雷帕黴素二醛化合物的製作方法
2023-09-17 15:29:45
專利名稱：雷帕黴素二醛化合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及可作為神經營養劑用於治療實體瘤和高增生性血管病的非免疫抑制性雷帕黴素二醛化合物、其製備方法和含有其的藥物組合物。
雷帕黴素是一種由吸水鏈黴菌(Streptomyces hygroscopicus)產生的大環三烯抗生素，已發現其具有體外和體內抗真菌活性，特別是抗白色念珠菌的活性[C.Vezina等人，J.Antibiot.28，721(1975)；S.N.Sehgal等人，J.Antibiot.28，727(1975)；H.A.Baker等人，J.Antibiot.31，539(1978)；美國專利3,929,992；和美國專利3,993,749]。此外，單獨的雷帕黴素(美國專利4,885,171)或與溶血鏈球菌(美國專利4,401,653)組合的雷帕黴素也顯示出抗腫瘤活性。
雷帕黴素的免疫抑制作用已在FASEB 3，3411(1989)中公開。其他大環分子Cyclosporin A和FK-506也顯示出可有效用作免疫抑制劑，並由此可用於預防移植排斥[FASEB 3，3411(1989)；FASEB 3，5256(1989)；R.Y.Calne等人，Lancet 1183(1978)；和美國專利5,100,899]。R.Martel等人[Can.J.Physio.Pharmacol.55,48(1977)]公開了雷帕黴素可有效用於實驗性過敏腦脊髓炎模型，這是一種多發性硬化的模型；用於佐劑關節炎模型，這是一種類風溼性關節炎的模型；並有效地抑制IgE樣抗體的形成。FK-506和一些合成的FKBP-12結合性配體顯示出具有神經保護性和神經再生性[US5696135，US5721256，US5780484，US5811434和US5840736]。
雷帕黴素也可用於預防或治療全身性紅斑狼瘡[美國專利5,078,999]，肺部炎症[美國專利5,080,899]，胰島素依賴型糖尿病[美國專利5,321,009]，皮膚病，比如牛皮癬[美國專利5,286,730]，腸病[美國專利5,286,731]，繼血管損傷之後的平滑肌細胞增生和內膜肥厚[美國專利5,288,711和5,516,781]，成人T細胞白血病/淋巴瘤[歐洲專利公開525,960 A1]，眼部炎症[美國專利5,387,589]，惡性癌症[美國專利5,206,018]，心臟炎性疾病[美國專利5,496,832]，貧血[美國專利5,561,138]和增長性軸突贅疣[Parker，E.M.等，Neuropharmacology 39，1913-1919，2000]。
一種雷帕黴素酯，即與3-羥基-2-(羥甲基)-2-甲基丙酸形成的雷帕黴素42-酯[在美國專利5,362,718中公開]，亦稱CCI-779，已被揭示在體內動物腫瘤模型和I期臨床試驗中具有針對多種腫瘤細胞系的抗腫瘤活性。[Gibbons，J.，Proc.Am.Assoc.Can.Res.40301(1999)；Geoerger，B.，Proc.Am.Assoc.Can.Res.40603(1999)；Alexandre，J.，Proc.Am.Assoc.Can.Res.40613(1999)；和Alexandre，J.，Clin.Cancer.Res.5(十一月增刊)摘要7(1999)]。
發明內容
