具有生理活性的複方人參三醇皂苷及其製劑及用途的製作方法

2023-09-14 05:28:10 2

專利名稱：具有生理活性的複方人參三醇皂苷及其製劑及用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種具有生理活性的複方人參三醇皂苷及其製劑及用途。
背景技術：
人參(高麗參)、西洋參和三七(又名參三七、田七、南方人參)均是五加科人參屬植物，其根、葉、花等均具有藥用價值，主要含有人參皂甙及其它物質。根據研究資料證實從各種植物中提取的人參皂苷、西洋參皂苷和三七總皂苷主要由以Rb1為主的人參二醇型皂苷和以Rg1為主的人參三醇型皂苷組成。二醇型皂苷和三醇型皂苷既有相似之處，又有區別，在神經系統的作用上甚至相反。兩者在改善血液循環的血流動力學，降低血液粘度，降低血脂等方面作用相似。目前，對各單有效提取部分均有一些研究報告，但未見與本發明專利申請相同的複方研究。

發明內容
本發明的目的在於提供一種具有生理活性的複方人參三醇皂苷及其製劑及用途，該複方具有互補增強的改善記憶和抗缺氧的效果，可用於治療或改善因血液系統或神經系統弱化而引起的腦供血、供氧不足及神經活動減弱的疾病或功能失調。
本發明的目的是這樣實現的這種具有生理活性的複方人參三醇皂苷含有以下成分人參三醇皂苷組(含PTG 51～98％)、銀杏提取物(含銀杏黃酮＞24％、銀杏內酯＞6％)、茶氨酸。
這種具有生理活性的複方人參三醇皂苷，複方中各有效成分的配比(重量)為
人參三醇皂苷組(含PTG 51～98％) 10％～68％銀杏提取物(含銀杏黃酮＞24％、銀杏內酯＞6％) 5％～49％茶氨酸 20％～75％這種具有生理活性的複方人參三醇皂苷，複方中還可含有以下活性成分B族維生素(B1、B2、B6等)。
這種具有生理活性的複方人參三醇皂苷，複方中各有效成分的配比(重量)為人參三醇皂苷組(含PTG 51～98％)10％～55％銀杏提取物(含銀杏黃酮＞24％、銀杏內酯＞6％) 5％～40％茶氨酸 20％～70％維生素B11％～5％維生素B21％～5％維生素B61％～5％這種具有生理活性的複方人參三醇皂苷，人參三醇組中人參皂苷Rg1在其中的含量為45％～99％，其餘為Re、Rf、Rg2、Rh1等。
這種具有生理活性的複方人參三醇皂苷製劑，其複方製劑中各成分的配比(重量)為上面所述的複方人參三醇皂苷 5％～85％輔料 15％～95％輔料為藥用或食用輔料中的一種或幾種，製成醫藥或食品上可以接受的製劑。
本發明所述的醫藥用的輔料為甘露醇、山梨醇、乳糖、蔗糖、澱粉及其衍生物、纖維素及其衍生物、卡波姆934、黃原膠、明膠、Syloid204、胺基酸及其衍生物、NaCl、CaCl2、CaCO3等有機或無機物；食品用的輔料為大豆油、精煉植物油、花生油、聚乙二醇(PEG)、麵粉、骨膠、果膠、茶葉、蜂蜜等。
這種具有生理活性的複方人參三醇皂苷的用途，可用於對腦細胞活力和腦神經細胞活力正性的加強作用。
這種具有生理活性的複方人參三醇皂苷的用途，還可用於治療或改善因血液系統或神經系統弱化而引起的腦供血、供氧不足及神經活動減弱的疾病或功能失調。
這種具有生理活性的複方人參三醇皂苷的用途，可製成醫療上可接受的各種新藥及功能食品，如粉針劑、滴劑、口服劑的口腔黏膜給藥的舌下含片、速溶片、咀嚼片和普通的口服劑及各種食品餅乾、糖果、飲料、果凍等。
本發明的複方人參三醇型皂苷主要由人參三醇型皂苷、銀杏提取物、茶氨酸等有效成分經加工精製而成，銀杏，又名白果，為銀杏科落葉喬木，銀杏葉是傳統止咳平喘的重要中藥材，其有效成分包括銀杏黃酮、銀杏內酯，目前成熟的市場上可購買到的銀杏葉提取物為—銀杏提取物(標準提取物Egb761)；茶氨酸是茶葉中的一個重要活性成分，屬於醯胺類化合物，具有促進大腦功能、神經生長等功效。本發明的複方有改善冠狀循環和腦循環作用，可改善腦動脈硬化症及其所引起的腦供血不足、腦力衰退、老年性痴呆等，對腦細胞活力和腦神經細胞活力有正性的加強作用，能迅速改善大腦供氧供血狀況，降低頭昏、頭痛、精力不集中等肌體反應，有良好的改善記憶功能、抗缺氧功能，穩定性較好，可用於治療或改善因血液系統或神經系統弱化而引起的腦供血、供氧不足及神經活動減弱的疾病或功能失調等。


圖1是本發明輔助改善記憶試驗中受試樣品對正常小鼠記憶的影響圖。
圖2是本發明輔助改善記憶試驗無意義圖形再認中無意義圖形背面的數字表示。
具體實施例方式
Rg1、Rg1＞45％的生產方法1、Rg1＞45％的生產取三七總皂苷(＞95％)100g，溶於90％的乙醇500ml中，在攪拌下加入2000ml丙酮，充分攪拌後，置於5～15℃下8h以上，過濾，取濾液，減壓濃縮至近幹，上一短的氧化鋁柱，用無水乙醇溶劑洗脫，收集2000ml，濃縮收集液，低溫乾燥或噴霧乾燥即得含量在Rg1＞45％的成品約12g(收率～12％)。
2、Rg1的生產取上述Rg1＞45％的產品，用矽膠柱層析法，用CHCl3∶CH3OH＝7∶3溶劑洗脫，收集Rg1組分。反覆數次即得含量在90％以上的Rg1成品。
具體實施方式
實施例1複方人參三醇型皂苷顆粒配方PTG(Rg1＝55.4％) 155g銀杏提取物 100g茶氨酸 70g維生素B15g
維生素B24g維生素B64g蔗糖 2500g糊精 300g環糊精55g乙醇 適量按普通制粒法制粒，分裝成1000袋(每袋約3.1g)。每次食用一袋，每日1～2次。
實施例2、複方人參三醇型皂苷膠丸配方PTG(Rg1＝65.1％) 29g銀杏提取物24g茶氨酸25g維生素B11.7g維生素B21.6g維生素B61.5g大豆油400g將原料混合，超細化(過2000目以上)，按普通膠丸劑製備方法製備膠皮。藥液的製備將超細化的複方藥加入溶劑基質中，充分攪拌、溶解、過濾、脫氣，送至填充機上方的罐內，待用；同時準備好軟膠囊充填機上方保溫明膠罐中的膠皮用的明膠溶液，待用；在10萬級、21℃～25℃、RH％∶39～41％的條件下，開動旋轉模壓機壓丸，把製成的軟膠囊洗淨，在28±2℃下乾燥19～27小時，分裝、包裝即得成品。每粒內容物重約500±4mg，可得1000粒。
實施例3複方人參三醇型皂苷滴丸配方PTG(Rg1＝65.1％) 32g銀杏提取物 18g茶氨酸 12gPEG-6000300g按普通滴丸劑製備方法製備，即將藥物有效成分混合，加入基質PEG-6000中，加熱融化成液體狀，在保溫下滴入液體石蠟冷凝液中，控制一定的速度，使其固化成圓整的球型。即得滴丸，測定每丸含量，以每次服用Rg1計應為20mg來確定服用量。
