抗-連接蛋白劑在調節精神藥物分子療效方面的應用的製作方法

2023-09-18 17:55:30

專利名稱：抗-連接蛋白劑在調節精神藥物分子療效方面的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及使用精神藥物分子改善神經和神經精神疾病的治療。更具體地，本發明能夠通過某些分子(在這裡稱作抗-連接蛋白劑)調節和/或增強精神藥物的作用。
背景技術：
靶向中樞神經系統的治療分子的開發和應用代表著一個快速發展的領域。儘管如此，該發展面臨眾多限制-副作用可能從施用藥劑開始就出現，因此減少了治療益處，-對治療的抗性、不耐受性、治療失敗和成癮現象都是個體對藥物的反應，它們尤其限制了精神藥物分子的開發和臨床應用。-治療效果隨著給藥時間而偏移的情況，是一種在抗抑鬱治療的背景下有大量記載的現象，這種現象是在調節服用藥劑時非常不確定的根源。此外，在可能用於治療中樞神經系統病理的分子中，僅8%經過臨床試驗驗證，然後投放市場。在臨床前試驗中，由於與對人的治療不配伍的毒理學結果，20%的分子被淘汰 (Kola I，Nat Rev Drug Discov. 2004, Aug ；3 (8) :711-5)。儘管如此，如果可以通過一種或多種其它的分子增強這些分子的作用，那麼這些分子仍可能具有療效。因此在該背景下，重要的是找到下述方法(i)最好地控制治療限制和副作用，和 ( )提高用於治療中樞神經系統病理的分子的效能。已經有各種研究涉及到調節治療的副作用。描述的幾種嘗試大多數與分子或肽靶向受體有關-PKRl in nociception phenomena (傷害感受現象中的 PKR1) (Negri L, THeJournal of Neuroscience,2006 June 21 ；26(25) :6716-27)),-a non-steroidal glucocorticoid receptor antagonist in the case of extremehypoglycemia after chronic insulin treatment (在長期月夷島素治療後，在極端低血糖症的情況下，非類固醇類的糖皮質激素受體拮抗劑)(Kale AY 2006,BrainResearch Bulletin 2006, July 15 ；135(1-2) :1_6)，-trimegestone, a progesterone receptor agonist that partialIy counteracts theadverse effects of estradiol treatments without compromising their efficacy in thetreatment of osteoporosis(曲美孕酮，即部分地抵消雌二醇治療的副作用、而不危害它們在治療骨質疏鬆症中的效能的黃體酮受體激動劑)(Wirmeker RC, Steroids,2003 Nov ；68 (10-13) :915-20)，-diazepam, a GABAA receptor agonist, for attenuating the addictive effects ofopiates (地西泮，即用於減弱阿片劑的成癮作用的GABAA受體激動劑) (TejwaniGA, Brain Res. 1998 June 29 ；797 (2) :305_12)。總之，在做出本發明時，任何旨在解決與精神藥物的使用有關的問題的方案都沒有考慮對總調節系統的幹預，而是對某些特定受體的幹預。


圖1顯示了通過定量腦電圖(EEG，electroencephalogram)進行的額葉前皮質的電活動的波譜分析，分析了腦膜下注射甲氯芬那酸(MFA(Meclofenamicacid)，黑色方塊) 或18-β-甘草次酸(Beta GA (18-β-Glycyrrhetinic)，白色圓圈)的作用。χ-軸顯示了分析的頻率，y_軸顯示了從快速傅立葉變換(FFT，FastFourier Transformation)分析得到的相對功率。波譜分析顯示為記錄的第1小時和第2小時的平均值。圖2顯示了通過定量腦電描記法進行的額葉前皮質的電活動的波譜分析，分析了單獨的氯氮平(Clozapine) (0. ^iig/kg腹膜內)、單獨的連接蛋白抑制劑(甲氯芬那酸、 80ng/kg經腦膜下注射)或組合[氯氮平和連接蛋白抑制劑]的作用。χ-軸顯示了分析的頻率，y_軸顯示了從快速傅立葉變換(FFT)分析得到的相對功率。波譜分析顯示為6隻動物在第1小時(上圖)和第2小時(下圖)的平均值。圖3顯示了通過定量腦電描記法進行的額葉前皮質逐分鐘變化的分析，平均頻率為8Hz，分別分析了單獨的氯氮平(0. ang/kg腹膜內)、單獨的連接蛋白抑制劑(甲氯芬那酸、80ng/kg經腦膜下注射)或組合[氯氮平和連接蛋白抑制劑]的作用。χ-軸顯示了按分鐘計算的時間，y-軸顯示了在FFT分析中得到的相對功率。圖4顯示了通過定量腦電描記法進行的額葉前皮質電活動的波譜分析，分析了腦膜下注射(甲氯芬那酸，80ng/kg)或腹膜內注射(甲氯芬那酸，2.45mg/kg)的連接蛋白抑制劑的作用。χ-軸顯示了分析的頻率，y_軸顯示了從FFT分析得到的相對功率。波譜分析顯示為6隻動物在記錄第1小時和第2小時的平均值。圖5顯示了通過定量腦電描記法進行的額葉前皮質電活動的波譜分析，分析了腹膜內注射不同劑量的連接蛋白抑制劑(甲氯芬那酸、2mg/kg、lmg/kg、0. 5mg/kg、0. 4mg/kg) 的作用。χ-軸顯示了分析的頻率，y_軸顯示了從FFT分析得到的相對功率。波譜分析顯示為記錄第1小時和第2小時的平均值。圖6顯示了通過定量腦電描記法進行的額葉前皮質電活動的波譜分析，分析了單獨的帕羅西汀(Paroxetine) (0. 5mg/kg腹膜內)、單獨的連接蛋白抑制劑(甲氯芬那酸， 0.%ig/kg通過腹膜內注射)、或帕羅西汀和連接蛋白抑制劑的組合的作用。χ-軸顯示了分析的頻率，y_軸顯示了從FFT分析得到的相對功率。波譜分析顯示為6隻動物在第1小時和第2小時的平均值。圖7顯示了通過定量腦電描記法進行的額葉前皮質電活動的波譜分析，分析了單獨的莫達非尼(Modafinil) (125mg/kg和250mg/kg腹膜內)、單獨的連接蛋白抑制劑(甲氯芬那酸O.^ig/kg通過腹膜內注射)、或莫達非尼(125mg/kg腹膜內)和連接蛋白抑制劑的組合的作用。χ-軸顯示了分析的頻率，y_軸顯示了從FFT分析得到的相對功率。波譜分析顯示為6隻動物在第1小時和第2小時的平均值。圖8顯示了通過定量腦電描記法進行的額葉前皮質電活動的波譜分析，分析了單獨的地西泮(Diaz印am) (lmg/kg腹膜內)、或地西泮(lmg/kg腹膜內)和連接蛋白抑制劑 (甲氯芬那酸，O.^ig/kg腹膜內)的組合的作用。χ-軸顯示了分析的頻率，y_軸顯示了從 FFT分析得到的相對功率。波譜分析顯示為6隻動物在第1小時和第2小時的平均值。圖9顯示了通過定量腦電描記法進行的額葉前皮質電活動的波譜分析，分析了單
5獨的文拉法辛(Venlafaxine) (0. 16mg/kg* %ig/kg腹膜內)、或文拉法辛(0. 16mg/kg腹膜內)和連接蛋白抑制劑(甲氯芬那酸，0. %ig/kg腹膜內)的組合的作用。χ-軸顯示了分析的頻率，Y"軸顯示了從FFT分析得到的相對功率。波譜分析顯示為6隻動物在第1小時和第2小時的平均值。圖10顯示了通過定量腦電描記法進行的額葉前皮質電活動的波譜分析，分析了單獨的依他普侖(Escitalopram) (0. 8mg/kg和％ig/kg腹膜內)、或依他普侖(0. 8mg/kg腹膜內)和連接蛋白抑制劑(甲氯芬那酸，0. %ig/kg腹膜內)的組合的作用。χ-軸顯示了分析的頻率，y-軸顯示了從FFT分析得到的相對功率。波譜分析顯示為6隻動物在第1小時和第2小時的平均值。圖11顯示了通過定量腦電描記法進行的額葉前皮質電活動的波譜分析，分析了單獨的安非他酮(Bupropion) (0. 16mg/kg，0. 8mg/kg和4mg/kg腹膜內)、或安非他酮 (0. 16mg/kg腹膜內)和連接蛋白抑制劑(甲氯芬那酸，O.^ig/kg腹膜內)的組合的作用。 χ-軸顯示了分析的頻率，y-軸顯示了從FFT分析得到的相對功率。波譜分析顯示為6隻動物在第1小時和第2小時的平均值。圖12顯示了通過定量腦電描記法進行的額葉前皮質電活動波譜分析，分析了單獨的舍曲林(Sertraline) (0. 16mg/kg，0. 8mg/kg和 4mg/kg腹膜內)、或舍曲林(0. 16mg/kg 腹膜內)和連接蛋白抑制劑(甲氯芬那酸，0. %ig/kg腹膜內)的組合的作用。χ-軸顯示了分析的頻率，y-軸顯示了從FFT分析得到的相對功率。波譜分析顯示為6隻動物在第1小時和第2小時的平均值。圖13顯示了在記錄的2個小時內根據施用不同劑量(0. 16mg/kg，0.8mg/kg和細g/kg腹膜內)的單獨的舍曲林、或舍曲林(0. 16mg/kg腹膜內)和連接蛋白抑制劑(甲氯芬那酸，0. %ig/kg腹膜內)組合的呈倒立「U」形的腦電描記法效應的示意圖。
具體實施例方式細胞間通訊對於維持組織和器官體內穩態而言是重要的。為了建立該通訊，通過間隙連接來連接細胞質，實現離子(Ca+和K+)、第二信使(AMPc，GMPc，IP3)、幾種小型代謝物 (葡萄糖)的交換，並確保細胞之間的電耦聯和代謝耦聯。間隙連接是具有選擇透性的連接，由質膜中包含的蛋白通道形成，且由連接蛋白六聚物形成(Meda P,Medecine/Sciences 1996 ；12 :909-920)。連接蛋白是細胞質膜的鑲嵌蛋白，實際上每種細胞類型都會合成它，無論多細胞生物在動物世界種系中的位置如何。在脊椎動物中，偶見的不生產連接蛋白的細胞是成年橫紋肌細胞、精子和循環血細胞。不同於許多膜蛋白，連接蛋白具有短半衰期(3至6小時之間)，沒有被糖基化，且不具有酶活性。目前，已經在哺乳動物中鑑別出至少13種不同的連接蛋白；在人體中，它們對應21種亞型。在實踐中，不同類型的連接蛋白可以存在於眾多組織中，且大多數細胞合成多種連接蛋白(Meda P, Medecine/Sciences 1996;12:909-920)。 在到達細胞膜之前，連接蛋白裝配成6分子集合，形成稱作連接子的中空管狀結構，其藉助於高爾基小泡連接質膜。當建立細胞接觸後，一個細胞的連接子與其鄰近細胞的連接子頭尾相接地對齊，建立約IOnm長的連續親水通道。該接合通道跨過細胞間隙建立相接觸的2 個細胞的細胞質之間的直接接觸。