本發明提供如此處所述的非免疫抑制性雷帕黴素二醛化合物以及其使用方法。如此處定義，術語＂雷帕黴素二醛化合物＂意指一類包含基本雷帕黴素核的神經營養性化合物(如下所示)。這些化合物缺乏與完整雷帕黴素核相關聯的免疫抑制性。本發明的雷帕黴素二醛化合物包括可能經化學或生物改性為雷帕黴素二醛核衍生物而同時仍保持神經營養性的化合物。因此，術語＂雷帕黴素二醛化合物＂包括雷帕黴素的酯、醚、肟、腙和羥胺，以及其中雷帕黴素二醛核上官能團已例如通過還原或氧化而被改性的雷帕黴素二醛化合物。術語＂雷帕黴素二醛化合物＂也包括雷帕黴素二醛化合物的可藥用鹽，其中所述的雷帕黴素二醛化合物因包含酸性結構部分或鹼性結構部分而能夠形成上述鹽。
雷帕黴素二醛優選的是由雷帕黴素二醛核42-和/或31-位羥基形成的雷帕黴素二醛的酯和醚，由27-位羥基(繼27-酮化學還原之後)形成的雷帕黴素二醛的酯和醚，以及由雷帕黴素二醛核42-位酮(繼42-羥基氧化之後)和27-酮形成的肟、腙和羥胺。
優選的用作相應雷帕黴素二醛化合物起始材料的雷帕黴素42-和/或31-酯和醚公開在如下專利中，全部這些文獻特此通過引述併入本文雷帕黴素的烷基酯(美國專利4,316,885)；氨烷基酯(美國專利4,650,803)；氟化酯(美國專利5,100,883)；醯胺酯(美國專利5,118,677)；氨基甲酸酯(美國專利5,118,678)；甲矽烷基醚(美國專利5,120,842)；氨基酯(美國專利5,130,307)；縮醛(美國專利5,51,413)；氨基二酯(美國專利5,162,333)；磺酸酯和硫酸酯(美國專利5,177,203)；酯(美國專利5,221,670)；烷氧基酯(美國專利5,233,036)；O-芳基、-烷基、-鏈烯基和-炔基醚(美國專利5,258,389)；碳酸酯(美國專利5,260,300)；芳基羰基和烷氧羰基氨基甲酸酯(美國專利5,262,423)；氨基甲酸酯(美國專利5,302,584)；羥基酯(美國專利5,362,718)；受阻酯(美國專利5,385,908)；雜環酯(美國專利5,385,909)；偕二取代酯(美國專利5,385,910)；氨基鏈烷酸酯(美國專利5,389,639)；磷醯基氨基甲酸酯(美國專利5,391,730)；氨基甲酸酯(美國專利5,411,967)；氨基甲酸酯(美國專利5,434,260)；脒基氨基甲酸酯(美國專利5,463,048)；氨基甲酸酯(美國專利5,480,988)；氨基甲酸酯(美國專利5,480,989)；氨基甲酸酯(美國專利5,489,680)；受阻N-氧化物酯(美國專利5,491,231)；生物素酯(美國專利5,504,091)；O-烷基醚(美國專利5,665,772)；和PEG酯(美國專利5,780,462)。這些酯和醚的製備方法在上列專利中公開。可以使用這些專利中所述的方法，從雷帕黴素起始，繼之以本文所述開環反應，完成相應的雷帕黴素二醛酯和醚的製備。一種改進的雷帕黴素42-酯和醚合成方法在美國專利6,277,539中公開，該文獻特此通過引述併入本文。
相應地，雷帕黴素二醛化合物的例子包括式(II)所示雷帕黴素二醛以及42-和/或31-酯和醚化合物 其中，RA和RB各自選自氫和如上述任一美國/歐洲專利公開的酯或醚形成基團(例如，醯基和任選取代的烷基)。
優選的用作相應雷帕黴素二醛化合物起始材料的雷帕黴素27-酯和醚公開在美國專利5,256,790中，該文獻特此通過引述併入本文。這些酯和醚的製備方法在上列專利中公開。可以使用這些專利中所述的方法，從雷帕黴素起始，繼之以本文所述開環反應，完成相應的雷帕黴素二醛酯和醚的製備。相應地，雷帕黴素二醛27-酯和醚化合物的例子包括式(III)所示化合物