實施例4、複方人參三醇型皂苷凍乾粉針配方PTG(Rg1＝89％) 52g銀杏提取物 10g茶氨酸 17g甘露醇 100g工藝在1萬級的條件下，將合格的藥物和輔料一起溶於注射用水中，經脫色等處理後，加入注射用水稀釋至所需體積。過濾，濾液經過濾紙及0.4μm的濾膜粗濾等處理後，在100級的條件下，用0.2μm以下的濾膜過濾。精濾液送入分裝機，按每支1～2ml分裝，蓋上帶槽的蓋子，送入冷凍真空乾燥機，快速冷至-30℃～-35℃，2～3小時，逐步緩慢升溫至35℃～45℃(約需10小時)。塞緊蓋子，取出製品，扎蓋、包裝、檢驗、合格的藥用粉針1000支成品。
實施例5複方人參三醇型皂苷口服液配方PTG(Rg1＝45％) 25g銀杏提取物 43g茶氨酸 60g維生素B11.8g維生素B22.0g維生素B62.1g蜂蜜1000g蒸餾水 加至10kg按普通口服液製備方法製備，可得1000支(每支約重11g)的口服液。
實施例6、複方人參三醇型皂苷口含片配方PTG(Rg1＝55％) 15g銀杏提取物 8g茶氨酸 10g維生素B10.5g維生素B20.5g維生素B60.8g乳糖 255g甘露糖 98g
17％澱粉漿 ～45g十二烷基硫酸鈉 ～1g按常規含片製造方法製造，可得1000片普通的複方人參三醇型皂苷口含片。
實施例7、複方人參三醇型皂苷咀嚼片配方PTG(Rg1＝88％) 13g銀杏提取物 10g茶氨酸 36g維生素B10.8g維生素B20.5g維生素B61.1gβ-CD30g甘露醇 60g蔗糖 7g甲基纖維素 2g阿司巴糖 0.3g薄荷醇 0.3gSyloid2040.9g硬脂酸鎂 1.0g製法先將PTG等有效成分和β-CD混合研磨，製成包合物備用。按配方量將蔗糖、甘露醇和阿司巴糖混合後，經40目篩過3次，再加入甲基纖維素和前述備用包合物，過12目篩過3次混勻。用10％阿拉伯膠漿為黏合劑製成溼料，過10目篩。溼顆粒經80℃烘箱乾燥8h。幹顆粒用12目篩整粒。噴入薄荷香精後加入Syloid204和硬脂酸鎂，壓片即得1000片複方人參三醇型皂苷咀嚼片。
以上實施例僅為了對本發明做進一步的說明，而本發明的範圍不受所舉實施例的局限。
本發明的功效及藥學研究結果如下一、複方人參三醇型皂苷膠丸對衰老動物模型的促智作用研究實驗目的複方人參三醇型皂苷膠丸主要由三七中人參三醇型皂苷、銀杏提取物、茶氨酸等有效成分經加工精製而成，藥理研究發現有改善冠狀循環和腦循環作用。可改善腦動脈硬化症及其所引起的腦供血不足、腦力衰退、老年性痴呆等，現為進一步觀察複方人參三醇型皂苷膠丸對大腦功能的影響，本實驗選擇其促智和抗衰老作用進行研究，以便為臨床應用提供實驗依據。
現將研究結果簡報如下。
1 材料1.1實驗動物ICR小鼠，體重20±2g，雌雄各半。
1.2藥物及試劑1.1.2.1供試品 複方人參三醇型皂苷膠丸，昆明香格喜瑪生物技術有限公司，批號20031116。臨用時，用1％羧甲纖維素鈉配製成5％、10％和20％的混懸液。
1.1.2.2對照品腦得生膠囊，江西生產，批號20030402，臨用時，用1％的羧甲纖維鈉配製成5％的混懸液。
1.2實驗方法和結果先將小鼠分為空白對照組和衰老模型組。衰老模型組小鼠每天眼球後注射D-半乳糖0.12mg/g，連續一月[1]。小鼠造型後根據需要再分若干小組。實驗時小鼠隨機作如下分組(1)空白對照組(動物不造型)，灌胃N.S。(2)造型對照組(動物造型)，灌胃N.S。(3)陽性藥對照組，動物造型、灌胃腦得生膠囊溶液(0.5g/kg，為臨床二倍成人劑量)。(4)-(6)組複方人參三醇型皂苷膠丸為低、中、高劑量組，分別灌胃5％、10％和20％的複方人參三醇型皂苷膠丸溶液(用藥量分別為臨床2、5和10倍的成人劑量)。各組小鼠灌胃容積均為10ml/kg，每日一次，連續兩周。於末次給藥後作下列各項指標測定。
1.2.1 複方人參三醇型皂苷膠丸對衰老模型小鼠的學習和記憶維持的影響1.2.1.1跳臺試驗仿文獻方法[2]，先將小鼠放入跳臺反應箱內適應環境3分鐘，然後給反應箱底的銅柵通以36V交流電，動物受到電擊後，往往會跳至平臺，以避傷害性刺激。由於平臺窄小，不便停留，迫使其再次或多次跳至銅柵，但受到電擊後又會迅速地跳回平臺，如此訓練5分鐘，記錄每鼠受到電擊的次數，以此作為該鼠的學習成績。24小時後重作測試。試驗時，先將小鼠放在平臺上，記錄小鼠第一次跳下平臺的時間(潛伏期)和3分鐘內因跳下平臺而受電擊的次數(即錯誤次數)，以此作為記憶維持的指標。結果見表1。
表1複方人參三醇型皂苷膠丸對衰老模型小鼠學習記憶的影響(跳臺法)x±SD，n＝20劑量學習成績 記 憶 維 持組別(g/kg.d)5min錯誤次數跳臺潛伏期(秒)5min錯誤次數空白對照組 N.S 10ml3.1±1.2** 83.6±14.6** 3.8±1.5**造型對照N.S 10ml4.7±1.349.4±12.28.8±2.6陽性藥對照 0.5 3.6±1.2** 62.2±15.5**△△5.1±1.7**△△膠低劑量 0.5 3.6±1.3** 70.0±15.1** 5.3±1.4**△△中劑量 1.0 3.8±1.3** 78.7±17.6** 4.3±1.6**丸高劑量 2.0 3.5±1.1** 84.0±19.0** 5.1±2.1**△注與造型對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01。
與空白對照組比較△P＜0.05；△△P＜0.01以上結果顯示，複方人參三醇型皂苷膠丸顯著延長小鼠跳臺潛伏期，同時明顯減少跳臺的錯誤次數(P＜0.01)。
1.2.1.2 矩型迷宮試驗 取造型合格小鼠一批，按上述試驗進行分組及給藥(或N.S)。給藥至第11天，禁食12小時後作迷宮取食訓練。小鼠放入起步區，經矩形迷宮到達目標區。途中走錯，幫助其糾正。達目標區後讓其進食5分鐘。每天如此練習10次，連續三天。第四天(即給藥的第十四天)正式實驗。各組選取靈活性較一致的小鼠20隻，記錄小鼠從起步區到達目標區的時間以及中途走錯的次數[3]。連續作兩次，兩次數據合併取平均值作為小鼠的學習成績。動物繼續給藥，一周後重複上述試驗，所得數據即表示記憶的維持，結果見表2表2複方人參三醇型皂苷膠丸對衰老模型小鼠學習記憶的改善作用(述宮法)x±SD n＝20

注與造型對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01。
與空白對照組比較△P＜0.05；△△P＜0.01以上結果顯示，複方人參三醇型皂苷膠丸明顯提高衰老模型小鼠走迷宮的學習成績，減少記憶維持期走迷宮發生的錯誤次數，即增強小鼠對記憶的保持效應。