因而，2個鄰近的質膜之間的六聚物雙鏈體的形成構成間隙連接。在人體中存在 21個編碼不同的連接蛋白亞型的基因，且參與間隙連接的組成的連接蛋白單體的不同組合已有描述。鑑別出的連接蛋白有一半是在腦中表達，更具體地，連接蛋白36(Cx36)表現為在定義為電突觸的界面中由神經元優勢地表達。缺少連接蛋白36的小鼠不具有任何中間神經元耦聯，這有助於證實這些特定的連接蛋白在至少一類電突觸中的關鍵作用 (Wellershaus K, Exp Cell Res. 200 。電突觸不會比化學突觸更快地傳遞信息，但是具有可逆的特性既不是抑制性的， 也不是刺激性的，它們局部地同步化多個細胞的狀態，且為雙向地。間隙連接如同低通過濾器一樣發揮作用，所以細胞狀態的該歸一化過程是更有效的，因為它或多或少地包含長期的變化。神經元之間的電耦聯由於其特徵而在新皮質和海馬的節律振蕩和放電現象中起作用。 最後，連接蛋白在不同的腦結構中到處存在，且局部地參與電活動的振蕩。但是，本發明人最近證實，連接蛋白也在腦電活動的整體調節中起重要作用。令人驚奇地，當這些蛋白在生理上存在時，它們實際上對中樞神經系統(CNS，Central Nervous System)的電活動具有整體去同步作用，減少並潛在地中和爆發現象。相反，藉助於所謂的 「抗-連接蛋白」劑來抑制這些分子，使得同步並因此增加測得的電生理活動成為可能。如已知的，通過腦電描記法(EEG)測得的中樞神經系統的電活動的增加在某些條件下反映了精神藥物的治療益處(Galderisi S,Methods Find Exp ClinPharmacol, 2002, M，85-89)，本發明人曾計劃測試連接蛋白對施用精神藥物的療效的抑制作用。許多結果清楚地證明，與施用抗-連接蛋白劑有關的腦電活動的調節使得能夠得到與所述試劑有關的精神藥物的藥劑益處，並得到一種基於該調節評估該藥劑益處的方法。因此抗-連接蛋白劑和精神藥物分子(例如抗抑鬱藥)的組合使得下述目的成為可能 (i)增加作用的特異性和精神藥物分子的治療效果，(ii)減少活性劑量並從而減少這些精神藥物分子的間接影響(副作用、失敗、抗性)。根據第一個方面，本發明提供了一種估計精神藥物有效當量劑量的方法，所述精神藥物可以與連接蛋白阻斷劑組合，用於治療患有精神疾病和/或神經退行性疾病的患者。該組合目的是獲得與單獨施用更大劑量的精神藥物相同的療效，但是副作用更少。在本發明的上下文中，精神藥物的「有效當量劑量」是指這樣的精神藥物劑量，當它與連接蛋白阻斷劑組合施用時，會產生與單獨施用藥理學活性劑量的精神藥物類似或相同的生理效應或藥理學藥效特徵。另外，精神藥物的「藥理學活性劑量」是指傳統上施用給諸如大鼠、小鼠、兔等實驗動物的精神藥物劑量。例如，《精神病學動物模型》(作者Olivier B, Slangen J,Mos J，1991 年由Birkhauser Verlag出版於巴塞爾)(Animal models inpsychopharmacology. Olivier B, Slangen J,Mos J,eds. Birkhauser Verlag, Basel ；1991) 一書提供了這樣的劑量。如果不了解該劑量，通過在動物中更換為人體中傳統上採用的藥理學活性劑量，能夠確定精神藥物的藥理學活性劑量，可以參考《法國本土精神藥物的消耗和處方實踐第一章國家數據 2000年》(作者Lecadet J，Vidal P，Baris B等，醫療保險醫學雜誌，2003年4_6月第34 卷第 2 期)("Medicaments psychotropes :consommation et pratiques de prescription enFrance metropolitaine. I. Donnees nationales,2000", Lecadet J, Vidal P, Baris B
7等人；Revue Medicale de 1' Assurance Maladie volume 34 no. 2/ApriI-June 2003」)。 也可能通過實驗性檢驗來確定該藥理學活性劑量，其中藥理學活性劑量是可以施用給動物的最大精神藥物劑量，且副作用不會比治療效果更顯著。在此情況下，通過施用多個遞增劑量的精神藥物劑量，並且每次測量所述藥物產生的效應，可以逐步確定藥理學活性劑量。在本發明的上下文中，「連接蛋白-阻斷」劑是這樣的化學分子、蛋白、蛋白片段或核酸(RNAi)，其能直接地和/或間接地抑制連接蛋白的功能活性，和更一般而言地抑制任何類型的細胞間連接，和/或能直接地和/或間接地在功能上抑制任何有關於連接蛋白-型蛋白的細胞活性。這樣的試劑也可以稱作「抗-連接蛋白分子」。估計精神藥物的有效當量劑量的方法是基於量化連接蛋白阻斷劑對精神藥物作用的增強來進行的。該估計通過幾個步驟進行對精神藥劑的效應進行表徵的步驟，和測量組合產品的藥劑益處的步驟。第一步包括確定和量化在不同劑量(藥理學活性劑量和從藥理學活性劑量遞減的劑量)的單獨精神藥物的作用，並從而得到在不同劑量下精神藥物分子特有的藥效特徵(或標準藥效特徵)。第二步包括確定當與連接蛋白-阻斷劑組合施用時具有與單獨精神藥物相同的藥理學藥效特徵的精神藥物劑量。有利地，首先通過實驗性檢驗，確定與精神藥物組合使用的連接蛋白-阻斷劑的劑量。該劑量實際上對應著不產生顯著的特定藥理學作用可以施用的連接蛋白-阻斷劑的最大劑量。當執行根據本發明的方法時，可以調節該劑量，從而優化該組合的效果。估計根據本發明的精神藥物的有效當量劑量的方法包括下述步驟a)準備與待測實驗條件一樣多的動物組，b)給第一個動物組施用藥理學活性劑量的所述精神藥物，並給接下來的動物組施用從所述藥理學活性劑量遞減的劑量，c)表徵在不同的施用劑量時所述精神藥物在所述組的動物中產生的作用，d)給新的動物組施用所述組合產品，其含有在b)中使用的劑量的所述精神藥物和所述連接蛋白-阻斷劑，e)表徵在d)中施用的每種所述組合產品在所述組的動物中產生的作用，f)測定精神藥物的有效當量劑量，即當精神藥物與連接蛋白-阻斷劑組合施用時，會產生與施用所述藥理學活性劑量的單獨精神藥物相同效果的精神藥物的劑量。該估計精神藥物的有效當量劑量的方法也可以估計組合產品(有效當量劑量的所述精神藥物和連接蛋白-阻斷劑的組合)和在藥理學活性劑量施用的精神藥物之間的藥劑益處。術語「藥劑益處」在本申請中是指單獨精神藥物的藥理學劑量和精神藥物的有效當量劑量之間的比例。換而言之，藥劑益處解釋了通過與抗-連接蛋白劑的組合所述精神藥物的藥理學劑量可以被減少的的量。施用的精神藥物(與抗-連接蛋白分子相組合施用)劑量的這種減少不僅不會在治療效能方面有任何後果，但是會減少副作用。因而，上面定義的藥劑益處(BD)可以寫為BD =精神藥物的藥理學活性劑量/精神藥物的有效當量劑量應當理解，為了實施根據本發明的估計方法，所述動物組屬於相同物種。此外，每個動物組都必須排他地接受單獨精神藥物劑量或含有某一劑量的精神藥物和抗-連接蛋白劑的組合產品，從而在相同組的動物中僅測量單獨的所述藥物或單獨所述組合產品的作用。優選地，所述動物組是相同年齡和相同性別。這些動物優選地是實驗動物，例如大鼠、 小鼠、兔等。應當理解，根據精神藥物的藥理學作用或含有精神藥物和連接蛋白-阻斷劑的組合產品的藥理學作用，確定要測試的劑量的數目；當某一劑量產生的藥理學作用不存在或不顯著時，不再需要使用更低的劑量。藥物或組合產品的施用可以大腦內進行，但是優選地腹膜內進行。有利地，通過不同類型的分析，尤其是電生理學或行為分析或血液標記或LCR標記，或通過醫學成像，可以測定由精神藥物和/或組合產品產生的作用。優選地，參照由給定刺激產生的電生理學應答，尤其是參照動物的腦電圖(EEG)活動，測定該作用。有利地，該估計方法可以確定施用組合產品的2個成分的最優時間方案(同時、分開或間隔施用)。該估計方法也可以在連接蛋白-阻斷劑的性質、精神藥物的性質以及使用的劑量方面進行選擇。根據第二個方面，本發明涉及含有至少一種連接蛋白-阻斷劑和精神藥物的新的組合產品，及其在患有精神疾病和/或神經退行性疾病的患者中的應用。通過連接蛋白阻斷間隙連接的各種分子是已知的。在這些分子中，芬那酯家族包括下述化合物甲氯芬那酸、氟芬那酸、尼氟酸和託芬那酸。這些化合物都具有非類固醇類的抗炎活性，但是該活性不是使它們具有阻斷間隙連接的能力的原因。實際上已經提出，芬那酯建立與連接蛋白或與蛋白膜界面的直接相互作用，其可以影響連接蛋白的構象，並因此影響其功能作用(Harks EG, The Journal of Pharmacology and ExperimentalTherapeutics 2001 Sep,298 (3) :1033_41)o2-[(2，6_二氯-3-苯基)氨基]苯甲酸(更常見地稱作甲氯芬那酸(MFA))是非類固醇類的抗炎劑、芬那酯類外周鎮痛劑，前列腺素抑制劑，且被描述為在水溶性的阻斷劑中能夠最有效地可逆地阻斷間隙連接。另外，甲氯芬那酸並不對一種連接蛋白類型具有特異性，因此可有效地阻斷大量腦連接蛋白(Pan F，Vis Neurosciences 2007，Jul-Aug ；24(4) 609-18)。甘草次酸衍生物是指18- β -甘草次酸(BGA，Beta Glycyrrhetinic Acid)，也稱作」甘草次酸(Enoxolone) M-α -甘草次酸和甘珀酸(CarbenoxoloneAcid)，它們是已知會抑制11-羥基固醇脫氫酶的三萜類皂草苷。此外，這些化合物能非常有效地抑制間隙連 ^ (Pan F, Vis Neurosciences 2007, Jul-Aug ；24(4) :609_18)。屬於奎寧家族的甲氟喹(Lariam)也對間隙連接具有強拮抗劑效力(SrinivasM， PNAS 2001,98 :10942-10947 ；Pan F,Vis Neurosciences 2007, Jul-Aug ；24(4) :609-18)。一些麻醉劑(諸如氟烷和異氟烷)具有快速的且可逆的間隙連接阻斷作用(Burt JM 等人，Circ Research. 1989 ；65 :829-37)。此外，油醯胺(順式-9-十八碳烯醯胺，油酸的第一種醯胺)也對連接蛋白分子43 和 32 具有抑制作用(Guan X.等人，J. Cell Biol 1997;139:1785-92)。另外，環糊精(α -環糊精(α -⑶)、β -環糊精(β -⑶)和Υ -環糊精(Υ -⑶))，是 α-D-吡喃葡萄糖的天然環狀寡糖，已經被證實抗-連接蛋白性質(Locke D.等人，J.Biol Chem 2004 ；279 :22883-92)。