其中RC是氫或如美國專利5,256,790中公開的酯或醚形成基團。
優選的雷帕黴素肟、腙和羥胺公開在美國專利5,373,014、5,378,836、5,023,263、5,023,264和5,563,145中，這些文獻特此通過引述併入本文。這些用作相應雷帕黴素二醛化合物起始材料的肟、腙和羥胺的製備方法在上列專利中公開。可以使用這些專利中所述的方法，從雷帕黴素起始，繼之以本文所述開環反應，完成相應的雷帕黴素二醛肟、腙和羥胺的製備。
特別優選的雷帕黴素二醛化合物包括雷帕黴素二醛，與3-羥基2-(羥甲基)-2-甲基丙酸形成的雷帕黴素二醛42-酯[見美國專利5,362,718和6,277,539，用3-羥基2-(羥甲基)-2-甲基丙酸製備雷帕黴素42-酯]，和42-O-(2-羥基)乙基雷帕黴素二醛[見美國專利5,665,772，製備42-O-(2-羥基)乙基雷帕黴素]。
適用時，若所述雷帕黴素化合物包含適宜的鹼性結構部分，可藥用鹽可以由有機和無機酸如乙酸、丙酸、乳酸、檸檬酸、酒石酸、琥珀酸、富馬酸、馬來酸、丙二酸、扁桃酸、蘋果酸、苯二甲酸、鹽酸、氫溴酸、磷酸、硝酸、硫酸、甲磺酸、萘磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、樟腦磺酸以及同樣已知可接受的助劑形成。若所述雷帕黴素化合物包含適宜的酸性結構部分，鹽也可由有機和無機鹼形成，如鹼金屬鹽(例如，鈉、鋰或鉀)，鹼土金屬鹽，銨鹽，含1-6個碳原子的烷基銨鹽或在各烷基中含1-6個碳原子的二烷基銨鹽，以及在各烷基中含1-6個碳原子的三烷基銨鹽。
如根據本發明使用，有關提供本發明範圍內化合物或物質的術語＂提供＂意指將這一化合物或物質直接給藥，或以將會在機體內形成有效量的這一化合物或物質的前藥、衍生物或類似物給藥。
本發明的化合物可以由一種雷帕黴素利用可商購起始材料製得，或者由可按照文獻方法製備的起始材料製得。所需的雷帕黴素二醛化合物可以經如下方式製備在對反應進程進行監測的情況下，用氧化劑如OsO4/高碘酸鈉或臭氧處理所述雷帕黴素化合物，直至形成所需的產品。
相應地，本發明提供一種如本文所述製備雷帕黴素二醛化合物的方法，包括如下步驟之一a)在非###中臭氧分解雷帕黴素化合物(例如，雷帕黴素、與3-羥基-2-(羥甲基)-2-甲基丙酸形成的雷帕黴素42-酯、或42-O-(2-羥基)乙基雷帕黴素)，以便生成雷帕黴素二醛化合物(例如，雷帕黴素二醛、與3-羥基-2-(羥甲基)-2-甲基丙酸形成的雷帕黴素二醛42-酯、或42-O-(2-羥基)乙基雷帕黴素二醛)；或者b)用醯化劑(例如，含上述RA或RB基團的醯化劑)醯化在活性取代基上任選被保護的雷帕黴素二醛，以便得到雷帕黴素二醛化合物，例如式(II)所示雷帕黴素二醛42-、31-或42，31-酯衍生物 其中RA和RB各自是所選酯形成基團(例如，醯基)或者RA和RB之一是氫，然後去除任何保護基；
或者c)用醚化劑(例如，含上述RA或RB基團的醚化劑)醚化在活性取代基上任選被保護的雷帕黴素二醛，以便得到雷帕黴素二醛化合物(例如，上式(II)所示雷帕黴素二醛42-、31-或42，31-醚衍生物，其中RA和RB各自是所選醚形成基團或者RA和RB之一是氫)，然後去除任何保護基。
在臭氧分解氧化過程中，除產生所述雷帕黴素二醛化合物之外，還生成相應雷帕黴素29-烯醇。雷帕黴素29-烯醇的結構如下。
雷帕黴素29-烯醇此外，在雷帕黴素化合物臭氧分解過程中，生成具有如下結構的(2E，4S，6R)-6-[(5S，6R)-5-羥基-6-甲氧基-4-甲基-2，3，7-三氧雜雙環[2.2.1]庚-1-基]-4-甲基庚-2-烯醛(實施例3)。