二、本品對腦缺血的改善作用腦力工作者長時間工作、體弱多病者、激烈運動時、血液粘稠者等會導致腦缺血和缺氧。用腦缺血模型、小鼠常壓下耐缺氧試驗及小鼠斷頭後張口實驗模型做實驗，結果如下樣品對大鼠腦缺血後腦梗死範圍的影響組別 n劑量(g/kg)左腦梗死範圍％P缺血對照組 10 --15.18±4.40實施例3 10 0.08 8.55±3.59＜0.01實施例4 10 0.08 8.20±3.31＜0.01小鼠常壓下耐缺氧時間及小鼠斷頭後張口呼吸時間的影響組別 n劑量(g/kg)耐缺氧時間/min P 張口呼吸時間/sp
對照組10-- 20.00±4.3114.30±3.11例3 100.0625.39±4.59 ＜0.0118.88±4.22 ＜0.01例4 100.0626.28±4.45 ＜0.0119.83±4.46 ＜0.01結果表明樣品具有良好的抗腦缺血作用、延長小鼠常壓下耐缺氧時間及小鼠斷頭後張口呼吸時間，證明本品有供血供氧的作用。
三、本產品提高腦力工作者工作效率和改善大腦供血供氧的試驗選一家軟體開發公司，在充分了解試驗內容及可能對人體產生的作用的基礎上，篩選年齡在24～44歲的軟體開發工作者68名，男女均可，隨機分為兩組。一組為空白對照組，給予不含有藥物的空白安慰劑；另一組為試驗組，給予實施例2製得的軟膠囊的試驗藥物。使用方法為每天剛上班時口服一片，試驗周期為30天。有3例因工作調動未完成試驗，實驗結果如下組別n頭昏 頭痛 精力不集中 連續工作時間工作效率對照組 3295 7 2h 72.42％試驗組 3341 2 3h 86.80％實驗結果表明，使用本品能迅速改善大腦供氧供血狀況，降低頭昏、頭痛、精力不集中等肌體反應，從而提高生活質量和工作效率。
四、複方人參三醇型皂苷型軟膠囊輔助改善記憶試驗1動物實驗1.1跳臺實驗1.1.1原理反應箱底鋪有通36v電的銅柵，動物受到電擊，其正常反應是跳上箱內絕緣的平臺以避免傷害性刺激。多數動物可能再次或多次跳至銅柵上，受到電擊又迅速跳回平臺，如此訓練5min，並記錄每鼠受到電擊的次數或叫錯誤次數，以此作為學習成績。24h或48h重作測驗，此即記憶保持測驗。記錄受電擊的動物數、第一次跳下平臺的潛伏期和3min內的錯誤總數。停止訓練5天後(也可以在訓練後的一周、兩周或其它時間點)進行記憶消退實驗。
1.1.2儀器與試劑跳臺儀該裝置為10×10×60cm3的被動迴避條件反射箱，用黑色塑料板分隔成5間。底面鋪以銅柵，間距為0.5cm，可以通電，電壓強度由一變壓器控制。每間左后角置一高和直徑均為4.5cm的絕緣平臺。
試劑樟柳鹼、環己醯亞胺、乙醇。
1.1.3實驗方法1.1.3.1實驗動物推薦使用近交系小鼠。斷乳鼠，體重10g左右；或成年鼠，體重18-22g。用於改善老年人記憶的產品必須採用成年鼠。雌雄均可，單一性別每組不少於10隻。
1.1.3.2劑量分組及受試樣品給予時間實驗設三個劑量組和一個空白對照組，以人體推薦量的10倍為其中的一個劑量組，另設二各劑量組，必要時設陽性對照組。受試樣品給予時間原則上不少於30天，必要時可適當延長。
1.1.3.3實驗方法及步驟1.1.3.3.1受試樣品對正常小鼠記憶的影響末次給樣後次日(或一次給樣後1h)開始訓練。將動物放入反應箱內(臺上、臺下)適應環境3min，然後將動物放置反應箱內的銅柵上，立即通以36v的交流電。動物受到電擊，其正常反應是跳回平臺(絕緣體)，以躲避傷害性刺激。多數動物可能再次或多次跳至銅柵上，受到電擊又迅速跳回平臺上。訓練一次後，將動物放在反應箱內的平臺上，記錄5min內各鼠跳下平臺的錯誤次數和第一次跳下平臺的潛伏期，以此作為學習成績(記憶獲得)。24或48h後進行重測驗，將小鼠放在平臺上，記錄各鼠第一次跳下平臺的潛伏期、各鼠3min內電擊次數和受電擊的動物數總數，同時計算出現錯誤反應的動物的百分率(受電擊的動物數佔該組動物總數的百分率)(記憶鞏固)。停止訓練5天後(包括第5天)可以在不同的時間進行一次或多次記憶消退實驗(記憶再現，方法同重測驗)。
1.1.3.3.2受試樣品對記憶障礙模型小鼠的影響1.1.3.3.2 1 模型製造記憶獲得障礙模型製造訓練前10min腹腔注射樟柳鹼或東莨菪鹼5mg/kg體重；記憶鞏固障礙模型製造訓練前10min腹腔注射環己醯亞胺120mg/kg體重；記憶再現障礙模型製造重測驗前30min灌胃30％的乙醇0.1mL/10g體重。
1.1.3.3.2.2 記憶測試的操作方法同1.1.3.3.1。
1.1.4 數據處理及結果判定潛伏期結果為計量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F值＜F0.05，結論各組均數間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計；對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊要求後，用轉換後的數據進行統計；若變量轉換後仍未達到正態或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統計。
錯誤次數和3min內跳下平臺的動物數均為記數資料，可用X2檢驗，四格表總例數小於40，或總例數等於或大於40但出現理論數等於或小於1時，應改用確切概率法。
若受試樣品組與對照組比較，潛伏期明顯延長，錯誤次數或跳下平臺的動物數明顯少於對照組，差異有顯著性，以上三項指標中，任一階段(記憶獲得、記憶鞏固和記憶再現)的任一項指標陽性，均可判定該項實驗陽性。
1.1.5 注意事項1.1.5.1 動物在24h內有其活動周期，不同時相處於不同的覺醒水平，故每次實驗應選擇同一時相(上午8-12點或下午1-4點)，前後2d的實驗要在同一時間內完成。
1.1.5.2 實驗應在隔音，光強度和溫、溼度適宜且保持一致的行為實驗室進行。
1.1.5.3 推薦使用純系動物，實驗前數天將動物移至實驗室以適應周圍環境。
1.1.5.4 實驗者必須每天與動物接觸，如餵水、餵食和撫摸動物。
1.1.5.5 減少非特異性幹擾，如情緒、注意、動機、覺醒、運動活動水平、應激和內分泌等因素。
1.1.5.6 考慮動物種屬差異。
1.2. 避暗法1.2.1 原理利用小鼠嗜暗的習性設計一個裝置，一半是暗室，一半是明室，中間有一小洞相連。暗室底部鋪有通電的銅柵，並與一計時器相連，計時器可自動記錄潛伏期的時間。小鼠進入暗室即受到電擊，計時自動停止。
1.2.2 儀器和試劑避暗儀該裝置分明暗兩室。明室大小為12cm×4.5cm，其上方約20cm處懸一40w鎢燈絲。暗室較大，大小為17cm×4.5cm，兩室之間有一直徑約3cm的圓洞。兩室底部均鋪以銅柵。暗室底部中間位置的銅柵可以通電，電擊強度可在一旋鈕上任意選擇。一般採用40v電壓。暗室與一計時器相連，計時器可自動記錄潛伏期的時間。試劑樟柳鹼、環己醯亞胺、乙醇。