最後，2-氨基乙基二苯基硼酸鹽O-APB)是最近被鑑別為間隙連接-阻斷劑的化合物(Bai D, J Pharmacol Exp Ther, 2006 Dec ；319 (3) :1452-8)。但是，這種肌醇 1，4， 5-三磷酸受體的調節劑相當特異性地靶向某些連接蛋白，諸如連接蛋白沈、30、36、40、45 禾口 50(Bai D,J Pharmacol Exp Ther,2006Dec ；319 (3) :1452-8)。類似地，最近已經提出用於阻斷連接蛋白胞外結構域(對於間隙連接的功能而言重要的結構域)的其它分子。其中特別地包括針對連接蛋白胞外結構域的抗體(HoferA等人，Glia 1998 ；24 :141-54 ；Meyer RA, J. Cell Biol. 1992 ；119 :179-89)或模擬連接蛋白的胞外環El和E2的保守的特定序列的小肽(DahlG.等人，Biophys J，1994 ；67 =1816-22)； 具體地，與胞外序列相對應且包括E1 (Gap26)的保守形式QPG和SHVR，和連接蛋白的 E2 (Gap27)的保守形式SRPTEK的肽，對於阻斷間隙連接最有效(ChaytorAT等人，J. Physiol 1997 ；503 :99-110)。在本發明的上下文中，連接蛋白-阻斷劑有利地選自長鏈醇(例如，庚醇和辛醇)、芬那酯(例如，甲氯芬那酸、氟芬那酸、尼氟酸、託芬那酸)、芳基氨基苯甲酸酯、氨基磺酸酯(例如牛磺酸)、甘草次酸衍生物(例如，18-β-甘草次酸、18-α-甘草次酸和甘珀酸)、油醯胺(例如，順式-9-十八碳烯醯胺)或四烷基銨離子和聚胺(諸如精胺和精脒)、 奎寧衍生物(諸如甲氟喹)、2_ΑΒΡ、麻醉劑(氟烷或異氟烷)、環糊精(α-環糊精(a-CD)、 β -環糊精(β -⑶)和Y -環糊精(Y -⑶))、針對具有模仿該特定結構域(尤其是Gap^和 Gap27)的保守形式的連接蛋白或肽的胞外結構域的抗體。這些不同的分子在下述文章中被準確地描述:Srivinas Μ, Connexins :A Guide ( 「連接蛋白導言」)，Humana Press2009, chapter 8, pp 207-224 ；Srinivas Μ, Molecular Pharmacology 2003 Jun,63 (6) 1389-97 ；Harks EG,The Journal of Pharmacology and ExperimentalTherapeutics 2001 Sep,298(3) :1033-41 ；禾口 Salameh A, Biochimica et BiophysicaActa 1719(2005)36-580優選地，連接蛋白-阻斷劑選自包括甲氯芬那酸、18-β-甘草次酸、甘珀酸、甲氟喹和2-ΑΡΒ的組，且更優選地選自包括甲氯芬那酸、18-β -甘草次酸和甘珀酸的組。這些化合物是作為實施例提供，本發明涉及具有直接或間接在功能上阻斷連接蛋白或間隙連接的性質的任何分子。對於一些具有公認的抗-連接蛋白功能的分子，已經描述了它們的抗炎作用、它們的麻醉作用或它們對前列腺素體內穩態的作用，因此，通過它們自身作用於中樞神經系統。但是，在本發明中使用這些分子的劑量(非常低的劑量)中，除了抗-連接蛋白活性以外，其他的活性不參與這些作用。另外，低劑量的使用可以獲得依賴於組織的連接蛋白組合物的更好的組織特異性，因為中樞神經系統特別富含連接蛋白。最後，應當指出，抗炎分子通過它們對前列腺素合酶的作用，可以間接地產生對連接蛋白的結構修飾(連接蛋白表達水平或其磷酸化的調節具體地通過PII和PKA發生， 它們自身依賴於Cox、N0和PG合成酶(抗炎劑的靶物)的活性水平)。從連接處的連接蛋白存在的減少這個意義上而言，這種修飾間接地造成連接蛋白的功能活性的降低，類似於連接蛋白的直接阻斷。結果，這些分子的使用會達到預期的效果(阻斷連接蛋白)，且不會妨礙低劑量與精神藥劑的組合使用(Yao J，Morioka T & Oite T. =Kidney Int. 2000 ；57 1915-26. Yao J, Hiramatsu N, Zhu Y ^A J Am Soc Nephrol. 2005 ；16 58-67 ；Figueroa XF,Alvina K,Martinez AD等人Microvasc Res. 2004 ；68 :247-57 Alldredge BT. J Clin
10Pathol. May 12 2008 ；Lai-Cheong JE,Arita K & McGrath JA. J InvestDermatol. 2007 ； 127 :2713-25,和 Giepmans BN. =Cardiovasc Res. 2004 ；62 :233-45)。此外，可以通過連接蛋白的磷酸化來調節功能性間隙連接的形成。實際上，六聚物亞基的某些蛋白結構域的磷酸化，根據磷酸化部位導致對間隙連接的功能的抑制，這是通過關閉通道或減少在膜處的存在來實現的(亞基的流量和半衰期的修飾)(Scemes E,Glia 2008 Jan 15,56(2) :145-53 ；Postma FR, J CellBiol 1998 Mar 9,140(5) :1199-209 ；Shaw RM, Cell 2007, February 9,128(3) :547-60 ；Fabrizi GM, Brain 2007 Feb，130 (Pt2) 394-403)。因而，通過連接蛋白的磷酸化水平，分子可以具有間接阻斷間隙連接的作用。特別具體地是溶血磷脂酸、凝血酶和神經肽，諸如內皮縮血管肽(PostmaFR，J Cell Biol 1998 Mar 9，140(5) :1199-209)。在本發明的一個優選的實施例中，連接蛋白-阻斷劑對連接蛋白和間隙連接具有間接作用，且它選自包括溶血磷脂酸、凝血酶和神經肽(諸如內皮縮血管肽)的組。在本發明的一個優選的實施例中，連接蛋白-阻斷劑既不是麻醉劑，也不是抗炎劑，也不是前列腺素合成抑制劑。根據該優選實施例，連接蛋白-阻斷劑是2-氨基乙氧基二苯基硼酸鹽Q-APB)。連接蛋白-阻斷劑可以有利地改善醫師開出的用於治療患有精神疾病和/或神經退行性疾病的患者的精神藥物的療效。在動物中，通過估計有效當量劑量的方法(這是本發明的第一個目的)，可以測量出這種改善。「精神藥劑」是指，通過修飾某些腦生化和生理過程而主要作用於中樞神經系統狀態的任何物質。本發明與以往技術的差別在於，在組合產品中，由連接蛋白-阻斷劑產生的治療益處並不對使用的特定精神藥物具有特異性，而是類似地適用於許多具有精神藥物作用的分子。優選地，精神藥物選自多巴胺能、GABA能、腎上腺素能、乙醯膽鹼、5-羥色胺能、阿片樣物質能、腺苷能、離子型、組胺能、ΙΜΑ0、兒茶酚-0-甲基轉移酶、DOPA脫羧酶和去甲腎上腺素能的精神藥物效應物。術語「效應物」是指激活或抑制一種或多種神經受體的任何物質，且因此可以是所述受體的激動劑或拮抗劑。根據一個優選實施例，所述精神藥物是多巴胺能效應物，諸如洛沙平、乙醯丙嗪、 哌甲酯、金剛烷胺、培高利特、利舒脲、溴隱亭、羅匹尼羅、阿撲嗎啡、阿立哌唑、舒必利、氨磺必利、舒託必利、硫必利、匹莫齊特、利培酮、氟哌啶醇、五氟利多、珠氯噻醇或安非他酮。根據另一個具體實施例，所述精神藥物是GABA能的效應物，諸如噻加賓、託吡酯、 氯卓酸鉀、地西泮、氯硝西泮、奧沙西泮、蘿拉西泮、溴西泮、氯甲西泮、硝西泮、氯噻西泮、阿普唑侖、艾司唑侖、三唑侖、氯普唑侖、艾替伏辛、甲丙氨酯、佐匹克隆、唑吡坦、苯巴比妥、非爾氨酯或氨己烯酸。根據另一個具體實施例，所述精神藥物是腎上腺素能的效應物，諸如雙氫麥角胺、 莫達非尼、阿屈非尼、米氮平和奧昔託隆。根據另一個具體實施例，所述精神藥物是乙醯膽鹼能的效應物，諸如舒布硫胺、曲
11帕替平或苯海索。根據另一個具體實施例，所述精神藥物是5-羥色胺能的效應物，諸如氯丙嗪、曲米帕明、氯氮平、奧氮平、氰美馬嗪、氟哌噻噸、奈福泮、氟伏沙明、氯米帕明、舍曲林、氟西汀、西酞普蘭、依他普侖、帕羅西汀、阿米替林、度洛西汀、文拉法辛、丁螺環酮、卡匹帕明、佐米曲普坦、舒馬普坦、那拉曲坦、吲哚拉明、麥角胺、麥角胺酒石酸鹽、苯噻啶、匹泮哌隆、美西麥角、苯噻啶、噻奈普汀、米那普侖、阿米替林、曲米帕明、維洛沙秦、噻奈普汀、金絲桃屬或鋰。根據另一個具體實施例，所述精神藥物是阿片樣物質能的效應物，諸如納布啡、丁丙諾啡、哌替啶、可待因、曲馬多、嗎啡、氫嗎啡酮、羥考酮、美沙酮、右丙氧芬、哌替啶、芬太尼、納曲酮或鹽酸嗎啡。根據另一個具體實施例，所述精神藥物是腺苷能的效應物，諸如卡馬西平或奧卡西平。根據另一個具體實施例，所述精神藥物是離子型的效應物，諸如氟桂利嗪，乙琥