用標準藥理學測試方法，通過評價本發明代表性化合物雷帕黴素二醛(實施例1)和雷帕黴素29-烯醇(實施例2)在體外抗SH-SY5Y細胞的活性，確證本發明化合物的神經再生活性[Gold等人，Exp Neurol147269-278，1997]。簡言之，將SH-SY5Y細胞置於已用阿非迪黴素處理的6孔板中5天，然後再經測試化合物處理。對照孔是未經處理的，或經單獨的神經生長因子(NGF)處理。測試孔用NGF連同實施例1和實施例2或者雷帕黴素處理。在168小時，對細胞照相。使用與裝有適宜軟體(Bioquant IV，RM Biometrics，Nashville，TN)的IBM XT計算機相連的Houston Instrument HI-PAD數位化標牌刻寫板，在相片上分析軸突長度。使用ANOVA(STATVIEW，Abacus Concepts，Inc.，Berkeley，CA)比較軸索麵積平均值。在下表中總結了所得結果。
表1. 168小時後的平均軸突長度
a數值為平均值±SEM(以μm表示)。n，細胞數目。
*與未處理細胞相比，p＜0.05**與NGF和未處理細胞相比，p＜0.05標準藥理學測試方法中得到的結果證明，本發明化合物可用作神經營養劑，特別可用於促進神經元再生和功能恢復，以及刺激軸突生長，由此可用於治療多種神經病理狀態，包括由如下因素引致的外周神經和中樞神經系統損傷物理損傷(例如，脊髓損傷和創傷，坐骨神經或面神經損害或損傷)，疾病(例如，糖尿病性神經病)，癌症化療(例如，通過長春花鹼和阿黴素)，與中風相關的腦損傷和與中風相關的局部缺血，以及神經系統紊亂，包括但不限於，各種與神經變性有關的外周神經病理紊亂和神經系統紊亂，包括但不限於三叉神經痛，舌咽神經痛，貝爾麻痺，重症肌無力，肌營養不良，肌萎縮性側索硬化，進行性肌萎縮，進行性延髓遺傳肌萎縮，突出、破裂或脫垂脊椎盤症候群，頸椎關節強直，叢病症，胸腔出口破壞症候群，外周神經病，例如由如下因素引起的外周神經病鉛，丙烯醯胺，γ-二酮(glue-sniffer氏神經病)，二硫化碳，氨苯碸，蜱，卟啉症，吉-巴症候群，痴呆，阿爾茨海默氏病，帕金森氏病，和亨廷頓氏舞蹈病。
通過評價本發明代表性化合物(實施例1-5)在體外針對六種腫瘤細胞系的抗腫瘤活性，確證了本發明的抗腫瘤活性。簡言之，將來自六種腫瘤細胞系的腫瘤細胞置於96孔微量滴定板的各孔中。使用了如下腫瘤細胞系3T3(卵巢腫瘤)，3T3/H2N(對順鉑耐藥的卵巢腫瘤)，A431(外陰表皮樣瘤起源)，SW620(結腸腫瘤)，SKBR3(乳腺腫瘤)，和MDA-435(乳腺腫瘤)。在待評價化合物的系列稀釋液存在下，使腫瘤細胞生長48小時，使用比色法(sulforhrodamine B)測定細胞生長。通過與加入測試化合物當時的細胞數目比較，計算生長抑制。結果以IC50(μg/ml)表示，在表2中列出。
表2.抗腫瘤活性(IC50，μg/ml)
此標準藥理學測試方法的結果證明本發明化合物可用作抗腫瘤藥。本發明化合物特別可用於抗實體瘤，包括肉瘤和癌症在內；更特別可用於抗星形細胞瘤，前列腺癌，乳腺癌，結腸癌，小細胞肺癌，和卵巢癌；以及成人T細胞白血病/淋巴瘤。
本發明化合物還可用於治療或抑制高增生性血管病如再狹窄。
當用於再狹窄時，優選將本發明化合物用於治療繼血管成形術後發生的再狹窄。當用於治療這種繼血管成形術後發生的再狹窄時，可在術前、術中、術後或者這些期間任意組合，給藥本發明化合物。