1.2.3 實驗方法1.2.3.1 實驗動物同1.1.3.11.2.3.2 劑量設計和分組同1.1.3.21.2.3.3 實驗方法及步驟1.2.3.3.1 受試樣品對正常小鼠記憶的影響末次給樣後次日(或一次給樣後1h)開始訓練。實驗時將小鼠面部背向洞口放入明室，同時啟動計時器。動物穿過洞口進入暗室受到電擊，計時器自動停止，取出小鼠，記錄每鼠從放入明室至進入暗室遭電擊所需的時間，此即潛伏期，訓練5min，並記錄5min內電擊次數(記憶獲得)。24h或48h後重作測驗，記錄每隻動物進入暗室的潛伏期和5min內的電擊次數，並計算5min內進入暗室(錯誤反應)的動物百分率(記憶鞏同)。停止訓練5天後可以在不同的時間進行一次或多次記憶消退實驗(記憶再現)。
1.2.3.3.2 受試樣品對記憶障礙模型小鼠的影響1.2.3.3.2.1 模型製造方法同1.1.3.3.2.11.2.3.3.2.2 操作方法同1.2.3.3.11.2.4 數據處理及結果判定潛伏期時間為計量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F值＜F0.05，結論各組均數間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計；對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊要求後，用轉換後的數據進行統計；若變量轉換後仍未達到正態或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統計。
5min內進入暗室的次數和5min內進入暗室的動物數均為計數資料，可用X2檢驗，四格表總例數小於40，或總例數等於或大於40但出現理論數等於或小於1時，應改用確切概率法。
若受試樣品組小鼠進入暗室的潛伏期明顯長於對照組，5min內進入暗室的錯誤次數或5min內進入暗室的動物數少於對照組，且差異有顯著性，以上三項指標中任一階段(記憶獲得、記憶鞏固和記憶再現)的任一項指標陽性，均可判定該項實驗陽性。
1.2.5 注意事項同1.1.51.3 穿梭箱實驗(雙向迴避實驗)1.3.1 原理條件反射1.3.2 儀器與試劑儀器大鼠穿梭箱。該裝置由實驗箱和自動記錄列印裝置組成。實驗箱大小為50cm×16cm×18cm。箱底部格柵為可以通電的不鏽鋼棒，箱底中央部有一高1.2Cm擋板，將箱底部分隔成左右兩側。實驗箱頂部有光源和蜂鳴音控制器，自動記錄列印裝置可連續自動記錄動物對電刺激(燈光或/和蜂鳴器)的反應和潛伏期，並將結果列印出來。試劑樟柳鹼，環己醯亞胺，乙醇1.3.3 實驗方法1.3.3.1 實驗動物Wistar或SD大鼠，斷乳鼠或成年鼠，雄、雌均可。
1.3.3.2 劑量設計和分組同1.1.3.2。
1.3.3.3 實驗方法及步驟1.3.3.3.1 受試樣品對正常大鼠條件反射建立的影響將大鼠放入箱內任何一側，20s後開始呈現燈光或蜂鳴音，持續20s，後10s內同時給以電刺激(100V，0.2mA，50Hz，AC)。大鼠在遭電擊後即逃避，必須跑到對側頂端，擋住光電管後才可中斷電擊，此為被動迴避反應，在每次電擊前給予條件刺激，反覆強化後，大鼠在接受條件刺激後即跳向對側並擋住光電管而逃避電擊，此為主動迴避反應，每隔天訓練一回，每回50次，連續訓練4-5回後，動物的主動迴避反應率可達80-90％以上。根據列印結果分析如下指標動物反應次數，動物主動迴避時間，動物被動迴避時間，動物主動迴避率。停止訓練5-50d內，分2-3次測定其記憶消退情況。
1.3.3.3.2 受試樣品對記憶障礙模型大鼠條件反射建立的影響1.3.3.3.2.1 模型製造同1.1.3.3.2.11.3.3.3.2.2 操作方法同1.3.3.3.1。
1.3.4 數據處理及結果判定動物主動迴避時間和被動迴避時間為計量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F值＜F0.05，結論各組均數間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計；對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊要求後，用轉換後的數據進行統計；若變量轉換後仍未達到正態或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統計。
若實驗組主動和/或被動迴避時間明顯短於對照組，差異有顯著性，可判定為該指標陽性。
1.3.5 注意事項同1.1.5。
1.4 水迷宮實驗1.4.1 原理動物都有一種「探索」和「更替」傾向，當離開一個臂時，總是跑向「久」未跑過的「新」臂。小鼠不願在水中，因而尋找能爬出水面的階梯，訓練後，小鼠能記住找到階梯的路線。
1.4.2 儀器與試劑水迷宮自動記錄儀。該儀器是由迷宮遊泳箱和自動記錄儀兩部分組成。迷宮遊泳箱由聚乙烯塑料製成，長100cm、寬100cm、高30cm；內徑長90cm、寬90cm、高30cm，泳道寬12cm，泳道走向固定。見附圖。
1.4.3 實驗方法1.4.3.1 實驗動物推薦使用純系小鼠，斷乳鼠或成年鼠，雌雄均可。
1.4.3.2 劑量設置、給樣途徑和期限均同1.1.3.2。
1.4.3.3 實驗方法1.4.3.3.1 受試樣品對正常小鼠記憶的影響見圖1連續給樣30天，末次給樣次日開始訓練。訓練期間繼續給樣，每天一次。迷宮泳道水深9cm，水溫約20℃(＜15℃)。將小鼠訓練時間限定為120s，在120s內未到達終點的小鼠均記為120s。
第一次訓練前將小鼠放在梯子附近，使其自動爬上3次。以後每次訓練前將小鼠放在梯子附近，背朝樓梯，使其自動爬上1次。實驗分階段進行，視動物學習成績逐步加長路程。第一次訓練時用一擋板在A處檔死，從A處開始訓練，記錄從A點到達終點的時間。第二次訓練加長路程，從B處開始，此路程約訓練3次，至動物數80％以上在2min內達到終點後再延長路程，分別記錄各鼠每次從B點到達終點所需的時間和發生錯誤的次數(進入任何一個盲端一次均算一次錯誤)。末次測試從起點進行，將小鼠放在起點，記錄從起點到達終點所需的時間和發生錯誤的次數。每次訓練時，對2min內未達到終點的小鼠，應引導其到達終點，從終點的樓梯上來，達到訓練的目的。每次訓練或測驗時均將頭朝起始點。最後計算各組動物5次訓練和測試的總錯誤次數，到達終點的總時間及2min內到達終點的總動物數(百分率)，(包括了記憶獲得和記憶鞏固兩個階段的成績)。停止訓練5天後可在不同的時間從起點進行消退實驗(記憶再現)。