胺，左乙拉西坦，拉莫三嗪，磷苯妥英或苯妥英。根據另一個具體實施例，所述精神藥物是組胺能的效應物，諸如尼普拉嗪，羥嗪或多西拉敏。根據另一個具體實施例，所述精神藥物是單胺氧化酶效應物，諸如嗎氯貝胺、司來吉蘭或異丙煙胼。根據另一個具體實施例，所述精神藥物是兒茶酚-0-甲基轉移酶效應物，諸如恩他卡朋或託卡朋。根據另一個具體實施例，所述精神藥物是DOPA脫羧酶效應物，諸如苄絲胼或卡比多巴。根據另一個具體實施例，所述精神藥物是去甲腎上腺素能的效應物，諸如米安色林、地昔帕明、嗎氯貝胺或安非他酮。根據另一個具體實施例，所述精神藥物是作用於邊緣系統的效應物，諸如加巴噴丁或卡普託胺。甚至更優選地，選擇的精神藥物分子是作為5-羥色胺能的效應物的氯氮平(一種二苯並二氮雜卓衍生物)或帕羅西汀、依他普侖、舍曲林或文拉法辛或任何其它5-羥色胺能的效應物，諸如氯丙嗪、曲米帕明、奧氮平、氰美馬嗪、氟哌噻噸、奈福泮、氟伏沙明、氯米帕明、氟西汀、西酞普蘭、阿米替林、度洛西汀、丁螺環酮、卡匹帕明、佐米曲普坦、舒馬普坦、 那拉曲坦、吲哚拉明、麥角胺酒石酸鹽、苯噻啶、匹泮哌隆、美西麥角、苯噻啶或噻奈普汀。甚至更優選地，選擇的精神藥物分子是作為腎上腺素能的效應物的莫達非尼(一種二苯基甲烷衍生物)或任何其它腎上腺素能的精神藥物效應物，諸如雙氫麥角胺、阿屈非尼、米氮平或奧昔託隆。因而，甚至更優選地，所述精神藥物分子選自莫達非尼、氯氮平、帕羅西汀、地西泮、文拉法辛、依他普侖、安非他酮或舍曲林。在一個優選的實施例中，所述精神藥物分子是選自下述的抗抑鬱藥嗎氯貝胺(M0CLAMINE)、阿米替林(LAR0XYL)、氯米帕明(ANAFRANIL)、米那普侖(IXEL)、依他普侖(SER0PLEX)、西酞普蘭(SER0PRAM)、氟西汀(PROZAC)、帕羅西汀(DER0XAT)、氟伏沙明(FL0XYFRAL)、舍曲林(ZOLOFT)、米氮平(NORSET)、度洛西汀(Cymbalta)或文拉法辛 (EFFEX0R)和安非他酮(ZYBAN)。在一個甚至更優選的實施例中，所述精神藥物分子是抗抑鬱藥，選自包含下列的組帕羅西汀、文拉法辛、依他普侖、安非他酮和舍曲林。根據第三個方面，本發明也涉及該組合產品與其他藥物同時、分開或間隔施用於患有精神疾病和/或神經退行性疾病的患者。需要該治療的患者可能患有選自包括下列的組的精神疾病和/或神經退行性疾病抑鬱症，雙相型障礙，癲癇，精神分裂症，廣泛性焦慮症，抑鬱症，由於壓力引起的病症， 恐慌，恐怖症，強迫性障礙，行為失常，免疫系統衰退，疲勞和伴有疼痛的症狀，慢性疲勞，纖維肌痛，和其它疾病，諸如孤獨症，注意力下降，活動過度，進食病症諸如貪食症、厭食症、肥胖症，精神障礙諸如情感淡漠，偏頭痛，疼痛，心血管病，神經退行性疾病和與抑鬱焦慮有關的疾病(阿爾茨海默氏病，亨廷頓病，帕金森病)，藥物依賴性和藥物成癮。在同時使用的情況下，將組合治療的2個組分同時施用給患者。根據本發明的該實施例，2個組分可以包裝以混合物的形式在一起，或分開包裝，在患者急需時混合到一起， 然後施用。更常見地，2個組分同時地、但是分開地施用。具體地，2個組分的給藥途徑可以是不同的。施用也可以在不同的部位進行。在另一個實施例中，所述2個組分錯開或間隔施用，例如在同一天或間隔幾天、幾周或甚至幾個月。根據第四個方面，本發明涉及使用至少一種連接蛋白-阻斷劑來製備藥物，所述藥物在精神藥物之前、同時或之後施用，以便治療患有精神疾病和/或神經退行性疾病的
^^ ο根據第五個方面，本發明包括使用至少一種連接蛋白-阻斷劑來調節和/或增強精神藥物對患有精神疾病和/或神經退行性疾病的患者的作用。術語「調節」在該情況下是指，通過增強作用或拮抗作用，幹預在抗-連接蛋白劑之前、同時或之後施用的精神藥物的直接或間接作用，尤其是副作用。術語「增強」在該情況下是指，顯著增加在抗-連接蛋白劑之前、同時或之後施用的精神藥物的作用。因而，精神藥物與抗-連接蛋白劑的組合使得能夠減少所述精神藥物的劑量，並因此限制所述精神藥物的副作用，和/或減少失敗和停藥的影響。本發明因此也涉及使用至少一種連接蛋白-阻斷劑來減少所述精神藥物的劑量， 和/或限制所述精神藥物的副作用，和/或減少失敗和停藥的影響。根據本發明的最後一個方面，描述了一種治療患有精神疾病和/或神經退行性疾病的患者的方法，其包括給所述患者施用a)至少一種選自精神藥物的活性物質，和b)至少一種連接蛋白-阻斷劑，且其中所述產品a)和b)同時地、分開或間隔施用。實施例現在，通過腦電描記法來分析腦的區域被視作靈敏可靠的表徵藥物對中樞神經系統作用的技術。腦電描記法(EEG)是藉助於放置在頭皮上的電極來測量腦電活動，經常表示為線的形式，稱作腦電圖。與心電圖(藉助它可以研究心臟的功能)相比，EEG是無痛、 且非侵入性的檢查，其提供關於腦(尤其是腦皮質)隨時間的神經生理學活動的信息，既可用於神經學診斷目的，也可用於認知研究神經科學的目的。基於EEG的電信號，對於每個頻率來說，都是由大量神經元產生的同步突觸後動作電位的求和的結果。已經證實，與每個頻率有關的電功率可以彼此獨立地隨個體的行為或施用的藥物而變化(Dimpfel W, Neuropsychobiology. 1986 :15(2) :101-8) 在施用藥物後，患者的腦電圖變化，與每個頻率有關的電位的分布構成所述藥物的藥電圖(electropharmacogram)。 一般而言，為不同的疾病開出的藥物的藥電圖是不同的，而當用它們治療相同病理時，則是類似的(Dimpfel W, British Journalof Pharmacology，2007，152，538-548)。已經測定了與150種以上的藥物相對應的藥電圖(例如，鎮痛藥、抗抑鬱藥、精神安定藥、興奮劑、 安神劑、鎮靜藥和麻醉品)。現在，由於這些眾多的研究，藥電圖的測定和分析被認為是一種測量藥物的藥理學作用的可靠技術。另外，EEG的參數使我們獲得關於許多化合物臨床階段變化的定量信息(Mandema & Danhof，Clin. Pharmacokinet. 1992，23，191-215)。EEG 電勢的測量結果也可以用於鑑別施用藥物的細胞受體(ParkerTJ，British Journal of Pharmacology 2001，132，151-158)。EEG是一種腦電活動的測量方法，且存在不同的表示腦電描記法數據的模式。第一種是以線表示並鑑別特徵性波動現象。該定性數據可以為準確測定一段電活動提供信息，但是不會提供關於電活動的定量方面的信息。為此，實驗人員使用基於傅立葉變換信號分析的定量腦電描記法，以得到在給定的頻率隨時間變化的功率值。該功率值與對照值有關，從而能夠測定在給定的頻率功率隨時間的變化。根據實驗，該值可以按照不同時間階段取平均值。這些功率隨時間的變化可以像作者那樣表示為與生理學或病理學的節律(δ (1-4Ηζ)，θ (4·5-8Ηζ)，α (8· 5_12Ηζ)，β (12. 5_24Ηζ)和 Y ( > 24Ηζ))相對應的特定頻率範圍內的平均值的形式，或相對功率柱狀圖的形式(逐赫茲)。這2種表示模式是嚴格相當的，可以彼此轉化(參見《EEG 神經心理學基礎，闡釋和處方原理》，作者 Jean Vion-Dury, France Blanquet, MASSON 出版社，Abr6g6Masson 叢書 (BasesneurophysioIogiques,principes d' interpretation et de prescription Jean Vion-Dury, France Blanquet. MASSON ;Collection :AbregeMasson))。在下面Il示的實施例中，選擇了以相對功率表示(逐赫茲)。例如，對於非典型的抗精神病藥，具體地是氯氮平，已經證實，施用它們會產生隨時間的兩相藥電圖在第1小時期間，對於非常低的頻率(0. 8至4. 5Ηζ) ( δ節律)和7至 9. 5Ηζ(α節律I)，EEG電位是非常高的，且對於4. 75至6. 75Ηζ ( θ節律)和大於18. 5Ηζ ( β 節律)的頻率，是低強度，這是積極的臨床反應的跡象(Galderisi S, Methods Find Exp Clin Pharmacol，2002，24，85-89)。在第2小時，在8至15Hz的頻率範圍，EEG電位是處於平均強度，這可能包含錐體束外的副作用。實際上，對於7-9. 5Hz和12. 75-18. 50Hz的頻率，在第2小時中平均強度的EEG電位意味著將存在副作用(Dimpfel W,British Journal ofPharmacology 2007,152，538—548)。方案-電極的預植入給一組6隻有意識的Wistar大鼠預植入6個兩側兩極電極O個在前額，2個在海馬前，2個在海馬後)。-注射通過6隻大鼠的循環組合(單獨的精神藥物治療、單獨的抗-連接蛋白治療、抗-連接蛋白+精神藥物組合治療)進行不同的治療。經由腦膜下或腹膜內緩慢地注射 (80ng/kg，4.5pg/秒)不同劑量的甲氯芬那酸(Sigma)。經由腦膜下注射(80ng/kg)甘草次酸(Sigma)。經由腹膜內注射(0. 2mg/kg)氯氮平(Sigma)。經由腹膜內注射(0. 5mg/kg) 帕羅西汀(Sigma)。經由腹膜內注射(125mg/kg和250mg/kg)莫達非尼(Cephalon) 。-EEG 的測量通過注射後的2-小時記錄，對不同組中有意識的大鼠(事先植入並馴化)進行 EEG測量。通過傅立葉變換(FFT)進行的波譜分析可以得到逐赫茲和逐秒的相對功率。然後將FFT數據逐分鐘取平均值，並與記錄前一天在嚴格相同的實驗條件下生成的溶劑對照相結合。然後將左和右額葉前皮質的相對波譜功率按照5-分鐘時間段取平均值，按照12 個5-分鐘重複取平均值，並逐小時表示。-統計分析對單獨施用不同藥物(單獨精神藥物或單獨抗-連接蛋白劑)的效果進行相對定量腦電圖描記術分析，將得到的數據通過三個因子的方差分析(ANOVA)進行統計學分析「頻率」(Hz)、「時間」(第1小時和第2小時，按照12個被平均的5-分鐘重複)和」動物」(每種處理使用6隻不同的動物)。對於在實施例中表示的精神藥物和抗-連接蛋白劑的組合，引入第四個ANOVA因子「抗-連接蛋白組合」。對於單獨精神藥物相對於對照(精神藥劑的溶劑)，或精神藥物與抗-連接蛋白的組合相對於單獨施用的精神藥劑(造成相對功率增加或降低)，選擇給定頻率的相對功率變化的顯著性閾值為P < 0. 05。實施例1 連接蛋白抑制劑的作用已經進行了一系列實驗來研究連接蛋白對不同腦結構的EEG活動的影響。