應理解雷帕黴素二醛化合物的有效劑量可隨具體使用的化合物、給藥方式、條件、所治病症的嚴重程度、以及各種與所治個體相關的生理因素而改變。在根據本發明使用時，若所述雷帕黴素二醛化合物以活性化合物口服日劑量接近於0.1μg/kg-100mg/kg、優選0.001-25mg/kg、更優選0.01-5mg/kg的設計日劑量給藥，則可得到滿意的結果。應理解設計日劑量將隨給藥途徑而改變。
當雷帕黴素二醛化合物用作組合方案的一部分時，在目標治療期間給予該組合中的各組分。組合中各組分可以以含全部兩個組分的整體劑型或作為單獨的劑量單元同時給藥；組合中各組分也可在治療期間的不同時間給藥，或其中之一可以以另一組分前處理形式給藥。
可以以任何可用於將本文所述活性化合物導向接受者血流的方式給藥，包括經口服、植入物、腸胃外(包括靜脈內、腹膜內和皮下注射)、直腸、鼻內、陰道和透皮給藥。為本發明公開目的，應理解透皮給藥包括所有穿越體表和包括上皮和黏膜組織在內的機體通道的內層的給藥。可使用本發明化合物或其可藥用鹽以洗劑、霜劑、泡沫劑、貼片劑、懸液劑、溶液劑和栓劑實現上述給藥。
含本發明活性化合物的口服製劑可包括任何常規使用的口服形式，包括片劑，膠囊劑，頰的形成，圓錠劑，糖錠劑和口服液劑，懸液劑或溶液劑。膠囊劑可以包含活性化合物與惰性填料和/或稀釋劑的混合物，所述惰性填料和/或稀釋劑例如為可藥用澱粉(例如，玉米澱粉、土豆澱粉或木薯澱粉)，糖，人工甜味劑，粉狀纖維素比如結晶纖維素和微晶纖維素，麵粉，白明膠，樹膠等等。可用的片劑製劑可通過常規壓縮、溼造粒或幹造粒方法並利用如下成分製得可藥用的稀釋劑，粘合劑，潤滑劑，崩解劑，表面改性劑(包括表面活性劑在內)，懸浮劑或穩定劑，包括但不限於，硬脂酸鎂，硬脂酸，滑石，十二烷基硫酸鈉，微晶纖維素，羧甲基纖維素鈣，聚乙烯吡咯烷酮，明膠，藻酸，阿拉伯樹膠，黃原膠，檸檬酸鈉，配合矽酸鹽，碳酸鈣，甘氨酸，糊精，蔗糖，山梨糖醇，磷酸二鈣，硫酸鈣，乳糖，高嶺土，甘露醇，氯化鈉，滑石，幹澱粉和糖粉。優選的表面改性劑包括非離子型和陰離子型表面改性劑。代表性表面改性劑的例子包括，但不限於，泊洛沙姆188，烷基苄基二甲基氯化銨，硬脂酸鈣，十六醇十八醇混合物，聚西託醇乳化蠟，脫水山梨糖醇酯，膠態二氧化矽，磷酸鹽，十二烷基硫酸鈉，矽酸鎂鋁，和三乙醇胺。更優選使用泊洛沙姆188作為表面改性劑。此處口服製劑可以採用標準的延遲或定時釋放製劑，以改變活性化合物的吸收。優選的雷帕黴素口服製劑在美國專利5,559,121；5,536,729；5,989,591；和5,985,325中公開，這些文獻特此通過引述併入本文。
有時，可能希望將所述化合物以氣霧劑形式直接向呼吸道給藥。
本發明化合物也可經腸胃外或經腹膜內給藥。以游離鹼和可藥用鹽形式存在的這些活性化合物的溶液或混懸液可在適當混有表面活性劑如羥丙基纖維素的水中製得。分散體也可在甘油、液態聚乙二醇及其在油中的混合物中製得。在普通保存和使用條件下，這些製劑包含防腐劑，以防止微生物生長。
適用於注射的藥物形式包括無菌水溶液和分散體以及用於臨時製備無菌注射溶液或分散體的無菌粉末。在所有情況下，所述形式必須是無菌的，並且流動性必須達到易於注射的程度。它在製造和保存條件下必須穩定，必須作抗微生物如細菌和真菌汙染防護。載體可以是含例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液態聚乙二醇)、其適宜混合物以及植物油的溶劑或分散介質。優選用於雷帕黴素給藥的腸胃外製劑在美國專利5,530,006；5,516,770；和5,616,588中公開，這些文獻特此通過引述併入本文。
栓劑可由常規材料製備，包括可可脂，其添加有或未添加改變栓劑熔點的蠟，和甘油。也可使用水溶性栓劑基底，如不同分子量的聚乙二醇。
