大於425個胺基酸，例如大於450個胺基酸，如大於475個胺基酸，例 如大於500個胺基酸，如大於525個胺基酸，例如大於550個胺基酸，如大於575個胺基酸， 例如大於600個胺基酸，如大於625個胺基酸。
10.如權利要求7所述的生物活性劑，其中，所述Hsp70的功能片段或變體具有的氨 基酸取代為Hsp70的0. 1-1 %的胺基酸殘基，如1-2 %的胺基酸殘基，例如2-3 %的氨基 酸殘基，如3-4%的胺基酸殘基，例如4-5 %的胺基酸殘基，如5-10 %的胺基酸殘基，例如 10-15%的胺基酸殘基，如15-20%的胺基酸殘基，例如20-30%的胺基酸殘基，如30-40% 的胺基酸殘基，例如40-50%的胺基酸殘基，如50-60%的胺基酸殘基，例如60-70%的氨基 酸殘基，如70-80 %的胺基酸殘基，例如80-90 %的胺基酸殘基，如90-100 %的胺基酸殘基。
11.如權利要求7所述的生物活性劑，其中，所述Hsp70的功能片段或變體的全長 為5-25個胺基酸，如25-50個胺基酸，例如50-75個胺基酸，如75-100個胺基酸，例如 100-125個胺基酸，如125-150個胺基酸，例如150-175個胺基酸，如175-200個胺基酸，例 如200-225個胺基酸，如225-250個胺基酸，例如250-275個胺基酸，如275-300個胺基酸，例如300-325個胺基酸，如325-350個胺基酸，例如350-375個胺基酸，如375-400個氨基 酸，例如400-425個胺基酸，如425-450個胺基酸，例如450-475個胺基酸，如475-500個氨 基酸，例如500-525個胺基酸，如525-550個胺基酸，例如550-575個胺基酸，如575-600個 胺基酸，例如600-625個胺基酸，如625-640個胺基酸。
12.如權利要求7所述的生物活性劑，其中，所述Hsp70的功能片段或變體包含Hsp70 的AIPase結構域的全部或部分。
13.如權利要求7所述的生物活性劑，其中，所述Hsp70的功能片段或變體在 Hsp70ATPase結構域的第90位胺基酸位置包含色氨酸。
14.如權利要求2所述的生物活性劑，其中，所述Hsp70或其功能片段或變體為重組 Hsp70 (rHsp70)。
15.如權利要求2所述的生物活性劑，其中，所述Hsp70源自選自人(homosapiens), 小鼠(mus musculus)、牛、狗、大鼠、鼬、豬、綿羊和猴的哺乳動物。
16.如權利要求1所述的生物活性劑，其中，所述生物活性劑是Hsp70誘導物或輔誘導物。
17.如權利要求16所述的生物活性劑，其中，所述生物活性劑是Hsp70誘導物。
18.如權利要求16所述的生物活性劑，其中，所述生物活性劑是Hsp70輔誘導物。
19.如權利要求18所述的生物活性劑，其中，所述Hsp70輔誘導物是羥胺衍生物。
20.如權利要求19所述的生物活性劑，其中，所述羥胺衍生物選自氯吡哌醇 (BRLP-42)、Arimoclomol(BRX-220)、BRX-345 和 BGP-15。
21.如權利要求19所述的生物活性劑，其中，所述羥胺衍生物是 Arimoclomol(BRX-220)。
22.如權利要求17所述的生物活性劑，其中，所述Hsp70誘導物是膜流化劑。
23.如權利要求22所述的生物活性劑，其中，所述膜流化劑選自苯甲醇、庚醇、AL721、 二十二碳六烯酸、脂肪醇、油醇、二甲基氨基乙醇、A2C、法尼醇、利多卡因、羅哌卡因、布比卡 因和馬比佛卡因。