為此， 通過直接在腦膜內緩慢施用連接蛋白抑制劑甲氯芬那酸(MFA)，以抑制腦連接蛋白。在相同的實驗條件下，研究了另一種抗-連接蛋白劑甘草次酸(BGA)大腦內給藥的作用。大腦內用連接蛋白抑制劑(MFA)治療的大鼠的腦電活動的分析顯示出，在第1 小時，對於8-lOHz的頻率，EEG電位顯著增加，並因此額葉前大腦活動同步化顯著增加 (140%)，並延續至第2小時。在大腦內注射另一種抗-連接蛋白類別(甘草次酸)時，觀察到類似的顯著變化(圖1)。該同步化表明，連接蛋白具有去同步電活動的生理學作用。鑑於連接蛋白抑制劑在研究的不同區域的總體作用和包含連接蛋白的連接處在腦內的普遍存在，通過這些實驗結果可以重新解釋文獻中的數據、並提出了未有報導的連接蛋白在腦的電生理學活動歸一化中的作用。這種歸一化會限制電活動爆發現象，並調節和減弱高度互連的系統的功能異常。實施例 2 型非典型抗精神病藥物與連接蛋白抑制劑組合的作用為了探究連接蛋白在腦活動中的一般調節作用的假說，研究了與抗-連接蛋白分子組合的藥理學治療的電生理學結果。在該背景下，研究了氯氮平與連接蛋白-抑制劑甲氯芬那酸(MFA)組合的作用。氯氮平是一種指定用於精神分裂症的非典型的抗精神病藥物，是一種5-羥色胺能的和多巴胺能的受體拮抗劑，或者腎上腺素能的、膽鹼能的和組胺能的拮抗劑，具有典型的複雜EEG 活化波譜(Parker TJ, British Journal ofPharmacology 2001，132，151-158)，且在治療劑量具有很多種副作用(體重增長，骨髓減少和血液中的白細胞數目減少)。
2. 1氯氮平的作用在第一個階段，對實驗模型進行驗證，以證實它與公開的數據相一致(Dimpfel W, British Journal of Pharmacology 2007,152,538-548 ；Parker TJ, British Journal of Pharmacology 2001，132，151-158)。由此得到單獨的氯氮平作用的記錄。EEG的波譜分析顯示出，在單獨的抗精神病藥物治療期間，在第1小時並延續至第 2小時，對於8-lOHz的頻率，EEG電位顯著增加，額葉前大腦活動的同步顯著增加)， 而對於16-20HZ的頻率也是一樣，程度稍低(圖2)。這些觀察結果與在文獻中報導的非典型抗精神病藥的特徵作用完全一致 (Dimpfel W,British Journal of Pharmacology 2007,152,538-548,Parker TJ,British Journal of Pharmacology 2001，132，151—158)。2. 2氯氮平和抗-連接蛋白組合的作用在第二個階段，研究了連接蛋白的連接系統對氯氮平的電生理作用的影響。在抗精神病藥物(氯氮平)和連接蛋白抑制劑(MFA)的組合治療期間，EEG的波譜分析顯示出，在第1小時，對於8-lOHz的頻率，額葉前大腦活動同步顯著增加060% )， 且對於16-20HZ的頻率也是一樣，程度稍低。這種同步的顯著增加與氯氮平波譜相對應，並因此對應於通過阻斷連接蛋白的連接系統對氯氮平作用的增強。這種抗-連接蛋白對氯氮平作用的增強機制隨時間受到控制。實際上，在第2小時，僅抗-連接蛋白的作用持續(圖 2)。另外，通過集中分析顯著的頻率(例如8Hz的頻率)，觀察到的氯氮平作用增強伴有振蕩作用波幅的顯著減小(圖幻，而用單獨的氯氮平治療產生高波幅波動(圖3)。因而，通過阻斷連接蛋白的連接系統而導致的波動減小表明，連接蛋白可能在建立電生理學活動的這些短暫波動中起作用。這些波動對應著由氯氮平產生並受連接蛋白控制的快速活動引發機制。最後，這些結果證實了連接蛋白的連接系統對電生理學活動的調節作用(調解總強度，以及基於局部的和時間的波動)的假說。此外，這些觀察證實了未經報導的與連接蛋白抑制劑組合的抗精神病藥物作用的調節。該調節通過抗精神病藥物作用在較短的時間段內的顯著增強和穩定得到證明。這種抗精神病藥物的作用增強將可能與使用更高劑量的氯氮平所得到的增強相同，但是可以控制作用時間。實施例3 給藥途徑的對比對比了通過MFA抑制劑的中樞或外周(大腦內對腹膜內)給藥途徑阻斷連接蛋白的電生理學結果。對外周和中樞給藥途徑進行評估的EEG波譜分析顯示出，在第1小時對於類似的頻率範圍，額葉前大腦活動的同步呈現相似的顯著增加。但是，對於外周給藥，同步的顯著增加持續至第2小時，而對於中樞給藥，這種增加則降低了。在第2小時的這種差異與給藥途徑的藥代動力學有關(圖4)。最後，這些初步結果表明，給藥途徑，不管是大腦內還是外周，只會改變作用的波幅。 對比了通過外周施用MFA抑制劑的劑量阻斷連接蛋白的電生理學結果(劑量效應)。對外周施用的劑量進行評估的EEG波譜分析顯示出，根據劑量在不同的頻率範圍內，同步會有顯著變化。利於額葉前大腦活動同步的這些變化出現在第1小時，且持續至第 2小時，並且隨劑量變化。這種通過連接蛋白的抑制的同步證實了連接蛋白的生理學去同步特性(圖幻。這些隨劑量的同步的重要變化可由連接蛋白的定量表示(根據中樞神經系統網絡的可變間隙連接的數目，例如膽鹼能的、去甲腎上腺素能的、5-羥色胺能的等)和/ 或定性表示(不同的連接蛋白亞型對給定劑量的抑制劑的親和力)。總之，這些初步結果表明，腹膜內施用的抗-連接蛋白的特有作用取決於劑量。 這似乎表明，這種通過連接蛋白實現的調節系統，即使它在腦中普遍存在，但在腦中具有局部特異性(亞型或定量)，這與文獻相一致(Fukuda T.，Neuroscientist 2007 ；13(3) 199-207)。這也表明，通過精神藥物(膽鹼能的、5-羥色胺能的、去甲腎上腺素能的、GABA 能的等)特異性地靶向的系統，應當根據它的結構和它的化學性質，並根據它的藥理學(半衰期、代謝、清除率)，調節抗-連接蛋白劑量。最後，該劑量-效應研究使人們能夠鑑別造成最小實際EEG效應(在第1小時沒有顯著性變化，在第2小時顯著性稍微增加)的腹膜內施用的MFA劑量，所述最小實際EEG 效應與採用不同的精神藥劑的作用的增強相當。該MFA劑量是0.%ig/kg(比抗炎效應使用的劑量小10-25倍的劑量)，且是在實施例5和6中所述的增強實施例中使用的劑量。棚列5輔擁為了繼續評估連接蛋白在大腦活動中的總調節作用的假說，研究了與抗-連接蛋白分子相組合的第一個藥理學抗抑鬱藥治療的電生理學結果。在該背景下，研究了帕羅西汀與連接蛋白抑制劑甲氯芬那酸(MFA)的組合的作用。帕羅西汀是一種適用於急性或慢性抑鬱發作的抗抑鬱藥，是5-羥色胺再吸收的選擇性抑制劑組中的苯基哌啶的衍生物，且在治療劑量具有大量副作用(情感淡漠、瞳孔散大、噁心、致畸性、嗜睡、頭痛、體重和食慾變化、性行為變化、抑鬱和焦慮感增加、口乾燥、攻擊行為(尤其是在兒童中)、可能的先天畸形、紅斑、心理運動不穩定、瘙癢、衰竭(鈉)、出汗、自殺念頭、肌無力、肌肉痛、異常的攻擊水平、血清素症候群)。5. 1帕羅西汀的作用在第一個階段，評估實驗模型，因為沒有已知關於帕羅西汀在有意識的大鼠中的 EEG效應的文獻數據。但是，關於帕羅西汀的作用(尤其是關於睡眠-清醒節律)的各種研究提供了用於急性治療的帕羅西汀的藥理學劑量，它們通常是2-5mg/kg(SancheZ C， Pharmacol Biochem Behav. 2007 Mar ；86 (3) :468-76)。因此，進行了對在腹膜內施用0. 5mg/kg劑量(比在大鼠的急性治療中常用的劑量小4-10倍)的單獨的帕羅西汀的作用的記錄。EEG波譜分析顯示出，在單獨抗抑鬱藥治療中，在第1小時，在8-lOHz，額葉前皮質的相對功率顯著增加，因此額葉前大腦活動同步顯著增加(約200% )，且對於2-3Hz和 18-19HZ的頻率也是一樣，程度稍低，且在第2小時，對於8-lOHz的頻率，同步程度增加(約 300% )，對於2-3Hz和18-19HZ的頻率也是一樣，程度稍低(圖6)。5. 2帕羅西汀和抗-連接蛋白組合的作用在第二個階段，研究了連接蛋白的連接系統對帕羅西汀的電生理作用的影響。
在抗抑鬱藥(帕羅西汀)和連接蛋白抑制劑(MFA)的組合治療中，EEG波譜分析顯示出，在第2小時，對於8-lOHz的頻率，額葉前大腦活動同步顯著增加(600%)，且對於 2-3Hz和18-19HZ的頻率也是一樣，程度稍低。該同步顯著增加與單獨帕羅西汀的波譜完全對應，並因此對應於通過阻斷連接蛋白的連接系統對帕羅西汀作用的顯著增強。另外，這種抗-連接蛋白增強帕羅西汀作用的機理遵循與單獨的帕羅西汀相同的時程。實際上，單獨的或與抗-連接蛋白組合的帕羅西汀會產生EEG效應，該效應在第2小時增加，且必須在施用後幾小時內清除(圖6)。因而，帕羅西汀不同於在第1小時造成最大EEG活動的氯氮平，帕羅西汀產生持續時間更長且需要更多時間來發展的效應。抗-連接蛋白的增強作用因此保持了研究的精神藥物分子(具有不同的化學性質，靶向不同的系統，且具有非常不同的適應症的精神藥物分子)的時程性質，並進一步肯定了連接蛋白調節的系統不限於單一神經傳遞系統的觀