當將雷帕黴素二醛化合物用於治療或抑制高增生性血管病如再狹窄時，優選經由已塗覆或滲透了所述雷帕黴素二醛化合物的血管支架或分流器提供雷帕黴素二醛化合物。
本發明代表性化合物的製備方法如下。
實施例1(方法A)雷帕黴素二醛使雷帕黴素(5.0g，5.5mmole)溶於100mL二噁烷和35mL水中。然後加入61mg OsO4，在室溫下進行反應。攪拌30分鐘後(溶液變為深綠色)，在30分鐘內分批加入偏高碘酸鈉(2.34g，10.9mmole)。將反應物攪拌過夜。用200mL CH2Cl2萃取反應混合物使反應終止，搜集得到5.1g粗品(總峰面積的66％為題述化合物，12％為未反應的雷帕黴素)。採用製備HPLC，在Prep Nova-pak HR Cl8柱(300×19mm)上經梯度法純化組品，其中在梯度法中初始5分鐘使用65％A和35％B，然後在30分鐘內由65％A和35％B改為10％A和90％B。緩衝劑A為90％水和10％乙腈。緩衝劑B為10％水和90％乙腈。流速為20mL/分鐘。收集20-21分鐘時的級分，用二氯甲烷萃取。用無水硫酸鈉乾燥有機層。使用旋轉蒸發系統去除有機溶劑。將殘留物溶於3mL二氯甲烷，並加入15mL己烷進行沉澱。過濾後，將白色固體置於變速真空(speed-vac)中乾燥過夜。如果產品純度不夠，在相同柱上使用51％B和49％A再次純化。收集13分鐘時的峰，重複上文所述搜集。得到白色固體。
測定化合物I，DMSO-d6，400MHz(13C100MHz)
使用負和正電霧化模式分別觀測到如下偽分子離子m/z 944的[M-H]-離子，和m/z 963的[M+NH4]+離子。
實施例1(方法B)雷帕黴素二醛使雷帕黴素(1.0g，1.09mmole)溶於250mL二氯甲烷中。將圓底燒瓶置於乾冰浴中。使臭氧氣體穿過上述溶液鼓泡6分鐘(6L/分鐘，控制鈕設置在輸出7)。然後，將反應混合物攪拌1小時。加入二甲硫(100μL)，將反應物再攪拌1小時。向反應混合物中加入200mL水使反應終止。搜集後得到約0.97g粗品(灰白色固體，總峰面積的44％為題述化合物)。LC/MS證實了主峰為題述化合物。
實施例2和3雷帕黴素29-烯醇(實施例2)和(2E，4S，6R)-6-[(5S，6R)-5-羥基-6-甲氧基-4-甲基-2，3，7-三氧雜雙環[2.2.1]庚-1-基]-4-甲基庚-2-烯醛(實施例3)除用臭氧氣體鼓泡50分鐘外，採用與實施例1B相同的方法處理雷帕黴素(1.3g，1.40mmol)。搜集後得到約1.1g粗品(灰白色固體，總峰面積的44％為實施例2的二醛)。通過製備HPLC分離出兩個主峰(9.5分鐘和14分鐘)。得到實施例2(14分鐘)，為白色固體(50mg)；和實施例3(9.5分鐘)，為無色油狀物(23mg)。
測定實施例2，DMSO-d6，於30℃，400MHz(13C100MHz)
觀測到化合物II的如下偽分子離子m/z 706的[M-H]-離子，和碎片離子424。
對於實施例3，1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ9.5(1H，-CHO)，6.8(1H，C＝CH)，6.1(1H，C＝CH)，5.07(1H，OH)，3.88，3.76，3.3(3H，-OCH3)，2.6，2.2，1.7，1.5，1.4，1.10.13C NMR(DMSO-d6，100MHz)δ194.7，163.5，131.6，112.0，110.4，81.1，73.9，59.0，35.6，28.0，20 3，14.0.