1.4.3.3.2 受試樣品對記憶障礙模型小鼠的影響1.4.3.3.2.1 模型製造方法同1.1.3.3.2.11.4.3.3.2.2 操作方法同1.4.3.3.1。
1.4.4 數據處理及結果判定到達終點的時間屬計量資料，可用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F值＜F0.05，結論各組均數間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計；對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊要求後，用轉換後的數據進行統計；若變量轉換後仍未達到正態或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統計。
錯誤次數和到達終點的動物數(百分率)兩指標為計數資料，可用x2檢驗，四格表總例數小於40，或總例數等於或大於40但出現理論數等於或小於1時，應改用確切概率法。
試驗組與對照組比，試驗組到達終點所用的時間或到達終點前的錯誤次數明顯少於對照組，或2min內到達終點的動物數明顯多於對照組，且經統計學檢驗差異有顯著性。其中記憶獲得、記憶鞏固和記憶再現任意階段的任一項指標為陽性，可判為該項實驗陽性。
1.4.5 注意事項1.4.5.1 訓練時在目標區(終點)停留的時間不能太短，否則失去強化效果。
1.4.5.2 每天訓練結束後，要對實驗箱進行清洗，以清除動物留下的氣味。
1.4.5.3 實驗前可對動物進行初篩，經訓練後，2min內仍不能遊至終點者淘汰。
1.4.5.4 其餘同1.1.5。
記憶測試指標一覽表測試項目評價指標所用儀器被動 跳臺實驗被動迴避時間、錯誤次數和動物跳臺儀回 出現錯誤反應百分率避 避暗實驗同上避暗儀主動 單向迴避實驗達標所需的訓練次數 穿梭箱迴避 雙向迴避實驗迴避時間和迴避率穿梭箱迷 水迷宮實驗 到達安全臺的時間和達標宮 所需的訓練次數、動物出試 現錯誤反應的動物百分率 水迷驗驗1.5 結果判定跳臺實驗、避暗實驗、穿梭箱實驗、水迷宮實驗四項實驗中任二項實驗結果陽性。且重複實驗結果一致(所重複的同一項實驗兩次結果均為陽性)，可以判定該受試樣品輔助改善記憶動物實驗結果陽性。
2 人體試食試驗2.1 改善記憶的保健食品人體試食試驗的一般原則2.1.1 受試樣品進行人體試食試驗，受試樣品必須有其來源、組成、加工工藝和衛生條件的詳細說明，必須先經毒理學安全性評價，證明安全無毒，也不存在任何潛在的危險因素；經動物功效實驗已證明有效，或者雖然動物實驗無效，但有大量背景資料證明確有改善人體記憶作用，在此基礎上，才能進行人體試食試驗。
2.1.2 受試者參加人體試食試驗的受試者應本著自覺自愿的原則。
2.1.3 主試者本試驗的主試人員應以保障受試者的健康為前提，對受試者高度負責。主試人員必須經過專門的培訓，取得結業證書後方可進行該項實驗。
2.2 選擇受試者的原則2.2.1 從比較集中、各方面影響因素大致相同的群體中挑選受試者，比如學校、部隊或其它群體。參加人體試食試驗的受試者應本著自覺自愿的原則。
2.2.2 文化程度基本一致。
2.2.3 屬同一年齡組，如不在同一年齡組，則應對量表分進行校正。
2.2.4 未接受過類似測試2.2.5 排除短期內服用與受試功能有關的物品，影響到對結果的判斷。
2.3 受試樣品的劑量和使用方法按照生產廠家推薦的服用量和服用方法服用。
2.4 試驗設計和分組2.4.1 試驗原則對照、雙盲、隨機2.4.2 對照記憶測試是一種心理測試，易受遷移學習和心理暗示的影響，第二次測驗的記憶商一般比第一次高，有時對照組前後兩次測試的記憶商差異有顯著性，因此，不能僅以服樣前後自身比較的結果下結論，必須設置平行對照。
2.4.3 雙盲對照組必須服用安慰劑(不含有效成分，但其劑型、色澤、外觀、口感、包裝等均與受試樣品相同)，以消除心理暗示的影響；主試者在施測時不知道誰服樣品，誰服安慰劑，以消除主試者主觀偏向的影響，保證測試結果客觀可靠。
2.4.4 同一受試者前後兩次測試由同一主試者進行，2.4.5 施測順序一般是先聽覺測驗後視覺測驗。具體測驗順序是(1)指向記憶，(2)聯想學習，(3)無意義圖形再認，(4)圖象自由回憶，(5)人像特點聯繫回憶。
2.4.6 分組方法服樣前對受試者進行第一次記憶商測試後，然後按記憶商隨機分為試食組和對照組，儘可能考慮影響結果的主要因素如文化水平、年齡等，進行均衡性檢驗，以保證組間可比性。每組受試者不少於50例。
2.4.7 受試樣品的劑量和使用方法試食組按樣品的推薦劑量和方法服用受試樣品，對照組服用安慰劑或陰性對照。觀察時間不少於30天，必要時可以延長。
2.5 觀察指標各項指標於試驗開始及結束時各檢測一次。
2.5.1 安全性指標2.5.1.1 一般狀況包括精神、睡眠、飲食、大小便、心率等(兒童只要求進行心肺聽診、肝脾觸診等一般體格檢查)2.5.1.2 血、尿常規檢查2.5.1.3 肝、腎功能檢查(成人受試者測定此項)2.5.1.4 胸透、心電圖、腹部B超檢查(成人受試者測定此項且僅試驗前檢查一次)
2.5.2 功效指標使用臨床記憶量表。用測試後的各分測驗原始分查量表分，各分測驗量表分相加得總量表分，用總量表分查記憶商。
2.5.2.1 指向記憶量表分2.5.2 2 聯想學習量表分2.5.2.3 圖象自由回憶量表分2.5.2.4 無意義圖形再認量表分2.5.2.5 人像特點聯繫回憶量表分2.5.2.6 記憶商2.6 試驗材料2.6.1 錄有指向記憶和聯想學習的指導語和刺激詞的磁帶。
2.6.2 圖片材料(分甲、乙兩套)2.6.2.1 無意義圖形再認備第一次呈現用目標刺激圖片20張，備第二次再認時呈現用目標刺激和混入刺激圖片各20張，共40張，合計60張圖片。
2.6.2.2 圖象自由回憶物象圖片兩組各15張，共30張。
2.6.2.3 人像特點聯繫回憶備第一次呈現用的黑白勾畫人面像6張，備回憶時呈現的人面像6張，兩者內容相同，順序不同，共計12張；每張人像圖片背面標有該人像的姓氏、職業、愛好、特點。
2.6.3 錄音機、秒表、記錄紙。
2.7 測試內容及方法統一使用臨床記憶量表，具體方法參見臨床記憶量表。
臨床記憶量表有五項測試內容指向記憶聯想學習圖象自由回憶無意義圖形再認人像特點聯繫回憶臨床記憶量表的特點是備有有文化和無文化兩個部分的正常值，便於檢測無文化者。臨床記憶量表共包括5個分量表。各分測驗的測試順序(如圖象自由回憶的圖片呈現順序)在所有受試者中應一致。