O總之，這些結果證實了連接蛋白的連接系統對電生理學活動的調節作用(對總強度和時程)的假說。最後，這些觀察顯示出未經報導的抗抑鬱藥和連接蛋白抑制劑組合對抗抑鬱作用的調節。該調節通過在劑量比藥理學劑量小4-25倍時的抗抑鬱作用的增強而得到證實。因此抗-連接蛋白對抗抑鬱作用的這種增強可將抗抑鬱藥劑量減少4-25，並且對抗-連接蛋白的特異性作用最小。測得的帕羅西汀和抗-連接蛋白組合的藥劑益處因此將大於4。棚列6 :撤申絲1^口連擁__船__為了繼續評估連接蛋白在大腦活動中的總調節作用的假說，研究了與抗-連接蛋白分子相組合的精神興奮藥藥理學治療的電生理學結果。在該背景下，研究了莫達非尼(Provigil)與連接蛋白抑制劑甲氯芬那酸(MFA)組合的作用。莫達非尼是一種用於治療發作性睡病和特發性睡眠增多症的精神興奮藥，是一種在治療劑量具有許多種副作用的去甲腎上腺素再吸收抑制劑(興奮、攻擊性、失眠、厭食症、頭痛、噁心、胃痛、過敏性皮疹)。6. 1莫達非尼的作用在第一個階段，用公開的數據評估了實驗模型，所述數據具體提供了莫達非尼在急性治療中的藥理學劑量，它們通常是100-350mg/kg(Sebban C，BritishJournal of Pharmacology(1999) 128,1045-1054, De saint Hilaire Ζ., Neuroreport. 2001 Nov 16 ； 12(16) :3533-7)。由此對在2個劑量(125mg/kg和250mg/kg)的單獨莫達非尼作用的進行記錄。EEG波譜分析顯示出，對於單獨的精神興奮藥治療，在第1小時，對於2-5Hz的頻率，EEG電位顯著增加，因此額葉前大腦活動同步顯著增加(對於250mg/kg劑量，是300%， 且對於125mg/kg劑量，是120% )，且對於10_25Hz的頻率，125mg/kg劑量，EEG電位顯著降低，因此額葉前大腦活動去同步(10-30% )，且對於250mg/kg劑量也是一樣，程度稍低，並在第2小時增加(圖7)。這些觀察與文獻報導的精神興奮藥的特異作用相一致(klDban C， BritishJournal of Pharmacology (1999) 128,1045-1054, De saint Hilaire Ζ., Neuroreport. 2001 Nov 16 ；12(16) :3533-7)。
6. 2 H汰非原和杭-連接合的作用在第二個階段，研究了連接蛋白的連接系統對低劑量(125mg/kg)的莫達非尼的電生理作用的影響。在精神興奮藥(莫達非尼)和連接蛋白抑制劑(MFA)的組合治療中，EEG波譜分析顯示出，在第1小時，對於2-5Hz的頻率，額葉前大腦活動同步顯著增加(300% )，同樣， 對於10-25HZ的頻率，EEG電位顯著降低，因此額葉前大腦活動去同步，且在第2小時增加 (圖7)。這種EEG變化與在高劑量Q50mg/kg)的單獨莫達非尼的波譜完全對應，因此對應於通過阻斷連接蛋白的連接系統對莫達非尼作用的增強。另外，這種抗-連接蛋白象氯氮平和帕羅西汀一樣，通過抗-連接蛋白增強莫達非尼作用的機理遵循與在較高劑量的單獨莫達非尼相同的時程。這種抗-連接蛋白的增強保留了類型不同的精神藥劑的時程性質， 進一步肯定了連接蛋白調節的系統不限於單一神經傳遞系統的觀念。總之，這些結果證實了連接蛋白的連接系統對電生理學活動的調節作用(對總強度和對時程)的假說。此外，這些觀察顯示出未經報導的通過與連接蛋白抑制劑組合對精神興奮藥作用的調節。該調節通過在低劑量精神興奮藥作用的增強得到證實，並完全模擬高劑量的作用。抗-連接蛋白對精神興奮藥作用的這種增強，使得精神興奮藥劑量減少至少2個因子，且對抗-連接蛋白沒有特異性作用。測得的莫達非尼和抗-連接蛋白組合的藥劑益處因此至少是2。棚列7輔擁_吿丨_輔_為了繼續評估連接蛋白對大腦活動的總調節作用的假說，研究了與抗-連接蛋白分子相組合的抗焦慮藥藥理學治療的電生理學結果。在該背景下，研究了地西泮與連接蛋白抑制劑甲氯芬那酸(MFA)組合的作用。地西泮是一種用於治療過度焦慮發作、睡眠困難、神經病狀態、心身表現、酒精解毒作用和癲癇的抗焦慮藥。地西泮是促進GABA能傳遞的苯並二氮雜卓，在治療劑量具有許多種副作用 (嗜睡、張力過低、中毒感覺、集中困難、應激性、攻擊性、興奮、意識錯亂、肝炎、過敏性皮膚反應、吞咽困難)，且可以導致耐受性和依賴性，需要在不同的治療階段進行劑量調節。7. 1地西泮的作用在第一個階段，評估了實驗模型，與在腹膜內施用給有意識的大鼠的地西泮的EEG 效應的文獻數據進行對比(Robledo P. ,Alcohol Clin Exp Res. 1994 Apr ； 18 (2)-363-8)。 由此對在腹膜內施用的lmg/kg劑量(比在大鼠的急性治療中常用的劑量小1.5-5倍)的單獨地西泮的作用的進行記錄。EEG波譜分析顯示出在第1小時地西泮的特徵性作用，即4-7Hz組分的功率輕微降低(約降低25% )和11-30HZ組分的功率顯著增加(約120% )。在第2小時，在4_7Hz 和11-30HZ組分的這些作用持續，而強度降低，且出現l-3Hz組分的功率的顯著增加(參見圖8)。7. 2地西泮和抗-連接蛋白組合的作用在驗證了實驗模型後，研究了連接蛋白的連接系統對地西泮的電生理作用的影響。在抗焦慮藥(地西泮，lmg/kg腹膜內)和連接蛋白抑制劑(MFA，0. %ig/kg腹膜內) 的組合治療中，EEG波譜分析顯示出在第1小時11-30HZ組分(約150% )和l_3Hz組分(約120%)的功率的顯著增加。這種功率增加在第2小時的11-30HZ組分持續，且具有更高的波幅(高達200% )(參見圖8)。l-3Hz和11-30HZ組分的功率的這種顯著增加對應於更高劑量(在第一個實驗中使用的劑量的2-10倍)的單獨地西泮的波譜，並因此對應於通過阻斷連接蛋白的連接系統對地西泮作用的顯著增強。另外，不同於單獨的地西泮，通過抗-連接蛋白產生的增強在第 2小時該作用強化，表明在抗-連接蛋白存在下作用時間延長。這後一種觀察與抗-連接蛋白分子與氯氮平、莫達非尼和帕羅西汀組合的作用的不同之處在於，沒有精確遵循單獨的地西泮的時程，這表明連接蛋白調節的系統可能隨神經傳遞系統的不同而在量上不同。因而，在地西泮的情況中，連接系統的阻斷在第2小時會具有比第1小時更強的影響，這突出了根據化學神經傳遞系統中的連接系統的結構不同，阻斷將具有不同的定性和定量後果。總之，GABA能系統的這種增強證實了連接蛋白的連接系統對電生理學活動的調節作用(可能在性質上和數量上取決於化學神經傳遞系統中的結構)的假說。最後，這些結果證實了未經報導的抗焦慮藥物與連接蛋白抑制劑組合對抗焦慮作用的調節。該調節通過在比藥理學劑量小2-10倍的劑量時抗焦慮藥物作用的增強得以證實，從而當抗焦慮藥物與抗-連接蛋白分子組合時能夠得到與單獨的藥理學劑量相同的腦動電流描記法效應。通過抗-連接蛋白產生的對抗焦慮藥物作用的增強使得可以將抗焦慮藥劑量減少2-10倍，且對抗-連接蛋白的特異性最小。測得的地西泮和抗-連接蛋白組合的藥劑益處因此大於2。_仿丨丨8 二連擁丨棚☆白為了繼續評估連接蛋白對大腦活動的總調節作用的假說，研究了與抗-連接蛋白分子組合的第二種抗抑鬱藥藥理學治療的電生理學結果。在該背景下，研究了文拉法辛與連接蛋白抑制劑甲氯芬那酸(MFA)的組合的作用。文拉法辛是一種抗抑鬱藥，用於成年人的嚴重抑鬱發作、預防單相障礙患者中的抑鬱症復發、和成年人至少6個月的廣泛性焦慮症。文拉法辛是一種5-羥色胺和去甲腎上腺素再吸收抑制劑，具有中間體特性，且具有與丙米嗪相當的效能，在治療劑量具有大量副作用 (噁心、嗜睡、口乾燥、失眠、眩暈、便秘、出汗、低鈉血症、射精困難、腹瀉、嘔吐、體重增長、頭痛、激動、震顫、感覺錯亂、心悸、順應障礙、皮疹)，且當停止治療時可能造成停藥症候群。8. 1文拉法辛的作用在第一個階段，用單獨的文拉法辛評估了實驗模型，因為不能得到關於文拉法辛在有意識的大鼠中的EEG效應的文獻數據。但是，關於文拉法辛的作用(尤其是關於調節睡眠)的不同研究提供了用於急性治療的文拉法辛的藥理學劑量，它們通常是腹膜內施用的 l-10mg/kg(Salin-Pascual RJ.，Psychopharmacology. 1997 Feb ； 129 (3) :295-6)。對在腹膜內施用的2個劑量0. 16mg/kg*^ig/kg(比大鼠的急性治療中常用的劑量小1-25倍)的單獨文拉法辛的作用進行了記錄。額葉前部EEG波譜分析顯示出，在第1小時，根據文拉法辛劑量，8-lOHz組分(對於0. 16mg/kg劑量，是約120%，且對於4mg/kg劑量，^ 200% )和16_18Hz組分的功率顯著增加，且M-26Hz組分增加程度稍低，並在第2小時增加，且在％ig/kg中出現l-3Hz組分功率的增加(圖9)。8. 2文拉法辛和抗-連接蛋白組合的作用
接著，研究了連接蛋白的連接系統對文拉法辛的電生理作用的影響。在抗抑鬱藥(文拉法辛，0. 16mg/kg腹膜內)和連接蛋白抑制劑(MFA，0. %ig/kg腹膜內)的組合治療中，EEG波譜分析顯示出，在第1小時，8-lOHz組分(約350% )、16_18Hz 組分(約200% )和M-26Hz組分(約180% )的功率顯著增加。這種功率增加在第2小時持續，除了觀察到l-3Hz組分的功率顯著增加以外，不同的組分的波幅減小(主要對於 8-lOHz組分)(參見圖9)。該同步顯著增加對應著單獨的文拉法辛的波譜，並因此對應著通過阻斷連接蛋白的連接系統對文拉法辛作用的顯著增強。另外，不同於單獨的文拉法辛，由抗-連接蛋白產生的增強在第1小時該作用強化，在第2小時減少(同時仍高於單獨的文拉法辛治療)，這顯示了在抗-連接蛋白存在下隨時間擴大的快速作用。這後一種觀察類似於與地西泮的組合的觀察結果，且與抗-連接蛋白分子與氯氮平、莫達非尼和帕羅西汀的組合的作用的差別之處在於，沒有精確遵循單獨的文拉法辛的時程，證實了連接蛋白調節的系統可能隨神經傳遞系統的不同而在量上不同。因而，在文拉法辛的情況中，證實了根據連接系統在化學神經傳遞系統中的結構的不同，阻斷連接系統將具有不同的定性和定量後果。總之，5-羥色胺能的和去甲腎上腺素能的系統的這種增強證實了連接蛋白的連接系統對電生理學活動的主要調節作用的假說。最後，這些結果證實了未經報導的抗抑鬱藥和連接蛋白抑制劑組合對抗抑鬱作用的調節。這種調節通過在比藥理學劑量小25倍的劑量時抗抑鬱作用的增強得以證實，從而當抗抑鬱藥與抗-連接蛋白分子組合時能夠得到與單獨的抗抑鬱藥(在藥理學劑量)相同的腦動電流描記法效應。抗-連接蛋白的這種抗抑鬱作用的增強，可使抗抑鬱藥劑量減少至少25倍，且對抗-連接蛋白的特異性最小。測得的文拉法辛和抗-連接蛋白組合的藥劑益處因此大於25。^mm 9 M^mmm^imm&mmmmitmim為了繼續評估連接蛋白對大腦活動的總調節作用的假說，研究了與抗-連接蛋白分子組合的第三種抗抑鬱藥藥理學治療的電生理學結果。在該背景下，研究了依他普侖與連接蛋白抑制劑甲氯芬那酸(MFA)組合的作用。 依他普侖是一種抗抑鬱藥，適用於嚴重抑鬱狀態、預防具有或沒有廣場恐怖症的恐慌發作。 依他普侖是一種5-羥色胺再吸收純抑制劑，具有中間體特性，且具有與丙米嗪相當的效能，在治療劑量具有大量副作用(噁心、頭痛、失眠、便秘、嗜睡、出汗、射精困難、腹瀉、嘔吐、眩暈、震顫、感覺錯亂、心悸、直立性低血壓和瘙癢)。9. 1依他普侖的作用在第一個階段，評估了實驗模型，因為不能得到關於依他普侖在有意識的大鼠中的EEG效應的文獻數據。但是，關於依他普侖的作用(尤其是關於睡眠EEG修飾)的不同研究提供了用於急性治療的依他普侖的藥理學劑量，它們通常是腹膜內施用I-IOmg/ kg (Sanchez C. , Pharmacol Biochem Behav. 2007 Mar ；86 (3) :468_76)。對在腹膜內施用的2個劑量0. 8mg/kg和％ig/kg(比大鼠的急性治療中常用的劑量小1-5倍)的單獨的依他普侖的作用進行了記錄。額葉前部EEG波譜分析顯示出，在第1小時，根據依他普侖劑量，6-8Hz組分(對於 0. 8mg/kg劑量，是約150%，且對於％ig/kg劑量，是200% )和14_16Hz組分的功率顯著增