使用負和正電霧化模式分別觀測到實施例3的如下偽分子離子m/z301的[M-H]-離子，和m/z 320的[M+NH4]+離子。
實施例3即(2E，4S，6R)-6-[(5S，6R)-5-羥基-6-甲氧基-4-甲基-2，3，7-三氧雜雙環[2.2.1]庚-1-基]-4-甲基庚-2-烯醛的化學結構實施例4和542-O-(2-羥基)乙基雷帕黴素二醛(實施例4)和42-O-(2-羥基)乙基雷帕黴素29-烯醇(實施例5)使42-O-(2-羥基)乙基雷帕黴素(10mg，0.01mmole)溶於10mL二氯甲烷中。將圓底燒瓶置於乾冰浴中。使臭氧氣體穿過上述溶液鼓泡1分鐘(2L/分鐘，控制鈕設置在輸出7)。然後，將反應混合物攪拌1小時。加入二甲硫(5μL)，將反應物再攪拌0.5小時。搜集後得到約9mg粗品。經製備HPLC處理後，得到0.5mg實施例4和0.24mg實施例5。
實施例4的陰離子模式顯示m/z 988.6的[M-H]-離子。採用雷帕黴素和42-O-(2-羥基)乙基雷帕黴素作為內標物，測得所述非已知離子的精確質量為988.5612 Da，元素組成為C53H82NO16(理論質量為988.5634，Δ＝2.2mDa)。與42-O-(2-羥基)乙基雷帕黴素相比較，實施例4化合物多含兩個氧原子。正電霧化模式顯示m/z 1007.6的強[M+NH4]+離子，從而進一步確證了分子量。
實施例5顯示出m/z 769.4的偽分子離子([M+NH4]+)。測得其精確質量為769.4487Da，元素組成為C39H65N2O13(理論質量為769.4487，Δ＝0.0mDa)。
權利要求
1.一種化合物，為雷帕黴素二醛化合物或其可藥用鹽。
2.權利要求1的化合物，其中雷帕黴素二醛化合物為雷帕黴素二醛。
3.權利要求1的化合物，其中雷帕黴素二醛化合物為雷帕黴素二醛的酯、醚、肟、腙或羥胺。
4.權利要求3的化合物，其中雷帕黴素化合物為一種雷帕黴素二醛42-酯或42-醚。
5.權利要求4的化合物，其中雷帕黴素化合物為與3-羥基-2-(羥甲基)-2-甲基丙酸形成的雷帕黴素42-酯。
6.權利要求4的化合物，其中雷帕黴素化合物為42-O-(2-羥基)乙基雷帕黴素二醛。
7.在需要的哺乳動物中刺激神經細胞生長的方法，包括向所述哺乳動物提供有效量的如權利要求1-6任一項所述雷帕黴素二醛化合物或其可藥用鹽。
8.在需要的哺乳動物中刺激神經再生的方法，包括向所述哺乳動物提供有效量的如權利要求1-6任一項所述雷帕黴素二醛化合物或其可藥用鹽。
9.在需要的哺乳動物中刺激受損外周神經生長的方法，包括向所述哺乳動物提供有效量的如權利要求1-6任一項所述雷帕黴素二醛化合物或其可藥用鹽。
10.在需要的哺乳動物中治療或抑制神經變性紊亂的方法，包括向所述哺乳動物提供有效量的如權利要求1-6任一項所述雷帕黴素二醛化合物或其可藥用鹽。
11.權利要求10的方法，其中所述神經變性紊亂是痴呆、帕金森氏病、阿爾茨海默氏病或肌萎縮性側索硬化。
12.在需要的哺乳動物中治療外周神經損傷的方法，包括向所述哺乳動物提供有效量的如權利要求1-6任一項所述雷帕黴素二醛化合物或其可藥用鹽。
13.權利要求12的方法，其中所述外周神經損傷是由物理損傷或創傷引起。
14.權利要求13的方法，其中所述外周神經損傷是由脊髓損傷和創傷、坐骨神經或面神經損害或損傷引起。
15.在需要的哺乳動物中治療實體瘤的方法，包括向所述哺乳動物提供有效量的如權利要求1-6任一項所述雷帕黴素二醛化合物或其可藥用鹽。
16.權利要求15的方法，其中所述實體瘤選自星形細胞瘤、前列腺癌、乳腺癌、結腸癌、小細胞肺癌和卵巢癌；以及成人T細胞白血病/淋巴瘤。
