通過酶法生產啶南平衍生物的方法

2023-09-21 11:03:00

專利名稱：通過酶法生產啶南平衍生物的方法
技術領域：
本發明涉及用於生產可用作為害蟲控制劑的唳南平(pyripyropene)衍生物的方法。更具體地，其涉及用於生產在I位和11位具有醯氧基以及在7位具有羥基的啶南平衍生物的方法。
背景技術：
如W02006/129714(專利文件I)和W02008/066153 (專利文件2)中所述，在I位
和11位具有醯氧基以及在7位具有羥基的啶南平衍生物是對昆蟲害蟲發揮控制作用的化合物。作為用於生產在I位和11位具有醯氧基以及在7位具有羥基的啶南平衍生物的方法，W02006/129714和日本特開259569/1996 (專利文件3)中已經公開了使用1，7，11-三醯氧基衍生物作為原料、從通過非選擇性水解醯氧基產生的多個產物中純化和分離所述啶南平衍生物的方法。此外，日本特開259569/1996描述了使用保護基的組合用於合成啶南平衍生物的用途。Journal of Antibiotics第49卷,第11期,第1149頁，1996年(非專利文件I)和Bioorganic Medicinal Chemistry Letter 第 5 卷,第 22 期,第 2683 頁，1995 年(非專利文件2)和日本特開269065/1996(專利文件4)已經公開了合成實例，其中使用保護基將醯基引入到7位。W02009/022702(專利文件5)已經公開了使用保護基從1，7，11-三去乙醯基啶南平A生產1，11- 二醯基-1，7，11-三去乙醯基啶南平A的方法。迄今為止，在I位和11位具有醯氧基以及在7位具有羥基的啶南平衍生物的已知生產方法是使用1，7，11-三醯氧基衍生物的非選擇性水解或者在多步驟中使用保護基的生產方法，但在工業生產中，期望進一步改進生產效率，例如降低生產費用、改進產率、簡化純化和分離或者縮短步驟的數目。現有技術參考專利文件[專利文件1]冊2006/129714[專利文件2]W02008/066153[專利文件3]日本特開259569/1996[專利文件4]日本特開269065/1996
[專利文件5]冊2009/022702非專利文件[非專利文件I] Journal of Antibiotics 第 49 卷,第 11 期,第 1149 頁，1996 年[非專利文件2]Bioorganic Medicinal Chemistry Letter 第 5 卷，第 22 期，第2683 頁，1995 年發明概述本發明人已經發現了用於在更簡單的條件下和以更短的步驟、使用啶南平類似物作為合成原料、通過藉助微生物的酶法或者通過酶法和化學轉化的組合獲得所需1，11-二醯氧基衍生物的方法，所述啶南平類似物作為天然存在的產物獲得(Journal of Antibiotics (1996)49 (3)，292-298，Pure AppI. Chem.，第 71 卷，第 6 期，第 1059-1064頁，1999 年；W094/09147 ；日本特開 239385/1996 ；日本特開 259569/1996 (專利文件 3)；Bioorganic Medicinal Chemistry Letter 第 5 卷,第 22 期,第 2683 頁，1995 年(非專利文件 2);和 W02004/060065)。因此，本發明的目的是提供用於使用微生物酶法生產1，11- 二醯氧基衍生物的方法。根據本發明的一個實施方案，提供了用於生產由下式A所表示的化合物的方法[化學式I]
,HA
RO[其中R表示線性、分支或者環狀C2_6烷基羰基(當該基團的的烷基部分是分支或者環狀時R為C3_6燒基擬基)]，該方法包括以下步驟，用由下式B所表示的化合物培養其中引入了至少一種下文(I)至(III)的多核苷酸或者包含該至少一種多核苷酸的重組載體的微生物[化學式2]
權利要求
1.用於生產由下式A所表示的化合物的方法 [化學式I]
2.根據權利要求I的生產方法，其中根據權利要求I的由式B所表示的化合物是下式BI所表示的化合物 [化學式3]
3.根據權利要求I的生產方法，包括以下步驟用根據權利要求I的式B所表示的化合物培養包含質粒pCCl-PPl、質粒pPP2或質粒pPP3或者選自這些質粒的一個或多個載體的微生物,並分離根據權利要求I的式A所表示的化合物。
4.根據權利要求I或2的生產方法，其包括以下步驟用根據權利要求I的式B所表示的化合物培養其中引入了至少一種下文(IV)至(V)的多核苷酸或者包含該至少一種多核苷酸的重組載體的微生物，並分離根據權利要求I的式A所表示的化合物 (IV)分離的多核苷酸，具有編碼SEQID NO :270的胺基酸序列或者與其基本上等同的胺基酸序列的核苷酸序列；和 (V)分離的多核苷酸，具有至少一種選自以下(I)至(4)的核苷酸序列的核苷酸序列 (1)以下(a)的核苷酸序列， (a)SEQ ID NO :266中所示的核苷酸序列的16220至18018的核苷酸序列， (2)核苷酸序列，其能在嚴格條件下與(I)的核苷酸序列的互補序列雜交，並且其編碼與由每一核苷酸序列所編碼的蛋白質基本上等同的蛋白質， (3)(I)的核苷酸序列，其中缺失、替換、插入或者添加了一個或多個核苷酸，並且其編碼與由每一核苷酸序列所編碼的蛋白質基本上等同的蛋白質，和 (4)核苷酸序列，其與(I)的核苷酸序列的多核苷酸具有至少90%同一'丨生,並且其編碼與由每一核苷酸序列所編碼的蛋白質基本上等同的蛋白質。