21加，且22-24HZ組分也是一樣，程度稍低，並在第2小時減少(參見圖10)。9. 2依他普侖和抗-連接蛋白組合的作用在第二個階段，研究了連接蛋白的連接系統對依他普侖的電生理作用的影響。
在抗抑鬱藥(依他普侖，0. 8mg/kg腹膜內)和連接蛋白抑制劑(MFA，0. 4mg/kg腹膜內)的組合治療中，EEG波譜分析顯示出，在第1小時，6-8Hz組分(約450% )、14_16Hz 組分(約230% )和22-24HZ組分(約14% )的功率顯著增加。該功率增加在第2小時持續，且不同的組分的波幅減小(主要對於8-lOHz組分)(參見圖10)。該同步顯著增加完全對應於單獨的依他普侖的波譜，並因此對應於通過阻斷連接蛋白的連接系統對依他普侖作用的顯著增強。另外，與氯氮平、帕羅西汀和莫達非尼一樣， 這種通過抗-連接蛋白增強依他普侖作用的機理遵循與單獨的依他普侖相同的時程。實際上，單獨的或與抗-連接蛋白組合的依他普侖會造成EEG效應，其在第1小時最大，且在第 2小時逐漸減弱。因而，抗-連接蛋白對依他普侖的增強保留時程性質，並進一步肯定了連接蛋白的調節系統不限於單一神經傳遞系統的觀念。總之，5-羥色胺能系統的這種增強證實了連接蛋白的連接系統對電生理學活動的調節作用的假說。最後，這些結果再次證實了抗抑鬱藥和連接蛋白抑制劑的組合對抗抑鬱作用的調節。該調節通過在比藥理學劑量小5倍的劑量時抗抑鬱藥作用的增強得以證實，從而當抗抑鬱藥與抗-連接蛋白分子組合時，能產生與單獨的抗抑鬱藥(在藥理學劑量)相同的腦動電流描記法效應。通過抗-連接蛋白產生的這種抗抑鬱作用的增強使得可以將抗抑鬱藥劑量減少至少5倍，且對抗-連接蛋白的特異性最小。測得的依他普侖和抗-連接蛋白組合的藥劑益處因此大於5。棚列10為了繼續評估連接蛋白對大腦活動的總調節作用的假說，研究了與抗-連接蛋白分子組合的第四種抗抑鬱藥藥理學治療的電生理學結果。在該背景下，研究了安非他酮與連接蛋白抑制劑甲氯芬那酸(MFA)的組合的作用。安非他酮是一種抗抑鬱藥，適用於輔助菸鹼依賴性的人戒菸。安非他酮是一種去甲腎上腺素和多巴胺再吸收抑制劑，在治療劑量具有大量副作用(皮疹、瘙癢、發熱、噁心、頭痛、 失眠、眩暈、便秘、嘔吐、共濟失調、耳鳴、精神錯亂、視覺障礙)。10. 1安非他酮的作用在第一個階段，評估了實驗模型，因為不能得到關於安非他酮在有意識的大鼠中的EEG效應的文獻數據；但是，關於安非他酮的作用(尤其是關於睡眠EEG修飾)的不同研究提供了用於急性治療的安非他酮的藥理學劑量，它們通常是腹膜內施用5-150mg/ kg (Henshall DC, Neuropsychiatr Dis Trat. 2009 ；5 :189-206)。對在腹膜內施用的3個劑量0. 16mg/kg、0. 8mg/kg和％ig/kg(比大鼠的急性治療中常用的劑量小10-150倍)的單獨的安非他酮的作用進行了記錄。額葉前部EEG波譜分析顯示出，在第1小時，根據安非他酮劑量，8-lOHz組分(對於0. 16mg/kg劑量，是約180%，對於0. 8mg/kg劑量，是450%，對於4mg/kg劑量，^ 280%) 和15-lSHz組分的功率顯著增加，且23-25HZ組分也是一樣，程度稍低。在第2小時，對於 0. 16mg/kg和％ig/kg劑量，觀察到相同組分相對於第1小時的顯著增加，而在0. 8mg/kg劑
22量，該效應逐漸減弱(圖11)。這顯示了安非他酮在第1小時的倒立「U-形」劑量效應(對於舍曲林，如圖13所示)，和在第2小時的傳統劑量-效應。根據劑量隨時間變化的這些複雜作用表明，根據安非他酮劑量的不同，不同的神經傳遞系統或神經元組的作用不同。10. 2安非他酮和抗-連接蛋白組合的作用在第二個階段，研究了連接蛋白的連接系統對安非他酮的電生理作用的影響。在抗抑鬱藥(安非他酮，0. 16mg/kg腹膜內)和連接蛋白抑制劑(MFA，0. 4mg/kg 腹膜內)的組合治療中，EEG波譜分析顯示出，在第1小時，8-lOHz組分(約400%)、組分 15-18Hz (約230% )和23_25Hz組分(約140% )的功率顯著增加。該功率增加在第2小時持續，且不同的組分的波幅減小(主要對於8-lOHz和15-lSHz組分)(參見圖11)。該同步顯著增加對應於在0. 8mg/kg劑量的單獨的安非他酮的波譜，並因此對應於通過阻斷連接蛋白的連接系統對安非他酮作用的顯著增強。另外，這種抗-連接蛋白增強安非他酮作用的機理遵循與在更高劑量的單獨安非他酮相同的時程，證明了上述的根據劑量的安非他酮作用時程的複雜性(段落10. 1)。實際上，在0. 8mg/kg劑量或在更低劑量 (0. 16mg/kg)的單獨安非他酮，與抗-連接蛋白的組合，會造成EEG效應，其在第1小時最大，且在第2小時逐漸減弱。因而，抗-連接蛋白對安非他酮的特殊增強證實了且進一步肯定了連接蛋白調節的系統不限於單一神經傳遞系統的觀念。總之，去甲腎上腺素能的和多巴胺能的系統的這種增強證實了連接蛋白的連接系統對電生理學活動的調節作用的假說。最後，這些結果再次證實了通過抗抑鬱藥與連接蛋白抑制劑的組合對諸如安非他酮等抗抑鬱藥的作用的調節。該調節通過在比藥理學劑量小5倍的劑量時抗抑鬱藥作用的增強得到證實，從而當抗抑鬱藥與抗-連接蛋白分子組合施用時，能夠產生與在藥理學劑量相同的腦動電流描記法效應。通過抗-連接蛋白產生的這種抗抑鬱作用的增強使得安非他酮劑量可以減少至少5倍，且對抗-連接蛋白的特異性最小。測得的安非他酮和抗-連接蛋白組合的藥劑益處因此大於5。^mm H M^Mmmm^immmmmm^mim為了繼續評估連接蛋白對大腦活動的總調節作用的假說，研究了與抗-連接蛋白分子組合的第五種抗抑鬱藥藥理學治療的電生理學後果。在該背景下，研究了舍曲林與連接蛋白抑制劑甲氯芬那酸(MFA)組合的作用。舍曲林是一種抗抑鬱藥，適用於成年人的嚴重抑鬱狀態、成年人和兒童的強迫性障礙、和預防單相障礙患者中的抑鬱症復發。舍曲林是一種特殊性的5-羥色胺再吸收抑制劑，在治療劑量具有大量副作用(皮疹、瘙癢、噁心、頭痛、失眠、眩暈、嘔吐、錐外反應、射精困難、便秘、視覺障礙、心動過速)。11. 1舍曲林的作用在第一個階段，評估了實驗模型，因為不能得到關於舍曲林在有意識的大鼠中的 EEG效應的文獻數據；但是，關於舍曲林的作用(尤其是關於睡眠EEG修飾)的不同研究提供了用於急性治療的舍曲林的藥理學劑量，它們通常是腹膜內施用4-40mg/kg(Freo U.， Neurosci Lett. 2008 ；436 (2) :148-52)。
對在腹膜內施用的3個劑量0. 16mg/kg、0. 8mg/kg和％ig/kg(比大鼠的急性治療中常用的劑量小1-25倍)的單獨的舍曲林的作用進行了記錄。額葉前部EEG波譜分析顯示出，在第1小時，根據舍曲林劑量，7_9Hz組分(對於 0. 16mg/kg劑量和0. 8mg/kg劑量，是約260 %，對於％ig/kg劑量，是200 % )和14_17Hz組分的功率顯著增加，且23-25HZ組分也是一樣，程度稍低。在第2小時，對於0. 8mg/kg (900% ) 和)劑量，觀察到相同組分相對於第1小時的顯著增加，而在0. 16mg/kg劑量，該效應逐漸減弱(圖12)。這顯示了舍曲林主要在第2小時的倒立「U-形」劑量效應(如圖13所示)。與在安非他酮的情況中一樣，根據劑量隨時間變化的這些複雜作用表明，根據舍曲林劑量的不同，不同的神經傳遞系統或神經元組的作用不同。11. 2安非他酮和抗-連接蛋白組合的作用在第二個階段，研究了連接蛋白的連接系統對舍曲林的電生理作用的影響。在抗抑鬱藥(舍曲林，0. 16mg/kg腹膜內)和連接蛋白抑制劑(MFA，0. 4mg/kg腹膜內)的組合治療中，EEG波譜分析顯示出，在第1小時，7-9Hz組分(約400% )、14_17Hz組分(約300% )和23-25HZ組分(約160% )的功率顯著增加。該功率增加在第2小時持續，不同的組分的波幅顯著增加(主要對於7-9Hz組分(約1000% )和14-17HZ組分(約 700% ))(圖 12)。在第2小時的該同步顯著增加對應於在0.8mg/kg劑量的單獨的舍曲林的波譜，並因此對應於通過阻斷連接蛋白的連接系統對舍曲林作用的顯著增強。另外，這種抗-連接蛋白增強舍曲林作用的機理遵循與在更高劑量的單獨舍曲林相同的時程，證明了上述的根據劑量的舍曲林作用時程的複雜性(段落11.1)。實際上，在0.8mg/kg劑量或在更低劑量(0. 16mg/kg)的單獨舍曲林，與抗-連接蛋白的組合，會產生EEG效應，其在第2小時最大。因而，抗-連接蛋白對舍曲林的特殊增強證實了且進一步肯定了連接蛋白調節的系統不限於單一神經傳遞系統的觀念。總之，5-羥色胺能的系統的這種增強證實了連接蛋白的連接系統對電生理學活動的調節作用的假說。最後，這些結果再次證實了通過抗抑鬱藥與連接蛋白抑制劑組合對抗抑鬱作用 (舍曲林)的調節。該調節通過在比藥理學劑量小5倍的劑量時抗抑鬱作用的增強表現出來。抗-連接蛋白的這種抗抑鬱作用的增強，因此使得舍取林劑量減少至少5倍，且抗-連接蛋白特異性最小。實測的舍曲林和抗-連接蛋白組合的藥劑益處因此大於5。參考文獻目錄Alldredge BT. J Clin Pathol. May 12 2008Bai D, J Pharmacol Exp Ther,2006 Dec ；319 (3) :1452-8Burt JM 等人，Circ Research. 1989 ；65 :829-37Chaytor AT 等人，J Physiol 1997 ；503 :99-110Dahl G.等人，Biophys J, 1994 ；67 :1816-22De saint Hilaire Ζ. , Neuroreport. 2001 Nov 16 ；12(16) :3533-7Dimpfel W, British Journal of Pharmacology 2007，152，538—548Fabrizi GM, Brain 2007 Feb,130(Pt2) :394-403