2.7.1 指向記憶包括兩組內容，每組24個詞，每詞由2-3個字組成，以1秒的速度讀出，兩個詞之間間隔2s，其中有12個詞屬於同一類別，即為指向詞；另12個混在其中相類似的詞，為非指向詞。(例如甲套第一組詞中有12個詞屬於水果類，混雜的詞有粽子、年糕、冰糖等12個食品類詞；第二組詞中有12個詞屬於動物類，混雜的詞有皮膚、尾巴、眼睛、耳朵等身體器官類詞12個。)要求受試者記憶指定的同類別詞(如水果)。24個詞隨機排列，用錄音機放送，每組詞全部放送完畢後，要求受試者者立即回憶，說出要求記憶的一類詞(不一定要按放送的順序回憶)。主試者按受試者者回憶的順序，將所說出的內容在記錄紙上按順序用數字記在相應詞下面的方格內，並記錄總的反應時間，如果受試者說出的不是放送的詞內容(稱為「添加性錯誤」)，則寫在記錄紙上該組詞後面空格內。如果說的是混雜進去的不需記憶的詞，則記在下面非指向欄內相應詞下，亦算錯誤。反應時間從主試者說「現在請您回答」算起，直到回憶結束。允許回憶時間不超過2min。
當第一組詞受試者回憶結束後，間隔5s，再重複一遍指導語，然後放送第二組詞，方法同前。在第二組詞回憶完畢後，詢問受試者「除了要求您記的動物(或穿戴)這類詞以外，您還記得別的詞嗎？」這就是「非指向記憶」結果，可記錄在表內混雜詞下面的方格內。這裡要注意在第一組詞回憶完畢時，不要做這樣的詢問，否則將引起受試者在識記第二組詞時把注意力指向識記包括指向和非指向在內的所有詞，那就不符合這項測驗的原意了。最後詢問受試者「用什麼方法記憶」。
指導語「我念一些詞，您要注意聽，裡面有的是水果名字(或動物名字、蔬菜名字、穿戴的東西)，有的不是，要求您記住水果名字(或動物名字一天上飛的、地下跑的、爬的，大的、小的都算；蔬菜名字、穿戴的東西)。我念完以後，您要把聽過的水果(或動物、蔬菜、穿戴)的名字說出來，不一定按照我念的順序說，記得什麼就先說什麼，聽明白了嗎？現在注意聽」。如果指導語沒聽明白，可以重複口述一遍。口頭重複時，指導語不得任意更改，例如，「要求記住水果(或其它)名字」不得改成「只要記住水果名字或光記(或就記)水果名字」，或者甚至加上「不記其它的東西」就更不對了，這會導致不同的結果，是不允許的。計分以兩組指向記憶刺激詞的正確回憶數之和來計分，並記錄添加性錯誤的詞或其它錯誤備分析研究用。(滿分24分)。
甲套指向記憶詞呈現順序為1.橘子 香蕉 粽子 石榴 桃子 粉條 年糕 西瓜 葡萄 冰糖 鴨蛋 柿子 茶葉 豆腐 蘋果 白酒 牛奶 李子 餅乾 杏 花椒 香瓜 木耳 鴨梨2.烏鴉 公雞 耳朵 蜜蜂 兔子 指甲 皮膚 狐狸 麻雀 眼睛 肩膀 青蛙 牙齒 肝臟 蒼蠅 翅膀 心臟 老虎 頭髮 猴子 尾巴 蜻蜒 鼻子 螞蟻乙套指向記憶詞呈現順序為1.蘿蔔 茄子 大麥 韭菜 黃瓜 玉米 松樹 扁豆 冬瓜 梅花 稻子 辣椒 荷花 楊樹 白菜 桃花 棉花 菠菜 芝麻 西紅柿 菊花 芹菜 柳樹 豆芽菜2.圍巾 球鞋 牙膏 裙予 手套 筷子 板凳 短褲 雨衣 鐵鍋 剪刀 大衣 鬧鐘 電燈 襪子 火柴 縫紉機 皮襖 刷子 襯衫 扁擔 毛褲 掃帚 草帽2.7.2 聯想學習每套有12對2個字組成的詞構成量表，其中容易的(成對聯想詞間有邏輯聯繫)與困難的(成對聯想詞間無邏輯聯繫)成對詞各6對，容易聯想包括反義詞(如困難--容易)、同類詞(如太陽--月亮)和從屬詞(如牲口--牛馬)各兩對；困難聯想包括具體--具體(如西瓜衣服)、抽象--具體(如勇敢--電燈)和抽象--抽象(如光明--服從)成對詞各兩對。用以檢查對不同成對詞的記憶情況。以每對詞3s的速度讀出，兩對詞之間間隔2s，12對詞隨機排列，用錄音機放送，共放送三遍，即受試者有三次學習機會，但每遍詞放送的順序不同。每放送一遍後，主試者念每對詞的前面一個詞(即刺激詞)，要求受試者者答出後面一個詞來(即反應詞)，主試者將結果記錄在相應格內。如果回答正確，打「√」號，如果錯誤，則記錄錯答之詞，沒答出來，則以「0」表示。每對詞允許回憶時間5s。最後詢問受試者「用什麼方法記憶」。
指導語「我給您念12對詞，您要注意聽，要求您記住哪兩個詞是連在一起的一對，比如我念『桌子--馬車』，表示『桌子』和『馬車』是聯在一起的一對詞。我念完12對詞以後，就念每對詞中的前面一個詞，要求您答出和它一對的後面一個詞來，比如我念『桌子』，您就回答(停頓一下，讓受試者回憶)『馬車』，聽明白了嗎？」如果沒聽明白，可以重複口述一遍。
計分分為容易、困難以及兩者之和三種分數。每遍放送後，對容易的詞每答對一個計0.5分，6對共3分；困難的詞每答對一個計1分，6對共6分，6對容易和6對困難詞之和為9分，三遍的滿分為27分。
2.7.3 圖象自由回憶包括2組畫有物體的圖片材料，每組15張，所畫的物體都是人們常見的、熟悉的和易於辨認的東西，如日用品、交通工具等。每張圖片呈現4s、圖片間間隔2s，圖片順序隨機排列。15張圖片呈現完畢後，要求受試者者立即回憶說出所記得的圖片內容(不一定要按刺激呈現的順序回憶)。主試者按受試者者回憶的順序，將所記得的圖片在記錄紙上按順序用數字記在相應圖片名稱下的方格內，並記錄總的反應時間。如果受試者說出的是圖片中沒有的內容(稱為添加性錯誤)，則寫在記錄紙上該圖片系列後面的空格內。反應時從主試者說「現在請您回答」算起，直到回憶結束。允許回憶時間不超過2min。當第一組圖片受試者回憶結束後，間隔5s，再重複一遍指導語，然後呈現第二組圖片，方法同前。最後詢問受試者「用什麼方法記憶」。
口述指導語「我給您看一些圖片，您要仔細看，並記住它們是什麼，有看不清的可以問，等全部看完後，立即說出您看到的是些什麼東西，不一定按照我念的順序說，記得什麼就先說什麼，聽明白了嗎？現在注意看」如果沒聽明白，可以重複口述一遍，直到受試者理解為止。
計分 以兩組圖片的正確回憶數之和計分(滿分30分)，並記錄添加性錯誤。
2.7.4 無意義圖形再認包括20張目標刺激圖片，40張再認刺激圖片(其中與呈現圖片相同目標刺激圖片20張，相似混同刺激圖片20張)。目標刺激為5種形式的無意義圖形，即曲線封閉、直線封閉、曲線直線、曲線不封閉、直線不封閉。每種各4張，共20張。
測驗時，先給受試者分別呈現20張目標刺激圖片，每張呈現3s，相隔3s，要求受試者記住這些目標刺激。然後，隨機呈現40張再認刺激圖片(包括目標刺激圖片和混同刺激圖片)，圖片隨機排列，要求受試者將與目標刺激圖片完全相同的圖片辨認出來，即每張圖片呈現時，回答「看過」或「沒看過」，每張允許回憶時間為5s。如果對目標刺激回答「看過」，則按圖片中央Z號(從1-20)在記錄紙目標刺激一項相應格內打「√」號，如答「沒看過」，則打「×」號。如果對混入刺激回答「沒看過」，則按圖片中央Z號(從21-40)在記錄紙混入刺激一項相應格內打「√」號，如答「沒看過」，則打「×」號。最後詢問受試者「用什麼方法記憶」。