24.如權利要求16所述的生物活性劑，其中，所述Hsp70誘導物或輔誘導物選自依地福 新(ET-18-0CH3或1-十八烷基-2-甲基-rac-甘油-3-磷酸膽鹼)、塞來昔布、羅非昔布、 乙醯水楊酸、水楊酸鈉、吲哚美辛、PGAU PGj2、2-環戊烯-1-酮、過氧化物酶增殖物激活型 受體Y-激動劑、長春新鹼、紫杉醇、吡格列酮、卡鉬、多柔比星、氟達拉濱、異環磷醯胺、阿 糖胞苷、格爾德黴素、17-AAG、17-DMAG、根赤殼菌素、除莠黴素_A、花生四烯酸、MG132、乳胞 素、DCIC、TLCK和TPCK、替普瑞酮(GGA)、瑞巴匹特、甘珀酸、聚普瑞鋅(L-肌肽鋅)、地塞米 松、古柯鹼、菸鹼、醇、α -腎上腺素激動劑、環戊烯酮前列腺素、芍藥苷、甘草甜素、雷公藤紅 素、二氫雷公藤紅素、二氫雷公藤紅素二乙酸酯和薑黃素。
25.如權利要求1所述的生物活性劑，其中，所述生物活性劑是亞致死熱療。
26.如權利要求25所述的生物活性劑，其中，所述亞致死熱療包括提高個體的溫度至 約38°C的核心溫度，如約39°C，例如約40°C，如約41V，例如約42°C，如約43°C的核心溫 度。
27.如權利要求1所述的生物活性劑，其中，所述生物活性劑包括Hsp70或其功能片段 或變體和Hsp70誘導物或輔誘導物的組合。
28.如權利要求1所述的生物活性劑，其中，所述生物活性劑包括Hsp70或其功能片段 或變體和提高Hsp70和BMP之間的相互作用的物質的組合。
29.如權利要求1所述的生物活性劑，其中，所述治療為預防、治癒或改善。
30.如權利要求1所述的生物活性劑，其中，所述溶酶體貯積症選自尼曼-皮克病、法伯 氏病、克拉伯病、法布裡病、戈謝病、唾液酸貯積病、異染性腦白質營養不良和鞘脂激活蛋白 缺乏病。
31.如權利要求1所述的生物活性劑，其中，所述生物活性劑經腸胃外施用於有此需要 的個體。
32.如權利要求31所述的生物活性劑，其中，所述腸胃外施用是靜脈內、皮下、肌內、動 脈內、皮下或腹膜內注射。
33.如權利要求31所述的生物活性劑，其中，所述腸胃外施用是靜脈內輸注。
34.如權利要求33所述的生物活性劑，其中，所述靜脈內輸注進行的時間為10分 鍾-20分鐘，如20-30分鐘，例如30-40分鐘，如40-50分鐘，例如50-60分鐘，如60-90分 鍾，例如90-120分鐘，如2小時-3小時，例如3-4小時，如4_5小時，例如5_6小時，如6_7 小時，例如7-8小時。
35.如權利要求31所述的生物活性劑，其中，所述腸胃外施用是經黏膜遞送。
36.如權利要求35所述的生物活性劑，其中，所述經黏膜遞送是舌下遞送。
37.如權利要求35所述的生物活性劑，其中，所述經黏膜遞送是口含遞送。
38.如權利要求35所述的生物活性劑，其中，所述經黏膜遞送是吹入遞送。
39.如權利要求35所述的生物活性劑，其中，所述經黏膜遞送是鼻內遞送。
40.Hsp70或其功能片段或變體，其用作藥物。
41.調節酶的酶促活性的方法，其中，所述酶與BMP(二(單醯基甘油)磷酸酯)相互作 用，所述方法包括以下步驟i)施用權利要求1-39中任一項所述的生物活性劑，ii)使BMP和Hsp70之間相互作用，和iii)調節與BMP相互作用的酶的酶促活性。
42.如權利要求41所述的方法，其中，所述Hsp70與BMP形成共價或非共價複合物。
43.如權利要求41所述的方法，其中，BMP與鞘脂激活蛋白相互作用。
44.如權利要求43所述的方法，其中，所述鞘脂激活蛋白選自鞘脂激活蛋白A、鞘脂激 活蛋白B、鞘脂激活蛋白C和鞘脂激活蛋白D。