24
Figueroa XF, Alvina K, Martinez AD 等人.=Microvasc Res. 2004 ；68 247-57Freo U.，Neurosci Lett. 2008 ；436 (2) 148-52Fukuda Τ. , Neuroscientist 2007 ；13(3) 199-207Galderisi S, Methods Find Exp Clin Pharmacol，2002，24，85-89Giepmans BN. =Cardiovasc Res. 2004 ；62 :233-45Guan X.等人，J. Cell Biol 1997 ；139 :1785-92Harks EG, The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 2001Sep,298(3) :1033-41Harks EG, The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics 2001Sep,298(3) :1033-41Henshall DC, Neuropsychiatr Dis Trat. 2009 ；5 :189-206Hofer A 等人，Glia 1998 ；24 :141-54Kale AY 2006, Brain Research Bulletin 2006，Jul 15 ；135(1-2) :1_6Kola I, Nat Rev Drug Discov. 2004 Aug ；3 (8) :711-5.Lai-Cheong JE,Arita K & McGrath JA. :J Invest Dermatol. 2007 ；127 :2713-25Locke D.等人，J Biol Chem 2004 ；279 :22883-92Mandema & Danhof，Clin. Pharmacokinet. 1992,23,191-215Meda P, Medecine/Sciences 1996 ；12 :909-920Meyer RA, J. Cell Biol. 1992 ；119 :179-89Negri L，The Journal of Neuroscience, 2006 Jun 21 ；26 (25) :6716-27Pan F, Vis Neurosciences 2007, Jul-Aug ；24 (4) :609-18Postma FR,J Cell Biol 1998 Mar 9,140(5) :1199-209Robledo P.，Alcohol Clin Exp Res. 1994 Apr ； 18 (2)-363-8Salameh A, Biochimica et Biophysica Acta 1719(2005)36-58Salin-Pascual RJ. , Psychopharmacology. 1997 Feb ；129(3) :295-6Sanchez C.，Pharmacol Biochem Behav. 2007 Mar ；86 (3) :468-76Scemes Ε, Glia 2008 Jan 15,56(2) :145-53Sebban C, British Journal of Pharmacology 1999Shaw RM, Cell 2007, February 9,128(3) :547-60Srinivas M, Molecular Pharmacology 2003 Jun,63(6) :1389-97Srinivas M，PNAS 2001，98 :10942-10947Tejwani GA, Brain Res. 1998 Jun 29 ；797 (2) :305-12Wellershaus K, Exp Cell Res. 2008Winneker RC, Steroids. 2003 Nov ；68 (10-13) :915-20Yao J, Hiramatsu N, Zhu Y 等人.:J Am Soc Nephrol. 2005 ；16 :58-67 ；Yao J, Morioka T & Oite Τ. =Kidney Int. 2000 ；57 :1915-26.
2權利要求
1.一種含有至少一種連接蛋白-阻斷劑和一種精神藥物的產品，該產品作為複合產品與其他藥物在時間上同時、分開或間隔施用於患有精神疾病和/或神經退行性疾病的患者ο
2.根據權利要求1所述的產品，其特徵在於，所述連接蛋白-阻斷劑選自包括甲氯芬那酸、18-β -甘草次酸、甲氟喹和2-ΑΡΒ的組，且優選地為甲氯芬那酸。
3.根據權利要求1和2所述的產品，其特徵在於，所述精神藥物是多巴胺能的、GABA能的、腎上腺素能的、乙醯膽鹼能的、5-羥色胺能的、阿片樣物質能的、腺苷能的、離子型的、組胺能的、ΙΜΑ0、兒茶酚-0-甲基轉移酶、DOPA脫羧酶或去甲腎上腺素能的效應物。
4.根據權利要求3所述的產品，其特徵在於，所述精神藥物是多巴胺能效應物，選自 洛沙平、乙醯丙嗪、哌甲酯、金剛烷胺、培高利特、利舒脲、溴隱亭、羅匹尼羅、阿撲嗎啡、阿立哌唑、舒必利、氨磺必利、舒託必利、硫必利、匹莫齊特、利培酮、氟哌啶醇、五氟利多、珠氯噻醇或安非他酮。
5.根據權利要求3所述的產品，其特徵在於，所述精神藥物是GABA能的效應物，選自 噻加賓、託吡酯、氯卓酸鉀、地西泮、氯硝西泮、奧沙西泮、蘿拉西泮、溴西泮、氯甲西泮、硝西泮、氯噻西泮、阿普唑侖、艾司唑侖、三唑侖、氯普唑侖、艾替伏辛、甲丙氨酯、佐匹克隆、唑吡坦、苯巴比妥、非爾氨酯或氨己烯酸。
6.根據權利要求3所述的產品，其特徵在於，所述精神藥物是腎上腺素能的效應物，選自雙氫麥角胺、莫達非尼、阿屈非尼、米氮平或奧昔託隆。
7.根據權利要求3所述的產品，其特徵在於，所述精神藥物是乙醯膽鹼能的效應物，選自舒布硫胺、曲帕替平或苯海索。
8.根據權利要求3所述的產品，其特徵在於，所述精神藥物是5-羥色胺能的效應物，選自氯丙嗪、曲米帕明、氯氮平、奧氮平、氰美馬嗪、氟哌噻噸、奈福泮、氟伏沙明、氯米帕明、 舍曲林、氟西汀、西酞普蘭、依他普侖、帕羅西汀、阿米替林、度洛西汀、文拉法辛、丁螺環酮、 卡匹帕明、佐米曲普坦、舒馬普坦、那拉曲坦、吲哚拉明、麥角胺、麥角胺酒石酸鹽、苯噻啶、 匹泮哌隆、美西麥角、苯噻啶、噻奈普汀、米那普侖、阿米替林、曲米帕明、維洛沙秦、噻奈普汀、金絲桃屬或鋰。
9.根據權利要求3所述的產品，其特徵在於，所述精神藥物是阿片樣物質能的效應物， 選自納布啡、丁丙諾啡、哌替啶、可待因、曲馬多、嗎啡、氫嗎啡酮、羥考酮、美沙酮、右丙氧芬、哌替啶、芬太尼、納曲酮或鹽酸嗎啡。
10.根據權利要求3所述的產品，其特徵在於，所述精神藥物是腺苷能的效應物，選自 卡馬西平或奧卡西平。
11.根據權利要求3所述的產品，其特徵在於，所述精神藥物是離子型的效應物，選自 氟桂利嗪、乙琥胺、左乙拉西坦、拉莫三嗪、磷苯妥英或苯妥英。
12.根據權利要求3所述的產品，其特徵在於，所述精神藥物是組胺能的效應物，選自 尼普拉嗪、羥嗪或多西拉敏。
13.根據權利要求3所述的產品，其特徵在於，所述精神藥物是單胺氧化酶效應物，選自嗎氯貝胺、司來吉蘭或異丙煙胼。
14.根據權利要求3所述的產品，其特徵在於，所述精神藥物是兒茶酚-0-甲基轉移酶效應物，選自恩他卡朋或託卡朋。
15.根據權利要求3所述的產品，其特徵在於，所述精神藥物是DOPA脫羧酶效應物，選自苄絲胼或卡比多巴。
16.根據權利要求3所述的產品，其特徵在於，所述精神藥物是去甲腎上腺素能的效應物，諸如米安色林、地昔帕明、嗎氯貝胺或安非他酮。
17.根據權利要求3所述的產品，其特徵在於，所述精神藥物是作用於大腦邊緣系統的效應物，諸如加巴噴丁或卡普託胺。
18.根據權利要求3所述的產品，其特徵在於，所述精神藥物選自包括氯氮平、莫達非尼、帕羅西汀、地西泮、依他普侖、舍曲林、文拉法辛和安非他酮的組。
19.使用至少一種連接蛋白-阻斷劑製備一種藥物，所述藥物在精神藥物，尤其是權利要求1至18中的任一項定義的精神藥物之前、同時或之後施用，以治療患有精神疾病和/ 或神經退行性疾病的患者。
20.使用根據權利要求19所述的至少一種連接蛋白-阻斷劑，以增強所述精神藥物在所述患有精神疾病和/或神經退行性疾病的患者中的作用。
21.使用根據權利要求19或20所述的至少一種連接蛋白-阻斷劑，以減少所述精神藥物的劑量，和/或限制所述精神藥物的副作用，和/或減少失敗和停藥的反應。
全文摘要
本發明首次涉及一種含有至少一種連接蛋白-阻斷劑和一種精神藥物的產品，作為複合產品，它可以與其他藥物同時、分開或間隔施用於患有精神疾病和/或神經退行性疾病的患者。所述連接蛋白-阻斷劑有利地選自包括甲氯芬那酸、18-β-甘草次酸、甘珀酸、甲氟喹和2-APB的組，優選地包含甲氯芬那酸。
文檔編號A61K45/06GK102164594SQ200980138043
公開日2011年8月24日 申請日期2009年9月10日 優先權日2008年9月10日
發明者F·艾瑞斯, M·查芙裡特, 弗蘭克·摩松, 簡·菲利普·戴斯裡斯 申請人:Bm系統, 原子能和替代能源委員會