口述指導語「我給您看一些由簡單的曲線和直線構成的圖形，看的時間比較短，您要仔細看，並記住它們的特點，有看不清的可以問，等看完後，我再給您看另一些圖片，其中有您看過的，也有您沒看過的，它們都很相似，要求您認出哪些是看過的，哪些是沒看過的，聽明白了嗎？現在注意看」。如果沒聽明白，可以重複口述一遍，直到受試者理解為止。
無意義圖形背面的數字表示見圖2。
計分再認分＝(正確再認目標刺激—錯誤混入刺激數)×2(滿分40分)，即再認分＝(擊中—虛報)×2對目標刺激回答「看過」，稱為「擊中」，對沒看過的混入刺激也回答「看過」，稱為「虛報」。
2.7.5 人像特點聯繫回憶包括6張黑白人面像圖片。按隨機順序排列每張人像分別呈現9s，間隔3s，在呈現的同時，告訴被測驗者每張圖片上的人像的姓名、職業和愛好等特點，重複2遍，並要求被測驗者記住人像及特點之間的聯繫。然後再以另一順序呈現這些圖片，讓被測驗者立即說出人像的姓名、職業和愛好等特點。如果回答正確，主試者在記錄紙相應格內打「√」號，回答錯誤，則記下說錯的內容，每張人像允許回憶時間30s。
口述指導語「我給您看一些畫的人像，在給您看每張人像的同時，向您介紹他姓什麼、職業和愛好特點，請您一邊注意看人像，一邊注意聽介紹，且要把人像和他的三個特點聯繫起來記憶。看完全部人像後，當我再給您看每一張人像時，要求您立即說出他的三個特點，不一定按我說的順序回答，記得什麼先說什麼，聽明白了嗎？」，如果沒聽明白，可以重複口述一遍，直到受試者理解為止。
計分分別記錄回憶出的姓名、職業和愛好的數目，每個姓名記2分，每項職業和愛好各記1分，然後以三項總和計分。(滿分24分)臨床記憶量表的5個分量表都有各自的記分方法，各分量表得出的分數均為原始分。根據這些原始分，換算量表分的等價值表，查出各分量表的量表分，計算出總量表分；然後按照不同的年齡組的總量表分的等值記憶商數換算表，即可查得記憶商數(MQ)。這就作為衡量人的記憶水平的指標。
2.8 數據處理及結果判定此試驗數據為計量資料，對兩組各分測驗量表分和記憶商可用t檢驗進行分析。自身對照可以採用配對t檢驗，組間平行比較採用兩樣本均數的t檢驗，後者需進行方差齊性檢驗，對非正態分布或方差不齊的數據進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊後，用轉換的數據進行t檢驗；若轉換數據仍不能滿足正態方差齊要求，改用t』檢驗或秩和檢驗；但變異係數太大(如CV＞50％)的資料應用秩和檢驗。
結果判定在試驗前兩組記憶商均衡的前提下，試食後試食組的記憶商高於對照組，且差異有顯著性，同時試食組試驗後的記憶商高於其試驗前的記憶商，且差異有顯著性，可以判定該受試樣品具有輔助改善記憶的作用。
2.9 注意事項2.9.1 心理測驗必須由受過訓練的人員進行，否則影響試驗結果。
2.9.2 測試應當在一個安靜的房間內進行。除受試者和主試者外，儘量避免有其它人在場。
2.9.3 本量表內有三項和視覺有關的分測驗，室內光線必須保證能看得清楚刺激圖片。儘量排除因聽力或視力不佳而影響記憶成績。
2.9.4 必須注意受試者受測時的精神狀態，測驗需在受試者情緒正常、不反對接受測試、注意力比較集中的情況下進行。受試者是否疲倦，注意力是否集中，是否配合、對測試是否緊張，是否有信心等均需記錄在記錄紙的首頁上。
2.9.5 同一受試者的測試要求一次做完。在用年齡量表分比較分測驗成績時，必須注意不同分測驗是否在相同的精神狀態下進行的。
2.9.6 填寫記錄必須認真，字跡清楚。填寫時注意以下幾點2.9.6.1 首頁必須逐項填寫，即受試者的姓名、性別和年齡，以及檢查日期和時間。
2.9.6.2 填寫文化程度和職業作為了解受試者接受測驗的背景材料。
2.9.6.3 填寫健康狀況或診斷，前一夜睡眠情況或當時疲倦與否。
2.9.6.4 對表明當時精神狀況的各項，如配合程度、注意力、緊張狀態、信心等也要填寫清楚。
2.9.6.5 除記錄受試者記憶回答的正誤外，應當記下錯誤回答的具體內容，以備分析研究用。
2.9.6.6 是否應用記憶方法以及使用什麼方法對記憶研究是有益的。在用此量表進行研究時應當記錄此項。
2.9.6.7 各項分測驗成績的原始分記入首頁總結表中，要先經複查，複查無誤方可填入原始分項內。
結果表明，樣品對動物和人體試驗都具有良好的改善記憶功能。
五、複方人參三醇型皂苷型軟膠囊提高缺氧耐受力檢驗方法1 常壓耐缺氧實驗1.1 原理缺氧對機體是一種緊張性刺激，影響機體各種代謝，特別是影響機體的氧化供能，最終會導致機體的心、腦等主要器官缺氧供能不足而死亡。
1.2 材料250mL磨口瓶、秒表、凡士林、鈉石灰(或等量氫氧化鈉和碳酸鈣)。
1.3 實驗動物成年健康小鼠，單一性別，18-22g，每組10-15隻。
1.4 劑量分組及受試樣品給予時間實驗設三個劑量組和一個空白對照組，以人體推薦量的10倍為其中的一個劑量組，另設二各劑量組，必要時設陽性對照組。受試樣品給予時間原則上不少於30天，必要時可適當延長。
1.5 實驗步驟各劑量組經口連續給予不同濃度受試樣品，對照組給予同等容量溶劑，於末次灌胃後1小時，將各組小鼠分別放入盛有5g鈉石灰的250mL磨口瓶內(每瓶1隻)，用凡士林封瓶口，蓋嚴，使之不漏氣，立即計時，以呼吸停止為指標，觀察小鼠因缺氧而死亡的時間。
1.6 統計方法及結果判定缺氧時間為計量數據，採用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F值＜F0.05，結論各組均數間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計；對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊要求後，用轉換後的數據進行統計；若變量轉換後仍未達到正態或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統計。
受試樣品組與對照組比較，存活時間延長，並具有統計學意義，則判定該實驗結果陽性。
1.7 注意事項1.7.1 每個磨口瓶內最好只放1隻小鼠，以防互相干擾影響耐缺氧能力的測定。
1.7.2 磨口瓶一定要密閉封嚴，以防漏氣，否則會影響實驗結果。
1.7.3 磨口瓶必須等容量(誤差±1mL)，實驗前先用水加以校正。
1.7.4 每批實驗動物的體重應儘量保持一致。