45.如權利要求41所述的方法，其中，所述酶選自鞘磷脂酶、酸性鞘磷脂酶(aSMase)、 酸性神經醯胺酶、β-半乳糖苷神經醯胺酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、葡糖神經醯 胺酶、唾液酸酶和芳基硫酸酯酶。
46.如權利要求41所述的方法，其中，所述酶促活性的調節是所述酶促活性的提高。
47.如權利要求46所述的方法，其中，所述酶促活性的提高是提高1-5%，如5-10 %， 例如 10-15 %，如 15-20 %，例如 20-25 %，如 25-30 %，例如 30-35 %，如 35-40 %，例如 40-45 %，如 45-50 %，例如 50-60 %，如 60-70 %，例如 70-80 %，如 80-90 %，例如 90-100 %， 如 100-120 %,例如 120-140 %,如 140-160 %,例如 160-180 %,如 180-200 %,例如 200-250 %，如 250-300 %，例如 300—400 %，如 400—500 %，例如 500—750 %，如 750—1000 %，例如 1000-1500%，如 1500-2000%，例如 2000-5000%
48.治療溶酶體貯積病的方法，所述方法包括向有此需要的個體施用權利要求1-39中 任一項所述的生物活性劑。
49.如權利要求48所述的方法，其中，所述治療為預防、治癒或改善。
50.如權利要求48所述的方法，其中，所述治療延長了有此需要的所述個體的預期壽命。
51.如權利要求48所述的方法，其中，所述預期壽命提高了6個月-1年，如1年-2年， 例如2-3年，如3-4年，例如4-5年，如5-6年，例如6_7年，如7-8年，例如8_9年，如9_10 年，例如10-12年，如12-14年，例如14-16年，如16-18年，例如18-20年，如20-25年，例如 25-30年，如30-40年，例如40-50年，如50-60年，例如60-70年，如70-80年，例如80-90 年，如90-100年。
52.如權利要求48所述的方法，其中，所述溶酶體貯積病選自尼曼-皮克病、法伯氏病、 克拉伯病、法布裡病、戈謝病、唾液酸貯積病、異染性腦白質營養不良和鞘脂激活蛋白缺乏 病。
53.如權利要求48所述的方法，其中，所述溶酶體貯積病的特徵是在細胞內積聚的鞘 脂增加。
54.如權利要求53所述的方法，其中，所述治療將細胞內積聚的鞘脂降低了至少5%， 如至少10%，例如至少15%，如至少20%，例如至少25%，如至少30%，例如至少35%，如 至少40%，例如至少45%，如至少50%，例如至少55%，如至少60%，例如至少65%，如至 少70%，例如至少75%，如至少80%，例如至少85%，如至少90%，例如至少95%，如至少 100%。
55.如權利要求M所述的方法，其中，所述鞘脂選自鞘磷脂、神經醯胺、半乳糖苷神經 醯胺、球形三醯神經醯胺、糖基神經醯胺、GM3和硫腦苷脂。
56.如權利要求48所述的方法，其中，所述生物活性劑被配製為藥物組合物。
57.如權利要求1所述的生物活性劑或如權利要求48所述的方法，其中，所述溶酶體貯 積症為A型尼曼-皮克病或B型尼曼-皮克病。
58.如權利要求1所述的生物活性劑或如權利要求48所述的方法，其中，所述溶酶體貯 積症為法伯氏病。
59.如權利要求1所述的生物活性劑或如權利要求48所述的方法，其中，所述溶酶體貯 積症為克拉伯病。