5.根據權利要求1-4中任一項的生產方法，進一步包括以下步驟使用醯化劑醯化由下式D所表示的化合物的I和11位的羥基[化學式4]
6.根據權利要求5的生產方法，進一步包括以下步驟水解下式C所表示的化合物的I 位的乙醯基和當V為乙醯基時11位的乙醯基 [化學式5]
7.根據權利要求6的生產方法，進一步包括以下步驟用啶南平E培養其中引入了至少一種下文(VI)至(VII)的多核苷酸或者包含該至少一種多核苷酸的重組載體的微生物，並分離根據權利要求6的式C所表示的化合物 (VI)分離的多核苷酸，具有編碼至少一種選自SEQID NO :269和275的胺基酸序列的核苷酸序列；和 (VII)分離的多核苷酸,具有至少一種選自以下(I)至(4)的核苷酸序列的核苷酸序列 (1)以下(a)和(b)的核苷酸序列 (a)SEQ ID NO :266中所示的核苷酸序列的13266至15144的核苷酸序列，和 (b)SEQID NO 266中所示的核苷酸序列的25824至27178的核苷酸序列， (2)核苷酸序列，其能在嚴格條件下與(I)的核苷酸序列的互補序列雜交，並且其編碼與由每一核苷酸序列所編碼的蛋白質基本上等同的蛋白質， (3)(I)的核苷酸序列，其中缺失、替換、插入或者添加了一個或多個核苷酸，並且其編碼與由每一核苷酸序列所編碼的蛋白質基本上等同的蛋白質，和 (4)核苷酸序列，其與(I)的核苷酸序列的多核苷酸具有至少90%同一'丨生,並且其編碼與由每一核苷酸序列所編碼的蛋白質基本上等同的蛋白質。
8.根據權利要求7的生產方法，包括以下步驟用啶南平E培養包含質粒pPP2或質粒PPP9的微生物，並分離根據權利要求6的式C所表示的化合物。
9.根據權利要求6的生產方法，進一步包括以下步驟用去乙醯啶南平E培養其中引入了至少一種下文(VIII)至(IX)的多核苷酸或者包含該至少一種多核苷酸的重組載體的微生物,並分離根據權利要求6的式C所表示的化合物 (VIII)分離的多核苷酸，具有編碼至少一種選自SEQID NO :269、274和275的胺基酸序列或者與其基本上等同的胺基酸序列的核苷酸序列；和 (IX)分離的多核苷酸,具有至少一種選自以下(I)至(4)的核苷酸序列的核苷酸序列 (1)以下(a)、(b)和(c)的核苷酸序列 (a)SEQ ID NO :266中所示的核苷酸序列的13266至15144的核苷酸序列，和 (b)SEQID NO 266中所示的核苷酸序列的23205至24773的核苷酸序列，和 (c)SEQID NO :266中所示的核苷酸序列的25824至27178的核苷酸序列， (2)核苷酸序列，其能在嚴格條件下與(I)的核苷酸序列的互補序列雜交，並且其編碼與由每一核苷酸序列所編碼的蛋白質基本上等同的蛋白質， (3)(I)的核苷酸序列，其中缺失、替換、插入或者添加了一個或多個核苷酸，並且其編碼與由每一核苷酸序列所編碼的蛋白質基本上等同的蛋白質，和 (4)核苷酸序列，其與(I)的核苷酸序列的多核苷酸具有至少90%同一'丨生,並且其編碼與由每一核苷酸序列所編碼的蛋白質基本上等同的蛋白質。
10.根據權利要求9的生產方法，包括以下步驟用去乙醯啶南平E培養包含質粒PPP2或質粒pPP9且還包含質粒pPP7的微生物，並分離根據權利要求6的式C所表示的化合物。
11.質粒pCCl-PPl、質粒pPP2、質粒pPP3、質粒pPP7或質粒pPP9、或者一個或多個選自這些質粒的載體的用途，用於生產由式A所表示的化合物。
12.包含質粒pCCl-PPl、質粒pPP2、質粒pPP3、質粒pPP7或質粒pPP9、或一個或多個選自這些質粒的載體的轉化體的用途，用於生產由式A所表示的化合物。
13.根據權利要求2的式BI所表示的化合物。
14.根據權利要求5的式D所表示的化合物。
全文摘要
提供了通過酶法生產由下式A所表示的啶南平衍生物的方法。本發明的生產方法允許在更簡單的條件下並以更短的步驟生產啶南平衍生物，[化學式1][其中R表示線性、分支或者環狀C2-6烷基羰基(當該基團的烷基部分是分支或者環狀時R為C3-6烷基羰基)]。
文檔編號C12N15/09GK102791871SQ20118000718
公開日2012年11月21日 申請日期2011年1月19日 優先權日2010年1月26日
發明者三富正明, 後藤公彥, 土田麻裡子, 尾山和彥, 山本憲太朗 申請人:明治制果藥業株式會社