2 亞硝酸鈉中毒存活實驗2.1 原理亞硝酸鈉使正常二價鐵血紅蛋白轉變為三價鐵血紅蛋白，破壞血紅蛋白攜氧能力，造成組織缺氧死亡。
2.2 材料亞硝酸鈉 秒表 1mL注射器2.3 實驗動物健康成年小鼠，單一性別，18-20g，每組10-15隻。
2.4 劑量分組同1.42.5 實驗步驟各劑量組經口連續給予不同濃度受試樣品，對照組給予同等容量溶劑，於末次灌胃後1小時，各組動物按200-240mg/kgBW劑量腹腔注射亞硝酸鈉(注射量為0.1mL/10g)，立即計時，記錄動物存活時間。
2.6 統計方法及結果判定存活時間為計量數據，採用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F值＜F0.05，結論各組均數間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計；對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊要求後，用轉換後的數據進行統計；若變量轉換後仍未達到正態或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統計。
受試樣品組與對照組比較，存活時間延長，並具有統計學意義，則判定該實驗結果陽性。
3 急性腦缺血性缺氧實驗3.1 原理動物斷頭後，由於腦供血終止，在短時間內腦中原有的血液和營養物質尚能使腦功能維持短暫時間，顯示出有規律地張口喘氣，以喘氣時間為指標，可觀察受試樣品對腦缺血性缺氧的保護作用，凡能使腦耗氧降低的受試樣品，均能延長動物喘氣時間。
3.2 材料剪刀 秒表3.3 實驗動物同2.33.4 劑量分組同1.43.5 實驗步驟各劑量組經口連續給予不同濃度受試樣品，對照組給予同等容量溶劑，於末次灌胃後1小時，各組動物(在乙醚淺麻醉下)自頸部逐只斷頭，立即按秒表記錄小鼠斷頭後至張口喘氣停止時間。
3.6 統計方法及結果判定喘氣停止時間為計量數據，採用方差分析，但需按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F值＜F0.05，結論各組均數間差異無顯著性；F值≥F0.05，P≤0.05，用多個實驗組和一個對照組間均數的兩兩比較方法進行統計；對非正態或方差不齊的數據進行適當的變量轉換，待滿足正態或方差齊要求後，用轉換後的數據進行統計；若變量轉換後仍未達到正態或方差齊的目的，改用秩和檢驗進行統計。
受試樣品組與對照組比較，喘氣時間延長，並具有統計學意義，則判定該實驗結果陽性。
3.7 結果判定常壓耐缺氧實驗、亞硝酸鈉中毒存活實驗、急性腦缺血性缺氧實驗三項實驗中至少二項實驗結果陽性，可判定該受試樣品具有提高缺氧耐受力的作用。
3.8 注意事項3.81 斷頭用的大剪刀必須鋒利，斷頭時操作要敏捷，捉拿小鼠不宜反覆多次或捉拿時間過長。
3.8.2斷頭部位在小鼠耳根後部，切勿損傷延腦，否則斷頭後小鼠不顯現喘氣活動。
結果表明，樣品對動物具有良好的抗缺氧功能。
六、本發明的藥學研究1、本發明的穩定性實施例七個樣品在室溫下避光保管，放置1、2、3、6、12個月，按時檢查，外觀基本不變，有效成分經檢驗也未發生變化。因此，初步認為各種處方製得的產品均可達到1年左右的保質期。
2、粉針劑和輸液劑的刺激性試驗取健康家兔4隻，W2.0～2.2kg，雌雄各半，分為兩組，分別在其左右腿股四頭肌上注射黃芪輸液1ml，藥後48h處死兔子，剖檢股四頭肌，縱向切開觀察注射局部肌肉刺激反應，並按下表換算出相應的反應級。
局部肌肉刺激反應級表
反應級 刺激反應0 無明顯變化1 輕度充血，其範圍小於0.51.0cm2 中度充血，其範圍小於0.51.0cm3 重度充血，伴有肌肉變性4 出現壞死，有褐色變性5 出現廣泛性壞死結果粉針劑和輸液的刺激性均為0級，表明注射劑無刺激性。
權利要求
1.一種具有生理活性的複方人參三醇皂苷，其特徵在於含有以下成分人參三醇皂苷組(含PTG 51～98％)、銀杏提取物(含銀杏黃酮＞24％、銀杏內酯＞6％)、茶氨酸。
2.根據權利要求1所述的具有生理活性的複方人參三醇皂苷，其特徵在於複方中各有效成分的配比(重量)為人參三醇皂苷組(含PTG 51～98％) 10％～68％銀杏提取物(含銀杏黃酮＞24％、銀杏內酯＞6％)5％～49％茶氨酸 20％～75％
3.根據權利要求1所述的具有生理活性的複方人參三醇皂苷，其特徵在於複方中還可含有以下活性成分B族維生素(B1、B2、B6等)。
4.根據權利要求3所述的具有生理活性的複方人參三醇皂苷，其特徵在於複方中各有效成分的配比(重量)為人參三醇皂苷組(含PTG 51～98％) 10％～55％銀杏提取物(含銀杏黃酮＞24％、銀杏內酯＞6％)5％～40％茶氨酸 20％～70％維生素B11％～5％維生素B21％～5％維生素B61％～5％
5.根據權利要求1或3所述的具有生理活性的複方人參三醇皂苷，其特徵在於人參三醇組中人參皂苷Rg1在其中的含量為45％～99％，其餘為Re、Rf、Rg2、Rh1等。
6.一種具有生理活性的複方人參三醇皂苷製劑，其特徵在於複方製劑中各成分的配比(重量)為權利要求1所述的複方人參三醇皂苷5％～85％、輔料15％～95％，輔料為藥用或食用輔料中的一種或幾種，製成醫藥或食品上可以接受的製劑。
7.一種具有生理活性的複方人參三醇皂苷的用途，其特徵在於用於對腦細胞活力和腦神經細胞活力正性的加強作用。
8.一種具有生理活性的複方人參三醇皂苷的用途，其特徵在於用於治療或改善因血液系統或神經系統弱化而引起的腦供血、供氧不足及神經活動減弱的疾病或功能失調。
9.一種具有生理活性的複方人參三醇皂苷的用途，其特徵在於可製成醫療上可接受的各種新藥及功能食品，如粉針劑、滴劑、口服劑的口腔黏膜給藥的舌下含片、速溶片、咀嚼片和普通的口服劑及各種食品餅乾、糖果、飲料、果凍等。
全文摘要
本發明涉及一種具有生理活性的複方人參三醇皂苷，含有人參三醇皂苷組(含PTG 51～98％)、銀杏提取物(含銀杏黃酮＞24％、銀杏內酯＞6％)、茶氨酸，添加輔料可製成各種製劑。本發明複方能改善腦動脈硬化症、老年性痴呆等，對腦細胞活力和腦神經細胞活力有正性的加強作用，能迅速改善大腦供氧供血狀況，降低頭昏、頭痛、精力不集中等肌體反應，有良好的改善記憶功能、抗缺氧功能，穩定性較好，可用於治療或改善因血液系統或神經系統弱化而引起的腦供血、供氧不足及神經活動減弱的疾病或功能失調等。
文檔編號A61K9/00GK1608629SQ20041002271
公開日2005年4月27日 申請日期2004年6月3日 優先權日2004年6月3日
發明者楊兆祥, 艾黎 申請人:昆明香格喜瑪生物技術有限責任公司