17.在需要的哺乳動物中治療或抑制高增生性血管病的方法，包括向所述哺乳動物提供有效量的如權利要求1-6任一項所述雷帕黴素二醛化合物或其可藥用鹽。
18.權利要求17的方法，其中所述高增生性血管病是再狹窄。
19.權利要求18的方法，其中所述雷帕黴素二醛化合物經由血管支架或分流器給藥。
20.如權利要求1-6任一項所述雷帕黴素二醛化合物或其可藥用鹽在製備用於刺激哺乳動物神經細胞生長的藥物中的用途。
21.如權利要求1-6任一項所述雷帕黴素二醛化合物或其可藥用鹽在製備用於刺激哺乳動物神經再生的藥物中的用途。
22.如權利要求1-6任一項所述雷帕黴素二醛化合物或其可藥用鹽在製備用於刺激哺乳動物受損外周神經生長的藥物中的用途。
23.如權利要求1-6任一項所述雷帕黴素二醛化合物或其可藥用鹽在製備用於治療或抑制哺乳動物神經變性紊亂的藥物中的用途。
24.權利要求23的用途，其中所述神經變性紊亂是痴呆、帕金森氏病、阿爾茨海默氏病或肌萎縮性側索硬化。
25.如權利要求1-6任一項所述雷帕黴素二醛化合物或其可藥用鹽在製備用於治療哺乳動物外周神經損傷的藥物中的用途。
26.權利要求25的用途，其中所述外周神經損傷是由物理損傷或創傷引起。
27.權利要求26的用途，其中所述外周神經損傷是由脊髓損傷和創傷、坐骨神經或面神經損害或損傷引起。
28.如權利要求1-6任一項所述雷帕黴素二醛化合物或其可藥用鹽在製備用於治療哺乳動物實體瘤的藥物中的用途。
29.權利要求28的用途，其中所述實體瘤選自星形細胞瘤、前列腺癌、乳腺癌、結腸癌、小細胞肺癌和卵巢癌；以及成人T細胞白血病/淋巴瘤。
30.如權利要求1-6任一項所述雷帕黴素二醛化合物或其可藥用鹽在製備用於治療或抑制哺乳動物高增生性血管病的藥物中的用途。
31.權利要求30的用途，其中所述高增生性血管病是再狹窄。
32.權利要求31的用途，其中所述雷帕黴素二醛化合物經由血管支架或分流器給藥。
33.一種藥物組合物，包含如權利要求1-6任一項所述雷帕黴素二醛化合物或其可藥用鹽以及可藥用載體。
34.一種製備如權利要求1-6任一項所述雷帕黴素二醛化合物的方法，包括如下步驟之一a)在非###中臭氧分解雷帕黴素化合物(例如，雷帕黴素、與3-羥基-2-(羥甲基)-2-甲基丙酸形成的雷帕黴素42-酯、或42-O-(2-羥基)乙基雷帕黴素)，以便生成雷帕黴素二醛化合物(例如，雷帕黴素二醛、與3-羥基-2-(羥甲基)-2-甲基丙酸形成的雷帕黴素二醛42-酯、或42-O-(2-羥基)乙基雷帕黴素二醛)；或者b)用醯化劑(例如，含上述RA或RB醯基基團的醯化劑)醯化在活性取代基上任選被保護的雷帕黴素二醛，以便得到雷帕黴素二醛化合物，例如式(II)所示雷帕黴素二醛42-、31-或42，31-酯衍生物 其中RA和RB各自是所選酯形成基團(例如，醯基)或者RA和RB之一是氫，然後去除任何保護基；或者c)用醚化劑(例如，含上述RA或RB醚形成基團的醚化劑)醚化在活性取代基上任選被保護的雷帕黴素二醛，以便得到雷帕黴素二醛化合物(例如，上式(II)所示雷帕黴素二醛42-、31-或42，31-醚衍生物，其中RA和RB各自是所選醚形成基團或者RA和RB之一是氫)，然後去除任何保護基。
全文摘要
本發明提供了非免疫抑制性雷帕黴素二醛化合物，它們可作為神經營養劑用於治療實體瘤和血管病。
文檔編號C07D493/08GK1545512SQ02816399
公開日2004年11月10日 申請日期2002年8月22日 優先權日2001年8月22日
發明者T·朱, M·B·法齊, T 朱, 法齊 申請人:惠氏公司