60.如權利要求1所述的生物活性劑或如權利要求48所述的方法，其中，所述溶酶體貯 積症為唾液酸貯積病。
61.如權利要求1所述的生物活性劑或如權利要求48所述的方法，其中，所述溶酶體貯 積症為異染性腦白質營養不良。
62.如權利要求1所述的生物活性劑或如權利要求48所述的方法，其中，所述溶酶體貯 積症為戈謝病。
63.如權利要求1所述的生物活性劑或如權利要求48所述的方法，其中，所述溶酶體貯 積症為法布裡病。
64.如權利要求1所述的生物活性劑或如權利要求48所述的方法，其中，所述溶酶體貯積症為鞘脂激活蛋白缺乏病。
65.如權利要求1所述的生物活性劑或如權利要求48所述的方法，其中，所述溶酶體貯 積病的特徵是具有與所述疾病病理相關的缺陷酶的殘餘酶促活性。
66.如權利要求1所述的生物活性劑或如權利要求48所述的方法，其中，所述殘餘酶促 活性為 0. -50%，如 0. 1-1%，例如 1-2%，如 2-3%，例如 3-4%，如 4_5%，例如 5-6%， 如 6-7%，例如 7-8%，如 8-9%，例如 9-10%，如 10-11%，例如 11-12%，如 12-13%，例如 13-14%，如 14-15%，例如 15-20%，如 20-25%，例如 25-30%，如 30-35%，例如 35-40%, 如40-45%，例如45-50%的殘餘酶促活性。
67.治療溶酶體貯積病的方法，所述方法包括施用權利要求1-39中任一項所述的生物 活性劑和至少一種其它治療形式的組合。
68.如權利要求67所述的方法，其中，所述至少一種其它治療形式是用於溶酶體貯積 病的常規或已知治療形式。
69.如權利要求67所述的方法，其中，所述至少一種其它治療形式同時或序貫施用。
70.如權利要求67所述的方法，其中，所述至少一種其它治療形式是酶替代療法 (ERT)。
71.如權利要求70所述的方法，其中，所述ERT選自Cerezyme (注射用伊米苷酶)、 美格魯特、Fabrazyme (β半乳糖苷酶)和利甫蓋素(α半乳糖苷酶)。
72.如權利要求67所述的方法，其中，向患有戈謝病的個體施用所述生物活性劑和 Cerezyme (注射用伊米苷酶)或美格魯特的組合。
73.如權利要求67所述的方法，其中，向患有法布裡病的個體施用所述生物活性劑和 Fabrazyme (^半乳糖苷酶)或利甫蓋素(α乳糖苷酶)的組合。
74.如權利要求67所述的方法，其中，所述至少一種其它治療形式是止痛物品。
75.如權利要求67所述的方法，其中，所述至少一種其它治療形式是皮質類固醇。
76.如權利要求56所述的方法，其中，所述至少一種其它治療形式是移植。
77.權利要求76所述的方法，其中，所述移植選自骨髓移植、臍帶血移植和幹細胞移植。
78.如權利要求67所述的方法，其中，所述至少一種其它治療形式是底物減少療法。
79.如權利要求67所述的方法，其中，所述至少一種其它治療形式是對症和支持療法， 如物理療法。
全文摘要
本發明涉及用於調節酶的酶促活性的方法，其中，所述酶與BMP相互作用，所述方法包括施用或誘導Hsp70或其功能片段或變體並從而調節與BMP相互作用的酶的酶促活性的步驟，其中所述Hsp70或其功能片段或變體是適合使BMP和Hsp70或所述功能片段或變體之間相互作用的形式。
文檔編號A61P3/00GK102123729SQ200980131985
公開日2011年7月13日 申請日期2009年6月26日 優先權日2008年6月26日
發明者託馬斯·基爾克高·延森, 瑪麗亞·海倫娜·耶泰萊 申請人:奧菲澤米有限公司